Лиганды, имеющие специфичность связывания в отношении рецептора эпидермального фактора роста (egfr) и/или сосудистого эндотелиального фактора роста (vegf), и способы их применения

Формула / Реферат | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Код ссылки

Номер патента: 13878

Опубликовано: 30.08.2010

Авторы: Лиу Хайкун, Джесперс Лорен С., Стьюард Майкл, Холмс Стив, Пьюпекка Малгорзата, Де Вильдт Рудольф М.Т., Сепп Армин, Игнатович Ольга, Бекманн Роланд

Есть еще 22 страницы.

Смотреть все страницы или скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR.

2. Лиганд по п.1, где каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

Рисунок 2

3. Лиганд по п.1, где каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и где каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

4. Лиганд по п.1, где каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и где каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

5. Лиганд по п.1, где (а) каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и/или (б) каждая указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирует за связывание с EGFR с цетуксимабом.

6. Лиганд по любому из пп.1-5, где каждая белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и каждая белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, обеспечена фрагментом антитела, например единичным вариабельным доменом иммуноглобулина.

7. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

8. Лиганд по п.7, где (а) каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR слит с Fc-областью антитела или (б) каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF слит с Fc-областью антитела.

9. Лиганд по п.7, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85%-ную идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из

Рисунок 15

10. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

11. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

12. Лиганд по п.10, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85%-ную идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

Рисунок 27

13. Лиганд по п.1, где указанный лиганд ингибирует связывание эпидермального фактора роста (EGF) и/или трансформирующего фактора роста альфа (TGF альфа) с EGFR.

14. Лиганд по п.1, где указанный лиганд ингибирует активность EGFR возможно без существенного ингибирования связывания эпидермального фактора роста (EGF) и/или трансформирующего фактора роста альфа (TGF альфа) с EGFR.

15. Лиганд по п.1, где указанный лиганд ингибирует связывание VEGF с рецептором 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR1) и/или рецептором 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR2).

16. Лиганд по п.1, где указанный лиганд ингибирует активность VEGF возможно без существенного ингибирования связывания VEGF с рецептором 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR1) и/или рецептором 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR2).

17. Лиганд по п.9, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF связывает VEGF с аффинностью (KD), составляющей от приблизительно 100 нМ до приблизительно 1 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

18. Лиганд по п.9, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR связывает EGFR с аффинностью (KD), составляющей от приблизительно 100 нМ до приблизительно 1 пМ или составляющей от приблизительно 10 нМ до приблизительно 100 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

19. Лиганд по п.9, где указанный лиганд содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, представляющий собой V_HH, и/или единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, представляющий собой V_HH.

20. Лиганд по п.9, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR независимо выбраны из группы, состоящей из человеческого V_H и человеческого V_L.

21. Лиганд по п.1, где указанный лиганд представляет собой IgG-подобный формат, содержащий два единичных вариабельных домена иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и два единичных вариабельных домена иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR.

22. Лиганд по п.1, где указанный лиганд содержит Fc-область антитела.

23. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с цетуксимабом.

24. Лиганд по п.23, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85%-ную идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из

25. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

Рисунок 33

или, альтернативно, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85%-ную идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из

Рисунок 36

26. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где указанный первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и указанный второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина конкурирует за связывание с EGFR с цетуксимабом.

27. Лиганд по п.23, где указанный лиганд ингибирует связывание эпидермального фактора роста (EGF) и/или трансформирующего фактора роста альфа (TGF альфа) с EGFR.

28. Лиганд по п.23, где указанный лиганд ингибирует активность EGFR, возможно, без существенного ингибирования связывания эпидермального фактора роста (EGF) и/или трансформирующего фактора роста альфа (TGF альфа) с EGFR.

29. Лиганд по п.23, где указанный лиганд ингибирует связывание VEGF с рецептором 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR1) и/или рецептором 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR2).

30. Лиганд по п.23, где указанный лиганд ингибирует активность VEGF, возможно, без существенного ингибирования связывания VEGF с рецептором 1 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR1) и/или рецептором 2 сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR2).

31. Лиганд по п.23, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF связывает VEGF с аффинностью (KD), составляющей от приблизительно 100 нМ до приблизительно 1 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

32. Лиганд по п.23, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR связывает EGFR с аффинностью (KD), составляющей от приблизительно 100 нМ до приблизительно 1 пМ или от приблизительно 10 нМ до приблизительно 100 пМ, как определено поверхностным плазмонным резонансом.

33. Лиганд по п.23, где указанный лиганд содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, представляющий собой V_HH, и/или единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, представляющий собой V_HH.

34. Лиганд по п.23, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR выбраны из группы, состоящей из человеческого V_H и человеческого V_L.

35. Лиганд по п.23, где указанный лиганд представляет собой IgG-подобный формат, содержащий два единичных вариабельных домена иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и два единичных вариабельных домена иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR.

36. Лиганд по п.23, где указанный лиганд содержит Fc-область антитела.

37. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где каждый указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из

38. Лиганд по п.37, где указанный лиганд содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, представляющий собой V_HH или человеческий V_H и человеческий V_L.

39. Лиганд по п.1, где указанный лиганд дополнительно содержит токсин, который, возможно, представляет собой поверхностно-активный токсин, например цитотоксин, генератор свободных радикалов, антиметаболит, белок, полипептид, пептид, фотохимически активный агент, антисмысловое соединение, химиотерапевтическое средство, радионуклид или интратело (intrabody).

40. Лиганд по п.1, где указанный лиганд дополнительно содержит группировку, увеличивающую период полувыведения, которая, возможно, представляет собой полиалкиленгликольную группировку, альбумин сыворотки или его фрагмент, рецептор трансферрина или его часть, связывающую трансферрин, или группировку, содержащую сайт связывания для полипептида, увеличивающего период полувыведения in vivo.

41. Лиганд по п.40, где указанная группировка, увеличивающая период полувыведения, представляет собой группировку, содержащую сайт связывания для полипептида, увеличивающего период полувыведения in vivo, выбранного из группы, состоящей из аффитела (affibody), домена SpA, домена рецептора класса А липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), домена EGF и авимера (avimer).

42. Лиганд по п.40, где указанная группировка, увеличивающая период полувыведения, представляет собой антитело или фрагмент антитела, возможно единичный вариабельный домен иммуноглобулина, содержащие сайт связывания для альбумина сыворотки или неонатального Fc-рецептора.

43. Лиганд по п.42, где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина, содержащий сайт связывания для альбумина сыворотки, конкурирует за связывание с человеческим альбумином сыворотки с dAb, выбранным из группы, состоящей из

Рисунок 41

или где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина, содержащий сайт связывания для альбумина сыворотки, содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85%-ную идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью любого из указанных dAb.

44. Применение лиганда по любому из пп.1-38 в терапии или диагностике.

45. Применение лиганда по любому из пп.1-38 в лечении рака.

46. Применение лиганда по любому из пп.1-38 в обработке раковых клеток, сверхэкспрессирующих EGFR и/или VEGF.

47. Применение лиганда по любому из пп.1-38 для изготовления лекарственного средства для лечения рака, возможно, где рак представляет собой рак мочевого пузыря, рак яичника, колоректальный рак, рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак головы и шеи, рак почки и рак желчного пузыря, немелкоклеточную карциному легкого или колоректальную карциному.

48. Применение лиганда по любому из пп.1-38 для изготовления лекарственного средства для обработки раковых клеток, сверхэкспрессирующих EGFR и/или VEGF.

49. Композиция, содержащая лиганд по любому из пп.1-38 и физиологически приемлемый носитель.

50. Композиция по п.49, где указанная композиция содержит наполнитель для внутривенного, внутримышечного, внутрибрюшинного, внутриартериального, интратекального, интраартикулярного или подкожного, легочного, интраназального, вагинального или ректального введения.

51. Устройство для доставки лекарственных средств, содержащее композицию по п.49.

52. Устройство для доставки лекарственных средств по п.51, где указанное устройство для доставки лекарственных средств выбрано из группы, состоящей из устройства для парентеральной доставки, устройства для внутривенной доставки, устройства для внутримышечной доставки, устройства для внутрибрюшинной доставки, устройства для трансдермальной доставки, устройства для легочной доставки, устройства для внутриартериальной доставки, устройства для интратекальной доставки, устройства для интраартикулярной доставки, устройства для подкожной доставки, устройства для интраназальной доставки, устройства для вагинальной доставки и устройства для ректальной доставки, например шприца, устройства для трансдермальной доставки, капсулы, таблетки, небулайзера, ингалятора, атомайзера (atomizer), аэролайзера (aerosolizer), туманообразователя, ингалятора сухого порошка, ингалятора с отмеренной дозой, распылителя с отмеренной дозой, туманообразователя с отмеренной дозой, атомайзера с отмеренной дозой, катетера.

53. Выделенная или рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая лиганд по любому из пп.1-38.

54. Вектор, содержащий рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.53.

55. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.53 или вектор по п.54.

56. Способ получения лиганда, включающий поддержание клетки-хозяина по п.55 в условиях, подходящих для экспрессии указанных нуклеиновой кислоты или вектора, посредством чего получают лиганд, и возможно выделение лиганда.

57. Композиция, содержащая конструкцию полипептида антитела с единичным доменом, антагонизирующую связывание человеческого EGFR с рецептором, где указанная конструкция полипептида антитела с единичным доменом содержит CDR3-последовательность, которая является такой же, как последовательность CDR3 dAb, выбранного из группы, состоящей из

Рисунок 43

58. Композиция, содержащая конструкцию полипептида антитела с единичным доменом, антагонизирующую связывание человеческого EGFR с рецептором, где указанная конструкция полипептида антитела с единичным доменом содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из

Рисунок 45

и последовательности, по меньшей мере на 85% идентичной, например по меньшей мере на 92, или 94, или 96, или 98, или 99% идентичной любой из вышеизложенных.

59. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, и Fc-область антитела.

60. Лиганд по п.59, где указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, представляет собой доменное антитело (dAb), связывающее VEGF, или, альтернативно, где указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, представляет собой доменное антитело (dAb), связывающее EGFR.

61. Лиганд по п.60, где указанное dAb, связывающее VEGF, конкурирует за связывание с VEGF с dAb против VEGF, выбранным из группы, состоящей из

62. Лиганд по любому из пп.59-61, где указанная белковая группировка, связывающая EGFR, представляет собой dAb, которое конкурирует за связывание с EGFR с dAb против EGFR, выбранного из группы, состоящей из

Рисунок 47

63. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), содержащий по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и Fc-область антитела.

64. Лиганд по п.63, где указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, представляет собой доменное антитело (dAb) и где, возможно, указанное dAb конкурирует за связывание с VEGF с dAb против VEGF, выбранного из группы, состоящей из

65. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, и Fc-область антитела.

66. Лиганд по п.65, где указанная белковая группировка, имеющая сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, представляет собой доменное антитело (dAb) и где возможно указанное dAb конкурирует за связывание с EGFR с dAb против EGFR, выбранного из группы, состоящей из

Рисунок 49

67. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR и линкер, где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR связан через указанный линкер с указанным единичным вариабельным доменом иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, или, альтернативно, лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR непосредственно слит с указанным единичным вариабельным доменом иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF.

68. Лиганд по п.67, где указанный линкер выбран из группы, состоящей из

69. Лиганд по п.67 или 68, где указанный лиганд дополнительно содержит Fc-область антитела.

70. Лиганд по любому из пп.67-69, где:

а) указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи и указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR представляет собой вариабельный домен легкой цепи;

б) указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF представляет собой вариабельный домен легкой цепи и указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи;

в) указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи и указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи; или

г) указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF представляет собой вариабельный домен легкой цепи и указанный единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR представляет собой вариабельный домен легкой цепи.

71. Лиганд по п.70, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи представляет собой V_H или V_HH, например человеческий V_H, или где указанный вариабельный домен легкой цепи представляет собой V_K.

72. Лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и/или рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), содержащий первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина, второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина и Fc-область антитела.

73. Лиганд по п.72, где указанный лиганд имеет формулу от N-конца к С-концу, dAb1-dAb2-Fc, где dAb1 представляет собой указанный первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина, dAb2 представляет собой указанный второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина и Fc представляет собой указанную Fc-область антитела, где dAb1 связан с dAb2 непосредственно или через первый линкер и dAb2 связан с Fc непосредственно или через второй линкер.

74. Лиганд по п.73, где dAb1 и dAb2 являются одинаковыми.

75. Лиганд по п.73 или 74, где каждый из dAb1 и dAb2 представляет собой единичный вариабельный домен легкой цепи, например где каждый из dAb1 и dAb2 представляет собой V_K, или, альтернативно, где каждый из dAb1 и dAb2 представляет собой единичный вариабельный домен тяжелой цепи.

76. Лиганд по любому из пп.72-75, где указанный первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина и указанный второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина имеет специфичность связывания в отношении EGFR.

77. Лиганд по любому из пп.72-75, где каждый указанный первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина и указанный второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина имеет специфичность связывания в отношении VEGF.

Текст

Смотреть все

ЛИГАНДЫ, ИМЕЮЩИЕ СПЕЦИФИЧНОСТЬ СВЯЗЫВАНИЯ В ОТНОШЕНИИ РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА (EGFR) И/ИЛИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА (VEGF), И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Раскрыты лиганды, имеющие специфичность связывания в отношении сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), в отношении рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) или в отношении VEGF и EGFR. Также раскрыты способы применения этих лигандов. В частности,описано применение этих лигандов в лечении рака. Игнатович Ольга, Холмс Стив (GB),Бекманн Роланд (CH), Лиу Хайкун (US), Де Вильдт Рудольф М.Т., Джесперс Лорен С.,Стьюард Майкл, Сепп Армин, Пьюпекка Малгорзата (GB) 013878 Заявка на данный патент имеет приоритет предварительной заявки на патент США 60/742992,поданной 6 декабря 2005 г., и приоритет предварительной заявки на патент США 60/758355, поданной 11 января 2006 г. Содержание упомянутых выше заявок включено сюда посредством ссылки. Предшествующий уровень техники Рак является ведущей причиной смертности и заболеваемости. Подходы к лечению рака включают хирургическое вмешательство для удаления опухолей и химиотерапию. Эти подходы могут быть успешны в лечении некоторых пациентов. Тем не менее, даже пациенты, в отношении которых обнаружено,что они получили лечение, часто страдают рецидивом рака, требующим дополнительного лечения. Химиотерапевтические агенты в большинстве случаев являются неселективными агентами, токсичными для клеток, таких как пролиферирующие клетки. Соответственно, такие агенты могут эффективно уничтожать раковые клетки, но также уничтожают здоровые клетки, порождая некоторые пагубные побочные эффекты. Определенные раковые клетки экспрессируют или экспрессируют активнее, чем обычно, различные клеточные компоненты, такие как поверхностные клеточные белки, или экспрессируют различные клеточные компоненты по сравнению с нормальными клетками. Один подход к реагированию на недостатки хирургического и химиотерапевтического подходов к лечению и диагностике рака включает целевое воздействие на раковые клетки, например, с использованием антител или фрагментов антител, связывающих белки, экспрессируемые или экспрессируемые активнее, чем обычно, на раковых клетках. Были идентифицированы несколько таких белков-мишеней. Среди таких белков присутствует рецептор эпидермального фактора роста (EGFR).EGFR является членом семейства ErbB1 и трансдуцирует сигналы, ведущие к клеточной пролиферации и выживанию, выработке факторов роста и ангиогенных факторов при связывании эпидермального фактора роста (EGF) и/или трансформирующего фактора роста альфа (TGF альфа). Соответственно,было продемонстрировано, что EGFR вовлечен в опухолевый рост, метастазирование и ангиогенез. Кроме того, многие раки экспрессируют EGFR, как, например, рак мочевого пузыря, рак яичника, колоректальный рак, рак молочной железы, рак легкого (например, немелкоклеточная карцинома легкого), рак желудка, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак головы и шеи, рак почки и рак желчного пузыря. ERBITUX (цетуксимаб; Imclone Systems Inc) представляет собой химерное мышиное/человеческое антитело, связывающее человеческий EGFR, которое было одобрено для лечения определенных EGFR-экспрессирующих раков в комбинации с иринотеканом. Важным патофизиологическим процессом, способствующим формированию, метастазированию и рецидивированию опухоли является опухолевый ангиогенез. Этот процесс опосредован выработкой опухолью ангиогенных факторов, таких как сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), индуцирующий формирование кровеносных сосудов, доставляющих питательные вещества к опухоли. Соответственно, другой подход к лечению определенных раков состоит в ингибировании опухолевого ангиогенеза, опосредованного VEGF, уничтожая посредством этого опухоль. AVASTIN (бевацизумаб; Genetech,Inc.) представляет собой гуманизированное антитело, связывающее человеческий VEGF, которое было одобрено для лечения колоректального рака. Сообщают, что антитело, называемое антителом 2 С 3 (американская коллекция культур (АТСС), инвентарный номер РТА 1595), связывает VEGF и ингибирует связывание VEGF с рецептором эпидермального фактора роста 2. Конъюгирование EGFR или VEGF с антителом, обеспечивающее направленную доставку к ткани или органу-мишени, с доступными в настоящее время лекарственными средствами не является эффективным у всех пациентов или в отношении всех раков (например, EGFR-экспрессирующих раков). Таким образом, имеется потребность в усовершенствованных агентах для лечения рака и других патологических состояний. Краткое изложение сущности изобретения Изобретение относится к лигандам, имеющим специфичность связывания в отношении VEGF (например, человеческого VEGF), лигандам, имеющим специфичность связывания в отношении EGFR (например, человеческого EGFR), и к лигандам, имеющим специфичность связывания в отношении VEGF иEGFR (например, человеческого VEGF и человеческого EGFR). Например, лиганд может содержать полипептидный домен, имеющий сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF,полипептидный домен, имеющий сайт связывания со специфичностью связывания EGFR, или содержать полипептидный домен, имеющий сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и полипептидный домен, имеющий сайт связывания со специфичностью связывания EGFR. В одном аспекте изобретение относится к лиганду, имеющему специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR. Такие лиганды содержат по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и по меньшей мере одну белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR. Каждая из белковой группировки, имеющей сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, и белковой группировки, имеющей сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, может представлять собой любую подходящую связывающую группировку. Белковые группировки могут представлять собой пептидную группировку, полипептидную группировку или-1 013878 белковую группировку. Например, белковые группировки могут быть обеспечены фрагментом антитела,имеющим сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF или EGFR, таким как единичный вариабельный домен иммуноглобулина, имеющий специфичность связывания в отношенииVEGF или EGFR. Лиганд может содержать белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирующую за связывание с VEGF с AVASTIN (бевацизумабом;Genetech, Inc.) и/или антителом 2 С 3 (АТСС, инвентарный номер РТА 1595). Лиганд может содержать белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR,конкурирующую за связывание с EGFR с ERBITUX (цетуксимабом; Imclone Systems, Inc.) и/или VECTIBIX (панитумумабом; Amgen, Inc.). В некоторых воплощениях лиганд содержит белковую группировку,имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирующую за связывание с VEGF с бевацизумабом и/или антителом 2 С 3 (АТСС, инвентарный номер РТА 1595), и, кроме того, содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирующую за связывание с EGFR с цетуксимабом. В некоторых воплощениях лиганд содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF (например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина), конкурирующую за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из В некоторых воплощениях лиганд содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF (например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина), конкурирующую за связывание с VEGF с TAR15-26-555 (SEQ ID NO:704). В дополнение, или в других воплощениях, лиганд может содержать белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR (например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина), конкурирующую за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из В определенных воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирующую за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из TAR15-6 (SEQ ID NO:117), TAR15-8 (SEQ ID NO:119) иTAR15-26 (SEQ ID NO:123), и, кроме того, содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирующую за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из-4 013878 В определенных воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении VEGF, конкурирующую за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и, кроме того, содержит белковую группировку, имеющую сайт связывания со специфичностью связывания в отношении EGFR, конкурирующую за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против В более конкретных воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из В определенных других воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из В определенных других воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из В некоторых воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношенииEGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из В дополнительных воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из и где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношенииEGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из Например, лиганд может содержать единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из и, кроме того, содержать единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из Например, лиганд может содержать единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из и, кроме того, содержать единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из В некоторых воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с доменным антителом (dAb) против VEGF, выбранным из группы, состоящей из И единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношенииEGFR конкурирует за связывание с EGFR с цетуксимабом. Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из В других воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношенииEGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и/или антителом 2 С 3 (АТСС, инвентарный номер РТА 1595); и единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из В других воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношенииEGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и/или антителом 2 С 3 (АТСС, инвентарный номер РТА 1595); и единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR конкурирует за связывание с EGFR с доменным антителом (dAb) против EGFR, выбранным из группы, состоящей из Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из Например, единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 85% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb, выбранного из группы, состоящей из В других воплощениях лиганд, имеющий специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR, содержит первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где указанный первый единичный вариабельный домен иммуноглобулина конкурирует за связывание с VEGF с бевацизумабом и/или антителом 2 С 3 (АТСС, инвентарный номер РТА 1595); и указанный второй единичный вариабельный домен иммуноглобулина конкурирует за связывание с EGFR с цетуксимабом. В определенных воплощениях лиганд имеет специфичность связывания в отношении VEGF и в отношении EGFR и содержит по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF и по меньшей мере один единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, где лиганд содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении VEGF, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью dAb против VEGF, выбранного из группы, состоящей из TAR15-6 (SEQ ID NO:117), TAR15-8 (SEQ ID NO:119) и TAR15-26 (SEQ IDNO:123), и, кроме того, содержит единичный вариабельный домен иммуноглобулина со специфичностью связывания в отношении EGFR, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательно- 29

МПК / Метки

МПК: C07K 16/28, A61P 35/00, C12N 15/13, A61K 39/395, C07K 16/22

Метки: имеющие, рецептора, vegf, отношении, эпидермального, фактора, лиганды, связывания, применения, способы, egfr, эндотелиального, сосудистого, роста, специфичность

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-13878-ligandy-imeyushhie-specifichnost-svyazyvaniya-v-otnoshenii-receptora-epidermalnogo-faktora-rosta-egfr-i-ili-sosudistogo-endotelialnogo-faktora-rosta-vegf-i-sposoby-ih-primeneniya.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Лиганды, имеющие специфичность связывания в отношении рецептора эпидермального фактора роста (egfr) и/или сосудистого эндотелиального фактора роста (vegf), и способы их применения</a>