Композиция опухолеассоциированных пептидов и относящаяся к ним противораковая вакцина

КОМПОЗИЦИЯ ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫХ ПЕПТИДОВ И ОТНОСЯЩАЯСЯ К НИМ ПРОТИВОРАКОВАЯ ВАКЦИНА Изобретение относится к иммунотерапевтическим пептидам и их применению в иммунотерапии,в частности иммунотерапии рака. Настоящее изобретение раскрывает опухолеассоциированные пептидные эпитопы Т-хелперных клеток, в отдельности или в комбинации с другими опухолеассоциированными пептидами, которые служат как активные фармацевтические ингредиенты для композиций вакцины, которая стимулирует противоопухолевые иммунные ответы. В частности, композиция пептидов настоящего изобретения может быть использована в вакцинных композициях для инициации противоопухолевых иммунных ответов против колоректального рака.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ИММАТИКС БАЙОТЕКНОЛОДЖИЗ ГМБХ (DE) Настоящее изобретение относится к иммунотерапевтическим пептидам и их применению в иммунотерапии, в частности иммунотерапии рака. Настоящее изобретение раскрывает опухолеассоциированные пептидные эпитопы Т-хелперных клеток, в отдельности или в комбинации с другими опухолеассоциированными пептидами, которые служат как активные фармацевтические ингредиенты для композиций вакцины, которая стимулирует противоопухолевые иммунные ответы. В особенности композиция пептидов настоящего изобретения может быть использована в вакцинных композициях для инициации противоопухолевых иммунных ответов против колоректального рака. В соответствии с целями настоящего изобретения все цитаты описания включены в их целостности путем ссылки. Уровень техники Колоректальная карцинома. По данным Американского общества по борьбе с раком колоректальный рак (КРР) занимает третье место по частоте распространения в США, это заболевание поражает ежегодно более 175000 новых пациентов. В США, Японии, Франции, Германии, Италии, Испании и Великобритании оно поражает более 480000 пациентов. Это одна из наиболее частых причин смертности от рака в развитых странах. Исследователи предполагают, что возникновение колоректального рака является результатом взаимодействия между наследственными факторами и факторами окружающей среды. В большинстве случаев появляются аденоматозные полипы, становясь предшественниками колоректальных опухолей, хотя процесс их перехода в опухоль может занять многие годы. Первостепенный фактор риска для заболевания колоректальным раком - это возраст, в 90% случаев диагноз был поставлен в возрасте более 50 лет. Другие факторы риска заболевания колоректальным раком по данным Американского общества по борьбе с раком включают употребление алкоголя, питание с высоким содержанием жиров и/или сырого мяса и неадекватное потребление фруктов и овощей. Число новых случаев продолжает расти, в особенности на территории таких стран, как Япония, где виновником может быть внедрение западных образцов питания с избыточным потреблением жира и мяса и снижение потребления волокнистой пищи. Несмотря на это частота заболеваемости растет не так быстро, как раньше, что может быть связано с увеличением количества скринингов и удалением полипов, предотвращая, таким образом, прогрессирование заболевания и переход полипов в рак. Как и при большинстве солидных опухолей, терапия первого ряда - операция, однако только пациенты на ранней стадии могут получить от этого пользу, значительной же доле пациентов диагноз ставится лишь на поздних стадиях заболевания. В химиотерапии колоректального рака на поздних стадиях стандартом лечения являются лечебные схемы, основанные на фторурациле. Большинство данных лечебных схем представляют собой так называемые курсы лечения "FOLFOX" (вливание 5-FU/лейковорин плюс оксалиплатин) и "FOLFIRI" (иринотекан, лейковорин, болюсное и продолжительное вливание 5FU). Внедрение цитотоксических препаратов третьего поколения, таких как иринотекан и оксалиплатин,увеличило надежду на значительное улучшение эффективности, однако прогнозы до сих пор относительно безнадежные. Срок выживаемости при метастатической болезни, как правило, составляет приблизительно 20 месяцев и, в результате этого, остается высокой беспомощность медицины при данном заболевании. Недавно стало доступным новое поколение медикаментов, действующих на молекулярные мишени,таких как Авастин (бевацизумаб) и Эрбитукс (цетуксимаб), а около 40 соединений находятся на поздней стадии клинических исследований для лечения различных стадий колоректального рака. Комбинации из нескольких таких соединений повышают число потенциальных возможностей лечения, ожидаемых в будущем. Подавляющее большинство веществ находятся на 2-й фазе исследований, при этом данные соединения более часто, чем другие разрабатываемые медикаменты против колоректального рака, адресованы против EGFR (рецептор эпидермального фактора роста), что связано с тем фактом, что у 80% пациентов с колоректальным раком наблюдается повышенная экспрессия EGFR. На данный момент проводятся клинические исследования с пациентами II стадии с комбинацией химиотерапии с одобренными недавно моноклональными антителами (mAbs) (цетуксимаб+иринотекан или FOLFOX4; бевацизумаб в качестве монотерапии или вместе с FOLFOX4). Для получения статистически достоверных результатов по данным исследованиям необходимы 3-4-годичные периоды наблюдения. Моноклональные антитела (mAbs), используемые в настоящее время в онкологии, в целом имеют превосходные шансы на то, что они не будут создавать помех активной иммунотерапии. Действительно,имеются доклинические данные, предполагающие, что элиминация фактора роста эндотелия сосудовVEGF (в случае бевацизумаба) вносит положительный вклад в опосредованную ДК (дендритные клетки) активацию Т-клеток. На данный момент в около 16 исследованиях проверяется безопасность и потенциал новых иммунотерапевтических подходов для лечения КРР. Иммунотерапевтические подходы в лечении. Стимуляция иммунных ответов зависит от присутствия антигенов, распознающихся иммунной системой хозяина как чужеродные. Открытие существования опухолеассоциированных антигенов повысило сейчас возможность использования иммунной системы хозяина для вмешательства в рост опухоли. Различные механизмы объединения обеих ветвей иммунной системы, как гуморальной, так и клеточной,исследуются в настоящее время для иммунотерапии рака. Специфические элементы клеточных иммунных ответов способны к специфическому распознаванию и уничтожению опухолевых клеток. Изоляция цитотоксических Т-клеток (ЦТЛ) из популяций опухоль-инфильтрирующих клеток или из периферической крови предполагает, что такие клетки играют важную роль в естественной иммунной защите против рака (Cheever et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 1993,690:101-112; Zeh H.J., Perry-Lalley D., Dudley M.E., Rosenberg S.A., Yang J.C.; J. Immunol. 1999, 162(2):989-94; High avidity CTLs for two self-antigens demonstrate superior in vitro and in vivo antitumor efficacy). В частности, CD8-положительные Т-клетки (TCD8+), которые распознают молекулы I класса главного комплекса гистосовместимости (МНС) с пептидами, имеющими обычно 8-10 остатков, образованными из белков или дефектных рибосомных продуктов (DRIPS) (Schubert U., Anton L.C., Gibbs J., Norbury C.C., Yewdell J.W., Bennink J.R.; Rapid degradation of a large fraction of newly synthesized proteins byproteasomes; Nature 2000; 404(6779):770-774), находящихся в цитозоли, играют важную роль при этом ответе. Молекулы МНС человека называются также человеческими лейкоцитарными антигенами (HLA). Существуют два класса молекул МНС: молекулы МНС I класса, которые могут встречаться на большинстве клеток, имеющих ядро, которые презентируют пептиды, образующиеся из протеолитического расщепления эндогенных белков DRIPS и более крупных пептидов. Молекулы МНС II класса могут встречаться преимущественно на профессиональных антигенпрезентирующих клетках (АПК) и презентировать пептиды экзогенных белков, которые поглощаются АПК в период эндоцитоза и впоследствии процессируются. Комплексы из пептида и молекулы МНС класса I распознаются CD8 положительными цитотоксическими Т-лимфоцитами с соответствующим ТКР (Т-клеточный рецептор),комплексы из пептида и молекулы МНС класса II распознаются CD4-положительными хелперными Тклетками с соответствующим ТКР.CD4-положительные хелперные Т-клетки играют важную роль в управлении эффекторными функциями противоопухолевых Т-клеточных ответов, и поэтому идентификация CD4-положительных Тклеточных эпитопов, образованных из опухолеассоциированных антигенов (ТАА), может быть чрезвычайно важна для разработки фармацевтических препаратов для инициации противоопухолевых иммунных ответов (Kobayashi, Н., R. Omiya, M. Ruiz, E. Huarte, P. Sarobe, J.J. Lasarte, M. Herraiz, В. Sangro, J.naturally occurring CD4+ T-cell responses against NY-ESO-1 in cancer patients: Correlation with antibody responses. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2003, 100 (15): 8862-7); CD4+ T- клетки могут приводить к локальному повышению уровня IFN (Qin Z., Schwartzkopff J., Pradera F., Kammertoens T., Seliger B., Pircher H.,Blankenstein T.; A critical requirement of interferon gamma-mediated angiostasis for tumor rejection by CD8+T cells; J. Cancer Res; 2003, 63(14):4095-4100). На моделях млекопитающих животных, например мышах, было показано, что даже при отсутствии эффекторных клеток цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (т.е. CD8-положительных Т-лимфоцитов),CD4-положительных Т-клеток достаточно для ингибирующего проявления опухолей посредством ингибирования ангиогенеза при секреции интерферон-гамма (IFN) (Qin, Z. and Т. Blankenstein. CD4+ T-cellmediated tumour rejection involves inhibition of angiogenesis that is dependent on IFN gamma receptor expression by nonhematopoietic cells. Immunity. 2000, 12:677-686). К тому же было показано, что CD4 положительные Т-клетки, распознающие пептиды из опухолеассоциированных антигенов, презентированные молекулами HLA класса II, могут препятствовать опухолевой прогрессии посредством индукции ответов антител (Ab) (Kennedy, R.C., М.Н. Shearer, A.M. Watts, and R.K. Bright. 2003. CD4+ T lymphocytesplay a critical role in antibody production and tumor immunity against simian virus 40 large tumor antigen. Cancer Res. 2003, 63:1040-1045). В отличие от опухолеассоциированных пептидов, связывающихся с молекулами HLA класса I, до сих пор было описано лишь небольшое число лигандов класса II опухолеассоциированных антигенов (www.cancerimmunity.org, www.syfpeithi.de). Так как конститутивная экспрессия молекул HLA класса II обычно ограничена клетками иммунной системы (Mach, В., V. Steimle, E. Martinez-Soria, and W. Reith. Regulation of MHC class II genes: lessonsfrom a disease. Annu. Rev. Immunol. 1996, 14: 301-331), то возможность изоляции пептидов класса II напрямую из первичных опухолей считалась невозможной. Тем не менее, изобретателям недавно удалось идентифицировать ряд эпитопов МНС класса II напрямую из опухолей (ЕР 1642905, ЕР 1760088; Dengjel 4170). При отсутствии воспаления экспрессия молекул МНС II класса преимущественно рестриктирована по клеткам иммунной системы, в особенности профессиональным антигенпрезентирующим клеткам(АПК), например, моноцитам, образованным из моноцитов клеткам, макрофагам, дендритным клеткам. Неожиданным образом у пациентов с опухолевыми заболеваниями было обнаружено, что клетки опухолей экспрессируют молекулы МНС II класса (Dengjel J., Nastke M.D., Gouttefangeas C., Gitsioudis G.,Schoor О., Altenberend F., Muller M., Kramer B., Missiou A., Sauter M., Hennenlotter J, Wernet D., Stenzl A.,Rammensee H.G., Klingel K., Stevanovic S.; Unexpected abundance of HLA class II presented peptides in primary renal cell carcinomas; Clin Cancer Res. 2006; 12:4163-4170). Для того чтобы пептид инициировал (вызывал) клеточный иммунный ответ, он должен связываться с молекулой МНС. Этот процесс зависит от аллеля молекулы МНС и специфических полиморфизмов аминокислотной последовательности пептида. Пептиды, связывающиеся с МНС класса I, имеют обычно 8-10 аминокислотных остатков в длину и обычно содержат два консервативных остатка ("якорь") в их последовательности, которые взаимодействуют с соответствующей связывающей бороздкой молекулы МНС. Таким образом, каждый аллель МНС имеет "соединительный элемент", определяющий, какие пептиды могут специфически связываться со связывающей бороздкой (Rammensee H.G., Bachmann J., Stevanovic S. МНС ligands and peptide motifs, Landes Bioscience, USA, 1997). В зависящей от МНС I класса иммунной реакции пептиды не только должны быть в состоянии связываться с конкретными молекулами МНС I класса, экспрессируемыми опухолевыми клетками, но они также должны распознаваться Т-клетками, несущими Т-клеточные рецепторы (ТКР). Антигены, которые распознаются опухолеспецифическими Т-лимфоцитами, т.е. их эпитопами, могут быть молекулами, образованными из любого класса белков, таких как ферменты, рецепторы, факторы транскрипции и т.д. Кроме того, опухолеассоциированные антигены, например, могут быть представлены также только в опухолевых клетках, например, как продукты мутировавших генов. Другой важный класс опухолеассоциированных антигенов представлен тканеспецифическими антигенами, такими как антигены СТ ("раковый тестикул"), которые экспрессированы в различных видах опухолей и здоровой ткани семенника. Были выявлены различные опухолеассоциированные антигены. Затем, много усилий было потрачено на исследования по идентификации дополнительных опухолеассоциированных антигенов. Некоторые группы опухолеассоциированных антигенов, также именуемые в области техники как опухолеспецифические антигены, являются тканеспецифическими. Примеры включают, но не ограничиваются тирозиназой для меланомы, PSA (простата-специфический антиген) и PSMA (простата-специфический мембранный антиген) для рака простаты и хромосомными кроссоверами (транслокации), такими как bcr/abl в лимфоме. Тем не менее, многие опухолеассоциированные антигены, которые были идентифицированы,встречаются во множестве видов опухолей, и некоторые, такие как онкогенные белки и/или генысупрессоры опухоли (обзор генов-супрессоров опухоли для почечного рака дается, например, у LinehanW.M., Walther M.M., Zbar В. The genetic basis of cancer of the kidney. J. Urol. 2003 Dec. 170 (6Ptl):2163-72),которые фактически вызывают трансформационное явление, встречаются практически во всех видах опухолей. Например, нормальные клеточные белки, контролирующие рост и дифференциацию клетки,такие как р 53 (который является примером гена-супрессора опухоли), ras, c-met, myc, pRB, VHL, и HER2/neu, могут аккумулировать мутации, приводящие к повышенной экспрессии продуктов этих генов, делая их тем самым онкогенными (McCartey et al. Cancer Research 1998, 15:58, 2601-5; Disis et al. CibaFound. Symp. 1994, 187:198-211). Эти мутантные белки также могут быть мишенью опухолеспецифического иммунного ответа при многих видах рака. Иммунотерапия больных раком направлена особенно на активацию клеток иммунной системы, в особенности, т.н. цитотоксических Т-клеток (ЦТЛ, также известные как "киллерные клетки", известные также как CD8-положительные Т-клетки) против опухолевых клеток, но не против здоровой ткани. Опухолевые клетки отличаются от здоровых клеток экспрессией опухолеассоциированных белков. Молекулы HLA презентируют наружу на клеточной поверхности клеточное содержимое, таким образом, давая возможность цитотоксическим Т-клеткам отличать здоровую клетку от опухолевой. Это происходит путем расщепления всех белков внутри клетки на короткие пептиды, которые присоединяются, затем, к молекулам HLA и презентируются на клеточной поверхности (Rammensee, H.G., Falk, K., and Rotzschke,О.; Peptides naturally presented by MHC class I molecules, Annu. Rev. Immunol., 1993, 11,213-244). Пептиды, представленные на опухолевых клетках, а не или в намного меньшей степени на здоровых клетках организма, называются опухолеассоциированными пептидами (TUMAPs). Для того чтобы белки были узнаны цитотоксическими Т-лимфоцитами в качестве опухолеспецифического или ассоциированного антигена, и чтобы они могли использоваться в терапии, должны выполняться особые предварительные требования. Антиген должен быть экспрессирован преимущественно опухолевыми клетками, а не здоровыми тканями или в сравнительно малом объеме. В дальнейшем желательно, чтобы соответствующий антиген не только присутствовал в каком-либо виде опухоли, но и также имел высокую концентрацию (т.е. число копий соответствующего пептида на клетку). Опухолеспецифические и опухолеассоциированные антигены часто бывают образованы из белков, напрямую задейство-3 023928 ванных в трансформации нормальной клетки в опухолевую, в связи с функцией, например, при контроле клеточного цикла или апоптозе. В дополнение также мишени белков нисходящего каскада реакций, напрямую являющихся причиной трансформации, могут быть представлены в повышенном количестве и,таким образом, косвенно опухолеассоциированными. Такие косвенно опухолеассоциированные антигены могут также быть мишенями вакцинационного подхода. В обоих случаях необходимо присутствие эпитопов в аминокислотной последовательности антигена, поскольку такой пептид ("иммуногенный пептид"), который образован из опухолеассоциированного антигена, должен вести in vitro или in vivo к Т-клеточному ответу. В основном любой пептид, способный связываться с молекулой МНС, может выполнять функцию Т-клеточного эпитопа. Предварительным условием для индукции Т-клеточного ответа in vitro или in vivo является присутствие Т-клетки с соответствующим ТКР и отсутствие толерантности к данному конкретному эпитопу. Т-хелперные клетки играют важную роль в управлении эффекторной функцией ЦТЛ в противоопухолевом иммунитете. Эпитопы Т-хелперных клеток, инициирующие ответы Т-хелперных клеток типа ТН 1, поддерживают эффекторные функции CD8-положительных киллерных Т-клеток, которые включают цитотоксические функции, направленные против опухолевых клеток, проявляющих опухолеассоциированные пептиды/МНС-комплексы на их клеточной поверхности. Таким образом, опухолеассоциированные пептидные эпитопы Т-хелперных клеток, одни или в комбинации с другими опухолеассоциированными пептидами, могут служить в качестве активных фармацевтических ингредиентов вакцинных композиций, которые стимулируют противоопухолевые иммунные ответы. Так как оба вида ответов, зависящие от CD8 и от CD4, вносят свой вклад в противоопухолевый эффект сообща и усиливая друг друга, то идентификация и характеристика опухолеассоциированных антигенов, распознаваемых как CD8+ ЦТЛ (молекула МНС I класса), так и CD4-положительными ЦТЛ (молекула МНС II класса) являются важными при разработке противоопухолевых вакцин. Поэтому целью настоящего изобретения является обеспечение композиций пептидов, которые содержат пептиды, связывающиеся с комплексами МНС любого класса. Первые клинические испытания с использованием опухолеассоциированных пептидов были начаты в середине 1990 г. Буном (Boon) и коллегами, в основном, для показания меланома. Клинические ответы в лучших попытках достигали от 10 до 30%. О серьезных побочных эффектах или сильной аутоиммунности не сообщалось ни в одном клиническом исследовании с использованием основанной на пептидах вакцинной монотерапии. Сообщалось о слабых формах витилиго у некоторых пациентов, проходивших лечение меланома-ассоциированными пептидами. Тем не менее, прайминга одного вида ЦТЛ обычно не достаточно для устранения всех опухолевых клеток. Опухоли обладают сильной мутагенностью и, таким образом, способны быстро реагировать на атаки ЦТЛ изменением своей белковой структуры для избегания узнавания ЦТЛ. Для контратаки по механизмам уклонения опухоли от ударов для вакцинации использовались различные специфические пептиды. Таким способом по опухоли могла быть произведена одновременная атака несколькими клонами ЦТЛ, действовавшим синхронно. Так могут быть снижены шансы опухоли на ускользание от иммунного ответа. Эта гипотеза недавно получила подтверждение в клиническом исследовании по лечению пациентов с меланомой на поздней стадии. С всего лишь несколькими исключениями пациенты, имевшие по меньшей мере три различных Т-клеточных ответа, демонстрировали объективные клинические ответы или стабильность заболевания (Banchereau, J., Palucka, A.K., Dhodapkar, M., Burkeholder, S., Taquet, N.,Rolland, A., Taquet, S., Coquery, S., Wittkowski, K.M., Bhardwaj, N., Pineiro, L., Steinman, R., and Fay, J.;cell vaccine, Cancer Res., 2001, 61, 6451-6458), а также увеличение выживаемости (личные беседы с J.Banchereau), в то время как подавляющему большинству пациентов, имевшему менее трех Т-клеточных ответов, был поставлен диагноз прогрессирования заболевания. Исследование кандидатов демонстрировало похожий эффект, если пациенты, страдавшие от почечно-клеточной карциномы, проходили курс лечения с вакциной, составленной из 13 различных пептидовIMA901, ASCO meeting 2007; Poster3017). Основной задачей в разработке вакцины против опухолей является, поэтому, не только идентификация и характеристика новых опухолеассоциированных антигенов и полученных из них иммуногенных Т-хелперных эпитопов, но и комбинирование различных эпитопов для увеличения вероятности ответа на более чем один эпитоп для каждого пациента. Поэтому целью настоящего изобретения является обеспечение комбинаций аминокислотных последовательностей таких пептидов, которые обладают способностью связываться с молекулой главного комплекса гистосовместимости человека (МНС) класса I (HLA класса I) или II (HLA класса II). Дальнейшей целью настоящего изобретения является обеспечение эффективной противораковой вакцины, которая основана на комбинации этих пептидов. В настоящем изобретении изобретатели изолировали и охарактеризовали пептиды, связывающиеся с молекулами HLA класса I или II, напрямую из опухолей млекопитающих, т.е. колоректальных карцином. Настоящее изобретение обеспечивает пептиды, которые образованы из антигенов, ассоциированных с генезом опухоли, и имеют способность связываться в достаточной мере с молекулами МНС (HLA)II класса для инициации иммунного ответа человеческих лейкоцитов, в особенности лимфоцитов, в особенности Т-лимфоцитов, в особенности CD4-положительных Т-лимфоцитов, в особенности CD4 положительных Т-лимфоцитов, опосредующих иммунные ответы типа TH1. Настоящее изобретение обеспечивает также пептиды, которые образованы из антигенов, ассоциированных с генезом опухоли, и имеют способность связываться в достаточной мере с молекулами МНС(HLA) I класса для инициации иммунного ответа человеческих лейкоцитов, в особенности лимфоцитов,в особенности Т-лимфоцитов, в особенности CD8-положительных цитотоксических Т-лимфоцитов, в равной степени как и комбинации обоих, которые особенно полезны для вакцинации пациентов, страдающих от рака. В соответствии с настоящим изобретением поставленная задача решена обеспечением фармацевтической композиции, включающей по крайней мере два пептида, содержащих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 по SEQ ID NO: 7, и/или содержащих вариантную аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 80% гомологична последовательностям с SEQ ID NO: 1 по SEQ ID NO: 7, и/или полинуклеотид, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую SEQ ID NO: 1 по SEQ ID NO: 7 или вариантную аминокислотную последовательность, и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению в дальнейшем могут включать по крайней мере один дополнительный пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 по SEQ ID NO: 15,или содержащий вариантную аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 80% идентична последовательностям с SEQ ID NO: 8 по SEQ ID NO: 15, или полинуклеотид, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую SEQ ID NO: 8 по SEQ ID NO: 15 или вариантную аминокислотную последовательность. Пептиды могут иметь общую длину между 8 и 100, предпочтительно между 8 и 30,и особенно предпочтительно между 8 и 16 аминокислотами. Пептиды могут также иметь непептидные связи. Как будет описано далее, пептиды, формирующие основу настоящего изобретения, были все идентифицированы как презентируемые несущими клетками МНС I или II класса. Таким образом, эти конкретные пептиды так же, как и другие пептиды, содержащие данную последовательность (т.е. дериваты пептидов), все вызывают специфический Т-клеточный ответ, хотя уровень, до которого такой ответ будет простимулирован, может варьироваться между отдельными пептидами и отдельными пациентами. Различия, например, могут быть вызваны мутациями в пептидах. Специалист данной области полностью осведомлен о способах, которые могут использоваться для определения силы, с которой был индуцирован ответ каждым отдельным пептидом, в частности, благодаря ссылкам на приведенные здесь примеры и соответствующую литературу. Предпочтительным образом, варианты по изобретению будут индуцировать Т-клеточную перекрестную реакцию с соответствующим пептидом по изобретению. Процентная доля гомологии между аминокислотной последовательностью пептида или последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, и вариантом может быть подсчитана с помощью алгоритмов, хорошо известных из уровня техники. В настоящем изобретении термин "гомологичный" относится к степени идентичности между последовательностями двух аминокислотных последовательностей, т.е. пептидных или полипептидных последовательностей. Упомянутая ранее "гомология" определяется при сравнении двух последовательностей, сопоставляемых в оптимальных условиях со сравниваемыми последовательностями. Сравниваемые здесь аминокислотные или нуклеинокислотные последовательности могут иметь дополнение или делецию (например, разрыв и т.п.) в оптимальном противопоставлении двух последовательностей. Такая гомология последовательности может быть подсчитана с помощью создания противопоставления, например, по алгоритму ClustalW (Nucleic Acid Res., 22(22): 4673,4680 (1994). Также может быть использовано широко распространенное программное обеспечение для анализа последовательностей, в частности, Vector NTI, GENETYX или аналитические инструменты, предоставляемые общественными банками данных,такие как,например,http://restools.sdsc.edu/biotools/biotools16.html. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны и обычно представляют собой жидкости,в которых приготавливается активное терапевтическое вещество. Носитель обычно не обеспечивает состав никакой фармакологической активностью, хотя он может обеспечивать химическую и/или биологическую стабильность, характеристики высвобождения и т.п. Примеры составов рассматриваются, например, у Alfonso R. Gennaro. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD:Lippincott WilliamsWilkins, 2000 и включают, но не ограничиваются, раствором натрия хлорида, водой, буферной водой, 0,3% глицином, гиалуроновой кислотой, декстрозой и т.п. Недавно было обнаружено, что определенные жировые эмульсии, которые в течение многих лет использовались для внутри-5 023928 венного питания пациентов (людей), могут также выступать в роли наполнителя для пептидов. Два примера таких эмульсий представляют собой имеющиеся в продаже жировые эмульсии, известные как Интралипид (Intralipid) и Липофундин (Lipofundin). "Intralipid" является зарегистрированной торговой маркой фирмы Kabi Pharmacia, Швеция, для жировой эмульсии для внутривенного питания и описывается в патенте США U.S. Pat. No. 3169094. "Lipofundin" - это зарегистрированная торговая марка фирмы В.Braun Melsungen, Германия. Обе эмульсии в качестве жира содержат масло соевых бобов (100 или 200 г на 1000 мл дистиллированной воды: 10% или 20% соответственно). Фосфолипиды яичного желтка используются в качестве эмульгатора в Интралипиде (12 г/л дистиллированной воды) и лецитин яичного желтка - в Липофундине (12 г/л дистиллированной воды). Изотоничность является результатом добавления глицерола (25 г/л) как в Интралипид, так и в Липофундин. Пептиды образованы из опухолеассоциированных антигенов, в особенности опухолеассоциированных антигенов с функциями, например, в протеолизе, ангиогенезе, росте клеток, регуляции клеточного цикла, делении клеток, регуляции транскрипции, регуляции трансляции, инвазии ткани и т.д. В табл. 1 представлены пептиды и функция белка, из которого они образованы. Таблица 1 Пептиды настоящего изобретения и функция материнского белка Открытая рамка считывания 42 хромосомы 20.C20orf42 является белком фокальной адгезии, задействованным в присоединении актинового цитоскелета к плазменной мембране и в опосредованных интегрином клеточных процессах. ДефицитC20orf42 как результат мутаций с потерей функции приводит к синдрому Киндлера, аутосомальному рецессивному генодерматозу, характеризующемуся образованием волдырей на коже, прогрессивной атрофией кожи, светочувствительностью и, изредка, к канцерогенезу (Herz, С., Aumailley, M., Schulte, С.,Schlotzer-Schrehardt, U., Bruckner-Tuderman, L., and Has, C.; Kindlin-1 is a phosphoprotein involved in regulation of polarity, proliferation, and motility of epidermal keratinocytes, J. Biol Chem., 2006, 281, 3608236090). Недавно сообщалось о серьезном поражении желудочно-кишечного тракта с гемоколитом у пациента с мутацией с потерей функции (Sadler, E., Klausegger, A., Muss, W., Deinsberger, U., Pohla-Gubo,G., Laimer, M., Lanschuetzer, C., Bauer, J.W., and Hintner, H.; Novel KINDI gene mutation in Kindler syndrome with severe gastrointestinal tract involvement, Arch. Dermatol., 2006, 142, 1619-1624). В контексте раковых заболеваний C20orf42 описывался в исследованиях, занимающихся изучением экспрессии генов в окружении, имеющем отношение к раку. Как было обнаружено, он был гиперэкс-6 023928 прессирован в 70% случаев рака толстой кишки и 60% случаев рака легких (n=10). Нормальная тканевая экспрессия при нозерн-блоттинге (Northern Blot) была ограничена нейромышечными тканями (Weinstein,E.J., Bourner, M., Head, R., Zakeri, H., Bauer, С., and Mazzarella, R.; URP1: a member of a novel family of PHcarcinomas, Biochim. Biophys. Acta, 2003, 1637, 207-216). Кроме того, C20orf42 был идентифицирован как ген, участвующий в TGFопосредованной клеточной миграции и опухолевой инвазии (Kloeker, S., Major, M.B., Calderwood, D.A., Ginsberg, M.H., Jones, D.A., and Beckerle, M.C.; The Kindler syndrome protein isNOX1 является чувствительным к факторам роста ферментом, который катализирует образование реактивных форм кислорода, высшего оксида (О 2-) и перекиси водорода (H2O2). Его экспрессия была первоначально выявлена в толстой кишке, простате, матке и пролиферирующих васкулярных гладкомышечных клетках (Sun, Y.А. et al. Cell transformation by the superoxide-generating oxidase Moxl. Nature 1999,401, 79-82). Его экспрессия связана с рядом биологических реакций, включая клеточную пролиферацию,ангиогенез и активацию клеточных сигнальных путей (Harper, R.W., Xu, С., Soucek, K., Setiadi, H. andNOX1 высокоэкспрессирован в толстой кишке, но его функция в кишечной физиологии или патологии до сих пор плохо изучена. В нормальных тканях экспрессия NOX1 была низкой в подвздошной кишке, средней в восходящей ободочной кишке и высокой в нисходящей ободочной кишке. Статистических различий по экспрессии NOX1 не наблюдалось между пробами, взятыми из аденом, хорошо или плохо дифференцированных аденокарцином толстой кишки. NOX1 был высокоэкспрессирован в эпителиальных клетках толстой кишки, как в криптах, так и на люминальной поверхности. В заключение,NOX1 является ферментом, который конститутивно экспрессирован в эпителии толстой кишки и не ассоциирован напрямую с генезом опухоли (Szanto, I. et al. Expression of NOX1, a superoxide-generatingNADPH oxidase, in colon cancer and inflammatory bowel disease. J. Pathol. 2005, 207, 164-176). Иммуногистохимия показала, что NOX1 был конститутивно экспрессирован в поверхности слизистых клеток. Аденомы и хорошо дифференцированные аденокарциномы повышали уровень экспрессииNOX1. Ядерный фактор (NF)-kappaB был преимущественно активирован в клетках аденомы и аденокарциномы, экспрессирующих в избытке NOX1, приводя к предположению, что NOX1 может стимулировать NF-карраВ-зависимые антиапоптотические каскады реакций в опухолях толстой кишки (Fukuyama,M. et al. Overexpression of a novel superoxide-producing enzyme, NADPH oxidase 1, in adenoma and well differentiated adenocarcinoma of the human colon. Cancer Lett. 2005, 221, 97-104). Сигнальные реакции с Wnt3a/beta-катенином, как было описано, индуцируют экспрессию NOX1Biol Chem. 2002, 277, 15393-15399). Недавно предполагалось, что реактивные формы кислорода индуцируют эндотелиальный апоптоз,который впоследствии индуцирует экспрессию различных адгезивных молекул для опухолевых клеток. Это указывает на то, что при остановке выделения ROS (активные формы кислорода) препятствование рецидиву опухоли на отдаленных участках может быть обоснованным (Ten, K.M., van der Wal, J.B., Sluiter, W., Hofland, L.J., Jeekel, J., Sonneveld, P., and van Eijck, C.H.; The role of superoxide anions in the development of distant tumour recurrence, 2006, Br.J Cancer). Орнитин-декарбоксилаза 1 (ODC1).ODC1 - это ограничивающий количество фермент при реакциях биосинтеза полиаминов, который катализирует орнитин в путресцин. Уровень активности фермента варьируется в зависимости от способствующих росту стимулов и проявляет высокую интенсивность обмена веществ по сравнению с другими белками млекопитающих. Метаболизм полиаминов является неотъемлемым компонентом механизма канцерогенеза в эпителиальных тканях. Увеличения ODC1 часто ассоциируются с началом роста нормальных клеток и с продолжительным ростом опухолевых клеток. Ингибиторы ODC1 подавляют образование опухоли в экспериментальных моделях канцерогенеза мочевого пузыря, груди, толстой кишки и кожи. Гиперэкспрессия активности ODC1 - это хорошо известная черта многих видов рака, и ODC1 считался протоонкогеномtransformation. Nature 1992, 360, 355-358). Мутации в линиях гоноцитов в гене аденоматозного полипоза толстой кишки (АРС) являются одной из наиболее явно выраженных наследственных предрасположенностей к раку толстой кишки. Мутации АРС вызывают значительное увеличение уровней свободного -катенина, который перемещается в ядро, где формирует комплекс с членами семейства лимфоидно-усиливающих факторовc-myc является одним из генов-мишеней Tcf (Не, Т.С. et al. Identification of c-MYC as a target of the APCpathway Science 281, 1509-1512 (1998). c-Myc РНК и белок гиперэкспрессированы как на ранних, так и на поздних стадиях онкогенеза колоректального рака). ODC является геном-мишенью с-Мус. Потеря функции АРС приводит к увеличению количества ODC1 (Gemer, E.W. and Meyskens, F.L.,Jr., Polyamines and cancer: old molecules, new understanding, Nat. Rev. Cancer, 2004, 4, 781-792), и гиперэкспрессия наблюдается часто при колоректальной карциноме (Hu, Н.Y. et al. Ornithine decarboxylaseODC1 обладает проангиогенными свойствами, действуя в качестве супрессора эндостатина (Nemoto, Т., Hori, H., Yoshimoto, М., Seyama, Y.Kubota, S. Overexpression of ornithine decarboxylase enhancesendothelial proliferation by suppressing endostatin expression. Blood 2002, 99, 1478-1481). Инфекция клеточной линии НТ-29 КРР аденовирусом, кодирующим антисмысловую РНК дляODC1 и S-аденосилметионин декарбоксилазу (другой важный фермент при реакциях биосинтеза полиаминов), приводит к снижению уровня CCND1 и блокировке клеточного цикла. Более того, ядерная транслокация бета-катенина была также ингибирована (Gong, L., Jiang, С., Zhang, В., Hu, H., Wang, W.,and Liu, X.; Adenovirus-mediated Expression of Both Antisense Ornithine Decarboxylase and Sadenosylmethionine Decarboxylase Induces G(l) Arrest in HT-29 Cells, J. Biochem. Mol. Biol, 2006, 39, 730736). Аденовирус индуцировал также регрессию опухоли уже сформировавшихся опухолей у "голых" мышей (Zhang, В., Liu, X.X., Zhang, Y., Jiang, C.Y., Hu, H.Y., Gong, L., Liu, M., and Teng, Q.S.; Polyaminevitro and in vivo, 2006, J. Gene Med, 8, 980-989). Специфическим и необратимо действующим ингибитором ODC1 является 2-дифтормегилорнитин(DMFO, Eflornithine (Sanofi- Aventis. Он применяется для лечения сонной болезни (вызываемой трипаносомами) и является активным ингредиентом крема для удаления волос "Vaniga". Что касается раковых заболеваний, DMFO широко использовался в преклинических моделях и проявил многообещающие антиопухолевые эффекты при снижении уровней полиамина (Gerner, E.W. andMeyskens, F.L., Jr.; Polyamines and cancer: old molecules, new understanding, Wat. Rev. Cancer, 2004, 4, 781792). Клинические исследования проводились для нескольких видов рака, и некоторые реализуются сейчас для КРР. Однако данные исследования представляют собой, в основном, комбинированные подходы,проводящиеся в профилактических целях для пациентов, особенно восприимчивых к КРР (аденоматозные полипы). Иммуногенный ODC-пептид ODC-001 был идентифицирован ранее (М. Diehl, PhD Thesis, University of Tubingen, 1998). Ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA).PCNA был обнаружен в ядре и является кофактором ДНК-полимеразы дельта. Кодируемый белок выступает в качестве гомотримера и помогает увеличить процессивность синтеза ведущей нити во время репликации ДНК. Поэтому он экспрессирован во всех пролиферирующих клетках, в особенности опухолевых клетках, и используется в качестве маркера для детекции пролиферации. Индексы пролиферации в неопластической и смежной нормальной слизистой оболочке, как установлено при иммуногистохимическом анализе PCNA, на протяжении долгого времени известны как независимые прогностические факторы рецидива и низкой выживаемости пациентов с колоректальным раком (al-Sheneber, I.F., Shibata, H.R., Sampalis, J., and Jothy, S.; Prognostic significance of proliferating cellTOP2A и ТОР 2 В кодируют изоформы ДНК-топоизомеразы, фермента, который контролирует и меняет топологическое состояние ДНК во время транскрипции. Данный ядерный фермент задействован в таких процессах, как конденсация хромосом, сепарация хроматид и снятие торсионного напряжения,которое возникает во время транскрипции и репликации ДНК. Он катализирует временный разрыв и воссоединение двух нитей дуплекса ДНК, который позволяет нитям пройти сквозь друг друга, меняя тем самым топологию ДНК. Две изоформы данного фермента существуют, как предполагается, как продукты явления дупликации гена. Ген, кодирующий альфа-форму, локализован в хромосоме 17, а бета-ген локализован в хромосоме 3. ТОР 2 А является мишенью для нескольких противораковых агентов, а ряд мутаций в этом гене был ассоциирован с развитием резистентности к лекарственным средствам. Ген ТОР 2 А расположен смежно с онкогеном HER-2, наиболее часто амплифицируемым онкогеном при раке груди, на хромосомной локализации 17q12-q21, и либо амплифицирован, либо делетирован, с одинаковой частотой, в почти 90% случаев первичных опухолей груди с амплификацией HER-2common than anticipated, Cytopathology, 14, 309-313). Более того, об амплификациях ТОР 2 А сообщалось и в связи с другими видами рака. Недавние экспериментальные, а также многочисленные, крупные, мультицентровые клинические исследования позволяют сделать предположение, что амплификация (и/или делеция) ТОР 2 А может сказываться как в чувствительности, так и резистентности к используемым обычно цитотоксическим лекарственным препаратам, т.е. ингибиторам топоизомеразы-II (антрациклины и т.д. Kellner, U., Sehested, M., Jensen, P.B., Gieseler, F., and Rudolph, P.; Culprit and victim-DNA topoisomerase II, Lancet Oncol., 2002, 3, 235-243), в зависимости от специфического генетического дефекта на локусе ТОР 2 А (Jarvinen, ТА and Liu, ET; Simultaneous amplification of HER-2 (ERBB2) and topoisomerase IIalpha (TOP2A) genes-molecular basis for combination chemotherapy in cancer, Curr.Cancer Drug Targets.,2006, 6, 579-602). Без ТОР 2 А невозможны репликация ДНК и деление клетки. Поэтому он стал основной мишенью многих лечебных схем при лечении опухолей, хотя точный механизм уничтожения клеток остается неясным (Kellner, U., Sehested, M., Jensen, P.B., Gieseler, F., and Rudolph, P.; Culprit and victim - DNA topoisomerase II, Lancet Oncol., 2002, 3, 235-243). Успех данного подхода ограничивается возникновением спонтанной резистентности, и индуцированное медикаментами повреждение ДНК может увеличить злокачественность. Внимание исследований рака не было в такой степени сконцентрировано на ТОР 2 В, втором потенциальном белковом источнике для ТОР-001, потому что он находится в хромосомном регионе (3 р 24),известном по частой амплификации при опухолях. Однако ТОР 2 В по первичной структуре сходен с ТОР 2 А и имеет практически идентичные каталитические свойства (Leontiou, С., Lightowlers, R., Lakey,J.H., and Austin, C.A.; Kinetic analysis of human topoisomerase Ilalpha and beta DNA binding by surface plasmon resonance, FEBS Lett., 2003, 554, 206-210). В другом исследовании было показано, что обе изоформы могут заменять друг друга (Sakaguchi, A. and Kikuchi, A.; Functional compatibility between isoform alphaand beta of type II DNA topoisomerase, J. Cell Sci., 2004, 117, 1047-1054). В настоящем изобретении изобретатели обеспечивают неопровержимую очевидность того, что опухолеассоциированные пептиды, в достаточной мере связывающиеся с молекулами HLA I класса, способны вызывать иммунные ответы, опосредованные CD8-положительными цитотоксическими Тлимфоцитами человека, демонстрируя также, что заявленные пептиды пригодны для инициации ответов человеческой иммунной системы против выбранных пептидов пептидомы опухолевых клеток. Аналогично было обнаружено, что опухолеассоциированные пептиды, в достаточной мере связывающиеся с молекулами HLA II класса, в особенности с такими аллелями HLA II класса, которые генетически закодированы локусом HLA DR человеческого генома, способны вызывать иммунные ответы,опосредованные CD4-положительными Т-клетками человека. CD4-положительные Т-клетки были изолированы из периферической крови человека, демонстрируя, что заявленные пептиды пригодны для инициации Т-клеточных ответов человеческой иммунной системы против выбранных пептидов пептидомы опухолевых клеток. Как поясняется далее на примере с пептидом из TGFBI-004, этот связывающийся с HLA-DR опухолеассоциированный пептид, как было обнаружено, распознается CD4 положительными Т-клетками. Так как пептиды могут быть синтезированы химическим путем и могут быть использованы в качестве активных фармацевтических ингредиентов в фармацевтических препаратах, то пептиды, обеспечиваемые настоящим изобретением, могут быть использованы для иммунотерапии, предпочтительно для иммунотерапии рака. В другом аспекте фармацевтическая композиция в дальнейшем включает по крайней мере один дополнительный пептид, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 по SEQ ID NO: 15, или содержащий вариантную аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 80% гомологична последовательностям с SEQ ID NO: 8 по SEQID NO: 15 или вариантную аминокислотную последовательность. Пептиды с SEQ ID NO: 8 по SEQ IDNO: 13 и 15 являются иммуногенными пептидами, идентифицированными ранее, и связываются с молекулами МНС I класса и МНС II класса (см. табл. 2). Было показано, что данные пептиды вызывают Т-клеточные ответы in vivo у пациентов, страдающих от почечно-клеточной карциномы (ПКК) (Н. Singh-Jasuja, S. Walter, T. Weinschenk, A. Mayer, P.Y.Beck, A. Mayer, S. Walter, H. Singh, J. Frisch, C.G. Stief; An open label study to evaluate the safety and immunogenicity of the peptide based cancer vaccine IMA901, ASCO meeting 2007; Poster3017). Так как материнские белки гиперэкспрессированы не только в ПКК, но и также в КРР и других видах рака, эти пеп-9 023928 тиды полезны также в вакцинах для лечения опухолей других видов, в частности в вакцинах против КРР. Таблица 2 Дополнительные иммуногенные пептиды, полезные для композиции по изобретению Карциномоэмбриональная, родственная антигену молекула клеточной адгезии 5. Карциномоэмбриональный антиген (СЕА=СЕАСАМ 5), 180 кДа, является обильно гликозилированным мембранным белком, состоящим из трех С 2 Ig-подобных повторяющихся звеньев, примыкающих кN-концевому Ig V-подобному участку и С-концевому участку, который включает участок сцепления гликофосфатидилинозитола (Hegde, P., Qi, R., Gaspard, R., Abernathy, K., Dharap, S., Earle-Hughes, J., Gay,C., Nwokekeh, N.U., Chen, T., Saeed, Al, Sharov, V., Lee, N.H., Yeatman, T.J., and Quackenbush, J.; Identification of tumour markers in models of human colorectal cancer using a 19,200-element complementary DNAmicroarray, Cancer Res., 2001, 61, 7792-7797). Являясь онкофетальным антигеном, СЕА экспрессируется во время эмбрионального развития, но и также, на низком уровне, в желудочно-кишечном эпителии взрослых. Однако СЕА гиперэкспрессирован в высокой степени в опухолях человека, включая 90% случаев желудочно-кишечного, колоректального рака и рака поджелудочной железы, 70% клеток немелкоклеточного рака легких и 50% случаев рака груди (Thompson, J.A., Grunert, F., and Zimmermann, W.; Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives, J. Clin Lab Anal, 5, 344-366, 2005). Из-за своего высокого уровня экспрессии в опухолевых клетках и секреции в сыворотку СЕА широко использовался в качестве опухолевого маркера (Sikorska, H., Shuster, J., and Gold, P.; Clinical applications of carcinoembryonic antigen, Cancer Detect.Prev., 12, 321-355, 1988) и является стандартным сывороточным маркером для мониторинга колоректального рака (Locker, G.Y., Hamilton, S., Harris, J., Jessup, J.M., Kemeny, N., Macdonald, J.S., Somerfield,M.R., Hayes, D.F., and Bast, R.C., Jr.; ASCO 2006 update of recommendations for the use of tumour markers ingastrointestinal cancer, J. Clin Oncol, 24, 5313-5327, 2006). Несмотря на гиперэкспрессию СЕА в опухолевых клетках, раковые пациенты обычно не дают иммунного ответа на данный антиген (Orefice, S, Fossati, G, Pietrojusti, E, and Bonfanti, G; Delayed cutaneoushypersensitivity reaction to carcinoembryonic antigen in cancer patients, Tumouri, 1982, 68, 473-475). Иммунная система обычно становится толерантной к СЕА, потому что он в нормальном случае экспрессирован в организме на низком уровне. Однако в сериях клинических исследований вакцин была продемонстрирована иммуногенность СЕА (Sarobe, P., Huarte, E., Lasarte, J.J., and Borras-Cuesta, F.; Carcinoembryonicantigen as a target to induce anti-tumour immune responses, Curr. Cancer Drug Targets., 2004, 4, 443-454), в особенности при колоректальном раке (КРР) (Mosolits, S., Ullenhag, G., and Mellstedt, H.; Therapeutic vaccination in patients with gastrointestinal malignancies. A review of immunological and clinical results,Ann.Oncol., 2005, 16, 847-862), и СЕА является опухолеассоциированным антигеном (ТАА) с обширным количеством вакцин, протестированных на данном виде опухоли (von Mehren, M.; Colorectal cancer vaccines: what we know and what we don't yet know, Semin. Oncol., 2005, 32, 76-84). Несколько цитотоксических и хелперных Т-клеточных эпитопов были описаны для СЕА (Crosti, M.,Longhi, R., Consogno, G., Melloni, G., Zannini, P., and Protti, M.P.; Identification of novel subdominant epitopes on the carcinoembryonic antigen recognized by CD4+ T-cells of lung cancer patients, J. Immunol., 2006,176, 5093-5099; Novellino, L., Castelli, C., and Parmiani, G.; A listing of human tumour antigens recognized bypeptide from carcinoembryonic antigen, Clin Cancer Res., 2004, 10, 2860-2867), позволяющих проведение ряда основанных на пептидах клинических исследований вакцин против КРР (Babatz, J., Rollig, С., Lobel,В., Folprecht, G., Haack, M., Gunther, H., Kohne, C.H., Ehninger, G., Schmitz, M., and Bornhauser, M.; Induction of cellular immune responses against carcinoembryonic antigen in patients with metastatic tumours afterClinical outcomes of 18 patients with metastatic gastrointestinal or lung adenocarcinomas, Int. J. Oncol., 2004,24, 909-917; Weihrauch, M.R., Ansen, S., Jurkiewicz, E., Geisen, C., Xia, Z., Anderson, K.S., Gracien, E.,Schmidt, M., Wittig, B., Diehl, V., Wolf, J., Bohlen, H., and Nadler, L.M.; Phase I/II combined chemoimmunotherapy with carcinoembryonic antigen-derived HLA-A2-restricted CAP-1 peptide and irinotecan, 5fluorouracil, and leucovorin in patients with primary metastatic colorectal cancer, Clin Cancer Res., 2005, 11,5993-6001). Данные и другие клинические исследования на данный момент продемонстрировали безопасность вакцинаций с СЕА и доказательства для индукции иммунного ответа против данного антигена(von Mehren, M; Colorectal cancer vaccines: what we know and what we don't yet know, Semin.Oncol., 2005,32, 76-84). Вариант СЕА-006 был опубликован ранее (Ruiz, M., Kobayashi, Н., Lasarte, J.J., Prieto, J., BorrasCuesta, F., Celis, E., and Sarobe, P.; Identification and characterization of a T-helper peptide from carcinoembryonic antigen, Clin Cancer Res., 2004, 10, 2860-2867). CEA-005 является мутантом с единственной аминокислотной заменой, о котором сообщалось, что он преодолевает центральную иммунную толерантность (Zaremba, S., Barzaga, E., Zhu, M., Soares, N., Tsang, K.Y., and Schlom, J.; Identification of an enhancerTGFBI был первым геном, идентифицированным в качестве TGF-бета-индуцированного, в клеточной линии человеческой аденокарциномы легких. Он кодирует секретируемый внеклеточный матричный белок, который, как предполагается, задействован в присоединении клеток и формировании внеклеточной матрицы. Как было показано, TGFBI находится среди генов с наиболее значительно повышенным уровнем при колоректальном раке, и он также экспрессирован на высоком уровне в аденомах. Результаты количественной ПЦР демонстрируют сильное повышение, как в неочищенных опухолях, так и очищенных эпителиальных клетках опухоли. Соответственно проведенные in situ эксперименты по гибридизации показали, что TGFBI экспрессирован во многих видах клеток, как в стромальных, так и эпителиальных компартментах (Buckhaults, P., Rago, С., St, C.B., Romans, K.E., Saha, S., Zhang, L., Vogelstein, B., and Kinzler,K.W.; Secreted and cell surface genes expressed in benign and malignant colorectal tumours, Cancer Res., 2001,61, 6996-7001). При мега-анализе исследований, изучающих экспрессию генов при колоректальном раке, было установлено, что TGFBI является одним из всего девяти генов, которые были описаны как содержащиеся многократно в повышенном количестве (4 исследования для TGFBI) (Shih, W., Chetty, R., and Tsao, M.S.;Expression profiling by microarrays in colorectal cancer, Oncol.Rep., 2005, 13, 517-524). В человеческих тканях поджелудочной железы наблюдалось повышение уровня TGFBI мРНК в 32,4 раза при раке поджелудочной железы в сравнении с нормальными контрольными тканями. Гибридизационный анализ in situ показывает, что TGFBI mPPIK был экспрессирован, в основном, в раковых клетках внутри опухолевой массы поджелудочной железы (Schneider, D., Kleeff, J., Berberat, P.O., Zhu, Z.,Korc, M., Friess, H., and Buchler, M.W.; Induction and expression of betaig-h3 in pancreatic cancer cells, Biochim.Biophys.Acta, 2002, 1588, 1-6). В модели in vitro было установлено, что TGFBI является геном, способствующим ангиогенезу. К тому же резко повышенный уровень экспрессии TGFBI был обнаружен в нескольких видах опухолей. Антисмысловые олигонуклеотиды к TGFBI блокировали как экспрессию генов, так и образование эндотелиальных трубок in vitro, позволяя предположить, что TGFBI может играть ведущую роль во взаимодействиях в эндотелиальной клеточной матрице (Aitkenhead, M., Wang, S.J., Nakatsu, M.N., Mestas, J.,- 11023928Heard, C., and Hughes, C.C.; Identification of endothelial cell genes expressed in an in vitro model of angiogenesis: induction of ESM-1, (beta)ig-h3, and NrCAM, Microvasc. Res., 2002, 63, 159-171). Муцин-1 (MUC1). Муцины - это высокомолекулярные эпителиальные гликопротеины с высоким содержанием кластерных олигосахаридов, соединенных о-гликозидной связью с пептидами тандемного повтора, богатыми треонином, серином и пролином. Существуют два класса муцинов, различающихся по структуре и функциям: трансмембранные муцины, к которым относится MUC1, и секретируемые гелеобразующие муцины. Муцины рака толстой кишки имеют различия в углеводных структурах, которые исследуются как диагностические и прогностические маркеры, а также как мишени для противораковых вакцин. Внеклеточный домен белка MUC1 образован из высококонсервативных повторов 20 аминокислот,фактическое число варьируется между 25 и 100 в зависимости от аллеля. Каждый тандемный повтор содержит пять потенциальных сайтов гликозилирования, а между дублетами треонинов и серинов находится иммунодоминантный участок, содержащий эпитопы, распознаваемые различными антителами анти-MUC1 (Taylor-Papadimitriou, J., Burchell, J., Miles, D.W., and Dalziel, M.; MUC1 and cancer, Biochim.Biophys. Acta, 1999, 1455, 301-313). В сравнении с большинством других эпителиев MUC1 толстого кишечника более сильно гликозилирован, тем самым маскируя белок MUC1 от иммуногистохимического окрашивания MUC1 специфическими антителами. В колоректальных аденокарциномах MUC1 менее гликозилирован, позволяя осуществление иммунодетекции. Аберрантно гликозилированный MUC1 предоставляет новые связующие способности и может одновременно опосредовать и блокировать связывание с адгезивными молекулами с некоторой молекулярной специфичностью, тем самым играя двойственную роль в метастатическом распространении опухолевых клеток (McDermott, K.M., Crocker, P.R., Harris, A., Burdick, M.D., Hinoda, Y., Hayashi, T., Imai, K.,and Hollingsworth, M.A.; Overexpression of MUC1 reconfigures the binding properties of tumor cells, Int. J.Cancer, 2001, 94, 783-791). Как было установлено иммунологическим путем MUC1 имеет повышенный уровень при экспрессии при раке толстой кишки, что соотносится с худшим прогнозом (Byrd, J.C. and Bresalier, R.S.; Mucinsand mucin binding proteins in colorectal cancer, Cancer Metastasis Rev., 2004, 23, 77-99), указывая на то, что повышенный уровень MUC1 может быть вовлечен в прогрессирование КРР. Рак толстой кишки с метастазами экспрессирует MUC1 более сильно, чем рак без метастазов (Nakamori, S., Ota, D.M., Cleary, K.R.,Shirotani, K, and Irimura, T; MUC1 mucin expression as a marker of progression and metastasis of human colorectal carcinoma, Gastroenterology, 1994, 106, 353-361), и окрашивание MUC1 было положительным при всех видах колоректального рака с поражением печени в рамках одного исследования (Matsuda, K., Masaki, T., Watanabe, T., Kitayama, J., Nagawa, H., Muto, T., and Ajioka, Y.; Clinical significance of MUC1 andMUC2 mucin and p53 protein expression in colorectal carcinoma, Jpn. J. Clin Oncol., 2000, 30, 89-94). Во время недавнего исследования у 462 пациентов с колоректальным раком было обнаружено, что экспрессияMUC1 является независимым прогностическим маркером плохого прогноза (Duncan, T.J., Watson, N.F.,Al-Attar, А.Н., Scholefield, J.H., and Durrant, L.G.; The role of MUC1 and MUC3 in the biology and prognosisof colorectal cancer, World J. Surg. Oncol, 2007, 5, 31). Существует патофизиологическая значимость циркулирующих антител анти-MUC1 при КРР: антитела анти-MUC1 были обнаружены у 5 из 31 (16,1%) здоровых субъектов и у 27 из 56 (48,2%) пациентов с колоректальным раком (Nakamura, H., Hinoda, Y., Nakagawa, N., Makiguchi, Y., Itoh, F., Endo, T., andGastroenterol., 1998, 33, 354-361). Помимо своей роли в качестве мишени для антител MUC1 является также хорошо известной мишенью для цитотоксических Т-клеток. В некоторых сообщениях демонстрируется, что цитотоксические нерестриктированные по МНС Т-клетки из опухолей яичника, груди, поджелудочной железы и множественной миеломы могут распознавать эпитопы центральной части белка MUC1, находящейся в тандемном повторе (Apostolopoulos, V. and McKenzie, I.F.; Cellular mucins: targets for immunotherapy, Crit Rev.MUC1 from a multiple myeloma patient, J. Immunol., 1994, 153, 2102-2109; Noto, H., Takahashi, T., Makiguchi, Y., Hayashi, T., Hinoda, Y., and Imai, K.; Cytotoxic T lymphocytes derived from bone marrow mononuclear cells of multiple myeloma patients recognize an underglycosylated form of MUC1 mucin, Int. Immunol.,1997, 9, 791-798). Однако были также идентифицированы рестриктированные по HLA-A02 T-клеточные эпитопы, образованные из белка MUC1 (Apostolopoulos, V., Karanikas, V., Haurum, J.S., and McKenzie,I.F.; Induction of HLA-A2-restricted CTLs to the mucin 1 human breast cancer antigen, J. Immunol., 1997, 159,5211-5218; Brossart, P., Heinrich, K.S., Stuhler, G., Behnke, L., Reichardt, V.L., Stevanovic, S., Muhm, A.,- 12023928the MUC1 tumor antigen for broadly applicable vaccine therapies, Blood, 1999, 93, 4309-4317). Одним из этих пептидов является MUC-001. Он образован из участка тандемного повтора белка MUC1. Индукция ответов цитотоксических Т-лимфоцитов in vivo после вакцинаций пациентов с распространенным раком груди или яичника дендритными клетками с введенным импульсным методом пептидом, используя пептидыMUC1, была успешной (Brossart, P., Wirths, S., Stuhler, G., Reichardt, V.L., Kanz, L., and Brugger, W.; Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses in vivo after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells,Blood, 2000, 96, 3102-3108; Wierecky, J., Mueller, M., and Brossart, P.; Dendritic cell-based cancer immunotherapy targeting MUC-1, Cancer Immunol. Immunother., 2005 Apr. 28: 288-94). Более того, такие вакцинации успешно индуцировали клинические ответы у пациентов с почечно-клеточной карциномой (Wierecky, J., Muller, M.R., Wirths, S., Halder-Oehler, E., Dorfel, D., Schmidt, S.M., Hantschel, M., Brugger, W.,Schroder, S., Horger, M.S., Kanz, L., and Brossart, P.; Immunologic and clinical responses after vaccinationswith peptide-pulsed dendritic cells in metastatic renal cancer patients, Cancer Res., 2006, 66, 5910-5918). Повышенный уровень иммунореактивного MUC1 при колоректальном раке в большинстве случаев не основан на гиперэкспрессии мРНК, но скорее вызван его пониженным гликозилированием, что разоблачает эпитопы для распознавания антителами, в особенности на участке тандемного повтора MUC1. Данная дегликозиляция обеспечивает, в то же самое время, возможность для генерирования Т-клеточных эпиотопов при измененном процессинге антигенов в опухолевых клетках, чему в нормальных клетках препятствует гликозилирование. Данный механизм может объяснить исключительные черты MUC-001 в качестве опухолеассоциированного Т-клеточного эпитопа, несмотря на отсутствие сильной гиперэкспрессии мРНК. Некоторая очевидность того, что изменения в гликозилировании могут действительно повлиять на процессинг антигенов, возникает из недавнего наблюдения, что измененное гликозилирование MUC1 при колоректальном раке может быть действительно обнаружено антигенпрезентирующими клетками с помощью рецептора, специфически распознающего опухолевые гликоформы (Saeland, E., vanMGL expressed by dendritic cells detects glycan changes on MUC1 in colon carcinoma, Cancer Immunol. Immunother., 2007, 56(8): 1225-36). Специфическое поглощение и процессинг опухолевых гликоформ антигенпрезентирующими клетками может также объяснить тот факт, что MUC-001-специфические Т-клетки наблюдались в естественных условиях (без иммунизации) у пациентов с раком груди (Rentzsch, С., Kayser, S., Stumm, S., Watermann, I., Walter, S., Stevanovic, S., Wallwiener, D., and Guckel, B.; Evaluation of preexistent immunity in patients with primary breast cancer: molecular and cellular assays to quantify antigenspecific T lymphocytes in peripheral blood mononuclear cells, Clin Cancer Res., 2003, 9, 4376-4386) и колоректальным раком (Dittmann, J., Keller-Matschke, K., Weinschenk, T., Kratt, T., Heck, T., Becker, H.D., Stevanovic, S., Rammensee, H.G., and Gouttefangeas, C.; CD8+ T-cell response against MUC1-derived peptides ingastrointestinal cancer survivors, Cancer Immunol. Immunother., 2005, 54, 750-758). Для этих пациентов не было заявлено об аутоиммунных эффектах. Это демонстрирует естественную роль MUC-001 как опухолеассоциированного пептида, индуцирующего специфические Т-клетки, и позволяет предположить, что введение MUC-001 может считаться безопасным, хотя для антигена MUC1 не может быть обнаружена гиперэкспрессия на уровне мРНК.Met-протоонкоген (рецептор фактора роста гепатоцитов) (с-Met). Белковый продукт протоонкогена МЕТ является рецептором фактора роста гепатоцитов. Он содержит домен тирозинкиназы, который активирует сигнальные пути, задействованные в клеточной пролиферации, подвижности, адгезии и инвазии (Trusolino, L and Comoglio, PM; Scatter-factor and semaphorinreceptors: cell signalling for invasive growth, Nat. Rev. Cancer, 2002, 2, 289-300). В исследованиях различных видов опухолей было продемонстрировано несколько механизмов для активации c-Met, включая аутокринную петлю HGF/c-Met, активирующую точечные мутации, белок слияния TPR-Met и неспособность расщепления с-Met на - и -цепи (Di Renzo, M.F., Olivero, M., Martone, T., Maffe, A., Maggiora, P., Stefani, A.D., Valente, G., Giordano, S., Cortesina, G., and Comoglio, P.M.;papillary renal carcinoma and identical novel mutations in the MET proto-oncogene, Cancer Res., 58, 17191722). Как свойственно механизму, гиперэкспрессия c-Met кооперирует с онкогенной мутацией Ki-ras с усилением канцерогенности раковых клеток толстой кишки in vivo (Long, I.S., Han, K., Li, M., Shirasawa,S., Sasazuki, T., Johnston, M., and Tsao, M.S.; Met receptor overexpression and oncogenic Ki-ras mutation cooperate to enhance tumorigenicity of colon cancer cells in vivo, Mol. Cancer Res., 2003, 1, 393-401). Интересно, что существует некоторая очевидность для взаимодействия сигнальных реакций МЕТ с каскадом реакций Wnt/бета-катенина, зачастую представленного в повышенном количестве при раке толстой кишки. МЕТ может активироваться иростагландином Е 2 (PGE2), и РОЕ 2-активированный c-Met ассоциируется с -катенином, увеличивая его тирозиновое фосфорилирование, тем самым индуцируя инвазивность раковых клеток при раке толстой кишки (Pai, R., Nakamura, T., Moon, W.S., and Tarnawski,A.S.; Prostaglandins promote colon cancer cell invasion; signaling by cross-talk between two distinct growthfactor receptors, FASEB J, 2003, 17, 1640-1647). Недавно была описана совместная активация МЕТ и бетакатенина, приводящая к положительному контуру обратной связи между этими двумя ключевыми игроками при колоректальном онкогенезе (Rasola, A., Fassetta, M., De, B.F., D'Alessandro, L., Gramaglia, D., Dibeta-catenin sustains colorectal cancer cell invasive growth, Oncogene, 2007, 26, 1078-1087). Уровень экспрессии c-Met мРНК в первичных опухолях КРР (n=36) является важным предсказывающим маркером для инвазии на ранних стадиях и региональных метастазов заболевания, таким образом, находясь в прямом соотношении со стадией рака толстой кишки (Takeuchi, H., Bilchik, A., Saha, S.,Turner, R., Wiese, D., Tanaka, M., Kuo, C., Wang, H.J., and Hoon, D.S.; c-MET expression level in primarycolon cancer: a predictor of tumor invasion and lymph node metastases, Clin Cancer Res., 2003, 9, 1480-1488). Другой анализ экспрессии c-Met в 130 пробах КРР показал гиперэкспрессию (T/N2,0) c-Met в 69% случаев первичного КРР и значительно повышенные уровни c-Met при КРР с поражением кровеносных сосудов (Р=0,04) и на поздней стадии (Р=0,04), подтверждая роль c-Met в прогрессировании и распространении метастазов при КРР человека (Zeng, Z., Weiser, M.R., D'Alessio, M., Grace, A., Shia, J., and Paty,P.B.; Immunoblot analysis of c-Met expression in human colorectal cancer: overexpression is associated withadvanced stage cancer, Clin Exp. Metastasis, 2004, 21, 409-417). В другом исследовании в 69% и 48% из 60 аденокарцином толстой кишки было установлено повышение c-Met мРНК в более чем 2 и более чем 10 раз, соответственно, по сравнению со смежной нормальной слизистой оболочкой (Kammula, U.S., Kuntz,E.L., Francone, T.D., Zeng, Z., Shia, J., Landmann, R.G., Paty, P.B., and Weiser, M.R.; Molecular co-expressionoutcome, Cancer Lett., 2007, 248, 219-228). Таким образом, увеличение передачи сигналов с-Met является широко распространенным явлением на ранней стадии КРР, но и проявляющееся даже с еще большей экспрессией на поздних стадиях и при метастатической болезни. Циклин D1 (CCND1).CCND1 относится к высококонсервативному семейству циклинов, члены которого характеризуются исключительной периодичностью наличия белков в течение клеточного цикла. Циклины выполняют функцию регуляторов CDK (циклинзависимые киназы). Различным циклинам свойственна разная экспрессия и способы деградации, которые содействуют временной координации каждого этапа митоза. Этот циклин формирует комплекс с - и функционирует как - регуляторная субъединица CDK4 илиCDK6, активность которой требуется для клеточного цикла перехода G1/S. Мутации, амплификация и гиперэкспрессия этого гена, который изменяет прогрессию клеточного цикла, часто наблюдались в различных опухолях и могут благоприятствовать онкогенезу (Fu, М., Wang, С., LI, Z., Sakamaki, Т., and Pestell, R.G.; Minireview: Cyclin D1: normal and abnormal functions, Endocrinology, 2004, 145, 5439-5447). Распространенный однонуклеотидный полиморфизм A/G (A870G) приводит к двум различным изоформам мРНК: а и b. Попеременно сплайсированная изоформа b кодирует "усеченный" белок, который был связан с более высокой заболеваемостью опухолевыми заболеваниями, включая рак легких, рак толстой кишки и другие виды рака (Fu, M., Wang, С., LI, Z., Sakamaki, T., and Pestell, R.G.; Minireview:Cyclin Dl: normal and abnormal functions, Endocrinology, 2004, 145, 5439-5447). Гиперэкспрессия CCND1 на уровне мРНК и белковом уровне была многократно описана для колоректального рака (Sutter, T., Doi, S., Camevale, K.A., Arber, N., and Weinstein, IB; Expression of cyclins DIMcKay, J.A., Douglas, J.J., Ross, V.G., Curran, S., Murray, G.I., Cassidy, J., and McLeod, H.L.; Cyclin DI protein expression and gene polymorphism in colorectal cancer. Aberdeen Colorectal Initiative, Int. J. Cancer, 2000,88, 77-81; Bartkova, J., Lukas, J., Strauss, M., and Bartek, J.; The PRAD-1/cyclin D1 oncogene product accumulates aberrantly in a subset of colorectal carcinomas, Int. J. Cancer, 1994, 58, 568-573). Это может быть объяснено хорошо обоснованным фактом, что CCND1 является геном-мишенью сигнального пути -катенин-TCF/LEF, зачастую представленного в повышенном количестве при колоректальном раке (Shtutman, M., Zhurinsky, J., Simcha, I., Albanese, С., D'Amico, M., Pestell, R., and BenZe'ev, A.; The cyclin D1 gene is a target of the beta-catenin/LEF-1 pathway, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999,96, 5522-5527; Tetsu, О. and McCormick, F.; Beta-catenin regulates expression of cyclin DI in colon carcinomacells, Nature, 1999,398, 422-426). Повышенная экспрессия CCND1 была связана с более высокими стадиями опухоли, метастазами и снижению выживаемости (Balcerczak, E., Pasz-Walczak, G., Kumor, P., Panczyk, M., Kordek, R., Wierzbicki,R., and Mirowski, M.; Cyclin D1 protein and CCND1 gene expression in colorectal cancer, Eur. J. Surg. Oncol.,2005, 31, 721-726; Bahnassy, A.A., Zekri, A.R., El-Houssini, S., El-Shehaby, A.M., Mahmoud, M.R., Abdallah,S., and El-Serafi, M.; Cyclin A and cyclin D1 as significant prognostic markers in colorectal cancer patients,BMC. Gastroenterol, 2004, 4, 22; McKay, J.A., Douglas, J.J., Ross, V.G., Curran, S., Murray, G.I., Cassidy, J.,and McLeod, H.L.; Cyclin D1 protein expression and gene polymorphism in colorectal cancer. Aberdeen Colorectal Initiative, Int. J. Cancer, 2000, 88, 77-81; Maeda, K., Chung, Y., Kang, S., Ogawa, M., Onoda, N., Nishiguchi, Y., Ikehara, T., Nakata, B., Okuno, M., and Sowa, M.; Cyclin Dl overexpression and prognosis in colorectal adenocarcinoma, Oncology, 1998, 55, 145-151). Матричная металлопротеиназа 7 (матрилизин, утерин) (ММР 7). Матричные металлопротеиназы (MMPs) являются крупным семейством структурно родственных цинк-зависимых протеиназ, описываемых типично как способные приводить к деградации компонентов внеклеточной матрицы. Были идентифицированы отдельные ММР, которые проявляют повышенную экспрессию при опухолях, и большинство опухолей демонстрировало усиленную активность ММР (Curran, S and Murray, GI; 1999, Matrix metalloproteinases in tumour invasion and metastasis, J. Pathol., 189, 300308; Curran, S and Murray, GI; 2000, Matrix metalloproteinases: molecular aspects of their roles in tumour invasion and metastasis, Eur.J Cancer, 36, 1621-1630). Базальная мембрана и внеклеточная матрица представляют собой два физических барьера для инвазии злокачественных заболеваний, и их разрушение ММР играет ключевую роль в прогрессировании опухоли и распространении метастазов (Johnsen, М., Lund, L.R., Romer, J., Almholt, K., and Dano, K.; 1998, Cancer invasion and tissue remodeling: common themes in proteolytic matrix degradation, Curr.Opin.Cellof progelatinase, Int. J. Cancer, 114, 19-31). Помимо данной функции на данный момент обсуждается участие ММР в развитии и прогрессировании опухоли, включая роли в апоптозе, клеточной пролиферации и дифференциации. Данные функции связаны с ММР-опосредованным протеолизом нематричных белков и действий, отличающихся от их ферментативной активности (Egeblad, M. and Werb, Z.; 2002, New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression, Nat.Rev.Cancer, 2, 161-174; Leeman, M.F., Curran, S., and Murray, G.I.; 2003, New insights into the roles of matrix metalloproteinases in colorectal cancerdevelopment and progression, J. Pathol., 201, 528-534). Недавние исследования показали, что несколько матричных металлопротеиназ, в особенности матрилизин (ММР 7), взаимодействуют со специфическими молекулярногенетическими и сигнальными путями, задействованными в развитии колоректального рака. В частности, матрилизин активируется на ранней стадии колоректального онкогенеза сигнальными путями бета-катенина (Brabletz, T., Jung, A.,Dag, S., Hlubek, F., and Kirchner, T.; 1999, beta-catenin regulates the expression of the matrix metalloproteinase-7 in human colorectal cancer, Am. J. Pathol., 155, 1033-1038; Leeman, M.F., Curran, S., and Murray,G.I.; 2003, New insights into the roles of matrix metalloproteinases in colorectal cancer development and progression, J.Pathol., 201, 528-534; Zucker, S. and Vacirca, J.; 2004, Role of matrix metalloproteinases (MMPs) inMMP7 гиперэкспрессирована как в доброкачественных, так и злокачественных колоректальных опухолях (Ishikawa, T., Ichikawa, Y., Mitsuhashi, M., Momiyama, N., Chishima, T., Tanaka, K., Yamaoka, H.,Miyazakic, K., Nagashima, Y., Akitaya, T., and Shimada, H.; 1996, Matrilysin is associated with progression ofcolorectal cancers, Int. J. Cancer, 54, 614-618). MMP7 является одной из немногих ММР, которая фактически секретируется опухолевыми клетками (Overall, CM and Kleifeld, О; 2006, Tumour microenvironment opinion: validating matrix metalloproteinases as drug targets and anti-targets for cancer therapy,Nat.Rev.Cancer, 6, 227-239). Кроме того, уровни экспрессии ММР 7 мРНК соотносятся со стадией прогрессирования КРР (Ishikawa, T, Ichikawa, Y, Mitsuhashi, M, Momiyama, N, Chishima, T, Tanaka, K, Yamaoka, H, Miyazakic, K, Nagashima, Y, Akitaya, T, and Shimada, H; 1996, Matrilysin is associated with progression of colorectal tumor, Cancer Lett., 107, 5-10; Mori, M, Barnard, GF, Mimori, K, Ueo, H, Akiyoshi, T, andSugimachi, K; 1995, Overexpression of matrix metalloproteinase-7 mRNA in human colon carcinomas, Cancer,75, 1516-1519). При метастазах при КРР ММР 7 играет также центральную роль (Adachi, Y, Yamamoto, H,Itoh, F, Hinoda, Y, Okada, Y, and Imai, K; 1999, Contribution of matrilysin (MMP-7) to the metastatic pathwaySugimachi, K; 1995, Overexpression of matrix metalloproteinase-7 mRNA in human colon carcinomas, Cancer,75, 1516-1519). Повышенные уровни сыворотки ММР 7 ассоциируются с плохим прогнозом для пациентов с колоректальным раком на поздних стадиях (Maurel, J, Nadal, С, Garcia-Albeniz, X, Gallego, R, Carcereny, E,Almendro, V, Marmol, M, Gallardo, E, Maria, AJ, Longaron, R, Martinez-Fernandez, A, Molina, R, Castells, A,and Gascon, P; 2007, Serum matrix metalloproteinase 7 levels identifies poor prognosis advanced colorectalcancer patients, Int. J. Cancer, Published Online: 8 May 2007), а гиперэкспрессия у пациентов с КРР, ассоциирующаяся опять же с сокращением выживаемости, как предполагалось способствует ускользанию от иммунологического надзора путем расщепления Fas на опухолевых клетках (Wang, WS, Chen, PM, Wang,HS, Liang, WY, and Su, Y; 2006, Matrix metalloproteinase-7 increases resistance to Fas-mediated apoptosis andis a poor prognostic factor of patients with colorectal carcinoma, Carcinogenesis, 27, 1113-1120). Белки по изобретению могут быть мишенью опухолеспецифического иммунного ответа при многих видах рака. Пептид корового антигена вируса гепатита В, HBV-001, получен не из эндогенного опухолеассоциированного антигена человека, а из корового антигена вируса гепатита В. Во-первых, это позволяет количественные сравнения интенсивности Т-клеточных ответов, индуцированных TUMAP, и, следовательно, позволяет сделать важные выводы о способности вызывать противоопухолевые ответы. Вовторых, он функционирует как важный положительный контроль в случае недостатка каких-либо Тклеточных ответов у пациента. И, в-третьих, он также позволяет сделать заключение о статусе иммунокомпетентности пациента. Инфицирование вирусом гепатита В (HBV) является одной из самых распространенных причин заболевания печени, поражающим примерно 350 млн человек по всему миру (Rehermann, В andNascimbeni, M; Immunology of hepatitis В virus and hepatitis С virus infection, Nat.Rev.Immunol., 2005, 5,215-229). В связи с простотой горизонтального и вертикального переноса и наличием потенциала для хронического заболевания это может привести к циррозу печени и гепатоклеточной карциноме, поэтомуHBV наносит сильный удар по системам здравоохранения многих стран мира. Геном HBV (Previsani, Nand Lavanchy, D; 2002, Hepatitis В, (Epidemic and Pandemic Alert and Response, World Health Organization,Geneva, 2002 включает частично двухнитевую кольцевую ДНК. В вирионах HBV она окружена коровым белком НВс и другими белками, формируя нуклеокапсид, который защищен внешней оболочкой,содержащей липиды и поверхностные белки семейства HBs (называемые также оболочечными белками). Антигенные детерминанты, ассоциированные с НВс и HBs, обозначаются как HBcAg и HBsAg соответственно. Эти антигены ассоциированы с серологической реакцией, т.е. ответами антител, обнаруженными в крови пациента, и находятся среди клинически наиболее применимых систем антиген-антитело для диагноза инфекции HBV. НВс будет представлять новый чужеродный антиген у всех индивидов без предшествующей истории инфекции HBV. Так как для этого антигена хорошо известны иммуногенные пептиды (Bertoletti, A, Chisari, FV, Penna, A, Guilhot, S, Galati, L, Missale, G, Fowler, P, Schlicht, HJ, Vitiello, A, Chesnut, RC, and; 1993, Definition of a minimal optimal cytotoxic T-cell epitope within the hepatitis Вhumans by lipopeptide vaccination are comparable to those elicited by acute viral infection, J.Immunol., 159,1383-1392), то в рамках исследований IMA из HBcAg в качестве антигена для положительного контроля был выбран один пептид из 10 аминокислот. Индукция пептид-специфических ЦТЛ НВс будет, затем,использоваться как маркер иммунокомпетентности пациента и успешности вакцинации. Фармацевтическая композиция в дальнейшем может содержать дополнительные пептиды и/или наполнители для большей эффективности, как это будет пояснено ниже."Вариантной аминокислотной последовательностью" данной аминокислотной последовательностью изобретатели обозначают, что боковые цепи, например, одного или двух аминокислотных остатков изменены (например, при их замещении боковой цепью другого встречающегося в природе аминокислотного остатка или какой-либо другой боковой цепью), так что пептид по-прежнему способен связываться с молекулой HLA по существу таким же путем, как и пептид, состоящий из данной аминокислотной последовательности. Например, пептид может быть модифицирован таким образом, что он, по крайней мере, сохранит, если, не улучшит, способность взаимодействовать и связываться с подходящей молекулой МНС, такой как HLA-A или -DR, и так что он, по крайней мере, сохранит, если не улучшит, способность генерировать активированные ЦТЛ, которые могут распознавать и уничтожать клетки, которые экспрессируют полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, как определено в аспектах данного изобретения. Как может быть извлечено из базы данных, некоторые позиции связывающихся с HLA-A пептидов являются типичными "якорными" остатками, образующими центральную последовательность, подходящую к соединительному элементу HLA-связывающей бороздки. Те аминокислотные остатки, которые не обязательны для взаимодействия с Т-клеточным рецептором, могут быть модифицированы при замещении другой аминокислотой, чье включение, по существу,не влияет на реактивность Т-клетки и не устраняет связь с релевантным МНС. Таким образом, помимо данного условия, пептид по изобретению может быть любым пептидом (в обозначение которого изобретатели включают олигопептиды или полипептиды), который включает аминокислотные последовательности или их участок или их вариант, как дано. В дальнейшем известно, что пептиды, презентированные МНС класса II, образованы "коровой последовательностью", имеющей конкретный HLA-специфический аминокислотный фрагмент и, факультативно, N- и/или С-терминальные удлиняющие сегменты, которые не препятствуют функции коровой последовательности (т.е. считаются нерелевантными для взаимодействия пептида и Т-клетки). N- и/или С-терминальные удлиняющие сегменты могут иметь длину, например, от 1 до 10 аминокислот соответственно. Эти пептиды могут быть использованы как непосредственно для погрузки на молекулы МНС класса II, так и последовательность может быть клонирована на векторы в соответствии с описанным ниже. Так как эти пептиды образуют конечный продукт процессинга более длинных пептидов внутри клетки, то более длинные пептиды могут использоваться в равной степени. Пептиды по изобретению могут быть любого размера, но, в основном, они могут иметь молекулярный вес меньше чем 100000,предпочтительно меньше чем 50000, более предпочтительно меньше чем 10000 и типично около 5000. В отношении числа аминокислотных остатков пептиды по изобретению могут иметь менее чем 1000 остатков, предпочтительно менее чем 500 остатков, более предпочтительно менее чем 100 остатков. Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает также композиции из пептидов и их вариантов, в которых пептид или вариант имеет общую длину между 8 и 100, предпочтительно между 8 и 30 и наиболее предпочтительно между 8 и 16, а именно 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 аминокислот. В соответствии с этим, варианты, которые индуцируют Т-клеточную перекрестную реакцию с пептидом по изобретению, часто являются вариантами по длине. Если пептид, который длиннее, чем около 12 аминокислотных остатков, непосредственно используется для связывания с молекулой МНС II класса, предпочтительно, чтобы остатки, которые примыкают к центральному HLA- связывающему региону, по существу, не влияли на способность пептида специфически связываться со связывающей бороздкой молекулы МНС II класса или презентировать пептид ЦТЛ. Тем не менее, как уже было указано выше, следует понимать, что могут быть использованы более крупные пептиды, в особенности, если они закодированы полинуклеотидом, потому что такие крупные пептиды могут быть разделены на фрагменты подходящими антигенпрезентирующими клетками. Также возможно, чтобы эпитопы МНС I класса, хотя они обычно имеют длину между 8-10 аминокислотами, генерировались при процессинге пептидов из более длинных пептидов или белков, включающих истинный эпитоп. Аналогично с эпитопами МНС II класса предпочтительно, чтобы остатки,которые примыкают к связывающему региону, по существу, не влияли на способность пептида специфически связываться со связывающей бороздкой молекулы МНС I класса или презентировать пептид ЦТЛ и не маскировали сайты для протеолитического расщепления, необходимые для выявления истинного эпитопа во время процессинга. Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает также пептиды и варианты эпитопов МНС I класса, имеющие общую длину между 8 и 100, предпочтительно между 8 и 30, наиболее предпочтительно между 8 и 16, а именно 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 аминокислот. Разумеется, пептид или вариант в соответствии с настоящим изобретением будет обладать способностью связываться с молекулой главного комплекса гистосовместимости человека (МНС) I или II класса. Связывание пептида или варианта с комплексом МНС может быть проверено методами, известными из уровня техники, например, теми, что описываются в примерах настоящего изобретения или в литера- 17023928 туре для различных аллелей МНС II класса (e.g. Vogt AB, Kropshofer H, Kalbacher H, Kalbus M, Rammensee HG, Coligan JE, Martin R; Ligand motifs of HLA-DRB50101 and DRB 11501 molecules delineated from(12):1765-1776). Дополнительные фрагменты аминокислот, находящиеся на N-и/или С-конце, не являющиеся обязательно формирующими часть пептида, которая функционирует как эпитоп для молекул МНС, могут, тем не менее, быть важны для обеспечения эффективного введения пептида в соответствии с настоящим изобретением в клетки. В одном воплощении настоящего изобретения пептид по изобретению является белком слияния, который включает, например, 80 N-терминальных аминокислот HLA-DR антигенассоциированной инвариантной цепи (р 33, в дальнейшем "Ii"), как взятая из банка данных NCBI, инвентарный номер - GenBank Accession-number X00497 (Strubin, M., Mach, В. and Long, E.O. The complete sequence of the mRNA for the HLA-DR-associated invariant chain reveals a polypeptide with an unusual transmembrane polarity EMBOJ. 3 (4), 869-872 (1984. Предпочтительной является фармацевтическая композиция, в которой пептиды имеют общую длину между 8 и 100, предпочтительно между 8 и 30 и особенно предпочтительно между 8 и 16 аминокислотами. Кроме того, пептид или вариант может быть модифицирован в дальнейшем для улучшения стабильности и/или связывания с молекулами МНС в целях получения более сильного иммунного ответа. Методы для такой оптимизации пептидной последовательности хорошо известны из уровня техники и включают, например, введение обратных пептидных или непептидных связей. Таким образом, в соответствии с другим аспектом изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, в которой по крайней мере один пептид или вариант включает непептидные связи. В пептидах с обратной связью аминокислотные остатки присоединены не пептидными связями(-CO-NH-), но пептидная связь является обратной. Такие ретро-обратные пептидомиметики могут быть получены методами, известными из уровня техники, например, такими, как описано в работе Meziere etal. (1997), J. Immunol. 159-3237, включенной сюда путем ссылки. Этот принцип охватывает получение псевдопептидов, содержащих изменения, которые охватывают остов, но не ориентацию боковых цепей.Meziere et al. (1997) показывают, что эти псевдопептиды пригодны для ответов МНС и Т-хелперных клеток. Ретро-обратные пептиды, содержащие связи NH-CO вместо пептидных связей CO-NH, намного более устойчивы к протеолизу. Непептидной связью, является, например, -CH2-NH, -CH2S-, -СН 2 СН 2-, -СН=СН-, -СОСН 2-,-СН(ОН)СН 2- и -CH2SO-. Патент США 4897445 обеспечивает метод твердофазного синтеза непептидных связей (-CH2-NH) в полипептидных цепях, что включает полипептиды, синтезированные с использованием стандартной методики, и непептидную связь, синтезированную при реакции аминоальдегида и аминокислоты в присутствии NaCNBH3. Пептиды, включающие последовательности по изобретению, описанные выше, могут быть синтезированы с дополнительными химическими группами, находящимися на их аминном и/или карбоксильном концах, для увеличения, например, стабильности, биологической доступности и/или аффинности пептидов. Например, гидрофобные группы, такие как карбобензоксильные, данзильные или третбутилоксикарбонильные группы, могут быть добавлены к аминным окончаниям пептидов. Подобным образом, ацетильная группа или 9-фторенилметокси-карбонильная группа может быть введена в аминные окончания пептидов. Кроме того, гидрофобная группа, трет-бутилоксикарбонильная или амидная группа может быть, например, добавлена к карбоксильным окончаниям пептидов. Далее, все пептиды по изобретению могут быть синтезированы в целях изменения их пространственной конфигурации. Например, D-изомер одного или более аминокислотных остатков пептида может быть использован скорее, чем обычный L-изомер. Более того, по крайней мере один из аминокислотных остатков пептидов по изобретению может быть замещен одним из хорошо известных не встречающихся в природе аминокислотных остатков. Изменения, такие как данные, могут служить для повышения стабильности, биологической доступности и/или связывающих свойств пептидов по изобретению. Подобным образом, пептид или вариант по изобретению может быть модифицирован химическим способом посредством реакции специфических аминокислот как до, так и после синтеза пептида. При- 18023928 меры таких модификаций хорошо известны из уровня техники и обобщаются, например, в работе R.Lundblad, Chemical Reagents for Protein Modification, 3rd ed. CRC Press, 2005, которая включена сюда путем ссылки. Химическая модификация аминокислот включает, но не ограничивается, модификацией с помощью ацилирования, амидирования, пиридоксилирования лизина, восстановительного алкилирования, тринитробензилирования аминных групп 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS),амидной модификацией карбоксильных групп и сульфгидрильной модификации с помощью окисления надмуравьиной кислотой цистеина до цистеиновой кислоты, образованием ртутных производных, образованием смешанных дисульфидов с другими тиоловыми соединениями, реакцией с малеимидом, карбоксиметилированием йодоуксусной кислотой или йодацетамидом и карбамоилированием цианатом при щелочном уровне рН, хотя не ограничиваясь ими. В этой связи специалист данной области может проконсультироваться с главой 15 раздела "Current Protocols" в журнале "Protein Science", Eds. Coligan et al.(John WileySons NY 1995-2000) для получения более обширной информации о методах, связанных с химической модификацией белков. Вкратце, модификация, например, остатков аргинила в белках часто основана на реакции вицинальных дикарбонильных соединений, таких как фенилглиоксаль, 2,3-бутандион и 1,2-циклогександион для формирования аддукта. Другим примером является реакция метилглиоксаля с остатками аргинина. Цистеин может быть модифицирован без сопутствующей модификации других нуклеофильных сайтов,таких как лизин и гистидин. В результате для модификации цистеина доступно большое число реагентов. На веб-сайтах фирм Pierce Chemical Company, Sigma-Aldrich и других опубликована информация о специфических реагентах. Также распространена селективная редукция дисульфидных связей в белках. Дисульфидные связи могут быть образованы и оксидированы во время тепловой обработки биофармацевтических средств. К-реагент Вудворда может использоваться для модификации специфических остатков глютаминовой кислоты. N-(3-(диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид может использоваться для формирования внутримолекулярных поперечных связей между остатком лизина и остатком глютаминовой кислоты. Например, диэтилпирокарбонат является реагентом для модификации остатков гистидила в белках. Гистидин может также быть модифицирован при использовании 4-гидрокси-2-ноненала. Реакция остатков лизина и других -аминных групп полезна, например, при связывании пептидов с поверхностями или перекрестном связывании (кросс-линкинг) белков/пептидов. Лизин является сайтом присоединения поли(этилен)гликоля и основным сайтом модификации при гликировании белков. Остатки метионина в белках могут быть модифицированы с помощью, например, йодацетамида,бромэтиламина, хлорамина Т. Тетранитрометан и N-ацетилимидазол могут быть использованы для модификации остатков тирозила. Кросс-линкинг через образование дитирозина может быть произведен с ионами перекиси водорода/меди. В последних исследованиях по модификации триптофана используются N-бромсукцинимид, 2 гидрокси-5-нитробензилбромид или 3-бром-3-метил-2-(2-нитрофенилмеркапто)-3 Н-индол (BPNSскатол). Успешная модификация терапевтических белков и пептидов с PEG-полиэтиленгликолем часто ассоциируется с увеличением циркуляторного полураспада, в то время как кросс-линкинг белков с глутаральдегидом, полиэтиленгликоль-диакрилатом и формальдегидом используется для приготовления гидрогелей. Химическая модификация аллергенов для иммунотерапии часто достигается при карбамоилировании цианатом калия. В целом пептиды и варианты (по крайней мере, те, что содержат пептидные связи между аминокислотными остатками) могут быть синтезированы, к примеру, Fmoc-полиамидным способом твердофазного пептидного синтеза, как раскрыто у Lu и соавторов (1981), J. Org. Chem. 46, 3433-3436 и в прилагающихся ссылках. Очистка может быть произведена любой техникой или комбинацией таких техник как рекристаллизация, эксклюзивная хроматография, ионообменная хроматография, хроматография гидрофобного взаимодействия и (обычно) обратнофазная высокоэффективная жидкостная хроматография с использованием, к примеру, градиентного разделения ацетонитрил/вода. Анализ пептидов может быть произведен при использовании тонкослойной хроматографии, электрофореза, в частности капиллярного электрофореза, твердофазной экстракции (ТФЭ), обратнофазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, аминокислотного анализа после кислотного гидролиза и масс-спектрометрического анализа при быстрой бомбардировке атомами (FAB), а также массспектрометрический анализ MALDI и ESI-Q-TOF. Дальнейший аспект изобретения обеспечивает нуклеиновую кислоту (например, полинуклеотид),кодирующую пептид или вариант по изобретению. Полинуклеотид может быть, к примеру, ДНК, кДНК,ПНК, ЦНК, РНК, как одно-, так и/или двухнитевыми; натуральными или стабилизированными формами полинуклеотидов, таких как, к примеру, полинуклеотиды с фосфоротиоатным остовом или их комбинациями и может или не может содержать интроны в период времени кодирования для пептида. Разумеется, только пептиды, содержащие встречающиеся в природе аминокислотные остатки, присоединенные природными пептидными связями, могут кодироваться полинуклеотидом. Еще один дальнейший аспект изобретения обеспечивает вектор экспрессии, способный экспрессировать полипептид в соответствии с изобретением. Векторы экспрессии для различных видов клеток хорошо известны из уровня техники и могут быть выбраны без проведения излишних экспериментов. Как правило, ДНК вводится в вектор экспрессии, такой как плазмида, с правильной ориентацией и корректной рамкой считывания экспрессии. Если необходимо, то ДНК может быть сцеплена с адекватными транскрипционными и трансляционными регулирующими контрольными нуклеотидными последовательностями, распознающимися желательным хозяином, хотя такой контроль обычно имеется в векторе экспрессии. Вектор вводится затем хозяину стандартными способами. С руководством можно ознакомиться, к примеру, в работе Sambrook и соавторов (1989), MolecularCloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY. В особенно предпочтительном воплощении изобретения, однако, фармацевтическая композиция включает по крайней мере два пептида, состоящих из аминокислотных последовательностей в соответствии с SEQ ID NO: 1 по SEQ ID NO: 15. Оптимальное количество каждого пептида, включаемого в вакцину, и оптимальная схема дозировки может быть определена специалистом данной области без проведения излишних экспериментов. Например, пептид или его вариант может приготавливаться для внутривенной (i.v.) инъекции, подкожной (s.c.) инъекции, внутрикожной (i.d.) инъекции, внутрибрюшной (i.p.) инъекции, внутримышечной (i.m.) инъекции. Предпочтительные пути введения пептидной инъекции - s.c, i.d., i.p., i.m. и i.v. Предпочтительными путями введения инъекции ДНК являются i.d., i.m., s.c, i.p. и i.v. Вводиться могут дозы, к примеру, между 1 и 500 мг, 50 мкг и 1,5 мг, предпочтительно от 125 мкг до 500 мкг пептида или ДНК и будут зависеть от соответствующего пептида или ДНК. Дозы в данных пределах успешно использовались в предыдущих клинических исследованиях (Brunsvig P.F., Aamdal S., Gjertsen M.K., Kvalheim G., Markowski-Grimsrudvaccine IMA901, ASCO meeting 2007; Abstract No 3017). Фармацевтическая композиция по изобретению может быть составлена так, что выбор, номер и/или количество пептидов, присутствующих в композиции является/являются ткане-, раково- и/или пациентспецифической(ими). Например, руководством для точного отбора пептидов могут служить образцы экспрессии родительских белков в данной ткани во избежание побочных эффектов. Выбор может зависеть от специфического типа рака, от которого страдает пациент, которому предназначено лечение, в равной степени, как и от статуса заболевания, ранних схем лечения, иммунного статуса пациента и, естественно, от HLA-гаплотипа пациента. В дальнейшем вакцина в соответствии с изобретением может содержать индивидуализированные компоненты, соответствующие личным потребностям отдельного пациента. Примерами являются различные количества пептидов в соответствии с экспрессией связанных с ними ТАА у конкретного пациента, нежелательными побочными эффектами в связи с аллергиями или другими лечениями и согласованием для вторичного лечения, следующего за первым циклом или схемой лечения. Для композиции, предназначенной для использования в качестве вакцины против КРР, например,будут избегаться пептиды, родительские белки которых экспрессированы в больших количествах в нормальных тканях, или они будут присутствовать в малых количествах в композиции по изобретению. С другой стороны, если известно, что опухоль пациента экспрессирует большие количества конкретного белка, то соответствующая фармацевтическая композиция для лечения данного вида рака может быть представлена в больших количествах и/или может включать более одного пептида, специфического для данного особенного белка или сигнального пути данного белка. Специалист данной области будет способен выбрать предпочтительные комбинации иммуногенных пептидов при проверке, например, поколения Т-клеток in vitro в равной степени, как их эффективности и общего присутствия, пролиферации, аффинности и размножения конкретных Т-клеток для конкретных пептидов, и функциональных свойств Т-клеток, например, при анализе выработки IFN- (см. также примеры ниже). Обычно наиболее эффективные пептиды комбинируются, затем, в качестве вакцины в соответствии с целями, описанными выше. Подходящая вакцина будет предпочтительно содержать между 1 и 20 пептидами, более предпочтительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 различных пептидов, в дальнейшем предпочтительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 различных пептидов и, наиболее предпочтительно, 14 различных пептидов. Длина пептида для применения в вакцине против рака может быть любым подходящим пептидом. В особенности, он может быть подходящим 9-мерным пептидом или подходящим 7-,или 8-, или 10-, или 11-мерным пептидом или 12-, 13-, 14- или 15-мером. Более длинные пептиды могут быть также подходящими; 9-мерные или 10-мерные пептиды, как описано в табл. 1 и 2, являются предпочтительными для пептидов МНС класса I, в то время как 12-ти - 15-меры предпочтительны для пепти- 20023928 дов МНС класса II. Пептид(ы) формирует(ют) вакцину против опухоли или рака. Она может вводиться непосредственно пациенту, в пораженный орган или систематично, или вноситься ex vivo в клетки, полученные от пациента, или в человеческую клеточную линию, которые затем могут вводиться пациенту или использоваться in vitro для селекции субпопуляции из иммунных клеток, полученных от пациента, которые после этого вновь вводятся пациенту. Пептид может быть, по существу, чистым или комбинированным с иммуностимулирующим адъювантом (см. ниже) или использоваться в комбинации с иммуностимулирующими цитокинами или вводиться с подходящей системой доставки, например, липосомами. Пептид может быть также конъюгирован в подходящий носитель, такой как гемоцианин лимфы улитки (KLH) или маннан (см. WO 95/18145 иLongenecker et al. (1993), Ann. NY Acad. Sci. 690, 276-291). Пептид может быть также меченым или являться белком слияния или гибридной молекулой. Пептиды, последовательность которых дана в настоящем изобретении, как ожидается, стимулируют CD4 или CD8 ЦТЛ. Тем не менее, стимуляция более эффективна в присутствии помощи, производимой Т-клетками, положительными для противоположногоCD. Таким образом, для эпитопов МНС II класса, которые стимулируют CD4 ЦТЛ, партнеры слияния или секции гибридной молекулы адекватно обеспечивают эпитопы, которые стимулируют CD8 положительные Т-клетки. С другой стороны, для эпитопов МНС I класса, которые стимулируют CD8 ЦТЛ, партнеры слияния или секции гибридной молекулы адекватно обеспечивают эпитопы, которые стимулируют CD4-положительные Т-клетки. CD4- и CD8-стимулирующие эпитопы хорошо известны из уровня техники и включают те, что были идентифицированы в настоящем изобретении. Чтобы вызвать иммунный ответ, обычно необходимо включить наполнители, что приводит к большей иммуногенности композиции. Таким образом, в предпочтительном воплощении изобретения фармацевтическая композиция включает далее по крайней мере один подходящий адъювант. Адъюванты - это вещества, которые неспецифически усиливают или потенцируют иммунный ответ(например, иммунные ответы, опосредованные ЦТЛ или хелперными Т-клетками (TH) на антиген, и могут, таким образом, рассматриваться как полезные в медикаменте настоящего изобретения. Подходящие адъюванты включают, но не ограничиваются, 1018 ISS, соли алюминия, Amplivax, AS15, BCG, CP870,893, CpG7909, CyaA, dSLIM, GM-CSF, IC30, IC31, Имиквимод, ImuFact IMP321, IS Patch, ISS, ISCOMATRIX, JuvImmune, LipoVac, MF59, монофосфорил липид А, Монтанид IMS 1312, Монтанид ISA 206, Монтанид ISA 50V, Монтанид ISA-51, OK-432, OM-174, OM-197-MP-EC, ONTAK, векторная система PepTel, микрочастицы PLG, резиквимод, SRL172, вирусомы и другие вирусоподобные частицы, YF17D, VEGF trap, R848, Бета-глюкан, Pam3Cys, стимулон Aquila's QS21 (Aquila Biotech, Worcester, MA,USA) который получают из сапонина, микобактериальные экстракты и синтетические имитации бактериальных клеточных стенок и другие запатентованные адъюванты, такие как Ribi's Detox, Quil или Superfos. Предпочтительными адъювантами являются такие, как неполный адъювант Фрейнда или ГМ-КСФ. Несколько иммунологических адъювантов (например, MF59), специфических для дендритных клеток, и их приготовление были описаны ранее (Dupuis M, Murphy TJ, Higgins D, Ugozzoli M, van Nest G, Ott G,McDonald DM; Dendritic cells internalize vaccine adjuvant after intramuscular injection; Cell Immunol. 1998; 186(1): 18-27; Allison AC; The mode of action of immunological adjuvants; Dev Biol Stand. 1998; 92:3-11). Также могут использоваться цитокины. Несколько цитокинов были присоединены напрямую для оказания влияния на миграцию дендритных клеток к лимфоидным тканям (например, TNF-), ускоряя созревание дендритных клеток до эффективных, презентирующих антиген Т-лимфоцитам, клеток (например,ГМ-КСФ, ИЛ-1 и ИЛ-4) (патент США 5849589, специфически включенный сюда в его целостности путем ссылки) и действуя как иммуноадъюванты (например, ИЛ-12) (Gabrilovich D1, Cunningham HT,Carbone DP; IL-12 and mutant P53 peptide-pulsed dendritic cells for the specific immunotherapy of cancer; J.Immunother Emphasis Tumor Immunol. 1996 (6):414-418). Об иммуностимулирующих олигонуклеотидах CpG также сообщалось, что они усиливают эффекты адъювантов в составе вакцин. Теоретически не связанные, CpG- олигонуклеотиды при активации врожденной (неадаптивной) иммунной системы действуют с помощью Toll-подобных рецепторов (TLR), в основном TLR9. Вызванная CpG активация TLR9 усиливает антиген-специфические гуморальные и клеточные ответы на широкий спектр антигенов, включая пептидные или белковые антигены, живые или убитые вирусы, вакцины из дендритных клеток, аутологичные клеточные вакцины и полисахаридные конъюгаты как в профилактических, так и терапевтических вакцинах. Более важно то, что улучшается созревание и дифференциация дендритных клеток, приводя к улучшенной активации TH1-клеток и интенсивной генерации цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) даже при отсутствии помощи CD4 Тклеток. Отклонение в сторону ТН 1, вызванное стимуляцией TLR9, сохраняется даже в присутствии вакцинных адъювантов, таких как квасцы или неполный адъювант Фрейнда (IFA), которые обычно способствуют отклонению в сторону ТН 2. CpG-олигонуклеотиды проявляют даже большую адъювантную активность, если они входят в состав или вводятся вместе с другими адъювантами или в таких составах как микрочастицы, наночастицы, липидные эмульсии или подобных составах, которые в особенности необходимы для инициации сильного ответа, если антиген относительно слаб. Они также ускоряют иммун- 21023928 ную реакцию и позволяли снизить дозы антигена на приблизительно два порядка величины с ответами антитела, сравнимыми с полной дозой вакцины без CpG в некоторых экспериментах (Arthur M. Krieg,Therapeutic potential of Toll-like receptor 9 activation, Nature Reviews, Drug Discovery, 2006, 5, 471-484). В патенте США 6406705 B1 описывается комбинированное применение CpG-олигонуклеотидов, адъювантов, не включающих нуклеиновые кислоты, и антигена для вызывания антиген-специфического иммунного ответа. Имеющимся в продаже антагонистом CpG TLR9 является dSLIM (контурный иммуномодулятор двойного действия) компании "Mologen" (Берлин, Германия), который является предпочтительным компонентом фармацевтической композиции настоящего изобретения. Также могут быть использованы другие молекулы, связывающиеся с TLR, такие как РНК, связывающаяся с TLR 7, TLR 8 и/или TLR 9. Другие примеры полезных адъювантов включают, но не ограничиваются химически модифицированными CpG (например, CpR, Idera), Poly(I:С) (например, polyI:C12U), не-CpG бактериальной ДНК или РНК, а также иммуноактивными малыми молекулами и антителами, такими как имидазохинолины, циклофосфамид, сунитиниб, бевацизумаб, целебрекс, NCX-4016, силденафил, тадалафил, варденафил, сорафениб, XL-999, СР-547632, пазопаниб, ZD2171, AZD2171, ипилимумаб, тремелимумаб и SC58175, которые могут действовать терапевтически и/или как адъювант. Количества и концентрации адъювантов и вспомогательных веществ, полезных в контексте настоящего изобретения, могут быть легко определены опытным специалистом без проведения излишних экспериментов. Предпочтительными адъювантами являются dSLIM, BCG, OK432, имиквимод, PeviTer, и JuvImmune. В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с изобретением адъювант выбран из группы, состоящей из колониестимулирующих факторов, таких как гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ, сарграмостим). В предпочтительном воплощении фармацевтической композиции в соответствии с изобретением адъювантом является имиквимод. Эта композиция используется для парентерального введения, такого как подкожное, внутрикожное,внутримышечное или оральное введение. Для этого пептиды и факультативно другие молекулы растворяются или суспендируются в фармацевтически приемлемом, предпочтительно водном носителе. Помимо этого, композиция может содержать наполнители, такие как буферы, связующие агенты, разрушающие агенты, разбавители, вкусоароматические добавки, смазочные вещества и т.д. Пептиды могут быть также введены вместе с иммуностимулирующими веществами, такими как цитокины. Пространный список наполнителей, которые могут быть использованы в такой композиции, может быть взят, например,из A. Kibbe, "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 3. Ed., 2000, изд. "American Pharmaceutical Association and pharmaceutical press". Композиция может применяться для предупреждения, профилактики и/или лечения аденоматозных или раковых заболеваний, предпочтительно КРР. Цитотоксические Т-клетки (ЦТЛ) распознают антиген в форме пептида, связанного с молекулой МНС скорее, чем интактный чужеродный антиген сам по себе. Сама молекула МНС находится на клеточной поверхности антигенпрезентирующей клетки. Так, активация ЦТЛ возможна, только если имеется в наличии тримерный комплекс из пептидного антигена, молекулы МНС и АПК. Соответственно, иммунный ответ может быть усилен, если для активации ЦТЛ использован не только пептид, а если, кроме того, добавлены АПК с соответствующей молекулой МНС. Поэтому в предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением дополнительно содержит по крайней мере одну антигенпрезентирующую клетку. Антигенпрезентирующая клетка (или клетка-стимулятор) типично имеет молекулу МНС I или II класса на своей поверхности и в одном воплощении является, по существу, не способной самостоятельно нагружать на молекулу МНС I или II класса выбранный антиген. Как более детально описано ниже, молекула МНС I или II класса может быть легко нагружена выбранным антигеном in vitro. Предпочтительно в клетке млекопитающих не хватает или имеется пониженный уровень или пониженная функция пептидного транспортера ТАР. Подходящие клетки, в которых не хватает пептидного транспортера ТАР, включают Т 2, RMA-S и клетки дрозофилы. ТАР - это транспортер, ассоциированный с процессингом антигена. Нагружающая пептидом дефектная клеточная линия Т 2 человека имеется в наличии в AmericanType Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, США под каталоговымCRL 1992; клеточная линия дрозофилы линия Schneider 2 имеется в наличии в АТСС под каталоговымCRL 19863; клеточная линия мыши RMA-S описывается у Karre и Ljunggren (1985), J. Exp. Med. 162, 1745. Данные клеточные линии могут быть использованы в качестве АПК, и из-за недостатка ТАР практически все пептиды, презентируемые МНС I класса, будут пептидами при тщательной проверке, использованными для загрузки извне пустых молекул МНС I класса этих клеточных линий, следовательно, все эффекты будут отчетливо относиться к использованным пептидам. Предпочтительно, чтобы антигенпрезентирующие клетки являлись дендритными клетками. Подходящим образом, дендритные клетки являются аутологичными дендритными клетками, в которые импульсным методом введен антигенный пептид. Антигенный пептид может быть любым подходящим ан- 22023928 тигенным пептидом, который вызывает адекватный Т-клеточный ответ. Т-клеточная терапия с использованием аутологичных дендритных клеток с введенными импульсным методом пептидами из опухолеассоциированного антигена раскрывается у Murphy и соавторов (1996), The Prostate 29, 371-380 and Tjua etal. (1997), The Prostate 32, 272-278. Так, в предпочтительном воплощении настоящего изобретения в фармацевтическую композицию,содержащую по крайней мере одну антигенпрезентирующую клетку, введен импульсным методом или погружен пептид, к примеру, методом примера 4. В качестве альтернативы антигенпрезентирующая клетка включает модель экспрессии, кодирующей пептид. Полинуклеотид может быть любым подходящим полинуклеотидом, и, предпочтительно,чтобы он был способен к трансдукции дендритной клетки, таким образом, приводя к презентации пептида и индукции иммунитета. Как правило, нуклеиновая кислота по изобретению может быть включена в вирусный полинуклеотид или вирус. Например, аденовирус-трансдуцированные дендритные клетки проявляли способность индуцировать антиген-специфический противоопухолевый иммунитет по отношению к MUC1 (см. Gonget al. (1997), Gene Ther. 4, 1023-1028). Подобным образом могут быть использованы системы, основанные на аденовирусе (см., например, Wan et al. (1997), Hum. Gene Ther. 8, 1355-1363); могут быть использованы ретровирусные системы (Specht et al. (1997), J. Exp. Med. 186-1221 и Szabolcs et al. (1997), также может быть использован опосредованный частицами крови перенос в дендритные клетки (Tuting et al.(1997), Eur. J. Immunol. 27-2707); а также может быть использована РНК (Ashley et al. (1997), J. Exp. Med. 186, 1182). В целом фармацевтическая композиция по изобретению, содержащая (а) нуклеиновую(ые) кислоту(ы) по изобретению, может вводиться подобным образом, как и те, что содержат пептид(ы) по изобретению, например, внутривенно, внутриартериально, внутрибрюшно, внутримышечно, внутрикожно,внутрь опухоли, орально, дермально, назально, буккально, ректально, вагинально, с помощью ингаляции или посредством топического введения. По причине действия механизмов уклонения опухоль часто вырабатывает резистентность к медикаменту, которым она лечится. Резистентность к медикаменту может появиться во время лечения, и она проявляется в метастазах и рецидивировании опухоли. Во избежание таковой медикаментозной резистентности опухоль обычно лечат комбинацией медикаментов, и для лечения метастазов и опухоли, возвращающейся повторно после периода ремиссии, часто требуется комбинация, отличающаяся от первой. Поэтому, в одном аспекте изобретения фармацевтическая композиция вводится в соединении со вторым противораковым веществом. Второе противораковое вещество может вводиться до, после или одновременно с фармацевтической композицией по изобретению. Одновременное введение может быть достигнуто, например, при смешивании фармацевтической композиции по изобретению со вторым противораковым веществом, при условии совместимости их химических свойств. Другая возможность для одновременного введения - это введение композиции и противоракового вещества в один и тот же день, независимо от способа введения, так что фармацевтическая композиция по изобретению может быть, например, инъецирована, в то время как второе противораковое вещество вводится, например, орально. Фармацевтическая композиция и второе противораковое вещество могут также вводиться в рамках одного и того же курса лечения, но в разные дни и/или в рамках отдельных курсов лечения. В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает метод для лечения или предупреждения рака у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества любой из фармацевтических композиций по изобретению. Терапевтически эффективным количеством будет количество, достаточное для вызывания иммунного ответа, в частности, активации субпопуляции ЦТЛ. Специалист данной области может легко определить, будет то или иное количество эффективным, при использовании стандартных иммунологических методов, таких как те, что приводятся в примерах к настоящей спецификации. Другим способом мониторинга эффекта от конкретного количества фармацевтической композиции является наблюдение роста обработанной опухоли и/или ее рецидива. В особенно предпочтительном воплощении настоящего изобретения фармацевтическая композиция применяется в качестве противораковой вакцины. Композиция, содержащая пептиды или кодирующие пептиды нуклеиновые кислоты, может также формировать вакцину против опухоли или рака. Она может вводиться непосредственно пациенту, в пораженный орган или систематично, или вноситься ex vivo в клетки, полученные от пациента, или в человеческую клеточную линию, которые затем могут вводиться пациенту или использоваться in vitro для селекции субпопуляции из иммунных клеток, полученных от пациента, которые после этого вновь вводятся пациенту. Композиция по изобретению может использоваться в методе лечения или в качестве вакцины против рака. Рак может быть раком ротовой полости и глотки, раком пищеварительного тракта, раком толстой кишки, прямой кишки и анального отверстия, раком дыхательных путей, раком груди, раком шейки матки, влагалища и наружных половых органов, раком тела матки и яичника, раком мужских половых путей, раком мочевыводящих путей, раком костной и мягкой ткани и саркомой Капоши, меланомой ко- 23023928 жи, меланомой глаза и немеланомным раком глаза, раком головного мозга и центральной нервной системы, раком щитовидной железы и других эндокринных желез, лимфомой Ходжкина, лимфомой неХоджкина и миеломой, предпочтительно раком почки, колоректальным раком, раком легкого, раком груди, раком поджелудочной железы, раком простаты, раком желудка, раком головного мозга, гастроинтестинальной стромальной опухолью (GIST) или глиобластомой. В наиболее предпочтительном воплощении метода лечения или вакцины в соответствии с изобретением вакцина является комплексной пептидной противоопухолевой вакциной для лечения колоректального рака. Предпочтительно, чтобы вакцина включала комплекс опухолеассоциированных пептидов,выбранных из последовательностей SEQ ID NO: 1 по 15, которые локализованы и были идентифицированы на первичных клетках колоректального рака. Этот комплекс включает пептиды HLA класса I и II. Пептидный комплекс может также содержать по крайней мере один пептид, например, из корового антигена HBV, используемый в качестве пептида положительного контроля, служащего как антигенный маркер для проверки эффективности внутрикожного введения. В одном особенном воплощении вакцина состоит из 14 отдельных пептидов (в соответствии с SEQ ID NO: 1 по 15) с весом каждого пептида от около 1500 мкг до около 75 мкг, предпочтительно от около 1000 мкг до около 750 мкг и, более предпочтительно, от около 500 мкг до около 600 мкг и, наиболее предпочтительно, около 578 мкг, которые все могут быть очищены на ВЭЖХ и ионообменной хроматографии и получены в виде белого до сероватобелого порошка. Лиофилизат предпочтительно растворяют в гидрокарбонате натрия и используют для внутрикожной инъекции в течение 30 мин после восстановления при комнатной температуре. В соответствии с настоящим изобретением предпочтительные количества пептидов могут варьироваться между около 0,1 и 100 мг, предпочтительно между около 0,1 до 1 мг и, наиболее предпочтительно, между около 300 мкг до 800 мкг на 500 мкл раствора. Термин "около" подразумевает здесь 10% процентов заданного объема, если не указано другое. Специалист данной области будет способен установить фактическое количество пептида для использования, исходя из нескольких факторов, таких как, например, иммунный статус отдельного пациента и/или количество TUMAP (опухолеассоциированный пептид), который презентируется в конкретном виде рака. Пептиды настоящего изобретения могут обеспечиваться в других подходящих формах (стерильные растворы и т.д.) вместо лиофилизата. Фармацевтический препарат по настоящему изобретению, содержащий пептиды и/или нуклеиновую(ые) кислоту(ы) в соответствии с изобретением, водится пациенту, страдающему аденоматозным или раковым заболеванием, ассоциированным с соответствующим пептидом или антигеном. Тем самым может быть инициирован иммунный ответ, опосредованный Т-клетками. Предпочтительна фармацевтическая композиция в соответствии с изобретением, в которой количество (в особенности опухолеассоциированного(ых пептида(ов), нуклеиновых(ой) кислот(ы) в соответствии с изобретением или вектора(ов) экспрессии в соответствии с изобретением, как присутствующие в указанной композиции, являе(ю)тся ткане-, раково- и/или пациент-специфическим. В другом предпочтительном воплощении изобретения вакцина является вакциной из нуклеиновой кислоты. Известно, что инокуляция вакциной из нуклеиновой кислоты, такой как ДНК-вакцина, кодирующей полипептид, приводит к Т-клеточному ответу. Она может вводиться непосредственно пациенту,в пораженный орган или систематично, или вноситься ex vivo в клетки, полученные от пациента, или в человеческую клеточную линию, которые затем могут вводиться пациенту или использоваться in vitro для селекции субпопуляции из иммунных клеток, полученных от пациента, которые после этого вновь вводятся пациенту. Если нуклеиновая кислота введена в клетки in vitro, то может быть полезно, чтобы клетки были трансфецированными, чтобы коэкспрессировать иммуностимулирующие цитокины, такие как интерлейкин-2 или ГМ-КСФ (GM-CSF). Нуклеиновая(ые) кислота(ы) может/могут быть, по существу, чистым или комбинированным с иммуностимулирующим адъювантом или использоваться в комбинации с иммуностимулирующими цитокинами или вводиться с подходящей системой доставки, например, липосомами. Вакцина из нуклеиновой кислоты может также вводиться с адъювантом, таким как те,что описывались выше для пептидных вакцин. Предпочтительно, если вакцина из нуклеиновой кислоты вводится без адъюванта. Полинуклеотид может быть, по существу, чистым или содержаться в подходящем векторе или системе доставки. Подходящие векторы и системы доставки включают вирусные системы, такие как те, что основаны на аденовирусе, вирусе осповакцины, ретровирусах, вирусе герпеса, аденоассоциированном вирусе или гибридах, содержащих элементы более чем одного вируса. Невирусные системы доставки включают катионные липиды и катионные полимеры, хорошо известные из уровня техники в области доставки ДНК. Также может быть использована физическая доставка, такая как посредством "генпистолета". Пептид или закодированный нуклеиновой кислотой пептид может быть белком слияния, например, с эпитопом из столбнячного токсина, который стимулирует CD4-положительные Т-клетки. Соответственно, любая нуклеиновая кислота, вводимая пациенту, является стерильной и свободной от пирогенов. "Обнаженная" ДНК может вводиться внутримышечно или внутрикожно или подкожно. Обычно вакцина из нуклеиновой кислоты может включать любое подходящее средство доставки нуклеиновой кислоты. Нуклеиновая кислота, предпочтительно ДНК, может быть также доставлена в липосоме или как часть системы доставки вирусного вектора. Предпочтительно, если вакцина из нуклеиновой кислоты, такая как ДНК-вакцина, вводится в мышцу, тогда как пептидные вакцины предпочтительно вводятся s.c. или i.d. Предпочтительно также, если вакцина вводится в кожу. Полагают, что поглощение нуклеиновой кислоты и экспрессия закодированного полипептида профессиональными антигенпрезентирующими клетками, такими как дендритные клетки, может быть механизмом прайминга иммунного ответа; тем не менее, дендритные клетки могут не быть трансфецированы,однако они по-прежнему важны, так как они могут поглощать экспрессированный пептид из трансфецированных клеток в ткани ("кросс-прайминг", например, Thomas AM, Santarsiero LM, Lutz ER, Armstrongpatients. J. Exp Med. 2004 Aug 2; 200(3):297-306). Полинуклеотид-опосредованная иммунизационная терапия против рака описывается у Сопгу и соавторов (1996), Seminars in Oncology 23, 135-147; Condon et al. (1996), Nature Medicine 2, 1122-1127; GongJ. Cancer 65, 664-670; и Burchell et al. (1996), с. 309-313 В: Breast Cancer, Advances in biology and therapeutics, Calvo et al. (eds), John Libbey Eurotext, которые все включены в описание путем ссылки. Можно также с пользой направлять вакцину в специфические популяции клеток, например, в антигенпрезентирующие клетки либо на месте инъекции с использованием нацеленных векторов и систем доставки, либо при селективной очистке такой клеточной популяции у пациента с введением ex vivo пептида или нуклеиновой кислоты (например, дендритные клетки могут быть отсортированы, как описывается у Zhou и соавторов (1995), Blood 86, 3295-3301; Roth et al. (1996), Scand. J. Immunology 43, 646651). Например, нацеленные векторы могут включать ткане- или опухолеспецифический промотор, который направляет экспрессию антигена в подходящее место. Наконец, вакцина в соответствии с изобретением может зависеть от специфического типа рака, от которого страдает пациент, которому предназначено лечение, в равной степени, как и от статуса заболевания, ранних схем лечения, иммунного статуса пациента и, естественно, от HLA-гаплотипа пациента. В дальнейшем вакцина в соответствии с изобретением может содержать индивидуализированные компоненты, соответствующие личным потребностям отдельного пациента. Примерами являются различные количества пептидов в соответствии с экспрессией связанных с ними ТАА у конкретного пациента, нежелательными побочными эффектами в связи с аллергиями или другими лечениями и согласованием для вторичного лечения, следующего за первым циклом или схемой лечения. Кроме того, пептиды настоящего изобретения полезны не только для лечения рака, но и также в качестве диагностических средств. Так как пептиды были получены из глиобластомы, и так как было определено, что данные пептиды не присутствуют в нормальных тканях, то эти пептиды могут быть использованы для постановки диагноза о наличии рака. Присутствие пептидов настоящего изобретения на тканевых биоптатах может помочь патологу в постановке диагноза рака. Детекция конкретных пептидов настоящего изобретения с помощью антител,масс-спектрометрии или других методов, известных из уровня техники, может дать знать патологу, что ткань поражена злокачественным или воспалительным или же заболеванием общего порядка. Присутствие групп пептидов настоящего изобретения может сделать возможной классификацию или субклассификацию пораженных заболеванием тканей. Детекция пептидов настоящего изобретения на образцах пораженной заболеванием ткани может позволить принять решение о преимуществах от терапии, воздействующей на иммунную систему, в особенности, если Т-лимфоциты, как известно или ожидается, задействованы в механизме действия. Отсутствие экспрессии МНС является хорошо описанным механизмом, при котором инфицированные или злокачественные клетки уклоняются от иммунного надзора. Так, присутствие пептидов настоящего изобретения показывает, что данный механизм не используется проанализированными клетками. Пептиды настоящего изобретения могут использоваться для анализа ответов лимфоцитов на пептиды настоящего изобретения, таких как ответы Т-клеток или ответы антител на пептиды настоящего изобретения или пептиды настоящего изобретения в комплексе с молекулами МНС. Данные иммунные ответы лимфоцитов могут использоваться в качестве прогностических маркеров для принятия решения о дальнейших этапах терапии. Данные иммунные ответы могут также использоваться в качестве суррогатных маркеров в иммунотерапевтических подходах, направленных на индуцирование ответов лимфоцитов с помощью различных средств, как, например, вакцинации белком, нуклеиновыми кислотами, аутологичными материалами, адаптивного переноса лимфоцитов. При генной терапии ответы лимфоцитов на пептиды настоящего изобретения могут быть рассмотрены в рамках оценки побочных эффектов. Мониторинг ответов лимфоцитов может также быть ценным инструментом для последующих обследований в случае трансплантации, к примеру, для детекции реакций "хозяин против трансплантата" и "трансплантат против хозяина". Пептиды настоящего изобретения могут использоваться для генерации и разработки специфических антител к комплексам МНС/пептид. Они могут быть использованы в терапии, нацеливающей токсины или радиоактивные вещества на пораженную ткань. Другим видом использования данных антител может быть "нацеливание" радионуклидов на пораженную ткань в целях визуализации, такой как PET(позитронно-эмиссионная томография). Это может помочь в обнаружении небольших метастазов или в определении размера и точного расположения пораженных тканей. Кроме того, пептиды могут быть использованы для верификации диагноза патолога, поставленного на основании биоптата. В другом его аспекте настоящее изобретение относится к комплекту, включающему (а) контейнер,содержащий фармацевтическую композицию, описанную выше, в виде раствора или в лиофилизованной форме; (b) опционально, второй контейнер, содержащий разбавитель или восстанавливающий раствор для лиофилизованного состава; и (с) опционально, инструкции по (i) применению раствора или (ii) восстановителя, и/или по применению лиофилизованного состава. В дальнейшем оборудование может включать один или более (iii) буфер, (iv) разбавитель, (v) фильтр, (vi) иглу или (vii) шприц. Контейнер является, предпочтительно, флаконом, ампулой, шприцем или пробиркой; и он также может быть контейнером многоразового использования. Фармацевтическая композиция предпочтительно лиофилизована. Вспомогательное оборудование настоящего изобретения предпочтительно включает лиофилизованный состав настоящего изобретения в подходящем контейнере и инструкции для ее восстановления и/или по ее применению. Подходящие контейнеры включают, например, флаконы, ампулы (например,двухкамерные ампулы), шприцы (такие как двухкамерные шприцы) и пробирки. Контейнер может быть сделан из разнообразных материалов, таких как стекло или пластик. Предпочтительным образом, вспомогательное оборудование и/или контейнер содержит инструкции для, или связанные с контейнером,которые дают указания для восстановления и/или применения. Например, на этикетке может быть указано, что лиофилизованный состав должен восстанавливаться до пептидных концентраций, как те, что описаны выше. На этикетке в дальнейшем может быть указано, что состав применяется или предназначается для подкожного введения. Контейнер с составом может быть ампулой многоразового использования, которая позволяет повторное введение (например, от 2-6 введений) восстановленного состава. Вспомогательное оборудование может включать в дальнейшем второй контейнер, включающий подходящий разбавитель (например,раствор бикарбоната натрия). При смешивании разбавителя и лиофилизованного состава окончательная концентрация пептида в восстановленном составе составляет предпочтительно по крайней мере 0,15 мг/мл/пептид (=75 мкг) и предпочтительно не более чем 3 мг/мл/пептид (=1500 мкг). Вспомогательное оборудование может в дальнейшем включать другие материалы, желательные с коммерческой и с точки зрения пользователя,включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и упаковочные вкладыши с инструкциями по применению. Вспомогательное оборудование настоящего изобретения может иметь один контейнер, который содержит состав фармацевтических композиций в соответствии с настоящим изобретением с или без других компонентов (например, других соединений или фармацевтических композиций этих других соединений) или может иметь отдельные контейнеры для каждого компонента. Вспомогательное оборудование по изобретению предпочтительно включает состав по изобретению,укомплектованный для применения в комбинации с ковведением второго соединения (такого как адъюванты (например, ГМ-КСФ), химиотерапевтического средства, натурального продукта, гормона или антагониста, средства против ангиогенеза или ингибитора; апоптоз-индуцирующего средства или хелатора) или их фармацевтической композиции. Компоненты вспомогательного оборудования до введения пациенту могут предварительно быть организованы в комплекс, или же каждый компонент может находиться в отдельном отличном контейнере. Компоненты вспомогательного оборудования могут обеспечиваться одним или несколькими жидкостными растворами, предпочтительно, водным раствором, более предпочтительно, стерильным водным раствором. Компоненты вспомогательного оборудования могут также обеспечиваться твердой формой, которая может быть превращена в жидкости при добавлении подходящих растворителей, которые, предпочтительным образом, предоставляются в другом, отличном, контейнере. Контейнер терапевтического оборудования может быть ампулой, пробиркой, колбой, флаконом,шприцем или любыми другими средствами, заключающими в себе твердое вещество или жидкость. Обычно, если имеются более одного компонента, оборудование содержит вторую ампулу или другой контейнер, который позволяет отдельную дозировку. Оборудование может также содержать другой контейнер для фармацевтически приемлемой жидкости. Терапевтическое оборудование будет предпочтительно содержать приспособление (например, одну или более иглу, шприцы, пипетки для глаз, пипетки и т.д.), которое позволяет введение веществ по изобретению, которые являются компонентами настоящего оборудования. Фармацевтический состав настоящего изобретения подходит для введения пептидов любым приемлемым способом, таким как оральный (энтеральный), назальный, офтальный, подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутривенный или трансдермальный. Предпочтительно, чтобы введение былоs.c, и, наиболее предпочтительно, i.d. Введение может производиться инфузионным насосом. Должно быть понятно, что отличительные черты изобретения, раскрываемые и описываемые здесь,могут быть использованы не только в соответственной комбинации, как было показано, но и также по отдельности без выхода из рамок, обозначенных настоящим изобретением. В соответствии с целями настоящего изобретения все цитаты описания включены в их целостности путем ссылки. Теперь изобретение будет описано более детально посредством ссылок на последующие фигуры,список последовательностей и примеры. Следующие примеры приведены исключительно для иллюстрационных целей и не направлены на ограничение изобретения. Краткое описание фигур Фиг. 1. Тетрамерный анализ стимулированной микросферой пролиферации ODC-001 и NOX-001 специфических CD8+ лимфоцитов из периферической крови. ПК, обогащенные на лунку 1106 CD8+ здорового донора HLA-A0201+HD100 стимулировались еженедельно микросферами, связанными с анти-CD28 плюс опухолевый антиген высокой плотности A0201/ODC-001 (верхняя секция) или антиCD28 плюс опухолевый антиген высокой плотности A0201/NOX-001 (нижняя секция). После трех стимуляций in vitro все клетки были окрашены антителом CD8 FITC плюс тетрамеры A0201/NOX-001 РЕ иA0201/ODC-001 APC. Клетки высаживаются в популяцию лимфоцитов или CD8+ лимфоцитов (правая секция), и числа показывают процентную долю тетрамера+ внутри лимфоцитов CD8+. Фиг. 2. Иммуногенность in vitro TGFBI-004, обнаруженного IFN- ELISPOT после пяти циклов стимуляции. Клетки примировали и стимулировали повторно TGFBI-004, а затем инкубировали с релевантным TGFBI-004 (лунки 1, 2, 3 и 4) и нерелевантным (отриц. контроль) пептидом соответственно. Анализ после IFN- ELISPOT был произведен на ELISPOT-ридере (CTL, Cleveland, США). ФГАиономицин служил положительным контролем. Числа указывают на количество положительных точек. Фиг. 3. Иммуногенность in vitro TGFBI-004, обнаруженного методом ICS после пяти циклов стимуляции. Клетки примировали аутологичными ДК с нагруженным TGFBI-004 и рестимулировали аутологичными МПК плюс TGFBI-004. Для считывания клетки инкубировали с релевантным TGFBI-004 (лунки 1, 2, 3 и 4) и нерелевантным (отриц. контроль) пептидом соответственно. В дополнение к внутриклеточному окрашиванию IFN-, клетки были также окрашены антителами CD4-FITC и CD8-PerCP. Анализ проводили на четырехцветном цитометре FACSCalibur (BD Biosciences, Германия). Фиг. 4. Анализ ELISPOT выработки IFN- линиями Т-клеток при рестимуляции in vitro пептидомELISPOT после рестимуляции нерелевантным (MLA-001) (верхние лунки) и релевантным (NOX-001)(нижние лунки) пептидом (10 мкг/мл). Числа указывают на количество положительных точек. Фиг. 5. Частотность СЕА-004-специфических CD8+ Т-клеток у 4 HLA-A2 здоровых доноров после стимуляции in vitro CEA-004, как было определено проточным цитометрическим анализом. Фиг. 6. Афинность пептидов HLA I класса по изобретению к молекуле МНС, закодированной аллелем HLA-A0201. Примеры 1. Синтез и структура. Пептиды были синтезированы стандартным и общепринятым методом твердофазного синтеза с использованием способа Fmoc. После очистки на препаративной ВЭЖХ проводилась ионообменная процедура для внедрения физиологически совместимых противоионов (ацетат или хлорид). Наконец, после лиофилизации были получены белые или серовато-белые твердые вещества. Все пептиды TUMAP вводят в виде солей ацетата за исключением IMA-CCN-001, который применяется в виде соли хлорида - это обусловлено техническими причинами во время процесса производства. Особенно важно, что принадлежность и чистота пептидов могут быть легко определены, причем с высокой точностью, с помощью масс-спектрометрии, аминокислотного анализа и аналитической ВЭЖХ. Как показали аналитические результаты все пептиды, использованные для вакцины IMA910, обладают правильной структурой с чистотой 95%. Измерение распределения размеров частиц и формы частиц, полученных после восстановления,производили при получении прямого изображения каждой отдельной частицы в диапазоне от 0,25 до 100 мкм с последующим анализом изображений. В результате большинство (95%) частиц находилось в диапазоне от 0,25 до 2,7 мкм. Итак, не наблюдалось существенных различий по размеру и распределению формы в течение 1, 2 или 3 ч после восстановления. 2. Компоненты на примере фармацевтической композиции IMA910.IMA910 составлена из "коктейля" синтетических опухолеассоциированных пептидов (TUMAPs),большинство из которых было выявлено на первичных клетках колоректального рака. Пептиды TUMAP включают 10 пептидов, связывающихся с HLA I класса, со способностью активировать цитотоксические Т-клетки (CD8+ Т-клетки) и 3 пептида, связывающиеся с HLA II класса, со способностью активировать хелперные Т-клетки (CD4+ Т-клетки). Хелперные Т-клетки играют центральную роль при поддержке функции цитотоксических Т-клеток при высвобождении цитокинов, которые усиливают киллерную функцию CD8+ Т-клеток и могут также напрямую выступать против опухолевых клеток (Knutson, KLDisord., 2005, 5, 365-371). В дополнение к этому данные 13 TUMAP-пептидов IMA910 содержат один вирусный контрольный пептид. Пробы хирургически удаленной злокачественной и нормальной ткани пациентов с КРР и кровь здоровых доноров были проанализированы поэтапно: Сначала для определения гиперэкспрессированных генов в злокачественной ткани по сравнению с диапазонами показателей для нормальных органов и тканей применялся анализ экспрессии мРНК всего генома с помощью микрочипов. На втором этапе лиганды HLA злокачественного материала идентифицировались с помощью массспектрометрии. Затем, идентифицированные лиганды HLA сравнивали с данными по генной экспрессии. Пептиды,кодируемые выборочно экспрессированными или гиперэкспрессироваными генами, выявленными на этапе 1, считались подходящими TUMAP-кандидатами для мультипептидной вакцины. Был произведен поиск литературы для выявления дополнительных свидетельств, подтверждающих релевантность идентифицированных в качестве TUMAP пептидов. Наконец, периферические CD8+ Т-клетки здоровых индивидов тестировали на реактивность по отношению к опухолеассоциированным лигандам HLA посредством нескольких иммунных анализов (inTUMAP. Кроме того, будет включен вирусный пептид-маркер HBV-001, которого нет в списке 3. Презентация эпитопов, содержащихся в IMA910, в опухолевых пробах. Получение. Хирургически удаленные тканевые препараты были предоставлены Университетской клиникой общей, висцеральной и трансплантационной хирургии г. Тюбинген (Германия) после получения формы информированного согласия от каждого пациента.