Молекулы гуманизированных антител, специфичных к il-31

Настоящее изобретение предлагает гуманизированные мышиные антитела и фрагменты антител против IL-31, которые способны связывать IL-31 и посредством этого нейтрализовать,ингибировать или уменьшать провоспалительные или вызывающие зуд эффекты IL-31. Уровень техники изобретения Обнаружено, что повышенная экспрессия IL-31 недавно идентифицированного цитокина вызывает у мышей дерматит-подобные симптомы. См. Dillon et al., Nature Immunol. 5:752-760, 2004. Эти симптомы можно облегчить путем применения антагонистов, которые блокируют, ингибируют, уменьшают, препятствуют или нейтрализуют активность IL-31 и включают антитела против IL-31. См. также патентную заявку США 10/352554, поданную 21 января 2003 г. (публикация патента США 2003-0224487), сейчас патенты США 7064186, 7425325 и 7459293. Технология моноклональных антител предоставляет широкий ряд терапевтических и диагностических средств, используемых для выявления и лечения заболевания. Описан ряд рекомбинантных или биосинтетических молекул, содержащих антигенсвязывающие участки грызунов. В частности, описаны молекулы, содержащие антигенсвязывающие участки грызунов, полученные непосредственно из человеческих антител путем прививания на домены тяжелых и легких цепей человеческих иммуноглобулинов только связывающего участка грызуна, а не целого вариабельного домена. См., например, Riechmann etal. (1988) Nature 332:323-327 и Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536. Молекулы, содержащие антигенсвязывающий участок, в которых по меньшей мере один из гипервариабельных участков (CDR) вариабельного домена получен из мышиного моноклонального антитела, а остальные иммуноглобулиновые фрагменты молекулы получены из человеческого иммуноглобулина, описаны в публикации патента Соединенного КоролевстваGB 2276169, опубликованного 21 сентября 1994 г. Также описан ряд одноцепочечных полипептидов антигенсвязывающего участка и одноцепочечных Fv (sFv) молекул. См.,например, патенты США 5132405 и 5091513, Huston et al. и патент США 4946778, Ladner et al. Мышиные моноклональные антитела против человеческого IL-31 описаны ранее в патентной заявке США 11/430066, поданной 8 мая 2006 г. (публикация патента США 2006-02752960), где раскрываются мышиные моноклональные антитела, которые распознают человеческий IL-31 и могут использоваться для получения химерных антител. Однако химерные антитела могут вызывать иммунный ответ,поэтому предпочтительными являются гуманизированные мышиные антитела против человеческого IL31. Гуманизированные антитела, предназначенные для лечения человека, как правило, имеют по меньшей мере три потенциальных преимущества по сравнению с мышиными и, в некоторых случаях, химерными антителами:(1) поскольку эффекторный фрагмент является человеческим, они могут лучше взаимодействовать с другими частями человеческой иммунной системы (например, они могут более эффективно разрушать клетки-мишени по механизму комплементзависимой цитотоксичности (CDC) или антитело-зависимой цитотоксичности (ADCC;(2) человеческая иммунная система не распознает каркасный или константный участок гуманизированного антитела как чужеродный, и, следовательно, гуморальный ответ на введение такого антитела должен быть менее интенсивным, чем на введение полностью чужеродного мышиного антитела или частично чужеродного химерного антитела; и(3) как описано, период полужизни мышиных антител в кровотоке человека гораздо меньше, чем период полужизни нормальных антител (D. Shaw et al., J. Immunol, 138, 4534-4538 (1987. Вероятно, период полужизни гуманизированных антител более близок к периоду полужизни природных человеческих антител, что позволяет вводить их в более низких дозах и с меньшей частотой. Таким образом, существует потребность в молекулах, которые представляют аминокислотные последовательности гуманизированного вариабельного участка для мышиного антитела против человеческого IL-31, предназначенного для лечения IL-31-опосредованного воспаления. Сущность изобретения В одном аспекте настоящее изобретение относится к выделенному антителу, которое связывается с человеческим IL-31 и содержит: а) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 1, 2 и 3 соответственно или состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 1, 4 и 3 соответственно;b) гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 5, 6 и 7. В другом аспекте изобретение относится к описанным в данном документе антителам, где: а) указанный гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи содержит каркасные участкиFR1, FR2, FR3 и FR4, имеющие аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, включающей: 1) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 (FR1), 9 (FR2), 10 (FR3) и 11 (FR4) соответственно; 2) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (FR1), 13 (FR2), 14 (FR3) и 15 (FR4) соответственно; 3) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (FR1), 13 (FR2), 16 (FR3) и 15 (FR4) соответственно; иb) указанный гуманизированный вариабельный домен легкой цепи включает каркасные участкиFR5, FR6, FR7 и FR8, содержащие аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности каркасных участков, выбранных из группы, включающей: 1) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 (FR5), 18 (FR6), 19 (FR7) и 20 (FR8) соответственно; и 2) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 (FR5), 18 (FR6), 21 (FR7) и 20 (FR8),соответственно. В одном воплощении указанная идентичность составляет по меньшей мере 95%, еще более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где аминокислота в положении 29 FR1 тяжелой цепи представляет собой лейцин, а аминокислота в положении 32 FR3 тяжелой цепи представляет собой фенилаланин. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где аминокислота в положении 8 FR3 тяжелой цепи представляет собой лизин, а аминокислота в положении 15 FR7 легкой цепи представляет собой тирозин. В следующем аспекте настоящее изобретение относится к выделенному антителу, которое связывается с человеческим IL-31 и содержит: а) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит CDR1 и CDR3, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1 и 3 соответственно, и CDR2, имеющий аминокислотную последовательность AIYPGDGDTRYSXaa1Xaa2FXaa3G(SEQ ID NO: 22), где Xaa1 представляет собой глутамин или пролин, Хаа 2 представляет собой серин или лизин, а Хаа 3 представляет собой глутамин или лизин; указанный гуманизированныей вариабельный домен тяжелой цепи включает каркасные участки FR1, FR2, FR3 и FR4, содержащие аминокислотную последовательность по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности: SEQ IDNO: 8, 9, 10 и 11, соответственно, или SEQ ID NO: 12, 13, 14 и 15 соответственно, или SEQ ID NO: 12, 13,16 и 15 соответственно при условии, что аминокислота в положении 29 FR1 представляет собой лейцин,а аминокислота в положении 32 FR3 представляет собой фенилаланин; b) гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит CDR, состоящие из аминокислотных последовательностейSEQ ID NO: 5, 6 и 7, причем указанный гуманизированный вариабельный домен легкой цепи включает каркасные участки FR5, FR6, FR7 и FR8, содержащие аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17, 18, 19 и 20 соответственно, или по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17, 18,21 и 20 соответственно. В одном аспекте настоящего изобретения указанная идентичность составляет по меньшей мере 95%, еще более предпочтительно по меньшей мере 98%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где аминокислота в положении 8 FR3 тяжелой цепи представляет собой лизин, а аминокислота в положении 15 FR7 легкой цепи представляет собой тирозин. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где аминокислота Xaa1 представляет собой глутамин, Хаа 2 представляет собой лизин, а Хаа 3 представляет собой лизин; аминокислотаXaa1 представляет собой пролин, Хаа 2 представляет собой серин, а Хаа 3 представляет собой глутамин; или аминокислота Xaa1 представляет собой глутамин, Хаа 2 представляет собой лизин, а Хаа 3 представляет собой глутамин. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где CDR вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 1, 4 и 3 соответственно, CDR вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 5, 6 и 7, соответственно, каркасные участки вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 8, 9, 10 и 11 соответственно и каркасные участки вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 17, 18, 19 и 20 соответственно. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где CDR вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 1, 2 и 3 соответственно, CDR вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 5, 6 и 7 соответственно, каркасные участки вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 12, 13, 14 и 15 соответственно, а каркасные участки вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 17, 18, 19 и 20 соответственно. В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, как описано в данном документе, где CDR вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 1, 2 и 3 соответственно, CDR вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 5, 6 и 7 соответственно, каркасные участки вариабельного домена тяжелой цепи состоят из SEQ ID NO: 12, 13, 16 и 15 соответственно, а каркасные участки вариабельного домена легкой цепи состоят из SEQ ID NO: 17, 18, 21 и 20 соответственно. Из примеров и приведенных в данном описании разъяснений очевидно, что присутствие лейцина в положении 29 FR1 и фенилаланина в положении 32 FR3 гуманизированных антител, описанных в данном документе, оказывает положительное воздействие на аффинность и активность указанных антител. Как показано, например, с помощью анализа Biacore, аффинность связывания гуманизированных антител, несущих и лейцин в положении 29 FR1, и фенилаланин в положении 32 FR3, выше, чем у гуманизированных антител, которые несут другие аминокислоты в этих положениях (по сравнению, например, с клонами под номерами 7, 10, 13 и 14 в табл. 2 примера 3) . Положительное влияние указанных аминокислот в положениях 29 FR1 и 94 FR3 тяжелой цепи на аффинность и активность также было подтверждена двумя другими биологическими анализами (см. примеры 4 и 5). В одном воплощении настоящего изобретения антитело, раскрытое в данном описании, содержит константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранный из группы, включающей константный участок , , ,илитяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. В одном воплощении настоящего изобретения антитело, раскрытое в данном описании, содержит константный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранный из группы, включающей константный домен человеческого IgG1; константный домен человеческого IgG2; константный домен человеческого IgG3; константный домен человеческогоIgG4; константный домен человеческого IgM; константный домен человеческого IgE и константный домен человеческого IgA. В одном воплощении константный домен человеческого IgG4 представляет собой мутантную форму, стабильную в растворе и обладающую низкой комплемент-активирующей активностью, или не обладающую такой активностью. В одном воплощении домен константного участка тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой константный домен человеческого IgG4 с заменой Ser на Pro в положении 241 (нумерация Kabat). В одном воплощении домен константного участка легкой цепи иммуноглобулина выбран из группы, включающей константный участок - или -легкой цепи человеческого иммуноглобулина. Предпочтительно домен константного участка легкой цепи иммуноглобулина представляет собой константный участок к-легкой цепи человеческого иммуноглобулина. Подробное описание изобретения Перед подробным описанием изобретения для его более полного понимания приводятся определения нижеследующих терминов. В данном описании термин "антитела" включает поликлональные антитела, аффинно-очищенные поликлональные антитела, моноклональные антитела, а также антигенсвязывающие фрагменты, такие как F(ab')2, протеолитические фрагменты Fab и фрагменты одноцепочечного вариабельного участка(scFv). В объем данного термина также входят полученные с помощью методов генной инженерии интактные антитела или фрагменты, такие как химерные антитела, фрагменты Fv, одноцепочечные антитела и т.п., а также синтетические антигенсвязывающие пептиды и полипептиды. Нечеловеческие антитела можно гуманизировать путем прививания нечеловеческих CDR на человеческие каркасные и константные участки, или путем введения целых нечеловеческих вариабельных доменов (необязательно "маскируя" их поверхностью, подобной человеческой, путем замены поверхностных остатков с получением в результате "облицованного" антитела). В некоторых случаях гуманизированные антитела могут сохранять нечеловеческие остатки в каркасных доменах человеческих вариабельных участков, если это приводит к улучшению характеристик связывания. Гуманизированные антитела могут характеризоваться более продолжительным периодом биологической полужизни и пониженной вероятностью неблагоприятных иммунных реакций после введения людям. Термин "химерное антитело" или "химерные антитела" относится к антителам, гены легких и тяжелых цепей которых конструируют, как правило, методами генной инженерии из генов вариабельных и константных участков иммуноглобулинов, принадлежащих к разным видам. Например, вариабельные сегменты генов мышиного моноклонального антитела можно присоединить к человеческим константным сегментам, таким как гамма 1 и гамма 3. Таким образом, типичное терапевтическое химерное антитело представляет собой гибридный белок, содержащий вариабельный или антигенсвязывающий домен мышиного антитела и константный домен человеческого антитела, хотя можно использовать фрагменты антител других видов млекопитающих. В данном описании термин "иммуноглобулин" относится к белку, состоящему из одного или нескольких полипептидов, в основном кодируемых генами иммуноглобулинов. Одна форма иммуноглобулина составляет основной структурный элемент антитела. Данная форма представляет собой тетрамер и состоит из идентичных пар иммуноглобулиновых цепей, каждая из которых содержит одну легкую и одну тяжелую цепь. В каждой паре вариабельные участки легкой и тяжелой цепей вместе отвечают за связывание с антигеном, а константные участки отвечают за эффекторные функции антитела. Полноразмерные "легкие цепи" иммуноглобулинов (примерно 25 кДа или 214 аминокислот) кодируются геном вариабельного участка с NH2-конца (примерно 110 аминокислот) и геном константного участка каппа или лямбда с СООН-конца. Полноразмерные "тяжелые цепи" иммуноглобулинов (примерно 50 кДа или 446 аминокислот) подобным образом кодируются геном вариабельного участка (примерно 116 аминокислот) и одним из других вышеуказанных генов константных участков (примерно 330 аминокислот). Тяжелые цепи, которые классифицируют как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, определяют изотип антитела, например IgG, IgM, IgA, IgD и IgE соответственно. В легких и тяжелых цепях вариабельные и константные участки соединяются участком "J", состоящим примерно из 12 или более аминокислот, а тяжелые цепи также содержат участок "D", состоящий примерно из 10 или более аминокислот.(См. в основном Fundamental Immunology (Paul W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989), Ch. 7 (приведенное в данной публикации описание получения антител и фрагментов антител включено в настоящий документ в виде ссылки). Вариабельный участок легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина состоит из "каркасного" участка, в который вставлены три гипервариабельных участка. Так, термин "гипервариабельный участок" от-3 020457 носится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельный участок содержит аминокислотные остатки из "участка, определяющего комплементарность" или "CDR" (т.е., остатки 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 31-35 (H1), 50-65 (Н 2) и 95-102 (НЗ) в вариабельном домене тяжелой цепи (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991 и/или остатки из "гипервариабельной петли" (т.е. остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 9196 (L3) в вариабельном домене легкой цепи и 26-32 (H1), 53-55 (Н 2) и 96-101 (Н 3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Chothia и Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917) (обе указанные публикации включены в данное описание в виде ссылки). Остатки "каркасного участка", или "FR", представляют собой остатки вариабельного домена, отличные от остатков гипервариабельного участка, как указано в данном описании. Последовательности каркасных участков разных легких или тяжелых цепей являются относительно консервативными среди разных видов. Так, "человеческий каркасный участок" представляет собой каркасный участок, практически идентичный (примерно на 85% или более, как правило, на 90-95% или более) каркасному участку природного человеческого иммуноглобулина. Каркасный участок антитела, который представляет собой объединенные каркасные участки, входящие в состав легких и тяжелых цепей,служит для позиционирования и упорядочивания CDR. CDR главным образом отвечают за связывание с эпитопом антигена. Соответственно термин "гуманизированный" иммуноглобулин относится к иммуноглобулину, который содержит человеческий каркасный участок и один или несколько CDR из нечеловеческого (как правило, мышиного или крысиного) иммуноглобулина. Нечеловеческий иммуноглобулин, являющийся источником CDR, называют "донорным", а человеческий иммуноглобулин, являющийся источником каркасного участка, называют "акцепторным". Присутствие константных участков не обязательно, но если они все-таки присутствуют, они должны быть практически идентичными константным участкам человеческого иммуноглобулина, т.е. идентичными по меньшей мере примерно на 85-90%, предпочтительно примерно на 95% или более. Следовательно, все фрагменты гуманизированного иммуноглобулина, за исключением, возможно, CDR, являются практически идентичными соответствующим фрагментам последовательностей природного человеческого иммуноглобулина. "Гуманизированные антитело" представляет собой антитело, которое содержит гуманизированную легкую цепь и гуманизированную тяжелую цепь иммуноглобулина. Например, термин "гуманизированные антитело" не охватывает типичное химерное антитело, определенное выше, поскольку, например, весь вариабельный участок химерного антитела является нечеловеческим. Термин "рекомбинантные антитела" относится к антителам, аминокислотные последовательности которых отличаются от последовательностей нативных антител. Поскольку для получения антител можно использовать методы рекомбинантных ДНК, не следует ограничиваться последовательностями аминокислот, присутствующими в природных антителах; антитела можно реконструировать с получением желательных характеристик. Возможные вариации являются многочисленными и варьируют от изменения только одной или нескольких аминокислот до полного реконструирования, например, вариабельного или константного участка. Изменения в константном участке, как правило, осуществляют с целью улучшения или изменения таких характеристик, как фиксация комплемента, взаимодействие с мембранами и другие эффекторные функции. Изменения в вариабельном участке осуществляют с целью улучшения характеристик связывания антигена. Помимо антител иммуноглобулины могут существовать в виде ряда других форм, включающих,например, одноцепочечные фрагменты, или Fv, Fab и (Fab')2, а также диатела, линейные антитела, поливалентные или полиспецифические гибридные антитела (как описано выше и более подробно в: Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987 и в виде одноцепочечных антител (например, Huston et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85, 5879-5883 (1988) и Bird et al., Science, 242, 423-426 (1988), которые включены в данное описание в виде ссылки относительно фрагментов антител). (See, generally, Hood et al.,"Immunology", Benjamin, N.Y., 2nd ed. (1984) и Hunkapiller и Hood, Nature, 323, 15-16 (1986), которые включены в данное описание в виде ссылки для антител). В данном описании термины "одноцепочечный Fv", "одноцепочечные антитела", "Fv" или "scFv" относятся к фрагментам антител, которые в одной полипептидной цепи содержат вариабельные участки из тяжелой и легкой цепей, но не содержат константные участки. Как правило, одноцепочечное антитело дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет им формировать желательную структуру, обеспечивающую связывание антигена. Одноцепочечные антитела обсуждаются подробно Pluckthun в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg andMoore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); см. также публикацию международной патентной заявкиW0 88/01649 и патенты США 4946778 и 5260203, описание которых включено в данный документ в виде ссылки с любой целью. В конкретных воплощениях одноцепочечные антитела также могут быть биспецифическими и/или гуманизированными."Фрагмент Fab" состоит из одной легкой цепи и CH1 и вариабельных участков одной тяжелой цепи. Тяжелая цепь молекулы Fab не может образовывать дисульфидные связи с другой молекулой тяжелой цепи."Фрагмент Fab'" состоит из одной легкой цепи и одной тяжелой цепи, которая содержит больше константных участков между доменами CH1 и СН 2, так что между двумя тяжелыми цепями может образоваться дисульфидная связь с получением молекулы F(ab')2."Фрагмент F(ab')2" состоит из двух легких цепей и двух тяжелых цепей, содержащих фрагмент константного участка между доменами CH1 и СН 2, так что между двумя тяжелыми цепями образуется дисульфидная связь. Следует понимать, что молекулярные массы и длины полимеров, определенные с помощью неточных аналитических методов (таких как гель-электрофорез), представляют собой приблизительные значения. Если такое значение выражают как "примерно" X или "приблизительно" X, следует понимать, что фактическое значение X определяется с точностью до 10%. Все документы, цитирующиеся в данном описании, включены в него в виде ссылки во всей своей полноте. В основе настоящего изобретения лежит разработка гуманизированных мышиных последовательностей антител против вариабельного участка человеческого IL-31. Данные антитела, используемые в качестве антагонистов IL-31, могут ингибировать воспаление в целом и, в частности, симптомы дерматита и заболеваний, сопровождающихся зудом. Изобретение предлагает применение гуманизированных участков легких и тяжелых цепей антител, которые распознают, связывают и/или нейтрализуют полипептид IL-31. Такие гуманизированные участки легких и тяжелых цепей можно гибридизовать с константным участком иммуноглобулина, такого как, например, IgG4 или IgG1, и экспрессировать в ряде клеток-хозяев. Гуманизированные последовательности против вариабельного участка IL-31, описанные в данном документе, получают с использованием аминокислотных последовательностей вариабельных участков легких и тяжелых цепей мышиных моноклональных антител против человеческого IL-31, ранее описанных в патентной заявке США 11/430066, поданной 8 мая 2006 г. (публикация патента США 2006-02752960), которая включена в данное описание в виде ссылки. Антитела могут включать антитела или фрагменты антител, которые содержат, или в состав которых входят вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, и могут представлять собой химерные антитела, гуманизированные антитела или фрагменты антител, которые способны нейтрализовать, ингибировать, уменьшать, предотвращать или минимизировать эффекты IL-31, опосредуемые его рецептором. Клинические результаты воздействия антител или фрагментов антител могут включать ослабление воспалительных и аутоиммунных заболеваний, таких как дерматит, в особенности атопический дерматит, заболевания, сопровождающиеся зудом, и болезнь Крона, как далее описано в данном документе. В одном воплощении дерматит представляет собой атопический дерматит. В другом воплощении дерматит представляет собой узелковую почесуху. В другом воплощении дерматит представляет собой экзему. Ослабление также может выражаться в уменьшении зуда, чесания или облысения.IL-31 представляет собой недавно открытый цитокин Т-клеток, который в случае повышенной экспрессии вызывает у мышей дерматит-подобные симптомы. См. Dillon, et al., Nature Immunol. 5:752-760,2004. IL-31 - это название по номенклатуре HUGO цитокина, который ранее был описан как Zcyto17rlig в патентной заявке США 10/352554, поданной 21 января 2003 г. (публикация патента США 20030224487), сейчас патент США 7064186, Sprecher, Cindy et al., 2003, включенный в данное описание в виде ссылки). См. также, Dillon et al., Nature Immunol., выше. Аминокислотная последовательность человеческого IL-31 показана в SEQ ID NO: 24. Анализ тканей показывает, что мышиный IL-31 экспрессируется в семенниках, мозге, клетках CD90+, клетках простаты, слюнных железах и коже. Гетеродимерный рецептор IL-31 описан в публикации патента США 20030224487 как zcytor17(наименование по номенклатуре HUGO, IL-31RA), который образует гетеродимер с рецептором OncostatinM бета (OSMRbeta). IL-31 получают с использованием библиотеки кДНК, полученной из активированных клеток периферической крови человека (hPBC), отобранных по CD3. CD3 представляет собой маркер клеточной поверхности, специфичный для клеток лимфоидного происхождения, в частности Тклеток. Ингибирование, нейтрализацию или блокирование передачи сигнала под действием молекул, содержащих гуманизированное мышиное антитело против человеческого вариабельного домена легкой цепи и/или гуманизированное мышиное антитело против человеческого вариабельного домена тяжелой цепи, называемых в данном описании "молекулы, связывающие антиген IL-31" или "антагонисты IL-31",можно измерить с помощью ряда анализов, известных специалистам в данной области. Например, анализы, с помощью которых можно измерить уменьшение пролиферации, включают анализы изменения состояния красителя, такого как AlamarBlue (AccuMed International, Inc. Westlake, Ohio), 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолия бромид (Mosman, J. Immunol. Meth. 65:55-63, 1983); 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-5-3-карбоксиметоксифенил-2 Н-тетразолий; 2,3-бис-(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-5-[(фениламино)карбонил]-2 Н-тетразолия гидроксид и цианодитолил-тетразолия хлорид (которые производит Polysciences, Inc., Warrington, PA); анализы митогенеза, такие как измерение включения 3 Н-тимидина; анализы высвобождения красителя с использованием, например, нафталинового черного или трипанового синего; анализы поглощения красителя с использованием диацетилфлуоресцеина и высвобождения хрома. См., в общем плане, Freshney, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique,3rd ed., Wiley-Liss, 1994, включенный в данное описание в виде ссылки. Помимо вышеуказанного, см. публикацию патента США 20030224487, (Sprecher, Cindy et al., 2003), в которой описаны клетки BaF3,экспрессирующие IL-31RA и полноразмерный OSMRbeta, или примеры анализов активности, описанные в данном документе. Способы получения полинуклеотидов (в том числе ДНК и РНК), кодирующих описанные здесь антитела, хорошо известны в данной области. Общую РНК получают путем экстракции с использованием гуанидинизотиоцианата и затем выделяют центрифугированием в градиенте CsCl (Chirgwin et al., Biochemistry 18:52-94, 1979). Поли (А)+ РНК получают из общей РНК по способу Aviv и Leder (Proc. Natl.Acad. Sci. USA 69:1408-12, 1972). Комплементарную ДНК (кДНК) получают из поли(А)+ РНК с помощью известных способов. Альтернативно можно выделить геномную ДНК. Затем идентифицируют полинуклеотиды, кодирующие антитела против IL-31, и выделяют их, например, методом гибридизации или ПЦР. Настоящее изобретение также включает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31,или антагонисты IL-31, которые связывают функциональные фрагменты полипептидов IL-31, и молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие функциональные фрагменты. "Функциональный" IL-31 или его фрагмент в данном описании характеризуется пролиферативной или дифференцирующей активностью, способностью индуцировать или ингибировать специализированные клеточные функции, или способностью специфически связывать антитело против IL-31 или гетеродимеры IL-31RA/OSMRbeta указанных рецепторов (растворимые или иммобилизованные). Таким образом, настоящее изобретение также предлагает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, которые связывают молекулу полипептида, содержащего один или несколько функциональных фрагментов IL-31. Настоящее изобретение также предлагает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL31, или антагонисты IL-31, которые связываются с полипептидными фрагментами или пептидами, содержащими эпитоп-несущую часть полипептида IL-31, или иммуногенный эпитоп, или антигенный эпитоп. Связывание антитела с указанными эпитопами приводит к ингибированию, блокированию, нейтрализации и/или уменьшению передачи сигнала IL-31 или его рецептора. Мышиные моноклональные антитела против человеческого IL-31 описаны ранее в одновременно рассматриваемой патентной заявке США 11/430066, поданной 8 мая 2006 г. (публикация патента США 2006-02752960). Аминокислотные последовательности вариабельных участков мышиных антител против человеческого IL-31 описаны в одновременно рассматриваемой патентной заявке США 11/850006, поданной 4 сентября 2007 г., и в принадлежащей тем же владельцам заявке РСТ US 07/77555,поданной 4 сентября 2007 г., которые включены в данное описание в виде ссылки на последовательности вариабельных участков и способы получения антител. Указанные аминокислотные последовательности используют в качестве исходных веществ для получения описанных в данном документе гуманизированных последовательностей. В частности, последовательность мышиного антитела против человеческого IL-31 получают с использованием гибридомы с номером клона 292.12.3.1. Активность антител, описанных в данном документе, можно определить путем анализа их способности ингибировать или уменьшать пролиферацию с помощью ряда способов, позволяющих измерить пролиферацию клеток, экспрессирующих рецептор IL-31RA, и/или связывание с такими клетками. Особый интерес представляют изменения в IL-31-зависимых клетках. Клеточные линии, подходящие для получения методом генной инженерии IL-31-зависимых клеток, включают IL-3-зависимую клеточную линию BaF3 (Palacios and Steinmetz, Cell 41:727-734, 1985; Mathey-Prevot et al., Mol. Cell. Biol. 6:41334135, 1986), FDC-P1 (Hapel et al., Blood 64:786-790, 1984) и M07e (Kiss et al., Leukemia 7:235-240, 1993). Зависимые от фактора роста клеточные линии можно получить с помощью описанных способов (например, Greenberger et al., Leukemia Res. 8:363-375, 1984; Dexter et al., in Baum et al. Eds., Experimental Hematology Today, 8th Ann. Mtg. Int. Soc. Exp. Hematol. 1979, 145-156, 1980). Активность гуманизированныех антител против IL-31 или антагонистов IL-31 также можно измерить с помощью анализа пролиферацииBaF3, анализа Biacore или анализов NHK, описанных в данном документе. В одном воплощении домен константного участка тяжелой цепи иммуноглобулина выбран из группы, включающей константный участок тяжелой цепи , , ,иличеловеческого иммуноглобулина. Указанный константный участок может представлять собой константный участок тяжелой цепи 1, 2, 3 или 4 человеческого иммуноглобулина. В другом воплощении домен константного участка легкой цепи иммуноглобулина выбран из группы, включающей константный участок легкой цепи к иличеловеческого иммуноглобулина. В другом воплощении тяжелая константная цепь представляет собой человеческую цепь 4, стабильную в растворе и обладающую низкой комплемент-активирующей активностью, или не обладающую такой активностью. В другом воплощении тяжелая константная цепь представляет собой человеческую цепь 1. Иммуноглобулин может быть выбран из любого из основных классов иммуноглобулинов, вклю-6 020457 чающих IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и любых подклассов или изотипов, например IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4;IgA-1 и IgA-2. Ингибирование активности IL-31 можно измерить с помощью ряда анализов. Помимо анализов,раскрытых в данном описании, образцы можно тестировать на ингибирование активности IL-31 с помощью ряда анализов, разработанных для определения связывания рецептора, стимулирования/ингибирования IL-31-зависимых клеточных ответов или пролиферации клеток, экспрессирующих рецептор IL-31RA.IL-31-связывающий полипептид, включающий молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, также можно использовать для очистки лиганда. Полипептид иммобилизуют на твердом носителе, таком как гранулы агарозы, поперечно-сшитая агароза, стекло, целлюлозные смолы, смолы на основе оксида кремния, полистирол, поперечно-сшитый полиакриламид или подобные вещества, которые являются стабильными в условиях применения. Способы присоединения полипептидов к твердым носителям известны в данной области и включают аминовую химию, активацию под действием цианогенбромида, активацию под действием N-гидроксисукцинимида, активацию под действием эпоксида,активацию под действием сульфгидрила и активацию под действием гидразида. Полученную среду используют, как правило, в виде колонки, через которую жидкости, содержащие лиганд, пропускают один или несколько раз, чтобы обеспечить связывание лиганда с рецепторным полипептидом. Затем лиганд элюируют, используя для разрушения связи лиганд-рецептор изменение концентрации соли, хаотропные средства (гуанидин HCl) или изменение рН. Считается, что гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31,способны к специфическому связыванию, если: 1) они обладают пороговым уровнем активности связывания и 2) они практически не вступают в перекрестные реакции с родственными полипептидными молекулами. Пороговый уровень связывания наблюдается, если молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, описанные в данном документе, связываются с полипептидом, пептидом или эпитопом IL-31 со сродством, которое по меньшей мере в 10 раз превышает сродство связывания с контрольным полипептидом (отличным от IL-31). Предпочтительно антитела имеют сродство связывания (Ка) 106 М-1 или выше, предпочтительно 107 М-1 или выше, более предпочтительно 108 М-1 или выше и наиболее предпочтительно 10 М-1 или выше. Специалист в данной области может легко определить сродство связывания гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, например, с помощью анализа Скэтчарда (Scatchard, G., Ann. NY Acad. Sci. 51:660-672, 1949). О том, что молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, практически не вступают в перекрестное взаимодействие с родственными полипептидными молекулами, свидетельствует, например, тот факт, что молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, распознают полипептид IL-31, но не распознают родственные полипептиды, как установлено с помощью стандартного анализа методом Вестерн-блоттинга (Ausubel et al., там же) . Скрининг также можно проводить с использованием нечеловеческого IL-31 и мутантных полипептидов IL-31. Кроме того, молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, можно "подвергнуть скринингу против" известных родственных полипептидов с целью выделения популяции, специфически связывающейся с полипептидами IL-31. Например, молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, адсорбируются на родственных полипептидах, присоединенных к нерастворимому матриксу; молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, специфичные к IL-31, элюируются через матрикс в подходящем буфере. Antibodies: AImmunology, Cooligan, et al. (eds.), National Institutes of Health, John Wiley и Sons, Inc., 1995. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, характеризуются способностью блокировать, ингибировать, предотвращать или уменьшать связывание рецептора с очищенными рекомбинантными белками человеческого IL-31. Например, гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, можно охарактеризовать разными способами, в том числе по связыванию (т.е. путем определения, способно ли антитело ингибировать связывание каких-либо других молекул), относительному сродству и нейтрализации. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, по данному изобретению приведены ниже в табл. 1 и на фиг. 1. В приведенной ниже табл. 1 в случае клонов, имеющих обозначение "12VH1" (т.е. клонов 7, 9, 10,13-18 и 26-36): термин "fback" обозначает LC(back)+HC(fback); термин "LC(back)" обозначает LC(G66R,G68E, D70Q, F71Y, T72S) и термин "НС(back)" обозначает HC(F29L, M69L, R71A, Т 73 К, V78A, R94F). Подобным образом, в приведенной ниже табл. 1, в случае клонов, имеющих обозначение "12VH5" (т.е. клонов 8, 11 и 21-24): термин "fback" обозначает LC(back) + НС(fback); термин "LC(back)" обозначает Антитела, раскрытые в данном описании, можно получить с помощью известных в данной области способов, таких как рекомбинантные технологии, химический синтез, клонирование, лигирование или их сочетания. В одном воплощении антитела по настоящему изобретению получают с помощью рекомбинантных методов, например, путем экспрессии соответствующей нуклеиновой кислоты в подходящей клетке-хозяине. Полученный полипептид необязательно может быть гликозилированным, или он может содержать другие посттрансляционные модификации в зависимости от типа клетки-хозяина. Методики клонирования и получения рекомбинантных белков с использованием векторов и прокариотических или эукариотических клеток-хозяев описаны в разных книгах и обзорах, например, в некоторых книгах из серии "Практический подход", опубликованных издательством Оксфордского университета ("DNA Cloning 2: Expression Systems", 1995; "DNA Cloning 4: Mammalian Systems", 1996; "Protein Expression", 1999;"Protein Purification Techniques", 2001). Следовательно, другой целью настоящего изобретения является выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая какое-либо из описанных выше или ниже антител, или комплементарная ей цепь,или ее вырожденная последовательность. В данной связи термин "молекула нуклеиновой кислоты" охватывает разные типы нуклеиновых кислот, включающие без ограничения дезоксирибонуклеиновые кислоты (например, ДНК, кДНК, гДНК, синтетические ДНК и др.), рибонуклеиновые кислоты (например,РНК, мРНК и др.) и пептидилнуклеиновые кислоты (ПНК). В предпочтительном воплощении молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу ДНК, такую как молекула двухцепочечной ДНК или молекула кДНК. Термин "выделенная" относится к молекулам нуклеиновых кислот, которые были идентифицированы и отделены по меньшей мере от одной нежелательной молекулы нуклеиновой кислоты, с которой они обычно связаны в природном источнике. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты имеет форму или окружающую среду, отличные от встречающихся в природе. Следовательно, выделенные молекулы нуклеиновых кислот отличаются от конкретной молекулы нуклеиновой кислоты, присутствующей в естественных клетках. Вырожденная последовательность представляет собой любую нуклеотидную последовательность, которая кодирует такую же аминокислотную последовательность, как и исходная нуклеотидная последовательность, но содержит другую последовательность нуклеотидов в результате вырожденности генетического кода. Другой целью данного изобретения является вектор, который содержит ДНК, кодирующую любое из описанных выше или ниже антител. Вектор может представлять собой любой вектор клонирования или экспрессии, способный интегрироваться в геном хозяина или реплицироваться автономно, и функционировать в любой прокариотической или эукариотической клетке. В частности, вектор может представлять собой плазмиду, космиду, вирус, фаг, эписому, искусственную хромосому и т.п. Вектор может содержать последовательности, кодирующие и тяжелую, и легкую цепь, или последовательности, кодирующие либо легкую, либо тяжелую цепь. Если вектор содержит последовательности, кодирующие и тяжелую, и легкую цепь, каждая из этих последовательностей может быть функционально связана с промотором. Промоторы последовательностей, кодирующих тяжелую и легкую цепи, могут быть одинаковыми или разными. Последовательности, кодирующие тяжелую и легкую цепи, также могут быть функционально связаны с одним промотором, в этом случае последовательности, кодирующие тяжелую и легкую цепи, предпочтительно разделяются внутренним участком связывания рибосомы (IRES). Промоторы, подходящие для экспрессии эукариотических генов, включают, например, промоторы вирусных генов, такие как промотор мышиного или человеческого цитомегаловируса (CMV) или промотор вируса саркомы Рауса (RSV), хорошо известные специалистам в данной области. Вектор может содержать регуляторные элементы, такие как промотор, терминатор, энхансер, маркер селекции, точка начала репликации и др. Конкретные примеры таких векторов включают прокариотические плазмиды, такие как плазмиды pBR, pUC или pcDNA; вирусные векторы, в том числе ретровирусные векторы, аденовирусные векторы или векторы AAV; бактериофаги; бакуловирусы; ВАС или YAC и др., как описано ниже. Подходящую последовательность нуклеиновой кислоты можно вставить в вектор с помощью ряда способов. Как правило, ДНК вставляют в подходящий участок (участки) рестрикции под действием эндонуклеазы с использованием известных в данной области способов. Для конструирования подходящих векторов, содержащих один или несколько из указанных компонентов, используют стандартные методы лигирования, хорошо известные специалистам в данной области. Другой аспект настоящего изобретения относится к рекомбинантной клетке-хозяину, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты или вектор, как указано выше. Клетка-хозяин может представлять собой прокариотическую или эукариотическую клетку. Примеры прокариотических клеток включают бактерии, такие как E.coli. Примеры эукариотических клеток включают клетки дрожжей, клетки растений, клетки млекопитающих и клетки насекомых, в том числе любые первичные клеточные линии или стабильные клеточные линии (например, 3 Т 3, Vero, HEK293, TN5 и др.). Клетки-хозяева, подходящие для экспрессии гликозилированных белков, получают из многоклеточных организмов. Примеры клеток беспозвоночных включают клетки насекомых, таких как Drosophila S2 и Spodoptera Sf9, а также клетки растений. Примеры подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих включают клетки яичника китайского хомячка (СНО) и клетки COS. Более характерные примеры включают линию клеток почек обезьян CV1, трансформированных SV40 (C0S-7, АТСС CRL 1651); линию клеток почек человеческих эмбрионов (293 или клетки 2 93, субклонированные для выращивания в суспензионной культуре, Grahamet al., J. Gen Virol, 36:59 (1977; Chinese hamster ovary cells/-DHFR (CHO, Urlaub и Chasin, Proc. Natl,Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980; мышиные клетки Сертоли (ТМ 4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251(1980; клетки человеческих легких (W138, АТСС CCL 75); клетки человеческой печени (Hep G2, НВ 8065); и клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562, АТСС CCL51). Особенно предпочтительными клетками млекопитающих по настоящему изобретению являются клетки СНО. К другим, особенно предпочтительным клеткам млекопитающих, подходящим для экспрессии антител по данному изобретению, относятся мышиные клетки, такие как клетки мышиной миеломы (NS0). Как указано выше, антитела по настоящему изобретению можно получить с помощью известных в данной области способов, таких как рекомбинантные технологии, химический синтез, клонирование,лигирование или их сочетания. В конкретном воплощении растворимые рецепторы получают с помощью рекомбинантных методов, например путем экспрессии соответствующей нуклеиновой кислоты в подходящей клетке-хозяине. Следовательно, другой целью данного изобретения является способ получения антитела по настоящему изобретению, который включает культивирование рекомбинантной клеткихозяина по данному изобретению в условиях, обеспечивающих экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты, и извлечение продуцируемого полипептида. Способ получения по настоящему изобретению может дополнительно включать стадию введения полипептида в фармацевтическую композицию. Полученный полипептид необязательно может быть гликозилированным, или он может содержать другие посттрансляционные модификации в зависимости от типа клетки-хозяина. Методики клонирования и получения рекомбинантных белков с использованием векторов и прокариотических или эукариотических клеток-хозяев описаны в разных книгах и обзорах, например, в некоторых книгах из серии "Практический подход", опубликованных издательством Оксфордского университета ("DNA Cloning 2: ExpressionSystems", 1995; "DNA Cloning 4: Mammalian Systems", 1996; "Protein Expression", 1999; "Protein Purification Techniques", 2001). Векторы, подходящие для использования в способе получения антитела по настоящему изобретению, могут представлять собой эписомальные или неинтегрирующиеся/гомологично интегрирующиеся векторы, которые можно ввести в соответствующие клетки-хозяева с помощью любых подходящих способов (трансформация, трансфекция, конъюгация, слияние протопластов, электропорация, осаждение фосфатом кальция, прямая микроинъекция и др.). Факторы, имеющие значение при выборе конкретного плазмидного, вирусного или ретровирусного вектора, включают легкость детекции реципиентных клеток, содержащих вектор, и отделения их от реципиентных клеток, не содержащих вектор; желательное для конкретного хозяина число копий вектора; и, если это желательно, способность к "передаче" вектора между клетками-хозяевами разных видов. Векторы обеспечивают экспрессию полипептида или гибридных белков по данному изобретению в прокариотических или эукариотических клетках-хозяевах под контролем подходящих регуляторных последовательностей инициации/терминации транскрипции, которые в указанных клетках могут функционировать как конститутивные или индуцируемые. Затем можно выделить клеточную линию, в значительной степени обогащенную такими клетками, с получением стабильной клеточной линии. Клетки-хозяева трансфицируют или трансформируют описанными в данном документе векторами экспрессии или клонирования, обеспечивающими продукцию белка, и культивируют в традиционной питательной среде, модифицированной, в зависимости от обстоятельств, с целью индуцирования промоторов, селекции трансформантов или амплификации генов, кодирующих целевые последовательности. Условия культивирования, такие как среда, температура, рН и т.п., специалист в данной области может выбрать без излишнего экспериментирования. Как правило, основы, методики и практические способы максимизации продуктивности клеточных культур можно найти в Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) и Sambrook et al., выше. Для эукариотических клеток-хозяев (например, клеток дрожжей, насекомых или млекопитающих) можно использовать разные последовательности, регулирующие транскрипцию и трансляцию, в зависимости от вида хозяина. Такие последовательности могут быть получены из вирусных источников, таких как аденовирус, вирус папилломы, вирус обезьян или т.п., где регуляторные сигналы связаны с конкретным геном, имеющим высокий уровень экспрессии. Примерами являются промотор ТК вируса герпеса,ранний промотор SV40, промотор гена дрожжей gal4 и др. Для модуляции экспрессии генов можно использовать регуляторные сигналы инициации транскрипции, обеспечивающие репрессию и активацию. Чтобы провести отбор клеток, стабильно трансформированных путем введения ДНК, в эти клетки можно дополнительно ввести один или несколько маркеров, позволяющих проводить селекцию клеток-хозяев,которые содержат вектор экспрессии. Маркер также может обеспечивать фототрофию к ауксотрофному хозяину, устойчивость к биоцидам, например, антибиотикам, или тяжелым металлам, таким как медь и т.п. Ген селектируемого маркера может быть непосредственно связан с последовательностями ДНК, подлежащими экспрессии (например, он может находиться на том же векторе), или он может быть введен в ту же клетку в результате совместной трансфекции. Для оптимального синтеза белков по данному изобретению могут потребоваться дополнительные элементы. Подходящие прокариотические клетки включают бактерии (такие как Bacillus subtilis или E.coli),трансформированные рекомбинантным бактериофагом, плазмидным или космидным ДНК-вектором экспрессии. Такие клетки обычно продуцируют белки, которые содержат N-концевой остаток метионина. Предпочтительные клетки, подходящие для применения в настоящем изобретении, представляют собой эукариотические клетки-хозяева, например клетки млекопитающих, такие как человеческие клетки,клетки обезьян, мышиные клетки и клетки яичника китайского хомячка (СНО), поскольку они обеспечивают посттрансляционные модификации молекул белков, включающие правильную укладку или гликозилирование по правильным участкам. Примеры подходящих клеток-хозяев млекопитающих включают клетки почек африканской зеленой мартышки (Vero; ATCC CRL 1587), клетки почек человеческого эмбриона (293-НЕК; ATCC CRL 1573), клетки почек детенышей хомяка (ВНК-21, ВНК-570; ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314), клетки почек собак (MDCK; ATCC CCL 34), клетки яичника китайского хомячка (СН 0-К 1; ATCC CCL61; СНО DG44 (Chasin et al., Som. Cell. Molec. Genet. 12:555, 1986, крысиные питуициты (GH1; ATCC CCL82), клетки HeLa S3 (ATCC CCL2.2), клетки крысиной гепатомы (H-4-II-E;ATCC CRL 1548), SV40-трансформированные клетки почек обезьян (COS-1; ATCC CRL 1650), клетки меланомы Bowes и печеночно-клеточного рака человека (например, Hep G2), клетки мышиных эмбрионов (NIH-3T3; ATCC CRL 1658) и другие клеточные линии. Альтернативные эукариотические клеткихозяева представляют собой дрожжевые клетки (например, Saccharomyces, Kluyveromyces и др.), трансформированные дрожжевыми векторами экспрессии. Дрожжевые клетки также могут осуществлять посттрансляционные модификации пептидов, в том числе гликозилирование. Целевые белки в дрожжах можно получить с помощью ряда рекомбинантных способов, в которых используются последовательности сильных промоторов и большое число копий плазмид. Клетки дрожжей распознают лидерные последовательности в клонированных генных продуктах млекопитающих и секретируют полипептиды, несущие лидерные последовательности (т.е. препептиды). Длительную продукцию рекомбинантного полипептида предпочтительно осуществляют с применением стабильной экспрессии. Например, клеточные линии, стабильно экспрессирующие представляющий интерес полипептид, можно трансформировать векторами экспрессии, которые могут содержать вирусные точки начала репликации и/или эндогенные элементы экспрессии и ген селектируемого маркера, присутствующие на одном векторе или на разных векторах. После введения вектора клетки оставляют расти в течение 1-2 дней в обогащенной среде, которую затем меняют на селективную среду. Селектируемый маркер используют для придания устойчивости к селекции, его присутствие обеспечивает рост и выделение клеток, успешно экспрессирующих введенные последовательности. Пролиферацию устойчивых клонов стабильно трансформированных клеток можно проводить с использованием методов культивирования тканей, подходящих для данного типа клеток. Затем можно выделить клеточную линию, в значительной степени обогащенную такими клетками с получением стабильной клеточной линии. Особенно предпочтительный и обеспечивающий высокий выход способ получения рекомбинантного полипептида по настоящему изобретению включает амплификацию дигидрофолатредуктазы (DHFR) вDHFR-дефицитных клетках СНО с использованием последовательно повышающихся уровней метотрексата, как описано в US 4889803. Полученный полипептид может находиться в гликозилированной форме. Антитела, раскрытые в данном описании, также можно экспрессировать в других эукариотических клетках, таких как клетки птиц, грибков, насекомых, дрожжей или растений. Бакуловирусная система является эффективным средством введения клонированных генов в клетки насекомых. Вещества, необходимые для бакуловирусных систем экспрессии в клетках насекомых, поставляются в виде наборов фирмой Invitrogen и другими производителями. Помимо методов рекомбинантных ДНК антитела по данному изобретению можно получить путем химического синтеза. Примеры способов химического синтеза включают твердофазный синтез и жидкофазный. Например, в твердофазном синтезе аминокислоту, соответствующую карбокси-концу синтезируемого полипептида, присоединяют к носителю, который является нерастворимым в органических растворителях, и затем путем чередования повторяющихся реакций (например, путем последовательной конденсации аминокислот с аминогруппами, при этом функциональные группы боковых цепей защищены соответствующими защитными группами) синтезируют полипептидную цепь. Методы твердофазного синтеза в основном подразделяются на метод tBoc и метод Fmoc, в зависимости от типа используемой защитной группы. Синтетические белки в целом описаны в литературе (Brown A. et al., 1996). Антитела по настоящему изобретению можно получать, вводить в состав композиции, вводить в организм или использовать в общих целях в других альтернативных формах, которые могут быть предпочтительными в соответствии с желательным способом применения и/или получения. Белки по данному изобретению могут подвергаться посттрансляционной модификации, такой как гликозилирование. Полипептиды или белки по данному изобретению могут быть получены в виде выделенной (или очищенной) биологически активной формы или в виде ее предшественников, производных и/или солей. Также можно получить подходящие конъюгаты или комплексы, повышающие эффективность доставки лекарственных средств. Для достижения данной цели антитела, описанные в данном документе,можно испльзовать в виде активных конъюгатов или комплексов с такими молекулами, как полиэтиленгликоль и другие природные или синтетические полимеры (Harris J.M. и Chess R.B., 2003; GreenwaldR.B. et al., 2003; Pillai О. и Panchagnula R., 2001). В данной связи настоящее изобретение рассматривает химически модифицированные антитела, раскрытые в данном описании, например, связанные с полимером. Как правило, полимер является водорастворимым, чтобы конъюгат не растворялся в водной среде,такой как физиологическая среда. Примером подходящего полимера является полимер, который после модификации содержит одну реакционноспособную группу, такую как активную сложноэфирную группу для ацилирования или альдегидную группу для алкилирования. В таком случае степень полимеризации можно контролировать. Примером реакционноспособного альдегида является пропиональдегид полиэтиленгликоля или его моно-(С 1-С 10)алкокси- или арилоксипроизводные (см., например, Harris et al.,патент США 5252714). Полимер может быть разветвленным или неразветвленным. Кроме того, для получения конъюгатов можно использовать смесь полимеров. Конъюгаты, используемые для лечения,могут содержать фармацевтически приемлемые водорастворимые полимерные фрагменты. Подходящие водорастворимые полимеры включают полиэтиленгликоль (ПЭГ), монометокси-ПЭГ, моно-(С 1 С 10)алкокси-ПЭГ, арилокси-ПЭГ, поли-(N-винилпирролидон)-ПЭГ, трезилмонометокси-ПЭГ, ПЭГпропиональдегид, бис-сукцинимидилкарбонат-ПЭГ, гомополимеры пропиленгликоля, сополимер полипропиленоксид/этиленоксид, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт, декстран, целлюлозу или другие полимеры на основе углеводов. Подходящие ПЭГ могут иметь молекулярную массу примерно от 600 до 60000, в том числе, например, 5000, 12000, 20000 и 25000. Конъюгат также может содержать смесь таких водорастворимых полимеров. Примеры конъюгатов включают любое из раскрытых выше антител и полиалкилоксидный фрагмент, присоединенный к N-концу указанного растворимого рецептора. ПЭГ представляет собой подходящий полиалкилоксид. В качестве иллюстрации, любое антитело, раскрытое в данном описании, можно модифицировать ПЭГ, данный процесс известен как "пэгилирование". Пэгилирование можно проводить с помощью любой известной в данной области реакции пэгилирования (см., например, ЕР 0154316, Delgado et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9: 249 (1992), Duncan и Spreafico, Clin.Pharmacokinet. 27:290 (1994), и Francis et al., Int J. Hematol 68:1 (1998. Например, пэгилирование можно проводить с помощью реакции ацилирования или реакции алкилирования с использованием реакционноспособной молекулы полиэтиленгликоля. В альтернативном способе конъюгаты получают путем конденсации активированного ПЭГ, в котором концевые гидрокси- или аминогруппы заменены на активированный линкер (см., например, Karasiewicz et al., патент США 5382657). Предпочтительно все указанные модификации не оказывают существенного влияния на способность антитела связывать человеческий IL-31. Описанные в данном документе антитела могут содержать дополнительный N-концевой аминокислотный остаток, предпочтительно метионин. Фактически, в зависимости от системы и условий экспрес- 11020457 сии, полипептиды могут экспрессироваться в рекомбинантной клетке-хозяине, начиная с метионина. Указанная дополнительная аминокислота впоследствии может либо сохраняться в полученном рекомбинантном белке, либо устраняться под действием эндопептидазы, такой как метионинаминопептидаза, в соответствии со способами, раскрытыми в литературе (Van Valkenburgh H.A. и Kahn R.A., Methods Enzymol. (2002) 344:186-93; Ben-Bassat A., Bioprocess Technol. (1991) 12:147-59). Как показано в экспериментальной части настоящего описания, мышиные антитела против человеческих антител против IL-31 могут содержать потенциальные участки гликозилирования в вариабельных доменах. Например, клон 2 92.12.3.1 несет участок гликозилирования в каркасном участке FR1 вариабельного домена тяжелой цепи. В ходе данной работы авторы настоящего изобретения обнаружили, что указанный участок гликозилирования не является необходимым для поддержания высокого сродства связывания к человеческому IL-31. Более того, устранение данного участка гликозилирования (например, путем мутации) оказывает положительное действие на термостабильность антитела. Следовательно,в одном воплощении настоящего изобретения антитела, раскрытые в данном описании, не содержат участка гликозилирования в вариабельных доменах. Молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, полученные с помощью описанных в данном документе способов, можно тестировать на способность к нейтрализации разными методами. Например, можно использовать люциферазный анализ, описанный в опубликованной патентной заявке США (см. публикацию 20030224487, Sprecher, Cindy et al., 2003). Кроме того, нейтрализацию можно тестировать путем измерения уменьшения продукции провоспалительных хемокинов, таких как TARC иMDC, в культурах кератиноцитов в присутствии лиганда и моноклонального антитела. Нейтрализацию также можно измерить с помощью анализов in vivo и in vitro, описанных в данном документе. Уменьшение продукции TARC и MDC в ответ на гуманизированные антитела против IL-31 и антагонисты, описанные в данном документе, можно измерить на мышиной модели AD с помощью следующих способов: Способ I. Самцов мышей NC/Nga возрастом шесть недель (CRL Japan) сенсибилизируют внутрикожно 50 мкг экстракта пылевого клеща (D. pteronyssinus, Indoor Biotechnologies) три раза в неделю в области спины и считают AD-подобные поражения. После 5 недель сенсибилизации мышей подвергают эвтаназии, правые уши отрезают и помещают в одну лунку 48-луночной чашки для культивирования (Corning) , содержащей RPMI + 2% FBS (GIBCO Invitrogen). Чашки помещают в инкубатор с атмосферой 5% СОг и контролируемой влажностью. Супернатанты собирают через 24 ч и замораживают при -20 С до последующего анализа. Способ II. Самок мышей NC/Nga возрастом двенадцать недель (CRL Japan) сенсибилизируют внутрикожно 10 мкг SEB (Toxin Technology) в области уха и спины три раза в неделю. У мышей считают AD-подобные поражения. После 5 недель сенсибилизации мышей подвергают эвтаназии, из уха каждой мыши, в которое производилось введение, берут биопсийные пункции 6 мм и помещают их в одну лунку 48-луночной чашки для культивирования, содержащей RPMI+2% FBS. Чашки помещают в инкубатор с атмосферой 5% СО 2 и контролируемой влажностью. Супернатанты собирают через 24 ч и замораживают при -20 С до последующего анализа. Группы мышей в обоих исследованиях обрабатывают гуманизированными молекулами, связывающими антиген IL-31, или гуманизированными антителами против IL-31 или антагонистами IL-31 внутрибрюшинно два раза в неделю, начиная через 1-2 недели после начала сенсибилизации. КонцентрацииTARC и MDC в образцах супернатантов, полученных после инкубации в течение 24 ч, измеряют традиционным методом ELISA (RD Systems). В одном воплощении гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонистыIL-31 по настоящему изобретению включают без ограничения Fab, Fab' и F(ab')2, Fd, одноцепочечные Fvs(scFv), одноцепочечные антитела, дисульфидсвязанные Fv (sdFv) и фрагменты, которые содержат либо домен VL, либо домен VH. Антигенсвязывающие фрагменты антител, включающие одноцепочечные антитела, могут содержать вариабельные участки (т.е. SEQ ID NO: 25-45) одни или в сочетании с целым из доменов: шарнирного участка, CH1, CH2 и СН 3, или их фрагментом. Данное изобретение также охватывает антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат любое сочетание вариабельного участка (вариабельных участков) с доменами шарнирного участка, CH1, CH2 и СН 3. В другом воплощении вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 25; 27; 29; 30; 31; 35; 36; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44 и 45, может быть объединен с вариабельным участком легкой цепи,имеющий последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 26; 28; 32; 33; 34 и 37. В другом воплощении изобретение предлагает выделенное антитело или фрагмент антитела, которые связываются с человеческим IL-31 и содержат гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, где гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи выбраны из группы, включающей: а) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который со- 12020457 держит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;b) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26; с) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;d) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; е) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;f) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;g) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;h) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;i) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33;j) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;k) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;l) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;m) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33;n) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; о) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; р) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;q) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;r) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;s) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;t) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;u) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;v) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную по- 13020457 следовательность SEQ ID NO: 43, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;w) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26; х) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; у) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28; иz) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37. В другом воплощении изобретение предлагает выделенное антитело или фрагмент антитела, который связывается с человеческим IL-31 и содержит гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, где гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи выбраны из группы, включающей: а) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;b) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26; с) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28;d) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26; е) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28;f) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;g) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;h) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32;i) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 33;j) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 34;k) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26;l) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32;m) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 33;n) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 34; о) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37; р) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;q) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;r) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;s) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 40, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;t) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 41, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;u) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 42, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;v) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37;w) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26; х) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28; у) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 36, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28; иz) гуманизированный вариабельный домен тяжелой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45, и гуманизированный вариабельный домен легкой цепи, последовательность которого по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37. В одном аспекте изобретение предлагает выделенное антитело, выбранное из группы, включающей: а) антитело, которое содержит легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 4 6, и тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47;b) антитело, которое содержит легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 48, и тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 49, и с) антитело, которое содержит легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательностиSEQ ID NO: 50, и тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 51. Настоящее изобретение также включает рекомбинантные гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, которые являются функционально эквивалентными описанным выше молекулам. Модифицированные гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31,или антагонисты IL-31, характеризующиеся повышенной стабильностью и/или терапевтической эффективностью, также входят в объем данного изобретения. Примеры модифицированных антител включают антитела, содержащие консервативные замены аминокислотных остатков и одну или несколько делеций или одно или несколько добавлений аминокислот, которые не оказывают неблагоприятного влияния на антигенсвязывающие характеристики. Замены могут варьировать от изменения или модификации одного или нескольких аминокислотных остатков до полной реконструкции участка, при условии сохранения терапевтической эффективности. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 по настоящему изобретению можно подвергнуть посттрансляционному модифицированию (например, ацетилированию и фосфорилированию), или их можно модифицировать синтетически (например, путем присоединения маркерной группы). Следует понимать, что гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31,или антагонисты IL-31, полученные с помощью способа по настоящему изобретению, могут содержать дополнительные консервативные аминокислотные замены, которые практически не влияют на связывание антигена или другие функции иммуноглобулинов. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 по настоящему изобретению включают производные, полученные в результате модифицирования, например, производные включают без ограничения гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, полученные в результате модифицирования, такого как гликозилирование, ацетилирование,пэгилирование,фосфорилирование,амидирование,дериватизация известными защитными/блокирующими группами, протеолитическое расщепление, присоединение к клеточному лиганду или другому белку и др. Все многочисленные химические модификации можно проводить с помощью известных методов, включающих без ограничения специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез туникамицина и др. Кроме того, производное может содержать одну или несколько неклассических аминокислот. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 содержат CDR мышиного донорного иммуноглобулина и каркасные участки тяжелой цепи и легкой цепи человеческого акцепторного иммуноглобулина. Способы получения гуманизированного антитела раскрыты в патентах США 5301101, 5585089, 5693762 и 6180370 (каждый из которых включен в данное описание в виде ссылки во всей полноте). Затем CDR указанных антител можно привить на любые выбранные человеческие каркасные участки, известные в данной области, с получением целевого гуманизированного антитела. Изобретение также предлагает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, которые способны конкурентно ингибировать связывание моноклонального антитела,описанного в данном документе, с человеческим IL-31. Конкурентное ингибирование можно определить с помощью любого известного в данной области метода, например, с помощью описанных в данном документе анализов конкурентного связывания. В предпочтительных воплощениях антитело конкурентно ингибирует связывание моноклонального антитела по данному изобретению с полипептидом по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 60% или по меньшей мере на 50%. Изобретение также предлагает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31, которые конкурентно ингибируют связывание антитела с эпитопом по настоящему изобретению по данным любого известного в данной области способа определения конкурентного связывания, такого как описанные в данном документе иммунологические анализы. В предпочтительных воплощениях антитело конкурентно ингибирует связывание с эпитопом по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 60% или по меньшей мере на 50%. Период полужизни гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL31 in vivo можно увеличить путем модификации (например, замены, делеции или добавления) аминокислотных остатков, которые были идентифицированы как участвующие во взаимодействии между доменомFc и рецептором FcRn (см., например, международные публикацииWO 97/34631 и WO 02/060919,которые включены в данное описание в виде ссылки во всей полноте), или путем присоединения полимерных молекул, таких как высокомолекулярный полиэтиленгликоль (ПЭГ). ПЭГ можно присоединять непосредственно или с использованием многофункционального линкера, либо путем сайтспецифической конъюгации ПЭГ с N- или С-концом указанных антител или фрагментов антител, либо путем взаимодействия с эпсилон-аминогруппами, присутствующими на остатках лизина. Для линейных или разветвленных полимеров используют дериватизацию, которая приводит к минимальной потере биологической активности. Степень конъюгации тщательно отслеживают методом SDS-PAGE и массспектрометрии, чтобы обеспечить правильную конъюгацию молекул ПЭГ с антителами. Непрореагиро- 16020457 вавший ПЭГ можно отделить от конъюгатов антитело-ПЭГ, например, с помощью гель-хроматографии или ионообменной хроматографии. Настоящее изобретение включает критерии выбора небольшого числа аминокислот каркасного участка гуманизированной иммуноглобулиновой цепи, которые совпадают с аминокислотами, находящимися в тех же положениях донора, а не акцептора, что позволяет повысить сродство антитела, которое содержит гуманизированную иммуноглобулиновую цепь. Помимо гуманизированных иммуноглобулинов, специально описанных в данном документе, другие модифицированные иммуноглобулины, "практически гомологичные" нативным последовательностям, можно легко сконструировать и производить с использованием разных методов рекомбинантных ДНК, хорошо известных специалистам в данной области. Ряд разных человеческих каркасных участков можно использовать по отдельности или в сочетании в качестве основы для гуманизированных иммуноглобулинов по настоящему изобретению. Как правило, модификации генов можно легко осуществить с помощью ряда хорошо известных методов, таких как сайт-направленный мутагенез (см., Gillman andSmith, Gene, 8, 81-97 (1979) и S. Roberts et al., Nature, 328, 731-734 (1987), которые включены в данное описание в виде ссылки). Гуманизированные антитела по данному изобретению включают фрагменты наряду с интактными антителами. Как правило, указанные фрагменты конкурируют с интактными антителами, из которых они получены, за связывание с антигеном. Фрагменты обычно связываются со сродством, составляющим по меньшей мере 107 М-1, чаще 108 или 109 М-1 (т.е. в тех же интервалах, как и интактные антитела). Гуманизированные фрагменты антител включают отдельные тяжелые цепи, легкие цепи, Fab, Fab', F(ab')2 иFv. Фрагменты получают методами рекомбинантных ДНК, или путем ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов. Гуманизированные антитела подробно описаны в Европейских патентахЕР 239400, ЕР 592106 и ЕР 519596; международных публикацияхWO 91/09967 и WO 93/17105; патентах США 5225539, 5530101, 5565332, 5585089, 5766886 и 6407213; и Padlan, 1991, Molecular Immunology 28Sandhu, 1994, Gene 150:409-10; Pedersen et al., 1994, J. Mol. Biol. 235:959-73; Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Reichmann et al., 1988, Nature 332:323-329 и Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596. Для получения фрагментов антител разработано много методов. Указанные фрагменты можно получить путем протеолитического расщепления интактных антител (см., например, Morimoto et al. , Journal of Biochemical и Biophysical Methods 24:107-117 (1992) и Brennan et al., Science, 229:81 (1985 или путем непосредственной продукции в рекомбинантных клетках-хозяевах. Например, фрагменты антител можно выделить из описанных выше фаговых библиотек антител. Альтернативно фрагменты Fab'-SH можно непосредственно выделить из E.coli и химически соединить с получением фрагментов F(ab')2(Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992. В соответствии с другим способом фрагменты F(ab')2 можно выделить сразу из культуры рекомбинантных клеток-хозяев. Опытным специалистам известны и другие способы получения фрагментов антител. Кроме того, примеры методов, которые можно использовать для получения одноцепочечных Fv и антител, включают методы, описанные в патентах США 4946778 и 5258498; Huston et al., Methods in Enzymology 203:46-88 (1991); Shu et al., PNAS 90: 7995-7999(1993) и Skerra et al., Science 240:1038-1040 (1988). Настоящее изобретение охватывает антитела, гибридизованные рекомбинантными способами, или конъюгированные химическими способами (включающими ковалентные и нековалентные конъюгации) с полипептидом (или его фрагментом, предпочтительно содержащим по меньшей мере 10, 20 или 50 аминокислот полипептида) по настоящему изобретению с получением гибридных белков. Таким образом,изобретение также относится к иммуноконъюгатам, которые содержат описанное в данном документе антитело, конъюгированное с цитотоксическим средством, таким как химиотерапевтическое средство,токсин (например, ферментативно активный токсин бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, или его фрагменты) или радиоактивный изотоп (т.е. с получением радиоконъюгата). Настоящее изобретение также включает композиции, которые содержат полипептиды по настоящему изобретению (например, содержащие иммуногенный или антигенный эпитоп), гибридизованные или конъюгированные с гетерологичными полипептидными последовательностями (например, доменами антител, отличными от вариабельных участков). Например, полипептиды по настоящему изобретению можно гибридизовать или конъгировать с Fc-участком антитела или его фрагментом. Например, полипептиды по настоящему изобретению (в том числе их фрагменты или варианты) можно гибридизовать с константными доменами иммуноглобулинов (IgA, IgE, IgG, IgM) или их фрагментами (CH1, CH2, CH3 или любые их сочетания и фрагменты) с получением химерных полипептидов. Фрагмент антитела, гибридизованный с полипептидом по настоящему изобретению, может содержать константный участок, шарнирный участок, домен CH1, домен СН 2 и домен СН 3, или любое сочетание целых доменов или их фрагментов. Полипептиды также можно гибридизовать или конъюгировать с вышеуказанными фрагментами антител с получением мультимеров. Например, фрагменты Fc, гибридизованные с полипептидами по настоящему изобретению, могут образовывать димеры посредством образования дисульфид-связей между фрагментами Fc. Высшие мультимерные формы можно получить путем гибридизации полипептидов с фрагментами IgA и IgM. Способы гибридизации или конъюгирования полипептидов по настоящему изобретению с фрагментами антител известны в данной области. См., например, патенты США 5336603, 5622929,5359046, 5349053, 5447851, 5112946; ЕР 307434; ЕР 367166; публикации РСТ WO 96/04388; WO 91/06570; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535-10539 (1991); Zheng et al., J. Immunol. 154:5590-5600 (1995) и Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-11341(1992) (указанные работы включены в настоящее описание в виде ссылки во всей полноте). В качестве другого неограничивающего примера полипептиды и/или антитела по настоящему изобретению (в том числе их фрагменты или варианты) можно гибридизовать с альбумином (включающим без ограничения рекомбинантный человеческий сывороточный альбумин и его фрагменты или варианты (см., например, патент США 5876969,поданный 2 марта 1999 г., патент ЕР 041362 и патент США 5766883, поданный 16 января 1998 г.,включенные в данное описание в качестве ссылки во всей полноте. Полипептиды и/или антитела по настоящему изобретению (в том числе их фрагменты или варианты) можно гибридизовать с N- или Сконцом гетерологичного белка (например, с полипептидом Fc иммуноглобулина или полипептидом человеческого сывороточного альбумина). Полинуклеотиды, кодирующие гибридные белки по настоящему изобретению, также входят в объем изобретения. Как указано выше, полипептиды по настоящему изобретению можно гибридизовать или конъюгировать с вышеупомянутыми фрагментами антител с целью увеличения периода полужизни полипептидовin vivo, или для применения в иммунологических анализах с использованием известных в данной области методов. Кроме того, полипептиды по настоящему изобретению можно гибридизовать или конъюгировать с вышеупомянутыми фрагментами антител с целью облегчения очистки. В одной публикации описаны химерные белки, состоящие из первых двух доменов полипептида человеческого CD4 и разных доменов константных участков тяжелых или легких цепей иммуноглобулинов млекопитающих. (См.,например, ЕР 394827; Traunecker et al., Nature 331:84-86 (1988. Улучшенная доставка антигена через эпителиальный барьер к иммунной системе продемонстрирована для антигенов (например, инсулина),конъюгированных с партнером FcRn по связыванию, таким как IgG или фрагменты Fc (см., например,публикации РСТ WO 96/22024 и WO 99/04813). Полипептиды по настоящему изобретению, гибридизованные или конъюгированные с антителом и имеющие димерную структуру, образованную дисульфидными связями (благодаря IgG), также могут более эффективно связывать и нейтрализовать другие молекулы, чем мономерные секретируемые белки или отдельные фрагменты белков (Fountoulakis et al., J. Biochem. 270:3958-3964 (1995. Во многих случаях фрагмент Fc в гибридном белке является полезным с точки зрения терапии и диагностики, поскольку он обуславливает, например, улучшенные фармакокинетические свойства (ЕР А 232262). Альтернативно фрагмент Fc желательно удалять после экспрессии,детекции и очистки гибридного белка. Например, фрагмент Fc может препятствовать терапии и диагностике, если гибридный белок используют в качестве антигена для иммунизации. При разработке лекарственных средств, например, человеческие белки, такие как hIL-5, гибридизуют с фрагментами Fc, чтобы использовать их в способах высокопроизводительного скрининга для идентификации антагонистов hIL-5(см., D. Bennett et al., J. Molecular Recognition 8:52-58 (1995); K. Johanson et al., J. Biol. Chem. 270:94599471 (1995. Такие способы также включают без ограничения применение бифункциональных конъюгирующих средств (см., например, патенты США 5756065, 5714631, 5696239, 5652361, 5505931,5489425, 5435990, 5428139, 5342604, 5274119, 4994560 и 5808003, содержание которых полностью включено в настоящее описание в виде ссылки). Кроме того, полипептиды по данному изобретению (например, антитела или их фрагменты) можно гибридизовать с маркерными последовательностями, такими как пептид, которые позволяют облегчить очистку полипептидов. В другом воплощении нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды по данному изобретению (включающие без ограничения нуклеиновые кислоты, кодирующие иммуногенные и/или антигенные эпитопы), также можно объединить с представляющим интерес геном, таким как эпитопный маркер (например, гемагглютининовый маркер ("НА") или маркер flag), обеспечивающий детекцию и очистку экспрессируемого полипептида. В предпочтительных воплощениях маркерная аминокислотная последовательность представляет собой гексагистидиновый пептид, такой как маркер, предоставляемый вектором pQE (QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, Calif, 91311) в числе прочих, многие из которых являются коммерчески доступными. Как описано в Gentz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824 (1989), например гексагистидин обеспечивает удобную очистку гибридного белка. Другие пептидные маркеры, используемые для очистки, включают без ограничения маркер "НА", который соответствует эпитопу, полученному из белка гемагглютинина вируса гриппа (Wilson et al., Cell 37:767(1984, и маркер "flag". Настоящее изобретение также охватывает гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL31, или антагонисты IL-31, конъюгированные с диагностическим или терапевтическим средством. Молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 можно использовать для диагностики, напри- 18020457 мер, для отслеживания развития или прогрессирования связанного с зудом заболевания как часть процедуры клинического тестирования, проводимого, например, для определения эффективности назначенного лечения, диагностики, детекции и/или профилактики. Детекцию можно облегчить путем присоединения антитела к детектируемому веществу. Примеры детектируемых веществ включают разные ферменты, простетические группы, флюоресцентные вещества, люминесцентные вещества, биолюминесцентные вещества, радиоактивные вещества, позитронно-активные металлы, используемые в разных методах позитронно-эмиссионной томографии, и ионы нерадиоактивных парамагнитных металлов. Ионы металлов, которые можно конъюгировать с антителами с получением диагностических средств по настоящему изобретению, описаны, например, в патенте США 4741900. Примеры подходящих ферментов включают пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, бета-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; примеры подходящих комплексов простетических групп включают стрептавидин/биотин и авидин/биотин. Примеры подходящих флуоресцентных веществ включают умбеллиферон, флюоресцеин, флюоресцеина изотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламинофлюоресцеин, дансилхлорид или фикоэритрин; пример люминесцентного вещества включает люминол; примеры биолюминесцентных веществ включают люциферазу, люциферин и экворин; и примеры подходящих радиоактивных веществ включают 125I, 131I, 111In или 99 Тс. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 можно также конъюгировать с терапевтическим фрагментом, таким как цитотоксин, например, цитостатическое или разрушающее клетки средство, терапевтическое средство или ион радиоактивного металла. Цитотоксин или цитотоксическое средство включает любое средство, оказывающее вредное воздействие на клетки. Примеры включают паклитаксол, цитохалазин В, грамицидин D, этидия бромид, эметин, митомицин,этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин, а также их аналоги и гомологи. Терапевтические средства включают без ограничения антиметаболиты (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6 тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацилдекарбазин), алкилирующие средства (например, мехлоретамин,тиотепа хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU) и ломустин (CCNU), циклофосфамид, бусульфан,дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цис-дихлордиамин платина(II) (DDP) цисплатин), антрациклины (например, даунорубицин (прежде дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например,дактиномицин (прежде актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС, и антимитотические средства (например, винкристин и винбластин). Конъюгаты по данному изобретению можно использовать для изменения конкретного биологического ответа, причем терапевтическое средство или фрагмент лекарственного средства не следует ограничивать классическими химическими терапевтическими средствами. Например, фрагмент лекарственного средства может представлять собой белок или полипептид, обладающий желательной биологической активностью. Такие белки могут включать, например, токсин, такой как абрин, рицин А, экзотоксин синегнойной палочки или дифтерийный токсин; такой белок, как фактор некроза опухолей, интерферон, -интерферон, фактор роста нервов, фактор роста тромбоцитов, тканевой активатор плазминогена, тромботическое средство или антиангиогенное средство, например, ангиостатин или эндостатин; или модификаторы биологического ответа, такие как, например, лимфокины, интерлейкин-1 ("IL1"), интерлейкин-2 ("IL-2"), интерлейкин-6 ("IL-6"), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор ("GM-CSF"), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор ("G-CSF") или другие факторы роста. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 также можно присоединить к твердым носителям, которые, в частности, можно использовать для иммунологических анализов или очистки целевого антигена. Такие твердые носители включают без ограничения стекло,целлюлозу, полиакриламид, нейлон, полистирол, поливинилхлорид или полипропилен. Способы конъюгирования такого терапевтического фрагмента с антителами хорошо известны, см.,например, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies и Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al.,"Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in ные или неконъюгированные с терапевтическим фрагментом, вводимые отдельно или в сочетании с цитотоксическим фактором (цитотоксическими факторами) и/или цитокином (цитокинами), можно использовать в качестве терапевтического средства. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 можно использовать для мечения клеток, экспрессирующих IL-31; выделения IL-31 методом аффинной очистки; диагностических анализов, используемых для определения уровней полипептидов IL-31 в кровотоке; детекции или количественного определения растворимого IL-31 как маркера ассоциированных с ним патологий или заболеваний; проведения аналитических методов с применением FACS; скрининга библиотек экспрессируемых последовательностей; получения антиидиотипических антител; и применения в качестве нейтрализующих антител или антагонистов для блокирования активности IL-31 in vitro и in vivo. Подходящие прямые маркеры или метки включают радионуклиды, ферменты, субстраты, кофакторы,ингибиторы, флуоресцентные маркеры, хемилюминисцентные маркеры, магнитные частицы и т.п.; к косвенным маркерам или меткам относятся биотин-авидин или другие пары комплемент/антикомплемент, используемые в качестве промежуточных соединений. Кроме того, описанные здесь антитела можно непосредственно или косвенно конъюгировать с лекарственными средствами, токсинами, радионуклидами и т.п., и полученные конъюгаты можно использовать in vivo для диагностических или терапевтических целей. Антитела против IL-31 или их фрагменты также можно использовать invitro для детекции денатурированного IL-31 или его фрагментов, например, в анализе методом вестернблоттинга или в других анализах, известных в данной области. Подходящие детектируемые молекулы, которые можно непосредственно или косвенно присоединять к полипептиду или антителу, включают радионуклиды, ферменты, субстраты, кофакторы, ингибиторы, флуоресцентные маркеры, хемилюминесцентные маркеры, магнитные частицы и т.п. Подходящие цитотоксические молекулы, которые можно непосредственно или косвенно присоединять к полипептиду или антителу, включают бактериальные или растительные токсины (например, дифтерийный токсин,сапорин, экзотоксин синегнойной палочки, рицин, абрин и т.п.), а также терапевтические радионуклиды,такие как йод-131, рений-188 или иттрий-90 (присоединяемые к полипептиду или антителу непосредственно или косвенно, например, через хелатирующий фрагмент). Полипептиды или антитела также можно конъюгировать с цитотоксическими лекарственными средствами, такими как адриамицин. При непосредственном присоединении детектируемую или цитотоксическую молекулу можно конъюгировать с членом пары комплементарный/антикомплементарный, где другой член связан с фрагментом полипептида или антитела. Примером такой пары комплементарный/антикомплементарный является пара биотин/стрептавидин. Способность молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 по настоящему изобретению ингибировать, блокировать или нейтрализовать лиганд IL-31 можно измерить с помощью разных моделей in vivo, известных в данной области и описанных в данном документе, которые включают без ограничения модель NC/Nga, накожную модель Ova, модель хронической гиперчувствтельности и хроническую гаптеновую модель. В патологии кожных заболеваний у людей участвуют и Т-клетки после хоминга в кожу, и эпидермальные кератиноциты. Экспрессия мРНК и белка IL-31 у людей ограничена возвращенной в кожу популяцией Т-клеток CLA+. См. патентную заявку США 11/353427, поданную 14 февраля 2006 г. (публикация патента США 2006-0188499), и патентную заявку США 11/353454, поданную 14 февраля 2006 г. (публикация патента США 2006-0188500), которые включены в данное описание в виде ссылки. Как таковой, антагонист IL-31, включающий антитело или антагонист рецептора, можно использовать для лечения кожи и эпидермальных заболеваний, которые характеризуются экспрессией IL-31 в Тклетках CLA+. Такие заболевания включают, например, атопический дерматит, контактный дерматит,индуцированные лекарственными средствами аллергические реакции, кожные вирусы и связанный с вирусами зуд, витилиго, Т-клеточную лимфому кожи, очаговую аллопецию, розацеа, обыкновенные угри,узелковую почесуху и буллезный пемфигоид. Для измерения нейтрализующего действия моноклонального антитела на IL-31 используют хемокины-маркеры, такие как TARC и MDC. Ингибиторные эффекты гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно измерить путем определения уровней TARC и MDC. Контактный дерматит Аллергический контактный дерматит определяют как опосредованную Т-клетками иммунную реакцию на антиген, вступающий в контакт с кожей. Считают, что Т-клеточная популяция CLA+ участвует в инициации дерматита, поскольку аллергензависимые Т-клеточные ответы, как правило, ограничиваются клеточной популяцией CLA+ (см. Santamaria-Babi, L. F. et al., J Exp Med: 181, 1935, (1995. Полученные в последнее время данные свидетельствуют о том, что в ответ на никель, распространенный аллерген контактной гиперчувствительности, пролиферируют и продуцируют цитокины типа 1 (IFN- ) и типа 2 (IL-5) только Т-клетки памяти (CD45RO+) CD4 + CLA+, но не CD8+. Кроме того, после никельспецифической стимуляции клетки, экспрессирующие CLA в сочетании с CD4, CD4 5RO (клеткипамяти) или CD69, увеличиваются в числе и экспрессируют рецепторы хемокинов CXCR3, CCR4,CCR10, но не CCR6. См. Moed H. et al., Br J Dermatol: 51, 32, (2004). На животных моделях показано, что аллергический контактный дерматит опосредуется Т-клетками,и что участвующие в аллергическом ответе Т-клетки мигрируют к участку нанесения аллергена. См. общее описание: Engeman T.M. et al., J Immunol: 164, 5207, (2000); Ferguson T.A.Kupper T.S. J Immunol: 150, 1172, (1993); и Gorbachev A.V.Fairchild RX. Crit Rev Immunol: 21, 451(2001). Поскольку Т-клеткиCLA+ продуцируют IL-31, а стимуляция кожных кератиноцитов под действием IL-31 может индуцировать провоспалительные хемокины, такие как TARC и MDC, IL-31 может участвовать в патофизиологии контактного дерматита, например, путем применения нейтрализующего антитела против IL-31 в мышиной модели контактной гиперчувствительности. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода контактной гиперчувствительности в результате ингибирования, уменьшения,нейтрализации, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанного с заболеванием. Атопический дерматит Атопический дерматит (AD) представляет собой хронически рецидивирующее воспалительное заболевание кожи с резким увеличением частоты встречаемости в течение последних десятилетий. Клинически AD характеризуется часто шелушащимися бляшками и папулами, которые вызывают сильный зуд,и имеет хронически рецидивирующее течение. Диагностика AD, как правило, основывается на главных и минорных клинических признаках. См. Hanifin J.M., Arch Dermatol: 135, 1551 (1999). Гистопатология включает спонгиоз, гиперкератоз и очаговый паракератоз в участках острых повреждений, тогда как отличительными признаками хронических повреждений являются выраженная эпидермальная гиперплазия с гиперкератозом и паракератозом, акантоз/гипергранулез и периваскулярная инфильтрация дермы лимфоцитами и большим количеством тучных клеток. Т-клетки играют основную роль в инициации локальных иммунных ответов в тканях, и полученные данные позволяют предположить, что инфильтрующиеся в кожу Т-клетки, в частности, могут играть ключевую роль в инициации и поддержании аномальных иммунных ответов в коже. Примерно 90% Тклеток, инфильтрующихся в воспаленных участках кожи, экспрессируют кожный лимфоцитассоциированный Ag (CLA+), который связывает Е-селектин, индуцируемую молекулу адгезии на эндотелии (обзор можно найти в Santamaria-Babi L.F. et al., Eur J Dermatol: 14, 13, (2004. Описано значительное увеличение Т-клеток CLA+ в кровотоке пациентов с AD по сравнению с контрольными субъектами (см. Teraki Y. et al., Br J Dermatol: 143, 373 (2000, а другие авторы показали, что Т-клетки памятиCLA+ пациентов с AD предпочтительно отвечают на аллергенный экстракт по сравнению с популяциейCLA- (см. Santamaria-Babi, L. F. et al. J Exp Med'ASl, 1935, (1995. У людей патогенез атопических нарушений кожи связан с увеличением числа Т-клеток CLA+, которые экспрессируют повышенные уровни цитокинов типа 2 Th-, таких как IL-5 и IL-13 9, 10. См. Akdis M. et al. Eur J Immunol: 30, 3533 (2000); иHamid Q. et al., J Allergy Clin Immunol: 98, 225 (1996). У мышей NC/Nga в возрасте примерно 6-8 недель в условиях отсутствия неспецифического патогена (non-SPF) спонтанно развиваются AD-подобные повреждения, аналогичные человеческому AD во многих аспектах, включающих клиническое течение и клинические симптомы, гистопатологию и иммунопатологию. И наоборот, у мышей NC/Nga, которых держат в условиях SPF, повреждения кожи не развиваются. Однако появление спонтанных повреждений кожи и почесывание можно синхронизировать у мышей NC/Nga, которых держат в условиях SPF, путем еженедельного внутрикожного введения неочищенного антигена пылевого клеща. См. Matsuoka H. et al., Allergy: 58, 139 (2003). Следовательно, развитие AD у NC/Nga является моделью, подходящей для анализа новых терапевтических средств противAD. Помимо NC/Nga модели спонтанного AD также можно использовать накожную сенсибилизацию мышей с использованием OVA в качестве модели индуцирования антигензависимого эпидермального и дермального утолщения с мононуклеарным инфильтратом в коже сенсибилизированных мышей. Это обычно сопровождается повышенными сывороточными уровнями общих и специфических IgE, однако дисфункция кожного барьера или зуд у данной модели не наблюдаются. См. Spergel J.M. et al., J Clin Invest, 101:1614 (1998). Чтобы индуцировать нарушение кожного барьера и зуд, указанный метод можно модифицировать путем сенсибилизации OVA трансгенных мышей DO11.10 OVA. Увеличение числа антиген-специфичных Т-клеток, способных распознавать сенсибилизирующий антиген, может привести к повышению уровня воспаления в коже и вызвать видимое почесывание и лихенификацию/шелушение кожи. И NC/Nga модель спонтанного AD и OVA накожную модель DO11.10 используют для анализа способности гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, ингибировать, уменьшать или нейтрализовать эффекты IL-31. Введение гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 может приводить к уменьшению расчесывания, что позволяет эффективно лечить связанные с зудом заболевания, включающие без ограничения атопический дерматит, узелковую почесуху и экзему, поскольку прекращение расчесывания останавливает развитие дерматита, которое зависит от расчесывания. Другие модели для анализа ингибиторных эффектов гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно найти в Umeuchi H. et al.,European Journal of Pharmacology, 518:133-139, 2005 и Yoo J. et al., J. Experimental Medicine, 202:541-549,2005. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода дерматита и связанных с зудом заболеваний, включающих атопический дерматит, узелковую почесуху и экзему, путем ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанного с заболеванием. Способы измерения способности гуманизированных антител против IL-31 и антагонистов IL-31 ингибировать, уменьшать или нейтрализовать зуд включают следующие анализы и модели:I) Лечение капсаицином мышей, обработанных IL-31 Животных BALB/c возрастом десять недель (CRL) анестезируют, после чего им подкожно вводят обезболивающее средство длительного действия, бупренорфина гидрохлорид, в дозе 0,1 мг/кг, и затем в заднюю часть шеи подкожно вводят 0,25 мл раствора капсаицина 4 мг/мл в 10% этаноле + 10% твин-80 в физиологическом растворе. После обработки нейротоксином животных держат под анестезией в течение по меньшей мере 30 мин. Через 48 ч подкожно имплантируют 14-дневные осмотические насосы, обеспечивающие непрерывную доставку 20 мкг/день IL-31 в течение 14 дней. У мышей ежедневно в течение 6 дней регистрируют алопецию и зуд, используя следующие критерии 0 = отсутствие почесывания, животное выглядит нормальным, 1 = разрежение шерсти в небольших участках, отмечается почесывание, 2 = небольшое уменьшение волосяного покрова (маленькие бляшки), почесывание, 3 = среднее уменьшение волосяного покрова, почесывание и 4 = сильное уменьшение волосяного покрова, чрезмерное почесывание. Нейтрализация, ингибирование или уменьшение IL-31 под действием гуманизированных молекул,связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 может снизить встречаемость и интенсивность зуда и, следовательно, дерматита у пациентов, страдающих от кожных нарушений, включающих зуд.II) Экспресссия гена Tac1 Мыши, гомозигоные по отсутствию гена Tacl, не экспрессируют детектируемых количеств вещества Р или нейрокинина А. Такие мыши имеют значительно пониженные ноцицептивные ответы на средние-интенсивные болевые стимулы и, следовательно, представляют собой полезный инструмент для изучения вклада пептидов тахикинина в развитие боли/зуда и состояний воспалительных заболеваний. Мышам с выключенным геном Tac1 возрастом двенадцать недель имплантируют 14-дневные осмотические насосы, доставляющие 1 мкг/день белка IL-31, и ежедневно наблюдают у них алопецию и зуд, используя следующие критерии: 0 = отсутствие почесывания, животное выглядит нормальным, 1 = разрежение шерсти в небольших участках, отмечается почесывание, 2 = небольшое уменьшение волосяного покрова(маленькие бляшки), почесывание, 3 = среднее уменьшение волосяного покрова, почесывание, и 4 = сильное уменьшение волосяного покрова, чрезмерное почесывание. Результаты данного исследования показывают, что Tac1-дефицитные мыши менее чувствительны к индуцированному IL-31 почесыванию/потере волос по сравнению с контрольными мышами дикого типа. После 6 дней обработки IL-31 почесывание и потеря волос наблюдаются у 100% (10/10) мышей дикого типа и только у 33,3% (2/6) Tac1-дефицитных мышей. Таким образом, нейтрализация, ингибирование или уменьшение IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 может приводить к уменьшению встречаемости и интенсивности почесывания при дерматите.III) Введение нейтрализующего антитела против IL-31 Нормальным самкам мышей BALB/c mice (CRL) возрастом примерно от 8 до 12 недель имплантируют подкожно 14-дневные осмотические насосы (Alzet, 2002), доставляющие 1 мкг/день mIL-31. Группам мышей вводят внутрибрюшинно (в.б.) крысиные моноклональные антитела против мышиногоIL-31 в дозе 10 мг/кг (200 мкг/мышь) два раза в неделю, начиная за неделю до введения IL-31. Контрольным группам мышей в.б. вводят среду (PBS/0,1% БСА), используя такой же режим введения. У мышей ежедневно оценивают алопецию и зуд, используя следующие критерии: 0 = отсутствие почесывания,животное выглядит нормальным, 1 = разрежение шерсти в небольших участках, отмечается почесывание, 2 = небольшое уменьшение волосяного покрова (маленькие бляшки), почесывание, 3 = среднее уменьшение волосяного покрова, почесывание и 4 = сильное уменьшение волосяного покрова, чрезмерное почесывание. Таким образом, нейтрализация, ингибирование или уменьшение IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 может замедлять начало расчесывания/потери волос, индуцированные IL-31. Эффекты гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 измеряют по ингибированию расчесывания, зуда, дерматита, уменьшению экспрессии IL-31RA в кератиноцитах, и/или уменьшению степени алопеции и зуда. Индуцированные лекарственными средствами кожные аллергические реакции замедленного типа Индуцированные лекарственными средствами кожные аллергические реакции замедленного типа являются очень разнородными и могут отражать многочисленные и разнообразные патофизиологические процессы. См. Brockow К. et al., Allergy: 57, 45 (2002). Показано, что иммунологические механизмы, участвующие в данных реакциях, опосредуются либо антителами, либо клетками. В случае если аллергия на лекарственное средство относится к немедленному типу, IgE-опосредованную реакцию антител можно продемонстрировать путем инъекционной кожной пробы и/или внутрикожной пробы через 20 мин, тогда как реакции замедленного типа в ответ на лекарственные средства могут наблюдаться более чем через час после последнего приема лекарства и часто опосредуются Т-клетками. Опосредованные Т-клетками реакции замедленного типа могут встречаться у пациентов с неблагоприятными реакциями, например, на пенициллин. Показано, что пролиферативные Т-клеточные ответы на пенициллины ограничены субпопуляцией Т-клеток памяти (CD4 5RO+) CLA+ у пациентов с аллергией на пенициллин, тогда как субпопуляция CD4 5RO+ CLA- не участвует в пролиферативном ответе. См. Blanca M., Leyva L., et al., BloodCells Mol Dis: 31, 75 (2003). Реакции гиперчувствительности замедленного типа (DTH) можно искусственно воспроизвести у мышей и использовать их для анализа факторов, участвующих в инициации и поддержании ответа DTH. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонистыIL-31 могут эффективно ограничивать, уменьшать, ингибировать реакцию гиперчувствительности замедленного типа. Токсический эпидермальный некролиз (TEN) является очень редкой, но крайне тяжелой реакцией на лекарственные средства, которая характеризуется обширным апоптозом эпидермиса и большими волдырями. Исследования показывают, что лимфоциты, инфильтрующиеся в волдыри, представляют собой Т-клетки CLA+ и могут проявлять цитотоксичность в отношении эпидермальных кератиноцитов. См.Leyva L. et al. J Allergy Clin Immunol: 105, 157 (2000); и Nassif A., Bensussan A. et al., J Allergy Clin Immunol: 114, 1209 2004). Животную модель TEN получают на основе трансгенной мышиной системы, которая обеспечивает экспрессию OVA под контролем промотора кератина-5 (К 5) в кератиноцитах эпидермиса и волосяных фолликул мышей. OVA-специфичные Т-клетки CD8+ после адоптивного переноса мышам К 5-OVA подвергаются активации и пролиферации в кожу-дренирующих лимфатических узлах и направляются в кожу мышей K5-0VA, приводя к развитию кожных повреждений, напоминающих TEN. См. Azukizawa Н. et al., Eur J Immunol: 33, 1879 (2003). Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода TEN в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Буллезный пемфигоид Буллезный пемфигоид представляет собой субэпидермальное нарушение, которое проявляется в виде субэпидермальных волдырей с кожным инфильтратом нейтрофилов и эозинофилов. Диагностирование осуществляется по присутствию антиген-специфичных антител против специфических белков адгезии эпидермиса и соединения кожи и эпидермиса. См. Jordon R.E. et al., JAMA: 200,751 (1967). Исследования по установлению роли Т-клеток в патогенезе буллезного пемфигоида путем анализа PBL и Т-клеток кожных волдырей показывают преобладание Т-клеток CLA+, экспрессирующих повышенные уровни цитокинов Тп 2, таких как IL-4 и IL-13. См. Teraki Y. et al., J Invest Dermatol: 117,1097 (2001). У пациентов с буллезным пемфигоидом после системной терапии кортикостероидами количество CLA+, но не CLA-, интерлейкин-13-продуцирующих клеток, значительно уменьшается. Уменьшение числа клеток CLA+ после лечения кортикостероидами связано с клиническим улучшением. См.Teraki, из того же источника. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода буллезного пемфигоида в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Очаговая алопеция Очаговая алопеция (АА) представляет собой тканеспецифическое аутоиммунное заболевание волосяных фолликул, при котором активность фолликул прекращается вследствие непрерывной активности лимфоцитарных инфильтратов. В результате АА по всему телу образуются участки полной потери волосяного покрова, хотя реальной утраты волосяных фолликул не происходит, даже в участках, лишенных волос. Хотя клинические симптомы воспаления отсутствуют, биопсия кожи в участках активного заболевания показывает наличие перифолликулярного лимфоцитарного воспаления с участием в основном клеток CD4 + , наряду с интрафолликулярным инфильтратом CD8+. См. Kalish R.S.Gilhar A. J InvestigDermatol Symp Proc: 8, 164 (2003). Исследования показывают, что у субъектов с АА инфильтрация лимфоцитов CD4 + или CD8+, экспрессирующих CLA, в кожу черепа и процент CLA+ лимфоцитов CD4+ или CD8+ в периферической крови значительно выше, чем у нормальных субъектов. Кроме того, пациенты с тяжелой или прогресси- 23020457 рующей АА имеют гораздо более высокую положительную пробу на CLA, чем выздоравливающие пациенты, и уменьшение процента клеток CLA+ соответствует хорошему течению болезни. См. Yano S., etal., Acta Derm Venereol: 82, 82 (2002). Следовательно, указанные исследования позволяют предположить,что лимфоциты CLA+ могут играть важную роль в развитии АА. На ксенотрансплантантных моделях показано, что активированные Т-клетки, вероятно, участвуют в патогенезе АА. На поврежденной коже черепа пациентов с АА, пересаженной голым мышас, наблюдается наращивание волос, соответствующее уменьшению лимфоцитов, инфильтрующихся из трансплантата, а пересадка активированных Т-клеток из участка повреждения мышам SCID может приводить к потере волос на эксплантатах человеческой кожи черепа у мышей SCID. См. Kalish R.S.Gilhar A. J Investig Dermatol Symp Proc: 8, 164 (2003). Ряд иммуномодулирующих терапий используют в качестве составной части распространенного способа лечения данного нарушения, однако ни один из указанных способов лечения не является удовлетворительным по своей эффективности. См. Tang L., et al., J Invest Dermatol: 120, 400 (2003); Tang L. etal., (2004) и Tang L., et al., J Am Acad Dermatol: 49, 1013 (2003). Тем не менее, их применение в действующих животных моделях обеспечивает инструмент для выявления молекулярных механизмов терапевтических эффектов. См. Shapiro J. et al., J Investig Dermatol Symp Proc: 4, 239 (1999); Tang L., et al. Oldwine in new bottles: reviving old therapies for alopecia areata using rodent models (2003); и Verma D. D., et al.,Eur J Dermatol: 14, 332 (2004). Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода очаговой алопеции в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Розацея/Обыкновенные угри Обыкновенные угри, связанные с нарушением аппарата волос и сальных желез, представляют собой наиболее распространенную проблему подросткового возраста. Считается, что причиной угревого повреждения являются нарушения кератинизации фолликул. Розацея отличается от обыкновенных угрей присутствием красных папул, прыщей, кист и экстенсивной телеангиэктазией, но отсутствием угрей (белых головок). Повышенная экскреция кожного жира из сальных желез является основным фактором патофизиологии обыкновенных угрей. С развитием угрей также связаны другие функции сальных желез,включающие продукцию провоспалительных липидов; локальную продукцию разных цитокинов/ продукцию околожелезистых пептидов и нейропептидов, таких как кортикотропин-высвобождающий гормон, который продуцируется себоцитами; продукцию вещества Р, которое экспрессируется в нервных окончаниях вблизи здоровых на вид желез пациентов, страдающих от угрей. См. Zouboulis С.С. ClinDermatol: 22, 360 (2004). Хотя патофизиология обыкновенных угрей и розацеи остается неизвестной, клинические наблюдения и гистопатологические исследования позволяют предположить, что в основе патогенеза розацеи и обыкновенных угрей лежит воспаление волосяных фолликул и сальных желез. Первые исследования,основанные на анализе субпопуляций Т-клеток, инфильтрующихся в пораженные розацеей участки, показали, что основная часть Т-клеток экспрессирует CD4. См. Rufli Т.Buchner S.A. Dermatologica: 169,1 (1984). Т-клетки CD4+ продуцируют IL-31, и анализ кожи на экспрессию IL-31 методом IHC позволяет предположить, что IL-31 экспрессируется в сальных и потовых железах. Стимуляция эпидермальных кератиноцитов под действием IL-31 индуцирует экспрессию хемокинов, которые, по всей вероятности,вызывают инфильтрацию клеток, позволяя предположить, что IL-31 может вносить вклад в провоспалительный ответ кожи. См. Dillon S.R. et al., Nat Immunol: 5, 752 (2004). Следовательно, IL-31 может участвовать в патофизиологии розацеи и обыкновенных угрей. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода обыкновенных угрей в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Узелковая почесуха Узелковая почесуха характеризуется высыпанием лихенифицированных или шелушащихся узелков, которые образуются в результате трудноизлечимого зуда. Поскольку хроническое натирание приводит к лихенификации и расчесыванию с линейными экскориациями, у субъектов, которые ковыряют и выдавливают свою зудящую раздраженную кожу, существует тенденция к сильному утолщению папул,известных как узелки пруриго. Хотя узелковая почесуха не является характерной чертой атопического дерматита, многие пациенты с указанными узелками также могут иметь атопическую реакцию, которая выражается в виде аллергического ринита, астмы или пищевой аллергии. Основную часть клеток, инфильтрующихся в участках повреждения пруриго, составляют Т-клетки, а указанные повреждения зачастую составляют большую часть зудящих поражений кожи у атопических пациентов. Доказано, что местное лечение узелковой почесухи капсаицином, алкалоидом, который препятствует ощущению зуда и боли путем истощения нейропептидов, таких как вещество Р, в маленьких сенсорных кожных нервах, представляет собой эффективный и безопасный режим, приводящий к очищению кожных повреждений. См. Stander S., et al., J Am Acad Dermatol: 44, 471 (2001). Исследования связанного с зудом ответа у мышей NC/Nga показывают, что лечение капсаицином практически полностью предотвращает спонтанное развитие кожных повреждений. Кроме того, у мышей после лечения капсаицином наблюдается подавление повышения сыворочных уровней IgE и уменьшения числа инфильтрующихся эозинофилов и тучных клеток в поврежденных участках кожи. См. Mihara K. et al., Br J Dermatol: 151,335 (2004). Наблюдение данной группы позволяет предположить, что расчесывание может вносить вклад в развитие дерматита путем усиления разных иммунных ответов, и, следовательно, предотвращение ощущения зуда и/или связанного с зудом расчесывания может способствовать эффективному лечениюAD. См. Mihara K. et al., Br J Dermatol: 151, 335 (2004). Таким образом, гуманизированные антитела против IL-31, описанные в данном документе, можно использовать для минимизации эффектов AD, узелковой почесухи и других связанных с зудом заболеваний, поскольку показано, что они уменьшают число почесываний у мышей NC/Nga. Постоянная доставка IL-31 индуцирует зуд и алопецию у мышей с последующим развитием кожных повреждений, напоминающих дерматит, позволяя предположить, что IL-31 может индуцировать зуд. См. Dillon S.R. et al., Nat Immunol: 5, 752 (2004). Участие IL-31 в индукции связанного с зудом ответа можно измерить, например, двумя способами, включающими (i) лечение капсаицином мышей, обработанных IL-31; и (ii) обработку IL-31 мышей с выключенным геном Tacl, у которых значительно снижены болевые ответы вследствие отсутствия экспрессии нейропептидов. Кроме того, с помощью данных моделей можно определить, приводит ли нейтрализация IL-31 под действием гуманизированных молекул,связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 к предотвращению зуда и алопеции у мышей, обработанных IL-31. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода узелковой почесухи в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Кожные вирусы и связанный с вирусами зуд Специфичные к вирусу простого герпеса (HSV) Т-клетки CD8+ периферической крови и HSVспецифичные Т-клетки CD8+ из участков, пораженных герпесом, экспрессируют высокие уровни CLA,тогда как неспецифичные к кожному вирусу герпеса Т-клетки CD8+ не экспрессируют CLA. См. KoelleD.M., et al., J Clin Invest: 110, 537 (2002). Реакционноспособные в отношении HSV-2 Т-лимфоциты CD4+ также экспрессируют CLA, но на более низких уровнях, чем Т-лимфоциты CD8+. См. Gonzalez J. С, etal., J Infect Dis: 191, 243 (2005). Инфекции вируса герпеса также могут сопровождаться зудом (см. HungK.Y., et al., Blood Purif. 16, 147 (1998, как и другие вирусные заболевания, например, ВИЧ, которые могут быть связаны с зудящими повреждениями кожи. Тяжелый неизлечимый зуд, зачастую связанный с эритематозно-папулезными повреждениями кожи и гиперэозинофилией, представляет собой состояние,наблюдающееся у некоторых неатопических ВИЧ-инфицированных пациентов. См. Singh F.RudikoffD., Am J Clin Dermatol; 4, 177 (2003); и Milazzo F., Piconi S., et al., Allergy: 54, 266 (1999). Связь кожных вирусов с зудом и Т-клетками CLA+ позволяет предположить, что IL-31 продуцирующие Т-клетки могут участвовать в патофизиологии вирусных инфекций. Таким образом, нейтрализацию IL-31 под действием гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, описанных в данном документе, можно использовать для улучшения клинического исхода зуда, связанного с кожными вирусами, в результате ингибирования, уменьшения, предотвращения или блокирования воспаления и/или расчесывания, связанных с заболеванием. Воспаление - это защитный ответ организма на вторжение чужеродного агента. Воспаление представляет собой каскад событий, в которых участвует много клеточных и гуморальных медиаторов. С одной стороны, подавление иммунных ответов может привести к ослаблению иммунитета хозяина; однако нерегулируемое воспаление может вызвать серьезные осложнения, включающие хронические воспалительные заболевания (например, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, воспалительная болезнь кишечника и т.п.), септический шок и полиорганную недостаточность. Важно отметить, что указанные разные болезненные состояния имеют общие медиаторы воспаления. Совокупность заболеваний, характеризующихся воспалением, оказывает сильное влияние на заболеваемость и смертность людей. Таким образом, очевидно, что противовоспалительные антитела и связывающие полипептиды, такие как антитела против IL-31 и IL-31-связывающие полипептиды, описанные в данном документе, могут обладать значительным терапевтическим потенциалом в отношении большого числа заболеваний человека и животных, от астмы и аллергии до аутоиммунных реакций и септического шока. Как таковые, описанные в данном документе противовоспалительные антитела против IL-31 и полипептиды, связывающие IL-31,можно использовать в качестве антагонистов IL-31, описанных в данном документе, в частности, для лечения таких заболеваний, как артрит, эндотоксикоз, воспалительная болезнь кишечника, псориаз, родственные заболевания и т.п. 1. Артрит Артрит, в том числе остеоартрит, ревматоидный артрит, артритические суставы как результат повреждения и т.п., представляет собой распространенное воспалительное состояние, улучшающееся при терапевтическом применении противовоспалительных антител и связывающих полипептидов, таких как антитела против IL-31 и IL-31-связывающие полипептиды по настоящему изобретению. Например, ревматоидный артрит (RA) представляет собой системное заболевание, которое оказывает влияние на весь организм, и является одной из наиболее распространенных форм артрита. Он характеризуется воспалением оболочки, выстилающей сустав, которое вызывает боль, тугоподвижность, жар, покраснение и опухание. Воспалительные клетки высвобождают ферменты, которые могут расщеплять кости и хрящи. При ревматоидном артрите выстилка воспаленного сустава, синовиальная оболочка, может проникать в кость и хрящ и разрушать их, вызывая разрушение сустава и сильную боль в числе прочих физиологических эффектов. Форма и расположение больного сустава могут измениться, приводя к болезненным ощущениям и потере двигательной способности. Ревматоидный артрит (RA) представляет собой опосредованное иммунной системой заболевание, в частности, характеризующееся воспалением и последующим разрушением ткани, которое приводит к тяжелой форме инвалидности и повышенной смертности. В ревматоидных суставах локально производится ряд цитокинов. Многочисленные исследования показывают, что IL-1 и TNF-альфа, два прототипических провоспалительных цитокина, играют важную роль в механизмах, участвующих в воспалении синовиальной оболочки и в развитии деструкции сустава. Действительно, введение ингибиторов TNFальфа и IL-1 пациентам с RA приводит к значительному улучшению клинических и биологических симптомов воспаления и уменьшению радиологических признаков эрозии кости и разрушения хряща. Однако, несмотря на эти обнадеживающие результаты, значительный процент пациентов не отвечает на указанные средства, это позволяет предположить, что в патофизиологии артрита участвуют и другие медиаторы (Gabay, Expert. Opin. Biol. Ther. 2 (2): 135-149, 2002). Одним из этих медиаторов может быть IL-31 и, как таковые, молекулы, которые связывают или ингибируют IL-31, такие как антитела против IL-31,или партнеры IL-31 по связыванию, можно использовать в качестве ценных терапевтических средств для уменьшения воспаления при ревматоидном артрите и других артритических заболеваниях. В данной области известно несколько животных моделей ревматоидного артрита. Например, у мышиной коллаген-индуцированной модели артрита (CIA) развивается хронический воспалительный артрит, очень напоминающий человеческий ревматоидный артрит. Поскольку CIA обладает такими же иммунологическими и патологическими признаками, как и RA, он является идеальной моделью для скрининга потенциальных человеческих противовоспалительных средств. Модель CIA представляет собой хорошо известную модель, для реализации которой нужен как иммунный, так и воспалительный ответ. Иммунный ответ включает взаимодействие В-клеток и Т-клеток CD4 + в ответ на коллаген, который вводят в качестве антигена, и последующую продукцию антител против коллагена. Воспалительная фаза является результатом тканевых ответов на медиаторы воспаления вследствие перекрестных реакций некоторых из указанных антител с нативным мышиным коллагеном и активации каскада комплемента под действием этих антител. Преимущество модели CIA заключается в том, что основные механизмы патогенеза известны. Соответствующие Т-клеточные и В-клеточные эпитопы на коллагене типа II и разные иммунологические (например, гиперчувствительность замедленного типа и антитела против коллагена) и воспалительные (например, цитокины, хемокины и ферменты, разрушающие матрикс) параметры, связанные с опосредованным иммунной системой артритом, идентифицированы и, следовательно, могут использоваться для определения эффективности тестируемых соединений на модели CIA (Wooley, Curr.Opin. Rheum. 3:407-20, 1999; Williams et al., Immunol. 89: 9784-788, 1992; Myers et al., Life Sci. 61:1861-78,1997 и Wang et al., Immunol. 92: 8955-959, 1995). Как молекула, которая модулирует иммунный и воспалительный ответы, IL-31 может индуцировать продукцию SAA, который участвует в патогенезе ревматоидного артрита. Гуманизированные молекулы,связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 могут уменьшать активность SAA in vitro и in vivo,системное или местное введение молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 потенциально может подавлять воспалительный ответ при RA. 2. Эндотоксикоз Эндотоксикоз представляет собой тяжелое состояние, которое обычно возникает в результате воздействия инфекционных факторов, таких как бактерии и другие инфекционные болезнетворные агенты,сепсис, синдром токсического шока, или у пациентов с иммунной недостаточностью, подвергающихся воздействию инфекций условно патогенных организмов и т.п. Терапевтическое применение противовоспалительных антител и связывающих полипептидов, таких как антитела против IL-31 и IL-31 связывающие полипептиды по настоящему изобретению, может обеспечивать профилактику и лечение эндотоксикоза у людей и животных. Другие потенциальные терапевтические средства включают полипептиды IL-31RA, растворимые гетеродимерные и мультимерные рецепторные полипептиды, или антитела против IL-31 или партнеры IL-31 по связыванию по настоящему изобретению и т.п., которые можно использовать в качестве полезных терапевтических средств для уменьшения воспаления и патологических эффектов при эндотоксикозе. В развитии индуцированного липополисахаридом (LPS) эндотоксикоза участвуют многие из провоспалительных медиаторов, вызывающих патологические эффекты при инфекционных заболеваниях,поэтому LPS-индуцированный эндотоксикоз у грызунов является широко распространенной и приемле- 26020457 мой моделью для изучения фармакологических эффектов потенциальных провоспалительных или иммуномодулирующих средств. LPS, продуцируемый грамотрицательными бактериями, является основным средством, инициирующим патогенез септического шока (Glausner et al., Lancet 338: 732, 1991). Шокоподобное состояние в действительности можно индуцировать экспериментально путем однократного введения LPS животным. Молекулы, продуцирующиеся клетками, отвечающими на LPS, могут быть направлены на патогены непосредственно или косвенно. Хотя указанные биологические ответы защищают хозяина от вторгающихся патогенов, они могут причинять вред. Так, массированная стимуляция врожденного иммунитета в результате тяжелой инфекции грамотрицательных бактерий приводит к избыточной продукции цитокинов и других молекул, а также к развитию летального синдрома, синдрома септического шока, который характеризуется лихорадкой, гипотонией, диссеминированной внутрисосудистой коагуляцией и полиорганной недостаточностью (Dumitru et al. Cell 103: 1071-1083, 2000). Указанные токсические эффекты LPS в основном связаны с активацией макрофагов, приводящей к высвобождению многочисленных медиаторов воспаления. Среди этих медиаторов ключевую роль играетTNF, поскольку введение нейтрализующих антител против TNF позволяет предотвратить токсичностьLPS (Beutler et al., Science 229:869, 1985). Хорошо установлено, что введение 1 мкг LPS E. coli мыши С 57 В 1/6 приводит к значительному увеличению уровней IL-6, TNF-альфа, IL-1 и острофазного белка(например, SAA) в кровотоке примерно через 2 ч после введения. Токсичность LPS опосредуется указанными цитокинами, поскольку пассивная иммунизация против данных медиаторов может приводить к уменьшению смертности (Beutler et al., Science 229:869, 1985). Потенциальные стратегии вмешательства в иммунную систему с целью профилактики и/или лечения септического шока включают применениеmAb против TNF, антагонистов рецептора IL-1, LIF, IL-10 и G-CSF. Поскольку LPS индуцирует продукцию провоспалительных факторов, возможно участвующих в патологии эндотоксикоза, нейтрализацию активности IL-31, SAA или других провоспалительных факторов с помощью полипептида, противодействующего IL-31, можно использовать для уменьшения симптомов эндотоксикоза, например, наблюдающихся при эндотоксическом шоке. Другие потенциальные терапевтические средства включают гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31. 3. Воспалительная болезнь кишечника (IBD) Воспалительная болезнь кишечника (IBD) может поражать или ободочную, или прямую кишку (язвенный колит), или и ту, и другую, тонкий и толстый кишечник (болезнь Крона). Патогенез данных заболеваний не известен, однако они могут включать хроническое воспаление пораженных тканей. Потенциальные терапевтические средства включают полипептиды IL-31RA, растворимые гетеродимерные и мультимерные рецепторные полипептиды, или антитела против IL-31 или партнеры IL-31 по связыванию настоящего изобретения и т.п., которые можно использовать в качестве полезных терапевтических средств для уменьшения воспаления и патологических эффектов при IBD и родственных заболеваниях. Хроническое воспаление и образование язв при болезни Крона обычно начинается либо с обструкции тонкого кишечника, либо с абдоминальной боли, которая может напоминать боль при остром аппендиците; другие симптомы могут относиться к его осложнениям. Заболевание имеет хроническое течение,и, несмотря на лечение, могут наблюдаться обострения и ремиссии. Заболевание обычно начинается в молодом возрасте, причем примерно половина всех случаев начинается в возрасте от 20 до 30 лет и 90% случаев начинается в возрасте от 10 до 40 лет. Самцы заболевают немного чаще, чем самки. Микроскопия отражает большие проявления. Воспалительные включения не являются сплошными: они встречаются в виде очагов или пятен. Группы лимфоцитов и плазматических клеток обнаруживаются в основном в слизистой оболочке и подслизистой оболочке, однако, как правило, они поражают все слои (трансмуральное воспаление). Классическим микроскопическим признаком болезни Крона является присутствие лаброцитов, окруженных скоплением лимфоцитов. Встречаемость идиопатических воспалительных болезней кишечника имеет значительные географические вариации. Эти заболевания гораздо чаще встречаются в северной Европе и Соединенных Штатах, чем в странах южной Европы, Африки,южной Америки и Азии, хотя повышенные урбанизация и благосостояние приводят к более высокой встречаемости в районах южной Европы и Японии (General и Systematic Pathology, Churchill Livingstone,3rd edition 2000, JCE Underwood, Ed.). Пациентов с болезнью Крона можно подразделить на две основные клинические группы, первая включает пациентов, заболевание которых вступает в фазу постоянной ремиссии в течение трех лет после его появления, а вторая включает пациентов, заболевание которых продолжается более трех лет. Независимо от этиологии существуют факты, свидетельствующие о том, что при болезни Крона происходит постоянная и некорректная активация Т-клеток и макрофагов с повышенной продукцией провоспалительных цитокинов, в частности интерлейкинов (IL) 1, 2, 6 и 8, интерферона (IFN) и фактора некроза опухолей (TNF). Болезнь Крона характеризуется постоянным (хроническим) воспалением, сопровождающимся фиброзом. Процесс пролиферации фибробластов и отложение коллагена может опосредоваться трансформирующим фактором роста, который обладает некоторым противовоспалительным действием, а именно обуславливает рекрутинг фибробластов, синтез матрикса и понижающую регуляцию воспалительных клеток, однако в этом процессе могут участвовать и многие другие медиаторы. Язвенный колит (UC) представляет собой воспалительное заболевание толстого кишечника, обычно называемого ободочной кишкой, характеризующееся воспалением и изъязвлением слизистой оболочки или наиболее глубокой выстилки ободочной кишки. Данное воспаление заставляет ободочную кишку чаще опорожняться, приводя к диарее. Симптомы включают послабление стула и связанные с ним спазмы в брюшной полости, лихорадку и потерю массы. Хотя точная причина UC неизвестна, последние исследования позволяют предположить, что природные защитные механизмы оганизма работают против собственных белков, которые организм считает чужими ("аутоиммунная реакция"). Возможно, из-за того, что они напоминают бактериальные белки в кишечнике, указанные белки могут инициировать или стимулировать воспалительные процессы, которые разрушают выстилку толстого кишечника. По мере разрушения выстилки толстого кишечника язвы выделяют слизь, гной и кровь. Заболевание обычно начинается в области прямой кишки и может, в конечном счете, распространяться по всему толстому кишечнику. Повторяющиеся эпизоды воспаления приводят к утолщению стенки кишечника и прямой кишки с образованием рубцовой ткани. При тяжелом состоянии заболевания может наблюдаться гибель ткани толстой кишки или сепсис. Симптомы язвенного колита имеют разную степень тяжести и могут начинаться постепенно или внезапно. Приступы могут вызываться многими факторами, в том числе респираторными инфекциями или стрессом. Хотя в настоящее время UC не излечивается, способы его лечения сфокусированы на подавлении аномального воспалительного процесса в выстилке толстой кишки. Для лечения заболевания используют способы, включающие применение кортикостероидов, иммунодепрессантов (таких как азатиоприн, меркаптопурин и метотрексат) и аминосалицилатов. Однако длительное применение иммунодепрессантов,таких как кортикостероиды и азатиоприн, может приводить к серьезным побочным эффектам, включающим утоньшение костей, катаракты, инфекцию и влияние на печень и костный мозг. Пациентов, на которых не действуют существующие в настоящее время способы лечения, можно подвергнуть хирургическому вмешательству. Хирургическое вмешательство включает удаление всей толстой кишки и прямой кишки. Существует несколько животных моделей, которые могут частично имитировать хронический язвенный колит. Наиболее широко используется модель колита, индуцированного 2,4,6 тринитробензолсульфоновой кислотой/этанол (TNBS), которая характеризуется хроническим воспалением и изъязвлением толстой кишки. После введения в толстую кишку чувствительных мышей TNBS индуцирует опосредованный Т-клетками иммунный ответ в слизистой оболочке толстого кишечника, который приводит к масштабному воспалению слизистой оболочки, характеризующемуся интенсивной инфильтрацией Т-клеток и макрофагов через всю стенку толстого кишечника. Указанные гистопатологические процессы сопровождаются такими клиническими признаками, как прогрессирующая потеря массы(кахексия), геморрагический понос, выпадение прямой кишки и утолщение стенки толстого кишечника(Neurath et al. Intern. Rev. Immunol. 19: 51-62, 2000). Другую модель колита получают с использованием декстрансульфата натрия (DSS), который индуцирует острый колит, сопровождающийся геморрагическим поносом, потерей массы, укорачиванием толстого кишечника и изъязвлением слизистой оболочки с инфильтрацией нейтрофилов. DSSиндуцированный колит гистологически характеризуется инфильтрацией воспалительных клеток в собственную пластинку слизистой оболочки с лимфоидной гиперплазией, фокальным разрушением крипт и изъязвлением эпителия. Полагают, что эти изменения развиваются вследствие токсического действияDSS на эпителий, фагоцитоза клеток собственной пластинки и продукции TNF-альфа и IFN-гамма. Несмотря на широкое применение данной модели, некоторые спорные вопросы, касающиеся механизмов воздействия DSS на человеческие заболевания, остаются нерешенными. DSS рассматривается как модель, независимая от Т-клеток, поскольку ее можно получить у животных, дефицитных по Т-клеткам,таких как мыши SCID. Введение гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 указанным моделям TNBS или DSS можно использовать для оценки применения антагонистов IL-31 с целью улучшения симптомов и изменения течения желудочно-кишечного заболевания. IL-31 может участвовать в воспалительном ответе при колите, и нейтрализация активности IL-31 путем введения гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31 является потенциальным терапевтическим подходом для лечения IBD. 4. Псориаз Псориаз представляет собой хроническое кожное состояние, от которого страдают более семи миллионов американцев. Псориаз возникает при аномальном росте новых клеток кожи, приводящем к образованию воспаленных, опухших и шелушащихся участков кожи, в которых старая кожа устраняется не достаточно быстро. Пятнистый псориаз, наиболее распространенная форма, характеризуется воспаленными участками кожи ("повреждениями"), покрытыми серебристо-белыми чешуйками. Псориаз может ограничиваться несколькими пятнами, или он может поражать участки кожи от средних до обширных,которые чаще всего наблюдаются на коже черепа, коленях, локтях и туловище. Хотя псориаз отчетливо виден, он не является заразным заболеванием. Патогенез данного заболевания включает хроническое воспаление пораженных тканей. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 можно использовать в качестве полезного терапевтического средства для уменьшения вос- 28020457 паления и патологических эффектов при псориазе, других воспалительных кожных заболеваниях, аллергических заболеваниях кожи и слизистой оболочки и родственных заболеваниях. Псориаз представляет собой опосредованное Т-клетками воспалительное нарушение кожи, которое может вызывать сильный дискомфорт. Это заболевание не поддается лечению и поражает людей всех возрастов. От псориаза страдает примерно два процента населения Европы и северной Америки. Хотя субъекты со слабовыраженным псориазом зачастую могут контролировать свое заболевание с помощью местных средств, более миллиона пациентов во всем мире нуждаются в терапии с применением ультрафиолетового облучения или системных иммунодепрессантов. К сожалению, недостатки и факторы риска,связанные с ультрафиолетовым облучением и токсичностью многих терапевтических средств, ограничивают их применение во времени. Кроме того, у пациентов обычно наблюдается рецидив псориаза.IL-31 выделяют из ткани, которая заведомо выполняет важную иммунологическую функцию и содержит клетки, участвующие в иммунных процессах. IL-31 экспрессируется в некоторых активированных клетках периферической крови CD3+, причем показано, что экспрессия IL-31 повышается после активации 1-клеток. Кроме того, гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 могут оказывать влияние на рост/экспансию моноцитов/макрофагов, Т-клеток, В-клеток, NKклеток и/или состояние дифференцировки моноцитов/макрофагов, Т-клеток, В-клеток, NK-клеток или предшественников указанных клеток. Факторы, которые способны и стимулировать пролиферацию предшественников кроветворных клеток, и активировать зрелые клетки, широко известны, однако для пролиферации и активации могут потребоваться и другие факторы роста. Например, показано, что для образования колоний предшественников NK-клеток требуются IL-7 и стальной фактор (лиганд с-набора).IL-15 + IL-2 в сочетании с IL-7 и стальным фактором являются более эффективными (Mrozek et al., Blood 87:2632-2640, 1996). Однако для пролиферации некоторых подвидов NK-клеток и/или NKпредшественников (Robertson et al., Blood 76:2451-2438, 1990) могут потребоваться и неидентифицированные цитокины. Подобным образом, IL-31 может действовать один или вместе с другими цитокинами,которые дополняют или усиливают его способность увеличивать рост, повышать пролиферацию и изменять дифференциацию моноцитов/макрофагов, Т-клеток, В-клеток или NK-клеток. Настоящее изобретение направлено на применение гуманизированных молекул, связывающих антиген IL-31, или антагонистов IL-31, в качестве антагонистов воспалительных и иммунных заболеваний или состояний, таких как атопический дерматит, связанные с зудом заболевания, панкреатит, диабет типа I (IDDM), рак поджелудочной железы, панкреатит, болезнь Грейвса, воспалительная болезнь кишечника (IBD), болезнь Крона, рак толстого и тонкого кишечника, дивертикулез, аутоиммунное заболевание,сепсис, органный или костномозговой трансплантат; воспаление вследствие травмы, хирургического вмешательства или инфекции; амилоидоз; спленомегалия; реакция трансплантат против хозяина; для ингибирования воспаления, подавления иммунитета, уменьшения пролиферации кроветворных, иммунных, воспалительных или лимфоидных клеток, макрофагов, Т-клеток (включающих клетки Thl и Тп 2,клетки CD4+ и CD8+), подавления иммунного ответа на патоген или антиген. Кроме того, наличие экспрессии IL-31RA в активированных иммунных клетках, таких как активированные клетки CD4+ иCD19+, показывает, что рецептор IL-31RA может участвовать в защитных иммунных реакциях организма против чужеродных агентов, таких как микроорганизмы и клеточные остатки, и может играть роль в иммунных ответах в процессе воспаления и возникновения рака. Как таковые, антитела и партнеры по связыванию по настоящему изобретению, которые обладают агонистическим или антагонистическим действием в отношении рецептора IL-31RA, такие как IL-31, можно использовать для модификации иммунного ответа и воспаления. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 также можно использовать в диагностических системах для определения уровней IL-31 в кровотоке. В родственном воплощении антитела или другие средства, которые специфически связываются с полипептидами IL-31,можно использовать для определения уровней полипептидов IL-31 в кровотоке. Повышенные или пониженные уровни лигандных полипептидов могут указывать на наличие патологических состояний, включающих рак. Полипептиды IL-31 могут участвовать в патологических процессах, следовательно, их можно использовать в качестве косвенных маркеров лежащего в основе заболевания. При атеросклеротических повреждениях одной из первых аномалий является локализация моноцитов/макрофагов вблизи эпителиальных клеток. Данные повреждения можно предотвратить путем применения антагонистов IL-31. Гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонистыIL-31 можно использовать в качестве антагонистов IL-31 в атеросклеротических повреждениях. Кроме того, монобластный лейкоз связан с рядом клинических аномалий, которые отражают высвобождение биологических продуктов из макрофагов, их примеры включают высокие уровни лизозима в сыворотке и моче и сильную лихорадку. Такие лейкозы также характеризуются аномальным увеличением числа моноцитов. Данные эффекты можно предотвращать с помощью антагонистов IL-31, таких как описанные в данном документе. Кроме того, гуманизированные молекулы, связывающие антиген IL-31, или антагонисты IL-31 можно конъюгировать, как описано в данном документе, с такими молекулами, как токсические фрагменты и цитокины, которые позволяют непосредственно уничтожать лейкемические моноцитарные клетки.