Антитела, специфически связывающиеся с baffr, и их применение

Описаны антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с рецептором BAFF (BAFFR) с KD, составляющим 100 нМ или менее, и ингибируют индуцируемуюBLyS пролиферацию человеческих В-клеток со значением IC50, составляющим примерно 10 нМ или менее, и истощают В-клетки in vivo или in vitro. Также описаны фармацевтические композиции и применение указанных антител или их антигенсвязывающих фрагментов для лечения патологических нарушений, опосредуемых рецептором BAFF, или которые можно лечить путем уничтожения или истощения В-клеток, таких как системная красная волчанка или ревматоидный артрит, или других аутоиммунных заболеваний или лимфом, лейкозов или миелом. В изобретении также раскрыты выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту, клеткахозяин, содержащая указанный вектор, и способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Настоящее изобретение относится к антителам, которые специфически связываются с рецепторомBAFF (BAFFR). Более конкретно изобретение относится к специфическим антителам, которые являются антагонистами BAFFR, обладающими способностью истощать В-клеточную активность in vivo, и к композициям и способам применения антител для лечения патологических нарушений, которые можно лечить путем уничтожения или истощения В-клеток, таких как системная красная волчанка или ревматоидный артрит, или других аутоиммунных заболеваний или лимфом, лейкозов или миелом.BAFFR (который обозначают также как BR3, TNFRSF13C или CD268) является представителем суперсемейства рецепторов факторов некроза опухолей. Он экспрессируется главным образом на Влимфоцитах и субпопуляции Т-клеток. BAFFR специфически связывается с представителем семейства факторов некроза опухолей BLyS (который обозначают также как BAFF, CD257, TALL-1, THANK,TNFSF13B, ZTNF4), который может экспрессироваться на различных типах клеток, прежде всего на миелоидных клетках. Пара лиганд-рецептор (BLyS/BAFFR) имеет решающее функциональное значение для созревания незрелых "переходных" В-клеток и для выживания, миграции и активации зрелых В-клеток, в том числе с переключением изотипа. BLyS может действовать индивидуально или в сочетании с Вклеточным рецептором (BCR), интерлейкином-4, интерлейкином-21 или лигандом CD40. Вследствие присутствия BAFFR на некоторых Т-клетках BLyS может проявлять активность в качестве костимулирующего фактора Т-клеточной активации. BLyS может связываться также с двумя дополнительными рецепторами, обнаруженными на В-клетках, а именно с TACI и ВСМА. Сверхэкспрессия BLyS или BAFFR в организме мышей приводит к В-клеточной гиперплазии и развитию системного аутоиммунитета с классическими признаками системной красной волчанки (СКВ). Кроме того, у больных, имеющих дефект (NZBxNZW)F1 и имеющих признаки аутоиммунного расстройства мышей линии MRL-lpr/lpr, которые представляют собой животные модели СКВ, обнаружены повышенные концентрации BlyS в сыворотке, и уровни BLyS коррелируют с развитием заболевания. Повышенные уровни BLyS обнаружены также у больных людей, страдающих СКВ, ревматоидным артритом, синдромом Шегрена, грануломатозом Вегенера и В-клеточными злокачественными заболеваниями. Кроме того, у используемых в качестве моделей животных фенотип заболевания, характерный для аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит (например, индуцированный коллагеном артрит), СКВ и рассеянный склероз (например, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит), можно частично возвращать к исходному состоянию путем блокады BLyS растворимыми слитыми с рецепторами белками. Аналогично этому, лечение с помощью слитого белка BAFFR:Fc ингибирует хроническую реакцию трансплантат-против-хозяна (cGVHD) путем снижения жизнеспособности В-клеток. Данные о клинической эффективности блокирующего антитела к BLyS в отношении пациентов, страдающих ревматоидным артритом и СКВ, подчеркивают патогенную роль BLyS в этих аутоиммунных нарушениях. Индуцируемая BLyS передача сигналов, вероятно, также воздействует на выживание злокачественных В-клеток. Апоптоз B-CLL-(В-клеточный хронический лимфолейкоз)-клеток можно предотвращать путем добавления рекомбинантного BLyS или APRIL. И наоборот, апоптоз B-CLL-клеток можно усиливать путем добавления растворимых слитых белков BAFFR или антител к APRIL, это свидетельствует о том, что BLyS и APRIL могут служить аутокринными факторами роста для злокачественных В-клеток.BAFFR экспрессируется на поверхности широкого разнообразия клеток в пораженной болезнью ткани,включая множественную миелому и неходжскинскую лимфому. Доступные современные пути лечения этих аутоиммунных заболеваний включают применение иммунодепрессантов, которые обладают серьезными побочными действиями, они не излечивают заболевание, а служат для облегчения признаков и симптомов заболевания (модифицирующие течение болезни лекарственные средства). Большинство иммунодепрессантов, применяемых в настоящее время для лечения СКВ и РА (ревматоидный артрит), типа кортикостероидов, циклофосфамида, метотрексата и азатиоприна, приводят к общему противовоспалительному действию, что обусловливает риск возникновения серьезных инфекций, поскольку оказывают воздействие на все эффекторные ветви иммунной системы. Таким образом, все еще существует потребность в разработке композиций и способов лечения СКВ и/или РА и других родственных аутоиммунных заболеваний, в частности в создании агентов, которые оказывают интерферирующее воздействие на передачу сигналов BAFFR, в которой BLyS, как ожидается, представляет собой фактор, обусловливающий заболевание. Таким образом, объектом изобретения является антитело или его антигенсвязывающий фрагмент,мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), отличающиеся тем, что антитело или его антигенсвязывающий участок содержат полипептид VH, имеющий по меньшей мере 90% идентичности к любой из SEQ ID NO: 50-56, и полипептид VL, имеющий по меньшей мере 90% идентичности к любой из SEQ ID NO: 43-49, и где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидом BAFFR с KD, составляющим 100 нМ или менее, ингибируют индуцируемую BLyS пролиферацию человеческих В-клеток со значением IC50, составляющим примерно 10 нМ или менее, и истощают В-клетки in vivo или in vitro. В частности, объектом изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VL SEQ ID NO: 51 и последовательность полипептида VLSEQ ID NO: 44. В другом варианте осуществления объектом изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VH SEQ ID NO: 52 и последовательность полипептида VL SEQ ID NO: 45. Объектом изобретения также являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VH SEQ ID NO: 53 и последовательность полипептида VL SEQ IDNO: 46. Еще одним объектом изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VH SEQ ID NO: 54 и последовательность полипептида VL SEQID NO: 47. Также объектом изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VH SEQ ID NO: 55 и последовательность полипептида VL SEQ IDNO: 48. Другим объектом изобретения также являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие последовательность полипептида VH SEQ ID NO: 56 и последовательность полипептида VLSEQ ID NO: 49. Изобретение также относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему участку, мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), отличающееся/отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий участок содержат:(a) аминокислотную последовательность CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 2-7;(b) аминокислотную последовательность CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 9-14;(c) аминокислотную последовательность CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 16-21;(d) аминокислотную последовательность CDR1 вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 23-28;(e) аминокислотную последовательность CDR2 вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 30-35; и(f) аминокислотную последовательность CDR3 вариабельной области легкой цепи, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 37-42,где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидом BAFFR со значением KD, составляющим 100 нМ или менее, ингибируют индуцируемую BLyS пролиферацию человеческих В-клеток со значением IC50, составляющим примерно 10 нМ или менее, и истощают Вклетки in vivo или in vitro. Другим объектом изобретения является антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие CDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 2, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 9, CDR3 вариабельной области тяжелой цепис SEQ ID NO: 16, CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 23, CDR2 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 30 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 37. В частности, изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащим CDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 3, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 10, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 17, CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 24, CDR2 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 31 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 38. Другим вариантом осуществления изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие CDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 4, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 11, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 18,CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 25, CDR2 вариабельной области легкой цепи сSEQ ID NO: 32 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 39. Еще одним вариантом осуществления изобретения является антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие CDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 5, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 12, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 19,CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 26, CDR2 вариабельной области легкой цепи сSEQ ID NO: 33 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 40. Изобретение также относится к антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащимCDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 6, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи сSEQ ID NO: 13, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 20, CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 27, CDR2 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 34 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 41. Другим вариантом осуществления изобретения является антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие CDR1 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7, CDR2 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 14, CDR3 вариабельной области тяжелой цепи с SEQ ID NO: 21,CDR1 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 28, CDR2 вариабельной области легкой цепи сSEQ ID NO: 35 и CDR3 вариабельной области легкой цепи с SEQ ID NO: 42, в частности к антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащим полноразмерную тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая идентична по меньшей мере на 95% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 75-78, и полноразмерную легкую цепь,содержащую аминокислотную последовательность, которая идентична по меньшей мере на 95% аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71-74. Еще одним вариантом осуществления изобретения является выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок антитела, мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), содержащее последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 75 и последовательность легкой цепи с SEQID NO: 71, где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидомvivo или in vitro. Другим вариантом осуществления изобретения является выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок антитела, мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), содержащее последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 76 и последовательность легкой цепи с SEQ IDNO: 72, где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидомvivo или in vitro. Также объектом изобретения является выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок антитела, мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), содержащее последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 77 и последовательность легкой цепи с SEQ ID NO: 73, где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидом BAFFR с KD, составляющим 100 нМ или менее, ингибируют индуцируемую BLyS пролиферацию человеческих В-клеток со значением IC50, составляющим примерно 10 нМ или менее, и истощают В-клетки in vivo или in vitro. Еще одним вариантом осуществления изобретения является выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок антитела, мишенью которых является полипептид BAFFR (SEQ ID NO: 87), содержащий последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 78 и последовательность легкой цепи с SEQID NO: 74, где указанные антитело или его антигенсвязывающий участок связываются с полипептидомvivo или in vitro, в частности, где указанное антитело или его антигенсвязывающий участок истощает Вклетки in vitro со значением ЕС 50, составляющим 10 нМ или менее, при оценке истощения человеческих В-клеток с помощью анализа ADCC. Дополнительно изобретение относится также к антителу или его антигенсвязывающему участку,где указанное антитело или его антигенсвязывающий участок обладают способностью снижать in vivo процентное содержание В-клеток на величину, составляющую вплоть до 90% по сравнению с необработанным контролем при оценке В-клеток с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции(FACS). В частности, объектом изобретения являются антитело или его антигенсвязывающий участок, где указанное антитело или его антигенсвязывающий участок обладают низкой агонистической активностью или не обладают ею совсем. Другим вариантом осуществления изобретения является антитело, представляющее собой полностью человеческое или гуманизированное антитело IgG1. Объектом изобретения является также антитело, которое содержит мутированную или химически модифицированную аминокислотную последовательность Fc-фрагмента, где мутированный или химически модифицированный Fc-фрагмент обеспечивает повышенную ADCC-активность по сравнению с Fcфрагментом дикого типа. Другим вариантом осуществления изобретения является антитело или его антигенсвязывающий участок, где указанное антитело или его антигенсвязывающий участок являются гипофукозилированными или нефукозилированными и имеют пониженное количество фукозильных остатков или не имеют фукозильных остатков, в частности антитело, которое получают путем рекомбинантной экспрессии в клеточной линии млекопитающих с дефицитом экспрессии гена FUT8, кодирующего фукозилтрансферазу, что приводит к повышению ADCC-активности продуцируемых в ней антител по сравнению с клеточной линией, экспрессирующей ген FUT8 дикого типа. Также изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему участку по одному из предшествующих пунктов, которые связываются с областью BAFFR, расположенной между аминокислотами 17 и 43, такой, например, как пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 88. Дополнительно изобретение относится также к антителу или его антигенсвязывающему участку по любому из предшествующих пунктов, которое/который перекрестно блокирует связывание с BAFFR по меньшей мере одного антитела по изобретению, или связывание которого с BAFFR перекрестно блокируется по меньшей мере одним антителом по изобретению. Другим объектом изобретения является применение антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения патологического нарушения,опосредуемого рецептором BAFF, или которое можно лечить путем уничтожения или истощения Вклеток. Еще одним объектом изобретения является применение антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению для лечения патологического нарушения, опосредуемого рецептором BAFF, или которое можно лечить путем уничтожения или истощения В-клеток, в частности, для лечения аутоиммунных заболеваний, которые могут представлять собой ревматоидный артрит, системную красную волчанку, синдром Шегрена, пузырчатку обыкновенную или рассеянный склероз, В-клеточную неоплазмы,которая может представлять собой лимфому, лейкоз или миелому, В-клеточных неходжкинских лимфом,которые могут представлять собой мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, лимфоплазмацитоидную лимфому, лимфому из клеток зоны мантии, фолликулярную лимфому, лимфому из ассоциированной со слизистыми оболочками лимфоидной ткани, диффузную крупноклеточную лимфому и лимфому Беркитта, В-лимфобластный лейкоз из клеток-предшественников и В-клеточный хронический лимфолейкоз и множественную миелому. Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция для лечения патологического нарушения, опосредуемого рецептором BAFF, или которое можно лечить путем уничтожения или истощения В-клеток, содержащая антитело или функциональный белок по изобретению в терапевтически эффективном количестве, где патологическое нарушение может представлять собой ревматоидный артрит, системную красную волчанку, синдром Шегрена, рассеянный склероз, пузырчатку обыкновенную,лимфому, лейкоз или миелому, в частности фармацевтическая композиция может содержать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, разбавителей или носителей. Также объектом изобретения является выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий участок по изобретению. Еще одним вариантом осуществления изобретения является клонирующий или экспрессионный вектор, содержащий одну или несколько нуклеиновых кислот по изобретению, в частности содержащий по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 79-86,или участок указанной нуклеиновой кислоты, кодирующий по меньшей мере один CDR-участок. Другим вариантом осуществления изобретения является клетка-хозяин, содержащая один или более клонирующих или экспрессионных векторов по изобретению. Также объектом изобретения является способ получения антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению, включающий культивирование клетки-хозяина по изобретению и выделение указанных антитела или его антигенсвязывающего участка, в котором клетка-хозяин может представлять собой клеточную линию, в которой отсутствует экспрессия фукозилтрансферазы. Частным вариантом осуществления изобретения является способ, в котором клеточная линия представляет собой клетку млекопитающего с дефицитом экспрессии гена, кодирующего фукозилтрансферазу, в частности, в котором клетка млекопитающего с дефицитом экспрессии гена, кодирующего фукозилтрансферазу, представляет собой клеточную линию СНО с дефицитом гена FUT8. С целью лучшего понимания настоящего изобретения сначала даны определения некоторых понятий. Дополнительные определения приведены в подробном описании изобретения. Понятие "иммунный ответ" относится к действию (активности), например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, которым обладают описанные выше клетки или печень (включая активность антител, цитокинов и комплемента), приводящему к избирательному повреждению, деструкции или элиминации из организма человека внедрившихся патогенов, клеток или тканей, зараженных патогенами, раковых клеток или в случае аутоиммунного или патологического воспаления, здоровых человеческих клеток или тканей. Понятие "путь трансдукции сигнала" или "сигнальная активность" относится к биохимической причинной взаимосвязи, как правило, инициируемой взаимодействием типа белок-белок, такой как связывание фактора роста с рецептором, приводящей в передаче сигнала от одной части клетки к другой части клетки. В целом, передача сигнала включает специфическое фосфорилирование одного или нескольких остатков тирозина, серина или треонина в одном или нескольких белках, участвующих в каскаде реакций, обусловливающих трансдукцию сигнала. Предпоследний процесс, как правило, включает связанные с ядром события, которые приводят к изменению генной экспрессии. Понятие BAFFR или рецептор BAFF относится к человеческому BAFFR, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 87. В публикациях патентов согласно РСТ WO 2000/04032 и WO 2006/073941 описаны антитела к BAFFR в целом. В WO 2006/073941 описаны специфические антитела кBAFFR. Понятие "антитело" в контексте настоящего описания включает полные антитела и любой антиген-4 024492 связывающий фрагмент (т.е. "антигенсвязывающий участок") или их одноцепочечные варианты. Встречающееся в естественных условиях "антитело" представляет собой гликопротеин, который содержит по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначена в контексте настоящего описания как VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, т.е. CH1, CH2 и СН 3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначена в контексте настоящего описания как VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, т.е. CL. VH- и VLобласти можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, которые называют гипервариабельными участками (CDR), которые перемежаются с более консервативными участками, которые называют каркасными участками (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, которые расположены в направлении от аминоконца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1,FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, в том числе с различными клетками иммунной системы (например, эффекторными клетками) и первым компонентом (Clq) классической системы комплемента. Понятие "антигенсвязывающий участок" антитела (или просто "антигенный центр" ("область детерминанты") в контексте настоящего описания относится к полноразмерному антителу или одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, участком BAFFR). Было установлено, что антигенсвязывающую функцию антитела можно осуществлять с помощью фрагментов полноразмерного антитела. Примерами связывающих фрагментов, подпадающих под понятие "антигенсвязывающий участок" антитела, являются Fabфрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из VL-, VH-, CL- И CH1-доменов; F(ab)2-фрагмент, двухвалентный фрагмент, состоящий из двух Fab-фрагментов, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; Fd-фрагмент, состоящий из VH- и СН 1-доменов; Fv-фрагмент, состоящий из VL- и VHдоменов одного плеча антитела; dAb-фрагмент (Ward и др., Nature 341, 1989, cc. 544-546), который состоит из VH-домена; и выделенный гипервариабельный участок (CDR). Кроме того, несмотря на то, что два домена Fv-фрагмента, т.е. VL и VH, кодируются различными генами, их можно соединять с помощью методов рекомбинации синтетическим линкером, который позволяет создавать из них одну белковую цепь, в которой пара VL- и VH-областей формирует одновалентные молекулы (известные под названием одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv); см., например, Bird и др., Science 242, 1988, cc. 423-426; и Huston и др., Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 1988, cc. 5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также подпадают под понятие "антигенсвязывающий участок" антитела. Указанные фрагменты антитела получают с помощью общепринятых методов, известных специалистам в данной области, и фрагменты подвергают скринингу в отношении возможности их применения, аналогичного применению интактных антител. Понятие "выделенное антитело" в контексте настоящего описания относится к антителу, которое практически свободно от других антител с другой антигенной специфичностью (например, выделенное антитело, которое специфически связывается с BAFFR, практически свободно от антител, которые специфически связываются с антигенами, отличными от BAFFR). Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с BAFFR, может давать перекрестную реакцию с другими антигенами, такими как молекулы BAFFR из других видов. Кроме того, выделенное антитело может быть практически свободно от другого клеточного материала и/или химических веществ. Понятия "моноклональное антитело" или "композиция моноклонального антитела" в контексте настоящего описания относятся к препарату молекул антител одинакового молекулярного состава. Композиция моноклональных антител обладает одинаковой специфичностью связывания и аффинностью в отношении конкретного эпитопа. Понятие "человеческое антитело" в контексте настоящего описания относится к антителам, несущим вариабельные области, в которых как каркасные, так и CDR-участки выводят из последовательностей, имеющих человеческое происхождение. Кроме того, если антитело содержит константную область,то константную область также выводят из таких человеческих последовательностей, например последовательностей человеческой зародышевой линии, или мутантных версий последовательностей человеческой зародышевой линии или входящих в антитело последовательностей консенсусных каркасных участок, полученных путем анализа последовательностей человеческих каркасных участков, например, согласно методу, описанному у Knappik и др., J. Mol. Biol. 296, 2000, cc. 57-86. Структуры и месторасположения вариабельных областей иммуноглобулинов, например CDR, можно определять с использованием хорошо известных схем нумерации, например, согласно номенклатуре Кэбота (Kabat), номенклатуре Chothia, комбинации номенклатуры Kabat и Chothia (AbM) и т.д. (см., например, Sequences of Proteins of Immunological Interest, под ред. Kabat и др., изд-во U.S. Department ofHealth and Human Services, 1991; A1 Lazikani и др., J. Mol. Bio. 273, 1997, cc. 927-948). Человеческие антитела, предлагаемые в изобретении, могут включать также аминокислотные ос-5 024492 татки, которые не кодируются человеческими последовательностями (например, в результате мутаций,интродуцированных путем случайного или сайт-направленного мутагенеза in vitro или соматической мутации in vivo). Однако в контексте настоящего описания не подразумевается, что под понятие "человеческое антитело" подпадают антитела, в которых последовательности CDR, выведенные из зародышевой линии других видов млекопитающих, таких как мыши, трансплантированы в последовательности человеческих каркасных участков. Понятие "человеческое моноклональное антитело" относится к антителам, обладающим одинаковой специфичностью связывания, которые имеют вариабельные области, в которых как каркасные, так иCDR-участки выводят из человеческих последовательностей. В одном из вариантов осуществления изобретения человеческие моноклональные антитела получают с помощью гибридомы, которая включает Вклетку, полученную из трансгенного животного кроме человека, например трансгенной мыши, в геноме которой содержится трансген человеческой тяжелой цепи и трансген человеческой легкой цепи, слитую с иммортализованной клеткой. Понятие "рекомбинантное человеческое антитело" в контексте настоящего описания относится ко всем человеческим антителам, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют с помощью методов рекомбинации, например, к антителам, выделенным из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным благодаря интродукции генов человеческого иммуноглобулина, или которые получены из гибридомы, к антителам, выделенным из клетки-хозяина, трансформированной с целью экспрессии человеческого антитела, например, с использованием трансфектомы, к антителам, выделенным из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител, и к антителам, полученным, экспрессированным, созданным или выделенным любыми другими путями, которые включают сплайсинг последовательностей всего гена человеческого иммуноглобулина или его части с другими последовательностями ДНК. Указанные рекомбинантные человеческие антитела несут вариабельные области, в которых каркасные и CDR-участки выводят из последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линий. Однако в некоторых вариантах осуществления изобретения указанные рекомбинантные человеческие антитела можно подвергать мутагенезу in vitro (или когда для получения человеческих последовательностей Ig используют трансгенных животных, то соматическому мутагенезу in vivo), и в результате аминокислотные последовательности VH- и VL-областей рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые хотя и выведены и являются родственными последовательностям VH и VL человеческой зародышевой линии, могут не встречаться в естественных условиях в популяции антител человеческой зародышевой линии in vivo. В контексте настоящего описания понятие "изотип" относится к классу антител (например, IgM,IgE, IgG, такому как IgG1 или IgG2), который кодируется генами константной области тяжелой цепи. Фраза "антитело, распознающее антиген" и "антитело, специфическое в отношении антигена" в контексте настоящего описания применяют взаимозаменяемо с понятием "антитело, которое связывается специфически с антигеном". В контексте настоящего описания подразумевается, что антитело, которое "специфически связывается с полипептидом BAFFR", представляет собой антитело, связывание которого с полипептидом человеческого BAFFR характеризуется значением KD, составляющим 100 нМ или менее, 10 нМ или менее, 1 нМ или менее. Антитело, которое "дает перекрестную реакцию с антигеном, отличным от BAFFR", означает антитело, связывание которого с антигеном характеризуется значением KD, составляющим 0,510-8 М или менее, 510-9 М или менее или 210-9 М или менее. Антитело, которое "не дает перекрестную реакцию с конкретным антигеном", представляет собой антитело, связывание которого с указанным антигеном характеризуется значением KD, составляющим 1,510-8 М или более или значением KD, составляющим 5-1010-8 М или 110-7 М или более. В конкретных вариантах осуществления изобретения те антитела, которые не дают перекрестную реакцию с антигеном, характеризуются практически не выявляемым связыванием с этими белками при оценке с помощью стандартных анализов связывания. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антагонистическое антитело" относится к антителу, которое уменьшает, снижает и/или ингибирует индуцируемую BAFFR сигнальную активность в присутствии BLyS при анализе с использованием человеческих В-клеток, таком как анализ пролиферации человеческих В-клеток или анализ производства IgG1 человеческими В-клетками. Примеры анализа пролиферации человеческих В-клеток и анализа производства IgG1 человеческими Вклетками более подробно описаны ниже в примерах. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела уменьшают, снижают или ингибируют индуцируемую BLyS активность, оцениваемую с помощью анализа пролиферации человеческих В-клеток, что характеризуется значением IC50, составляющим 10 нМ или менее, 1 нМ или менее или 100 пМ или менее. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитела ингибируют индуцируемую BLyS активность, оцениваемую с помощью анализа производства IgG1, что характеризуется значением IC50, составляющим 10 нМ или менее, 1 нМ или менее или 100 пМ или менее. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие антитело, "не обладающее агонистической активностью" относится к антителу, которое не обладает способностью значительно повышать опосредуемую BAFFR сигнальную активность в отсутствии BLyS в основанном на применении клеток анализе, таком как анализ пролиферации человеческих В-клеток. Указанные анализы описаны более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое истощает Вклетки in vitro", относится к антителу, которое обладает способностью вызывать истощение В-клеток,что характеризуется значением ЕС 50, составляющим 10 нМ или менее, предпочтительно значением ЕС 50,составляющим 1 нМ или менее, более предпочтительно значением EC50, составляющим 100 пМ или менее, при оценке с помощью анализа истощения человеческих В-клеток (ADCC). Указанные анализы описаны более подробно ниже в примерах. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "антитело, которое истощает Вклетки in vivo", относится к антителу, которое снижает in vivo процентное содержание В-клеток на величину, составляющую вплоть до 70%, предпочтительно 80% и более предпочтительно 90%, при оценке Вклеток с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (FACS). Указанные анализы описаны более подробно ниже в примерах. Понятие "Kassoc" или "Ka" в контексте настоящего описания относится к скорости ассоциации взаимодействия конкретных антитела-антигена, а понятие "Kdis" или "Kd" в контексте настоящего описания относится к скорости диссоциации взаимодействия конкретных антитела-антигена. В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "KD" относится к константе диссоциации, которую получают из соотношения Kd к Ka (т.е. Kd/Ka) и выражают в молярной концентрации (М). Значения KD для антител можно определять с помощью методов, хорошо известных в данной области. Метод определения значения KD антитела представляет собой метод, основанный на резонансе поверхностного плазмона,или метод, основанный на применении биосенсорной системы, такой как система Biacore. В контексте настоящего описания понятие "аффинность" относится к силе взаимодействия между антителом и антигеном в одном из антигенсвязывающих центров антитела. В каждом антигенсвязывающем центре вариабельная область "плеча" антитела взаимодействует посредством слабых нековалентных сил с антигеном в многочисленных сайтах; чем сильнее взаимодействия, тем сильнее аффинность. В контексте настоящего описания понятие "авидность" относится к информативному критерию общей стабильности или силе комплекса антитело-антиген. Она контролируется тремя основными факторами: аффинность антитела к эпитопу; валентность и антигена, и антитела; и структурная организация взаимодействующих участков. Эти три фактора определяют в конце концов специфичность антитела, то есть вероятность того, что конкретное антитело будет связываться именно с конкретным антигенным эпитопом. В контексте настоящего описания понятие "ADCC-активность" или "антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность" относится к способности истощать человеческие В-клетки. ADCCактивность можно измерять с помощью анализов истощения человеческих В-клеток, которые описаны выше. Для получения высокоавидного зонда можно конструировать димерный конъюгат (две молекулы белка антитела сшиты с FACS-маркером), создавая тем самым обладающие низкой аффинностью взаимодействия (такие, которые имеют место в случае антитела зародышевой линии), что более легко выявлять с помощью FACS. Кроме того, другим средством повышения авидности связывания антигена является создание димеров, тримеров или мультимеров любой из представленных в настоящем описании конструкций антител к BAFFR. Указанные мультимеры можно создавать путем ковалентного связывания индивидуальных молекул, например путем имитации встречающегося в естественных условиях связывания С- конца с N-концом или путем имитации димеров антител, которые удерживаются вместе их константными областями. Связи, сконструированные на границе раздела Fc/Fc, могут быть ковалентными или нековалентными. Кроме того, в гибридах BAFFR можно использовать в качестве партнеров димеризующие или мультимеризующие компоненты, отличные от Fc, для создания таких структур более высокого порядка. Например, можно применять мультимеризующие домены, такие как тримеризующий домен, описанный у Borean (WO 2004/039841), или пентамеризующий домен, описанный в опубликованной заявке WO 98/18943. В контексте настоящего описания понятие "избирательное, селективное" касательно антитела относится к антителу, которое связывается с определенным полипептидом-мишенью, но не связывается с близкородственными полипептидами. В контексте настоящего описания понятие "высокая аффинность" касательно антитела относится к антителу, для которого значение KD в отношении антигена-мишени составляет 1 пМ или менее. В контексте настоящего описания понятие "индивидуум" относится к любому человеку или животному кроме человека. Понятие "животное кроме человека" включает всех позвоночных животных, например млекопитающих и животных, не относящихся к млекопитающим, таких как приматы, кроме человека, овцы, собаки, кошки, лошади, коровы, куры, амфибии, рептилии и т.д. В контексте настоящего описания понятие "оптимизированная" означает, что нуклеотидная последовательность изменена с позиций кодирования аминокислотной последовательности с помощью кодо-7 024492 нов, предпочтительных для продуктивной клетки или организма, как правило, эукариотической клетки,например клетки Pichia, клетки Trichoderma, клетки яичника китайского хомячка (СНО) или клетки человека. Оптимизированную нуклеотидную последовательность создают так, чтобы она кодировала аминокислотную последовательность, идентичную или практически идентичную аминокислотной последовательности, кодируемой исходной нуклеотидной последовательностью, которую называют также "родительской" последовательностью. Оптимизированные последовательности, представленные в настоящем описании, создавали так, чтобы они имели кодоны, предпочтительные для клеток млекопитающего,таких как СНО; однако под объем изобретения подпадает также оптимизированная экспрессия этих последовательностей в других эукариотических клетках. Аминокислотные последовательности, кодируемые оптимизированными нуклеотидными последовательностями, также рассматриваются как оптимизированные. Различные объекты изобретения описаны более подробно в приведенных ниже подразделах. Стандартные анализы, предназначенные для оценки способности к связыванию антител с BAFFR различных видов, известны в данной области и включают, например, ELISA, вестерн-блоттинг и РИА. Приемлемые анализы описаны подробно в примерах. Кинетические характеристики связывания (например, аффинность к связыванию) антител можно определять также с помощью стандартных анализов,известных в данной области, таких как Biacore-анализ. Анализы, предназначенные для оценки воздействий антител на функциональную активность BAFFR (например, связывание с рецептором, предупреждение или индукция пролиферации человеческих клеток В-клеток или производство IgG), описаны более подробно в примерах. Таким образом, следует понимать, что антитело, которое "ингибирует" одну или несколько из видов активности BAFFR (например, биохимическую, иммунохимическую, клеточную, физиологическую или другие виды биологической активности или т.п.), что определяют на основе методик, известных в данной области и представленных в настоящем описании, статистически значимо снижает конкретный вид активности по сравнению с вариантом без антитела (или, например, когда присутствует контрольное антитело с несоответствующей специфичностью). Антитело, которое ингибирует активность BAFFR, вызывает статистически значимое снижение оцениваемого параметра по меньшей мере на 10, 50, 80 или 90%,и в конкретных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, может ингибировать более чем на 95, 98 или 99%) функциональную активность BAFFR. Понятия "перекрестно блокирует", "перекрестно блокированный" или "перекрестная блокада" в контексте настоящего описания используют взаимозаменяемо для обозначения способности антитела или другого связывающего агента оказывать интерферирующее воздействие на связывание других антител или связывающих агентов с BAFFR при оценке с помощью стандартного анализа конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело или другой связывающий агент может оказывать интерферирующее воздействие на связывание другого антитела или связывающей молекулы с BAFFR, и следовательно, могут ли они рассматриваться как перекрестно блокирующие согласно изобретению,можно определять с помощью стандартных анализов конкурентного связывания. Одним из приемлемых анализов предусматривает применение Biacore-технологии (например, с использованием устройстваBIAcore 3000 (фирма Biacore, Уппсала, Швеция, с помощью которого можно определять степень взаимодействий с использованием технологии на основе резонанса поверхностного плазмона. Другим анализом, который можно применять для оценки перекрестной блокады, является подход на основе ELISA. Оба метода более подробно описаны в примерах. Согласно изобретению перекрестно блокирующее антитело или другой связывающий агент, предлагаемый в изобретении, связывается с BAFFR при оценке с помощью описанного BIAcore-анализа перекрестного связывания таким образом, что измеренное связывание комбинации (смеси) антител или связывающих агентов составляет от 80 до 0,1% (например, от 80 до 4%) от максимального теоретического связывания, в частности от 75 до 0,1% (например, от 75 до 4%) от максимального теоретического связывания, более конкретно от 70 до 0,1% (например, от 70 до 4%) и более конкретно от 65 до 0,1% (например, от 65 до 4%) от максимального теоретического связывания (как описано выше) двух антител или связывающих агентов в комбинации. Антитело рассматривается как перекрестно блокирующее при оценке с помощью ELISA-анализа,который описан в примерах, если растворимая фаза антитела к BAFFR обладает способностью вызывать уменьшение на 60-100%, в частности на 70-100% и более конкретно на 80-100% выявляемого сигналаBAFFR (т.е. количество BAFFR, связанное сенсибилизирующим антителом) по сравнению с выявляемым сигналом BAFFR, полученным в отсутствии растворимой фазы антитела к BAFFR (т.е. в лунках, применяемых в качестве положительного контроля). Рекомбинантные антитела Антитела, предлагаемые в изобретении, представляют собой человеческие рекомбинантные антитела, выделенные и структурно охарактеризованные согласно методам, описанным в примерах. Аминокислотные последовательности VH выделенных антител представлены в SEQ ID NO: 50-56. Аминокислотные последовательности VL выделенных антител представлены в SEQ ID NO: 43-49 соответственно. Примеры предпочтительных аминокислотных последовательностей легких цепей полноразмерных антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQ ID NO: 71-74. Примеры предпочтительных аминокислотных последовательностей тяжелых цепей полноразмерных антител, предлагаемых в изобретении, представлены в SEQ ID NO: 75-78 соответственно. Другими примерами предпочтительных аминокислотных последовательностей тяжелых и легких цепей полноразмерных антител являются последовательности, кодируемые соответствующими последовательностями ДНК, которые входят в состав плазмид pBW510 и pBW512, депонированных фирмой Novartis Pharma AG, форум 1, СН-4002 Базель, Швейцария в DSMZ 29 апреля 2009 г. под регистрационным номером DSM22542 и DSM22543 соответственно. Другие антитела, предлагаемые в изобретении, содержат аминокислоты, измененные в результате мутаций, таких как делеция, инсерсия или замена аминокислот, но CDR-участки которых еще по меньшей мере на 60, 70, 80, 90 или 95% идентичны CDR-участкам указанных выше последовательностей, включаяCDR-участки, кодируемые соответствующими последовательностями ДНК плазмид pBW510 и pBW512,депонированных фирмой Novartis Pharma AG, форум 1, СН-4002 Базель, Швейцария в DSMZ 29 апреля 2009 г. под регистрационным номером DSM22542 и DSM22543 соответственно. Некоторые варианты осуществления изобретения включают мутантные аминокислотные последовательности, в которых не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот изменены в результате мутаций, таких как делеция, инсерсия или замена аминокислот, в CDR-участках по сравнению с CDR-участками, представленными в указанных выше последовательностях. Кроме того, родительские нуклеотидные последовательности вариабельной области тяжелой цепи представлены в SEQ ID NO: 64. Родительские нуклеотидные последовательности вариабельной области легкой цепи представлены в SEQ ID NO: 57. Полноразмерные нуклеотидные последовательности легких цепей, оптимизированные для экспрессии в клетке млекопитающего, представлены в SEQ ID NO: 83-86. Полноразмерные нуклеотидные последовательности тяжелых цепей, оптимизированные для экспрессии в клетке млекопитающего, представлены в SEQ ID NO: 79-82. Другие антитела, предлагаемые в изобретении, включают мутантные аминокислотные или нуклеотидные последовательности, которые еще идентичны по меньшей мере на 60, 70, 80, 90 или 95% описанным выше последовательностям. Некоторые варианты осуществления изобретения включают мутантные аминокислотные последовательности, в которых не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот изменены в результате мутаций, таких как делеция, инсерсия или замена аминокислот, в вариабельных областях по сравнению с вариабельными областями, представленными в указанных выше последовательностях. Поскольку каждое из указанных антител связывается с одним и тем же эпитопом, и они являются потомками одного и того же родительского антитела, то последовательности VH, VL, последовательности полноразмерной легкой цепи и полноразмерной тяжелой цепи (нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности) можно "смешивать и совмещать" для создания других антиBAFFR связывающих молекул, предлагаемых в изобретении. Связывание с BAFFR указанных полученных в результате "смешения и совмещения" антител можно оценивать с помощью описанных выше и в примерах анализов связывания (например, ELISA). Когда эти цепи смешивают и совмещают, то последовательность VH из конкретной пары VH/VL следует замещать структурно сходной последовательностьюVH. Аналогично этому, полноразмерную последовательность тяжелой цепи из конкретной пары полноразмерная последовательность тяжелой цепи/полноразмерная последовательность легкой цепи следует замещать структурно сходной полноразмерной последовательностью тяжелой цепи. Аналогично этому,последовательность VL из конкретной пары VH/VL следует замещать структурно сходной последовательностью VL. Аналогично этому, полноразмерную последовательность легкой цепи из конкретной пары полноразмерная последовательность тяжелой цепи/полноразмерная последовательность легкой цепи следует замещать структурно сходной полноразмерной последовательностью легкой цепи. Таким образом, одним из объектов изобретения является выделенное рекомбинантное антитело или его антигенсвязывающий участок, которое/который имеет вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 50-56; и вариабельную область легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 43-49; при этом антитело специфически связывается с BAFFR. Другим объектом изобретения является(I) выделенное рекомбинантное антитело, которое имеет полноразмерную последовательность тяжелой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 75-78; и полноразмерную последовательность легкой цепи, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 71-74; при этом антитело специфически связывается с BAFFR, или(II) функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок. Другим объектом изобретения является(I) выделенное рекомбинантное антитело, которое имеет полноразмерную последовательность тяжелой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая была оптимизирована с целью экспрессии в клетке млекопитающего, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 79-82; и полноразмерную последовательность легкой цепи, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая была оптимизирована с целью экспрессии в клетке млекопитающего, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 83-86; при этом антитело специфически связывается с BAFFR, или(II) функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок. Аминокислотные последовательности CDR1 VH антител представлены в SEQ ID NO: 1-7. Аминокислотные последовательности CDR2 VH антител представлены в SEQ ID NO: 8-14. Аминокислотные последовательности CDR3 VH антител представлены в SEQ ID NO: 15-21. Аминокислотные последовательности CDR1 VL антител представлены в SEQ ID NO: 22-28. Аминокислотные последовательностиCDR2 VL антител представлены в SEQ ID NO: 29-39. Аминокислотные последовательности CDR3 VL антител представлены в SEQ ID NO: 36-42. CDR-участки описывают с помощью системы Кэбота (Kabat Е.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд., изд-во U.S. Department of Health andHuman Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991). С учетом того, что каждое из указанных антител может связываться с BAFFR и что специфичность связывания с антигеном обеспечивается прежде всего участками CDR1, 2 и 3, последовательности CDR1,2 и 3 VH и последовательности CDR1, 2 и 3 VL можно "смешивать и совмещать" (т.е. можно смешивать и совмещать CDR из различных антител), при этом из каждого антитела, содержащего CDR1, 2 и 3 VH иCDR1, 2 и 3 VL, создают другие связывающиеся с BAFFR молекулы, предлагаемые в изобретении. Связывание с BAFFR таких полученных в результате "смешения и совмещения" антител можно оценивать с помощью описанных выше и в примерах анализов связывания (например, ELISA). Когда смешивают и совмещают CDR-последовательности VH, то последовательность CDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VH следует заменять структурно сходной(ыми) последовательностью(ями) CDR. Аналогично этому, когда смешивают и совмещают CDR-последовательности VL, то последовательностьCDR1, CDR2 и/или CDR3 из конкретной последовательности VL следует заменять структурно сходной(ыми) последовательностью(ями) CDR. Обычному специалисту в данной области должно быть очевидно, что новые последовательности VH и VL можно создавать путем замены одной или нескольких последовательностей CDR-участков VH и/или VL на структурно сходные последовательности CDR, указанные в настоящем описании для моноклональных антител, предлагаемых в настоящем изобретении. В некоторых вариантах осуществления изобретения выделенные рекомбинантные антитела или их антигенсвязывающие участки содержат CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1-7; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 8-14; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-21; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 22-28; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 29-35; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы,включающей SEQ ID NO: 36-42; при этом антитело специфически связывается с BAFFR. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2; GDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 16; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 23; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 30; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 37. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 17; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 24; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 31; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 38. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 18; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 25; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 32; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 39. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной облас- 10024492 ти тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 19; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 26; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 33; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 40. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 20; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 27; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 34; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 41. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14;CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQID NO: 21; CDR1 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 28; CDR2 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность,представленную в SEQ ID NO: 35; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, который имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 42. Согласно настоящему описанию человеческое антитело содержит вариабельные области тяжелой или легкой цепи или полноразмерные тяжелые или легкие цепи, которые "являются продуктом" или "выведены из" последовательности конкретной зародышевой линии, если вариабельные области или полноразмерные цепи антитела получают из системы, основанной на применении генов иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Для создания таких систем осуществляют иммунизацию трансгенной мыши, несущей человеческие гены иммуноглобулинов, с использованием представляющего интерес антигена или осуществляют скрининг фаговой дисплейной библиотеки человеческих генов иммуноглобулинов с использованием представляющего интерес антигена. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "выведено из" последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии,можно идентифицировать индивидуально путем сравнения аминокислотной последовательности человеческого антитела и аминокислотных последовательностей иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии и отбора последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, которая является наиболее близкой по последовательности (т.е. имеет самый высокий % идентичности) с последовательностью человеческого антитела. Человеческое антитело, которое "является продуктом" или "выведено из" конкретной последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, может иметь различия в аминокислотах по сравнению с последовательностью зародышевой линии, например, в результате встречающихся в естественных условиях соматических мутаций или преднамеренной интродукции сайт-направленной мутации. Однако аминокислотная последовательность отобранного человеческого антитела, как правило, по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности,кодируемой геном человеческого иммуноглобулина зародышевой линии, и содержит аминокислотные остатки, которые свидетельствуют о том, что человеческое антитело является человеческим при сравнении с аминокислотными последовательностями иммуноглобулинов зародышевых линий других видов(например, последовательности мышиной зародышевой линии). В определенных случаях аминокислотная последовательность человеческого антитела может быть по меньшей мере на 60, 70, 80, 90%) или даже по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. Как правило, человеческое антитело, выведенное из конкретной последовательности человеческой зародышевой линии,должно иметь не более 10 аминокислотных различий по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. В определенных случаях человеческое антитело может иметь не более 5 или даже не более 4, 3, 2 или 1 аминокислотного различия по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодируемой геном иммуноглобулина зародышевой линии. Гомологичные антитела Согласно еще одному варианту осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении,имеет аминокислотные последовательности полноразмерных тяжелых и легких цепей; нуклеотидные последовательности полноразмерных тяжелых и легких цепей; нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей или аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей, которые гомологичны аминокислотным и нуклеотидным последовательностям представленных в настоящем описании антител, и при этом антитела сохраняют требуемые функ- 11024492 циональные свойства антител к BAFFR, предлагаемых в изобретении. Например, в изобретении предложено выделенное рекомбинантное антитело (или функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок), которое содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 50-56; вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 43-49; антитело специфически связывается с BAFFR, и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: оно ингибирует индуцируемую BLyS пролиферацию В-клеток или индуцируемое BLyS производство IgG1, и оно истощает В-клетки in vitro или in vivo. В другом примере в изобретении предложено выделенное рекомбинантное антитело (или функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок), которое содержат полноразмерную тяжелую цепь и полноразмерную легкую цепь, где: полноразмерная тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 75-78; полноразмерная легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 71-74; антитело специфически связывается с BAFFR, и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: оно ингибирует индуцируемую BLyS пролиферацию В-клеток или индуцируемое BLyS производство IgG1, и оно истощает В-клетки in vitro или in vivo. В другом примере в изобретении предложено выделенное рекомбинантное антитело (или функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок), которое содержат полноразмерную тяжелую цепь и полноразмерную легкую цепь, где полноразмерная тяжелая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающей SEQ ID NO: 79-82; полноразмерная легкая цепь кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, включающейSEQ ID NO: 83-86; антитело специфически связывается с BAFFR, и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: оно ингибирует индуцируемую BLyS пролиферацию Вклеток или индуцируемое BLyS производство IgG1, и оно истощает В-клетки in vitro или in vivo. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя из описанных выше функциональных свойств. Антитело может представлять собой, например, человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело. Предпочтительно антитело представляет собой полностью человеческое антитело IgG1-изотипа. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны указанным выше последовательностям. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности VH и/или VL могут быть идентичны за исключением аминокислотной замены, затрагивающей не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных положений. Антитело, у которого VH- и VL-области обладают высоким уровнем (т.е. 80% или выше) идентичности с VH- и VL-областями, представленными в SEQ ID NO: 50-56 и SEQ ID NO: 4349 соответственно, можно получать путем мутагенеза (например, сайт-направленного или опосредуемого ПЦР мутагенеза) молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют SEQ ID NO: 64-70 и SEQ ID NO: 5763 соответственно, с последующим тестированием кодируемого измененного антитела в отношении сохранения функции (т.е. перечисленных выше функций) с помощью приведенных в настоящем описании функциональных анализов. В других вариантах осуществления изобретения аминокислотные последовательности полноразмерной тяжелой цепи и/или полноразмерной легкой цепи могут быть на 50, 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны указанным выше последовательностям. Антитело, у которого полноразмерная тяжелая цепь и полноразмерная легкая цепь обладают высоким уровнем (т.е. 80%) или выше) гомологии с полноразмерными тяжелыми цепями, представленными в любой из SEQ ID NO: 75-78, и с полноразмерными легкими цепями, представленными в любой из и SEQ ID NO: 71-74 соответственно, можно получать путем мутагенеза (например, сайт-направленного или опосредуемого ПЦР мутагенеза) молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют SEQ ID NO: 79-82 и SEQ ID NO: 83-86 соответственно, с последующим тестированием кодируемого измененного антитела в отношении сохранения функции (т.е. перечисленных выше функций) с помощью приведенных в настоящем описании функциональных анализов. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности полноразмерной тяжелой цепи и/или полноразмерной легкой цепи могут быть идентичны на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97,98 или 99%) представленным выше последовательностям. В других вариантах осуществления изобретения нуклеотидные последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и/или легкой цепи могут быть идентичны на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% представленным выше последовательностям. Согласно настоящему описанию процент идентичности двух последовательностей является функцией количества идентичных положений в последовательностях (т.е. % идентичности = количество идентичных положений/общее количество положений 100), принимая во внимание количество брешей и длину каждой бреши, которую необходимо интродуцировать для оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности двух последовательностей можно определять с помощью описанного ниже математического алгоритма. Процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определять с помощью алгоритма, разработанного Е. Meyers и W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4, 1988, cc. 11-17), который включен в программу ALIGN (версия 2.0), с использованием таблицы взвешенных остатков РАМ 120,штрафа за длину бреши 12 и штрафа за брешь 4. Кроме того, процент идентичности двух аминокислотных последовательностей можно определять с помощью алгоритма Needleman и Wunsch (J. Mol, Biol. 48,1970, cc. 444-453), который включен в программу GAP, входящую в пакет программ GCG (которая доступна на сайте http://www.gcg.com), с использованием матрицы Blossom 62 или матрицы РАМ 250 и веса бреши 16, 14, 12, 10, 8, 6 или 4 и веса длины 1, 2, 3, 4, 5 или 6. Антитела с консервативными модификациями В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, имеет вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, где одна или нескольких указанных последовательностей CDR представляет собой специфические аминокислотные последовательности, характерные для антител, предлагаемых в настоящем изобретении, или их консервативные модификации, и где антитела сохраняют требуемые функциональные свойства антител кBAFFR, предлагаемых в изобретении. Таким образом, в изобретении предложено выделенное рекомбинантное антитело или функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок, которые содержат вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 иCDR3, и вариабельную область легкой цепи, которая содержит последовательности CDR1, CDR2 иCDR3, где последовательности CDR1 вариабельной области тяжелой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности,представленные в SEQ ID NO: 1-7, и их консервативные модификации; последовательности CDR2 вариабельной области тяжелой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 8-14, и их консервативные модификации; последовательности CDR3 вариабельной области тяжелой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 15-21, и их консервативные модификации; последовательности CDR1 вариабельной области легкой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 22-28, и их консервативные модификации; последовательности CDR2 вариабельной области легкой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 29-35, и их консервативные модификации; последовательности CDR3 вариабельной области легкой цепи содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные вSEQ ID NO: 36-42, и их консервативные модификации; антитело специфически связывается с BAFFR; и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: оно ингибирует индуцируемую BLyS пролиферацию В-клеток или индуцируемое BLyS производство IgG1, и оно истощает В-клетки in vitro или in vivo. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из указанных выше функциональных свойств. Такие антитела могут представлять собой, например, человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела. В других вариантах осуществления изобретения антитело, предлагаемое в изобретении, оптимизированное с целью экспрессии в клетке млекопитающего, имеет полноразмерную последовательность тяжелой цепи и полноразмерную последовательность легкой цепи, при этом одна или несколько из этих последовательностей имеет аминокислотные последовательности, специфические для антител, представленных в настоящем описании, или их консервативные модификации, и при этом антитела сохраняют требуемые функциональные свойства антител к BAFFR, предлагаемых в изобретении. Таким образом,изобретение относится к выделенному моноклональному антителу, оптимизированному с целью экспрессии в клетке млекопитающего, которое имеет полноразмерную последовательность тяжелой цепи и полноразмерную последовательность легкой цепи, где: полноразмерная тяжелая цепь имеет аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 75-78, и их консервативные модификации; а полноразмерная легкая цепь имеет аминокислотные последовательности, выбранные из группы, которая включает аминокис- 13024492 лотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 71-74, и их консервативные модификации; антитело специфически связывается с BAFFR; и антитело обладает по меньшей мере одним из следующих функциональных свойств: оно ингибирует индуцируемую BLyS пролиферацию В-клеток или индуцируемое BLyS производство IgG1, и оно истощает В-клетки in vitro или in vivo. В различных вариантах осуществления изобретения антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из указанных выше функциональных свойств. Такие антитела могут, например, представлять собой человеческие антитела, гуманизированные антитела или химерные антитела. В контексте настоящего описания понятие "консервативные модификации последовательностей" относится к аминокислотным модификациям, которые не оказывают существенного влияния или не существенно изменяют характеристики связывания антитела, которое содержит указанную аминокислотную последовательность. Указанные консервативные модификации включают аминокислотные замены,добавления и делеции. Модификации можно интродуцировать в антитело, предлагаемое в изобретении, с помощью стандартных методов, известных в данной области, таких как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредуемый мутагенез. Консервативные аминокислотные замены представляют собой замены, при которых аминокислотный остаток замещают аминокислотным остатком, который имеет сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков со сходными боковыми цепями известны в данной области. Эти семейства включают аминокислотные остатки с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислотными боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин,пролин, фенилаланин, метионин), бета-разветвленными боковыми цепями (например, треонин, валин,изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или несколько аминокислотных остатков в CDR-участках антитела, предлагаемого в изобретении, можно заменять на другие аминокислотные остатки из одного и того же семейства боковых цепей, и измененное антитело можно оценивать в отношении сохранения им функции с помощью представленных в настоящем описании функциональных анализов. Антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и антитела к BAFFR, предлагаемые в изобретении. Другим вариантом осуществления изобретения являются антитела, которые связываются с тем же эпитопом, что и различные специфические антитела к BAFFR, предлагаемые в изобретении. Все антитела, описанные в примерах, которые обладают способностью блокировать индуцируемое BLyS действие,связываются с высокой аффинностью с одним и тем же эпитопом в BAFFR, указанный эпитоп расположен между аминокислотами, представленными в SEQ ID NO: 88. Так, дополнительные антитела можно идентифицировать по их способности к перекрестной конкуренции (например, к статистически значимому конкурентному ингибированию связывания) с другими антителами, предлагаемыми в изобретении, при использовании стандартных анализов связыванияBAFFR. Способность тестируемого антитела ингибировать связывание антител, предлагаемых в настоящем изобретении, с человеческим BAFFR демонстрирует, что тестируемое антитело может конкурировать с антителом за связывание с человеческим BAFFR; согласно одной из возможных теорий такое антитело может связываться с тем же или родственным (например, структурно подобным или находящимся в пространственной близости) эпитопом на человеческом BAFFR, что и антитело, с которым оно конкурирует. Таким образом, другим объектом изобретения являются антитела, которые связываются с тем же антигеном и конкурируют с антителами, последовательности которых представлены в настоящем описании. В конкретном варианте осуществления изобретения антитело, которое связывается с тем же эпитопом на человеческом BAFFR, что и антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, представляет собой человеческое рекомбинантное антитело. Указанные человеческие рекомбинантные антитела можно получать и выделять согласно описанным в примерах методам. Сконструированные и модифицированные антитела Антитело, предлагаемое в изобретении, можно получать также с использованием антитела, которое имеет одну или несколько указанных в настоящем описании последовательностей VH и/или VL, В качестве исходного материала для создания модифицированного антитела, где модифицированное антитело может иметь измененные свойства по сравнению с исходным антителом. Антитело можно создавать путем модификации одного или нескольких остатков в одной или обеих вариабельных областях (т.е. VH и/или VL), например в одном или нескольких CDR-участках и/или в одном или нескольких каркасных участках. В дополнительном или альтернативном варианте антитело можно создавать путем модификации остатков в константной(ых) области(ях), например, для изменения эффекторной(ых) функции(ий) антитела. Для осуществления одного из типов конструирования вариабельной области можно применять трансплатацию CDR. Антитела взаимодействуют с антигенами-мишенями в основном посредством аминокислотных остатков, локализованных в шести гипервариабельных участках (CDR) тяжелой и легкой цепи. По этой причине между аминокислотными остатками в CDR индивидуальных антител существуют более значительные различия, чем в последовательностях вне CDR. Поскольку последовательности CDR ответственны за большую часть взаимодействий антитело-антиген, можно экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства конкретных встречающихся в естественных условиях антител, путем конструирования экспрессионных векторов, которые содержат последовательности CDR из конкретного встречающегося в естественных условиях антитела, полученные путем трансплантации в последовательности каркасных участков из других антител с другими свойствами (см., например, Riechmann L. и др., Nature 332, 1998, cc. 323-327; Jones P. и др., Nature, 321, 1986, cc. 522-525; Queen С. и др.,Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86, 1989, cc. 10029-10033; US 5225539 на имя Winter и US 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавторами). Таким образом, следующим объектом изобретения является выделенное моноклональное антитело к BAFFR или функциональный белок, содержащий его антигенсвязывающий участок, имеющие последовательности CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 1-7; последовательности CDR2, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 8-14; последовательности CDR3, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 15-21 соответственно; и последовательности CDR1 вариабельной области легкой цепи, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 22-28; последовательности CDR2, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 29-35; и последовательности CDR3, которые содержат аминокислотные последовательности, выбранные из группы, включающей SEQ ID NO: 36-42 соответственно. Таким образом, указанные антитела содержат последовательности CDR VH и VL моноклональных антител, кроме того, они могут содержать различные последовательности каркасных участков указанных антител. Указанные последовательности каркасных участков можно получать из публичных баз данных ДНК или опубликованных ссылок, которые содержат последовательности генов антител зародышевой линии. Например, последовательности ДНК генов зародышевой линии вариабельных областей человеческих тяжелых и легких цепей можно найти в базе данных последовательностей человеческой зародышевой линии "Vbase" (доступной в Интернете на сайте www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase), а также у Kabat E.А. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 1991, 15-oe изд., изд-во U.S. Department of Health andCox J.P.L. и др., Eur. J. Immunol. 24, 1994, cc. 827-836. Примером последовательностей каркасных участков, предназначенных для применения в антителах, предлагаемых в изобретении, являются последовательности, структурно подобные последовательностям каркасных участков, которые входят в отобранные антитела, предлагаемые в изобретении, например консенсусные последовательности и/или последовательности каркасных участков, которые входят в моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении. Последовательности CDR1, 2 и 3 VH и последовательности CDR1, 2 и 3 VL можно трансплантировать в каркасные участки, которые имеют последовательность, идентичную с последовательностью гена иммуноглобулина зародышевой линии, из которого выведена последовательность каркасного участка, или последовательности CDR можно трансплантировать в каркасные участки, которые содержат одну или несколько мутаций по сравнению с последовательностями зародышевой линии. Например, было установлено, что в определенных случаях целесообразно изменять посредством мутации остатки в каркасных участках для поддержания или повышения способности антитела связываться с антигеном (см., например, US 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавторами). Другим типом модификации вариабельной области является мутация аминокислотных остатков вCDR1, CDR2 и/или CDR3 VH- и/или VL-областей, которая повышает тем самым одну или несколько способностей к связыванию (например, аффинность) представляющего интерес антитела, что называют "созреванием аффинности". Для интродукции мутации(й) и воздействия на связывание антитела или на другое представляющее интерес функциональное свойство можно применять сайт-направленный мутагенез или ПЦР-опосредуемый мутагенез, что можно оценивать с помощью анализов in vitro или in vivo, представленных в настоящем описании и описанных ниже в примерах. Можно интродуцировать консервативные модификации (указанные выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные замены,добавления или делеции. Кроме того, как правило, изменяют не более 1, 2, 3, 4 или 5 остатков в CDRучастке. Таким образом, другим вариантом осуществления изобретения являются выделенные моноклональные антитела к BAFFR или функциональный белок, содержащий их антигенсвязывающие участки,которые включают вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: CDR1-участок VH-области, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1-7,или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 1-7; CDR2-участок VH-области, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 8-14, или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 8-14; CDR3-участок VH-области, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-21, или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 15-21; CDR1-участок VL-области, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 22-28, или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 22-28; CDR2 участок VL-области, который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 29-35, или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 29-35; и CDR3-участок VL-области,который имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 36-42, или аминокислотную последовательность с 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами, делециями или добавлениями по сравнению с SEQ ID NO: 36-42. Трансплантация антигенсвязывающих доменов в альтернативные каркасные участки или остовы Можно применять широкое разнообразие остовов или каркасов антитела/иммуноглобулина при условии, что образующийся полипептид включает по меньшей мере один связывающий участок, который специфически связывается с BAFFR. Такие остовы или каркасы включают пять основных идиотипов человеческих иммуноглобулинов или их фрагментов (например, которые представлены в настоящем описании), и включают иммуноглобулины других видов животных, которые предпочтительно имеют гуманизированные компоненты. В этом плане особенно интересными являются состоящие только из тяжелых цепей антитела, которые идентифицированы в представителях верблюжьих. Специалисты в данной области продолжают выявлять и создавать новые остовы, каркасы и фрагменты. Одним из объектов изобретения является создание антител, не относящихся к иммуноглобулинам, с использованием неиммуноглобулиновых каркасов, в которые можно трансплантировать CDR, предлагаемые в изобретении. Можно применять известные неиммуноглобулиновые остовы или каркасы или те,которые будут созданы в будущем, при условии, что они содержат связывающий участок, специфический для белка белка-мишени, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 87. Такие соединения обозначены в контексте настоящего описания как "полипептиды, содержащие специфический для мишени связывающий участок". Примеры неиммуноглобулиновых каркасов дополнительно описаны ниже в соответствующих разделах (верблюжьи антитела и каркасы, отличные от характерных для антител каркасов). Верблюжьи антитела Белки антител, полученные из представителей семейства двугорбых и одногорбых верблюдов(Camelus bactrianus и Calelus dromaderius), включая представителей животных Нового Света, таких как различные виды лам (Lama paccos, Lama glama и Lama vicugna), охарактеризованы в отношении их размера, структурной комплексности и антигенности в отношении человека. Установлено, что некоторые антитела типа IgG из этого семейства млекопитающих в естественных условиях лишены легких цепей и поэтому отличаются по структуре от типичной состоящей из четырех цепей четвертичной структуры с двумя тяжелыми и двумя легкими цепями, характерной для антител из организма других животных (см. РСТ/ЕР 93/02214 (WO 94/04678, опубликована 3 марта 1994 г Участок верблюжьего антитела, представляющий собой небольшую индивидуальную вариабельную область, обозначенную как VHH, можно создавать с помощью генной инженерии с получением небольшого белка, обладающего высокой аффинностью к мишени, что приводит к получению низкомолекулярного выведенного из антитела белка, который обозначают как "верблюжье нанотело" (см. US 5759808, выданный 2 июня 1998 г.; см. также Stijlemans В. и др., J. Biol. Chem. 279, 2004, cc. 1256-1261;Dumoulin M. и др., Nature 424, 2003, cc. 783-788; Pleschberger M. и др. Bioconjugate Chem 14, 2003, cc. 440-448; Cortez-Retamozo V. и др., Int. J. Cancer 89, 2002, cc. 456-462; и Lauwereys М. и др., EMBO J. 17,1998, cc. 3512-3520). Созданные библиотеки верблюжьих антител и фрагментов антител доступны на коммерческой основе, например, от фирмы Ablynx, Гент, Бельгия. Аналогично другим антителам, полученным из видов, кроме человека, аминокислотную последовательность верблюжьего антитела можно изменять рекомбинантно с получением последовательности, в большей степени напоминающей человеческую последовательность, т.е. нанотело можно "гуманизировать". Таким путем можно дополнительно понижать естественную низкую антигенность верблюжьих антител для людей. Верблюжье нанотело имеет молекулярную массу, составляющую примерно 1/10 от молекулярной массы человеческого IgG, а физический диаметр белка составляет лишь несколько нанометров. Одной из связанных с малым размером особенностей является способность верблюжьих нанотел связываться с антигенными сайтами, которые являются функционально незаметными для более крупных белковых антител, т.е. верблюжьи нанотела можно применять в качестве реагентов, выявляющих антигены, которые остаются скрытыми при использовании классических иммунологических методов, и возможно в качестве терапевтических агентов. Таким образом, другой особенностью верблюжьего нанотела, связанной с его малым размером, является способность ингибировать связывание со специфическим сайтом в бороздке или узкой расщелине белка-мишени, и поэтому их можно применять в качестве субстанции, более напоминающей по своей функции классическое низкомолекулярное лекарственное средство, чем классическое антитело. Небольшая молекулярная масса и компактный размер обусловливает также очень высокую термостабильность, стабильность при экстремальных значениях рН и стабильность к протеолитическому расщеплению и низкую антигенность верблюжьих нанотел. Еще одним следствием указанных особенностей является то, что верблюжьи нанотела легко проникают из кровеносной системы в ткани и даже проникают через гематоэнцефалический барьер и их можно применять для лечения заболеваний, поражающих нервную ткань. Нанотитела могут облегчать также транспорт лекарственных средств через гематоэнцефалический барьер (см. заявку на патент США 20040161738, опубликованную 19 августа 2004 г). Эти особенности в сочетании с низкой антигенностью в отношении людей свидетельствуют об их большом терапевтическом потенциале. Кроме того, эти молекулы можно полностью экспрессировать в прокариотических клетках, таких как Е. coli, и экспрессировать в виде слитых белков с бактериофагом, и они являются функционально активными. Таким образом, отличительным признаком настоящего изобретения является верблюжье антитело или нанотело, обладающее высокой аффинностью к BAFFR. В конкретных вариантах осуществления изобретения верблюжье антитело или нанотело получают в естественных условиях в животном из семейства верблюжьих, т.е. оно продуцируется в организме представителя верблюжьих после иммунизации BAFFR или его пептидным фрагментом при применении методов, описанных для других антител. В другом варианте верблюжье нанотело к BAFFR конструируют, т.е. получают путем отбора, например, из фаговых дисплейных библиотек соответствующим образом мутированных белком верблюжьих нанотел,с помощью метода пэннинга с использованием в качестве мишени BAFFR, как описано в приведенных в настоящем описании примерах. В одном из вариантов осуществления изобретения антитело, представленное в настоящем описании, является "камелизированным", имеющим каркасный участок из верблюжьего антитела и CDR1-, CDR2- и/или CDR3-участки VH, представленные в настоящем описании. Сконструированные нанотела можно дополнительно усовершенствовать с помощью генной инженерии таким образом, чтобы время их полужизни в реципиенте составляло от 45 мин до 2 недель. В конкретном варианте осуществления изобретения верблюжье антитело или нанотело получают путем трансплантации последовательностей CDR тяжелой или легкой цепи человеческих антител, предлагаемых в изобретении, в нанотело или в последовательности каркасных участков, имеющего один домен антитела согласно методам, описанным, например в РСТ/ЕР 93/02214. Нехарактерные для антител каркасы Известные неиммуноглобулиновые остовы или каркасы включают (но, не ограничиваясь только ими) аднектины (фибронектин) (фирма Compound Therapeutics, Inc., Уолтем, шт. Массачусетс), анкирин(фирма Molecular Partners AG, Цюрих, Швейцария), домены антител (фирма Domantis, Ltd (Кэмбридж,шт. Массачусетс) и фирма Ablynx nv (Цвинаарде, Бельгия, липокалин (антикалин) (фирма Pieris Proteolab AG, Фрейзинг, Германия), небольшие модульные иммунологические фармацевтические агенты(фирма Trubion Pharmaceuticals Inc., Сиэтл, шт. Вашингтон), макситела (фирма Avidia, Inc. (МаунтинВью, шт. Калифорния), белок А (фирма Affibody AG, Швеция) и аффилин (гамма-кристаллин или убикитин) (фирма Scil Proteins GmbH, Галле, Германия), миметики белковых эпитопов (фирма Polyphor Ltd,Аллшвиль, Швейцария).(I) Фибронектиновые каркасы. Основой фибронектиновых каркасов является предпочтительно домен фибронектина типа III (например, десятый модуль фибронектина типа III (домен 10 Fn3). Домен фибронектина типа III несет 7 или 8 -цепей, которые распределены между двумя -складками, которые сами упакованы друг напротив друга с образованием ядра белка, и дополнительно содержат петли (аналоги CDR), которые соединяют цепи друг с другом и являются доступными для растворителя. Известно по меньшей мере три таких петли на каждом крае -складчатого "сэндвича", при этом край является границей белка, перпендикулярной к направлению -цепей (US6818418). Эти каркасы, основой которых является фибронектин, не представляют собой иммуноглобулин, хотя общая укладка очень похожа на укладку наименьшего обладающего функциональной активностью фрагмента антитела, т.е. вариабельной области тяжелой цепи, который содержит полный распознающий антиген компонент в IgG представителей верблюжьих и лам. Благодаря указанной структуре антитело,не представляющее собой иммуноглобулин, имитирует антигенсвязывающие свойства, которые напоминают по природе и аффинности свойства антител. Эти каркасы можно применять для стратегии рандомизации петель и перестановки in vitro, что подобно процессу созревания аффинности антител in vivo. Такие молекулы, основой которых является фибронектин, можно применять в качестве каркасов, в которых области петель молекулы можно заменять на CDR, предлагаемые в изобретении, с помощью стандартных методов клонирования.(II) Анкирин - фирма Molecular Partners. Технология основана на применении белков, несущих выведенные из анкирина повторяющиеся модули в качестве каркасов для вариабельных областей, которые можно использовать для связывания с различными мишенями. Повторяющийся анкириновый модуль представляет собой состоящий из 33 аминокислот полипептид, который содержит две антипараллельные -спирали и -петли. Связывание вариабельных областей максимально оптимизируют на основе доступности для рибосом.(III) Макситела/авимеры - фирма Avidia. Авимеры получают из встречающегося в естественных условиях содержащего А-домен белка, такого как LRP-1. Эти домены используются в естественных условиях для взаимодействий типа белок-белок,и у человека структурной основой более чем 250 белков являются А-домены. Авимеры состоят из нескольких различных мономеров "А-домена" (2-10), сцепленных с помощью аминокислотных линкеров. Можно создавать авимеры, которые могут связываться с антигеном-мишенью, с использованием методологии, описанной, например в 20040175756; 20050053973; 20050048512 и 20060008844.(VI) Белок А - фирма Affibody. Обладающие аффинностью лиганды Affibody представляют собой небольшие простые белки, состоящие из трехспирального пучка, основой которого является каркас одного из IgG-связывающих доменов белка А. Белок А представляет собой поверхностный белок бактерии Staphylococcus aureus. Этот каркасный домен состоит из 58 аминокислот, 13 из которых произвольно использовали для создания библиотек Affibody с большим количеством вариантов лиганда (см., например, US 5831012). МолекулыAffibody напоминают антитела, их молекулярная масса составляет 6 кДа, для сравнения молекулярная масса антител составляет 150 кДа. Несмотря на небольшой размер сайт связывания молекул Affibody подобен сайту связывания антитела.(V) Антикалины (Anticalins) - фирма Pieris. Антикалины (Anticalins) представляют собой продукты, разработанные компанией Pieris ProteoLab AG. Их получают из липокалинов, широкораспространенной группы небольших и эффективных белков, которые, как правило, принимают участие в физиологическом транспорте или хранении чувствительных к химическим агентам или нерастворимых соединений. Несколько встречающихся в естественных условиях липокалинов обнаружено в тканях или общей воде организма человека. Их белковая архитектура напоминает структуру иммуноглобулинов с гипервариабельными петлями на вершине жесткого остова. Однако в отличие от антител или их рекомбинантных фрагментов липокалины состоят из одной полипептидной цепи, содержащей 160-180 аминокислотных остатков, т.е. несколько более крупной, чем один домен иммуноглобулина. Набор из четырех петель, которые образуют связывающий карман, обладает выраженной структурной пластичностью и допускает широкое разнообразие боковых цепей. Таким образом, при использовании соответствующего процесса сайту связывания можно придавать новую форму, предназначенную для распознавания с высокой аффинностью и специфичностью заранее определенных молекул-мишеней различной формы. Один из белков семейства липокалинов, а именно связывающий билин белок (ВВР) из Pieris brassicae (капустная белянка), использовали для создания антикалинов путем мутагенеза, затрагивающего четыре петли. Одной из заявок на патент, в которых описаны "антикалины", приведенной в качестве примера, является РСТ WO 199916873.(VI) Аффилин (Affilin) - белки фирмы Scil Proteins. Молекулы Affilin представляют собой небольшие неиммуноглобулиновые белки, которые разработаны с целью достижения специфических аффинностей к белкам и небольшим молекулам. Новые молекулы Affilin можно очень быстро отбирать из двух библиотек, основой каждой из которых являются различные полученные из человеческого организма белки-каркасы. Молекулы Affilin не обладают какой либо структурной гомологией с белками иммуноглобулинов. На фирме Scil Proteins применяют два Affilin-каркаса, одним из которых является гамма-кристаллин,человеческий структурный белок хрусталика глаза, а другим являются белки суперсемейства "убикитина". Оба человеческих каркаса имеют очень малый размер, характеризуются высокой теплостойкостью и практически устойчивы к изменениям значений рН и действию денатурирующих агентов. Указанная высокая стабильность главным образом является результатом расширенной -складчатой конформации белков. Примеры выведенных из -кристаллина белков описаны в WO 200104144, а примеры "убикитиноподобных" белков описаны в WO 2004106368.(VII) Миметики белковых эпитопов (РЕМ). РЕМ представляют собой имеющие средний размер, циклические, напоминающие пептиды молекулы (ММ 1-2 кДа), которые имитируют вторичные структуры белков типа -"шпилек", т.е. основную вторичную структуру, участвующую во взаимодействиях типа белок-белок. Конструирование каркасных участков или Fc К сконструированным антителам, предлагаемым в изобретении, относятся антитела, в которых сделаны модификации в остатках каркасных участков в VH и/или VL, например, с целью улучшения свойств антитела. Как правило, такие модификации каркасных участков осуществляют для снижения иммуногенности антитела. Например, один из подходов представляет собой "обратное мутирование" одного или нескольких остатков каркасного участка с получением соответствующей последовательности зародыше- 18024492 вой линии. Более конкретно, антитело, которое было подвергнуто соматической мутации, может содержать остатки каркасного участка, отличающиеся от последовательности зародышевой линии, из которой выведено антитело. Такие остатки можно идентифицировать путем сравнения последовательностей каркасных участков антитела с последовательностями зародышевой линии, из которой выведено антитело. Для возвращения последовательностей каркасного участка к исходной конфигурации зародышей линии соматические мутации можно подвергать "обратному мутированию" с получением последовательности зародышевой линии, например, с помощью сайт-направленного мутагенеза или ПЦР-опосредуемого мутагенеза. Такие антитела с "обратными мутациями" подпадают также под объем настоящего изобретения. Другой тип модификации каркасного участка включает изменение путем мутации одного или нескольких остатков в каркасном участке или даже в одном или нескольких CDR-участках для удаления Тклеточных эпитопов с целью снижения потенциальной иммуногенности антитела. Этот подход обозначают также как "деиммунизация", и он описан более подробно в опубликованном US 2003/0153043 на имя Carr с соавторами. В дополнительном или альтернативном варианте помимо модификаций в каркасных участках илиCDR антитела, предлагаемые в изобретении, могут включать модификации в Fc-фрагменте, как правило,для изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела, таких как время полужизни в сыворотке, фиксация комплемента, связывание Fc-рецептора и/или антитело-обусловленная клеточнозависимая цитотоксичность. Кроме того, антитело, предлагаемое в изобретении, можно модифицировать химически (например, к антителу можно присоединять один или несколько химических фрагментов) или можно модифицировать для изменения его гликозилирования, и в этом случае с целью изменения одного или нескольких функциональных свойств антитела. Каждый из указанных вариантов осуществления изобретения будет дополнительно описан ниже. Нумерация остатков в Fc-фрагменте соответствует нумерации EU по Кэботу. В одном из вариантов осуществления изобретения модифицируют шарнирную область СН 1 так,чтобы изменять, например, увеличивать или снижать, количество цистеиновых остатков в шарнирной области. Этот подход описан также в US 5677425 на имя Bodmer с соавт. Количество цистеиновых остатков в шарнирной области СН 1 изменяют, например, для облегчения сборки легких и тяжелых цепей или для повышения или снижения стабильности антитела. В другом варианте осуществления изобретения шарнирную область Fc-фрагмента антитела можно изменять с помощью мутации для снижения биологического времени полужизни антитела. Более конкретно, интродуцируют одну или несколько аминокислотных мутаций в область контакта СН 2-СН 3 доменов шарнирной области Fc-фрагмента для ухудшения связывания антитела с белком А золотистого стафилококка Staphylococcyl (SpA) по сравнению со связыванием нативной шарнирной области Fcфрагмента с SpA. Этот подход описан более подробно в US 6165745 на имя Ward с соавт. В другом варианте осуществления изобретения антитело модифицируют для удлинения биологического времени полужизни. При этом возможно применение различных подходов. Например, можно интродуцировать одну или несколько из следующих мутаций: T252L, T254S, T256F, описанных в US 6277375 на имя Ward. В другом варианте для удлинения биологического времени полужизни можно изменять антитело в СН 1- или CL-области путем интродукции связывающегося с рецептором-"спасателем" эпитопа, полученного из двух петель СН 2-домена Fc-фрагмента IgG, как описано в US 5869046 и US 6121022 на имя Presta с соавторами. В других вариантах осуществления изобретения Fc-фрагмент изменяют путем замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка на другой аминокислотный остаток для изменения эффекторных функций антитела. Например, один или несколько аминокислотных остатков можно заменять на другой аминокислотный остаток таким образом, чтобы у такого антитела изменялась аффинность к эффекторному лиганду, но сохранялась антигенсвязывающая способность родительского антитела. Эффекторный лиганд, аффинность к которому изменяют, может представлять собой, например, Fc-рецептор или С 1 компонент системы комплемента. Этот подход описан более подробно в US 5624821 и US 5648260, оба на имя Winter с соавт. В другом варианте осуществления изобретения один или несколько аминокислотных остатков аминокислотной последовательности можно заменять другим аминокислотным остатком так, чтобы антитело имело измененную способность к C1q-связыванию и/или пониженную комплементзависимую цитотоксичность (CDC) или чтобы у него отсутствовала CDC. Этот подход описан более подробно в US 6194551 на имя Idusogie с соавт. В другом варианте осуществления изобретения один или несколько аминокислотных остатков модифицируют, изменяя тем самым способность антитела к фиксации комплемента. Этот подход описан также в опубликованной заявке РСТ WO 94/29351 на имя Bodmer с соавт. Еще в одном варианте осуществления изобретения Fc-фрагмент модифицируют для повышения способности антитела вызывать антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (ADCC) и/или для повышения аффинности антитела к Fc-рецептору посредством модификации одной или нескольких аминокислот. Этот подход описан более подробно в опубликованной заявке РСТ WO 00/42072 на имя Presta. Кроме того, были картированы сайты связывания человеческого IgG1 с FcRI, FcRII,FcRIII и FcRn и описаны варианты с улучшенной способностью к связыванию (см. Shields R.L. и др., J.Biol. Chen. 276, 2001, cc. 6591-6604). В следующем варианте осуществления изобретения модифицируют гликозилирование антитела. Например, можно создавать агликозилированное антитело (т.е. антитело, в котором отсутствует гликозилирование). Гликозилирование можно изменять, например, для повышения аффинности антитела к"антигену". Такие углеводные модификации можно осуществлять путем, например, изменения одного или нескольких сайтов гликозилирования в последовательности антитела. Например, можно осуществлять одну или несколько аминокислотных замен, которые приводят к элиминации одного или нескольких сайтов гликозилирования каркасного участка вариабельной области, устраняя тем самым гликозилирование в этом сайте. Указанное агликозилирование может повышать аффинность антитела к антигену. Этот подход описан более подробно в US 5714350 и US 6350861 на имя Со с соавт. В дополнительном или альтернативном варианте можно создавать антитело с измененным типом гликозилирования, например, гипофукозилированное или нефукозилированное антитело, которое имеет пониженное количество фукозильных остатков, или антитело с повышенным содержанием разделяющих пополам GlcNac-структур. Было продемонстрировано, что такие измененные схемы гликозилирования повышают ADCC-активность антител. Указанные углеводные модификации можно осуществлять, например, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине с измененным механизмом гликозилирования. Клетки с измененным механизмом гликозилирования известны в данной области, и их можно применять в качестве клеток-хозяев, в которых экспрессируют рекомбинантные антитела, предлагаемые в изобретении, для получения тем самым антител с измененным гликозилированием. Например, в ЕР 1176195 на имя Hang с соавт. описана линия клеток с функционально нарушенным геном FUT8, который кодирует фукозилтрансферазу, в результате чего экспрессируемые в такой клеточной линии антитела характеризуются гипофукозилированием или отсутствием фукозильных остатков. Таким образом, согласно одному из вариантов осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, получают путем рекомбинантной экспрессии в клеточной линии, которая отличается схемой гипофузилирования или отсутствием фукозилирования, например, в клеточной линии млекопитающего с дефицитом экспрессии генаFUT8, который кодирует фукозилтрансферазу. В опубликованной заявке РСТ WO 03/035835 на имя Presta описан вариант линии СНО-клеток, Lec13-клетки, с пониженной способностью присоединять фукозу к связанным с Asn(297) углеводам, что приводит также к гипофукозилированию антител, экспрессируемых в этой клетке-хозяине (см. также Shields R.L. и др., J. Biol. Chem. 277, 2002, cc. 26733-26740). В опубликованной заявке РСТ WO 99/54342 на имя Umana с соавт., описаны линии клеток, сконструированные для экспрессии модифицирующих гликопротеин гликозилтрансфераз (например, (1,4)-Nацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII, в результате чего антитела, которые экспрессируются в сконструированных линиях клеток, характеризуются повышенным содержанием разделяющих пополамBiotech. 17, 1999, cc. 176-180). Описаны также генетически созданные на фирме Eureka Therapeutics клетки млекопитающих, такие как СНО, обладающие способностью продуцировать антитела с измененной от характерной для млекопитающих схемой гликозилирования, в которых отсутствуют фукозильные остатки (http://www.eurekainc.com/aboutus/companyoverview.html). В альтернативном варианте антитела предлагаемые в изобретении, можно получать в дрожжах или нитчатых грибах, сконструированных для создания напоминающей характерную для млекопитающих схему гликозилирования, и которые обладают способностью продуцировать антитела с отсутствием фукозы в качестве компонента схемы гликозилирования (см., например, ЕР 1297172 В 1). Другой модификацией антител, подпадающей под объем изобретения, является пэгилирование. Антитело можно пэгилировать, например, для удлинения биологического (например, в сыворотке) времени полужизни антитела. Для пэгилирования антитела, как правило, антитело или его фрагмент подвергают взаимодействию с полиэтиленгликолем (ПЭГ), таким как реакционноспособный сложный эфир или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, при которых одна или несколько ПЭГ-групп присоединяется к антителу или фрагменту антитела. Пэгилирование можно осуществлять с помощью реакции ацилирования или реакции алкилирования с реакционноспособной молекулой ПЭГ (или аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). В контексте настоящего описания подразумевается, что понятие "полиэтиленгликоль" относится к любым формам ПЭГ, которые используют для дериватизации других белков, таким как моно(С 1-С 10)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или полиэтиленгликольмалеимид. В конкретных вариантах осуществления изобретения антитело, подлежащее пэгилированию,представляет собой агликолизированное антитело. Методы пэгилирования белков известны в данной области и их можно применять к антителам, предлагаемым в изобретении (см., например, ЕР 0154316 на имя Nishimura с соавт. и ЕР 0401384 на имя Ishikawa с соавт.). Другой модификацией антител, подпадающей под объем изобретения, является конъюгат или слитый белок, содержащий, по меньшей мере, антигенсвязывающий участок антитела, предлагаемого в изобретении, с сывороточным белком, таким как человеческий сывороточный альбумин или его фрагмент, с целью удлинения времени полужизни образовавшейся молекулы. Такой подход описан, например, у Ballance с соавт. в ЕР 0322094. Другим возможным вариантом является слияние по меньшей мере одного антигенсвязывающего участка антитела, предлагаемого в изобретении, с белками, которые могут связываться с сывороточными белками, такими как человеческий сывороточный альбумин, удлиняя время полужизни образовавшейся молекулы. Такой подход описан у Nygren с соавт. в ЕР 0486525. Методы создания измененных антител Как указано выше, антитела к BAFFR, которые имеют последовательности VH и VL или последовательности полноразмерной тяжелой и легкой цепи, представленные в настоящем описании, можно применять для создания новых антител к BAFFR путем модификации последовательностей полноразмерной тяжелой цепи и/или легкой цепи, последовательностей VH и/или VL или присоединенной(ых) к ним константной(ых) области(ей). Таким образом, согласно другому объекту изобретения структурные особенности антитела к BAFFR, предлагаемого в изобретении, используют для создания структурно родственных антител к BAFFR, которые сохраняют по меньшей мере одно из функциональных свойств антител,предлагаемых в изобретении, таких как связывание с человеческим BAFFR, а также ингибирование одного или нескольких функциональных свойств BAFFR (например, антагонистическая активность, способность истощать В-клетки). Например, один или несколько CDR-участков антител, предлагаемых в настоящем изобретении,или их мутантов можно объединять рекомбинантно с известными каркасными участками и/или другимиCDR для получения дополнительных, созданных с использованием рекомбинантной ДНК антител кBAFFR, предлагаемых в изобретении, с помощью указанных выше методов. Другие типы модификаций включают модификации, описанные в предыдущем разделе. Исходным материалом для конструирования является одна или несколько последовательностей VH и/или VL, представленных в настоящем описании,или один или несколько из их CDR-участков. Для создания сконструированного антитела не является необходимым фактическое получение (т.е. экспрессия в виде белка) антитела, которое имеет одну или несколько из последовательностей VH и/или VL, представленных в настоящем описании, или одного или нескольких их CDR-участков. Предпочтительно информацию, содержащуюся в последовательности(ях),используют в качестве исходного материала для создания последовательности(ей) "второго поколения",выведенной(ых) из исходной(ых) последовательности(ей), и затем получают последовательность(и) второго поколения и экспрессируют в виде белка. Таким образом, еще одним вариантом осуществления изобретения является способ получения антитела к BAFFR, состоящего из последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела, которая содержит последовательность CDR1, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1-7, последовательность CDR2, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 8-14, и/или последовательностьCDR3, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 15-21; и последовательности вариабельной области легкой цепи антитела, которая содержит последовательность CDR1, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 22-28, последовательность CDR2, выбранную из группы, включающей SEQ NO: 2935, и/или последовательность CDR3, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 36-42; заключающийся в том, что изменяют по меньшей мере один аминокислотный остаток в последовательности вариабельной области тяжелой цепи антитела и/или вариабельной области легкой цепи антитела для создания по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и экспрессируют измененную последовательность антитела в виде белка. Таким образом, другим вариантом осуществления изобретения является способ получения антитела к BAFFR, оптимизированного для экспрессии в клетке млекопитающего, которое состоит из полноразмерной последовательности тяжелой цепи антитела, которая имеет последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 75-78; полноразмерной последовательности легкой цепи антитела,которая имеет последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 71-74; заключающийся в том, что изменяют по меньшей мере один аминокислотный остаток в полноразмерной последовательности тяжелой цепи антитела и/или в полноразмерной последовательности легкой цепи антитела для создания по меньшей мере одной измененной последовательности антитела; и экспрессируют измененную последовательность антитела в виде белка. Измененную последовательность антитела можно создавать также путем скрининга библиотек антител, которые имеют фиксированные последовательности CDR3, выбранные из группы, включающейSEQ ID NO: 15-21 и SEQ ID NO: 36-42, или минимальные имеющие решающее значение связывающие детерминанты, описанные в US 20050255552, и разнообразные последовательности CDR1 и CDR2. Скрининг можно осуществлять с использованием любого метода скрининга, пригодного для скрининга антител из библиотек антител, такого как технология фагового дисплея. Для получения и экспрессии измененной последовательности антитела можно применять стандартные методы молекулярной биологии. Антитело, кодируемое измененной(ыми) последовательностью(ями), представляет собой антитело, которое сохраняет одну, несколько или все функциональные свойства антител к BAFFR, представленных в настоящем описании, где функциональные свойства представляют собой (но, не ограничиваясь только ими) специфическое связывание с человеческим BAFFR; и/или и способность антитела ингибировать индуцируемую BLyS пролиферацию В-клеток, индуцируемое BLyS производство IgG1, и способность антитела истощать В-клетки in vitro или in vivo. Измененное антитело может обладать одним или несколькими, двумя или более или тремя или более из указанных выше функциональных свойств. Функциональные свойства измененных антител можно оценивать с помощью стандартных анализов, известных в данной области и/или представленных в настоящем описании, таких как описанные в примерах (например, ELISA). В конкретных вариантах способов создания антител, предлагаемых в изобретении, мутации можно интродуцировать произвольно или избирательно во всю или в часть кодирующей последовательности антитела к BAFFR и полученные в результате модифицированные антитела к BAFFR можно подвергать скринингу в отношении связывающей активности и/или других описанных выше функциональных свойств. Методы интродукции мутаций известны в данной области. Например, в опубликованной заявке РСТ WO 02/092780 на имя Short описаны методы создания и скрининга мутаций антител с помощью насыщающего мутагенеза, синтетической сборки лигированием или с помощью комбинации этих методов. Альтернативно этому в опубликованной заявке РСТ WO 03/074679 на имя Lazar с соавт. описаны альтернативные методы, основанные на вычислительном скрининге для оптимизации физико-химических свойств антител. Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела, предлагаемые в изобретении Следующим объектом изобретения являются молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют антитела, предлагаемые в изобретении. Примерами нуклеотидных последовательностей полноразмерной легкой цепи, оптимизированных для экспрессии в клетке млекопитающего, являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 83-86. Примерами нуклеотидных последовательностей полноразмерной тяжелой цепи, оптимизированных для экспрессии в клетке млекопитающего, являются последовательности, представленные в SEQ ID NO: 79-82. Нуклеиновые кислоты могут присутствовать в целых клетках, в клеточных лизатах или могут представлять собой нуклеиновые кислоты в частично очищенной или практически чистой форме. Нуклеиновую кислоту "выделяют" или "получают ее в практически очищенном виде", когда ее очищают от других клеточных компонентов или других загрязнителей, например, других присутствующих в клетке нуклеиновых кислот или белков, с помощью стандартных методов, включая обработку щелочью/ДСН, CsClбэндинг, хроматографию на колонках, электрофорез в агарозном геле и других методов, хорошо известных в данной области (см. Current Protocols in Molecular Biology, под ред. F. Ausubel и др., изд-во GreenePublishing and Wiley Interscience, New York, 1987). Нуклеиновая кислота, предлагаемая в изобретении,может представлять собой, например, ДНК или РНК и может содержать интронные последовательности или не содержать их. В одном из вариантов осуществления изобретения нуклеиновая кислота представляет собой молекулу кДНК. Нуклеиновая кислота может присутствовать в векторе, таком как фаговый дисплейный вектор или рекомбинантный плазмидный вектор. Нуклеиновые кислоты, предлагаемые в изобретении, можно получать с помощью стандартных методов молекулярной биологии. Для антител,экспрессируемых гибридомами (например, гибридомами, полученными из трансгенных мышей, которые несут гены человеческих иммуноглобулинов, что будет описано ниже), кДНК, которые кодируют легкие и тяжелые цепи антитела, созданные с использованием гибридомы, можно получать с помощью стандартных методов ПЦР-амплификации или клонирования кДНК. Для антител, которые получают из библиотеки генов иммуноглобулинов (например, с помощью метода фагового дисплея), нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, можно выделять из различных фаговых клонов, которые являются компонентами библиотеки. После получения ДНК-фрагментов, кодирующих VH- и VL-области, эти ДНК-фрагменты можно подвергать дополнительной обработке с помощью стандартных методов рекомбинантной ДНК, например, для превращения генов вариабельной области в гены полноразмерной цепи антитела, в гены Fabфрагмента или в ген scFv-фрагмента. При осуществлении этого процесса ДНК-фрагмент, кодирующийVL или VH, функционально связывают с другой молекулой ДНК или фрагментом, кодирующей/кодирующим другой белок, такой как константная область антитела или гибкий линкер. Понятие"функционально связанный" в контексте настоящего описания означает, что два ДНК-фрагмента соединяют функциональным образом, в результате чего аминокислотные последовательности, кодируемые двумя ДНК-фрагментами, сохраняются в рамке считывания, или в результате чего белок экспрессируется под контролем требуемого промотора. Выделенную ДНК, кодирующую VH-область, можно превращать в ген полноразмерной тяжелой цепи путем функционального связывания ДНК, которая кодирует VH, с другой молекулой ДНК, которая кодирует константные области тяжелой цепи (CH1, CH2 и СН 3). Последовательности генов константной области тяжелой цепи известны в данной области (см., например, Kabat Е.А. и др., Sequences of ProteinsNo. 91-3242, 1991), и ДНК-фрагменты, включающие эти области, можно получать с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константная область может представлять собой константную область IgG1,IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM или IgD. Предпочтительно константную область тяжелой цепи выбирают среди IgG2-изотипов. В случае гена Fab-фрагмента тяжелой цепи ДНК, кодирующую VH, можно функ- 22024492 ционально связывать с другой молекулой ДНК, которая кодирует только константную область СН 1 тяжелой цепи. Выделенную ДНК, кодирующую VL-область, можно превращать в ген полноразмерной легкой цепи(а также в ген легкой цепи Fab-фрагмента) путем функционального связывания ДНК, кодирующей VL, с другой молекулой ДНК, которая кодирует константную область легкой цепи, т.е. CL. Последовательности человеческих генов константной области легкой цепи известны в данной области (см., например, Kabat E.A. и др., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 15-oe изд., изд-воU.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 1991), и ДНК-фрагменты,включающие эти области, можно получать с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константная область легкой цепи может представлять собой константную область каппа- или лямбда-цепи. Для создания гена scFv ДНК-фрагменты, которые кодируют VH и VL, функционально связывают с другим фрагментом, который кодирует гибкий линкер, например, который кодирует аминокислотную последовательность (Gly4 -Ser)3, в результате чего последовательности VH и VL можно экспрессировать в виде смежного одноцепочечного белка, в котором VL- и VH-области соединены гибким линкером (см.,например, Bird и др., Science 242, 1988, cc. 423-426; Huston и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 1988, cc. 5879-5883; McCafferty и др., Nature 348, 1990, cc. 552-554). Создание моноклональных антител, предлагаемых в изобретении Моноклональные антитела (МАт) можно получать с помощью различных методов, включая общепринятые методы получения моноклональных антител, например, с помощью стандартного метода гибридизации соматических клеток, описанного у Kohler и Milstein, Nature 256, 1975, с. 495. Для получения моноклональных антител можно применять многочисленные методики, например трансформацию Влимфоцитов вирусами или онкогенами. Применяемая для получения гибридом система животного происхождения представляет собой систему, основанную на использовании мышей. Создание гибридомы в мыши является хорошо известной процедурой. Протоколы иммунизации и методы выделения иммунизированных спленоцитов, предназначенных для слияния, хорошо известны в данной области. Компоненты, участвующие в слиянии (например, клетки мышиной миеломы), и процедуры слияния также хорошо известны. Химерные или гуманизированные антитела, предлагаемые в настоящем изобретении, можно создавать на основе последовательности мышиного моноклонального антитела, полученного согласно описанному выше методу. ДНК, кодирующую тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов, можно получать из представляющей интерес мышиной гибридомы и создавать так, чтобы она содержала немышиные(например, человеческие) последовательности иммуноглобулинов, с помощью стандартных методов молекулярной биологии. Например, для создания химерного антитела мышиные вариабельные области можно связывать с человеческими константными областями с использованием известных в данной области методов (см., например, US 4816567 на имя Cabilly с соавторами). Для создания гуманизированного антитела мышиные CDR-участки можно встраивать в человеческий каркасный участок с помощью известных в данной области методов (см., например, US 5225539 на имя Winter и US 5530101; 5585089: 5693762 и 6180370 на имя Queen с соавт.). В конкретном варианте осуществления изобретения антитела, предлагаемые в изобретении, представляют собой человеческие моноклональные антитела. Такие человеческие моноклональные антитела к BAFFR можно создавать с использованием трансгенных или трансхромосомных мышей, несущих фрагменты человеческой, а не мышиной иммунной системы. К этим трансгенным и трансхромосомным мышам относятся мыши, обозначенные в контексте настоящего описания как HuMAb-мыши и KMмыши соответственно, и мышей обеих указанных линий обозначают в контексте настоящего описания как "мыши, несущие человеческий Ig". Мыши линии HuMAb (HuMAb mouse, фирма Medarex, Inc.) содержат минилокусы гена человеческого иммуноглобулина, который кодирует неперегруппированные последовательности человеческой тяжелой ( и ) и легкой -цепи иммуноглобулина, в сочетании с целевыми мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы - и -цепи (см., например, Lonberg и др., Nature 368(6474), 1994, cc. 856859). Таким образом, у мыши снижена способность экспрессировать мышиный IgM или -цепь, и в ответ на иммунизацию интродуцированные трансгены человеческой тяжелой и легкой цепи подвергаются переключению класса и соматической мутации с образованием обладающего высокой аффинностью человеческого моноклонального IgGK (Lonberg N. и др., 1994, выше; обзорная статья Lonberg N., Handbook ofExperimental Pharmacology 113, 1994, cc. 49-101; Lonberg N. и Huszar D., Intern. Rev. Immunol. 13, 1995,cc. 65-93 и Harding F. и Lonberg N., Ann. N.Y. Acad. Sci. 764, 1995, cc. 536-546). Получение и применение мышей линии HuMAb и геномные модификации, которые несут такие мыши, описаны также у Taylor L. и др. Nucleic Acids Research 20, 1992, cc. 6287-6295; Chen J. и др., International Immunology 5, 1993, cc. 647-656; Tuaillon и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 1993, cc. 3720-3724; Choi и др., Nature Genetics 4,1993, cc. 117-123; Chen J. и др., ЕМВО J. 12, 1993, cc. 821-830; Tuaillon и др., J. Immunol. 152, 1994, cc. 2912-2920; Taylor L. и др., International Immunology, 1994, cc. 579-591; и Fishwild D. и др., Nature Biotechnology 14, 1996, cc. 845-851 (см. также US 5545806;5569825;5625126;5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299 и 5770429; все на имя Lonberg и Kay; US 5545807 на имя Surani с соавт.; опубликованные заявки РСТ WO 92103918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97113852, WO 98/24884 иWO 99/45962, все на имя Lonberg и Kay; и опубликованную заявку РСТ WO 01/14424 на имя Korman с соавт.). В другом варианте осуществления изобретения человеческие антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать с использованием мыши, которая несет последовательности человеческого иммуноглобулина на трансгенах и трансхромосомах, например, мыши, которая несет трансген человеческой тяжелой цепи и трансхромосому человеческой легкой цепи. Такие мыши, обозначенные в контексте настоящего описания как "KM-мыши", описаны подробно в публикации РСТ WO 02/43478 на имя Ishida с соавт. В данной области известны также и другие альтернативные системы на основе трансгенных животных, экспрессирующих гены человеческого иммуноглобулина, и их можно применять для получения антител к BAFFR, предлагаемых в изобретении. Например, можно использовать другую трансгенную систему, обозначенную как Xenomouse (фирма Abgenix, Inc.); такие мыши описаны, например, в US 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963 на имя Kucherlapati с соавт. Кроме того, в данной области известны также другие трансхромосомные системы, созданные на основе животных, для экспрессии генов человеческого иммуноглобулина, и их можно применять для получения антител к BAFFR, предлагаемых в изобретении. Например, можно использовать мышей, несущих как трансхромосому человеческой тяжелой цепи, так и трансхромосому человеческой легкой цепи, которые обозначены как "ТС-мыши"; такие мыши описаны, например, у Tomizuka и др. Proc. Natl.Acad. Sci. USA 97, 2000, cc. 722-727. Кроме того, в данной области известны коровы, несущие трансхромосомы человеческой тяжелой и легкой цепи (Kuroiwa и др., Nature Biotechnology 20, 2002, cc. 889-894) и их можно применять для получения антител к BAFFR, предлагаемых в изобретении. Человеческие рекомбинантные антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также с использованием методов фагового дисплея для скрининга библиотек генов человеческих иммуноглобулинов. В данной области разработаны такие методы фагового дисплея для выделения человеческих антителDower с соавт.; US 5969108 и 6172197 на имя McCafferty с соавт. и US 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081 на имя Griffiths с соавт.). Человеческие моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также с использованием SCID-мышей (мыши с тяжелым комбинированным иммунодефицитом), в которых восстанавливали человеческие иммуноциты с тем, чтобы при иммунизации можно было получать человеческий гуморальный иммунный ответ. Такие мыши описаны, например, в US 5476996 и 5698767 на имяWilson с соавт. Создание гибридом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела Для создания гибридом, которые продуцируют человеческие моноклональные антитела, предлагаемые в изобретении, можно выделять спленоциты и/или клетки лимфатических узлов из иммунизированных мышей и сливать с соответствующей иммортализованной линий клеток, такой как линия клеток мышиной миеломы. Образовавшиеся гибридомы можно подвергать скринингу в отношении производства специфических для антигена антител. Например, суспензии индивидуальных клеток селезеночных лимфоцитов из иммунизированных мышей можно сливать в количестве, составляющем одну шестую часть от количества клеток несекретирующейся мышиной миеломы линии P3X63-Ag8.653 (АТСС, CRL 1580) с помощью 50% ПЭГ. Клетки высевают примерно из расчета 2105/лунку в плоскодонные титрационные микропланшеты, затем инкубируют в течение 2 недель в среде для селекции, содержащей 20% фетальной сыворотки (Clone), кондиционированной среды "653", 5% оригена (фирма IGEN), 4 мМ Lглутамин, 1 мМ пируват натрия, 5 мМ HEPES, 0,055 мМ 2-меркаптоэтанол, 50 ед./мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина, 50 мкг/мл гентамицина и 1 ГАТ (фирма Sigma; ГАТ добавляют через 24 ч после слияния). Примерно через 2 недели клетки можно культивировать в среде, в которой ГАТ заменен на ГТ. Затем индивидуальные лунки можно подвергать скринингу с помощью ELISA в отношении человеческих моноклональных антител в виде IgM и IgG. После достижения интенсивного роста гибридом осуществляют мониторинг среды, как правило, через 10-14 дней. Гибридомы, секретирующие антитела,можно пересевать, вновь подвергать скринингу и, если все еще сохраняется позитивная реакция в отношении человеческого IgG, то моноклональные антитела можно субклонировать по меньшей мере дважды с использованием конечного разведения. Затем стабильные субклоны можно культивировать in vitro для получения небольших количеств антител в среде для культуры ткани с целью дальнейшей характеризации. Для очистки человеческих моноклональных антител отобранные гибридомы можно выращивать в 2-литровых вращающихся колбах с целью очистки моноклональных антител. Супернатанты можно фильтровать и концентрировать перед осуществлением аффинной хроматографии с использованием белка А-сефарозы (фирма Pharmacia, Пискатавей, шт. Нью-Джерси). Элюированный IgG можно проверять с помощью гель-электрофореза и жидкостной хроматографии высокого разрешения для гарантии чистоты. Буферный раствор можно заменять на ЗФР и концентрацию определять на основе ОП 280 с использованием коэффициента экстинкции 1,43. Моноклональные антитела можно разделять на аликвоты и хранить при -80 С. Создание трансфектом, продуцирующих моноклональные антитела Антитела, предлагаемые в изобретении, можно получать также в трансфектоме клетки-хозяина с использованием, например, комбинации методов рекомбинантной ДНК и методов генной трансфекции,которые хорошо известны в данной области (см., например, Morrison S., Science 229, 1985, с. 1202). Например, для экспрессии антител или фрагментов антител ДНК, которые кодируют частичные или полноразмерные легкие и тяжелые цепи, можно получать с помощью стандартных методов молекулярной биологии (например, с помощью ПЦР-амплификации или клонирования кДНК с использованием гибридом, которые экспрессируют представляющее интерес антитело), и ДНК можно встраивать в экспрессионные векторы таким образом, чтобы гены были функционально связаны с контролирующими транскрипцию и трансляцию последовательностями. В этом контексте подразумевается, что понятие"функционально связанный" означает, что ген антитела встраивают путем лигирования в вектор таким образом, чтобы присутствующие в векторе контролирующие транскрипцию и трансляцию последовательности выполняли свойственные им функции регуляции транскрипции и трансляции гена антитела. Выбранные экспрессионный вектор и контролирующие экспрессию последовательности должны быть совместимы с применяемой для экспрессии клеткой-хозяином. Ген легкой цепи антитела и ген тяжелой цепи антитела можно встраивать в различные векторы или, как правило, оба гена встраивают в один и тот же экспрессионный вектор. Гены антитела встраивают в экспрессионный вектор стандартными методами (например, встраивают путем лигирования комплементарных сайтов рестрикции на фрагменте гена антитела и вектора, или путем лигирования "затупленных" концов, если отсутствуют какие-либо сайты рестрикции). Вариабельные области легких и тяжелых цепей антител, предлагаемых в изобретении,можно использовать для создания полноразмерных генов антител любых изотипов путем встраивания их в экспрессионные векторы, которые уже кодируют константные области тяжелой цепи и константные области легкой цепи требуемого изотипа, таким образом, чтобы VH-область была функционально связана с СН-сегментом(ами) в векторе, а VL-область функционально связана с CL-областью в векторе. В другом или дополнительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный экспрессионный вектор может кодировать сигнальный пептид, который облегчает секрецию цепи антитела из клетки-хозяина. Ген цепи антитела можно клонировать в векторе так, чтобы сигнальный пептид был связан в рамке считывания с N-концом гена цепи антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (т.е. сигнальный пептид из белка, не относящегося к иммуноглобулинам). Помимо генов цепи антитела рекомбинантные экспрессионные векторы, предлагаемые в изобретении, несут регуляторные последовательности, которые контролируют экспрессию генов цепи антитела в клетке-хозяине. Подразумевается, что понятие "регуляторная последовательность" относится к промоторам, энхансерам и другим контролирующим экспрессию элементам (например, сигналы полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепи антитела. Указанные регуляторные последовательности описаны, например, у Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, изд-во Academic Press, San Diego, CA 1990). Специалистам в данной области должно быть очевидно, что создание экспрессионного вектора, включая выбор регуляторных последовательностей,может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяина для трансформации, требуемый уровень экспрессии белка и т.д. Регуляторные последовательности, предназначенные для экспрессии в клетках млекопитающих, включают вирусные элементы, которые обеспечивают высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры, выведенные из цитомегаловируса(CMV), обезьяньего вируса 40 (SV40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса(AdMLP и вируса полиомы. В альтернативном варианте можно использовать невирусные регуляторные последовательности, такие как промотор убикйтина или промотор Р-глобина. Кроме того, можно применять регуляторные элементы, состоящие из полученных из разных источников последовательностей,такие как промоторная система Sra, которая содержит последовательности раннего промотора SV40 и длинный концевой повтор вируса типа 1 человеческого Т-клеточного лейкоза (Takebe Y. и др., Mol. Cell.Biol. 8, 1988, cc. 466-472). Помимо генов цепи антитела и регуляторных последовательностей рекомбинантные экспрессионные векторы, предлагаемые в изобретении, могут нести дополнительные последовательности, например,последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, сайты инициации репликации) и гены селектируемых маркеров. Гены селектируемых маркеров облегчают отбор клеток-хозяев, в которые интродуцирован вектор (см., например, US4399216, 4634665 и 5179017, все на имя Axel с соавт.). Например, как правило, ген селектируемого маркера обусловливает устойчивость клетки-хозяина, в которую интродуцирован вектор, к лекарственным средствам, таким какG418, гигромицин или метотрексат. К генам селектируемых маркеров относятся ген дигидрофолатредуктазы (DHFR) (для применения в dhfr- клетках-хозяевах при селекции/амплификации в присутствии метотрексата) и ген neo (для отбора в присутствии G418). Для экспрессии легких и тяжелых цепей экспрессионным(ыми) вектором(ами), кодирующим(ими) тяжелые и легкие цепи, трансфектируют клетку-хозяина с помощью стандартных методов. Под различные формы понятия "трансфекция" подпадает широкое разнообразие методов, обычно применяемых для интродукции экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяина, например электропорация, осаждение фосфатом кальция, трансфекция с использованием ДЭАЭ диэтиламино)этилцеллюлоза)декстрана и т.п. Теоретически можно экспрессировать антитела, предлагаемые в изобретении, как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах. Считается, что следует осуществлять экспрессию в эукариотических клетках, прежде всего в клетках-хозяевах млекопитающих,поскольку указанные эукариотические клетки и, прежде всего клетки млекопитающих, с большей вероятностью, чем прокариотические клетки, могут обеспечивать сборку и секрецию имеющего правильную укладку и обладающего иммунологической активностью антитела. Установлено, что экспрессия генов антител в прокариотических хозяевах не может эффективно обеспечивать высокие уровни производства активного антитела (Boss М.А. и Wood С.R., Immunology Today 6, 1985, cc. 12-13). Клетки-хозяева млекопитающих, предназначенные для экспрессии рекомбинантных антител, предлагаемых в изобретении, представляют собой клетки яичника китайского хомячка (СНО-клетки) (включая СНО-клетки с дефицитом dhfr (dhfr-), описанные у Urlaub и Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77,1980, cc. 4216-4220, которые применяют в сочетании с селектируемым маркером DHFR, например, как описано у R.J. Kaufman и P.A. Sharp, Mol. Biol. 159, 1982, cc. 601-621, клетки миеломы линии NSO, COSклетки и SP2-клетки). В частности, для применения в сочетании с клетками миеломы NSO используют другую экспрессионную систему, представляющую собой экспрессионную систему GS-гена, как описано в WO 87/04462, WO 89/01036 и ЕР 338,841. В одном из вариантов осуществления изобретения клетки-хозяева млекопитающих, предназначенные для экспрессии рекомбинантных антител, предлагаемых в изобретении, представляют собой линии клеток млекопитающих с дефицитом экспрессии гена FUT8, например, описанные в US 6946292 B2. Когда рекомбинантные экспрессионные векторы, кодирующие гены антитела, интродуцируют в клеткихозяева млекопитающих, то антитела получают путем культивирования клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для осуществления экспрессии антитела в клетке-хозяине или секреции антитела в культуральную среду, в которой выращивают клетки-хозяева. Антитела можно выделять из культуральной среды с помощью стандартных методов очистки белков. Фармацевтические композиции Следующим объектом настоящего изобретения является композиция, например фармацевтическая композиция, содержащая одно или комбинацию моноклональных антител или их антигенсвязывающий(ие) участок(ки), предлагаемые в настоящем изобретении, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Такие композиции могут включать одно или комбинацию (например, два или большее количество различных) антител или иммуноконъюгатов или биспецифических молекул, предлагаемых в изобретении. Например, фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, может содержать комбинацию антител, которые связываются с различными эпитопами на антиген-мишени или которые обладают дополнительным видом активности. Фармацевтические композиции, предлагаемые в изобретении, можно применять также для комбинированной терапии, т.е. в сочетании с другими агентами. Например, для комбинированной терапии можно применять антитело к BAFFR, предлагаемое в настоящем изобретении, в сочетании по меньшей мере с одним другим противовоспалительным агентом или другим химиотерапевтическим средством,например цитотоксическим, противораковым или антипролиферативным средством. Примеры терапевтических средств, которые можно применять в комбинированной терапии, более подробно описаны ниже в разделе, посвященном применению антител, предлагаемых в изобретении. В контексте настоящего описания понятие "фармацевтически приемлемый носитель" включает каждый и все растворители, дисперсионные среды, материалы для нанесения покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, агенты, придающие изотоничность, и замедляющие абсорбцию агенты и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Носитель должен быть пригодным для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, путем инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения на действующее вещество, т.е. антитело, иммуноконъюгат или биспецифическую молекулу, можно наносить покрытие из материала, защищающего соединение от воздействия кислот и других факторов окружающей среды, которые могут инактивировать соединение. Фармацевтические соединения, предлагаемые в изобретении, могут включать одну или несколько фармацевтически приемлемых солей. Понятие "фармацевтически приемлемая соль" относится к соли,которая сохраняет требуемую биологическую активность родительского соединения и не вызывает никаких нежелательных токсикологических действий (см., например, Berge S.M., и др., J. Pharm. Sci. 66, 1977,cc. 1-19). Примерами таких солей являются кислотно-аддитивные соли и соли присоединения оснований. К кислотно-аддитивным солям относятся соли, образованные из нетоксичных неорганических кислот,таких как соляная, азотная, фосфорная, серная, бромисто-водородная, йодисто-водородная, фосфористая кислота и т.п., а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбо- 26024492 новые кислоты, замещенные фенилом алкановые кислоты, оксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и т.п. Соли присоединения оснований включают соли, образованные с щелочно-земельными металлами, такими как натрий, калий, магний,кальций и т.п., а также с нетоксичными органическими аминами, такими как N,N'-дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и т.п. Фармацевтическая композиция, предлагаемая в изобретении, может содержать также фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примерами фармацевтически приемлемых антиоксидантов являются водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия,метабисульфит натрия, сульфит натрия и т.п.; жирорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВГА), бутилированный гидрокситолуол (БГТ), лецитин,пропилгаллат, -токоферол и т.п.; металлхелатирующие агенты, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п. Примерами приемлемых водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении, являются вода, этанол, полиолы (такие как глицерин,пропиленгликоль, полиэтителенгликоль и т.п.) и их приемлемые смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и пригодные для инъекций сложные органические эфиры, такие как этилолеат. Требуемую текучесть можно поддерживать, например, с помощью применяемых для нанесения покрытий материалов, таких как лецитин, сохраняя требуемый размер частиц в случае дисперсий, и с помощью поверхностно-активных веществ. Указанные композиции могут содержать также адъюванты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульгаторы и диспергирующие вещества. Отсутствие микроорганизмов можно гарантировать как с помощью описанных выше процессов стерилизации, так и включением различных антибактериальных и противогрибковых средств, таких, например, как парабен, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота и т.п. Может оказаться желательным включать в композиции придающие изотоничность агенты, такие как сахара, хлорид натрия и т.п. Кроме того, можно получать инъецируемую фармацевтическую форму с пролонгированной абсорбцией, например, путем включения агентов, которые замедляют абсорбцию,таких как моностеарат алюминия и желатин. Фармацевтически приемлемые носители представляют собой стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления при необходимости стерильных инъецируемых растворов или дисперсии. Применение таких сред и агентов для фармацевтических действующих веществ известно в данной области. За исключением случая, когда любые из общепринятых сред или агентов не совместимы с действующим веществом, предусматривается их применение в фармацевтических композициях, предлагаемых в изобретении. В композиции можно включать также дополнительные действующие вещества. Терапевтические композиции, как правило, должны быть стерильными и стабильными в условиях приготовления и хранения. Композиция может иметь форму раствора, микроэмульсии, липосомы или иметь другую упорядоченную структуру, пригодную для включения лекарственного средства в высокой концентрации. Носитель может представлять собой растворитель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их приемлемые смеси. Требуемую текучесть можно поддерживать, например, с помощью применяемых для нанесения покрытий материалов, таких как лецитин, сохраняя требуемый размер частиц в случае дисперсий, и с помощью поверхностно-активных веществ. Во многих случаях можно включать придающие изотоничность агенты, такие как сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия и т.п. Кроме того, можно получать инъецируемую фармацевтическую форму с пролонгированной абсорбцией, например, путем включения агентов, которые замедляют абсорбцию,таких как моностеараты и желатин. Обзоры, касающиеся создания стабильных препаративных форма белка (например, антитела), представлены у Cleland и др., Crit. Reviews. Ther. Drug Carrier Systems 10(4), 1993, cc. 307-377 и Wei Wang, Int.J. Pharmaceutics 185, 1999, cc. 129-188. Дополнительные данные о препаративных формах антител представлены, например, у Daugherty и Mrsny, Advanced Drug Delivery Reviews 58, 2006, cc. 686-706; в US 6171586; US 4618486; US 20060286103; WO 06044908; WO 07095337; WO 04016286; Colandene и др., J.Pharm. Sci 96, 2007, cc. 1598-1608; Schulman, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 164, 2001, cc. S6-S11 и в других известных ссылках. Растворы или суспензии, применяемые для внутрикожного или подкожного введения, как правило,включают один или несколько следующих компонентов: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты; и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Значение рН можно регулировать кислотами или основаниями, такими как соляная кислота или гидроксид натрия. Такие препараты можно помещать в ампулы, одноразовые шприцы или мультидозовые флаконы, изготовлен- 27024492 ные из стекла или пластика. Стерильные предназначенные для инъекций растворы можно получать путем включения антитела,предлагаемого в изобретении, в требуемом количестве в соответствующий растворитель либо индивидуально, либо при необходимости в сочетании с указанными выше ингредиентами, с последующей стерилизацией микрофильтрацией. Как правило, дисперсии получают включением действующего вещества в стерильный наполнитель, который содержит основную дисперсионную среду и требуемые другие вышеперечисленные ингредиенты. Методы получения стерильных порошков, предназначенных для приготовления стерильных инъецируемых растворов, представляют собой вакуумную сушку и сушку вымораживанием (лиофилизация), с помощью которых получают порошок действующего вещества в сочетании с любым другим требуемым ингредиентом, из предварительно стерилизованного фильтрацией раствора. Когда антитело, предлагаемое в изобретении, применяют в терапевтически эффективном количестве, например, путем внутривенной, кожной или подкожной инъекции, то связывающий агент должен иметь форму свободного от пирогенов, приемлемого для парентерального введения водного раствора. В данной области известно получение таких пригодных для парентерального введения растворов белков,имеющих требуемые рН, изотоничность, стабильность и т.п. Предпочтительная фармацевтическая композиция, предназначенная для внутривенного, кожного или подкожного введения, должна содержать помимо связывающих агентов изотоничный наполнитель, такой как предназначенный для инъекций хлорид калия, предназначенный для инъекций раствор Рингера, предназначенную для инъекций декстрозу и предназначенный для инъекций хлорид натрия, предназначенный для инъекций лактированный раствор Рингера или другие наполнители, известные в данной области. Фармацевтическая(ие) композиция(и), предлагаемая(ые) в настоящем изобретении, может(гут) содержать также стабилизаторы, консерванты, буферы, антиоксиданты или другие добавки, известные в данной области. Количество действующего вещества, которое можно объединять с носителем для получения формы в виде однократной дозы, должно варьироваться в зависимости от индивидуума, подлежащего обработке, и конкретного пути введения. Количество действующего вещества, которое можно объединять с носителем для получения формы в виде однократной дозы, как правило, представляет собой количество композиции, которое обладает терапевтическим действием. Как правило, количество, за исключением случая, когда оно составляет 100%, представляет собой количество, составляющее от примерно 0,01 до примерно 99% действующего вещества, от 0,1 до примерно 70%) или от примерно 1 до примерно 30% действующего вещества в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Схему приема лекарственного средства регулируют для получения оптимального требуемого ответа(например, терапевтического ответа). Например, можно применять однократную болюсную инъекцию,можно вводить несколько разделенных доз в течение определенного промежутка времени или дозу можно пропорционально понижать или повышать в зависимости от конкретной терапевтической ситуации. Наиболее целесообразно приготавливать композиции для парентерального введения в виде стандартных доз лекарственного средства, что облегчает их применение и однородность доз. Под стандартной дозой лекарственного средства в контексте настоящего описания понимают физически дискретные единицы,предназначенные для введения стандартных доз индивидууму, подлежащему лечению; каждая единица содержит предварительно определенное количество действующего вещества, которое согласно расчету должно обладать желаемым терапевтическим действием, в сочетании с требуемыми фармацевтическим носителем. Специфические особенности форм в виде стандартных доз, предлагаемых в изобретении, определяются и непосредственно зависят от индивидуальных характеристик действующего вещества и конкретного терапевтического действия, которое необходимо достигать, и ограничениями, известными в области приготовления препаративных форм такого действующего вещества, связанными с лечением чувствительных индивидуумов. Предназначенные для введения антитела дозы составляют от примерно 0,0001 до 100 мг/кг и более конкретно от 0,01 до 5 мг/кг веса тела пациента. Например, дозы могут составлять 0,3, 1, 3, 5 или 10 мг/кг веса тела или могут находиться в диапазоне от 1 до 10 мг/кг. Пример схемы лечения включает введение один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые четыре недели, один раз в месяц, один раз каждые 3 месяца или один раз каждые 3-6 месяцев. Схемы приема антитела к BAFFR, предлагаемого в изобретении, могут включать введение 1 мг/кг веса тела или 3 мг/кг веса тела путем внутривенного применения, при этом антитело вводят с использованием следующих режимов применения: например, каждые 4 недели по 6 доз, затем каждые 3 месяца; каждые три недели; 3 мг/кг веса тела однократно, затем 1 мг/кг веса тела каждые 3 недели. В некоторых вариантах способа можно вводить одновременно два или большее количество моноклональных антител с различными специфичностями связывания, в этом случае доза каждого вводимого антитела находится в указанных диапазонах. Антитело, как правило, вводят многократно. Можно использовать, например, следующие интервалы между каждым введением доз: еженедельно, ежемесячно,каждые три месяца или ежегодно. Интервалы могут также быть нерегулярными в зависимости от измеренных в крови пациента уровней антитела к антигену-мишени. В некоторых вариантах способа дозу регулируют с целью достижения концентрации антитела в плазме, составляющей примерно 1-1000 мкг/мл, а в некоторых вариантах способа до достижения концентрации, составляющей примерно 25-300 мкг/мл. В альтернативном варианте антитело можно вводить в виде формы с замедленным высвобождением, в этом случае требуется меньшая частота введения. Доза и частота введения варьируются в зависимости от времени полужизни антитела в организме пациента. В целом, человеческие антитела обладают наиболее длительным временем полужизни, в порядке снижения этого показателя антитела распределяются следующим образом: гуманизированные антитела, химерные антитела и антитела из организмов кроме человека. Дозу и частоту введения можно варьировать в зависимости от того, является ли лечение профилактическим или терапевтическим. При применении в профилактических целях вводят относительно более низкие дозы с относительно редкими интервалами в течение длительного периода времени. Некоторые пациенты продолжают прием лекарственного средства в течение всей оставшейся жизни. При терапевтическом применении иногда требуется использование относительно высокой дозы с введением через относительно короткие интервалы вплоть до снижения скорости развития заболевания или прекращения его развития или до частичного или полного уменьшения интенсивности симптомов заболевания у пациента. После этого пациента можно переводить на профилактический режим применения. Фактические уровни доз действующих веществ в фармацевтических композициях, предлагаемых в настоящем изобретении, можно варьировать таким образом, чтобы получать количество действующего вещества, эффективное для достижения требуемого терапевтического ответа у конкретного пациента,при использовании конкретной композиции и пути введения, и они не должны быть токсичными для пациента. Выбранный уровень доз должен зависеть от различных фармакокинетических факторов, включая активность применяемых конкретных композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, или сложного эфира, соли или амида, пути введения, времени введения, скорости выделения конкретного применяемого соединения, продолжительности лечения, других лекарственных средств, соединений и/или материалов, применяемых в сочетании с конкретными используемыми композициями, возраста,пола, веса, состояния, общего состояния здоровья и предыдущей истории болезни подлежащего лечению пациента и аналогичных хорошо известных в области медицины факторов."Терапевтически эффективная доза" антитела к BAFFR, предлагаемого в изобретении, может приводить к уменьшению серьезности симптомов заболевания, повышению частоты и продолжительности бессимптомных периодов заболевания или к предупреждению ухудшения состояния или нетрудоспособности, связанной с поражением болезнью. Композицию, предлагаемую в настоящем изобретении, можно вводить с помощью одного или нескольких путей введения с использованием одного или нескольких различных методов, известных в данной области. Как должно быть очевидно специалисту в данной области, путь и/или механизм введения должен варьироваться в зависимости от требуемых результатов. Пути введения антител, предлагаемых в изобретении, представляют собой внутривенный, внутримышечный, внутрикожный, внутрибрюшинный,подкожный, спинальный или другие парентеральные пути введения, например, с помощью инъекции или инфузии. Под "парентеральном введением" в контексте настоящего описания понимают пути введения,отличные от энтерального и местного применения, как правило, путем инъекции, и включают (но, не ограничиваясь только ими) внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, внутриоболочечную, внутрикапсульную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную,транстрахеальную, подкожную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсульную, подпаутинную,интраспинальную, эпидуральную и надчревную инъекцию и инфузию. В альтернативном варианте антитело, предлагаемое в изобретении, можно вводить непарентеральным путем, таким как местный, эпидермальный путь применения или нанесение на слизистую оболочку,например, интраназально, орально, вагинально, ректально, подъязычно или местно. Действующие вещества можно включать в препаративную форму в сочетании с носителями, которые должны защищать соединение от быстрого высвобождения, например, в случае препаративной формы с контролируемым высвобождением, в том числе такой, как имплантаты, трансдермальные пластыри и микрокапсулированные системы введения. Можно применять биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортороэфиры и полимолочная кислота. Целый ряд методов получения таких препаративных форм запатентован или известен специалистам в данной области (см., например, Sustained and Controlled ReleaseDrug Delivery Systems, под ред. J.R. Robinson, изд-во Marcel Dekker, Inc., New York, 1978). Терапевтические композиции можно вводить с помощью известных в данной области медицинских устройств. Например, в одном из вариантов осуществления изобретения терапевтическую композицию,предлагаемую в изобретении, можно вводить с помощью безыгольного устройства для гиподермальных(подкожных) инъекций, например, с помощью устройств, описанных в US 5399163;5383851;5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556. Примерами хорошо известных имплантатов и модулей, которые можно применять в настоящем изобретении, являются описанный в US 4487603 пригодный для имплантации насос для микроинфузии дозированных медицинских препаратов с контролируемой скоростью; описанное в US 4486194 терапевтическое устройство для введения медицинских препаратов через кожу; описанный в US 4447233 насос для инфузии медицинских препаратов, предназначенный для введения