Способ лечения немелкоклеточного рака легких

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКИХ Изобретение относится к применению 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4 ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамина или 6-5-хлоро-4-[2(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин 4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-она или их фармацевтически приемлемых солей для леченияEML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, для производства лекарственного средства для лечения EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких. Изобретение также относится к способу лечения опосредованного EML4-ALK+ состояния немелкоклеточного рака легких, включающему введение индивидууму указанных соединений или их фармацевтически приемлемых солей.EML4-ALK+ немелкоклеточный рак легких может быть устойчив к кризотинибу. Перекрестная ссылка на родственные заявки Данная заявка заявляет приоритет заявки 61/438878, поданной 2 февраля 2011 г., которая настоящим включается в данную заявку посредством ссылки во всей своей полноте. Область техники Настоящее изобретение относится к области использования ALK-ингибиторов в качестве лекарственных препаратов. Предшествующий уровень техники В западных странах рак легких остается ведущей причиной смертности от онкологических заболеваний. (Jemal et al., CA Cancer J. Clin. 56, 106-130 (2006. Пациентов с немелкоклеточным раком легких(NSCLC), число которых составляет 80% от общего числа больных раком легких, часто диагностируют на поздних стадиях болезни. Учитывая, что современные химиотерапии лишь в незначительной степени улучшают исход таких пациентов, их средняя продолжительность жизни после постановки диагноза составляет меньше одного года (Schiller et al., N. Engl. J. Med. 346, 92-98 (2002. Поэтому постоянно требуются новые терапевтические препараты для пациентов с раком легких. В ходе клинических исследований ингибитор c-MET/ALK-киназы кризотиниб продемонстрировал значимую активность у пациентов сEML4-ALK. Однако также отмечался рецидив (или вторичная резистентность). Таким образом, до сих пор востребованы лекарственные препараты для пациентов, несущих слияние EML4-ALK. Описание изобретения В настоящем изобретении предложены соединения и фармацевтические композиции для лечения опосредованных EML4-ALK+ состояний, например EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких(NSCLC). В одном из аспектов изобретения предложен способ лечения опосредованных EML4-ALK+ состояний, такого как EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, необязательно устойчивого к кризотинибу,включающий в себя введение в клетку или индивидууму такого соединения, как 5-хлоро-N2-(2 изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4 диамин (соединение 1) или их фармацевтически приемлемых солей. В другом аспекте в изобретении предложено применение таких соединений, как 5-хлоро-N2-(2 изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4 диамин или 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси 2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемых солей, для лечения EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, в частности устойчивого к кризотинибу. В следующем аспекте в изобретении предложено применение таких соединений, как 5-хлоро-N2-(2 изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4 диамин или 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси 2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемых солей, в производстве лекарственного средства для лечения опосредованных EML4-ALK+ состояний, такого какEML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, в частности устойчивого к кризотинибу. В любом из выше перечисленных способов и применений указанные соединения можно вводить в клетку или организм млекопитающего, в частности организм человека или животного. Краткое описание фигур Фиг. 1 показывает противоопухолевую активность соединения 1 на мышиной модели NCI-H2228 Фиг. 2 и 3 показывают противоопухолевую активность соединения 1 в отношении роста опухоли в кризотиниб-устойчивых NCI-H2228 опухолях. Способы осуществления изобретения Генетические аномалии на ALK-генном локусе были описаны с целью их связывания с несколькими видами рака. Благодаря хромосомной перестройке слияние гена белка иглокожих, ассоциированного с микротрубочками, тип 4 (EML4)-ALK, было описано у группы пациентов с немелкоклеточным раком легких (NSCLC) (Soda et al., Nature 448, 561-566 (2007. Амплификация, увеличение числа копий и точечные мутации гена ALK были описаны у ряда нейробластом. Благодаря хромосомным перестройкам 5 хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5 изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемые соли можно использовать для лечения пациентов, имеющих слияние генов ALK, например NSCLC пациентов с EML4-ALK, имеющих амплификацию гена, увеличение числа генов и точечные мутации гена ALK, таких как пациенты с нейробластомой, или других пациентов с опухолями, характеризуемыми генетическими аномалиями гена ALK или усиленной экспрессией ALK по сравнению с таковой в нормальной ткани. С одной стороны, в изобретении предложен способ лечения опосредованных EML4-ALK+ состояний, например EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких (NSCLC), необязательно устойчивого к кризотинибу, включающий в себя введение в клетку или индивидууму такого соединения, как 5-хлоро-N2(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4 диамин или 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси 2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемых солей.WO 2008/07368 A1 раскрывает процесс получения указанных соединений. Как показано на фиг. 1,соединение формулы 1 вызвало полную регрессию опухоли (Т/С=100%) на мышиной модели NCI-H2228NSCLC при дозировке 25 мг/кг (орально) раз в день в течение двух недель. Как показано на фиг. 2 и 3,соединение 1 показало значительную противоопухолевую активность в отношении роста опухоли в кризотиниб-устойчивых NCI-H2228. Действие этого соединения изучали в ходе клинических испытаний на резистентных к кризотинибу и пациентах, ранее не получавших кризотиниб. В основном, соединения 1 и 6 вводят в терапевтически эффективных количествах как отдельно, так и в комбинации с одним и более терапевтическими средствами, посредством любого используемого и применимого способа, известного из уровня техники. Терапевтически эффективные количества могут широко варьироваться в зависимости от тяжести заболевания, возраста и состояния здоровья индивидуума, активности используемого соединения и других факторов, известных специалистам в данной области. Например, для лечения неопластических заболеваний и расстройств иммунной системы требуемая дозировка также варьируется в зависимости от способа введения, конкретного состояния и желаемого эффекта. Пример 1. Противоопухолевая активность на мышиной модели NCI-H2228 NSCLC. Рост клеток in vitro и пролиферация.NCI-H2228 клетки были получены из американских коллекций типовых культур (АТСС) (Манасса,США) и модифицированы путем вирусной инфекции до стабильно экспрессирующих люциферазу. В ходе исследований клеточного роста и пролиферации 2250 клеток в 50 L раствора RPMI (Gibco, Carlsbad, CA), содержащего 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Gibco, Carlsbad, CA), были помещены при помощи -Fill оборудования (Bio-Tek) в белые 384-луночные планшеты с твердым дном (Corning,Acton, MA). Перед добавлением соединения при помощи MiniTrak оборудования (Perkin-Elmer) планшеты инкубировали в течение 1 ч при 37 С в инкубаторе культуры клеток ткани. 50 nL соединения в чашках Петри, разведенного 1:3, добавляли в аналитические планшеты с получением итоговых концентраций: 10000, 3333, 1111, 370, 123, 41, 14, 4,6, 1,5, 0,5 и 0,17 nM. После добавления соединения планшеты инкубировали в течение 3 дней при 37 С в инкубаторе культуры клеток ткани. На 3 день планшеты анализировали на клеточный рост и пролиферацию путем измерения активности люциферазы в каждой отдельной лунке. Подробнее, 25 мкл BRIGHT-GLO (Promega, Madison, WI) или BRITELITE (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts) добавляли в каждую лунку. После 10 мин инкубации при комнатной температуре планшеты исследовали при помощи Analyst-GT или Envision plate reader (Molecular Devices,Sunnyvale, CA). IC50 интерполировали как значение концентрации соединения, требуемого для уменьшения клеточного роста и пролиферации до 50% к DMSO контролю. Модель подкожного ксенотрансплантанта опухоли, извлеченной из NCI-H2228 клеток. В день имплантации NCI-H2228 клетки собрали при помощи 0,05% Trypsin/EDTA и повторно суспендировали в смеси бессывороточной питательной среды RPMI 1640 и матригеля (BD Biosciences 354234, La Jolla, CA) в соотношении 1:1. Пять миллионов клеток подкожно имплантировали в правый задний пах SCID мыши бежевого окраса. Когда размер опухолей достиг объема 300-400 мм 3, опухоли извлекли и разрезали на маленькие части объема 1-2 мм 3 в питательной среде для проведения подкожной имплантации. После того как опухоли трижды пересадили в SCID мышей бежевого окраса, опухоли рас-2 023404 сматривали в качестве основных опухолей для изучения имплантации. Части опухолей держали в смеси бессывороточной питательной среды RPMI 1640 и матригеля в соотношении 1:1 на водном льду для имплантации в SCID мышей бежевого окраса. Имплантация в безтимусных мышей: две-три части опухоли со смесью матригеля подкожно имплантировали в правый пах мыши. После имплантации опухоли трижды в неделю измеряли кронциркулем до тех пор, пока опухоли не стали пальпируемыми.SCID мышей бежевого окраса, имеющих Н 2228 опухоли, в случайном порядке разделили на 5 групп (n=4 мыши на группу) со средним объемом опухоли 8535 мм 3. Тестируемое соединение вводили путем орального принудительного питания. На 14-й день оценивали концентрацию соединения в опухолях самок SCID мышей бежевого окраса. Рост опухоли подсчитывали при помощи % Т/С, как описано ниже: % Т/С=( Т/ С)100, гдеТ 0; или % Т/С=( Т/ TI)100, гдеТ 0. Изменения в объеме опухолей ( объемы) для каждой обработанной (Т) и контрольной (С) групп подсчитывали каждый день,опухоли измеряли путем вычитания медианы объема опухоли в день первой обработки (день стадирования опухоли) из медианы объема опухоли в определенный день наблюдения. Как показано в таблице, соединения 1 и 6 ингибируют рост in vitro и пролиферацию человеческих клеток линии NCI-H2228 с EIML4-ALK, извлеченных из NSCLC. В это время соединение 1 тестировали на модели ксенотрансплантанта на мышах путем подкожной имплантации фрагмента ткани опухоли NCI-H2228. Как показано на фиг. 1, соединение 1 вызвало полную регрессию опухоли при дозировке 25 мг/кг (орально) раз в день в течение 2 недель. Соединение хорошо переносилось животными, потерь животными в весе не наблюдалось. Пример 2. Противоопухолевая активность в кризотиниб-устойчивых опухолях. Ксенотрансплантанты опухолей мышей, извлеченные из NCI-Н 2228, непрерывно обрабатывали кризотинибом 50 мг/кг в течение 9 дней, затем 75 мг/кг в течение 9 дней и затем 100 мг/кг в течение 33 дней. В качестве альтернативы после того как ксенотрансплантанты опухолей, извлеченные из NCIH2228, обрабатывали кризотинибом 100 мг/кг в течение 14 дней, обработку кризотинибом прекращали на несколько дней до тех пор, пока опухоли не увеличивались повторно. После повторного увеличения опухолей животных обрабатывали кризотинибом 100 мг/кг до тех пор, пока опухоли не становились устойчивыми к обработке кризотинибом. После того как опухоли становились устойчивыми к обработке кризотинибом, опухоли определенного животного извлекали. Несколько таких опухолей случайным образом отбирали для дальнейших исследований, описанных ниже. Каждую устойчивую опухоль разрезали на маленькие части в ходе сбора ткани и имплантировали 5 животным; после того как у 5 животных размер опухоли достаточно увеличивался, опухоли извлекали и затем имплантировали 25 животным для исследования соединения. Часть извлеченных опухолей также использовали для экстракции РНК и затем для установления последовательности EML4-ALK транскрипта. Как показано на фиг. 2, (5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин) (соединение 1) продемонстрировало значительную противоопухолевую активность в отношении роста опухоли в кризотиниб-устойчивых NCI-H2228. В других кризотиниб-устойчивых NCI-H2228 опухолях соединение 1 продемонстрировало большую активность, чем кризотиниб - 100 мг/кг (фиг. 3). На основании 4-недельных GLP токсикологических исследований, концентрация соединения 1, соответствующая 50 мг/кг для мышей, была предположительно ниже концентрации MTD для людей. Понятно, что примеры и варианты осуществления данного изобретения описаны в данном документе только для иллюстрации целей изобретения, различные модификации и их незначительные изменения будут предложены специалистам в данной области и включены в область данной заявки и содержание прилагаемых пунктов патентной формулы. Все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые в данном документе, включаются в данную заявку посредством ссылки во всей своей полноте. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение соединения для лечения EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, где соединение представляет собой 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-3 023404 сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемые соли. 2. Применение по п.1, где указанное соединение представляет собой 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5 метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или его фармацевтически приемлемую соль. 3. Применение по п.1, где указанное соединение представляет собой 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2 сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или его фармацевтически приемлемую соль. 4. Применение по любому из пп.1-3, где EML4-ALK+ немелкоклеточный рак легких устойчив к кризотинибу. 5. Применение соединения для производства лекарственного средства для лечения EML4-ALK+ немелкоклеточного рака легких, где соединение представляет собой 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или 6-5-хлоро-4-[2(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)2,3-дигидроизоиндол-1-он или их фармацевтически приемлемые соли. 6. Применение по п.5, где указанное соединение представляет собой 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5 метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или его фармацевтически приемлемую соль. 7. Применение по п.5, где указанное соединение представляет собой 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2 сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или его фармацевтически приемлемую соль. 8. Применение по любому из пп.5-7, где EML4-ALK+ немелкоклеточный рак легких устойчив к кризотинибу. 9. Способ лечения опосредованного EML4-ALK+ состояния немелкоклеточного рака легких, включающий введение индивидууму соединения, выбранного из 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5-метил-4(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамина или 6-5-хлоро-4[2-(пропан-2-сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4 ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-она или их фармацевтически приемлемых солей. 10. Способ по п.9, где указанное соединение представляет собой 5-хлоро-N2-(2-изопропокси-5 метил-4-(пиперидин-4-ил)фенил)-N4-[2-(пропан-2-сульфонил)фенил]пиримидин-2,4-диамин или его фармацевтически приемлемую соль. 11. Способ по п.9, где указанное соединение представляет собой 6-5-хлоро-4-[2-(пропан-2 сульфонил)фениламино]пиримидин-2-иламино-5-изопропокси-2-(1-метилпиперидин-4-ил)-2,3-дигидроизоиндол-1-он или его фармацевтически приемлемую соль. 12. Способ по любому из пп.9-11, где EML4-ALK+ немелкоклеточный рак легких устойчив к кризотинибу.