Ингибиторы гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (gm-csf) и интерлейкина-17 (il-17) для терапии

Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний, содержащей (а) соединение, нейтрализующее гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF); и (б) соединение, нейтрализующее интерлейкин-17 (IL-17), где соединение, нейтрализующее GM-CSF, представляет собой антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие GM-CSF, и где соединение нейтрализующее IL-17, представляет собой антитело или его функционально активный фрагмент,связывающие IL-17. Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения воспалительных и/или опухолевых заболеваний, содержащей соединение, нейтрализующее гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), и соединение, нейтрализующее интерлейкин-17 (IL-17). В последнее время было показано, что гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), изначально идентифицированный как гемопоэтический фактор роста, является важным цитокином воспаления и аутоиммунитета. Повышенные уровни матричной РНК (мРНК) или белкаGM-CSF определяют во множестве воспалительных очагов, в том числе у пациентов с аллергией и псориазом, пациентов с артритом и астмой. В последние несколько лет во множестве исследований in vivo было показано, что блокада GM-CSF нейтрализующими антителами может привести к предотвращению или даже излечению провоспалительных заболеваний в различных моделях воспаления, включая модели артрита, экспериментального аутоиммунного энцефалита, псориаза и заболевания легких. GM-CSF играет важную роль во врожденном иммунитете, стимулируя пролиферацию и активацию зрелых нейтрофилов и макрофагов. В дополнение,была продемонстрирована ключевая роль GM-CSF в представлении антигенов посредством управления дифференцировкой и созреванием дендритных клеток in vitro. Было сообщено, что in vivo, в человеческих мононуклеарных клетках периферической крови (РВМС), Т-клетках и антиген-представляющих клетках (APC), GM-CSF индуцирует провоспалительные цитокины преимущественно 1 типа. Интерлейкин-17 (IL-17) представляет собой семейство цитокинов приобретенного иммунитета, состоящее на данный момент из шести членов, IL-17 А - IL-17F. Описано связывание IL-17 с рецепторамиIL-17, семейством, состоящим в настоящее время из пяти членов, IL-17RA - IL-17RE, имеющих значительную гомологию последовательности друг с другом. Члены семейства рецептора IL-17 представляют собой трансмембранные белки I типа. В настоящее время является общепринятым, что все клетки иммунной системы активно экспрессируют рецепторы IL-17 и стимуляция различных типов клеток IL-17A,IL-17F и IL-17D может индуцировать экспрессию других цитокинов, таких как интерлейкин-1 (IL-1),фактор некроза опухоли- (TNF) и IL-6, и хемокинов IL-8 и макрофагального воспалительного белка 1 (MIP-1). В отличие от его рецепторов, IL-17 продуцируют главным образом недавно открытые Th17 клетки, и его экспрессия часто связана с инфекцией и аутоиммунитетом. Ревматоидный артрит (RA) представляет собой хроническое, воспалительное и системное аутоиммунное заболевание. Несмотря на то что этиология и патогенез RA не вполне ясны, данное заболевание отличается агрессивной синовиальной гиперплазией (образованием паннуса) и воспалением (синовитом),что приводит к прогрессирующей деструкции суставного хряща и кости. Ревматоидный артрит (RA) является результатом сложных взаимодействий многих типов клеток и факторов, принадлежащих как к врожденной, так и приобретенной ветви иммунной системы. Например, было сообщено об общем повышении экспрессии различных цитокинов у пациентов с RA, т.е. о значительно более высоких уровняхIL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-13, интерферона- (IFN), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF), GM-CSF, моноцитарного хемотаксического белка (МСР-1) и MIP-1 по сравнению с контролями. Более того, было установлено, что IL-1, TNF и IL-18 являются сильными воспалительными факторами, стимулирующими Т-клетки при RA. В опубликованных сообщениях была выдвинута гипотеза о патогенетической роли GM-CSF при RA. Данную гипотезу подтверждают следующие наблюдения: (1) образование GM-CSF в синовиальной оболочке пациентов с RA и возможность определения повышенных уровней данного цитокина в их синовиальной жидкости; (2) лечение нейтрализующим моноклональным антителом (mAb) против GM-CSF снижает тяжесть заболевания в модели коллагениндуцированного артрита (CIA) на мышах; (3) мыши с дефицитом GM-CSF менее чувствительны к индукции заболевания коллагеном и метилированным бычьим сывороточным альбумином (mBSA);(4) инъекция рекомбинантного GM-CSF мышам с CIA приводит к обострению заболевания и (5) пациенты с RA, получающие GM-CSF после химиотерапии, демонстрируют внезапные обострения тяжести артрита. Помимо различных цитокинов, указанных выше, IL-17, по-видимому, также вовлечен в патологиюRA, поскольку при RA уровни IL-17 в синовиальной оболочке и синовиальной жидкости повышены, а блокада IL-17 уменьшает воспаление и деструкцию суставов при артрите в экспериментальных моделях. В дополнение, мыши с генетическим дефицитом IL-17 демонстрируют ослабленный коллагениндуцированный артрит, а при скрещивании с мышами IL-1 Ra-/- у мышей IL-17-/- полностью отсутствует спонтанное начало полиартрита, обычно наблюдаемое у мышей Balb/c с дефицитом антагониста рецептора IL-1. Также сообщено о том, что местная совместная стимуляция IL-17 и TNF в экспериментах на мышах in vivo приводила к GM-CSF-зависимому накоплению нейтрофилов в дыхательных путях,действуя как на рекрутинг, так и на выживание нейтрофилов. Одной из моделей, используемых для исследования человеческого RA-подобного заболевания у мышей, является артрит, индуцированный клеточными стенками стрептококков (SCW-артрит). В данной модели возможна индукция как острого заболевания, так и хронического рецидивирующего артрита внутрисуставной (в/с) инъекцией фрагментов клеточной стенки бактерий в один коленный сустав мы-1 024654 шей. Острый артрит, при котором основную патогенетическую роль играет врожденный иммунитет, получают однократной инъекцией фрагментов SCW в коленные суставы интактных мышей. Повторной в/с инъекцией фрагментов SCW устанавливают хроническую рецидивирующую модель, при которой медиаторы приобретенного иммунитета постепенно перенимают изначальное преобладание врожденного ответа. Коллаген-индуцированный артрит (CIA) является другой общепринятой моделью артрита, основанной на Т-клеточной и антитело-опосредованной аутоиммунной реактивности против хрящевого коллагена II типа (CII). Эта модель на мышах имеет некоторые клинические, гистопатологические и иммунологические сходства с человеческим RA, и для нее характерно главным образом воспаление синовиальной оболочки с последующими тяжелыми эрозиями хряща и кости. Авторы настоящего изобретения исследовали терапевтическую эффективность нейтрализации GM-CSF в модели TNF-зависимого хронического SCW-артрита и модели TNF-зависимого CIA. В дополнение, авторы настоящего изобретения изучали эффект блокады как врожденного, так и приобретенного иммунитета ингибированием метаболических путей GM-CSF и IL-17. Это было осуществлено нейтрализацией GM-CSF у мышей с генетической недостаточностью рецептора IL-17 (мышей IL-17R-KO) или комбинированным введением соединений, нейтрализующих GM-CSF и IL-17. Вопреки ожиданиям, авторы изобретения наблюдали, что оба типа воспалительных заболеваний можно с высокой эффективностью лечить комбинированной блокадой метаболических путей GM-CSF и IL-17. В модели CIA комбинированное введение соединения, ингибирующего GM-CSF, и соединения, ингибирующего IL-17, существенно снижало клинические показатели коллаген-индуцированного артрита, в то время как введение соединения, ингибирующего GM-CSF, или соединения, ингибирующего IL-17, по отдельности не приводило к значимому уменьшению тяжести артрита. В дополнение, подробный гистологический анализ продемонстрировал синергетический эффект комбинированной терапии на воспаление суставов и деструкцию хряща и кости. Таким образом, комбинированная блокада обоих метаболических путей приводила к высокоэффективной защите от воспаления и деструкции суставов. Эти результаты были особенно неожиданными, поскольку до недавнего времени существовала гипотеза о том, что GM-CSF находится под регуляцией IL-17 (см., например, Kawaguchi M.et al., J. Allergy Clin. Immunol. 114 (2004), 444-450; Starnes T. et al., The Journal of Immunology, 169 (2002),642-646; Laan M. et al., Eur, Respir. J. 21 (2003), 387-393). Таким образом, от лечений, в которых комбинируют соединения, нейтрализующие GM-CSF и IL-17, не ожидали никакого аддитивного или синергетического эффекта. В настоящем изобретении впервые продемонстрированы полезные эффекты комбинированной блокады IL-17 и GM-CSF in vivo. Представленные здесь данные обеспечивают убедительное доказательство того, что лечение против GM-CSF в комбинации с лечением против IL-17 имеет глубокий терапевтический эффект не только при RA, но также при других аутоиммунных и воспалительных заболеваниях, как определено в данном описании ниже. Таким образом, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению конкретно направлена на лечение артрита, но может быть также применена при других воспалительных заболеваниях, включая рассеянный склероз, псориаз и воспаление легких, такое как астма и хроническая обструктивная болезнь легких (COPD). В соответствии с настоящим изобретением предложена фармацевтическая композиция для лечения воспалительных и аутоиммунных заболеваний, содержащая:(б) соединение, нейтрализующее интерлейкин-17 (IL-17),где соединение, нейтрализующее GM-CSF, представляет собой антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие GM-CSF, и где соединение нейтрализующее IL-17, представляет собой антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие IL-17. Предпочтительными воплощениями фармацевтической композиции по изобретению являются следующие.(а) Фармацевтическая композиция, как она определена выше, где антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие GM-CSF, и/или антитело или его функционально активный фрагмент,связывающие IL-17, представляет собой человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент.(б) Фармацевтическая композиция, как она определена выше, где антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие GM-CSF, связывают эпитоп GM-CSF, включающий аминокислоты(в) Фармацевтическая композиция согласно (б), где эпитоп представляет собой эпитоп прерывистого типа.(г) Фармацевтическая композиция согласно (в), где указанный эпитоп прерывистого типа дополнительно включает: а) аминокислоты LSRD в положениях 28-31 в SEQ ID NO: 57, 58, 59 или 60; б) аминокислоты ТА в положениях 32-33 в SEQ ID NO: 57, 58, 59 или 60 и/или(д) Фармацевтическая композиция согласно любому из (а)-(г), где антитело или его функционально активный фрагмент, связывающие GM-CSF, содержат в вариабельной области тяжелой цепи CDR3,имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей любую из последовательностей SEQ ID NO: 1-13 и 56.(е) Фармацевтическая композиция согласно (д), где указанное антитело или его функционально активный фрагмент содержит в вариабельной области тяжелой цепи CDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и CDR2, имеющий аминокислотную последовательность(ж) Фармацевтическая композиция согласно (д) или (е), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат в вариабельной области легкой цепиCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность(з) Фармацевтическая композиция согласно (ж), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат в вариабельной области легкой цепи любую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 19, 54 и 55.(и) Фармацевтическая композиция согласно (д) или (е), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат в вариабельной области тяжелой цепи любую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 20-33, 52 и 53.(к) Фармацевтическая композиция согласно любому из (д)-(и), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат в вариабельной области легкой цепи CDR1, имеющий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 16, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18; и в вариабельной области тяжелой цепи CDR1, имеющий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 14, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и CDR3, имеющий любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 1-13 и 56.(л) Фармацевтическая композиция согласно любому из (д)-(к), где указанные человеческое моноклональное антитело против GM-CSF или его функционально активный фрагмент содержат в вариабельной области легкой цепи CDR1, имеющий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 16, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQIDNO:18; и в вариабельной области тяжелой цепи CDR1, имеющий аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 14, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.(м) Фармацевтическая композиция согласно любому из (д)-(л), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 34 и любую аминокислотную последовательность тяжелой цепи из(н) Фармацевтическая композиция согласно (м), где указанные человеческое моноклональное антитело или его функционально активный фрагмент содержат аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 34 и аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 35.(о) Фармацевтическая композиция, как она определена выше, где указанное воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита (RA) (включая RA, устойчивый к лечению агентами, нейтрализующими фактор некроза опухоли-альфа (TNF-альфа, астмы, рассеянного склероза (MS), хронической обструктивной болезни легких (COPD), острого респираторного дистресссиндрома (ARDS), идиопатического фиброза легких (IPF), воспалительного заболевания кишечника(IBD), болезни Крона, увеита, дегенерации желтого пятна, колита, псориаза, валлеровского перерождения, антифосфолипидного синдрома (APS), острого коронарного синдрома, рестеноза, атеросклероза,рецидивирующего полихондрита (RP), острого или хронического гепатита, заболевания, связанного с неудачными ортопедическими имплантатами, гломерулонефрита, волчанки и аутоиммунных расстройств. Определения. Термин "субъект" при использовании в описании относится к животному. Термин "животное" включает, без ограничения, млекопитающих, таких как лабораторные животные (грызуны, например крысы, морские свинки, хомяки или мыши, приматы, не являющиеся людьми,например яванский макак или макак), одомашненные или домашние животные (например, собаки или кошки), домашний скот или сельскохозяйственные животные (например, быки, овцы, козы и свиньи) и/или люди. Предпочтительно животное представляет собой человека или примата, не являющегося человеком. Термин "GM-CSF" при использовании в описании обозначает как GM-CSF человека (Homo sapiens),так и GM-CSF примата, не являющегося человеком, как определено в литературе, и включает его варианты (гомологи). Данный термин также включает рецептор GM-CSF человека и примата, не являющегося человеком, и его варианты (гомологи). Особенно предпочтительные варианты (гомологи) GM-CSF примата, не являющегося человеком, и рецептора GM-CSF примата, не являющегося человеком, включают варианты (гомологи) GM-CSF и рецептора GM-CSF гиббона (Nomascus concolor, также известного как западный черный белощекий гиббон) и обезьян семейства макаков, например макака-резуса (Масасаmulatta) и яванского макака (Масаса fascicularis). Термин "антитело, связывающее GM-CSF или рецептор GM-CSF" или его функциональный фрагмент при использовании в описании включает любое антитело или фрагмент антитела, способные связывать GM-CSF или рецептор GM-CSF животного. В частности, он включает любое антитело или его фрагмент, демонстрирующие перекрестную реактивность (в отношении связывания GM-CSF или рецептора GM-CSF) между человеком и по меньшей мере одним видом обезьян, упомянутым выше. Например,антитело или его фрагмент способны связывать (и нейтрализовать) как GM-CSF человека, так и GM-CSF яванского макака (Масаса fascicularis). Это особенно предпочтительно для молекулы антитела, предназначенной для терапевтического введения субъектам-людям, поскольку такое антитело будет обычно проходить множество тестов перед получением разрешения надзорного органа, среди которых определенные тесты на ранней стадии включают виды животных, не являющихся людьми. При проведении таких тестов в большинстве случаев желательно использовать в качестве вида, не являющегося человеком,вид с высокой степенью генетического сходства с людьми (например, приматов, не являющихся людьми,таких как яванский макак), поскольку результаты, полученные таким образом, в большинстве случаев будут в значительной степени предсказывать соответствующие результаты, которые можно ожидать при введении той же молекулы людям. Тем не менее, такая прогнозирующая способность, основанная на тестах на животных, по меньшей мере, частично зависит от совместимости молекулы и очень высока, если ввиду межвидовой перекрестной реактивности одна и та же терапевтическая молекула может быть введена людям и животным, не являющимся людьми. Соответственно, если молекула антитела обладает перекрестной реактивностью в отношении одного и того же антигена у людей и у другого вида, тесты могут быть проведены с использованием одной и той же молекулы антитела у людей и у другого вида,например, у одного из видов обезьян, упомянутых выше. Это увеличивает как эффективность тестов самих по себе, так и прогнозирующую способность таких тестов в отношении свойств таких антител у людей, конечного интересующего вида с терапевтической точки зрения. Термин "антитело, связывающее GM-CSF или рецептор GM-CSF" при использовании в описании также включает моноклональные антитела к GM-CSF или рецептору GM-CSF или их функциональный фрагмент, имеющий такую связывающую способность. Как упомянуто выше, при использовании в настоящем описании термин "IL-17" относится к семейству цитокинов приобретенного иммунитета, состоящему из шести членов, IL-17A - IL-17F. Определение данного термина также включает гетеродимеры, такие как IL-17A/IL-17F, которые, согласно сообщениям, физиологически экспрессированы, например, CD4+ Т-клетками. Особенно предпочтительная группа членов семейства IL-17, нейтрализация которых предложена согласно настоящему изобретению, включает IL-17A, IL-17F и IL-17D. Более предпочтительно согласно изобретению нейтрализуют эффекты IL17A и IL-17F. Поскольку предпочтительна группа, состоящая из IL-17 А, IL-17F и IL-17D, также предпочтительно нейтрализовать/ингибировать сигнализацию подгруппы рецепторов IL-17 (IL-17R), т.е. сигнализацию IL-17RA, IL-17RB и IL-17RC, более предпочтительно IL-17RA и IL-17RC. Термин "специфично связывает" или родственные выражения, такие как "специфичное связывание", "специфично связывающий", "агент, специфично связывающий" и т.п. при использовании здесь относятся к способности соединения, ингибирующего GM-CSF/IL-17, и предпочтительно человеческого моноклонального антитела или его функционального фрагмента (как определено ранее) различать GMCSF/IL-17 от любого числа других потенциальных антигенов, отличных от GM-CSF/IL-17, в такой степени, что из пула множества различных антигенов в качестве потенциальных партнеров для связывания происходит связывание только GM-CSF/IL-17 или по существу только GM-CSF/IL-17. В значении для данного изобретения связывание GM-CSF/IL-17 "специфично", если из пула множества одинаково доступных различных антигенов в качестве потенциальных партнеров для связывания связывание GMCSF/IL-17 происходит по меньшей мере в 10 раз чаще, предпочтительно в 50 раз чаще, наиболее предпочтительно в 100 или более раз чаще (в кинетическом смысле), чем связывание любого другого антигена, отличного от GM-CSF/IL-17. Такие кинетические измерения могут быть проведены на прибореBiacore. При использовании здесь "нейтрализация", "нейтрализующий агент", "нейтрализующий" и их грамматически родственные варианты относятся к частичному или полному ослаблению биологического эффекта (эффектов) GM-CSF/IL-17. Такое частичное или полное ослабление биологического эффекта(эффектов) GM-CSF/IL-17 является результатом модификации, нарушения и/или срыва процессов, опосредованных GM-CSF/IL-17, таких как трансдукция сигналов, проявляющаяся, например, во внутриклеточной передаче сигналов, пролиферация клеток или высвобождение растворимых веществ, повышаю-4 024654 щая или понижающая регуляция активации внутриклеточных генов, например, приводящая к экспрессии поверхностных рецепторов для лигандов, отличных от GM-CSF. Специалисту в данной области техники ясно, что существует несколько способов определения того, следует ли агент, например рассматриваемое антитело или его функциональный фрагмент, классифицировать как нейтрализующий агент. Например,это может быть осуществлено стандартным исследованием in vitro, проводимым обычно следующим образом. В первом эксперименте пролиферации клеточную линию, о которой известно, что степень ее пролиферации зависит от активности GM-CSF, инкубируют с серией образцов с различными разведениями GM-CSF и после этой инкубации измеряют степень пролиферации клеточной линии. На основании данного эксперимента определяют концентрацию GM-CSF, обеспечивающую половину максимальной пролиферации клеток. Затем проводят второй эксперимент пролиферации с использованием в каждой серии образцов того же числа клеток, что было использовано в первом эксперименте пролиферации,определенной выше концентрации GM-CSF и, в данном случае, различных концентраций антитела или его функционального фрагмента, в отношении которых подозревают, что они являются агентами, нейтрализующими GM-CSF. Пролиферацию клеток измеряют снова для определения концентрации антитела или его функционального фрагмента, достаточной для достижения ингибирования роста, составляющего половину от максимума. Если полученный график зависимости ингибирования роста от концентрации антитела (или его функционального фрагмента) имеет сигмовидную форму, и повышение концентрации антитела (или его функционального фрагмента) приводит к уменьшению пролиферации клеток, то достигнута некоторая степень антитело-зависимого ингибирования роста, т.е. активность GMCSF в некоторой степени нейтрализована. В таком случае антитело или его функциональный фрагмент можно рассматривать как "нейтрализующий агент" в его значении для настоящего изобретения. Одним примером клеточной линии, о которой известно, что степень ее пролиферации зависит от активностиGM-CSF, является клеточная линия TF-1, как описано у Kitamura, T. et al. (1989), J. Cell. Physiol. 140, 32334. Специалисту в данной области техники ясно, что степень пролиферации клеток не является единственным параметром, посредством которого может быть установлена способность нейтрализоватьGM-CSF. Например, для идентификации предполагаемого агента, нейтрализующего GM-CSF (соединения, ингибирующего GM-CSF), может быть использовано измерение уровня сигнальных молекул (например, цитокинов), уровень секреции которых зависит от GM-CSF. Специалисту в данной области техники известны соответствующие экспериментальные условия в клетках для верификации нейтрализующих эффектов соединения, ингибирующего IL-17. Другие примеры клеточных линий, которые могут быть использованы для определения того, является ли рассматриваемое антитело или его функциональный фрагмент агентом, нейтрализующим активность GM-CSF, включают AML-193 (Lange, В. et al. (1987), Blood. 70, 192-9); GF-D8 (Rambaldi, A. et al.(Avanzi, G.C. et al. (1990), Journal of Cellular Physiology, 145, 458-64); TALL-103 (Valtieri, M. et al. (1987),Journal of Immunology, 138, 4042-50); UT-7 (Komatsu, N. et al. (1991), Cancer Research, 51, 341-8). Примеры клеточных линий/клеточных анализов, которые могут быть использованы для определения того, является ли рассматриваемое соединение, например антитело или его функциональный фрагмент, агентом,нейтрализующим активность IL-17, включают BEAS-2B in Vitro Assay of IL-17 Proteins (BEAS-2B, клетки бронхиального эпителия человека (АТСС, CRL-9609 или стандартный анализ высвобождения IL-6 фибробластами (Yao et al., 1995, Journal of Immunology, 155, 5483-5486). Следует понимать, что ингибирование/нейтрализация GM-CSF и IL-17 соответственно согласно настоящему изобретению может быть осуществлено либо вне клеток, несущих рецепторы для этих цитокинов, либо внутри указанных клеток. Таким образом, ингибирование/нейтрализация GM-CSF и IL-17 соединением может представлять собой ингибирование или предотвращение связывания GM-CSF илиIL-17 с его специфическим рецептором или ингибирование внутриклеточного сигнала, индуцируемого связыванием цитокинов с их рецепторами. Пример внутриклеточно действующих ингибиторов сигналаIL-17/агентов, нейтрализующих сигнал IL-17, включает соединения, блокирующие внутриклеточные сигнальные пути, включая ингибиторы JAK/STAT (янус-киназа/сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции), MAPK (митоген-активируемая протеинкиназа) р 38, NF-В (ядерный фактор В) или JNK(Jun N-концевая киназа). Как определено в данном описании выше, ингибиторы GM-CSF или IL-17 представляют собой антитела, более предпочтительно человеческие антитела (или их функциональные фрагменты). При использовании здесь термином "полипептид" описывают группу молекул, состоящих более чем из 30 аминокислот. Согласно изобретению группа полипептидов включает "белки", состоящие из одного полипептида или более чем одного полипептида. Термином "полипептид" также описывают фрагменты белков, если эти фрагменты состоят более чем из 30 аминокислот. В данной области техники хорошо известно, что полипептиды могут образовывать мультимеры, такие как димеры, тримеры и олигомеры более высокого порядка, т.е. состоящие более чем из одной полипептидной молекулы. Такие мультимеры также включены в определение термина "полипептид". Полипептидные молекулы, образующие такие димеры, тримеры и т.п., могут быть идентичными или неидентичными. Соответствующие структуры более высокого порядка таких мультимеров соответственно называют гомо- или гетеродимерами, гомо- или гетеротримерами и т.п. Примером гетеромультимера является молекула антитела, которая, в ее встречающейся в природе форме, состоит из двух идентичных легких полипептидных цепей и двух идентичных тяжелых полипептидных цепей. Термины "полипептид" и "белок" также относятся к естественным или неестественным образом модифицированным полипептидам/белкам, где модификацию осуществляют, например, посредством посттрансляционных модификаций, таких как гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. Такие модификации хорошо известны в данной области техники. Термин "рецептор GM-CSF" относится к физиологическому поверхностному клеточному рецепторуGM-CSF, описанному в данной области техники как гетеродимер CD116 и общей бета-субъединицы (Cсубъединицы). Термин "рецептор IL-17" относится к семейству физиологических поверхностных клеточных рецепторов различных изоформ IL-17. Данное семейство в настоящее время включает, среди прочих, изоформы IL-17RA, IL-17RB, IL-17RC, IL-17RD и IL-17RE. Методики получения антител хорошо известны в данной области техники и описаны, например, вLane "Using Antibodies: A Laboratory Manual" Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999. Термин "антитело" включает иммуноглобулины (Ig) различных классов (т.е. IgA, IgG, IgM, IgD и IgE) и подклассов (таких как IgG1, IgG2 и т.п.). Производные антител, которые также входят в определение термина антитело в значении для данного изобретения, включают модификации таких молекул, как, например, гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование, фарнезилирование, гидроксилирование, метилирование или эстерификация. Антитела от источника, не являющегося человеком, и человеческие антитела или их функциональные фрагменты (со специфичностью как к GM-CSF, так и к IL-17) предпочтительно являются моноклональными. Особенно сложно получить человеческие антитела, являющиеся моноклональными. В отличие от продуктов слияния мышиных В-клеток с иммортализованными клеточными линиями, продукты слияния человеческих В-клеток с иммортализованными клеточными линиями не жизнеспособны. Таким образом, человеческие моноклональные антитела являются результатом преодоления существенных технических препятствий, обычно известных в области технологии антител. Моноклональная природа антител делает их особенно подходящими для применения в качестве терапевтических агентов, поскольку такие антитела будут существовать в виде одной гомогенной молекулярной разновидности, которая может быть хорошо охарактеризована и воспроизводимым образом получена и очищена. Эти факторы приводят к получению продуктов с предсказуемыми с высокой точностью биологическими активностями,что крайне важно, если для этих молекул планируют получение разрешения надзорного органа для терапевтического применения у людей. Особенно предпочтительно, чтобы моноклональные антитела (или соответствующие функциональные фрагменты) представляли собой человеческие антитела (или соответствующие функциональные фрагменты). При рассмотрении агентов-антител, предназначенных для терапевтического применения у людей, весьма предпочтительно, чтобы антитела имели происхождение от человека. После введения пациенту-человеку человеческое антитело или его функциональный фрагмент наиболее вероятно не будет вызывать сильного иммуногенного ответа иммунной системы пациента, т.е. не будет распознан как чужеродный белок, т.е. белок, имеющий происхождение от источника, не являющегося человеком. Это означает отсутствие выработки антител хозяина, т.е. пациента, против терапевтического антитела, что в противном случае привело бы к блокаде активности терапевтического антитела и/или ускорению элиминации терапевтического антитела из организма пациента, предотвращая, таким образом, оказание его желаемого терапевтического эффекта. Термин "человеческое" антитело при использовании здесь следует понимать как означающий, что антитело любой специфичности или его функциональный фрагмент содержат аминокислотную последовательность (последовательности), входящую в репертуар человеческих антител зародышевого типа. В целях данного определения антитело или его фрагмент можно, таким образом, рассматривать как человеческие, если они состоят из такой человеческой аминокислотной последовательности (последовательностей) зародышевого типа, т.е. если аминокислотная последовательность (последовательности) рассматриваемого антитела или его функционального фрагмента идентична (идентичны) экспрессируемой человеческой аминокислотной последовательности (последовательностям) зародышевого типа. Антитело или его функциональный фрагмент также можно рассматривать как человеческие, если они состоят из последовательности (последовательностей), имеющей происхождение от наиболее близкой человеческой последовательности (последовательностей) зародышевого типа, не более чем следует ожидать ввиду импринтинга соматической гипермутации. В дополнение, антитела многих млекопитающих, не являющихся людьми, например грызунов, таких как мыши и крысы, содержат аминокислотные последовательности CDR3 VH, существование которых также можно ожидать в репертуаре экспрессируемых человеческих антител, В целях настоящего изобретения любую такую последовательность (последовательности), имеющую происхождение от человека или источника, не являющегося человеком, существование которых можно ожидать в экспресси-6 024654 руемом человеческом репертуаре, будут также рассматривать как "человеческие". Согласно предпочтительному воплощению изобретения человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент для использования в фармацевтических целях демонстрируют перекрестную реактивность между человеком и по меньшей мере одним видом обезьян. Такая же межвидовая перекрестная реактивность предпочтительна для всех других соединений, нейтрализующих/ингибирующих GM-CSF и/или IL-17 (не являющихся антителом или имеющих происхождение от источника, не являющегося антителом). Поскольку обычно будет необходимо оценивать фармацевтические средства во множестве тестов перед получением разрешения надзорного органа, среди которых определенные тесты на ранней стадии включают виды животных, не являющихся людьми, такие антитела с межвидовой перекрестной реактивностью особенно полезны. При проведении таких тестов в большинстве случаев желательно использовать в качестве вида, не являющегося человеком, вид с высокой степенью генетического сходства с людьми, поскольку результаты, полученные таким образом, в большинстве случаев будут в значительной степени предсказывать соответствующие результаты, которые можно ожидать при введении той же молекулы людям. Тем не менее, такая предсказательная сила, основанная на тестах на животных, по меньшей мере, частично зависит от совместимости молекулы и очень высока,если ввиду межвидовой перекрестной реактивности одна и та же терапевтическая молекула может быть введена людям и в моделях на животных. Как в данном воплощении, если молекула антитела обладает перекрестной реактивностью в отношении одного и того же антигена у людей и у другого близкородственного вида, тесты могут быть проведены с использованием одной и той же молекулы антитела у людей и у данного близкородственного вида, например у вида обезьян, упомянутого выше. Это увеличивает как эффективность тестов самих по себе, так и предсказательную силу таких тестов в отношении свойств таких антител у людей, конечного интересующего вида с терапевтической точки зрения. То же справедливо для альтернативных воплощений с нейтрализующими/ингибирующими соединениями, не являющимися антителами (или имеющими происхождение от источника, не являющегося антителом). Согласно другому воплощению изобретения человеческое моноклональное антитело может представлять собой антитело IgG. IgG включает не только вариабельные области антитела, обеспечивающие строго избирательное распознавание и связывание антигенов, но также константные области тяжелых и легких полипептидных цепей антитела, обычно присутствующие в эндогенно образуемых антителах, и в некоторых случаях даже присоединенные в одном или более чем одном месте углеводы. Такое гликозилирование в большинстве случаев является признаком формата IgG, и части этих константных областей составляют так называемую Fc-часть целого антитела, которая, как известно, вызывает различные эффекторные функции in vivo. В дополнение, Fc-часть опосредует связывание IgG с Fc-рецептором, продлевая, таким образом, период полувыведения in vivo, а также усиливая локализацию IgG в местах с повышенным содержанием Fc-рецепторов, например в воспаленной ткани. Предпочтительно антитело IgG представляет собой антитело IgG1 или антитело IgG4, являющиеся предпочтительными форматами, поскольку механизм их действия in vivo особенно хорошо описан и понятен. Это относится в первую очередь к антителам IgG1. Согласно другому воплощению изобретения функциональный фрагмент человеческого моноклонального антитела может представлять собой scFv, однодоменное антитело, Fv, VHH-антитело, диатело,тандемное диатело, Fab, Fab' или F(ab)2. В целом, эти форматы могут быть разделены на два подкласса, а именно на состоящие из одной полипептидной цепи и содержащие по меньшей мере две полипептидные цепи. Члены первого подкласса включают scFv (содержащий одну область VH и одну область VL, соединенные в одну полипептидную цепь полипептидным линкером); однодоменное антитело (содержащее одну вариабельную область антитела), как, например, VHH-антитело (содержащее одну областьVH). Члены последнего подкласса включают Fv (содержащий одну область VH и одну область VL в виде отдельных полипептидных цепей, нековалентно связанных друг с другом); диатело (содержащее две нековалентно связанные полипептидные цепи, каждая из которых включает две вариабельные области антитела, обычно одну VH и одну VL на полипептидную цепь, при этом две полипептидные цепи образуют конформацию "голова-к-хвосту", что приводит к образованию молекулы бивалентного антитела); тандемное диатело (биспецифичные одноцепочечные Fv-антитела, содержащие четыре ковалентно связанные вариабельные области иммуноглобулина, VH и VL, с двумя различными специфичностями, образующие гомодимер, в два раза больше описанного выше диатела); Fab (содержащий в качестве одной полипептидной цепи целую легкую цепь антитела, которая сама по себе содержит область VL и целую константную область легкой цепи, и, в качестве другой полипептидной цепи, часть тяжелой цепи антитела, включающую целую область VH и часть константной области тяжелой цепи, при этом указанные две полипептидные цепи связаны межмолекулярной связью посредством межцепьевой дисульфидной связи); Fab' (такой же, как описанный выше Fab, за исключением дополнительных восстановленных дисульфидных связей в тяжелой цепи антитела) и F(ab)2 (содержащий две молекулы Fab', каждая из которых связана с соответствующей другой молекулой Fab' посредством межцепьевых дисульфидных связей). В целом, функциональные фрагменты антител описанного выше типа обеспечивают значительную гибкость при придании, например, фармакокинетических свойств антитела, желательных для терапевтического введения с учетом конкретных практических необходимостей. Например, может быть желатель-7 024654 ным уменьшить размер вводимого антитела для увеличения степени проникновения в ткани при лечении тканей, в отношении которых известно, что их кровоснабжение скудно (например, суставы). В некоторых обстоятельствах может быть также желательным увеличить скорость элиминации терапевтического антитела из организма, обычно увеличиваемую уменьшением размера вводимого антитела. Фрагмент антитела определяют как функциональный фрагмент антитела в контексте данного изобретения, если фрагмент сохраняет характеристики специфичного связывания в отношении эпитопа/мишени исходного антитела, т.е. если он специфично связывает GM-CSF или IL-17 соответственно. Согласно другому воплощению изобретения указанное человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент может существовать в моновалентных моноспецифичных, мультивалентных моноспецифичных, в частности бивалентных моноспецифичных; или мультивалентных мультиспецифичных, в частности бивалентных биспецифичных, формах. В большинстве случаев мультивалентное мультиспецифичное, в частности бивалентное моноспецифичное, антитело, такое как целый человеческий IgG, как описано выше, может обеспечивать терапевтическое преимущество, заключающееся в том,что нейтрализацию, обеспечиваемую таким антителом, потенцируют эффекты авидности, т.е. связывания одним и тем же антителом нескольких молекул одного и того же антигена, в данном случае GM-CSF/IL17. Несколько моновалентных моноспецифичных форм фрагментов антител были описаны выше (например, scFv, Fv, VHH или однодоменное антитело). Мультивалентные мультиспецифичные, в частности бивалентные биспецифичные, формы человеческого моноклонального антитела против GM-CSF/IL-17 могут включать целый IgG, где одно связывающее плечо связывает GM-CSF/IL-17 примата, не являющегося человеком, в то время как его другое связывающее плечо связывает другой антиген, отличный отGM-CSF/IL-17. Другая мультивалентная мультиспецифичная, в частности бивалентная биспецифичная,форма может предпочтительно представлять собой человеческое одноцепочечное биспецифичное антитело, т.е. рекомбинантную конструкцию человеческого антитела, содержащую две группировки scFv, как описано выше, соединенные в одну непрерывную полипептидную цепь коротким промежуточным полипептидным спейсером, как общеизвестно в данной области техники (см., например, биспецифичное одноцепочечное антитело против CD19 и против CD3 по WO 99/54440). В данном случае одна часть scFv биспецифичного одноцепочечного антитела, входящая в биспецифичное одноцепочечное антитело, будет специфично связывать GM-CSF/IL-17, как изложено выше, в то время как соответствующая другая часть scFv этого биспецифичного одноцепочечного антитела будет связывать другой антиген, определенный как имеющий терапевтическое преимущество. В предпочтительном альтернативном случае биспецифичное одноцепочечное антитело будет специфично связывать GM-CSF, как изложено выше, в то время как соответствующая другая часть scFv этого биспецифичного одноцепочечного антитела будет связывать IL-17. Согласно другому воплощению ингибирующие человеческие моноклональные антитела или их функциональные фрагменты могут быть дериватизированы, например, органическим полимером, например одной или более чем одной молекулой полиэтиленгликоля ("PEG") и/или поливинилпирролидона("PVP"). Как известно в данной области техники, такая дериватизация может быть полезной при модулировании фармакодинамических свойств антител или их функциональных фрагментов. Особенно предпочтительны молекулы PEG, дериватизированные как PEG-малеимид, что делает возможной конъюгацию с антителом или его функциональным фрагментом сайт-специфическим образом через сульфгидрильную группу аминокислоты цистеина. Среди них особенно предпочтительны 20 и/или 40 кДа PEGмалеимид либо в разветвленной, либо в неразветвленной форме. Может быть особенно предпочтительным увеличение эффективной молекулярной массы небольших фрагментов человеческих антител противGM-CSF/IL-17, таких как scFv-фрагменты, сочетанием последних с одной или более чем одной молекулой PEG, особенно PEG-малеимид. При использовании здесь нумерация GM-CSF человека или примата, не являющегося человеком,относится к нумерации зрелого GM-CSF, т.е. GM-CSF без его сигнальной последовательности из 17 аминокислот (общая длина зрелого GM-CSF как у людей, так и у видов приматов, не являющихся людьми,описанных выше, составляет 127 аминокислот). Последовательность GM-CSF человека (SEQ ID NO: 57) и GM-CSF гиббона (SEQ ID NO: 58) представляет собой следующее: Последовательность GM-CSF у определенных членов семейства макаков, таких как, например, макак-резус (SEQ ID NO: 59) и яванский макак (SEQ ID NO: 80) представляет собой следующее: Минимальный эпитоп, предпочтительно эпитоп прерывистого типа", связываемый человеческим моноклональным антителом (или его функциональным фрагментом), как описано выше, выделен в приведенной выше последовательности GM-CSF жирным шрифтом. При использовании здесь термин "эпи-8 024654 топ прерывистого типа" следует понимать по меньшей мере как два не прилежащих друг к другу участка аминокислотной последовательности в пределах данной полипептидной цепи, в данном случае зрелогоGM-CSF, человека или примата, не являющегося человеком, одновременно и специфично связываемые антителом. Согласно данному определению такое одновременное специфичное связывание может представлять собой связывание полипептида GM-CSF в линейной форме. Здесь можно представить, что зрелый полипептид GM-CSF образует вытянутую петлю, в одной области которой происходит выравнивание двух последовательностей, выделенных выше жирным шрифтом, например более или менее параллельно и близко друг к другу. В этом состоянии происходит их специфичное и одновременное связывание фрагментом антитела. Согласно данному определению одновременное специфичное связывание двух участков последовательности зрелого GM-CSF, указанных выше, может также принимать форму связывания антитела с конформационным эпитопом. В данном случае уже произошло формирование третичной конформации зрелого GM-CSF, в которой он обычно существует in vivo. В этой третичной конформации полипептидная цепь зрелого GM-CSF свернута таким образом, что два участка последовательности, указанные выше, расположены в пространственной близости друг к другу, например на внешней поверхности определенной области зрелого прошедшего фолдинг GM-CSF, где затем происходит их распознавание в силу их трехмерной конформации в контексте окружающих полипептидных последовательностей. Предпочтительно человеческие моноклональные антитела против GM-CSF или их функциональные фрагменты представляют собой антитела или их функциональные фрагменты, содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14,последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 1; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 2; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 3; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 4; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 5; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 6; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 7; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 8; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 9; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 10; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 11; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 12; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено вSEQ ID NO: 13; или содержащие последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 14, последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в SEQ ID NO: 15, и последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, как изложено в Еще более предпочтительно любая из 14 указанных выше комбинаций последовательностей CDR1,CDR2 и CDR3 представлена в человеческом моноклональном антителе или его функциональном фрагменте, дополнительно содержащем в своей вариабельной области легкой цепи CDR1, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 16, CDR2, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 17, и CDR3, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 18. Согласно другому воплощению ингибирующее человеческое моноклональное антитело противGM-CSF или его функциональный фрагмент содержат в своей вариабельной области легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19. Предпочтительным является человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 20; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 21; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,как изложено в SEQ ID NO: 22; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 23; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 24; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 25; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 26; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент" где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 27; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 28; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 29; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 30; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,как изложено в SEQ ID NO: 31; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 32; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 33; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 52; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 19, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 53. Согласно другому воплощению ингибирующее человеческое моноклональное антитело противGM-CSF или его функциональный фрагмент содержат в своей вариабельной области легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54. Предпочтительным является человече- 10024654 ское моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 20; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 21; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,как изложено в SEQ ID NO: 22; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 23; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 24; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 25; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 26; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 27; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 28; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 29; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 30; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,как изложено в SEQ ID NO: 31; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 32; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 33; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 52; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 54, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 53. Согласно другому воплощению ингибирующее человеческое моноклональное антитело противGM-CSF или его функциональный фрагмент содержат в своей вариабельной области легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55. Предпочтительным является человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 20; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 21; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,- 11024654 как изложено в SEQ ID NO: 22; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 23; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 24; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 25; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 26; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 27; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 28; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 29; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 30; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность,как изложено в SEQ ID NO: 31; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 32; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 33; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 52; или человеческое моноклональное антитело или его функциональный фрагмент, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 55, а вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 53. Предпочтительное ингибирующее человеческое моноклональное антитело против GM-CSF или его функциональный фрагмент содержат в своей вариабельной области легкой цепи участок CDR1, содержащий аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 16, участок CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 17, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 18, и содержат в своей вариабельной области тяжелой цепи участок CDR1, содержащий аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 1, 2,3,4,5,6,7,8,9, 10, 11, 12, 13 или 56. В другом предпочтительном воплощении антитело содержит в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 35; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 36; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 37; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 38; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 39; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 40; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 41; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 43; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 44; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 45; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 46; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 47; или в своей легкой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 34, и в своей тяжелой цепи аминокислотную последовательность, как изложено вSEQ ID NO: 48. Согласно предпочтительным воплощениям, изложенным выше, предложены молекулы человеческого моноклонального антитела и/или их функциональные фрагменты, особенно полезные в качестве агентов, нейтрализующих активность GM-CSF человека и примата, не являющегося человеком. Человеческие моноклональные антитела или их функциональные фрагменты по этим особенно предпочтительным воплощениям очень полезны по нескольким причинам. Во-первых, они распознают GM-CSF человека и примата, не являющегося человеком, с высокой специфичностью. То есть, из смеси GM-CSF примата, не являющегося человеком, с другими колониестимулирующими факторами примата, не являющегося человеком (например, G-CSF и M-CSF примата,не являющегося человеком), связывающие молекулы по этим особенно предпочтительным воплощениям высокоизбирательны в отношении GM-CSF примата, не являющегося человеком, в то время как распознавания других колониестимулирующих факторов в таком же окружении не происходит. То же справедливо, с необходимыми поправками, для GM-CSF человека. Это означает, что при введении человеку человеческого моноклонального антитела или его функционального фрагмента по этим воплощениям будут ожидать, что это антитело или его функциональный фрагмент будет специфично связывать и нейтрализовать только желаемую мишень, в то время как в отношении других нежелательных мишеней не происходит ни связывания, ни нейтрализации. В конечном счете это приводит к высокой степени предсказуемости относительно терапевтического способа действия in vivo. Во-вторых, связывающие агенты по этим особенно предпочтительным воплощениям связываютGM-CSF человека и примата, не являющегося человеком, с очень высокой аффинностью. Для молекул этого класса наблюдали значения KD от приблизительно 410-9 М до таких низких, как приблизительно 0,0410-9 М, последнее соответствует приблизительно 40 пМ. Поскольку кинетическая скорость ассоциации таких молекул в водной среде ограничена главным образом диффузией, она не может быть улучшена в большей степени, чем будут позволять местные условия диффузии в физиологических условиях,низкая KD возникает, в первую очередь, в результате кинетической скорости диссоциации, koff, которая для связывающего агента, представляющего собой антитело с наибольшей аффинностью, составляет приблизительно 10-5 с-1. Это означает, что после образования комплекса человеческого моноклонального антитела или его функционального фрагмента по любому из этих воплощений, с одной стороны, и GMCSF, с другой стороны, не происходит его легкого или, по меньшей мере, быстрого распада. Для связывающих молекул, предназначенных для нейтрализации биологической активности, эти характеристики очень полезны, поскольку желаемый нейтрализующий эффект будет обычно продолжаться только пока молекула, биологическую активность которой следует нейтрализовать (здесь, GM-CSF примата, не являющегося человеком, и человека), связана нейтрализующей связывающей молекулой. Таким образом,нейтрализующая молекула, связывающая ее предполагаемую мишень в течение длительного времени,будет продолжать обеспечивать нейтрализацию в течение соответствующего длительного времени. Высокая аффинность связывания человеческих моноклональных антител или их функциональных фрагментов с GM-CSF примата, не являющегося человеком, и человека имеет дополнительное преимущество. Обычно элиминация антител или их функциональных фрагментов из кровотока пациента происходит зависимым от размера образом, при этом выведение и элиминация молекул меньшего размера происходят раньше молекул большего размера. Поскольку комплекс двух полипептидов, антитела или фрагмента антитела и связанного GM-CSF, очевидно, крупнее антитела самого по себе, низкая koff, упомянутая выше, приводит к такому эффекту, что выведение и элиминация терапевтического нейтрализующего агента из организма пациента происходят медленнее, чем происходили бы в случае, когда нейтрализующий агент не связан с GM-CSF. Таким образом, происходит не только увеличение значения нейтрализующей активности, но и его продолжительности от vivo. Нейтрализующая активность, определенная для связывающих агентов по описанным выше воплощениям, неожиданно высока. Как будет описано более подробно ниже, нейтрализующую активность в отношении GM-CSF измеряли от vitro с применением анализа ингибирования роста клеток TF-1(Kitamura, T. et al. (1989), J. Cell. Physiol. 140, 323-34). В качестве признака нейтрализующей способности измеряли значения средней ингибирующей концентрации (IC50), представляющие собой концентрацию человеческого моноклонального антитела или его функционального фрагмента по любому из этих воплощений, необходимую для оказания ингибирования пролиферации клеток TF-1, составляющего половину от максимального. Для человеческих моноклональных антител против GM-CSF или их функциональных фрагментов, указанных выше, было определено значение IC50 приблизительно 310-10 М, или приблизительно 0,3 нМ. Следовательно, связывающие молекулы являются мощными агентами, нейтрализующими активность GM-CSF примата, не являющегося человеком, и человека. Итак, в заключение человеческие моноклональные антитела против GM-CSF или их функциональные фрагменты демонстрируют высокую степень избирательности в отношении желаемого антигена,связывают этот антиген очень прочно и на продолжительное время и демонстрируют очень мощную нейтрализующую активность в течение длительного времени, пока они связаны с антигеном. В то же время длительная персистенция комплекса связывающего агента и антигена замедляет элиминацию этого связывающего агента из организма, увеличивая посредством этого продолжительность желаемого терапевтического эффекта от vivo. Подобные выводы также справедливы для нейтрализующего/ингибирующего моноклонального антитела против IL-17. Согласно данному изобретению термин "фармацевтическая композиция" относится к композиции для введения пациенту, предпочтительно пациенту-человеку. Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит подходящие композиции носителей, стабилизаторов и/или эксципиентов. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция включает композицию для парентерального, чрескожного, внутрипросветного, внутриартериального, интратекального и/или интраназального введения или для введения прямой инъекцией в ткань. В частности, предполагают введение указанной композиции пациенту посредством инфузии или инъекции. Введение подходящих композиций может быть осуществлено различными способами, например внутривенным, внутрибрюшинным, подкожным, внутримышечным, местным или внутрикожным введением. Композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель. Примеры подходящих фармацевтических носителей хорошо известны в данной области техники и включают забуференные фосфатом физиологические растворы, воду, эмульсии, такие как эмульсии типа "масло/вода", различные типы увлажняющих агентов, стерильные растворы, липосомы и т.п. Композиции, содержащие такие носители, могут быть изготовлены хорошо известными обычными способами. Эти фармацевтические композиции могут быть введены субъекту в подходящей дозе. Схема приема будет определена лечащим врачом и клиническими факторами. Как хорошо известно в области медицины, дозы для любого пациента зависят от многих факторов, включая биометрические данные пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, подлежащее введению, время и путь введения, общее состояние здоровья и одновременное введение других лекарственных средств. Препараты для парентерального введения включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и органические эфиры для инъекций, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, водно-спиртовые растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и забуференную среду. Наполнители для парентерального введения включают раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или нелетучие масла. Наполнители для внутривенного введения включают жидкие и питательные наполнители, электролитные наполнители (например, основанные на декстрозе Рингера) и т.п. Также могут присутствовать консерванты или другие добавки, такие как, например,противомикробные агенты, антиоксиданты, хелатирующие агенты, инертные газы и т.п. В дополнение,фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать белковые носители, такие как, например, сывороточный альбумин или иммуноглобулин, предпочтительно человеческого происхождения. Предполагают, что фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может содержать, в дополнение к описанным выше соединениям, другие биологически активные агенты, в зависимости от предполагаемого применения фармацевтической композиции. Такие агенты могут представлять собой лекарственные средства, действующие на пищеварительную систему, лекарственные средства, действующие как цитостатики, лекарственные средства, предотвращающие гиперурикемию,лекарственные средства, ингибирующие иммунные реакции (например, кортикостероиды), лекарственные средства, модулирующие воспалительный ответ, лекарственные средства, действующие на систему кровообращения, и/или такие агенты, как цитокины, известные в данной области техники. Биологическая активность фармацевтической композиции, определенной здесь, может быть определена, например, анализами цитотоксичности, как описано в следующих примерах, в WO 99/54440 илиvivo" при использовании здесь относится к ответу на терапию фармацевтической композицией по изо- 14024654 бретению с использованием, например, стандартизированных критериев ответа Национального института рака США (NCI). Успешность или эффективность терапии с использованием фармацевтической композиции по изобретению in vivo относится к эффективности композиции для ее предполагаемого назначения, т.е. способности композиции оказывать желаемый эффект, т.е. истощению патологических клеток, например опухолевых клеток. Эффективность in vivo можно отслеживать установленными стандартными способами для соответствующего заболевания, включая, без ограничения, определение числа лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, сортировку клеток с возбуждением флуоресценции, аспирацию костного мозга. В дополнение могут быть применены различные специфичные для болезни клиникобиохимические параметры и другие установленные стандартные способы. Кроме того, могут быть применены компьютерная томография, рентгенологическое исследование, магнитно-резонансная томография (например, для оценки ответа на основании критериев Национального института рака США), сканирующая позитронно-эмиссионная томография, определение числа лейкоцитов, лейкоцитарной формулы,сортировка клеток с возбуждением флуоресценции, аспирация костного мозга, биопсии/гистологические исследования лимфатических узлов и различные специфичные для лимфом клинико-биохимические параметры (например, лактатдегидрогеназа), и другие установленные стандартные способы. Другой основной проблемой при разработке лекарственных средств, таких как фармацевтическая композиция по изобретению, является предсказуемая модуляция фармакокинетических свойств. С этой целью устанавливают фармакокинетический профиль лекарственного средства-кандидата, т.е. профиль фармакокинетических параметров, влияющих на возможность лечения данного состояния конкретным лекарственным средством. Фармакокинетические параметры лекарственного средства, влияющие на возможность лечения определенного заболевания лекарственным средством, включают, без ограничения,период полувыведения, объем распределения, метаболизм при первом прохождении через печень и степень связывания с сывороткой крови. Каждый из упомянутых выше параметров может влиять на эффективность данного лекарственного агента."Период полувыведения" означает время, в течение которого происходит элиминация 50% введенного лекарственного средства посредством биологических процессов, например метаболизма, выведения и т.п. Под "метаболизмом при первом прохождении через печень" понимают способность лекарственного средства подвергаться метаболизму при первом контакте с печенью, т.е. в течение его первого прохождения через печень,"Объем распределения" означает степень задержки лекарственного средства в различных компартментах организма, таких как, например, внутриклеточное и внеклеточное пространства, ткани и органы и т.п., и распределение лекарственного средства в пределах этих компартментов."Степень связывания с сывороткой крови" означает склонность лекарственного средства к взаимодействию и связыванию с белками сыворотки крови, такими как альбумин, что приводит к снижению или потере биологической активности лекарственного средства. Фармакокинетические параметры также включают биодоступность, время до начала ответа (Tlag),время достижения максимальной концентрации в крови (Tmax), скорости всасывания, начало возрастания концентрации в крови и/или максимальную концентрацию в крови (Cmax) для данного введенного количества лекарственного средства."Биодоступность" означает количество лекарственного средства в кровяном компартменте."Время до начала ответа" означает время задержки между введением лекарственного средства и его выявлением и возможностью измерить в крови или плазме."Tmax" представляет собой время достижения максимальной концентрации лекарственного средства в крови, и "Cmax" представляет собой максимальную концентрацию в крови, достижимую для данного лекарственного средства. На время достижения концентрации лекарственного средства в крови или ткани, необходимой для его биологического эффекта, влияют все эти параметры. Термин "токсичность" при использовании здесь относится к токсическим эффектам лекарственного средства, проявляющимся в нежелательных явлениях или тяжелых нежелательных явлениях. Эти побочные явления могут относиться к недостаточной общей переносимости лекарственного средства и/или недостаточной местной переносимости после введения. Токсичность может также включать тератогенные или канцерогенные эффекты, вызванные лекарственным средством. Термины "безопасность", "безопасность от vivo" или "переносимость" при использовании здесь определяют введение лекарственного средства, не вызывающее тяжелых нежелательных явлений непосредственно после введения (местная переносимость) и в течение более длительного периода применения лекарственного средства. "Безопасность", "безопасность от vivo" или "переносимость" можно оценивать, например, через постоянные интервалы в течение лечения и периода последующего наблюдения. Измерения включают клиническую оценку, например органные проявления, и скрининг лабораторных отклонений. Проведение клинической оценки и запись/кодирование обнаруженных отклонений от нормы могут быть осуществлены согласно стандартам оценочной шкалы общих критериев токсичности Национального института рака США (NC1-CTC) и/или Медицинского словаря регуляторной деятельности(MedDRA). Органные проявления могут включать такие критерии, как аллергия/иммунология,- 15024654 кровь/костный мозг, нарушения сердечного ритма, коагуляция и т.п., как изложено, например, в Общих критериях терминологии нежелательных явлений, версии 3.0 (СТСАЕ). Лабораторные параметры, которые могут быть исследованы, включают, например, гематологию, клиническую химию, коагуляционный профиль и анализ мочи и исследование других биологических жидкостей, таких как сыворотка, плазма,лимфа или спинномозговая жидкость, ликвор и т.п. Безопасность, таким образом, может быть оценена,например, физическим обследованием, методиками визуализации (т.е. ультразвуковыми, рентгенологическими, сканированием компьютерной томографией (СТ), магнитно-резонансной томографией (MRI),другими способами с использованием технических устройств (т.е. электрокардиограммой), оценкой основных показателей состояния организма, измерением лабораторных параметров и записью нежелательных явлений. Термин "эффективная и нетоксичная доза" при использовании здесь относится к переносимой дозе биспецифичного одноцепочечного антитела, как определено здесь, достаточно высокой для истощения патологических клеток, элиминации опухоли, уменьшения опухоли или стабилизации заболевания без серьезных токсических эффектов или по существу без серьезных токсических эффектов. Такие эффективные и нетоксичные дозы могут быть определены, например, исследованиями с увеличением дозы, описанными в данной области техники, и эти дозы должны быть меньше дозы, вызывающей тяжелые нежелательные побочные явления (дозолимитирующая токсичность, DLT). Настоящее изобретение включает некоторые графические материалы, на которых изображено следующее. Фиг. 1. Эффект лечения с использованием mAb 22E9, нейтрализующего GM-CSF (A), mAb 1400.24.17, нейтрализующего IL-1 (Б), и антагониста TNF этанерцепта (В) на припухлость суставов при хроническом SCW-индуцированном воспалении. Артрит индуцировали, как описано в разделе "Методы". Препараты вводили внутрибрюшинно в виде 300 мкг доз на 14, 17, 21 и 24 сутки. Воспаление оценивали по накоплению 99mTc в коленных суставах и представляли как соотношение правое (колено с артритом)/левое (колено с контролем PBS). Соотношение 1,10 рассматривают как припухлость сустава. Группы сравнивали U-критерием Манна-Уитни ( 0,05 р 0,01;0,01 р 0,001); n=7 на группу. Фиг. 2. Эффект введения mAb, нейтрализующего GM-CSF (22E9 mAb), mAb, нейтрализующегоIL-1, (1400.24.17) и антагониста TNF этанерцепта на приток воспалительных клеток в синовиальную оболочку (А) и на повреждение хряща (Б). Индукция заболевания и лечение описаны в разделе "Методы". Мышей умерщвляли на 28 сутки, приготавливали и визуально оценивали гистологические препараты. Группы сравнивали с контролем U-критерием Манна-Уитни, n=7. Фиг. 3. Микрофотографии характерных коленных суставов от мышей с хроническим(1400.24.17) (Б), антагонист TNF этанерцепт (В) и контрольное mAb (Г). Срезы приготавливали на 28 сутки после начальной индукции SCW-артрита и окрашивали сафранином О/малахитовым зеленым. Р = надколенник; F = бедро; С = хрящ. Следует отметить хорошую сохранность хряща в (А) и (Б) и потерю протеогликанов и эрозии хряща в (В) и (Г). Изначальное увеличение составляло 200. Фиг. 4. Уровни местного IL-1 (А) и KC (эквивалента Gro) (Б), измеренные с использованием гранул Luminex в супернатантах 1-часовых культур надколенников, полученных на 21 сутки после первой индукции SCW-артрита. Введения проводили, как описано в подписи к фиг. 1. Фиг. 5. Хронический SCW-индуцированный артрит у мышей дикого типа и мышей с дефицитомIL-17R, которым вводили контрольные антитела или антитела против GM-CSF. (А) Припухлость суставов у мышей дикого типа (WT) и IL-17R-/-, Как показано ранее, у мышей WT значимые различия в припухлости суставов между мышами, получавшими контрольное антитело, и мышами, получавшими антитело против GM-CSF, были обнаружены на 22, 23 и 28 сутки. (Б) Воспаление суставов и деструкция хрящевых протеогликанов (PG) на 28 сутки. (В) Повреждение хряща (эрозии и гибель хондроцитов) в хрящевых слоях надколенника и бедра мыши WT, которой вводили контрольное антитело. (Г) Меньшее повреждение хряща у мыши IL-17R-/-, которой вводили антитела против GM-CSF. (Д) Потеря хрящевыхPG в хрящевых слоях надколенника и бедра мыши WT, которой вводили контрольное антитело. (Е) Потеря хрящевых PG у мыши IL-17R-/-, получавшей антитело против GM-CSF. Подробности см. на фиг. 3. Данные представлены как среднеестандартное отклонение (SD) по меньшей мере для 6 мышей на группу. Эксперименты повторяли один раз со сходными результатами.Р 0,01 по сравнению с контрольными мышами WT, которым вводили контрольные антитела,Р 0,01 по сравнению с мышамиIL-17R-/-, которым вводили антитела против GM-CSF, U-критерий Манна-Уитни. Фиг. 6. Макроскопические показатели мышей с коллаген-индуцированным артритом, наблюдаемые в течение десяти суток после начала лечения. После появления первых симптомов артрита (что соответствует 1 суткам на фиг. 6) мышам внутривенно (в/в) вводили (также на 1 сутки на фиг. 6) (1) моноклональное антитело против IL-17, mAb 421, само по себе в дозе 1,5 мг/кг, однократно, (2) моноклональное антитело против GM-CSF, 22E9, само по себе в дозе 3 мг/кг или (3) mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг и 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг в комбинации. Блокада IL-17 посредством mAb 421 в комбинации с нейтрализациейGM-CSF с использованием 22 Е 9 значительно снижала клинические показатели коллагениндуцированного артрита, в то время как введение mAb 421 или 22 Е 9 самих по себе не приводило к су- 16024654 щественному снижению тяжести заболевания. Симптомы артрита у мышей исчезали через 2-3 суток после внутрибрюшинного введения дексаметазона (2 мг/кг, положительный контроль). Антитело IgG2A(контроль изотипа) использовали в качестве отрицательного контроля. Результаты представлены как среднее + стандартная ошибка среднего (SEM) при n=9-10 мышей на группу.Р 0,05,Р 0,01 по сравнению с мышами отрицательного контроля, которым вводили антитело изотипа IgG2A, как определено однофакторным дисперсионным анализом (one-way ANOVA) и критерием множественного сравнения Даннетта (Dunnett's multiple comparison test). Фиг. 7. Характерные срезы суставов через 10 суток после однократного введения 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг (A), mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг (Б), комбинации 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг и mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг (В) или контроля изотипа (Г). Суставы фиксировали в 4% формалине, декальцифицировали, приготавливали срезы и окрашивали гематоксилином/эозином. Для мышей, получавших крысиный IgG2a контроля изотипа (фиг. 7 Г), было показано явное воспаление суставов с массивной клеточной инфильтрацией синовиальной оболочкии деструкция суставов с эрозиями хряща и кости . Хотя и в несколько меньшей степени, но для мышей, получавших дозу 22 Е 9 3 мг/кг (фиг. 7 А), или mAb 421 1,5 мг/кг (фиг. 7 Б), также было показано тяжелое воспаление и деструкция суставов, в то время как для мышей, получавших однократное введение комбинированного лечения 22 Е 9, 3 мг/кг, вместе с mAb 421, 1,5 мг/кг, продемонстрировано весьма существенно сниженное воспаление(фиг. 7 В) и хорошая сохранность целостности сустава с почти нормальной поверхностью хряща, что отмечено стрелкой на фиг. 7 В. Следующие подробности экспериментов позволят специалисту в данной области техники полностью понять суть настоящего изобретения. Животные. Самцов мышей C57Bl/6 получали от Charles River (Sulzfeld, Germany). Мыши с дефицитом IL-17R были любезно предоставлены J. Peschon, Amgen, Seattle, WA, USA. Мышей содержали в клетках с верхним фильтром (filter top cages) и воду и пищу предоставляли ad libitum. Использовали мышей в возрасте 10-12 недель. Все процедуры на животных были одобрены ведомственным этическим комитетом. Приготовление SCW и индукция SCW-артрита. Микроорганизмы Streptococcus pyogenes T12 культивировали в течение ночи в бульоне ТоддаГевитта. Клеточные стенки приготавливали, как описано van den Broek et al., Am. J. Pathol. 133(1), 139149 (1988). В экспериментах использовали полученный центрифугированием при 10000 g супернатант. Препарат содержал 11% мурамовой кислоты. Односторонний артрит индуцировали внутрисуставной(в/с) инъекцией 25 мкг SCW (содержание рамнозы) в 6 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS) в правый коленный сустав интактных мышей, как описано Joosten et al., Ann Rheum Dis. 59(3), 196-205 (2000). Для получения хронического артрита, индуцированного клеточными стенками стрептококков (SCW-артрита), внутрисуставные инъекции в правый коленный сустав повторяли на 0, 7,14 и 21 сутки. Эти повторные инъекции приводят к хроническому артриту. В качестве контроля в левый коленный сустав вводили PBS. Реагенты и протокол лечения.GM-CSF нейтрализовали с использованием крысиного mAb 22E9 (MM500CS, Perbio Science, Bonn,Germany). Этанерцепт (Enbrel; Wyeth Pharma, Mnster, Germany) использовали для блокады TNF. В некоторых исследованиях было сообщено об эффективности этого Fc-слитого белка человеческого растворимого рецептора TNF в различных моделях на мышах, включая CIA. Крысиный IgG2a контроля изотипа (BLD-400516-bulk, Biozol Diagnostica, Eching, Germany) и Humira (Abbott, Wiesbaden-Delkenheim,Germany) использовали в качестве контролей изотипа. IL-1 нейтрализовали крысиным mAb против мышиного IL-1 1400.24.17 (MM425, Perbio Science, Bonn, Germany). Все препараты, вводимые внутрибрюшинно в дозах 300 мкг, вводили 4 раза: 1) за 2 ч до третьей реактивации (14 сутки); 2) на 17 сутки; 3) за 2 ч до четвертой реактивации (21 сутки) и 4) на 24 сутки после начальной индукции заболевания. Оценка припухлости суставов. Припухлость суставов при SCW-артрите количественно оценивали способом накопления 99mTc,описанным Kruijsen et al., Agents Actions 11(6-7), 640-2 (1981). Этим утвержденным способом измеряют накопление радиоизотопа в месте воспаления ввиду увеличенного местного кровотока и припухлости тканей, вычисляемое по внешнему гамма-излучению. Выраженность припухлости представлена как отношение накопления 99mTc в правом (воспаленном) и левом (контрольном) коленном суставе. Все значения, превышающие 1,10, рассматривали как припухлость сустава. Измерения цитокинов и хемокинов. В смывах из надколенников определяли уровни нескольких цитокинов и хемокинов, включая IL-1,IL-6, TNF, RANTES, KC и MIP-1. Надколенник с окружающей синовиальной тканью выделяли из воспаленных коленных суставов и культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 0,1% BSA (200 мкл на надколенник) в течение 1 ч при комнатной температуре, как описано ранее Joosten et al., J. Immunol. 165(11), 6553-8 (2000). Затем супернатанты собирали и центрифугировали в течение 5 мин при 1000 g. Уровни цитокинов и хемокинов определяли с применением технологии Luminex для нескольких анализируемых веществ. Авторы изобретения использовали систему BioPlex от BioRad (Munich, Germany) в комбинации с наборами для нескольких цитокинов и хемокинов. Гистологический анализ. Мышей умерщвляли цервикальной дислокацией на 28 сутки. Целые коленные суставы удаляли и фиксировали в 4% формальдегиде в течение 7 суток перед декальцификацией в 5% муравьиной кислоте и обработкой для заключения в парафин. Срезы тканей (7 мкм) окрашивали гематоксилином/эозином(Н/Е) или сафранином О/малахитовым зеленым (SO). Проводили балльную оценку гистопатологических изменений в коленных суставах в надколенной/бедренной области на 5 полусерийных срезах отделенных друг от друга на 140 мкм. Балльную оценку проводили на кодированных микропрепаратах с привлечением двух независимых исследователей с использованием следующих параметров. В микропрепаратах,окрашенных Н/Е, количеству клеток, инфильтрирующих синовиальную выстилку, присваивали балльную оценку от 0 до 3. Повреждению хряща в микропрепаратах, окрашенных SO, присваивали балльную оценку по шкале от 0 до 3. Статистический анализ. Различия между экспериментальными группами исследовали с применением U-критерия МаннаУитни и с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 4. Показатели статистической значимости группировали следующим образом;0,05 р 0,01;0,01 р 0,001 ир 0,001. Сходным образом, следующие примеры позволят специалисту в данной области техники полностью понять суть настоящего изобретения. Пример 1. Системная нейтрализация GM-CSF уменьшает припухлость суставов в модели хроническогоSCW-артрита. В хронической фазе SCW-артита у мышей C57Bl/6 эффект на припухлость суставов после лечения биологическими агентами, нейтрализующими GM-CSF (mAb 22E9), TNF (этанерцепт) или IL-1(mAb 1400.24.17) исследовали на 15, 16, 22, 23 и 28 сутки по дифференциальному накоплению 99mTc в коленных суставах. Результаты представлены как отношение накопления 99mTc в колене с артитом после инъекции SCW и контрольном колене после инъекции PBS. Системное введение антитела, нейтрализующего GM-CSF, эффективно и значительно уменьшало припухлость суставов на 16, 22, 23 и 28 сутки с р-значениями 0,018, 0,004, 0,004 и 0,002 соответственно(фиг. 1A). Нейтрализация IL-1 также приводила к уменьшению припухлости суставов, хотя значимое уменьшение накопления 99mTc в коленных суставах по сравнению с контрольными коленными суставами наблюдали лишь на 22 (р=0,011) и 23 (р=0,001) сутки (фиг. 1 Б). Как и ожидали, блокада TNF этанерцептом, способным нейтрализовать человеческий, а также мышиный TNF, не оказывала эффекта на припухлость суставов в модели хронического SCW-артрита (фиг. 1 В). В отличие от этого, ранее было показано, что этанерцепт активен в острой фазе данной модели заболевания. Таким образом, нейтрализация GM-CSF при хроническом SCW-артрите, по-видимому, была более эффективна, чем нейтрализацияIL-1, и этот эффект продолжался до 28 суток, т.е. 4 суток после последнего введения антитела. Во втором независимом исследовании была подтверждена эффективность нейтрализации GM-CSF для уменьшения припухлости суставов в модели хронического SCW-артрита. Пример 2. Нейтрализация GM-CSF уменьшает приток воспалительных клеток в синовиальную оболочку и повреждение хряща. Гистопатологические срезы суставов из различных групп мышей приготавливали после окончания эксперимента на 28 сутки. Балльную оценку степени притока воспалительных клеток в синовиальную оболочку и повреждения хряща проводили два исследователя на маскированных срезах тканей, окрашенных Н/Е и SO. Все три лечения, нейтрализация GM-CSF посредством mAb 22E9, нейтрализация IL-1 посредствомmAb 1400.24.17 и блокада TNF этанерцептом, были эффективны для существенного снижения притока воспалительных клеток в синовиальную оболочку (фиг. 2 А). Блокада TNF, хотя и была достоверно эффективна, по-видимому, была менее эффективна, чем нейтрализация GM-CSF или IL-1 с р-значениями по сравнению с контролями 0,042, 0,004 и 0,001 соответственно. Более того, несмотря на снижение притока воспалительных клеток в коленные суставы мышей, которым вводили этанерцепт, целостность хряща не была сохранена (фиг. 2 Б). В отличие от этого, нейтрализация GM-CSF достоверно обеспечивала защиту от повреждения хряща (р=0,02; mAb 22E9 против mAb контроля изотипа) (фиг. 2 Б). Как сообщено ранее, нейтрализация IL-1 была очень эффективна для защиты хряща от повреждения (р=0,004,антитело против IL-1 по сравнению с контролем; фиг. 2 Б). Эффекты различных лечений на целостность хряща проиллюстрированы на фиг. 3, где показаны микрофотографии окрашивания сафранином О/малахитовым зеленым коленных суставов от одной характерной мыши из каждой из трех групп лечения. Сильное окрашивание хряща и хорошая сохранность тканей, наблюдаемые у мыши, которой вводили mAb 22E9 (фиг. 3 А), подчеркивает эффект нейтрализации GM-CSF на защиту целостности хряща. Наоборот, для хряща от мыши, получавшей антитело контроля изотипа (фиг. 3 Г), показаны деструктивные эрозии и сниженная интенсивность окрашивания, что демонстрирует потерю протеогликана, одного из основных компонентов суставного хряща. Сходным образом, потерю протеогликана и большее повреждение хряща наблюдают у мыши, которой вводили этанерцепт (фиг. 3 В). Это согласуется с предшествующими исследованиями в хронической SCW-модели артрита, в которых была показана независимость от TNF. Известно, что IL-1 оказывает выраженный деструктивный эффект на хрящ в экспериментальных моделях артрита. Соответственно, нейтрализацияIL-1 антителом имеет выраженный защитный эффект на хрящ в настоящем исследовании авторов изобретения (фиг. 3 Б). Пример 3. Нейтрализация GM-CSF уменьшает образование IL-1 и KC в коленных суставах. Для лучшего понимания защитного эффекта GM-CSF и его взаимосвязи с IL-1 авторы изобретения исследовали концентрации различных цитокинов и хемокинов в надколенных смывах. Анализировали только коленные суставы с артритом (правые), поскольку в предыдущих экспериментах было неоднократно обнаружено, что уровни в непораженных контрольных коленных суставах (левых) были ниже предела выявления. Нейтрализация GM-CSF посредством mAb 22E9 приводила к существенному снижению местногоIL-1 по сравнению с уровнями, выявленными в суставах от мышей, получавших лечение антителом контроля изотипа (р=0,042; введение 22 Е 9 по сравнению с контролем) (фиг. 4). Блокада TNF этанерцептом не оказывала эффекта на уровни IL-1 в суставах (фиг. 4), в то время как, согласно ожиданиям, у мышей, получавших mAb, нейтрализующее IL-1, уровни IL-1 были близки к исходным. Все три лечения значительно снижали уровни хемокина KC (мышиного GRO-) в коленных суставах с артритом(р=0,0047 для 22 Е 9 по сравнению с контролем; р=0,0007 для этанерцепта по сравнению с контролем; р=0,007 для антитела против IL-1 по сравнению с контролем). Ни одно из исследованных лечений не оказывало влияния на местные уровни IL-6 и RANTES (данные не показаны). Уровни IL-2, TNF иGM-CSF были ниже пределов выявления анализов, например 10 пг/мл. Пример 4. Нейтрализация GM-CSF в отсутствие сингализации IL-17 потенцирует защитные эффекты на деструкцию хряща. Нейтрализация GM-CSF снижала припухлость суставов и обеспечивала защиту хряща от повреждения с эффективностью, сходной с наблюдаемой при нейтрализации IL-1, Впоследствии сходные исследования с mAb против GM-CSF при хроническом SCW-артрите проводили у мышей с дефицитом IL17R. Дефицит IL-17R приводит к меньшей припухлости суставов и деструкции хряща при хроническомSCW-артрите (фиг. 5 А). Комбинированное направленное действие на сигнализацию как GM-CSF, так иIL-17 в данной модели артрита приводило к сильному повышенному подавлению припухлости суставов(фиг. 5 А). Несмотря на то что как лечение против GM-SCF, так и дефицит IL-17R приводили к сниженному притоку клеток, комбинированное лечение не приводило к существенному уменьшению воспаления суставов (фиг. 5 Б). Тем не менее, интересно, что потеря протеогликанов и повреждение хряща (гибель хондроцитов и эрозия) были заметно снижены у мышей с дефицитом IL-17R, которым вводили антитело против GM-CSF (фиг. 5 Б-Д). Эти результаты демонстрируют, что защитный эффект антитела против GM-CSF на хрящ может быть сверх того усилен дополнительным направленным воздействием на Т-клеточный цитокин IL-17. Пример 5. Модель хронического рецидивирующего SCW-артрита на мышах отличается тяжелой деструкцией суставов, что типично для поздних стадий хронического RA у людей. В отличие от наблюдений в моделиCIA на мышах и модели острого SCW-артрита, нейтрализация TNF не является эффективной для контроля хронического SCW-артрита, где, по-видимому, основную патогенетическую роль играет IL-1(72). Независимость от TNF и ключевая роль IL-1 в деструкции хряща при хроническом SCW-артрите были подтверждены в исследовании авторов изобретения. Во-первых, в данной конкретной модели была исследована блокада GM-CSF и было обнаружено,что она оказывала сильный ингибирующий эффект на припухлость суставов и деструкцию хряща в коленных суставах, в которые инъецировали SCW, при внутрибрюшинном введении доз антитела, составлявших 300 мкг, в хронической фазе заболевания. Это демонстрирует, что антитело против GM-CSF у мышей в дозе, эквивалентной дозе антитела приблизительно 1 мг/кг у людей (после аллометрической коррекции), является достаточным для коррекции уровней GM-CSF в коленных суставах с артритом. Терапевтическая эффективность нейтрализации GM-CSF в модели хронического артрита была абсолютной. Лечение против GM-CSF обеспечивало лучший контроль припухлости суставов, чем лечение против IL-1, в то время как блокада TNF была неэффективна. Аберрантная продукция TNF все же может играть некоторую роль при хроническом SCW-артрите, поскольку его нейтрализация оказывала эффект на приток воспалительных клеток и уровни хемокина KC. Тем не менее, роль TNF в стимуляции этого хронического заболевания уменьшена, в противоположность острой фазе заболевания и в отличие от других моделей артрита на мышах. В отношении защитного действия на хрящ как лечение противIL-1 было сообщено ранее в другой модели артрита. В этой модели IL-1-индуцированного артрита после инъекции mBSA GM-CSF играет преобладающую патогенетическую роль. Отсутствие GM-CSF как у мышей GM-CSF KO или в результате нейтрализации GM-CSF у животных WT заметно ослабляло артрит. Тем не менее, при хроническом SCW-артрите GM-CSF, по-видимому, действует раньше IL-1, поскольку его нейтрализация снижала уровни IL-1 в суставах с артритом. Этой сниженной продукциейGM-CSF, можно также объяснить, почему лечение против GM-CSF оказывало защитный эффект на хрящ в модели, использованной авторами изобретения. В модели острого SCW-артрита авторы изобретения также обнаружили, что антитело против GM-CSF могло снижать уровни IL-1, в то время как блокаторTNF этанерцепт не мог обеспечить такого эффекта. В CIA-модели RA на мышах блокада GM-CSF весьма существенно снижала уровни как IL-1, так и TNF. В то время как в различных иммунокомпетентных клетках провоспалительные цитокины, такие какTNF и IL-1, приводят к сильной индукции экспрессии GM-CSF посредством активации транскрипционного фактора NF-В и других, по-видимому, на поздних стадиях воспаления иерархия цитокинов меняется на противоположную, при этом GM-CSF начинает контролировать продукцию TNF и IL-1 и,возможно, других цитокинов и хемокинов. Одновременно с ингибированием TNF и IL-1 в ткани с артритом блокада GM-CSF также может снижать активность и выживание GM-CSF-зависимых иммунокомпетентных клеток, таких как гранулоциты, нейтрофилы, макрофаги. Возможно, GM-CSF не только непосредственно индуцирует экспрессию IL-1 и TNF, но также вызывает координированное антиапоптотическое действие и продолжительную активацию многих клеток врожденного иммунитета, посредством чего он косвенно усиливает продукцию IL-1 и TNF. Такой эффект на клеточный цикл и выживание был продемонстрирован в модели артрита, вызванного mBSA, где нейтрализация GM-CSF invivo приводила к заметно сниженной общей клеточности, а также к сниженному числу циклирующих клеток в суставах с артритом. Пример 6. В дополнение к блокаде GM-CSF при хроническом SCW-артрите у животных WT также проводили эксперименты у мышей с дефицитом IL-17R. IL-17 продуцируют Th17-клетки, которые могут одновременно продуцировать TNF и GM-CSF. В присутствии TNF, IL-17 стимулирует продукцию GM-CSF клетками синовиальной оболочки, что позволяет предположить о главенствующей роли IL-17 по отношению к GM-CSF. С другой стороны, обработанные GM-CSF клетки костного мозга, стимулированные липополисахаридом (LPS), образуют IL-23, являющийся важным фактором выживания для продуцирующих IL-17 Th17-клеток, До настоящего изобретения комбинированная блокада IL-17 и GM-CSF не была изучена in vitro или in vivo. Настоящее исследование авторов изобретения является первым, в котором было показано, что одновременная блокада метаболических путей как GM-CSF, так и IL-17 приводила к более выраженному уменьшению припухлости суставов и большей защите от деструкции хряща по сравнению с блокадой метаболических путей по отдельности. Этот сильный эффект на хрящ может быть объяснен синергетическим действием между IL-17 и (индуцированным GM-CSF) IL-1, поскольку ранее было показано синергетическое действие этих двух цитокинов на образование цитокинов синовиальной оболочкой от пациентов с RA и на образование простагландина Е 2 (PGE2) и оксида азота (II) (NO) в хряще при остеоартрите. Настоящее и предшествующие исследования обеспечивают убедительное доказательство того, что нейтрализация GM-CSF может иметь терапевтический потенциал у пациентовлюдей с RA, а также у пациентов, более не отвечающих или изначально не отвечавших на блокаду TNF. В дополнение, данное исследование демонстрирует, что лечение против GM-CSF в комбинации с лечением против IL-17 имеет глубокий терапевтический эффект при RA, а также при других аутоиммунных и воспалительных заболеваниях. Пример 7. Коллаген-индуцированный артрит (CIA) является общепринятой моделью артрита на мышах, основанной на Т-клеточной и антитело-опосредованной аутоиммунной реактивности против хрящевого коллагена II типа (CII). Эта модель имеет некоторые клинические, гистопатологические и иммунологические сходства с человеческим RA, и для нее характерно главным образом воспаление синовиальной оболочки с последующими тяжелыми эрозиями хряща и кости. Целью настоящего исследования, описанного здесь, была оценка терапевтической эффективности комбинированного введения соединения, нейтрализующего GM-CSF, и соединения, нейтрализующего IL-17, в системе CIA-модели на мышах. В частности, после начала CIA проводили изучение эффекта лечения мышей (1) моноклональным антителом против IL-17 (mAb 421) самим по себе, (2) моноклональным антителом против GM-CSF (mAb 22 Е 9) самим по себе и (3) комбинацией обоих антител по сравнению с отрицательным (IgG2A) и положительнымmAb 22 Е 9 было от Perbio Science. Крысиные антитела IgG2a контроля изотипа получали от Biolegend. Все антитела хранили при -80 С. Дексаметазон получали от Centrafarm и хранили при комнатной температуре. Все соединения разводили в стерильном PBS перед введением. Эффект лечения указанными выше соединениями на мышей с CIA изучали в 7-недельном исследовании. На 0 сутки самцов мышей DBA/1J иммунизировали в основание хвоста с использованием 100 мкл бычьего CII под изофлурановой анестезией. На 21 сутки мыши получали внутрибрюшинную бустерную инъекцию 100 мкг CII, растворенного в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS), и артрит начинался через несколько суток после этой бустерной инъекции. Бычий коллаген II типа (CII) в концентрации 2 мг/мл в 0,05 М уксусной кислоте в равных объемах полного адъюванта Фрейнда (2 мг/млMycobacterium tuberculosis, штамм H37Ra). При появлении первых симптомов артрита (показатель 0,25) мышей последовательно определяли в различные экспериментальные группы, перечисленные ниже, и наблюдали в течение еще 10 суток исследования. Мышей рассматривали как имеющих артрит при наблюдении существенных изменений красноты и/или припухлости в пальцах или других частях лап. Визуально проводили балльную оценку воспаления суставов в каждой лапе с использованием шкалы от 0 до 2 на лапу с максимальным показателем 8 на животное (четыре лапы с симптомами артрита и показатель 2 для каждой лапы), как описано R. Smeets etal., Arthritis Rheum 2003: 0 - отсутствие воспаления, 1 - легкое воспаление, 1,5 - явное воспаление и 2 -тяжелое воспаление. Независимые наблюдатели, не знавшие об экспериментальных группах, проводили балльную оценку три раза в неделю с 21 суток до 45 суток. Антитела вводили в виде однократной дозы при появлении симптомов артрита. Дексаметазон вводили в дозе 2 мг/кг внутрибрюшинно три раза в неделю (в понедельник, среду и пятницу). Мышей, не демонстрировавших никаких симптомов артрита на 35 сутки исследования, рассматривали как не отвечавших и удаляли из анализа дальнейшего исследования. На основании результатов предыдущих экспериментов для исследования была установлена доза 1,5 мг/кг mAb 421. Для антитела против GM-CSF 22E9 была установлена доза 3 мг/кг. С использованием этих доз проводили исследование для оценки эффекта комбинированной блокады IL-17 и GM-CSF при коллаген-индуцированном артрите. Дексаметазон использовали в качестве положительного контроля и крысиное антитело IgG2a использовали в качестве отрицательного контроля. В дополнение, в исследование были включены экспериментальные группы для лечения антителом против IL-17 (mAb 421), антителом против GM-CSF (22E9) и их комбинацией, все в указанных выше дозах. Экспериментальные группы:mAb 421, 1,5 мг/кг + 22 Е 9, 3 мг/кг; крысиное IgG2a, 15 мг/кг; дексаметазон 2 мг/кг. Как показано на фиг. 6, нейтрализация IL-17 посредством mAb 421 в комбинации с нейтрализациейGM-CSF с использованием 22 Е 9 значимо снижала клинические показатели коллаген-индуцированного артрита. Наоборот, лечение mAb 421 или 22 Е 9 по отдельности не приводило к значимому снижению тяжести заболевания. Симптомы артрита исчезали через 2-3 суток после внутрибрюшинного введения дексаметазона (2 мг/кг, положительный контроль). Мыши, которым вводили IgG2A (отрицательный контроль), продемонстрировали отчетливое прогрессирование тяжести артрита. Для гистопатологического анализа получали передние и задние лапы (правые и левые; 4 образца на мышь). Лапы затем фиксировали в 4% растворе формальдегида. После декальцификации в этилендиаминтетрауксусной кислоте (EDTA) или стандартном растворе для декальцификации в течение 3 суток лапы заключали в парафин (paraplast), окрашивали Н/Е и оценивали световой микроскопией. Гистологическая оценка была ограничена дистальными суставами лап (предплюсна/запястье и пальцы). При гистологической оценке был выявлен подострый-хронический артрит нижних суставов конечностей (предплюсны/запястья, пальцев). Признаками артрита были утолщение синовиальной оболочки(гиперплазия синовиальной оболочки), внутрисуставной экссудат и выраженная смешанно-клеточная инфильтрация преимущественно в капсуле сустава. В явных случаях воспалительную клеточную реакцию также наблюдали в соединительной ткани и сухожилиях. В дополнение, в случаях с более хроническим течением наблюдали типичную грануляционную ткань, состоящую из соединительной ткани и главным образом мононуклеарных клеток. Также наблюдали эрозивные изменения хряща дистальных суставов. В большинстве случаев происходило поражение более чем одного сустава (полиартрит). На фиг. 7 представлены типичные срезы суставов через 10 суток после однократного введения 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг (A), mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг (Б), комбинации 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг и mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг (В) или контроля изотипа в дозе 15 мг/кг (Г). Суставы фиксировали в 4% формалине, декальцифицировали,приготавливали срезы и окрашивали гематоксилином/эозином. У мышей, получавших контроль изотипа(фиг. 7 Г), было показано явное воспаление суставов с массивной клеточной инфильтрацией синовиальной оболочки и деструкция суставов с эрозиями хряща и кости. Хотя и в несколько менее тяжелой степени, у мышей, получавших 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг (фиг. 7 А) или mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг (фиг. 7 Б), также были показаны тяжелое воспаление и деструкция суставов, в то время как мыши, получавшие однократное введение комбинированного лечения 22 Е 9 в дозе 3 мг/кг совместно с mAb 421 в дозе 1,5 мг/кг, продемонстрировали весьма существенно сниженное воспаление и хорошую сохранность целостности сус- 21024654 тавов с близкой к норме поверхностью хряща (фиг. 3 В). В результате, большую часть случаев с артритом наблюдали в группе отрицательного контроля (крысиный IgG2A). Через 2-3 суток после введения дексаметазона (положительный контроль) выявление артрита было невозможно. При сравнении мышей с CIA,которым вводили mAb 421 или mAb 22E9 сами по себе или в комбинации, с отрицательными контролями наилучшие результаты по частоте и тяжести артрита наблюдали в группе, которой вводили mAb 421 в комбинации с mAb 22E9. Заключение. Авторы настоящего изобретения исследовали терапевтическую эффективность нейтрализацииGM-CSF в двух различных системах моделей артрита, т.е. (1) в модели TNF-независимого хронического SCW-артрита и (2) в модели TNF-зависимого CIA. В дополнение, авторы изобретения исследовали эффект блокады как врожденного, так и приобретенного иммунитета ингибированием метаболических путей GM-CSF и IL-17. Это было осуществлено нейтрализацией GM-CSF у мышей с генетическим дефицитом рецептора IL-17 (мышей IL-17R-KO) или комбинированным лечением моноклональными антителами, нейтрализующими GM-CSF и IL-17. Вопреки ожиданиям, авторы изобретения наблюдали, что оба типа воспалительных заболеваний можно с высокой эффективностью лечить комбинированной блокадой метаболических путей GM-CSF и IL-17. В модели CIA комбинированное введение соединения, ингибирующего GM-CSF, и соединения, ингибирующего IL-17, существенно снижало клинические показатели коллаген-индуцированного артрита, в то время как введение соединения, ингибирующего GM-CSF, и соединения, ингибирующего IL-17, по отдельности не приводило к значимому уменьшению тяжести артрита. В дополнение, подробный гистологический анализ продемонстрировал полезный эффект комбинированной терапии на воспаление суставов и деструкцию хряща и кости. Таким образом, комбинированная блокада обоих метаболических путей приводила к высокоэффективной защите от воспаления и деструкции суставов. Эти результаты были особенно неожиданными, поскольку до недавнего времени существовала гипотеза о том, что GM-CSF находится под регуляцией IL-17 (см., например, Kawaguchi M.et al., J. Allergy Clin. Immunol. 114 (2004), 444-450; Starnes T. et al., The Journal of Immunology, 169 (2002),642-646; Laan M. et al., Eur. Respir. J. 21 (2003), 387-393). Таким образом, от лечений, в которых комбинируют блокаду этих двух метаболических путей, не ожидали никакого аддитивного или синергетического эффекта. В настоящем изобретении впервые продемонстрированы полезные эффекты комбинированной блокады IL-17 и GM-CSF in vivo. Одновременная блокада метаболических путей как GM-CSF,так и IL-17 приводила к более выраженному уменьшению припухлости суставов и большей защите от деструкции хряща по отношению к блокаде метаболических путей по отдельности. Представленные здесь данные обеспечивают убедительное доказательство того, что лечение против GM-CSF в комбинации с лечением против IL-17 имеет сильный терапевтический эффект не только при RA, но также при других аутоиммунных и воспалительных заболеваниях, как определено выше в данном описании.