Агонисты смешанного действия на основе глюкозозависимого инсулинотропного пептида для лечения нарушений обмена веществ и ожирения

Формула / Реферат | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Код ссылки

Номер патента: 20326

Опубликовано: 30.10.2014

Авторы: Димарчи Ричард Д., Ма Тао

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, со следующими модификациями:

(a) модификация аминокислоты в положении 1, придающая активность агониста GIP;

(b) модификация, выбранная из группы, включающей:

(i) лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 либо между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 или 24 и где j - 17; и

(ii) одна, две, три либо все аминокислоты в положениях 16, 20, 21 и 24 аналога заменены α,α-дизамещенной аминокислотой;

(d) 1-10 других модификаций аминокислот относительно нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1),

причем аналог демонстрирует по меньшей мере 1% активности нативного GIP на GIP-рецепторе, величина ЕС₅₀ глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается меньше чем приблизительно в 50 раз от величины его ЕС₅₀ на GLP-1-рецепторе и факультативно GIP эффективность упомянутого аналога приблизительно в 15 раз превышает его GLP-1 эффективность.

2. Аналог по п.1, где модификация аминокислоты в положении 1 представляет собой замену His аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи.

3. Аналог по п.2, где аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи, является большая ароматическая аминокислота.

4. Аналог по п.3, где большой ароматической аминокислотой является Tyr.

5. Аналог по любому из пп.1-4, где лактамовый мостик расположен между аминокислотами в положениях 16 и 20, где одна из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Glu, а другая из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Lys.

6. Аналог по любому из пп.1-4, где α,α-дизамещенной аминокислотой является AIB.

7. Аналог по любому из пп.1-4 и 6, где аминокислота в положении 16 либо положении 20 заменена α,α-дизамещенной аминокислотой.

8. Аналог по п.7, где аминокислотой в положении 20 является AIB, a аминокислота в положении 16 заменена положительно заряженной аминокислотой.

9. Аналог по п.8, где положительно заряженной аминокислотой является аминокислота формулы IV

[Формула IV]

где n составляет от 1 до 7, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, включающей Н, С₁-С₁₈-алкил, (С₁-С₁₈-алкил)OH, (С₁-С₁₈-алкил)NH₂,(С₁-С₁₈-алкил)SH, (С₀-С₄-алкил)(С₃-С₆)циклоалкил, (С₀-С₄-алкил)(С₂-С₅-гетероцикл), (С₀-С₄-алкил)(С₆-С₁₀-арил)R₇ и (С₁-С₄-алкил)(С₃-С₉-гетероарил), где R₇ - Н или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу.

10. Аналог по п.9, где аминокислотой формулы IV является гомо-Lys, Lys, Orn или 2,4-диаминомасляная кислота (DAB).

11. Аналог по любому из пп.1-10, где:

(a) Met в положении 27 заменен на большую алифатическую аминокислоту, факультативно Leu;

(b) Asn в положении 28 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Ala;

(d) комбинация двух или всех (а)-(с).

12. Аналог по п.11, содержащий Leu в положении 27, Ala в положении 28 и Gly либо Thr в положении 29.

13. Аналог по любому из пп.1-12, содержащий удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29.

14. Аналог по п.13, где удлиняющий сегмент содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95 либо 96.

15. Аналог по п.13 либо 14, где 1-6 аминокислот удлиняющего сегмента являются положительно заряженными аминокислотами.

16. Аналог по п.15, где 1-6 положительно заряженными аминокислотами являются аминокислоты формулы IV

[Формула IV]

где n составляет от 1 до 7, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, включающей Н, С₁-С₁₈-алкил, (С₁-С₁₈-алкил)ОН, (С₁-С₁₈-алкил)NH₂, (C₁-C₁₈-алкил)SH, (С₀-С₄-алкил)(С₃-С₆)циклоалкил, (С₀-С₄-алкил)(С₂-С₅-гетероцикл), (С₀-С₄-алкил)(С₆-С₁₀-арил)R₇ и (С₁-С₄-алкил)(С₃-С₉-гетероарил), где R₇- H или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу.

17. Аналог по п.16, где аминокислотой формулы IV является гомо-Lys, Lys, Orn или Dab.

18. Аналог по любому из пп.1-17, содержащий аминокислоту, содержащую боковую цепь, ковалентно связанную с ацильной либо алкильной группой, где упомянутая ацильная либо алкильная группа не является нативной для природной аминокислоты.

19. Аналог по п.18, где аминокислотой, связанной с ацильной либо алкильной группой, является аминокислота формул I, II либо III.

20. Аналог по п.18, где аминокислотой формулы I является Lys.

21. Аналог по любому из пп.18-20, где аминокислота, связанная с ацильной либо алкильной группой, расположена в положении 10 аналога относительно последовательности SEQ ID NO: 1.

22. Аналог по любому из пп.18-20, где в случае, если аналог содержит удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, упомянутая аминокислота, связанная с ацильной либо алкильной группой, расположена в положении, соответствующем любому из положений 37-43.

23. Аналог по п.22, где аминокислота, связанная с ацильной либо алкильной группой, расположена в положении 40.

24. Аналог по любому из пп.18-23, где ацильная либо алкильная группа ковалентно связана с боковой цепью аминокислоты через спейсер.

25. Аналог по п.24, где длина спейсера составляет 3-10 атомов.

26. Аналог по п.25, где спейсером является аминокислота либо дипептид.

27. Аналог по п.26, где спейсером является 6-аминогексановая кислота.

28. Аналог по п.26, где спейсер представляет собой дипептид, выбранный из группы, включающей Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro и γ-Glu-γ-Glu.

29. Аналог по любому из пп.24-28, где общая длина спейсера и ацильной группы составляет от приблизительно 14 до приблизительно 28 атомов.

30. Аналог по любому из пп.18-29, где ацильной группой является ацильная группа С₁₂-С₁₈ жирной кислоты.

31. Аналог по п.30, где ацильной группой является ацильная группа С₁₄-С₁₆ жирной кислоты.

32. Аналог по любому из пп.1-31, содержащий модификацию, выбранную из группы, включающей следующие модификации:

(a) Ser в положении 2 заменен на D-Ser, Ala, D-Ala Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляную кислоту;

(b) Tyr в положении 10 заменен на Trp, Lys, Orn, Glu, Phe либо Val;

(d) Lys в положении 12 заменен на Arg или Ile;

(e) Ser в положении 16 заменен на Glu, Gln, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту, Thr, Gly либо AIB;

(f) Arg в положении 17 заменен на Gln;

(g) Arg в положении 18 заменен на Ala, Ser, Thr либо Gly;

(h) Gln в положении 20 заменен на Ser, Thr, Ala, Lys, цитруллин, Arg, Orn либо AIB;

(i) Asp в положении 21 заменен на Glu, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту;

(j) Val в положении 23 заменен на Ile;

(k) Gln в положении 24 заменен на Asn, Ser, Thr, Ala либо AIB и

(l) консервативная замена в любом из положений 2, 5, 9-21, 24, 27-29.

33. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, содержащий ацильную группу, где упомянутая ацильная группа присоединена к спейсеру, где:

(i) упомянутый спейсер присоединен к боковой цепи аминокислоты в положении 10 аналога либо

(ii) аналог содержит удлиняющий сегмент длиной от 1 до 21 аминокислоты в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29 и спейсер присоединен к боковой цепи аминокислоты, соответствующей одному из положений 37-43 относительно последовательности SEQ ID NO: 1,

причем упомянутый аналог демонстрирует по меньшей мере 1% активности нативного GIP на GIP-рецепторе, величина ЕС₅₀ глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается меньше чем приблизительно в 50 раз от величины его ЕС₅₀ на GLP-1-рецепторе и факультативно GIP эффективность упомянутого аналога приблизительно в 15 раз превышает его GLP-1 эффективность.

34. Аналог по п.33, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 с:

(i) модификацией аминокислоты в положении 1, придающей активность агониста GIP; и

(ii) по меньшей мере с одним или обоими из следующих:

(A) аналог содержит лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 либо между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 либо 24 и где j - 17; и

(B) одна, две, три либо все аминокислоты в положениях 16, 20, 21 и 24 аналога заменены дизамещенной аминокислотой;

(iii) до 6 дополнительных модификаций аминокислот.

35. Аналог по п.34, содержащий:

(i) замену аминокислоты Ser в положении 16 аминокислотой формулы IV

[Формула IV]

где n составляет от 1 до 7, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, включающей Н, С₁-С₁₈-алкил, (С₁-С₁₈-алкил)OH, (С₁-С₁₈-алкил)NH₂, (С₁-С₁₈-алкил)SH, (С₀-С₄-алкил)(С₃-С₆)циклоалкил, (С₀-С₄-алкил)(С₂-С₅-гетероцикл), (С₀-С₄-алкил)(С₆-С₁₀-арил)R₇ и (С₁-С₄-алкил)(С₃-С₉-гетероарил), где R₇ - Н или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу; и

(ii) замену аминокислоты Gln в положении 20 α,α-дизамещенной аминокислотой.

36. Аналог по любому из пп.33-35, содержащий модификации аминокислот в одном, двух или всех положениях 27-29.

37. Аналог по п.36, содержащий Leu в положении 27, Ala в положении 28 и Gly либо Thr в положении 29.

38. Аналог по любому из пп.33-37, где удлиняющий сегмент содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95 либо 96.

39. Аналог по любому из пп.33-38, где спейсер присоединен к боковой цепи аминокислоты формул I, II либо III.

40. Аналог по п.39, где аминокислотой формулы I является Lys.

41. Аналог по любому из пп.33-40, где длина спейсера составляет 3-10 атомов.

42. Аналог по п.41, где спейсером является аминокислота либо дипептид.

43. Аналог по п.42, где спейсером является 6-аминогексановая кислота.

44. Аналог по п.42, где спейсер представляет собой дипептид, выбранный из группы, включающей Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro и γ-Glu-γ-Glu.

45. Аналог по любому из пп.33-44, где общая длина спейсера и ацильной группы составляет от приблизительно 14 до приблизительно 28 атомов.

46. Аналог по любому из пп.33-45, где ацильной группой является С₁₂-С₁₈ жирная кислота.

47. Аналог по п.46, где ацильной группой является С₁₄ либо С₁₆.

48. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, со следующими модификациями:

(a) модификация аминокислоты в положении 1, придающая активность агониста GIP;

(b) лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 либо между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 или 24 и где j - 17;

(d) 1-9 дополнительных модификаций аминокислот относительно нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1),

причем значение ЕС₅₀ аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше, величина ЕС₅₀ глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается меньше чем приблизительно в 50 раз от величины его ЕС₅₀ на GLP-1-рецепторе и факультативно GIP эффективность упомянутого аналога приблизительно в 15 раз превышает его GLP-1 эффективность.

49. Аналог по п.48, где модификация аминокислоты в положении 1 представляет собой замену His аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи.

50. Аналог по п.48 или 49, где:

(a) модификацией аминокислоты в положении 1 является замена His большой ароматической аминокислотой, факультативно Tyr;

(b) лактамовый мостик расположен между аминокислотами в положениях 16 и 20, где одна из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Glu, а другая из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Lys;

(d) Asn в положении 28 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Ala;

(e) Thr в положении 29 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Gly.

51. Аналог по любому из пп.48-50, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) модификация аминокислоты в положении 12, факультативно замена на Ile;

(b) модификации аминокислот в положениях 17 и 18, факультативно замены на Q в положении 17 и на А в положении 18;

52. Аналог по любому из пп.48-51, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(l) Ser в положении 2 заменен на D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляную кислоту;

(m) Tyr в положении 10 заменен на Trp, Lys, Orn, Glu, Phe либо Val;

(n) связь ацильной группы с Lys в положении 10;

(о) Lys в положении 12 заменен на Arg;

(р) Ser в положении 16 заменен на Glu, Gln, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту, Thr, Gly либо AIB;

(q) Arg в положении 17 заменен на Gln;

(r) Arg в положении 18 заменен на Ala, Ser, Thr либо Gly;

(s) Gln в положении 20 заменен на Ala, Lys, цитруллин, Arg, Orn либо AIB;

(t) Asp в положении 21 заменен на Glu, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту;

(u) Val в положении 23 заменен на Ile;

(v) Gln в положении 24 заменен на Asn, Ala либо AIB и

(w) консервативная замена в любом из положений 2, 5, 9-21, 24, 27-29 или любую их комбинацию.

53. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, со следующими модификациями:

(a) модификация аминокислоты в положении 1, придающая активность агониста GIP;

(b) одна, две, три либо все аминокислоты в положениях 16, 20, 21 и 24 аналога заменены α,α-дизамещенной аминокислотой;

(d) 1-9 дополнительных модификаций аминокислот относительно нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1),

54. Аналог по п.53, где модификация аминокислотного остатка в положении 1 представляет собой замену His аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи.

55. Аналог по п.53 или 54, где:

(b) α,α-дизамещенной кислотой является AIB;

(d) Asn в положении 28 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Ala;

(e) Thr в положении 29 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Gly.

56. Аналог по любому из пп.53-55, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) модификация аминокислоты в положении 12, факультативно замена на Ile;

(b) модификации аминокислот в положениях 17 и 18, факультативно замены на Q в положении 17 и на А в положении 18,

57. Аналог по любому из пп.53-56, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) Ser в положении 2 заменен на D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляную кислоту;

(b) Tyr в положении 10 заменен на Trp, Lys, Orn, Glu, Phe либо Val;

(d) Lys в положении 12 заменен на Arg;

(e) Ser в положении 16 заменен на Glu, Gln, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту, Thr, Gly либо AIB;

(f) Arg в положении 17 заменен на Gln;

(g) Arg в положении 18 заменен на Ala, Ser, Thr либо Gly;

(h) Gln в положении 20 заменен на Ala, Lys, цитруллин, Arg, Orn либо AIB;

(i) Asp в положении 21 заменен на Glu, гомоглутаминовую кислоту, гомоцистеиновую кислоту;

(j) Val в положении 23 заменен на Ile;

(k) Gln в положении 24 заменен на Asn, Ala либо AIB;

(l) консервативная замена в любом из положений 2, 5, 9-21, 24, 27-29,

или любую их комбинацию.

58. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, со следующими модификациями:

(а) модификация аминокислоты в положении 1, придающая активность агониста GIP;

(b) замена аминокислоты Ser в положении 16 аминокислотой формулы IV

[Формула IV]

где n составляет от 1 до 7, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, включающей Н, С₁-С₁₈-алкил, (С₁-С₁₈-алкил)ОН, (С₁-С₁₈-алкил)NH₂, (C₁-С₁₈-алкил)SH, (С₀-С₄-алкил)(С₃-С₆)циклоалкил, (С₀-С₄-алкил)(С₂-С₅-гетероцикл), (С₀-С₄-алкил)(С₆-С₁₀-арил)R₇ и (С₁-С₄-алкил)(С₃-С₉-гетероарил), где R₇- H или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу;

(d) модификации аминокислот в одном, двух или всех положениях 27-29;

(e) 1-9 других модификаций аминокислот относительно нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1),

59. Аналог по п.58, где модификация аминокислоты в положении 1 представляет собой замену His аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи.

60. Аналог по п.59, где аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи, является большая ароматическая аминокислота.

61. Аналог по п.60, где большой ароматической аминокислотой является Tyr.

62. Аналог по любому из пп.58-61, где аминокислотой формулы IV в (b) является гомо-Lys, Lys, Orn или 2,4-диаминомасляная кислота (Dab).

63. Аналог по любому из пп.58-62, где α,α-дизамещенной аминокислотой является AIB.

64. Аналог по любому из пп.58-63, где (i) Met в положении 27 заменен на большую алифатическую аминокислоту, факультативно Leu, (ii) Asn в положении 28 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Ala, или (iii) Thr в положении 29 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Gly, или где аналог содержит комбинацию (i)-(iii).

65. Аналог по любому из пп.58-64, дополнительно содержащий аминокислотную последовательность GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96) в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29.

66. Аналог по любому из пп.58-65, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) Ser в положении 2 заменен на D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляную кислоту;

(b) Gln в положении 3 заменен на Glu;

(c) замена аминокислоты Tyr в положении 10 аминокислотой, содержащей боковую цепь, ковалентно связанную с ацильной группой либо алкильной группой;

(d) добавление аминокислоты, содержащей боковую цепь, ковалентно связанную с ацильной группой либо алкильной группой, как С-концевой аминокислоты аналога;

(e) Lys в положении 12 заменен на Ile;

(f) Arg в положении 17 заменен на Gln;

(g) Arg в положении 18 заменен на Ala;

(h) Asp в положении 21 заменен на Glu и

(i) Gln в положении 24 заменен на Asn.

67. Аналог по п.65, содержащий:

(а) модификацию аминокислоты в положении 2, придающую резистентность к DDP-IV, и

(b) аминокислоту в положении 40, ковалентно связанную с ацильной группой либо алкильной группой.

68. Аналог по п.67, содержащий гидрофильную составляющую, связанную с аминокислотой в положении 24.

69. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, содержащий:

(a) модификацию аминокислоты в положении 1, которая придает активность агониста GIP;

(b) удлиняющий сегмент длиной от 1 до 21 аминокислоты в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, где по меньшей мере одна из аминокислот удлиняющего сегмента, соответствующая любому из положений 37-43 относительно последовательности SEQ ID NO: 1, ацилирована либо алкилирована; и

70. Аналог по п.69, где упомянутый аналог дополнительно содержит одну из следующих модификаций:

(A) аналог содержит лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 или между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 или 24 и где j - 17;

(B) одна, две, три либо все аминокислоты в положениях 16, 20, 21 и 24 аналога заменены α,α-дизамещенной аминокислотой или

[Формула IV]

где n составляет от 1 до 7, где каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из группы, включающей Н, С₁-С₁₈-алкил, (С₁-С₁₈-алкил)ОН, (С₁-С₁₈-алкил)NH₂, (С₁-С₁₈-алкил)SH, (С₀-С₄-алкил)(С₃-С₆)циклоалкил, (С₀-С₄-алкил)(С₂-С₅-гетероцикл), (С₀-С₄-алкил)(С₆-С₁₀-арил)R₇ и (С₁-С₄-алкил)(С₃-С₉-гетероарил), где R₇ - Н или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу; и (ii) замену аминокислотного остатка Gln в положении 20 α,α-дизамещенной аминокислотой.

71. Аналог по п.69 или 70, содержащий дополнительные модификации аминокислот в одном или обоих положениях 27 и 28.

72. Аналог по любому из пп.69-71, где модификация аминокислоты в положении 1 представляет собой замену His аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи.

73. Аналог по п.72, где аминокислотой, не имеющей имидазольной боковой цепи, является большая ароматическая аминокислота.

74. Аналог по п.73, где большой ароматической аминокислотой является Tyr.

75. Аналог по любому из пп.69-74, где 1-21 аминокислота содержит аминокислотную последовательность GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где X - любая аминокислота или аминокислотная последовательность, содержащая одну или несколько консервативных замен относительно последовательности SEQ ID NO: 95 или 96.

76. Аналог по п.75, где 1-21 аминокислота содержит аминокислотную последовательность GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где X - любая аминокислота.

77. Аналог по любому из пп.69-76, где ацилированной либо алкилированной аминокислотой является аминокислота формул I, II или III.

78. Аналог по п.77, где ацилированной либо алкилированной аминокислотой является Lys.

79. Аналог по любому из пп.69-78, где ацилированная либо алкилированная аминокислота расположена в любом из положений 37-42 или 43 аналога.

80. Аналог по п.79, где ацилированная либо алкилированная аминокислота располагается в положении 40 аналога.

81. Аналог по любому из пп.69-80, который содержит лактамовый мостик между аминокислотами в положениях 16 и 20, где одна из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Glu, а другая из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Lys.

82. Аналог по любому из пп.69-80, который содержит замену одной, двух, трех либо всех аминокислот в положениях 16, 20, 21 или 24 на α,α-дизамещенную аминокислоту, которая является AIB.

83. Аналог по п.82, который содержит AIB в положении 20.

84. Аналог по любому из пп.69-80, который содержит гомо-Lys, Lys, Orn или 2,4-диаминомасляную кислоту (Dab) в положении 16 и AIB в положении 20.

85. Аналог по любому из пп.69-84, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) Ser в положении 2 заменен на D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляную кислоту;

(b) Gln в положении 3 заменен на Glu;

(e) Lys в положении 12 заменен на Ile;

(f) Arg в положении 17 заменен на Gln;

(g) Arg в положении 18 заменен на Ala;

(h) Asp в положении 21 заменен на Glu и

(i) Gln в положении 24 заменен на Asn.

86. Аналог по любому из пп.69-85, содержащий модификацию аминокислоты в положении 2, придающую резистентность к DDP-IV.

87. Аналог по п.86, где аминокислота в положении 2 выбрана из группы, включающей D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val и α-амино-N-масляную кислоту.

88. Аналог глюкагона, содержащий аминокислотную последовательность, соответствующую любой из числа последовательностей SEQ ID NO: 227, 228, 229 или 230, и удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, причем значение ЕС₅₀ аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше, величина ЕС₅₀ глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается меньше чем приблизительно в 50 раз от величины его ЕС₅₀ на GLP-1-рецепторе и факультативно GIP эффективность упомянутого аналога приблизительно в 15 раз превышает его GLP-1 эффективность.

89. Аналог по п.88, где удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты содержит аминокислотную последовательность GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где Х - любая аминокислота или аминокислотная последовательность, содержащая одну или несколько консервативных замен относительно последовательности SEQ ID NO: 95 или 96.

90. Аналог по п.88, где удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты содержит аминокислотную последовательность GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где X - любая аминокислота.

91. Аналог по любому из пп.88-90, где по меньшей мере одна из аминокислот удлиняющего сегмента в положении, соответствующем любому из положений 37-43, ацилирована либо алкилирована.

92. Аналог по п.91, где ацилированная либо алкилированная аминокислота расположена в положении 40 аналога.

93. Аналог по любому из пп.88-92, где глюкагоновый пептид ковалентно связан с гидрофильной составляющей в аминокислотном положении 24.

94. Аналог по п.93, где гидрофильная составляющая ковалентно связана с Lys, Cys, Orn, гомоцистеином либо ацетилфенилаланином.

95. Аналог по п.93 или 94, где гидрофильной составляющей является полиэтиленгликоль (PEG).

96. Аналог по любому из пп.88-95, дополнительно содержащий до 6 других модификаций аминокислот.

97. Аналог по п.96, содержащий одну или несколько из следующих модификаций:

(a) аминокислотой в положении 2 является любая аминокислота из числа D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-метил-Ser, AIB, Val либо α-амино-N-масляной кислоты;

(b) аминокислотой в положении 10 является Tyr, Trp, Lys, Orn, Glu, Phe либо Val;

(d) аминокислотой в положении 12 является Ile, Lys или Arg;

(e) аминокислотой в положении 16 является любая аминокислота из числа Ser, Glu, Gln, гомоглутаминовой кислоты, гомоцистеиновой кислоты, Thr, Gly либо AIB;

(f) аминокислотой в положении 17 является Gln или Arg;

(g) аминокислотой в положении 18 является любая аминокислота из числа Ala, Arg, Ser, Thr либо Gly;

(h) аминокислотой в положении 20 является любая аминокислота из числа Ala, Lys, цитруллина, Arg, Orn либо AIB или другой α,α-дизамещенной аминокислоты;

(i) аминокислотой в положении 21 является любая аминокислота из числа Glu, Asp, гомоглутаминовой кислоты, гомоцистеиновой кислоты;

(j) аминокислотой в положении 23 является Val либо Ile;

(k) аминокислотой в положении 24 является любая аминокислота из числа Gln, Asn, Ala либо AIB и

(l) одна или несколько консервативных замен в любом из положений 2, 5, 9-21, 24, 27-29.

98. Аналог, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 99-141, 144-164, 166, 192-207, 209-221 и 223.

99. Аналог, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 167-169, 173-178 и 225.

100. Аналог, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей последовательности SEQ ID NO: 5-94.

101. Пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или состоящий из этой последовательности.

102. Аналог глюкагона, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 или состоящий из этой последовательности.

103. Аналог глюкагона, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146 или состоящий из этой последовательности.

104. Аналог по п.98, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 или состоящий из этой последовательности.

105. Аналог по п.98, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 или состоящий из этой последовательности.

106. Аналог по п.98, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 153 или состоящий из этой последовательности.

107. Аналог по любому из пп.1, 53 и 58, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или состоящий из нее, со следующими модификациями аминокислот: Tyr в положении 1, AIB в положении 2, Lys в положении 10, причем упомянутый Lys ковалентно связан с ацильной группой С₁₆ жирной кислоты через γ-Glu-γ-Glu дипептидный спейсер, Ile в положении 12, Lys в положении 16, Gln в положении 17, Ala в положении 18, AIB в положении 20, Glu в положении 21, Asn в положении 24, Leu в положении 27, Ala в положении 28, Gly в положении 29, с последующей аминокислотой, имеющей последовательность SEQ ID NO: 95, расположенной в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, и С-концевой амид вместо С-концевого α-карбоксилата.

108. Аналог по п.52 или 57, где ацильная группа связана с Lys через спейсер.

109. Аналог по любому из пп.66-68, 85 и 97, где ацильная группа или алкильная группа связана с боковой цепью аминокислоты через спейсер.

110. Аналог по любому из пп.69, 91 и 92, где ацилированная или алкилированная аминокислота в любом из положений 37-43 относительно последовательности SEQ ID NO: 1 ковалентно связана с ацильной или алкильной группой через спейсер.

111. Аналог по п.110, где ацилированная или алкилированная аминокислота расположена в положении 40 относительно последовательности SEQ ID NO: 1.

112. Аналог по любому из пп.98-100, где в случае, если аналог содержит ацильную или алкильную группу, упомянутая ацильная либо алкильная группа присоединена к аналогу через спейсер.

113. Аналог по любому из пп.108-112, где длина спейсера составляет 3-10 атомов.

114. Аналог по п.113, где спейсером является аминокислота либо дипептид.

115. Аналог по п.114, где спейсером является 6-аминогексановая кислота.

116. Аналог по п.114, где спейсер представляет собой дипептид, выбранный из группы, включающей Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro и γ-Glu-γ-Glu.

117. Аналог по любому из пп.108-116, где общая длина спейсера и ацильной группы составляет от приблизительно 14 до приблизительно 28 атомов.

118. Аналог по любому из пп.108-117, где ацильной группой является ацильная группа С₁₂-С₁₈ жирной кислоты.

119. Аналог по п.118, где ацильной группой является ацильная группа С₁₄ либо С₁₆ жирной кислоты.

120. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, где (i) значение ЕС₅₀ аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 1 нМ или меньше, (ii) значение ЕС₅₀ аналога для активации GLP-1-рецептора составляет приблизительно 1 нМ или меньше, (iii) значение ЕС₅₀ аналога для активации глюкагонового рецептора составляет приблизительно 1 нМ или меньше или (iv) их комбинацию.

121. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, который:

(i) имеет по меньшей мере приблизительно 4% активности GIP дикого типа (последовательность SEQ ID NO: 4) на GIP-рецепторе;

(ii) имеет по меньшей мере приблизительно 4% активности GLP-1 (последовательность SEQ ID NO: 2) на GLP-1-рецепторе;

(iii) имеет по меньшей мере приблизительно 20% активности глюкагона на глюкагоновом рецепторе или

(iv) их комбинацию.

122. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, исключая п.121, часть (iii), который содержит модификацию аминокислоты в положении 3 и имеет менее чем 1% активности глюкагона на глюкагоновом рецепторе.

123. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, исключая пп.120, часть (ii) и 121 часть (ii), который содержит модификацию аминокислоты в положении 7 и имеет менее чем приблизительно 10% активности GLP-1 на GLP-1-рецепторе.

124. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, где глюкагоновый пептид ковалентно связан с гидрофильной составляющей в любом из аминокислотных положений 19, 20, 23, 24, 27, 32, 43 или на С-конце.

125. Аналог или пептид по п.124, где глюкагоновый пептид ковалентно связан с гидрофильной составляющей в аминокислотном положении 27 или 43.

126. Аналог или пептид по п.124 или 125, где гидрофильная составляющая ковалентно связана с Lys, Cys, Orn, гомоцистеином либо ацетилфенилаланином.

127. Аналог или пептид по любому из пп.124-126, где гидрофильной составляющей является полиэтиленгликоль (PEG).

128. Аналог или пептид по п.127, где PEG имеет молекулярную массу от приблизительно 1000 до приблизительно 40000 Да или от приблизительно 20000 до приблизительно 40000 Да.

129. Аналог или пептид по любому из пп.124-128, где (i) EC₅₀ аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше, (ii) EC₅₀аналога для активации GLP-1-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше, (iii) EC₅₀ аналога для активации глюкагонового рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше или (iv) их комбинацию.

130. Аналог или пептид по любому из пп.124-128, который (i) имеет по меньшей мере приблизительно 0,4% активности GIP дикого типа (последовательность SEQ ID NO: 4) на GIP-рецепторе, (ii) имеет по меньшей мере приблизительно 0,4% активности GLP-1 (последовательность SEQ ID NO: 2) на GLP-1-рецепторе, (iii) имеет по меньшей мере приблизительно 2% активности глюкагона на глюкагоновом рецепторе или (iv) их комбинацию.

131. Аналог или пептид по любому из предшествующих пунктов, исключая п.122, где GIP эффективность аналога приблизительно в 15 раз превышает глюкагоновую эффективность аналога.

132. Димер, содержащий два пептида, связанные через линкер, где по меньшей мере один из двух пептидов является аналогом или пептидом по любому из пп.1-131.

133. Димер по п.132, который является гомодимером.

134. Димер по п.132 или 133, где линкер выбран из группы, включающей бифункциональный тиоловый кросс-линкер и бифункциональный аминовый кросс-линкер.

135. Конъюгат, ковалентно связанный с аналогом или пептидом по любому из пп.1-131, димером по любому из пп.132-134 либо их комбинацией.

136. Гибридный пептид, содержащий аналог или пептид по любому из пп.1-131 или димер по любому из пп.132-134, связанный со вторым пептидом.

137. Фармацевтическая композиция, содержащая аналог или пептид по любому из пп.1-131, димер по любому из пп.132-134, конъюгат по п.135, гибридный пептид по п.136 либо их комбинацию и фармацевтически приемлемый носитель.

138. Набор, содержащий фармацевтическую композицию по п.137 и устройство для введения упомянутой фармацевтической композиции в организм пациента.

139. Набор по п.138, где упомянутое устройство представляет собой шприц, содержащий фармацевтическую композицию.

140. Применение аналога или пептида по любому из пп.1-131, димера по любому из пп.132-134, конъюгата по п.135, гибридного пептида по п.136 либо их комбинации в производстве лекарственного средства для лечения диабета, уменьшения прироста или стимулирования уменьшения массы тела.

141. Аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1) или пептид по любому из пп.1-131 для применения в лечении диабета или ожирения.

Текст

Смотреть все

АГОНИСТЫ СМЕШАННОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ГЛЮКОЗОЗАВИСИМОГО ИНСУЛИНОТРОПНОГО ПЕПТИДА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ И ОЖИРЕНИЯ В изобретении предложены глюкагоновые пептиды, демонстрирующие активность агониста GIP в дополнение к глюкагоновой и/или GLP-1 активности. Предложены также фармацевтические композиции, содержащие такие глюкагоновые пептиды, и терапевтические способы применения таких пептидов.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ИНДИАНА ЮНИВЕРСИТИ РИСЕРЧ ЭНД ТЕКНОЛОДЖИ КОРПОРЕЙШН (US) Перекрестная ссылка на родственные заявки Эта заявка претендует на приоритет по предварительной заявке на патент США 61/073274, поданной 17 июня 2008 г., предварительной заявке на патент США 61/078171, поданной 3 июля 2008 г.,предварительной заявке на патент США 61/090448, поданной 20 августа 2008 г., и предварительной заявке на патент США 61/151349, поданной 10 февраля 2009 г. Содержание каждой заявки включено в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки. Предпосылки создания изобретения Препроглюкагон представляет собой состоящий из 158 аминокислот полипептид-предшественник,подвергаемый процессингу в различных тканях с образованием ряда различных проглюкагоновых пептидов, в том числе глюкагона, глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), глюкагоноподобного пептида-2(GLP-2) и оксинтомодулина (ОХМ), которые принимают участие в разнообразных физиологических процессах, в том числе глюкозном гомеостазе, секреции инсулина, опорожнении желудка, развитии кишечника, а также регулировании потребления пищи. Глюкагон представляет собой пептид, состоящий из 29 аминокислот, соответствующих аминокислотам 33-61 препроглюкагона, в то время как GLP-1 продуцируется в виде пептида, состоящего из 37 аминокислот, соответствующих аминокислотам 72-108 препроглюкагона. В том случае, когда уровень глюкозы в крови начинает падать, глюкагон, являющийся гормоном,продуцируемым поджелудочной железой, сигнализирует печени о необходимости расщепления гликогена и выделения глюкозы, что вызывает повышение содержания глюкозы в крови до нормального уровня.GLP-1 имеет иные виды биологической активности по сравнению с глюкагоном. Его воздействия включают стимуляцию синтеза и секретирования инсулина, ингибирование секреции глюкагона и снижение потребления пищи. Было показано, что GLP-1 снижает гипергликемию (повышенные уровни глюкозы) у больных диабетом. Экзендин-4, пептид из яда ящерицы, имеющий приблизительно 50% идентичность аминокислотного состава с GLP-1, активирует GLP-1-рецептор, и было показано, что он подобным образом снижает гипергликемию у больных диабетом. Глюкозозависимый инсулинотропный пептид (GIP) представляет собой состоящий из 42 аминокислот регуляторный пептид желудочно-кишечного тракта, стимулирующий секрецию инсулина -клетками поджелудочной железы в присутствии глюкозы. Он образуется в процессе протеолитического процессинга из предшественника, состоящего из 133 аминокислот, препро-GIP. Сущность изобретения Как описано ниже, в настоящем описании предложены глюкагоновые пептиды, являющиеся аналогами нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), которые демонстрируют активность GIP. Настоящим изобретением предложены также способы применения таких пептидов. Нативный глюкагон не активирует GIP-рецептор и при обычных обстоятельствах обладает приблизительно 1% активности нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. В результате описанных в настоящей заявке модификаций последовательности нативного глюкагона получают глюкагоновые пептиды, которые могут проявлять высокую глюкагоновую активность, эквивалентную активности нативного глюкагона либо превосходящую ее (последовательность SEQ ID NO: 1), высокую активность на GIPрецепторе, эквивалентную активности нативного GIP либо превосходящую ее (последовательность SEQID NO: 4), и/или высокую активность на GLP-1-рецепторе, эквивалентную активности нативного GLP-1 либо превосходящую ее. GLP-1(7-36) амид (последовательность SEQ ID NO: 3) либо GLP-1(7-37) (кислая форма) (последовательность SEQ ID NO: 2) представляют собой биологически активные формы GLP-1,демонстрирующие, по существу, эквивалентную активность на GLP-1-рецепторе. Данные, представленные в настоящем описании, показывают, что пептиды, обладающие активностью как на GIP-рецепторе, так и на GLP-1-рецепторе, являются особо полезными для стимулирования уменьшения массы тела либо предотвращения увеличения массы тела, а также для лечения гипергликемии, в том числе диабета. In vivo данные, приведенные в настоящем описании, демонстрируют, что комбинация агонистической активности на GIP-рецепторе с агонистической активностью на GLP-1 рецепторе оказывает на снижение массы тела воздействие большее, нежели активность на GLP-1 рецепторе сама по себе. Эта активность особенно неожиданна, принимая во внимание принципы, принятые в настоящей области, суть которых заключается в том, что антагонизирование GIP желательно для снижения суточного потребления пищи и массы тела, а также повышения чувствительности к инсулину и расхода энергии (Irwin et al., Diabetologia 50: 1532-1540 (2007) и Althage et al., J. Biol. Chem., электронная публикация от 17 апреля 2008 г.). Таким образом, согласно одному из аспектов настоящее изобретение предлагает способы стимулирования уменьшения массы тела либо предотвращения увеличения массы тела, которые включают введение в организм, пациента, нуждающегося в этом, эффективного количества соединения, например глюкагонового пептида, которое демонстрирует активность как на GIP-рецепторе, так и на GLP-1 рецепторе, и которое факультативно также демонстрирует активность на глюкагоновом рецепторе. К числу таких соединений относятся описываемые в настоящей заявке коагонисты GIP-рецептора/GLP-1 рецептора и триагонисты глюкагонового рецептора/GIP-1-рецептора/GLP-1-рецептора. Повышенная активность на GIP-рецепторе обеспечивается модификацией аминокислоты в положе-1 020326 нии 1. Например, His в положении 1 заменяют большой ароматической аминокислотой, факультативноTyr, Phe, Trp, амино-Phe, нитро-Phe, хлоро-Phe, сульфо-Phe, 4-пиридил-Ala, метил-Tyr либо 3-амино-Tyr. Повышенная активность на GIP-рецепторе обеспечивается модификациями, которые стабилизируют -спиральную структуру С-концевого участка (аминокислоты 12-29) глюкагонового пептида либо его аналога. Например, внутримолекулярный мостик может быть образован посредством ковалентной связи между боковыми цепями двух аминокислот в положениях i и i+4, или между положениями j и j+3, или между положениями k и k+7. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутый мостик находится между положениями 12 и 16, 16 и 20, 20 и 24, 24 и 28 либо 17 и 20. В других вариантах осуществления настоящего изобретения в этих положениях между положительно и отрицательно заряженными аминокислотами могут образовываться нековалентные взаимодействия, такие как солевые мостики. Альтернативно, например, стабилизация -спиральной структуры на С-концевом участке глюкагонового пептида (вблизи аминокислот 12-29) обеспечивается направленным введением одной или нескольких ,-дизамещенных аминокислот в положения, которые сохраняют необходимую активность. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одно, два, три, четыре или больше положений 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 или 29 глюкагонового пептида либо его аналога заменяют ,дизамещенной аминокислотой. Например, замена аминокислоты в положении 16 глюкагонового пептида либо его аналога на аминоизомасляную кислоту (AIB) обеспечивает стабилизированную -спираль при отсутствии солевого мостика либо лактама. Такие пептиды рассматриваются в настоящем описании как пептиды, не имеющие внутримолекулярного мостика. Согласно конкретным аспектам настоящего изобретения стабилизация -спирали осуществляется посредством введения одной либо нескольких ,дизамещенных аминокислот без введения ковалентного внутримолекулярного мостика, например лактамового мостика, дисульфидного мостика. Такие пептиды рассматриваются в настоящем описании как пептиды, не имеющие ковалентного внутримолекулярного мостика. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в одном, двух, трех или нескольких положениях 16, 20, 21 или 24 заменяют на AIB. Повышенная активность на GIP-рецепторе обеспечивается модификациями аминокислот в положениях 27 и/или 28 и факультативно в положении 29. Например, Met в положении 27 заменяют большой алифатической аминокислотой, факультативно Leu, Asn в положении 28 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Ala, и Thr в положении 29 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Gly. Повышенная активность на GIP-рецепторе обеспечивается также модификацией аминокислоты в положении 12. Например, аминокислоту в положении 12 заменяют большой алифатической неполярной аминокислотой, факультативно Ile. Повышенная активность на GIP-рецепторе обеспечивается также модификацией аминокислот в положениях 17 и/или 18. Например, аминокислоту в положении 17 заменяют полярным остатком, факультативно Gln, и аминокислоту в положении 18 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Ala. Повышенная активность на глюкагоновом рецепторе обеспечивается модификацией аминокислоты в положении 16 нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO:1), как описано в настоящей заявке. Пониженная, поддерживаемая на одинаковом уровне либо повышенная активность на глюкагоновом рецепторе обеспечивается, например, посредством модификации аминокислоты в положении 3, как описано в настоящей заявке. Восстановление глюкагоновой активности, которая была снижена вследствие модификаций аминокислот в положениях 1 и/или 2, обеспечивается модификациями, которые стабилизируют -спиральную структуру С-концевого участка (аминокислоты 12-29) глюкагонового пептида либо его аналога. Например, внутримолекулярный мостик может быть образован ковалентной связью между боковыми цепями двух аминокислот в положениях i и i+4, или между положениями j и j+3, или между положениями k иk+7. В других вариантах осуществления настоящего изобретения в этих положениях между положительно и отрицательно заряженными аминокислотами могут образовываться нековалентные взаимодействия,такие как солевые мостики. В других вариантах осуществления настоящего изобретения одну или несколько ,-дизамещенных аминокислот используют для замены или вводят на упомянутый С-концевой участок (аминокислоты 12-29) в положения, которые сохраняют необходимую активность. Например,одно, два, три либо все положения 16, 20, 21 или 24 заменяют ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается заменой карбоновой кислоты Сконцевой аминокислоты группой с нейтральным зарядом, такой как амидная или сложноэфирная группа. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается модификациями, которые стабилизируют -спиральную структуру С-концевого участка (вблизи аминокислот 12-29) глюкагонового пептида либо его аналога. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярный мостик может быть образован ковалентной связью между боковыми цепями двух аминокислот в поло-2 020326 жениях i и i+4, или между положениями j и j+3, или между положениями k и k+7. В других вариантах осуществления настоящего изобретения в этих положениях между положительно и отрицательно заряженными аминокислотами могут образовываться нековалентные взаимодействия, такие как солевые мостики. В других вариантах осуществления настоящего изобретения одна или несколько ,дизамещенных аминокислот используются для замены или вводятся на упомянутый С-концевой участок(аминокислоты 12-29) в положения, которые сохраняют желаемую активность. Например, аминокислоту в одном, двух, трех либо всех положениях 16, 20, 21 или 24 заменяют ,-дизамещенной аминокислотой,например AIB. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается модификацией аминокислоты в положении 20, как описано в настоящей заявке. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается добавлением С-концевого удлиняющего пептида, такого как GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) или XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), к С-концу. Активность на GLP-1-рецепторе у таких аналогов может быть также повышена модифицированием аминокислот в положении 18, 28 или 29 либо в положениях 18 и 29 как описано в настоящей заявке. Дальнейшее незначительное повышение эффективности на GLP-1-рецепторе обеспечивается модифицированием аминокислоты в положении 10 с превращением ее в большой ароматический аминокислотный остаток, факультативно - Trp. Пониженная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается, например, модификацией аминокислоты в положении 7, делецией аминокислоты(аминокислот), расположенной(-ых) в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 27 или 28, с получением пептида из 27 или 28 аминокислотных остатков, либо комбинацией этих модификаций, как описано в настоящей заявке. Сохранение активности после пэгилирования обеспечивается добавлением GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) к С-концу. Как показано в настоящей заявке, сохранение на постоянном уровне либо повышение активности на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе и GIP-рецепторе) (по сравнению с лактамсодержащим активным по отношению к GIP-рецептору аналогом на основе глюкагона) обеспечивается (i) заменой аминокислоты Ser в положении 16 аминокислотой формулы IV где n составляет от 1 до 16, или от 1 до 10, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 2 до 6, или 2, или 3,или 4, или 5, каждый из R1 и R2 независимо выбран из группы, включающей Н, C1-C18-алкил, (С 1-С 18 алкил)ОН, (С 1-С 18-алкил)NH2, (C1-C18-алкил)SH, (С 0-С 4-алкил)(С 3-С 6)циклоалкил, (С 0-С 4-алкил)(С 2-С 5 гетероцикл), (С 0-С 4-алкил)(С 6-С 10-арил)R7 и (С 1-С 4-алкил)(С 3-С 9-гетероарил), где R7 - H или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу, и (ii) заменой аминокислоты Gln в положении 20 ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотой в положении 16 является Lys, а аминокислотой в положении 20 является AIB. Активность аналога, содержащего аминокислоту формулы IV в положении 16 и ,-дизамещенную аминокислоту в положении 20, на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) может также быть повышена увеличением длины пептида, например присоединением Сконцевого удлиняющего пептида, например, длиной приблизительно 1-21 аминокислота, приблизительно 9-21 аминокислота, приблизительно 6-18 аминокислот, приблизительно 9-12 аминокислот либо приблизительно 10 или 11 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Сконец удлиняют посредством присоединения GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либоXGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где X - Gly либо небольшая алифатическая или неполярная либо слабополярная аминокислота. В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения С-конец удлиняют посредством присоединения GPSSGAPPPS (последовательность SEQ IDGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) могут включать, например, одну или несколько небольших алифатических аминокислот, таких как Ala или Gly. В этом смысле С-конечным удлиняющим сегментом может быть, например, GPSSGAPPPSXm, где m составляет от 1 до 11 (например, от 1 до 5), а Х-Ala или Gly. Альтернативно, 1-11 аминокислот (например, от 1 до 5 аминокислот), присоединенных к С-концу последовательности SEQ ID NO: 95, могут представлять собой комбинацию различных небольших алифатических аминокислот. Например, упомянутые 1-11 аминокислот (например, от 1 до 5 аминокислот) могут представлять собой комбинацию остатков Ala и Gly. Повышение активности на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIPрецептору, включая аналог, содержащий аминокислоту формулы IV в положении 16 и ,дизамещенную аминокислоту в положении 20, кроме того, может обеспечиваться посредством ацилирования либо алкилирования аминокислоты, расположенной в пределах С-концевого удлиняющего сегмента либо С-концевой аминокислоты (например, аминокислоты, добавленной к С-концу С-концевого удлиняющего сегмента). Ацилированию либо алкилированию может быть подвергнута аминокислота, расположенная, например, в любом из положений 30-50. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислота, подвергаемая ацилированию либо алкилированию, размещена в положении 37-42 или 43. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ацилированной или алкилированной аминокислотой является Lys, присоединенный к ацильной либо алкильной группе, например С 10-С 22. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Lys расположен в С-концевом направлении относительно С-концевого удлиняющего сегмента, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95, так что Lys занимает положение 40 аналога. Факультативно ацилированные,удлиненные на С-конце пептиды также пэгилируют, например, в положении 24. Повышение активности на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIPрецептору, может также обеспечиваться ацилированием или алкилированием аминокислоты через спейсер (например, аминокислоту, дипептид, трипептид, гидрофильный бифункциональный спейсер, гидрофобный бифункциональный спейсер). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения в состав аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIP-рецептору, вводят ацильную или алкильную группу через спейсер, который присоединяют к боковой цепи аминокислоты в положении 10 либо в положении 40 аналога. В других вариантах осуществления настоящего изобретения аналог содержит С-концевой удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты, располагающийся в Сконцевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, и спейсер, ковалентно присоединенный к ацильной либо алкильной группе, присоединяют к аминокислоте удлиняющего сегмента в положении, соответствующем одному из положений 37-43 относительно последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения длина спейсера составляет от 3 до 10 атомов. В отдельных аспектах этого изобретения общая длина спейсера и ацильной либо алкильной группы составляет от приблизительно 14 до приблизительно 28 атомов. В настоящей заявке также приводится описание спейсеров, подходящих для повышения активности на одном или нескольких рецепторах из числа глюкагонового рецептора, GLP-1-рецептора и GIP-рецептора. Любая из описанных выше модификаций, которая повышает или снижает активность на GIPрецепторе, которая повышает или снижает активность на глюкагоновом рецепторе и которая повышает или снижает активность на GLP-1-рецепторе, может применяться отдельно либо в комбинации. Любую из описанных выше модификаций можно также комбинировать с другими модификациями, которые придают другие желаемые свойства, например повышенную растворимость, и/или стабильность, и/или продолжительность действия. Альтернативно, любую из описанных выше модификаций можно комбинировать с другими модификациями, которые не оказывают существенного влияния на растворимость,стабильность либо активность. К примерам модификаций относятся (но без ограничения ими):(A) улучшение растворимости, например, посредством введения одной заряженной аминокислоты,двух, трех или более заряженных аминокислот в состав С-концевого участка нативного глюкагона, предпочтительно в положении, ориентированном в С-концевом направлении относительно положения 27. Такую заряженную аминокислоту можно вводить посредством замены нативной аминокислоты на заряженную аминокислоту, например, в положениях 28 или 29, либо же, альтернативно, посредством добавления заряженной аминокислоты, например, после положения 27, 28 или 29. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одна, две, три либо все заряженные аминокислоты имеют отрицательный заряд. В других вариантах осуществления настоящего изобретения одна, две, три либо все заряженные аминокислоты имеют положительный заряд. Такие модификации повышают растворимость,например обеспечивают повышение растворимости по меньшей мере в 2, 5, 10, 15, 25, 30 раз или более по сравнению с нативным глюкагоном при значении рН, составляющем от приблизительно 5,5 до 8, например рН 7, при определении через 24 ч при температуре 25 С;(B) повышение растворимости и продолжительности действия либо полупериода существования в системе кровообращения посредством добавления гидрофильной составляющей, такой как полиэтиленгликолевая цепь, как описано в настоящей заявке, например, в положении 16, 17, 20, 21, 24 либо 29, в пределах С-концевого удлиняющего сегмента либо на С-концевой аминокислоте пептида;(C) повышение растворимости и/или продолжительности действия либо полупериода существования в системе кровообращения и/или отсрочку начала действия посредством ацилирования либо алкилирования глюкагонового пептида, как описано в настоящей заявке;(D) повышение продолжительности действия либо полупериода существования в системе кровообращения посредством введения резистентности к расщеплению дипептидилпептидазой IV (DPP IV) модифицированием аминокислоты в положении 1 или 2, как описано в настоящей заявке;(E) повышение стабильности посредством модификации Asp в положении 15, например, посредством делеции либо замены глутаминовой кислотой, гомоглутаминовой кислотой, цистеиновой кислотой либо гомоцистеиновой кислотой. Такие модификации могут уменьшить деградацию или расщепление при значении рН в пределах от 5,5 до 8, например сохранение по меньшей мере 75, 80, 90, 95, 96, 97, 98% или от 99 до 100% исходного пептида через 24 ч при температуре 25 С. Такие модификации уменьшают расщепление пептидной связи Asp 15-Ser 16;(F) повышение стабильности посредством модификации Ser в положении 16, например, посредством замены на Thr либо AIB. Такие модификации также уменьшают расщепление пептидной связи Asp 15-Ser 16;(G) повышение стабильности модифицированием метионина в положении 27, например, посредством замены на лейцин либо норлейцин. Такие модификации могут уменьшить окислительную деградацию. Стабильность может быть также повышена модифицированием Gln в положении 20 или 24, например, посредством замены на Ala, Ser, Thr либо AIB. Такие модификации могут уменьшить деградацию,обусловленную деамидированием Gln. Стабильность может быть повышена модифицированием Asp в положении 21, например, посредством замены на Glu. Такие модификации могут уменьшить деградацию, обусловленную дегидратацией Asp, приводящей к образованию циклического сукцинимидного промежуточного соединения, и последующей изомеризацией до изоаспартата;(Н) неконсервативные либо консервативные замены, добавления или делеции, которые не оказывают существенного влияния на активность, например консервативные замены в одном или нескольких положениях 2, 5, 9-21, 24, 27, 28 либо 29; замена аминокислоты в одном или нескольких из этих положений на Ala; делеция аминокислот в одном или нескольких положениях 27, 28 или 29; либо делеция аминокислоты 29, факультативно объединенной с С-концевой амидной либо сложноэфирной группой вместо С-концевой карбоксильной группы; замена Lys в положении 12 на Arg; замена Tyr в положении 10 на Val или Phe. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют EC50 для активации GIP-рецептора, величина которой составляет приблизительно 100 нМ или меньше либо приблизительно 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 либо 1 нМ или меньше. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют EC50 на GIP-рецепторе, величина которой составляет приблизительно 0,001, 0,01 либо 0,1 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют EC50 на GIP-рецепторе, величина которой не превышает приблизительно 1, 3-6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 или 100 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды демонстрируют ЕС 50 для активации глюкагонового рецептора, величина которой составляет приблизительно 100 нМ или меньше либо приблизительно 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 либо 1 нМ или меньше. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют EC50 на глюкагоновом рецепторе, величина которой составляет приблизительно 0,001, 0,01 либо 0,1 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 на глюкагоновом рецепторе не превышает приблизительно 1-6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 или 100 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды демонстрируют ЕС 50 для активации GLP-1-рецептора, величина которой составляет приблизительно 100 нМ или меньше либо приблизительно 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 либо 1 нМ или меньше. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют ЕС 50 наGLP-1-рецепторе, величина которой составляет приблизительно 0,001, 0,01 либо 0,1 нМ. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 на GLP-1-рецепторе не превышает приблизительно 1-6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 или 100 нМ. Активация рецептора может быть определена посредством in vitro анализов, в ходе которых определяют индукцию сАМР (цАМФ, аденозин 3,5-циклофосфат) в клетках линии НЕК 293, сверхпродуцирующих рецептор, например, посредством исследования клеток линии НЕК 293, котрансфицированных ДНК, кодирующей рецептор и ген люциферазы, связанной с сАМР-реактивным элементом, как описано в примере 16. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды демонстрируют по меньшей мере приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60,75, 100, 125, 150, 175, 200% или более высокую активность на GIP-рецепторе по сравнению с нативнымGIP (GIP эффективность). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящем изобретении, демонстрируют не более чем 1000, 10000, 100000 либо 1000000% активности на GIP-рецепторе по сравнению с нативным GIP. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды демонстрируют по меньшей мере приблизительно 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500% или более высокую активность на глюкагоновом рецепторе по сравнению с нативным глюкагоном (глюкагоновая эффективность). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют не более чем 1000, 10000, 100000 либо 1000000% активности на глюкагоновом рецепторе по сравнению с нативным глюкагоном. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды демонстрируют по меньшей мере приблизительно 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 75, 100, 125, 150, 175, 200% или более высокую активность на GLP-1-рецепторе по сравнению с нативным GLP-1 (GLP-1 эффективность). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, демонстрируют не более чем 1000, 10000, 100000 либо 1000000% активности на GLP-1-рецепторе по сравнению с нативным GLP-1. Активность глюкагонового пептида на рецепторе относительно нативного лиганда упомянутого рецептора рассчитывают как обратное отношение значений ЕС 50 для глюкагонового пептида в сопоставлении с нативным лигандом. Таким образом, в одном из аспектов настоящего изобретения предложены глюкагоновые пептиды,демонстрирующие активность как на глюкагоновом рецепторе, так и на GIP-рецепторе ("коагонисты глюкагонового рецептора/GIP-рецептора"). Эти глюкагоновые пептиды утратили селективность нативного глюкагона в отношении глюкагонового рецептора по сравнению с GIP-рецептором. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 глюкагонового пептида на GIPрецепторе отличается в меньше чем приблизительно 50, 40, 30 или 20 раз (в более высокую или более низкую сторону) от величины его EC50 на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения GIP эффективность глюкагонового пептида отличается в менее чем приблизительно 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 50, 25, 20, 15, 10 или 5 раз (в более высокую или более низкую сторону) от его глюкагоновой эффективности. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение ЕС 50 глюкагонового пептида на GIP-рецепторе к ЕС 50 глюкагонового пептида на глюкагоновом рецепторе составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15,10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение ЕС 50 на GIPрецепторе к ЕС 50 на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение GIP эффективности глюкагонового пептида по сравнению с глюкагоновой эффективностью глюкагонового пептида составляет менее чем приблизительно 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение эффективности на GIP-рецепторе к эффективности на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения активность на GLP-1-рецепторе была значительно снижена или ликвидирована, например, модификацией аминокислоты в положении 7, делецией аминокислоты(аминокислот), расположенной(-ых) в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 27 или 28, с образованием пептида длиной 27 аминокислот или 28 аминокислот, или комбинацией этих модификаций. Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложены глюкагоновые пептиды, демонстрирующие активность на глюкагоновом рецепторе, GIP-рецепторе и GLP-1-рецепторе ("триагонисты глюкагонового рецептора/GIP-рецептора/GLP-1-рецептора"). Эти глюкагоновые пептиды утратили селективность нативного глюкагона в отношении глюкагонового рецептора по сравнению как с GLP-1 рецептором, так и с GIP-рецептором. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается в меньше чем приблизительно 50,40, 30 или 20 раз (в более высокую или более низкую сторону) от соответствующей величины его EC50 на глюкагоновом рецепторе и на GLP-1-рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения GIP эффективность глюкагонового пептида отличается в менее чем приблизительно 500, 450,400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 50, 25, 20, 15, 10 или 5 раз (в более высокую или более низкую сторону) от его глюкагоновой и GLP-1 эффективности. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение ЕС 50 триагониста на GIP-рецепторе к ЕС 50 триагониста на GLP-1-рецепторе составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение EC50 на GIP-рецепторе к EC50 на GLP-1-рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013,0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение GIP эффективности триагониста по сравнению с GLP-1 эффективностью триагониста составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение эффективности на GIP-рецепторе к эффективности на GLP-1-рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения отношение EC50 триагониста на GIP-рецепторе к ЕС 50 триагониста на глюкагоновом рецепторе составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение EC50 на GIP-рецепторе к EC50 на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например,приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение GIP эффективности триагониста по сравнению с глюкагоновой эффективностью триагониста составляет менее чем приблизительно 500, 450, 400, 350, 300, 250,-6 020326 200, 150, 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение эффективности на GIP-рецепторе к эффективности на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013,0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение ЕС 50 триагониста на GLP-1-рецепторе к ЕС 50 триагониста на глюкагоновом рецепторе составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение EC50 на GLP-1-рецепторе к EC50 на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение GLP-1 эффективности триагониста по сравнению с глюкагоновой эффективностью триагониста составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение эффективности на GLP-1 рецепторе к эффективности на глюкагоновом рецепторе составляет приблизительно 1 или меньше чем приблизительно 1 (например, приблизительно 0,01, 0,013, 0,0167, 0,02, 0,025, 0,03, 0,05, 0,067, 0,1, 0,2). Согласно другому аспекту настоящее изобретение предлагает глюкагоновые пептиды, которые демонстрируют активность на GLP-1- и GIP-рецепторах, но глюкагоновая активность которых была значительно снижена либо ликвидирована ("коагонисты GIP-рецептора/GLP-1-рецептора"), например, модификацией аминокислоты в положении 3. Например, замена в этом положении на кислую, основную либо гидрофобную аминокислоту (глутаминовая кислота, орнитин, норлейцин) снижает глюкагоновую активность. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 глюкагонового пептида на GIP-рецепторе отличается в меньше чем приблизительно 50, 40, 30 или 20 раз (в более высокую или более низкую сторону) от величины его ЕС 50 на GLP-1-рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения GIP эффективность глюкагонового пептида отличается в менее чем приблизительно 25, 20, 15, 10 или 5 раз (в более высокую или более низкую сторону) от его GLP-1 эффективности. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эти глюкагоновые пептиды имеют приблизительно 10% или меньше активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе, например приблизительно 1-10% или приблизительно 0,1-10% либо более чем приблизительно 0,1%,но менее чем приблизительно 10%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение ЕС 50 глюкагонового пептида на GIP-рецепторе к ЕС 50 глюкагонового пептида на GLP-1 рецепторе составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5 и не менее чем 1. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отношение GIP эффективности глюкагонового пептида по сравнению с GLP-1 эффективностью глюкагонового пептида составляет менее чем приблизительно 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10 или 5 и не менее чем 1. Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение предлагает глюкагоновые пептиды, которые демонстрируют активность на GIP-рецепторе, но у которых активность на глюкагоновом рецепторе иGLP-1-рецепторе была значительно снижена либо ликвидирована ("глюкагоновые пептиды-агонистыGIP-рецептора"), например, модификациями аминокислот в положениях 3 и 7. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эти глюкагоновые пептиды имеют приблизительно 10% или меньше активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе, например приблизительно 1-10%,или приблизительно 0,1-10%, или более чем приблизительно 0,1, 0,5 или 1%, но менее чем приблизительно 1, 5 или 10%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эти глюкагоновые пептиды имеют также приблизительно 10% или меньше активности нативного GLP-1 на GLP-1 рецепторе, например приблизительно 1-10%, или приблизительно 0,1-10%, или более чем приблизительно 0,1, 0,5 или 1%, но менее чем приблизительно 1, 5 или 10%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1), обладающий активностью агониста GIP, содержит последовательность SEQ ID NO: 1 с (а) модификацией аминокислоты в положении 1, которая придает активность агониста GIP, (b) модификацией, которая стабилизирует -спиральную структуру С-концевого участка (аминокислоты 12-29) аналога, и (с) факультативно с 1-10 (например, 1-10) другими модификациями аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аналог демонстрирует по меньшей мере приблизительно 1% активности нативного GIP на GIP-рецепторе или любой другой уровень активности на GIPрецепторе, описанный в настоящей заявке. Упомянутой модификацией, стабилизирующей -спиральную структуру, может быть любая из модификаций, известных в этой области, например любая из модификаций, описание которой приведено в этой заявке; смотри описание в разделе "Стабилизация -спиральной структуры". В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения модификацией, которая стабилизирует -спиральную структуру, является модификация, выбранная из группы, которую составляют (i) лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 или между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 или 24 и где j - 17, и (ii) одна,две, три либо все аминокислоты в положениях 16, 20, 21 и 24 аналога заменены ,-дизамещенной аминокислотой. Такие аналоги глюкагона, обладающие активностью агониста GIP, также описаны в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предлагает аналог глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1): обладающий активностью агониста GIP, со следующими модификациями:(b) (i) лактамовый мостик между боковыми цепями аминокислот в положениях i и i+4 либо между боковыми цепями аминокислот в положениях j и j+3, где i - 12, 13, 16, 17, 20 или 24 и где j - 17, либо (ii) замена аминокислоты ,-дизамещенной аминокислотой в одном, двух, трех или всех положениях 16,20, 21 или 24;(c) модификации аминокислот в одном, двух или всех положениях 27, 28 и 29;(d) 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 8 других модификаций аминокислот,где величина ЕС 50 аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 100 нМ или меньше. В иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения:(a) модификация аминокислоты в положении 1 представляет собой замену His в положении 1 большой ароматической аминокислотой, факультативно Tyr, Phe, Trp, амино-Phe, нитро-Phe, хлоро-Phe,сульфо-Phe, 4-пиридил-Ala, метил-Tyr либо 3-амино-Tyr;(b) (i) лактамовый мостик расположен между аминокислотами в положениях 16 и 20, где одна из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Glu, а другая из аминокислот в положениях 16 и 20 заменена на Lys; или(c) Met в положении 27 заменен на большую алифатическую аминокислоту, факультативно Leu;(d) Asn в положении 28 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Ala;(e) Thr в положении 29 заменен на небольшую алифатическую аминокислоту, факультативно Gly. Аналог может содержать другие модификации, в том числе без ограничения:(a) модификацию аминокислоты в положении 12, факультативно замененной на Ile;(b) модификации аминокислот в положениях 17 и 18, факультативно замененных на Q в положении 17 и на А в положении 18;(c) добавление GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) к С-концу либо любую их комбинацию. Упомянутый аналог может, альтернативно либо дополнительно, содержать другие модификации, в том числе без ограничения:(c) связь ацильной группы с Lys в положении 10;(l) консервативную замену в любом из положений 2, 5, 9-21, 24, 27-29,или любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения в случае, когда глюкагоновый пептид не пэгилирован, величина ЕС 50 аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 4,2, 1 нМ или меньше либо аналог имеет по меньшей мере приблизительно 1-4 или 5% активности нативного GIP на GIP-рецепторе. В соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 непэгилированного аналога для активации GLP-1-рецептора составляет приблизительно 4,2, 1 нМ или меньше либо аналог имеет по меньшей мере приблизительно 1-4 или 5% активности нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. В других соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения величина ЕС 50 непэгилированного аналога для активации глюкагонового рецептора составляет приблизительно 4, 2, 1 нМ или меньше либо аналог имеет по меньшей мере приблизительно 5, 10, 15 или 20% активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения непэгилированный аналог имеет менее чем приблизительно 1% активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе. В других вариантах осуществления настоящего изобретения непэгилированный аналог имеет менее чем приблизительно 10, 5 либо 1% активности нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид ковалентно связан с гидрофильной составляющей в любом из аминокислотных положений 16, 17, 20, 21, 24 либо 29,после положения 29 на добавленной аминокислоте (например, положение 30) в пределах С-концевого удлиняющего сегмента либо на С-концевой аминокислоте. В других вариантах осуществления настоящего изобретения эта гидрофильная составляющая ковалентно связана с Lys, Cys, Orn, гомоцистеином либо ацетилфенилаланиновым остатком в любом из этих положений. К примерам гидрофильных составляющих относятся полиэтиленгликоль (PEG), например, с молекулярной массой от приблизительно 1000 до приблизительно 40000 Да или от приблизительно 20000 до приблизительно 40000 Да. В тех вариантах осуществления настоящего изобретения, в которых аналоги связаны с гидрофильными составляющими, такими как PEG, относительные значения ЕС 50 на одном или нескольких рецепторах могут быть более высокими, например приблизительно в 10 раз более высокими, по сравнению с аналогом, не имеющим гидрофильной составляющей. Например, ЕС 50 пэгилированного аналога для активации GIP-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше или же аналог имеет по меньшей мере приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 или 0,5% активности нативного GIP на GIP-рецепторе. В соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения ЕС 50 пэгилированного аналога для активации GLP-1-рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше или же аналог имеет по меньшей мере приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 или 0,5% активности нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. В других вариантах осуществления настоящего изобретения ЕС 50 пэгилированного аналога для активации глюкагонового рецептора составляет приблизительно 10 нМ или меньше или же аналог имеет по меньшей мере приблизительно 0,5, 1, 1,5 или 2% активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аналог имеет менее чем приблизительно 1% активности нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе. В других вариантах осуществления настоящего изобретения аналог имеет менее чем приблизительно 10, 5 или 1% активности нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. Глюкагоновый пептид может быть частью димера, тримера или мультимера более высокого порядка, содержащего по меньшей мере два, три или больше пептидов, связанных линкером, где по меньшей мере один или оба пептиды представляют собой глюкагоновый пептид. Упомянутый димер может быть гомодимером либо гетеродимером. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения линкер выбран из группы, включающей бифункциональный тиоловый кросс-линкер и бифункциональный аминный кросс-линкер. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутым линкером является PEG, например 5, 20 кДа PEG. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутым линкером является дисульфидная связь. Например, каждый мономер димера может содержать Cys остаток (например, концевой Cys либо занимающий внутреннее положение Cys) и атом серы каждого Cys остатка принимает участие в образовании дисульфидной связи. Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения мономеры соединяются концевыми аминокислотами (например,N-концевыми или С-концевыми), внутренними аминокислотами либо концевой аминокислотой по меньшей мере одного мономера и внутренней аминокислотой по меньшей мере одного другого мономера. Согласно конкретным аспектам настоящего изобретения мономеры не соединяются N-концевой аминокислотой. Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения мономеры мультимера соединяются между собой с ориентацией "хвост к хвосту", при которой между собой соединяются С-концевые аминокислоты каждого мономера. Конъюгатная составляющая может быть ковалентно связана с любым из глюкагоновых пептидов, описание которых приведено в настоящей заявке, включая димер, тример либо мультимер более высокого порядка. Любая из модификаций, описание которой приведено в настоящей заявке, которая повышает активность глюкагонового рецептора, частично сохраняет активность глюкагонового рецептора, улучшает растворимость, повышает стабильность либо снижает деградацию, может применяться к глюкагоновым пептидам в индивидуальном порядке либо в комбинации. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды растворимы с концентрацией по меньшей мере 1 мг/мл при величине рН от 6 до 8, или от 6 до 9, или от 7 до 9 (например, рН 7), и факультативно сохраняют по меньшей мере 95% исходного пептида (например, 5% или меньше исходного пептида деградируют либо расщепляются) через 24 ч при температуре 25 С. Предложены стерильные фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, и наборы, включающие в себя соответствующие устройства. Предложены способы уменьшения прироста или стимулирования уменьшения массы тела, включающие введение в организм пациента, нуждающегося в этом, таких фармацевтических композиций в количестве, эффективном для уменьшения прироста или стимулирования уменьшения массы тела. Предложены способы лечения диабета, включающие введение в организм пациента, нуждающегося в этом, таких фармацевтических композиций в количестве, эффективном для снижения уровней глюкозы в крови. Все терапевтические способы, фармацевтические композиции, наборы и другие подобные варианты осуществления, описанные в настоящей заявке, предусматривают, что применение терминов "пептиды","агонисты", "коагонисты", "триагонисты" либо "аналоги" охватывает все их фармацевтически приемлемые соли либо сложные эфиры. Приведенное выше краткое изложение сущности изобретения не предназначено для определения каждого аспекта настоящего изобретения и дальнейшие варианты осуществления описаны в других разделах, например в разделе "Подробное описание". Документ в целом предназначен для рассмотрения в качестве комплексного описания, и следует иметь в виду, что могут быть предусмотрены все возможные комбинации отличительных особенностей, описанных в настоящей заявке, даже если комбинация отличительных особенностей не находится вместе в одном и том же предложении, параграфе или разделе настоящего документа. Более того, настоящее изобретение включает любой из или все варианты осуществления настоящего изобретения, которые имеют более узкий в каком-либо отношении объем, по сравнению с вариантами,которые определены конкретными фрагментами текста настоящей заявки. Например, если определенные аспекты настоящего изобретения описаны в родовом отношении, следует иметь в виду, что каждый член рода, отдельно, представляет собой вариант осуществления настоящего изобретения и что комбинации двух или нескольких членов рода являются вариантами осуществления настоящего изобретения. Краткое описание чертежей Фиг. 1 представляет собой график процента (%) изменения массы тела мышей в зависимости от времени (дни) после введения только носителя (светлые перевернутые треугольники), препарата химера 2 AIB2 Cys24 (40K PEG) (темные квадраты), антагониста GIP, Pro3 Cys24 GIP-NH2 (1-42) 40K PEG (светлые ромбы), агониста GIP, AIB2 Cys24 GIP (1-42) 40K PEG (светлые треугольники с пунктирной линией) либо неродственного пептидного гормона (темные перевернутые треугольники). Фиг. 2 представляет собой график потребления корма (в граммах) мышами в зависимости от времени после введения только носителя (светлые перевернутые треугольники), препарата химера 2 AIB2Cys24 40K PEG (темные квадраты), антагониста GIP, Pro3 Cys24 GIP-NH2 (1-42) 40K PEG (светлые ромбы), агониста GIP, AIB2 Cys24 GIP (1-42) 40K PEG (светлые треугольники с пунктирной линией) либо неродственного пептидного гормона (темные перевернутые треугольники). Фиг. 3 представляет собой диаграмму изменения уровней глюкозы в крови (мг/дл) у мышей на 7 день после введения только носителя (темный столбик), препарата химера 2 AIB2 Cys24 (40K PEG)(светлый столбик), антагониста GIP, Pro3 Cys24 GIP-NH2 (1-42) 40K PEG (затушеванный столбик), агониста GIP, AIB2 Cys24 GIP (1-42) 40K PEG (столбик с горизонтальной штриховкой) либо неродственного пептидного гормона (столбик с вертикальной штриховкой). Фиг. 4 представляет собой график процента (%) изменения массы тела мышей в зависимости от времени (дни) после введения только носителя (светлые перевернутые треугольники), препарата химера 2 AIB2 (светлые ромбы), препарата химера 2 AIB2 лактам (светлые треугольники), пептида-триагониста МТ-170 (светлые квадраты), пептида-коагониста GIP/глюкагона МТ-182 (темные ромбы), пептидакоагониста GLP-1/GIP МТ-178 (затушеванные треугольники с пунктирной линией) или пептидакоагониста GIP/глюкагона (темные квадраты). Следует обратить внимание, что пэгилированный МТ-179 действует как триагонист. Фиг. 5 представляет собой график процента (%) изменения массы тела мышей в зависимости от времени (дни) после введения только носителя (темные треугольники), агониста GLP-1 Е 16 в дозе 10 нмоль/кг (темные перевернутые треугольники) либо в дозе 35 нмоль/кг (светлые квадраты), пептидатриагониста МТ-170 в дозе 10 нмоль/кг (светлые перевернутые треугольники) либо в дозе 35 нмоль/кг(темные ромбы) или пептида-коагониста GLP-1/GIP МТ-178 в дозе 10 нмоль/кг (серые перевернутые треугольники) либо в дозе 35 нмоль/кг (серые квадраты). Фиг. 6 представляет собой диаграмму изменения уровней глюкозы в крови (мг/дл) у мышей на 7 день после введения только носителя (темный столбик), агониста GLP-1 E 16 в дозе 10 нмоль/кг (светлый столбик) либо в дозе 35 нмоль/кг (серый столбик), пептида-триагониста МТ-170 в дозе 10 нмоль/кг(столбик с горизонтальной штриховкой) либо в дозе 35 нмоль/кг (столбик с вертикальной штриховкой) или пептида-коагониста GLP-1/GIP МТ-178 в дозе 10 нмоль/кг (столбик с диагональной штриховкой справа налево) либо в дозе 35 нмоль/кг (столбик с диагональной штриховкой слева направо). Фиг. 7 представляет собой график уровней глюкозы в крови (мг/дл) в зависимости от времени перед и после введения (введение в момент времени 0) глюкозы мышам, которым ввели (в момент времени -60) контрольный носитель, контрольный пептид-агонист GLP-1, содержащий лактам (циклический) пэгилированный GIP-активный аналог глюкагона ("mt-178") или не содержащий лактама (линейный) пэгилированный GIP-активный аналог глюкагона ("mt-274") в дозе 1, 3 или 10 нмоль/кг/неделя. Из данных, приведенных на этом чертеже, исключены данные по четырем мышам, поскольку у этих мышей наблюдалось агрессивное поведение и значительное уменьшение массы тела. Фиг. 8 представляет собой график уровней глюкозы в крови (мг/дл) в зависимости от времени перед и после введения (введение в момент времени 0) глюкозы мышам, которым ввели (за 24 ч до введения глюкозы) контрольный носитель, контрольный пептид-агонист GLP-1, mt-178 или mt-274 в дозе 1, 3 или 10 нмоль/кг/неделя. Из данных, приведенных на этом чертеже, исключены данные по четырем мышам,поскольку у этих мышей наблюдалось агрессивное поведение и значительное уменьшение массы тела. Фиг. 9 представляет собой диаграмму уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 или 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178 или mt-274 в дозе 1, 3 или 10 нмоль/кг/неделя. Из данных, приведенных на этом чертеже, исключены данные по четырем мышам, поскольку у этих мышей наблюдалось агрессивное поведение и значительное уменьшение массы тела. Фиг. 10 представляет собой график процентного изменения массы тела мышей через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178 или mt-274 в дозе 1, 3 или 10 нмоль/кг/неделя. Из данных, приведенных на этом чертеже, исключены данные по четырем мышам, поскольку у этих мышей наблюдалось агрессивное поведение и значительное уменьшение массы тела. Фиг. 11 представляет собой диаграмму уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 или 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-178(TE), mt274 либо mt-274(TE) в дозе 10 или 35 нмоль/кг/неделя. "ТЕ" обозначает PEG группу, присоединенную кCys в положении 40. Фиг. 12 представляет собой диаграмму изменения уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-178(TE),mt-274 либо mt-274(TE) в дозе 10 или 35 нмоль/кг/неделя. "ТЕ" обозначает PEG группу, присоединенную к Cys в положении 40. Фиг. 13 представляет собой график процентного изменения массы тела мышей через 0, 1, 3, 5, 7 и 10 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt178(TE), mt-274 либо mt-274(TE) в дозе 10 или 35 нмоль/кг/неделя. "ТЕ" обозначает PEG группу, присоединенную к Cys в положении 40. Фиг. 14 представляет собой диаграмму процентного изменения массы тела мышей через 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-178(TE), mt-274 либо mt-274(TE) в дозе 10 или 35 нмоль/кг/неделя. "ТЕ" обозначает PEG группу, присоединенную к Cys в положении 40. Фиг. 15 представляет собой диаграмму уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 или 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-274, линейного непэгилированного неацилированного пептида ("mt-311"), ацилированного С 14 жирной кислотой линейного пептида ("mt-309"), ацилированного С 16 жирной кислотой линейного пептида ("mt-298") либо ацилированного С 18 жирной кислотой линейного пептида ("mt-310"), в дозе 10 нмоль/кг. Фиг. 16 представляет собой график процентного изменения массы тела мышей через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-274, mt311, mt-309, mt-298 либо mt-310 в дозе 10 нмоль/кг. Фиг. 17 представляет собой диаграмму процентного изменения массы тела мышей через 7 дней после введения контрольного носителя, контрольного пептида-агониста GLP-1, mt-178, mt-274, mt-311, mt309, mt-298 либо mt-310 в дозе 10 нмоль/кг. Фиг. 18 представляет собой диаграмму изменения уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 и 7 дней после введения один раз в день в течение 7 дней контрольного носителя, лираглутида (ацилированный аналог GLP-1), ацилированного С 14 жирной кислотой непэгилированного линейного пептида("mt-260"), ацилированного С 16 жирной кислотой непэгилированного линейного пептида ("mt-261") либо ацилированного С 18 жирной кислотой непэгилированного линейного пептида ("mt-262"), в дозе 25 или 125 нмоль/кг. Фиг. 19 представляет собой график процентного изменения массы тела мышей через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после введения контрольного носителя, лираглутида, mt-260, mt-261 либо mt-262 в дозе 25 или 125 нмоль/кг. Фиг. 20 представляет собой диаграмму процентного изменения массы тела мышей через 7 дней после введения контрольного носителя, лираглутида, mt-260, mt-261 либо mt-262 в дозе 25 или 125 нмоль/кг. Фиг. 21 представляет собой график изменения массы тела (г) мышей через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после первого введения контрольного носителя, лираглутида (в дозе 30 нмоль/кг/сутки) или mt-261 (в дозе 0,3,1, 3, 10 или 30 нмоль/кг/сутки). Фиг. 22 представляет собой диаграмму жировой массы мышей через 7 дней после первого введения контрольного носителя, лираглутида (в дозе 30 нмоль/кг/сутки) или mt-261 (в дозе 0,3, 1, 3, 10 или 30 нмоль/кг/сутки). Фиг. 23 представляет собой диаграмму уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 и 7 дней после первого введения контрольного носителя, лираглутида (в дозе 30 нмоль/кг/сутки) или mt-261 (в дозе 0,3, 1, 3, 10 или 30 нмоль/кг/сутки). Фиг. 24 представляет линейный график изменения массы тела (% изменение) в зависимости от времени у мышей, которым был введен mt-263, экзендин-4 либо контрольный носитель в дозах(нмоль/кг/сутки), указанных в круглых скобках. Фиг. 25 представляет собой столбиковую диаграмму общего изменения массы тела (%) (определенного на 7 день, по сравнению с 0 днем) у мышей, которым был введен mt-263, экзендин-4 либо контрольный носитель в дозах (нмоль/кг/сутки), указанных в круглых скобках. Фиг. 26 представляет собой столбиковую диаграмму изменения уровней глюкозы в крови (мг/дл)(определенного на 7 день, по сравнению с 0 днем) у мышей, которым был введен mt-263, экзендин-4 либо контрольный носитель в дозах (нмоль/кг/сутки), указанных в круглых скобках. Фиг. 27 представляет собой график изменения массы тела (%) мышей через 0, 1, 3, 5 и 7 дней после первого введения контрольного носителя, лираглутида, mt-277, mt-278 или mt-279. Фиг. 28 представляет собой диаграмму уровней глюкозы в крови (мг/дл) мышей через 0 и 7 дней после первого введения контрольного носителя, лираглутида, mt-277, mt-278 или mt-279. Фиг. 29 представляет собой диаграмму общего изменения массы тела (%) мышей через 7 дней после введения mt-331, mt-311 или контрольного носителя. Дозы (нмоль/кг) указаны в круглых скобках. Фиг. 30 представляет собой диаграмму общего потребления корма (г) мышами через 7 дней после введения mt-331, mt-311 или контрольного носителя. Дозы (нмоль/кг) указаны в круглых скобках. Фиг. 31 представляет собой диаграмму общего изменения уровней глюкозы в крови мышей через 7 дней после введения mt-331, mt-311 или контрольного носителя. Дозы (нмоль/кг) указаны в круглых скобках. Фиг. 32 представляет собой диаграмму общего изменения массы тела мышей через 7 дней после введения mt-331, mt-353 или контрольного носителя в указанной дозе (нмоль/кг), представленной в круглых скобках. Фиг. 33 представляет собой диаграмму общего потребления корма (г) мышами через 7 дней после введения mt-331, mt-353 или контрольного носителя в указанной дозе (нмоль/кг), представленной в круглых скобках. Фиг. 34 представляет собой диаграмму изменения уровней глюкозы (мг/дл) в крови мышей через 7 дней после введения mt-331, mt-353 или контрольного носителя в указанной дозе (нмоль/кг), представленной в круглых скобках. Фиг. 35 представляет собой диаграмму общего изменения массы тела (%) мышей через 7 дней после первого введения mt-277, mt-278, mt-279 или контрольного носителя. Фиг. 36 представляет собой диаграмму общего изменения массы тела (%) мышей через 6 дней после первого введения mt-261, mt-309 или контрольного носителя. Фиг. 37 представляет собой диаграмму уровней глюкозы (мг/дл) в крови мышей через 6 дней после первого введения mt-261, mt-309 или контрольного носителя. Первый столбик каждой пары столбиков одинаковой расцветки обозначает уровни глюкозы в крови на 0 день, а второй столбик каждой пары обозначает уровни на 6 день. Фиг. 38 представляет собой столбиковую диаграмму общего изменения массы тела (%) через 6 дней после первого введения mt-261 (в сравнении с массой тела, определенной в первый день введения) у мышей, которым был введен контрольный носитель или mt-261, как описано ниже в настоящей заявке. Подробное описание Определения. В описании и формуле настоящего изобретения будет применяться следующая терминология, соответствующая определениям, приведенным ниже. Термин "приблизительно", используемый в настоящем описании, означает, что значение либо диапазон значений больше или меньше указанного на 10%, однако он не предназначен для ограничения любого значения либо диапазона значений лишь этим более широким определением. Каждое значение либо диапазон значений, которым предшествует термин "приблизительно", охватывают также конкретно указанное абсолютное значение либо диапазон значений. Термин "фармацевтически приемлемый носитель", применяемый в настоящем описании, охватывает любой из обычных фармацевтических носителей, таких как забуференный фосфатом солевой раствор,вода, эмульсии, такие как эмульсия "масло в воде" либо эмульсия "вода в масле", и увлажняющие средства различных типов. Упомянутый термин охватывает также любой из агентов, одобренных органом регулирования федерального правительства США или приведенных в Фармакопее США для применения на животных, включая людей. Термин "фармацевтически приемлемая соль", применяемый в настоящем описании, обозначает соли соединений, которые сохраняют биологическую активность исходного соединения и которые не являются нежелательными ни в биологическом, ни в других отношениях. Многие соединения, раскрытые в настоящем описании, способны образовывать кислые и/или основные соли вследствие присутствия аминогрупп и/или карбоксильных групп либо групп, им подобных. Фармацевтически приемлемые соли с основаниями могут быть получены из неорганических и органических оснований. К числу солей, производных неорганических оснований, относятся (только в качестве примера) соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния. К числу солей, производных органических оснований, относятся (но ими не ограничиваются) соли первичных, вторичных и третичных аминов. Фармацевтически приемлемые соли с кислотами могут быть получены из неорганических и органических кислот. К числу солей, производных неорганических кислот, относятся соли хлористоводородной кислоты, бромисто-водородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты и т.п. К числу солей, производных органических кислот, относятся соли уксусной кислоты, про- 12020326 пионовой кислоты, гликолевой кислоты, пировиноградной кислоты, щавелевой кислоты, яблочной кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, малеиновой кислоты, фумаровой кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, бензойной кислоты, коричной кислоты, миндальной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, салициловой кислоты и т.п. Термин "лечение", применяемый в настоящем описании, охватывает профилактику определенного расстройства либо состояния или облегчение тяжести симптомов, связанных со определенным расстройством либо состоянием, и/или предотвращение либо ликвидацию упомянутых симптомов. Например,термин "лечение диабета", применяемый в настоящем описании, будет в общем относиться к изменению уровня глюкозы в крови в направлении нормального уровня и может включать повышение или снижение уровня глюкозы в крови в зависимости от конкретной ситуации. Определение "эффективное" количество или "терапевтически эффективное количество" глюкагонового пептида, применяемое в настоящем описании, обозначает нетоксическое, но достаточное для обеспечения достижения желаемого эффекта количество пептида. Например, одним из желаемых эффектов было бы предотвращение либо лечение гипогликемии, действенность которого определяют, например,по повышению уровня глюкозы в крови. Альтернативным желаемым эффектом для аналогов коагонистов, раскрытых в настоящем описании, было бы также лечение гипергликемии, действенность которого определяют, например, по незначительному отклонению уровня глюкозы в крови от нормального, либо инициирование уменьшения массы тела/предотвращение прироста массы тела, действенность которых определяют, например, по уменьшению массы тела, либо предотвращение или снижение прироста массы тела, или нормализация распределения жирового компонента тела. Количество, являющееся "эффективным", будет отличаться от субъекта к субъекту в зависимости от возраста и общего состояния индивида,способа введения и т.п. Таким образом, не всегда возможно определить точное "эффективное количество". Однако подходящее "эффективное" количество в любом отдельном случае может быть определено специалистом в этой области посредством общепринятой практики экспериментирования. Термин "парентерально" обозначает введение не через пищеварительный тракт, а каким-либо иным путем, например подкожным, внутримышечным, интраспинальным либо внутривенным. Термин "очищенный" и подобные термины, применяемые в настоящем описании, относятся к выделению молекулы или соединения в форме, являющейся, по существу, свободной от примесей, которые,как правило, связываются с молекулой либо соединением в нативном либо природном окружении. Термин "очищенный", применяемый в настоящем описании, не означает абсолютной чистоты; этот термин,скорее, применяется в качестве относительного определения. Словосочетание "очищенный полипептид" применяется здесь для описания полипептида, который был отделен от других соединений, в том числе (но без ограничения) от молекул нуклеиновых кислот,липидов и углеводов. Термин "выделенный" обозначает удаление эталонного материала из его естественного окружения(например, природного окружения, если он встречается в естественных условиях). Например, естественно встречающийся полинуклеотид, присутствующий в живом животном, не является выделенным, но тот же самый полинуклеотид, отделенный от некоторой части либо всех сосуществующих в природной системе материалов, является выделенным. Термин "пептид", применяемый в настоящем описании, обозначает последовательность из 3 или более аминокислот, как правило, меньше чем 50 аминокислот, где упомянутые аминокислоты являются естественными либо искусственными аминокислотами. Искусственные аминокислоты означают аминокислоты, которые не встречаются in vivo в природных условиях, но которые, тем не менее, могут быть включены в пептидные структуры, описание которых приведено в этой заявке. Термины "полипептид" и "белок", применяемые в настоящем описании, представляют собой термины, применяемые взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислот, независимо от длины упомянутого полимера. Длина полипептидных и белковых полимеров, как правило, превосходит длину"пептидов". Словосочетание "глюкагоновый пептид", применяемое в настоящем описании, обозначает любой пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или любой аналог аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, включая замены аминокислот, добавления, делеции или посттрансляционные модификации (например, метилирование, ацилирование, алкилирование, убиквитинирование, внутримолекулярное ковалентное связывание, такое как образование лактамных мостиков, пэгилирование и т.п.) пептида, где упомянутый аналог стимулирует активность глюкагонового рецептора,GLP-1-рецептора либо GIP-рецептора, что определяется, например, по уровню продуцирования цАМФ с помощью анализа, описание которого приведено в примере 16. Словосочетание "агонист глюкагона" обозначает комплексное соединение, содержащее глюкагоновый пептид, который стимулирует активность глюкагонового рецептора, что определяется, например, по уровню продуцирования цАМФ с помощью анализа, описание которого приведено в примере 16. Термин "модификация" аминокислоты, применяемый в настоящем описании, обозначает замену,добавление либо делецию аминокислоты и охватывает замену любой из 20 аминокислот либо добавление любой из 20 аминокислот, которые обычно входят в состав человеческих белков, а также атипичных либо искусственных аминокислот. Все ссылки в описании на конкретные номера положений аминокислоты (например, положение 28) относятся к аминокислоте в этом положении в нативном глюкагоне (последовательность SEQ ID NO: 1) либо к положению соответствующей аминокислоты в любом из его аналогов. Например, ссылка в описании на "положение 28" будет обозначать соответствующее положение 27 для аналога глюкагона, в котором первая аминокислота последовательности SEQ ID NO: 1 была удалена. Подобным же образом ссылка в описании на "положение 28" будет обозначать соответствующее положение 29 для аналога глюкагона, у которого перед N-концом последовательности SEQ ID NO: 1 была добавлена одна аминокислота. К числу имеющихся на рынке источников атипичных аминокислот относятся компания Sigma-Aldrich (Milwaukee, штат Висконсин), компания ChemPep Inc. (Miami, штат Флорида) и компания Genzyme Pharmaceuticals (Cambridge, штат Массачусетс). Атипичные аминокислоты могут быть закуплены от коммерческих поставщиков, синтезированы de novo, химически модифицированы либо получены из других аминокислот. Термин "нативный глюкагон", применяемый в настоящем описании, обозначает пептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 1, термин "нативный GIP" обозначает пептид, содержащий последовательность SEQ ID NO:4, и термин "нативный GLP-1" представляет собой обобщающий термин, обозначающий GLP-1(7-36) амид (содержащий последовательность SEQ ID NO: 3), GLP-1 (7-37) (кислую форму) (содержащую последовательность SEQ ID NO: 2) либо смесь двух этих соединений. Общая ссылка на "глюкагон" или "GIP" либо "GLP-1", используемая в настоящем описании, при отсутствии любых дополнительных определений обозначает нативный глюкагон, нативный GIP или нативный GLP-1 соответственно. Термин "замена аминокислоты", применяемый в настоящем описании, обозначает замену одного остатка аминокислоты другим остатком аминокислоты. Словосочетание "консервативная замена аминокислоты", применяемое в настоящем описании, определяется как замена в пределах одной из пяти приведенных ниже групп.I. Небольшие алифатические, неполярные либо немного полярные остатки: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly.II. Полярные, отрицательно заряженные остатки и их амиды и сложные эфиры: Asp, Asn, Glu, Gln,цистеиновая кислота и гомоцистеиновая кислота.V. Большие ароматические остатки: Phe, Tyr, Trp, ацетилфенилаланин. Обобщающее словосочетание "полиэтиленгликолевая цепь" или "PEG цепь", применяемое в настоящем описании, обозначает смеси конденсационных полимеров этиленоксида и воды, в виде разветвленной или неразветвленной цепи, представленной общей формулой H(OCH2CH2)nOH, где n равняется не менее 9. При отсутствии любых дополнительных определений упомянутое словосочетание обозначает полимеры этиленгликоля с усредненным значением молекулярной массы, выбранным в пределах от 500 до 40000 Да. Словосочетание "полиэтиленгликолевая цепь" или "PEG цепь" применяется в сочетании с числовым индексом для обозначения ее приблизительной средней молекулярной массы. Например, PEG5000 означает полиэтиленгликолевую цепь, имеющую усредненное значение молекулярной массы приблизительно 5000 Да. Термин "пэгилированный" и подобные термины, применяемые в настоящем описании, относятся к соединению, которое было модифицировано по сравнению с его нативным состоянием посредством присоединения к упомянутому соединению полиэтиленгликолевой цепи. "Пэгилированный глюкагоновый пептид" представляет собой глюкагоновый пептид, имеющий полиэтиленгликолевую цепь, ковалентно присоединенную к упомянутому глюкагоновому пептиду. Термин "пептид", который применяется в настоящем описании, охватывает пептиды, имеющие модифицированные амино- и карбоксильные концы. Например, аминокислотная цепь, содержащая амидную группу вместо концевой карбоксильной группы, определяется аминокислотной последовательностью, состоящей из стандартных аминокислот. Термин "линкер", применяемый в настоящем описании, обозначает связь, молекулу либо группу молекул, соединяющую две отдельные составляющие одна с другой. Линкеры могут определять оптимальное пространственное размещение двух составляющих или же могут дополнительно обеспечивать лабильную связь, которая предоставляет возможность взаимного разделения двух составляющих. К числу лабильных связей относятся фоторасщепляемые группы, нестойкие к воздействию кислот группы,нестойкие к воздействию оснований группы и расщепляемые ферментами группы. Термин "димер", применяемый в настоящем описании, обозначает комплексное соединение, содержащее две субъединицы, ковалентно присоединенные одна к другой посредством линкера. Термин "димер", в случае его применения без каких-либо определений, обозначает как гомодимеры, так и гетеродимеры. Гомодимер содержит две идентичные субъединицы, в то время как гетеродимер содержит две субъединицы, которые различаются, несмотря на то, что две упомянутые субъединицы являются, по существу, подобными одна другой. Словосочетание "заряженная аминокислота", применяемое в настоящем описании, означает амино- 14020326 кислоту, которая содержит боковую цепь, отрицательно заряженную (т.е. депротонированную) или положительно заряженную (т.е. протонированную), в водном растворе при физиологическом рН. Например, к числу отрицательно заряженных аминокислот относятся аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, цистеиновая кислота, гомоцистеиновая кислота и гомоглутаминовая кислота, в то время как к числу положительно заряженных аминокислот относятся аргинин, лизин и гистидин. К заряженным аминокислотам относятся заряженные аминокислоты из числа 20 аминокислот, обычно обнаруживаемых в человеческих белках, а также атипичные либо искусственные аминокислоты. Словосочетание "кислая аминокислота", применяемое в настоящем описании, означает аминокислоту, которая содержит вторую кислую составляющую, включая, например, карбоксильную либо сульфокислотную группы. Применяемый в настоящем описании термин "селективность" молекулы к первому рецептору относительно второго рецептора означает отношение ЕС 50 молекулы второго рецептора к ЕС 50 молекулы на первом рецепторе. Например, молекула, имеющая на первом рецепторе EC50, равную 1 нм, и на втором рецепторе ЕС 50, равную 100 нМ, имеет в 100 раз большую селективность в отношении первого рецептора по сравнению со вторым рецептором. Словосочетание "глюкагоновая эффективность" молекулы, применяемое в настоящем описании,означает отношение ЕС 50 молекулы на глюкагоновом рецепторе к ЕС 50 нативного глюкагона на глюкагоновом рецепторе. Словосочетание "GIP эффективность" молекулы, применяемое в настоящем описании, означает отношение ЕС 50 молекулы на GIP-рецепторе к ЕС 50 нативного GIP на GIP-рецепторе. Словосочетание "GLP-1 эффективность" молекулы, применяемое в настоящем описании, означает отношение EC50 молекулы на GLP-1-рецепторе к EC50 нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторе. Термин "алкил", применяемый в настоящем описании, означает линейный либо разветвленный углеводород, содержащий конкретно указанное количество атомов углерода. К примерам алкилов относятся метил, этил и линейные пропиловые группы. Термин "гетероалкил", применяемый в настоящем описании, означает линейный либо разветвленный углеводород, содержащий конкретно указанное количество атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом в каркасе структуры. К числу пригодных для целей настоящего изобретения гетероатомов относятся (но без ограничения ими) N, S и О. Термин "циклоалкил", применяемый в настоящем описании, означает циклическую углеводородную группу, содержащую конкретно указанное количество атомов углерода, например циклопропил,циклобутил, циклогексил и циклопентил. Термин "гетероцикл", применяемый в настоящем описании, означает циклическую углеводородную группу, содержащую конкретно указанное количество атомов углерода и от одного до трех гетероатомов, независимо один от другого выбранных из группы, включающей кислород, азот и серу. Неограничивающими примерами гетероциклоалкильных групп являются пиперидин, тетрагидрофуран, тетрагидропиран, дигидрофуран, морфолин, тиофен и т.п. Термин "арил", применяемый в настоящем описании, означает моноциклическую либо полициклическую ароматическую группу, предпочтительно моноциклическую либо бициклическую ароматическую группу, например фенил или нафтил, содержащую конкретно указанное количество атомов углерода. Если не указано иное, арильная группа может быть незамещенной либо замещенной. Термин "гетероарил", применяемый в настоящем описании, означает моноциклическую либо полициклическую ароматическую группу, содержащую конкретно указанное количество атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом, выбранный из группы, включающей кислород, азот и серу. Если не указано иное, арильная группа может быть незамещенной либо замещенной. Варианты осуществления Модификации, раскрытые в настоящем описании, позволяют осуществлять манипуляции глюкагоном (последовательность SEQ ID NO: 1) для получения глюкагоновых пептидов, демонстрирующих повышенную активность на GIP-рецепторе, на глюкагоновом рецепторе и/или на GLP-1-рецепторе. Другие модификации, раскрытые в настоящем описании, увеличивают полупериод существования в плазме крови, повышают растворимость либо повышают стабильность полученного пептида. Некоторые модификации, раскрытые в настоящем описании, не оказывают воздействия на активность либо могут быть получены без ликвидации необходимой активности либо активностей. Любая из комбинаций, применяемая для одной цели (например, для повышения активности на GIP-рецепторе), может применяться в индивидуальном порядке либо в комбинации. Любая из одиночных комбинаций либо наборов комбинаций,обеспечивающая получение улучшенных (усиленных) свойств, может применяться в индивидуальном порядке либо в комбинации, например повышение активности на GIP-рецепторе и/или GLP-1-рецепторе может комбинироваться с увеличением полупериода существования в плазме крови. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид может содержать в целом от 1 до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9 или до 10 модификаций аминокислот по сравнению с последовательностью нативного глюкагона. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения такие глюкагоновые пептиды сохраняют по меньшей мере 22-27 или 28 естественных аминокислот в соответствующих положениях в нативном глюкагоне (например, имеют 1-7, 1-5 ных аминокислот в соответствующих положениях в нативном глюкагоне (например, имеют 1-7, 1-5 или 1-3 модификации по сравнению с природным глюкагоном). В соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения 1-6 или больше модификаций аминокислот могут быть неконсервативными заменами, добавлениями либо делециями. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения 1-6 или больше модификаций аминокислот могут быть консервативными заменами. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения 1-4 или 5 неконсервативных замен производят в любом из положений 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 или 29 и, кроме того, до 5 консервативных замен производят в любом из этих положений. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения 1, 2 либо 3 модификации аминокислот осуществляют в пределах аминокислот в положениях 1-16 и 1, 2 или 3 модификации аминокислот осуществляют в пределах аминокислот в положениях 17-26. Модификации, оказывающие воздействие на активность на GIP-рецепторе. Усиленная активность на GIP-рецепторе обеспечивается модификацией аминокислоты в положении 1. Например, His в положении 1 заменяют большой ароматической аминокислотой, факультативно Tyr,Phe, Trp, амино-Phe, нитро-Phe, хлоро-Phe, сульфо-Phe, 4-пиридил-Ala, метил-Tyr либо 3-амино-Tyr. Неожиданно комбинация Tyr в положении 1 со стабилизацией -спирали в пределах участка, соответствующего аминокислотам 12-29, обеспечила получение глюкагонового пептида, который активирует GIPрецептор, а также GLP-1-рецептор и глюкагоновый рецептор. -Спиральная структура может быть стабилизирована, например, образованием ковалентного или нековалентного внутримолекулярного мостика либо заменой и/или вставкой аминокислот вблизи положений 12-29, например аминокислоты, стабилизирующей -спираль (например, ,-дизамещенной аминокислоты). Усиленная активность на GIP-рецепторе обеспечивается также модификациями аминокислот в положениях 27 и/или 28 и факультативно в положении 29. Например, Met в положении 27 заменяют большой алифатической аминокислотой, факультативно Leu, Asn в положении 28 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Ala, и Thr в положении 29 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Gly. Замена на LAG в положениях 27-29 обеспечивает усиленную активность на GIP-рецепторе по сравнению с нативной последовательностью MNT в этих положениях. Усиленная активность на GIP-рецепторе обеспечивается также модификацией аминокислоты в положении 12. Например, аминокислоту в положении 12 заменяют большой алифатической неполярной аминокислотой, факультативно Ile. Усиленная активность на GIP-рецепторе обеспечивается также модификацией аминокислоты в положениях 17 и/или 18. Например, аминокислоту в положении 17 заменяют полярным остатком, факультативно Gln, а аминокислоту в положении 18 заменяют небольшой алифатической аминокислотой, факультативно Ala. Замена на QA в положениях 17 и 18 обеспечивает повышенную активность на GIPрецепторе по сравнению с нативной последовательностью RR в этих положениях. Любая из вышеописанных модификаций, которая усиливает активность на GIP-рецепторе, может применяться в индивидуальном порядке либо в комбинации. Комбинации модификаций, усиливающих активность на GIP-рецепторе, как правило, обеспечивают более высокую активность на GIP-рецепторе,нежели любая из таких модификаций по отдельности. Модификации, оказывающие воздействие на активность на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены аналоги глюкагона,имеющие повышенную эффективность и факультативно повышенную растворимость и стабильность. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения повышенную глюкагоновую эффективность обеспечивают модификацией аминокислоты в положении 16 нативного глюкагона (последовательностьSEQ ID NO: 1). В качестве неограничивающего примера такая повышенная эффективность может быть обеспечена заменой природного серина в положении 16 глутаминовой кислотой либо другой отрицательно заряженной аминокислотой, имеющей боковую цепь длиной в 4 атома, или, альтернативно, любой аминокислотой из группы, состоящей из глутамина, гомоглутаминовой кислоты и гомоцистеиновой кислоты, либо заряженной аминокислотой, имеющей боковую цепь, содержащую по меньшей мере один гетероатом (например, N, О, S, Р), где длина упомянутой боковой цепи составляет приблизительно 4 (или 3-5) атома (атомов). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид сохраняет свою исходную селективность в отношении глюкагонового рецептора по сравнению сGLP-1-рецепторами. Активность на глюкагоновом рецепторе может быть снижена модификацией аминокислоты в положении 3, например заменой природного глутамина в положении 3 кислой, основной либо гидрофобной аминокислотой. Например, замена аминокислоты в положении 3 глутаминовой кислотой, орнитином либо норлейцином существенно снижает или ликвидирует активность на глюкагоновом рецепторе. Поддерживаемая на соответствующем уровне либо повышенная активность на глюкагоновом рецепторе может обеспечиваться посредством модификации Gln в положении 3 аналогом глутамина. Например, глюкагоновый пептид, содержащий аналог глутамина в положении 3, может демонстрировать приблизительно 5%, приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 50%, приблизительно 85% или большую активность нативного глюкагона (последовательность SEQ ID NO: 1) на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид,содержащий аналог глутамина в положении 3, может демонстрировать приблизительно 20%, приблизительно 50%, приблизительно 75%, приблизительно 100%, приблизительно 200%, приблизительно 500% или большую активность соответствующего глюкагонового пептида, имеющего такую же самую аминокислотную последовательность, что и пептид, содержащий аналог глутамина, за исключением модифицированной аминокислоты в положении 3 (например, последовательность SEQ ID NO: 250 или последовательность SEQ ID NO: 251) на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид, содержащий аналог глутамина в положении 3, демонстрирует повышенную активность на глюкагоновом рецепторе, однако упомянутая повышенная активность составляет не более чем 1000, 10000, 100000 или 1000000% активности нативного глюкагона либо соответствующего глюкагонового пептида, имеющего такую же самую аминокислотную последовательность,что и пептид, содержащий аналог глутамина, за исключением модифицированной аминокислоты в положении 3. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аналог глутамина представляет собой природную либо искусственную аминокислоту, содержащую боковую цепь структуры I, структуры где R1 - С 0-С 3-алкил или С 0-С 3-гетероалкил; R2- NHR4 или C1-С 3-алкил; R3-C1-С 3-алкил; R4 - Н или С 1-С 3-алкил; X - NH, О или S; и Y - NHR4, SR3 или OR3. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения X - NH или Y - NHR4. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретенияR1 - С 0-С 2-алкил либо C1-гетероалкил. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретенияR2- NHR4 либо C1-алкил. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R4 - Н либо C1 алкил. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложена аминокислота, содержащая боковую цепь Структуры I, где R1 - CH2-S, X - NH и R2 - СН 3 (ацетамидометилцистеин,C(Acm; R1 - СН 2, X - NH и R2 - СН 3 (ацетилдиаминобутановая кислота, Dab(Ac; R1 - С 0-алкил, X - NH,R2 - NHR4 и R4 - Н (карбамоилдиаминопропановая кислота, Dap(мочевина; или R1 - СН 2-СН 2, Х - NH иR2 - СН 3 (ацетилорнитин, Orn(Ас. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложена аминокислота, содержащая боковую цепь структуры II, где R1 - СН 2, Y - NHR4 и R4 - СН 3(метилглутамин, Q(Me; в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложена аминокислота, содержащая боковую цепь структуры III, где R1 - СН 2 и R4 - Н (метионинсульфоксид,М(О; в конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 3 заменяют на Dab(Ac). Например, агонисты глюкагона могут содержать аминокислотную последовательность, представленную любой последовательностью SEQ ID NO: 243-248, 250, 251 и 253-256. Модификации, оказывающие воздействие на активность на GLP-1-рецепторе. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается посредством замены карбоновой кислоты С-концевой аминокислоты группой с нейтральным зарядом, такой как амидная или сложноэфирная группа. Повышенная активность на GLP-1-рецепторе обеспечивается также посредством стабилизации спиральной структуры на С-концевом участке глюкагона (вблизи аминокислот 12-29), например посредством образования внутримолекулярного мостика между боковыми цепями двух аминокислот или посредством замены и/или вставки аминокислот вблизи положений 12-29, например аминокислоты, стабилизирующей -спираль (например, ,-дизамещенной аминокислоты). Боковые цепи этих аминокислот могут связываться между собой водородными связями либо ионными взаимодействиями, такими как образование солевых мостиков, или ковалентными связями. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутый мостик образуется между аминокислотами, отделенными тремя расположенными между ними аминокислотами, т.е. аминокислотой в положении "i" и аминокислотой в положении "i+4", где i представляет собой любое целое число от 12 до 25 (например, 12-24 или 25). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения боковые цепи аминокислотных пар 12 и 16, 13 и 17, 16 и 20, 17 и 21, 20 и 24 либо 24 и 28 (аминокислотные пары, у которых i=12, 16, 20 или 24) образуют связь между собой и, тем самым, стабилизируют -спираль глюкагона. В других вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутый мостик образуется между аминокислотами, отделенными двумя расположенными между ними аминокислотами, т.е. аминокисло- 17020326 той в положении "j" и аминокислотой в положении "j+3", где j представляет собой любое целое число от 12 до 26 (например, 12-25 или 26). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения j=17. В других вариантах осуществления настоящего изобретения упомянутый мостик образуется между аминокислотами, отделенными шестью расположенными между ними аминокислотами, т.е. аминокислотой в положении "k" и аминокислотой в положении "k+7", где k представляет собой любое целое число от 12 до 22 (например, 12-21 или 22). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения k=17. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения длина упомянутого мостика или линкера составляет приблизительно 8 (или приблизительно 7-9) атомов, в частности, в случае, когда мостик расположен между положениями i и i+4. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения длина упомянутого мостика или линкера составляет приблизительно 6 (или приблизительно 5-7) атомов, в частности, в случае, когда мостик расположен между положениями j и j+3. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярные мостики образуются посредством (а) замены природного серина в положении 16 глутаминовой кислотой или другой отрицательно заряженной аминокислотой, имеющей боковую цепь длиной 4 атома, или, альтернативно,любой аминокислотой из группы, состоящей из глутамина, гомоглутаминовой кислоты и гомоцистеиновой кислоты, либо заряженной аминокислотой, имеющей боковую цепь, содержащую по меньшей мере один гетероатом (например, N, О, S, Р), длина которой составляет приблизительно 4 (или 3-5) атома(атомов), и (b) замены природного глутамина в положении 20 другой гидрофильной аминокислотой,имеющей боковую цепь, которая либо заряжена, либо может образовывать водородную связь и имеет в длину по меньшей мере 5 (или приблизительно 4-6) атомов, например лизином, цитруллином, аргинином или орнитином. Боковые цепи таких аминокислот в положениях 16 и 20 могут образовывать солевой мостик или могут образовывать ковалентную связь. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения две аминокислоты связаны между собой с образованием лактамового цикла. Величина упомянутого лактамового цикла может изменяться в зависимости от длины боковых цепей аминокислот и в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения лактам образуется посредством соединения боковых цепей аминокислоты - лизина - с боковой цепью глутаминовой кислоты. Порядок амидной связи в лактамовом цикле может быть обращен (например, лактамовый цикл может быть образован между боковыми цепями Lis12 и Glu16 либо, альтернативно, между Glu12 и Lys16). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения стабилизация -спиральной структуры С-концевой части глюкагонового пептида обеспечивается посредством образования внутримолекулярного мостика, который отличается от лактамового мостика. Например, для стабилизации -спирали применяются подходящие способы образования ковалентной связи, включающие любой один или несколько способов из группы, в состав которой входит олефиновый метатезис, циклизация на основе лантионина, образование дисульфидного мостика или модифицированного серасодержащего мостика, применение ,-диаминоалкановых связей, образование мостиковых связей между атомами металла и другие способы пептидной циклизации. Эффективность на GLP-1-рецепторе может быть также увеличена посредством замены нативного аргинина в положении 18 аланином. Любая из вышеописанных модификаций, которая усиливает активность на GLP-1-рецепторе, может применяться в индивидуальном порядке либо в комбинации. Комбинации модификаций, усиливающих активность на GLP-1-рецепторе, как правило, обеспечивают более высокую активность на GLP-1 рецепторе, нежели любая из таких модификаций по отдельности. Например, настоящее изобретение предлагает глюкагоновые пептиды, содержащие модификации в положении 16, в положении 20 и в Сконцевой карбоксильной группе, факультативно с ковалентной связью между аминокислотами в положениях 16 и 20; глюкагоновые пептиды, содержащие модификации в положении 16 и в С-концевой карбоксильной группе; глюкагоновые пептиды, содержащие модификации в положениях 16 и 20, факультативно с ковалентной связью между аминокислотами в положениях 16 и 20; глюкагоновые пептиды, содержащие модификации в положении 20 и в С-концевой карбоксильной группе. Активность на GLP-1-рецепторе может быть снижена посредством (i) введения С-концевой карбоксилатной группы, (ii) замены Thr в положении 7 аминокислотой, не содержащей гидроксильной группы, например Abu или Ile, (iii) делеции аминокислоты(аминокислот), ориентированной(-ых) в Сконцевом направлении относительно аминокислоты в положении 27 или 28 (например, делеции аминокислоты в положении 28, делеции аминокислоты в положениях 28 и 29) с образованием пептида длиной 27 или 28 аминокислот, или (iv) их комбинации. Модификации, оказывающие воздействие на активность на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе и GIP-рецепторе). Повышенная активность на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе и где n составляет от 1 до 16, или от 1 до 10, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 2 до 6, или 2, или 3,или 4, или 5, каждый из R1 и R2 независимо выбран из группы, включающей Н, C1-C18-алкил, (С 1-С 18 алкил)ОН, (С 1-С 18-алкил)NH2, (С 1-С 18-алкил)SH, (С 0-С 4-алкил)(С 3-С 6)циклоалкил, (С 0-С 4-алкил)(С 2-С 5 гетероцикл), (С 0-С 4-алкил)(С 6-С 10-арил)R7 и (С 1-С 4-алкил)(С 3-С 9-гетероарил), где R7 - H или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу, и (ii) заменой аминокислоты Gln в положении 20 ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотой в положении 16 является Orn, Dab, Lys или гомо-Lys, а аминокислотой в положении 20 является AIB. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотой в положении 16 является Lys, а аминокислотой в положении 20 является AIB. Активность аналога, содержащего аминокислоту формулы IV в положении 16 и ,-дизамещенную аминокислоту в положении 20, на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) можно также повышать посредством увеличения длины пептида, например посредством присоединения С-концевого удлиняющего пептида, например, длиной приблизительно 1-21 аминокислота, приблизительно 9-21 аминокислота, приблизительно 6-18 аминокислот, приблизительно 9-12 аминокислот, приблизительно 10 аминокислот или 11 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения С-конец удлиняют посредством присоединения GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95) либо XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 96), где X - Gly либо небольшая алифатическая или неполярная либо слабополярная аминокислота. В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения С-конец удлиняют посредством присоединения GPSSGAPPPS(последовательность SEQ ID NO:95) и 1-11 аминокислот присоединяют к С-концу GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95). Например, С-концевой удлиняющий сегмент аналога может содержатьGPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95), за которой следуют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 дополнительных аминокислот на С-конце последовательности SEQ ID NO:95. Упомянутые 1-11 дополнительных аминокислот могут представлять собой, например, небольшие алифатические аминокислоты,например Ala. В этом отношении С-концевой удлиняющий сегмент может содержать, например, аминокислотную последовательность GPSSGAPPPSAm, где m составляет от 1 до 11. Повышение активности на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIPрецептору, включая аналог, содержащий аминокислоту формулы IV в положении 16 и ,дизамещенную аминокислоту в положении 20, можно также обеспечивать посредством ацилирования либо алкилирования аминокислоты, расположенной в пределах С-концевого удлиняющего сегмента либо С-концевой аминокислоты (например, аминокислоты, добавленной к С-концу С-концевого удлиняющего сегмента). Ацилированию либо алкилированию может быть подвергнута аминокислота, расположенная,например, в любом из положений 30-50 аналога, удлиненного на С-конце. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислота, подвергаемая ацилированию либо алкилированию,размещена в положении 37-42 или 43 аналога, удлиненного на С-конце. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ацилированной или алкилированной аминокислотой является аминокислота формул I, II или III, например Lys, которая присоединена к ацильной либо алкильной группе, например С 10-С 22. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Lys расположен в Сконцевом направлении относительно С-концевого удлиняющего сегмента, содержащего последовательность SEQ ID NO: 95, благодаря чему Lys, Dab, Orn либо гомо-Lys занимает положение 40 аналога. Факультативно удлиненные на С-конце пептиды также пэгилируют, например, в любом из положений, описанных в настоящей заявке (например, в положении 24). Повышение активности на каждом из рецепторов (глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе иGIP-рецепторе) аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIPрецептору, можно также обеспечивать посредством ацилирования либо алкилирования аминокислоты через спейсер (например, аминокислоту, дипептид, трипептид, гидрофильный бифункциональный спейсер, гидрофобный бифункциональный спейсер). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения в состав аналога на основе глюкагона, обладающего активностью по отношению к GIPрецептору, вводят ацильную или алкильную группу через спейсер, где упомянутый спейсер присоединяют к боковой цепи аминокислоты в положении 10 аналога. В других вариантах осуществления настоящего изобретения аналог содержит С-концевой удлиняющий сегмент из 1-21 аминокислоты (напри- 19020326 мер, удлиняющий сегмент, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95 или 96),располагающийся в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 29, и спейсер,ковалентно присоединенный к ацильной либо алкильной группе, присоединяют к аминокислоте удлиняющего сегмента в положении, соответствующем одному из положений 37-43 относительно последовательности SEQ ID NO: 1. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения спейсер присоединяют к аминокислоте в положении 40 относительно последовательности SEQ ID NO: 1. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения длина спейсера составляет от 3 до 10 атомов. Согласно конкретным аспектам настоящего изобретения общая длина спейсера и ацильной либо алкильной группы составляет от приблизительно 14 до приблизительно 28 атомов. Например, упомянутым спейсером может быть аминокислота, включая любую из тех, которые описаны в настоящей заявке (но без ограничения ими). Упомянутым спейсером может быть также, например, дипептид либо трипептид, содержащий аминокислоты, описание которых приведено в настоящей заявке. Согласно конкретным аспектам настоящего изобретения спейсером является один из следующих дипептидов: Ala-Ala, Ala-Ala либо Glu-Glu. Кроме того, в настоящей заявке приведено описание дополнительных спейсеров, подходящих для повышения активности на одном или нескольких рецепторах из числа глюкагонового рецептора, GLP-1-рецептора и GIP-рецептора. Модификации, повышающие резистентностъ к DDP-IV. Модификации в положении 1 и/или 2 могут повышать резистентность пептида к расщеплению дипептидилпептидазой IV (DDP-IV). Например, аминокислота в положении 2 может быть заменена Dсерином, D-аланином, валином, глицином, N-метилсерином, N-метилаланином либо аминоизомасляной кислотой. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислота в положении 1 может быть заменена D-гистидином, дезаминогистидином, гидроксигистидином, ацетилгистидином, гомогистидином, N-метилгистидином, -метилгистидином, имидазолуксусной кислотой либо ,диметилимидазолуксусной кислотой (DMIA). Экспериментально было обнаружено, что модификации в положении 2 (например, AIB в положении 2) и в некоторых случаях модификации в положении 1 (например, DMIA в положении 1) могут снижать активность на глюкагоновом рецепторе, иногда значительно; неожиданно было обнаружено, что это снижение активности на глюкагоновом рецепторе может быть восстановлено посредством стабилизации-спиральной структуры на С-концевом участке глюкагона (вблизи аминокислот 12-29), например, посредством образования ковалентной связи между боковыми цепями двух аминокислот, как описано в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ковалентная связь расположена между аминокислотами в положениях "i" и "i+4" либо положениях "j" и "j+3", например,между положениями 12 и 16, 16 и 20, 20 и 24, 24 и 28 либо 17 и 20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения этой ковалентной связью является лактамовый мостик между глутаминовой кислотой в положении 16 и лизином в положении 20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения этой ковалентной связью является внутримолекулярный мостик, который отличается от лактамового мостика. Например, к числу подходящих способов образования ковалентной связи (т.е. способов образования ковалентного внутримолекулярного мостика) относится любой один или несколько способов из группы, в состав которой входят олефиновый метатезис, циклизация на основе лантионина,образование дисульфидного мостика или модифицированного серасодержащего мостика, использование,-диаминоалкановых связей, образование мостиковых связей между атомами металла и другие способы пептидной циклизации. Модификации, уменьшающие деградацию. В других вариантах осуществления настоящего изобретения любой из глюкагоновых пептидов может быть подвергнут модификации для повышения стабильности посредством модифицирования аминокислоты в положении 15 и/или 16 последовательности SEQ ID NO: 1 для уменьшения деградации пептида со временем, особенно в кислых либо щелочных буферных растворах. Такие модификации уменьшают расщепление пептидной связи Asp15-Ser16. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения модификацией аминокислоты в положении 15 является делеция или замена Asp глутаминовой кислотой, гомоглутаминовой кислотой, цистеиновой кислотой либо гомоцистеиновой кислотой. В других вариантах осуществления настоящего изобретения модификацией аминокислоты в положении 16 является делеция или замена Ser на Thr или AIB. В других вариантах осуществления настоящего изобретения Ser в положении 16 заменяют глутаминовой кислотой либо другой отрицательно заряженной аминокислотой, имеющей боковую цепь длиной в 4 атома или, альтернативно, любой аминокислотой, выбранной из глутамина, гомоглутаминовой кислоты либо гомоцистеиновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения метиониновый остаток, присутствующий в положении 27 нативного пептида, модифицируют, например, выполняя делецию либо замену. Такие модификации могут предотвратить окислительную деградацию пептида. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Met в положении 27 заменяют лейцином, изолейцином либо норлейцином. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения Met в положении 27 заменяют лейцином либо норлейцином. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Gln в положении 20 и/или 24 модифицируют, например, выполняя делецию либо замену. Такие модификации могут снижать деградацию, являющуюся следствием деамидирования Gln. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Gln в положении 20 и/или 24 заменяют на Ala или AIB. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Gln в положении 20 и/или 24 заменяют на Lys, Arg, Orn или цитруллин. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Asp в положении 21 модифицируют, например, выполняя делецию либо замену. Такие модификации могут снижать деградацию, являющуюся следствием дегидратации Asp с образованием циклического сукцинимидного промежуточного соединения с последующей изомеризацией до изоаспартата. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 21 заменяют на Glu, гомоглутаминовую кислоту либо гомоцистеиновую кислоту. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 21 заменяют на Glu. Другие модификации. Некоторые положения нативного глюкагонового пептида могут быть модифицированы с одновременным сохранением, по меньшей мере, некоторых активностей исходного пептида. Соответственно заявители предполагают, что одна или несколько аминокислот, расположенных в положениях 2, 5, 10, 11,12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 или 29, могут быть заменены аминокислотой, отличающейся от кислоты, присутствующей в нативном глюкагоновом пептиде с сохранением при этом активности на глюкагоновом рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 18 заменяют аминокислотой, выбранной из группы, включающей Ala, Ser и Thr. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 20 заменяют на Ser, Thr, Lys, Arg, Orn,цитруллин либо AIB. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 21 заменяют на Glu, гомоглутаминовую кислоту либо гомоцистеиновую кислоту. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид содержит от 1 до 10 модификаций аминокислот, выбранных из положений 16, 17, 18, 20, 21, 23, 24, 27, 28 и 29. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения модификации представляют собой одну или несколько замен аминокислот, выбранных из группы, включающей Gln17, Ala18, Glu21, Ile23, Ala24, Val27 и Gly29. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения 1-2 аминокислоты, выбранные из положений 17-26, отличаются от исходного пептида. В других вариантах осуществления настоящего изобретения 1-2 аминокислоты, выбранные из положений 17-22, отличаются от исходного пептида. В других вариантах осуществления настоящего изобретения модификациями являются Gln17, Ala18, Glu21,Ile23 иAla24. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения к карбоксильному концу глюкагонового пептида добавляют одну или несколько аминокислот. Аминокислотой, как правило, является одна из 20 обычных аминокислот, и в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислота имеет амидную группу вместо карбоновой кислоты нативной аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения добавленная аминокислота выбрана из группы, включающей глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту и глицин. К числу других модификаций, не уничтожающих активности, относятся W10 и R20. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, описанные в настоящей заявке, модифицируют посредством укорачивания С-конца на один или два аминокислотных остатка, но с сохранением одинаковой активности и эффективности на глюкагоновом рецепторе,GLP-1-рецепторе и GIP-рецепторе. Таким образом может быть удалена аминокислота в положении 29 и/или 28. Стабилизация -спиральной структуры. Стабилизация -спиральной структуры на С-концевом участке глюкагонового пептида (вблизи аминокислот 12-29) обеспечивает повышенную активность на GLP-1-рецепторе и/или GIP-рецепторе и восстанавливает активность на глюкагоновом рецепторе, которая была снижена модификациями аминокислот в положениях 1 и/или 2. -Спиральная структура может быть стабилизирована, например, образованием ковалентного либо нековалентного внутримолекулярного мостика или заменой и/или вставкой аминокислот (аминокислоты, стабилизирующей -спираль) вблизи положений 12-29 (например, ,дизамещенной аминокислоты). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярный мостик образуют между двумя боковыми цепями аминокислот для стабилизации объемной структуры карбоксиконцевой области (например, аминокислот 12-29) глюкагонового пептида. Две боковые цепи аминокислот могут быть соединены между собой через нековалентные связи, например водородные связи, ионные взаимодействия, такие как образование солевых мостиков, либо через ковалентные связи. Когда две боковые цепи аминокислот соединяются между собой через одну или несколько ковалентных связей, пептид может рассматриваться в контексте настоящей заявки как пептид, содержащий ковалентный внутримолекулярный мостик. Когда две боковые цепи аминокислот соединяются между собой через некова- 21020326 лентные связи, например водородные связи, ионные взаимодействия, пептид может рассматриваться в контексте настоящей заявки как пептид, содержащий нековалентный внутримолекулярный мостик. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярный мостик образуют между двумя аминокислотами, разделенными 3 расположенными между ними аминокислотами,например между аминокислотами в положениях "i" и "i+4", где i представляет собой любое целое число от 12 до 25 (например, 12-25). Более конкретно, боковые цепи аминокислотных пар 12 и 16, 16 и 20, 20 и 24 либо 24 и 28 (аминокислотные пары, у которых i=12, 16, 20 или 24) связываются между собой и, тем самым, стабилизируют -спираль глюкагона. Альтернативно, i может равняться 17. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения в случае, если аминокислоты в положениях "i" и "i+4" соединены внутримолекулярным мостиком, величина линкера составляет приблизительно 8 атомов или приблизительно 7-9 атомов. В других вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярный мостик образован между двумя аминокислотами, отделенными двумя расположенными между ними аминокислотами,например аминокислотами в положениях "j" и "j+3", где j представляет собой любое целое число от 12 до 26 (например, 12-26). В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения j=17. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения в случае, если аминокислоты в положениях "j" и "j+3" соединены внутримолекулярным мостиком, величина линкера составляет приблизительно 6 атомов или от приблизительно от 5 до 7 атомов. В других вариантах осуществления настоящего изобретения внутримолекулярный мостик образуется между двумя аминокислотами, отделенными 6 расположенными между ними аминокислотами, т.е. аминокислотами в положении "k" и "k+7", где k представляет собой любое целое число от 12 до 22 (например, 12-22). В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения k равняется 12, 13 либо 17. В конкретном варианте осуществления k=17. Примерами аминокислотных пар, способных к ковалентному связыванию с образованием шестиатомного линкерного мостика, являются Orn и Asp, Glu и аминокислота формулы I, где n - 2, и гомоглутаминовая кислота и аминокислота формулы I, где n - I и где формула I имеет следующий вид: где n - от 1 до 4. Примерами аминокислотных пар, способных к ковалентному связыванию с образованием семиатомного линкерного мостика, являются Orn-Glu (лактамовый цикл); Lys-Asp (лактам); либо гомо-Serгомо-Glu (лактон). Примерами аминокислотных пар, которые могут образовывать восьмиатомный линкер, являются Lys-Glu (лактам); гомо-Lys-Asp (лактам); Orn-гомо-Glu (лактам); 4-амино-Phe-Asp (лактам); и Tyr-Asp (лактон). Примерами аминокислотных пар, которые могут образовывать девятиатомный линкер, являются гомо-Lys-Glu (лактам); Lys-гомо-Glu (лактам); 4-амино-Phe-Glu (лактам) и Tyr-Glu(лактон). Любую из боковых цепей этих аминокислот можно дополнительно замещать дополнительными химическими группами до тех пор, пока не будет разрушена объемная структура -спирали. Специалист в данной области может представить себе альтернативные пары либо альтернативные аналоги аминокислот, включая химически модифицированные производные, которые могли бы образовать стабилизирующую структуру подобного размера и необходимого действия. Например, дисульфидный мостик гомоцистеин-гомоцистеин, который имеет в длину 6 атомов, для обеспечения необходимого действия может быть дополнительно модифицирован. Даже без образования ковалентной связи вышеописанные аминокислотные пары или подобные пары, которые может представить себе специалист в данной области,также могут обеспечить дополнительную стабильность -спирали благодаря нековалентным связям, например, посредством образования солевых мостиков или взаимодействий водородных связей. Величина лактамового цикла может изменяться в зависимости от длины боковых цепей аминокислот, и в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения лактам образуется посредством соединения боковых цепей аминокислоты - лизина - с боковой цепью глутаминовой кислоты. Другие варианты осуществления включают следующие пары факультативно с лактамовым мостиком: Glu в положении 12 с Lys в положении 16; нативный Lys в положении 12 с Glu в положении 16; Glu в положении 16 сLys в положении 20; Lys в положении 16 с Glu в положении 20; Glu в положении 20 с Lys в положении 24; Lys в положении 20 с Glu в положении 24; Glu в положении 24 с Lys в положении 28; Lys в положении 24 с Glu в положении 28. Альтернативно, порядок амидной связи в лактамовом цикле может быть обращен (например, лактамовый цикл может быть образован между боковыми цепями Lis12 и Glu16 либо альтернативно между Glu12 и Lys16). Для стабилизации -спирали пептидов, являющихся аналогами глюкагона, могут использоваться другие внутримолекулярные мостики, отличающиеся от лактамового мостика. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения внутримолекулярным мостиком является гидрофобный мостик. В этом случае внутримолекулярный мостик факультативно может располагаться между боковыми цепями двух аминокислот, являющихся частью гидрофобной области -спирали пептида - аналога глюкагона. Например, одной из аминокислот, присоединенных гидрофобным мостиком, может быть аминокислота в положении 10, 14 и 18. Согласно одному из конкретных аспектов настоящего изобретения олефиновый метатезис применяют для сшивания одного или двух витков -спирали глюкагонового пептида с применением системы сплошного перекрестного связывания всех углеводородов. Глюкагоновый пептид в этом случае может содержать -метилированные аминокислоты, имеющие олефиновые боковые цепи различной длины,конфигурация которых обусловлена R- или S-стереохимией в положениях i, i+4 или i+7. Например, олефиновая боковая цепь может содержать (СН 2)n, где n представляет собой любое целое число от 1 до 6. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения n равняется 3 для образования поперечной межмолекулярной связи длиной 8 атомов. Подходящие способы образования таких внутримолекулярных мостиков известны в данной области; смотри, например, Schafmeister et al., J. Am. Chem. Soc. 122:58915892 (2000) и Walensky et al., Science 305: 1466-1470 (2004). Альтернативно, глюкагоновый пептид может содержать О-аллил Ser остатки, расположенные на прилегающих витках спирали, которые соединяют между собой мостиком посредством катализируемого рутением метатезиса с замыканием цикла. Подобные методики образования поперечных межмолекулярных связей описаны, например, у Blackwell et al.,Angew. Chem. Int. Ed. 37:3281-3284 (1998). Согласно другому конкретному аспекту настоящего изобретения искусственная тиодиаланиновая аминокислота, лантионин, которая нашла широкое применение в качестве пептидомиметика цистина,используется для перекрестного связывания одного витка -спирали. Подходящие способы основанной на лантионине циклизации известны в этой области; смотри, например, Matteucci et al., Tetrahedron Letters 45: 1399-1401 (2004); Mayer et al., J. Peptide Res. 51:432-436 (1998); Polinsky et al., J. Med. Chem. 35: 4185-4194 (1992); Osapay et al., J. Med. Chem. 40:2241-2251 (1997); Fukase et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 65: 2227-2240 (1992); Harpp et al., J. Org. Chem. 36:73-80 (1971); Goodman and Shao, Pure Appl. Chem. 68: 1303-1308 (1996); и Osapay and Goodman, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1599-1600(1993). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ,-диаминоалкановые связи, например 1,4-диаминопропан и 1,5-диаминопентан, между двумя Glu остатками в положениях i и i+7 применяют для стабилизации -спирали глюкагонового пептида. Такие связи ведут к образованию мостика длиной в 9 или более атомов в зависимости от длины диаминоалкановой связи. Подходящие способы продуцирования пептидов, сшитых такими связями, известны в данной области техники; смотри, например, Phelan et al., J. Am. Chem. Soc. 119:455-460(1997). В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения дисульфидный мостик применяют для сшивания одного или двух витков -спирали глюкагонового пептида. Альтернативно, модифицированный дисульфидный мостик, в котором один или оба атома серы заменены метиленовой группой, результатом чего является макроциклизация стереомеров, применяют для стабилизации -спирали глюкагонового пептида. Подходящие способы модифицирования пептидов дисульфидными мостиками либо циклизацией на основе серы описаны, например, Jackson et al., J. Am. Chem. Soc. 113: 9391-9392 (1991) иRudinger and Jost, Experientia 20: 570-571 (1964). В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения -спираль глюкагонового пептида стабилизируют посредством связывания атома металла двумя His остатками либо парой His-Cys в положениях i и i+4. Упомянутым атомом металла может быть, например, Ru(III), Cu(II), Zn(II) либо Cd(II). Подобные способы стабилизации -спирали на основе связывания металла известны в данной области техники; смотри, например, Andrews and Tabor, Tetrahedron 55: 11711-11743 (1999); Ghadiri et al., J. Am.-Спираль глюкагонового пептида, альтернативно, может быть стабилизирована иными способами циклизации пептидов, обзор которых приведен у Davies, J. Peptide. Sci. 9:471-501 (2003). -Спираль может быть стабилизирована посредством образования амидного мостика, тиоэфирного мостика, сложного тиоэфирного мостика, мочевинного мостика, карбаматного мостика, сульфонамидного мостика и т.п. Например, сложный тиоэфирный мостик может быть образован между С-концом и боковой цепью Cys остатка. Альтернативно, сложный тиоэфирный мостик может быть образован через боковые цепи аминокислот, имеющих тиол (Cys) и карбоновую кислоту (например, Asp, Glu). Согласно другому способу агент сшивания, такой как дикарбоновая кислота, например субериновая кислота (октандиоевая кислота), и подобные кислоты, может вводить связь между двумя функциональными группами боковой цепи аминокислоты, такими как свободная аминогруппа, гидроксильная группа, тиоловая группа и их комбинации. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения -спираль глюкагонового пептида стабилизируется посредством включения гидрофобной аминокислоты в положениях i и i+4. Например, i может быть Tyr, a i+4 может быть Val или Leu; i может быть Phe, a i+4 может быть Cys или Met; i может быть Cys, a i+4 может быть Met; либо i может быть Phe, a i+4 может быть Ile. Следует иметь в виду, что в целях настоящей заявки вышеупомянутые аминокислотные пары могут изменять расположение на противоположное, так что аминокислота, указанная в положении i, может, альтернативно, быть размещена в положении i+4, в то время как аминокислота, указанная в положении i+4, может быть размещена в положении i. В других вариантах осуществления настоящего изобретения -спираль стабилизируют посредством включения (заменой либо введением аминокислоты) одной или нескольких аминокислот, стабилизирующих -спираль, на С-концевом участке глюкагонового пептида (вблизи аминокислот 12-29). В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения аминокислотой, стабилизирующей -спираль,является ,-дизамещенная аминокислота, в том числе, но без ограничения, любая аминоизомасляная кислота (AIB), аминокислота, дизамещенная той же самой либо иной группой, выбранной из числа метиловой, этиловой, пропиловой и н-бутиловой групп, циклооктаном либо циклооктаном или циклогептаном (например, 1-аминоциклооктан-1-карбоновой кислотой). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в одном, двух, трех, четырех или больше положениях 16-21, 24 или 29 глюкагонового пептида заменяют ,-дизамещенной аминокислотой. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения аминокислоту в одном, двух, трех или всех положениях 16, 20, 21 и 24 заменяют ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB. Например, аминокислота в положении 16 глюкагонового пептида может быть заменена на AIB при отсутствии внутримолекулярного мостика, например нековалентного внутримолекулярного мостика (например, солевого мостика) либо ковалентного внутримолекулярного мостика (например, лактама). Такие пептиды, не содержащие внутримолекулярный мостик, исключительно легки в получении. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновый пептид, не содержащий внутримолекулярный мостик, имеет одну либо несколько замен аминокислот в положениях 12-29 на ,-дизамещенную аминокислоту и ацильную либо алкильную группу, ковалентно присоединенную к боковой цепи аминокислоты глюкагонового пептида, например аминокислоты в положениях 10 или 40 глюкагонового пептида. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения ацильная либо алкильная группа не является нативной для природной аминокислоты. Согласно определенным аспектам настоящего изобретения ацильная либо алкильная группа не является нативной для аминокислоты в положении 10. Подобные ацилированные либо алкилированные глюкагоновые пептиды, не содержащие внутримолекулярный мостик, демонстрируют повышенную активность на GLP-1-рецепторе и глюкагоновом рецепторе по сравнению с аналогичными неацилированными пептидами. Дальнейшего усиления активности на GLP-1-рецепторе и глюкагоновом рецепторе можно достичь с помощью ацилированных глюкагоновых пептидов, не содержащих внутримолекулярный мостик, посредством введения спейсера между ацильной или алкильной группой и боковой цепью аминокислоты в положениях 10 либо 40 пептида. В этой заявке ниже описано ацилирование и алкилирование с введением спейсеров либо без него. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения ацилированный либо алкилированныйглюкагоновый пептид либо его аналог также содержит модификацию, которая селективно снижает активность на GLP-1-рецепторе. Например, ацилированный либо алкилированный глюкагоновый пептид либо его аналог содержит одну или комбинацию таких модификаций как С-концевой карбоксилат, делеция аминокислот в С-концевом направлении относительно аминокислоты в положении 27 или 28 (например, делеция аминокислоты в положении 29, делеция аминокислот в положениях 28 и 29), замена Thr в положении 7 большой алифатической неполярной аминокислотой, например Ile. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 16 или аминокислоту в положении 20 заменяют ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 20 заменяют ,дизамещенной аминокислотой, например AIB. В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту в положении 20 заменяют ,-дизамещенной аминокислотой, например AIB,а аминокислоту в положении 16 заменяют аминокислотой формулы IV где n составляет от 1 до 16, или от 1 до 10, или от 1 до 7, или от 1 до 6, или от 2 до 6, или 2, или 3,или 4, или 5, каждый из R1 и R2 независимо выбран из группы, включающей Н, C1-C18-алкил, (С 1-С 18 алкил)ОН, (С 1-С 18-алкил)NH2, (C1-C18-алкил)SH, (С 0-С 4-алкил)(С 3-С 6)циклоалкил, (С 0-С 4-алкил)(С 2-С 5 гетероцикл), (С 0-С 4-алкил)(С 6-С 10-арил)R7 и (С 1-С 4-алкил)(С 3-С 9-гетероарил), где R7 - H или ОН, и боковая цепь аминокислоты формулы IV содержит свободную аминогруппу. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислотой формулы IV является 2,3-диаминопропионовая кислота (DAP), 2,4-диаминомасляная кислота (DAB), Orn, Lys или гомо-Lys. Комбинация аминокислоты формулы IV в положении 16 и ,-дизамещенной аминокислоты, как правило, обеспечивает улучшенную активность на каждом рецепторе, а именно на глюкагоновом рецепторе, GLP-1-рецепторе и GIPрецепторе. Соединение гидрофильных составляющих. В другом варианте осуществления настоящего изобретения растворимость раскрытых в настоящем описании глюкагоновых пептидов повышают посредством ковалентного присоединения гидрофильной составляющей к пептиду. Гидрофильные составляющие могут быть присоединены к глюкагоновым пептидам при любых подходящих условиях, используемых для осуществления реакции белка с активированной полимерной молекулой. Могут использоваться любые способы, известные в данной области техники, в том числе ацилирование, гидроалкилирование, реакция Михаэля, алкилирование тиолов или другие методы хемоселективного сопряжения/лигирования через реакционноспособную группу PEG составляющей (например, альдегидную группу, аминогруппу, сложноэфирную группу, тиоловую группу, галогенацетильную группу, малеимидогруппу или гидразиногруппу) с реакционноспособной группой соединения-мишени (например, альдегидной группой, аминогруппой, сложноэфирной группой, тиоловой группой, -галогенацетильной группой, малеимидогруппой или гидразиногруппой). К числу активирующих групп, которые могут применяться для соединения водорастворимого полимера с одним либо несколькими белками, относятся (без ограничения) сульфоновая группа, малеимидная группа, сульфгидрильная группа, тиоловая группа, трифлатная группа, трезилатная группа, азидириновая группа, оксирановая группа, 5-пиридильная группа и -галогенированная ацильная группа (например, -йодоуксусная кислота, -бромуксусная кислота, -хлоруксусная кислота). В случае присоединения к пептиду посредством гидроалкилирования выбранный полимер должен иметь одну реакционноспособную альдегидную группу для контролирования степени полимеризации; смотри, например, Kinstler et al., Adv. Drug. Delivery Rev. 54:477-485 (2002); Roberts et al., Adv. Drug Delivery Rev. 54:459-476 (2002) и Zalipsky et al., Adv.Drug Delivery Rev. 16:157-182 (1995). Согласно конкретному аспекту настоящего изобретения аминокислотный остаток на глюкагоновом пептиде, имеющий тиоловую группу, модифицируют гидрофильной составляющей, например PEG. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тиолову группу модифицируют малеимидактивированным PEG в реакции Михаэля с получением пэгилированного пептида, содержащего тиоэфирную связь, показанную ниже В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения тиоловую группу модифицируют галогенацетил-активированным PEG в реакции нуклеофильного замещения с получением пэгилированного пептида, содержащего тиоэфирную связь, показанную ниже К числу подходящих гидрофильных составляющих относятся полиэтиленгликоль (PEG), полипропиленгликоль, полиоксиэтилированные полиолы (например, POG), полиоксиэтилированный сорбит, полиоксиэтилированная глюкоза, полиоксиэтилированный глицерин (POG), полиоксиалкилены, пропиональдегид полиэтиленгликоля, сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, монометоксиполиэтиленгликоль, моно-(С 1-С 10)алкокси- либо арилоксиполиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлоза, полиацетали, поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, поли(бета-аминокислоты) (гомополимеры либо статистические сополимеры), поли(н-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропропиленгликоля (PPG) и другие полиалкиленоксиды, сополимеры полипропиленоксида/этиленоксида, жирные кислоты толстой кишки и другие полисахаридные полимеры, фиколл либо декстран и их смеси. Гидрофильная составляющая, например полиэтиленгликолевая цепь, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения имеет молекулярную массу, выбранную в диапазоне от приблизительно 500 до приблизительно 40000 Да. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения гидрофильная составляющая, например PEG, имеет молекулярную массу, выбранную в диапазоне от приблизительно 500 до приблизительно 5000 Да либо от приблизительно 1000 до приблизительно 5000 Да. В другом варианте осуществления настоящего изобретения гидрофильная составляющая, например PEG,имеет молекулярную массу от приблизительно 10000 до приблизительно 20000 Да. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения гидрофильная составляющая, например PEG, имеет молекулярную массу от приблизительно 20000 до приблизительно 40000 Да. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения декстраны используют в качестве гидрофильной составляющей. Декстраны представляют собой полисахаридные полимеры, состоящие из субъединиц глюкозы, соединенных между собой, главным образом, 1-6 связями. Декстраны доступны в различных диапазонах молекулярных масс, например от приблизительно 1 до приблизительно 100 кДа либо от приблизительно 5, 10, 15 или 20 кДа до приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90 кДа. Полимеры могут быть линейными либо разветвленными. Полученные препараты конъюгатов могут быть, по существу, монодисперсными либо полидисперсными и могут иметь приблизительно, 0,5, 0,7, 1,1,2, 1,5 либо 2 полимерные составляющие на пептид. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения гидрофильная составляющая представляет собой полиэтиленгликолевую (PEG) цепь, факультативно присоединенную к пептиду в одном или нескольких из положений 16, 17, 21, 24, 29, в положении в пределах С-концевого удлиняющего сегмента, например 30-39, либо на С-концевой аминокислоте (например, 40). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нативную аминокислоту в этом положении заменяют аминокислотой, имеющей боковую цепь, подходящую для сшивания с гидрофильными составляющими, для облегчения присоединения гидрофильной составляющей к пептиду. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нативную аминокислоту в этом положении заменяют на Lys, Cys, Orn, гомоцистеиновый либо ацетил-фенилаланиновый остаток. В других вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту, модифицированную для включения гидрофильной группы, добавляют к пептиду на С-конце. Другие модификации, повышающие растворимость. В другом варианте осуществления настоящего изобретения растворимость любого из глюкагоновых пептидов может быть повышена посредством замен аминокислотных остатков и/или добавлений аминокислотных остатков, которые вводят заряженную аминокислоту на С-концевой участок пептида, предпочтительно в положение, ориентированное в С-концевом направлении относительно положения 27 последовательности SEQID NO: 1. Факультативно одна, две либо три заряженные аминокислоты могут быть вставлены в пределах С-концевого участка, предпочтительно с С-концевой ориентацией относительно положения 27. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения нативную(-ые) аминокислоту(-ы) в положениях 28 и/или 29 заменяют одной либо двумя заряженными аминокислотами и/или в другом варианте осуществления настоящего изобретения от одной до трех заряженных аминокислот также добавляют к С-концу пептида. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения одна, две или все заряженные аминокислоты имеют отрицательный заряд. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения отрицательно заряженной (кислой аминокислотой) является аспарагиновая кислота либо глутаминовая кислота. На глюкагоновом пептиде можно осуществлять дополнительные модификации, например консервативные замены, которые, тем не менее, позволяют ему сохранять активность на GIP-рецепторе (и факультативно активность на GLP-1-рецепторе и/или глюкагоновом рецепторе). Конъюгаты и гибриды. Настоящее описание имеет отношение также к другим конъюгатам, в которых глюкагоновые пептиды, соответствующие настоящему изобретению, присоединены к конъюгатной составляющей факультативно посредством ковалентных связей и факультативно через линкер. Присоединение может осуществляться с помощью ковалентных химических связей, физических сил, например электростатических,водородных, ионных, ван-дер-ваальсовых, гидрофобных либо гидрофильных взаимодействий. Могут быть использованы различные системы нековалентного взаимодействия, включая биотин-авидин, лиганд/рецептор, фермент/субстрат, нуклеиновая кислота/белок, связывающий нуклеиновые кислоты, липид/белок, связывающий липиды, молекулы-партнеры клеточной адгезии, или любые связывающие партнеры либо их фрагменты, которые обладают взаимным сродством. Пептид можно соединять с конъюгатными составляющими посредством прямого ковалентного присоединения при введении в реакцию целевых аминокислотных остатков пептида с органическим дериватизатором, который может реагировать с избранными боковыми цепями либо N- или С-концевыми остатками этих целевых аминокислот. К числу реакционноспособных групп пептида либо конъюгата относятся, например, альдегидная группа, аминогруппа, сложноэфирная группа, тиоловая группа, галогенацетильная группа, малеимидогруппа или гидразиногруппа. К числу дериватизаторов относятся,например, малеимидобензоилсульфосукцинимидный сложный эфир (сопряжение через цистеиновые остатки), N-гидроксисукцинимид (через лизиновые остатки), глутаральдегид, сукцинангидрид и другие дериватизаторы, известные в данной области. Альтернативно, конъюгатные составляющие могут присоединяться к пептиду опосредованно через промежуточные носители, такие как полисахаридные либо полипептидные носители. Примером полисахаридного носителя является аминодекстран. Примерами подходящих полипептидных носителей являются полилизин, полиглутаминовая кислота, полиаспарагиновая кислота, их сополимеры и смешанные полимеры этих и других аминокислот, например серина, для придания необходимых свойств растворимости, получаемым в результате нагруженным носителям. Цистеиниловые остатки чаще всего взаимодействуют с -галогенацетатами (и соответствующими аминами), например хлоруксусной кислотой, хлорацетамидом, с получением карбоксиметиловых либо карбоксиамидометиловых производных. Цистеиниловые остатки дериватизуют также в ходе реакции с бромтрифторацетоном, -бромо(5-имидазоил)пропионовой кислотой, хлорацетилфосфатом, Nалкилмалеимидами,3-нитро-2-пиридилдисульфидом,метил-2-пиридилдисульфидом,пхлормеркурбензоатом, 2-хлормеркур-4-нитрофенолом или хлоро-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом. Гистидиловые остатки дериватизуют посредством введения в реакцию с диэтилпирокарбонатом при рН 5,5-7,0, поскольку этот агент обладает относительной специфичностью к боковой цепи гистидила. Пригоден также пара-бромфенацетилбромид; реакцию предпочтительно проводят в 0,1 М растворе какодилата натрия при рН 6,0. Лизиниловый и аминоконцевой остатки реагируют с янтарным или другими ангидридами карбоновой кислоты. Дериватизация этими агентами изменяет на противоположный заряд лизиниловых остатков. Другие подходящие реактивы для дериватизации -аминосодержащих остатков включают сложные имидоэфиры, такие как метилпиколинимидат, пиридоксал-фосфат, пиридоксаль, хлорборогидрид, тринитробензолсульфокислота, О-метилизомочевина, 2,4-пентандион и продукт катализированной трансаминазой реакции с глиоксилатом. Аргиниловые остатки модифицируют посредством реакции с одним или несколькими обычными реагентами, к числу которых относятся фенилглиоксаль, 2,3-бутандион, 1,2-циклогександион и нингидрин. Для дериватизации остатков аргинина требуется, чтобы упомянутая реакция осуществлялась в щелочных средах из-за высокой рКа гуанидиновой функциональной группы. Кроме того, такие реагенты могут взаимодействовать с группами лизина, а также аргинин-эпсилон-аминогруппой. Тирозиловые остатки можно подвергать специфической модификации, причем особый интерес в этом случае представляет введение спектральных меток в тирозиловые остатки посредством введения в реакцию с ароматическими соединениями - диазонием либо тетранитрометаном. Чаще всего для получения различных О-ацетилтирозиловых остатков и 3-нитропроизводных применяют N-ацетилимидазол и тетранитрометан соответственно. Карбоксильные боковые группы (аспартил или глутамил) селективно модифицируют путем введения в реакцию с карбодиимидами (R-N=C=N=R'), где R и R' являются разными алкильными группами,такими как 1-циклогексил-3-(2-морфолинил-4-этил)карбодиимид или 1-этил-3-(4-азониа-4,4 диметилфенил)карбодиимид. Кроме того, аспартиловые и глутамиловые остатки превращают в аспарагиниловый и глутаминиловый остатки посредством проведения реакции с ионами аммония. Другие модификации включают гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп сериловых либо треониловых остатков, метилирование -аминогрупп боковых цепей лизина, аргинина и гистидина (Т.Е. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. FreemanCo., San Francisco, (1983) с. 79-86), деамидирование аспарагинов либо глутамина, ацетилирование Nконцевого амина и/или амидирование либо эстерификацию С-концевой карбоксильной группы. Ковалентной модификацией другого типа является химическое либо ферментативное присоединение гликозидов к пептиду. Сахар(-а) может(-гут) присоединяться к (а) аргинину и гистидину, (b) свободным карбоксильным группам, (с) свободным сульфгидрильным группам, таким как сульфгидрильные группы цистеина, (d) свободным гидроксильным группам, таким как гидроксильные группы серина, треонина либо гидроксипролина, (е) ароматическим остаткам, таким как ароматические остатки тирозина либо триптофана, или (f) амидогруппе глутамина. Эти методы описаны в WO 87/05330, опубликованной 11 сентября 1987 г., и в работе Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., с. 259-306 (1981). К примерам конъюгатных составляющих, которые могут присоединяться к любому из глюкагоновых пептидов, описание которых приведено в настоящей заявке, относятся (но без ограничения ими) гетерологические пептиды либо полипептиды (в том числе, например, белок плазмы крови), направляющий агент, иммуноглобулин либо его часть (например, вариабельная область, гипервариабельная область(CDR) или Fc-фрагмент), диагностическая метка, например радиоизотоп, фторофор либо ферментативная метка, полимер, в том числе водорастворимые полимеры, или другие терапевтические либо диагностические средства. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен конъюгат, содержащий глюкагоновый пептид, соответствующий настоящему изобретению, и белок плазмы крови, где упомянутый белок плазмы крови выбран из группы, включающей альбумин, трансферрин, фибриноген и глобулины. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения линкер содержит цепь атомов длиной от 1 до приблизительно 60 атомов, от 1 до 30 атомов или больше, от 2 до 5 атомов, от 2 до 10 атомов,от 5 до 10 атомов, от 10 до 20 атомов. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения все атомы цепи являются атомами углерода. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения атомы цепи в каркасе линкера выбраны из группы, включающей С, О, N и S. Атомы цепи и линкеры могут быть выбраны согласно их ожидаемой растворимости (гидрофильности) для получения более растворимого конъюгата. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения линкер предоставляет функциональную группу, которую подвергают расщеплению ферментом или другим катализатором либо гидролитическими условиями, складывающимися в ткани-мишени или органе-мишени либо клетке-мишени. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения длина линкера достаточно велика для снижения потенциала для стерического препятствия. Если линкер представляет собой ковалентную связь или пептидильную связь, а конъюгат является полипептидом, конъюгат в целом может быть гибридным белком. Такие пептидильные линкеры могут иметь любую длину. К примерам линкеров относятся линкеры, которые имеют в длину от приблизительно 1 до приблизительно 50 аминокис- 27020326 лот, от 5 до 50 аминокислот, от 3 до 5 аминокислот, от 5 до 10 аминокислот, от 5 до 15 аминокислот или от 10 до 30 аминокислот. Такие гибридные белки можно, альтернативно, продуцировать методами рекомбинантных ДНК, известными специалисту в данной области. Как отмечалось выше, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды конъюгируют, например сшивают, с иммуноглобулином либо его частью (например, вариабельной областью, CDR либо Fc-фрагментом). Иммуноглобулины (Ig) известных типов включают IgG,IgA, IgE, IgD или IgM. Fc-фрагмент представляет собой С-концевой участок тяжелой цепи иммуноглобулина, который отвечает за связывание с Fc-рецепторами, которые осуществляют такие воздействия, например, как рециклизация (результатом которой является увеличенный полупериод существования в плазме крови), антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимая цитотоксичность (CDC). Например, согласно некоторым определениям Fc-фрагмент тяжелой цепи человеческого IgG протягивается от Cys226 до С-конца тяжелой цепи. "Шарнирная область", как правило, простирается от Glu216 до Рго 230 человеческого IgG1 (шарнирные области других изотипов IgG могут выравниваться с последовательностью IgG1 посредством выравнивания цистеинов, вовлеченных в связывание цистеинов). Fcфрагмент IgG включает два константных домена, СН 2 и СН 3. Домен СН 2 Fc-фрагмента человеческогоIgG простирается, как правило, от аминокислоты 231 до аминокислоты 341. Домен СН 3 Fc-фрагмента человеческого IgG простирается, как правило, от аминокислоты 342 до аминокислоты 447. Все ссылки на нумерацию аминокислот иммуноглобулинов либо иммуноглобулиновых фрагментов или областей основаны на Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Public Health,Bethesda, Md. В соответствующих вариантах осуществления настоящего изобретения Fc-фрагмент может содержать одну или несколько нативных либо модифицированных константных областей тяжелой иммуноглобулиновой цепи, кроме СН 1, например области СН 2 и СН 3 IgG и IgA либо области СН 3 и СН 4IgE. Подходящими конъюгатными составляющими являются участки иммуноглобулиновой последовательности, включающие сайт связывания FcRn. FcRn, спасательный Fc-рецептор, несет ответственность за рециклизацию иммуноглобулинов и возвращение их в систему кровообращения. Область Fcфрагмента IgG, которая связывается с FcRn-рецептором, была описана на основании данных рентгеновской кристаллографии (Burmeister et al. 1994, Nature 372:379). Основная зона контакта Fc с FcRn находится поблизости от точки соединения доменов СН 2 и СН 3. Все Fc-FcRn контакты происходят в пределах одной тяжелой цепи иммуноглобулина. Основными контактными участками являются аминокислотные остатки 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 и 314 домена СН 2 и аминокислотные остатки 385-387, 428 и 433-436 домена СН 3. Некоторые конъюгатные составляющие могут включать или могут не включать сайт(-ы) связывания FcR. FcR несет ответственность за ADCC и CDC. Примерами положений в пределах Fc-фрагмента,которые осуществляют непосредственный контакт с FcR, являются аминокислоты 234-239 (нижняя часть шарнирной области), аминокислоты 265-269 (петля В/С), аминокислоты 297-299 (петля С'/Е) и аминокислоты 327-332 (петля F/G) (Sondermann et al., Nature 406:267-273, 2000). Предполагается также причастность нижней части шарнирной области IgE к связыванию FcRI (Henry et al., Biochemistry 36,15568-15578, 1997). Остатки, вовлеченные в связывание IgA-рецепторов, описаны у Lewis et al. (J. Immunol. 175:6694-6701, 2005). Аминокислотные остатки, вовлеченные в связывание IgE-рецепторов, описаны у Sayers et al. (J. Biol. Chem. 279(34):35320-35325, 2004). Модификации аминокислот могут быть осуществлены на Fc-фрагменте иммуноглобулина. Такие вариантные Fc-фрагменты содержат по меньшей мере одну модификацию аминокислоты в домене СН 3Fc-фрагмента (остатки 342-447) и/или по меньшей мере одну модификацию аминокислоты в домене СН 2Fc-фрагмента (остатки 231-341). Мутации, которые, как полагают, обеспечивают повышенное сродство кFcRn, включают Т 256 А, Т 307 А, Е 380 А и N434A (Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591). Другие мутации могут снижать связывание Fc-фрагмента с FcRI, FcRIIA, FcRIIB и/или FcRIIIA без значительного снижения сродства к FcRn. Например, замена Asn в положении 297 Fc-фрагмента на Ala или другую аминокислоту удаляет высококонсервативный сайт N-гликозилирования и может привести к снижению иммуногенности с сопутствующим увеличением полупериода существования Fc-фрагмента в плазме крови, а также снижению связывания с FcgRs (Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847; Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632; Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591). Были осуществлены модификации аминокислот в положениях 233-236 IgG1, что привело к снижению связывания с FcgRs (Ward andGhetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77 и Armour et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29:2613). Некоторые примеры замен аминокислот описаны в патентах США 7355008 и 7381408, каждый из которых в полном объеме включен в настоящее описание посредством ссылки. Настоящее описание охватывает также гибридные глюкагоновые пептиды или белки, где второй пептид или полипептид был присоединен к концу, например карбоксильному концу глюкагонового пептида. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вторым пептидом, добавленным к карбоксильному концу глюкагонового пептида, является последовательность SEQ ID NO: 95(GPSSGAPPS), последовательность SEQ ID NO: 97 (KRNRNNIA) или последовательность SEQ ID NO: 98 (KRNR), присоединенная к аминокислоте 29 глюкагонового пептида. В других вариантах осуществления настоящего изобретения вторым пептидом является XGPSSGAPPPS (последовательность SEQ IDNO: 96), где X является одна аминокислота, выбранная среди 20 обычных аминокислот, например глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота либо глицин. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения X представляет собой аминокислоту, например Cys, которая также содержит гидрофильную составляющую, ковалентно присоединенную к боковой цепи этой аминокислоты. Такие С-концевые удлиняющие сегменты улучшают растворимость и также могут улучшить активность на GIP-рецепторе либо GLP-1-рецепторе. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, где глюкагоновый пептид также содержит карбоксиконцевой удлиняющий сегмент, карбоксиконцевая аминокислота удлиняющего сегмента заканчивается амидной группой либо сложноэфирной группой, а не карбоновой кислотой. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, например, в глюкагоновых пептидах, которые содержат С-концевой удлиняющий сегмент, треонин в положении 29 нативного глюкагонового пептида заменяют глицином. Например, глюкагоновый пептид, имеющий глициновую замену треонина в положении 29 и содержащий С-концевой удлиняющий сегмент GPSSGAPPPS (последовательность SEQ ID NO: 95), оказывается в четыре раза эффективнее на GLP-1-рецепторе по сравнению с нативным глюкагоном, модифицированным так, что он содержит такой же самый С-концевой удлиняющий сегмент. Эту замену T29G можно осуществлять в сочетании с другими модификациями, раскрытыми в настоящем описании, для усиления сродства глюкагоновых пептидов к GLP-1-рецептору. Например, замена T29G может сочетаться с заменами аминокислот S16E и N20K, факультативно с лактамовым мостиком между аминокислотами 16 и 20 и факультативно с добавлением полиэтиленгликолевой цепи, как описано в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения аминокислоту добавляют к Сконцу и упомянутую дополнительную аминокислоту выбирают из группы, включающей глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту и глицин. Настоящее изобретение охватывает также мультимеры модифицированных глюкагоновых пептидов, описанных в настоящей заявке. Два или несколько модифицированных глюкагонових пептидов можно соединять между собой с помощью стандартных линкеров в соответствии с методиками, известными специалистам в этой области. Например, димеры могут образовываться между двумя модифицированными глюкагоновыми пептидами с помощью бифункциональных тиоловых кросс-линкеров и бифункциональных аминовых кросс-линкеров, в частности в случае глюкагоновых пептидов, которые были заменены цистеиновым, лизиновым, орнитиновым, гомоцистеиновым либо ацетилфенилаланиновым остатками. Ацилирование и алкилирование. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения глюкагоновые пептиды, раскрытые в настоящем описании, модифицируют для включения ацильной группы либо алкильной группы, например ацильной либо алкильной группы, которая не является нативной для природной аминокислоты. Ацилирование либо алкилирование может увеличить полупериод существования глюкагоновых пептидов в системе кровообращения. Ацилирование либо алкилирование может существенно отсрочить начало действия, и/или увеличить продолжительность действия на глюкагоновом рецепторе и/или GLP-1 рецепторе, и/или улучшить резистентность к протеазам, таким как DPP-IV, и/или улучшить растворимость. Активность глюкагонового пептида на глюкагоновом рецепторе, и/или GLP-1-рецепторе, и/илиGIP-рецепторе после ацилирования может сохраняться на прежнем уровне. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения эффективность ацилированных глюкагоновых пептидов сравнима с эффективностью неацилированных вариантов глюкагоновых пептидов. В других вариантах осуществления настоящего изобретения эффективность ацилированных глюкагоновых пептидов увеличивается по сравнению с эффективностью неацилированного варианта глюкагоновых пептидов. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен глюкагоновый пептид,модифицированный с включением ацильной группы либо алкильной группы, ковалентно связанной с аминокислотой глюкагонового пептида в положении 10. Глюкагоновый пептид может также содержать спейсер между аминокислотой глюкагонового пептида в положении 10 и ацильной группой либо алкильной группой. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ацильная группа представляет собой жирную кислоту либо желчную кислоту или их соль, например С 4-С 30 жирную кислоту,С 8-С 24 жирную кислоту, холевую кислоту, С 4-С 30-алкил, С 8-С 24-алкил либо алкил, содержащий стероидную составляющую желчной кислоты. Спейсером является любая составляющая с подходящими реакционноспособными группами для присоединения ацильных либо алкильных групп. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения спейсером является аминокислота, дипептид, трипептид, гидрофильный бифункциональный либо гидрофобный бифункциональный спейсер. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения спейсер выбран из группы, включающей Trp, Glu, Asp, Cys и спейсер, содержащий NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH, где m представляет собой любое целое число от 1 до 6, а n представляет собой любое целое число от 2 до 12. Такие ацилированные либо алкилированные

МПК / Метки

МПК: A61K 38/00

Метки: агонисты, смешанного, ожирения, веществ, основе, действия, инсулинотропного, пептида, обмена, нарушений, глюкозозависимого, лечения

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/30-20326-agonisty-smeshannogo-dejjstviya-na-osnove-glyukozozavisimogo-insulinotropnogo-peptida-dlya-lecheniya-narushenijj-obmena-veshhestv-i-ozhireniya.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Агонисты смешанного действия на основе глюкозозависимого инсулинотропного пептида для лечения нарушений обмена веществ и ожирения</a>