Белки, связывающие tweak, и их применение

(71)(73) Заявитель и патентовладелец: БАЙОДЖЕН АЙДЕК МА ИНК. (US) Перекрестные ссылки на родственные заявки По данной заявке испрашивается приоритет по заявке США с порядковым 60/685149, поданной 27 мая 2005 г., содержание которой полностью включено в настоящее изобретение в качестве ссылки. Уровень техники Цитокины, родственные фактору некроза опухолей (TNF), представляют собой суперсемейство белков, которые имеют множество функций, включая те, что вовлечены в иммунную регуляцию и регуляцию апоптоза. TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis, TNF-подобный слабый индуктор апоптоза) является одним из членов этого суперсемейства. Сущность изобретения Антитела против TWEAK могут применяться для лечения ряда состояний и нарушений, например воспалительного заболевания, нервного расстройства или других описанных здесь нарушений. Антитело предпочтительно является человеческим, гуманизированным или иным фактически человеческим антителом при применении для лечения человека. В одном аспекте описание характеризует белок, который содержит первую и вторую последовательности вариабельного домена иммуноглобулина и который связывается с TWEAK, например сTWEAK человека. Белок может связываться с TWEAK, например, с аффинностью, соответствующей KD менее чем 10-7 М, например 10-8, 10-9, 10-10, 10-11 М или более. Также в данном описании белок именуется"антителом против TWEAK". Первая и вторая последовательности вариабельного домена иммуноглобулина могут включать по меньшей мере часть вариабельного домена иммуноглобулина, достаточную для образования антигенсвязывающей области, которая связывается с TWEAK. В большинстве случаев первая и вторая последовательности вариабельного домена иммуноглобулина соответствуют последовательностям вариабельного домена тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина соответственно, например образующих пару или иным образом совместимых тяжелой и легкой цепей. Антитело может связываться с эпитопом TWEAK, который включает по меньшей мере один, два,три или четыре аминокислотных остатка из эпитопа TWEAK, распознаваемого P2D10, может связываться с пептидом из TWEAK, который связывается P2D10 (например, с пептидом менее чем из 25, 20 или 15 аминокислот в длину) или с участком TWEAK, распознаваемым P2D10. Например, антитело специфически связывается с эпитопом, например линейным или конформационным эпитопом TWEAK, в частностиTWEAK человека, например, с растворимым участком TWEAK. Антитело может конкурировать с P2D10 за связывание с TWEAK, например с TWEAK человека. Антитело может конкурентно ингибировать связывание P2D10 с TWEAK, например с TWEAK человека. В одном варианте осуществления антитело может связываться с эпитопом, который перекрывается с таковым для P2D10, например включает по меньшей мере одну, две, три или четыре аминокислоты, общих с эпитопом для P2D10, или с эпитопом, который, когда связан, стерически препятствует взаимодействию TWEAK с P2D10. Например, антитело против TWEAK может связываться с TWEAK и модулировать, например ингибировать, взаимодействие (например, связывание) между TWEAK и рецептором TWEAK, например Fn14(например, Fn14 человека). Также антитело может ослаблять сигнальную активность рецептора TWEAK. Антитело может выявлять TWEAK, связывать TWEAK и/или модулировать стабильность TWEAK invivo. В одном варианте осуществления антитело специфически связывается по меньшей мере с частью сайта взаимодействия с TWEAK, который контактирует с Fn14 (например, Fn14 человека). Антитело может конкурировать с Fn14 за связывание с TWEAK, например с TWEAK человека. Антитело может конкурентно ингибировать связывание Fn14 с TWEAK. Антитело может взаимодействовать с эпитопомTWEAK, который при связывании стерически препятствует взаимодействию между TWEAK и Fn14 (например, между TWEAK человека и Fn14 человека). В одном воплощении антитело может ингибировать одну или несколько активностей, ассоциированных с TWEAK, с IC50 приблизительно от 50 нМ до 5 пМ, обычно приблизительно от 100 до 250 пМ или менее. Например, антитело может ингибировать способность TWEAK активировать пролиферацию эндотелиальных клеток или новообразование кровеносных сосудов. В одном воплощении антитело против TWEAK снижает по меньшей мере одну активность, ассоциированную с TWEAK, например так, что антитело может регулировать воспалительное состояние при введении субъекту. В прочих вариантах осуществления антитело может связываться с TWEAK с кинетическими показателями в диапазоне от 103 до 108 М-1 с-1, в большинстве случаев от 104 до 107 М-1 с-1. В еще одном воплощении антитело имеет кинетические показатели диссоциации в диапазоне от 10-2 до 10-6 с-1, обычно от 10-2 до 10-5 с-1. В одном воплощении антитело связывается с TWEAK, например с TWEAK человека, с аффинностью и/или кинетическими характеристиками, сходными (например, в пределах коэффициента пять или десять) с таковыми для моноклонального антитела P2D10 или его модифицированных форм,например его химерных форм или гуманизированных форм (например, описанной здесь гуманизированной формы). Аффинность и кинетические показатели связывания антитела против TWEAK могут быть исследованы, например, при применении биосенсорной технологии (BIACORE). В одном воплощении антитело представляет собой антигенсвязывающий фрагмент полноразмерного антитела, например Fab, F(ab')2, Fv или одноцепочечный Fv-фрагмент. Обычно антитело представляет собой полноразмерное антитело. Антитело может быть моноклональным антителом или моноспецифическим антителом. Например, антитело находится в композиции, которая включает менее чем 20 других разновидностей антител против TWEAK, например в композиции, которая не включает другие разновидности антитела против TWEAK. Антитело может быть фактически человеческим. "Фактически человеческое" антитело представляет собой антитело, которое включает достаточное количество положений человеческих аминокислот, так что антитело не вызывает иммуногенного ответа у здорового человека. Предпочтительно, чтобы белок не вызывал образования нейтрализующего антитела, например образования антимышиного антитела человека (НАМА). НАМА может быть проблематичным в ряде случаев, например, если ожидается, что антитела будут вводиться неоднократно, например, при лечении хронического или рецидивирующего болезненного состояния. Образование НАМА может сделать потенциально неэффективным неоднократное введение антитела вследствие повышенного выведения антитела из сыворотки (см., например, Saleh etal., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990 и также вследствие возможных аллергических реакций (см., например, LoBuglio et al. (1986) Hybridoma, 5:5117-5123). Например, антитело может быть человеческим, гуманизированным, CDR-привитым, химерным,мутантным, аффинно созревшим, деиммунизированным, синтетическим или иным образом созданным invitro антителом и его комбинациями. В одном варианте осуществления антитело против TWEAK представляет собой гуманизированное антитело. Тяжелая и легкая цепи антитела против TWEAK могут быть, по существу, полноразмерными. Белок может включать по меньшей мере одну и предпочтительно две полные тяжелые цепи и по меньшей мере одну и предпочтительно две полные легкие цепи или может включать антигенсвязывающий фрагмент(например, Fab, F(ab')2, Fv или одноцепочечный Fv-фрагмент). В других вариантах осуществления антитело содержит константную область тяжелой цепи, выбранную, например, из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4,IgM, IgA1, IgA2, IgD и IgE; в частности выбранную, например, из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, конкретнее IgG1 (например, IgG1 человека). В основном константная область тяжелой цепи является человеческой или модифицированной формой константной области человека. В еще одном воплощении антитело имеет константную область легкой цепи, выбранную, например, из -цепи или -цепи, в частности - -цепь(например, человеческая -цепь). В одном воплощении белок включает по меньшей мере один, два и предпочтительно три CDR вариабельной области легкой или тяжелой цепи антитела, раскрытого в настоящем изобретении, напримерP2D10. В данном случае CDR-участки относятся к CDR, которые определяются гипервариабельными петлями Chothia. Например, белок включает в последовательности вариабельного домена тяжелой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах CDR-участка: или CDR, имеющий аминокислотную последовательность, которая отличается не более чем 4, 3, 2,5, 2,1,5, 1 или 0,5 изменениями (например, заменами, инсерциями или делециями) на каждые 10 аминокислот(например, количество отличий пропорционально длине CDR) по отношению к последовательности,приведенной выше, например по меньшей мере одним изменением, но не более чем двумя, тремя или четырьмя на CDR. Последовательность вариабельного домена тяжелой цепи может включать эти последовательности CDR, в частности в CDR3, или по меньшей мере в два CDR, например CDR1 и CDR3,CDR2 и CDR3 или во все три CDR. Белок может включать в последовательности вариабельного домена тяжелой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах CDR-участка (аминокислоты в круглых скобках представляют варианты для конкретного положения):(SEQ ID NO: 7). Белок может включать в последовательности вариабельного домена легкой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах CDR-участка:SQSTHFPRT; (CDR3) (SEQ ID NO: 10) или CDR, имеющий аминокислотную последовательность,которая отличается не более чем 4, 3, 2,5, 2, 1,5, 1 или 0,5 изменениями (например, заменами, инсерциями или делециями) на каждые 10 аминокислот (например, количество отличий пропорционально длинеCDR) по отношению к последовательности, приведенной выше, например, по меньшей мере одним изменением, но не более чем двумя, тремя или четырьмя на CDR. Последовательность вариабельного домена легкой цепи может включать эти последовательности CDR, в частности в CDR3 или по меньшей мере в две CDR, например CDR1 и CDR3, CDR2 и CDR3 или во все три CDR. Белок может включать в последовательности вариабельного домена легкой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах CDR-участка (аминокислоты в круглых скобках изображают варианты для конкретного положения):NO: 16). В одном предпочтительном варианте осуществления белок включает все шесть CDR из P2D10 или близкородственные CDR, например CDR, которые являются идентичными или которые имеют по меньшей мере одно аминокислотное изменение, но не более чем два, три или четыре изменения (например,замены, делеции или инсерции) или другие CDR, описанные в настоящем изобретении. В еще одном примере белок включает по меньшей мере один, два или три CDR-участка, которые имеют одинаковые канонические структуры и соответствующие CDR-участки Chothia из P2D10, например те же канонические структуры, что и, по меньшей мере, CDR1 и/или CDR2 вариабельных доменов тяжелой и/или легкой цепи P2D10. Белок может включать одну из следующих последовательностей: или последовательность, которая имеет менее чем восемь, семь, шесть, пять, четыре, три или два изменения (например, замены, инсерции или делеции, например консервативные замены или замена на аминокислотный остаток в соответствующем положении в P2D10, huP2D10-L1 или huP2D10-L2). Иллюстративные замены находятся в одном из следующих положений Kabat: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69,85, 87, 98, 99, 101 и 102. Замены могут, например, замещать одну или несколько аминокислот P2D10 вFR2 (например, в положении 46 на Phe согласно последовательной нумерации) и в FR3 (например, в положении 87 на Phe). Белок может включать одну из следующих последовательностей в вариабельном домене тяжелой цепи: или последовательность, которая имеет менее чем восемь, семь, шесть, пять, четыре, три или два изменения (например, замены, инсерции или делеции, например консервативные замены или замена на аминокислотный остаток в соответствующем положении в P2D10). Иллюстративные замены находятся в одном из следующих положений Kabat: 2, 4, 6, 25, 36, 37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106 и 107. Замены могут, например, замещать одну или несколько аминокислот P2D10 в соответствующих положениях в каркасной области, например каркасной области человека. В одном варианте осуществления каркасная область тяжелой цепи (например, FR1, FR2, FR3 по отдельности или последовательность, вмещающая FR1, FR2 и FR3, но исключающая CDR-участки) включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90%, 95, 97, 98, 99 или более идентична каркасной области тяжелой цепи одной из следующих последовательностей V-сегмента эмбрионального типа: DP-25, DP-1, DP-12, DP-9, DP-7, DP-31, DP-32, DP-33, DP-58, DP-54, другой последовательности подгруппы VH I эмбрионального типа, другой последовательности подгруппы VH III эмбрионального типа или еще одному гену V, который соответствует классу канонической структуры 13 (см., например, Chothia et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817; Tomlinson et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798). Другие каркасные области, соответствующие классу канонической структуры 1-3, включают каркасные области с одним или несколькими из следующих остатков согласно нумерации Kabat:Ala, Gly, Thr или Val в положении 26; Gly в положении 26; Tyr, Phe или Gly в положении 27; Phe, Val, Ile или Leu в положении 29; Met, Ile, Leu, Val, Thr, Trp или Ile в положении 34; Arg, Thr, Ala, Lys в положении 94; Gly, Ser, Asn или Asp в положении 54 и Arg в положении 71. В одном варианте осуществления каркасная область легкой цепи (например, FR1, FR2, FR3 по отдельности или последовательность, вмещающая FR1, FR2 и FR3, но исключающая CDR-участки) включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более идентична каркасной области легкой цепи последовательности подгруппы Vk II эмбрионального типа или одной из следующих последовательностей V-сегмента эмбрионального типа: А 17, А 1, А 18, А 2,А 19/А 3, А 23, последовательности подгруппы Vk I эмбрионального типа (например, последовательностиDPK9), или еще одному гену V, который соответствует классу канонической структуры 4-1 (см., например, Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628). Другие каркасные области, соответствующие классу канонической структуры 4-1, включают каркасные области с одним или несколькими из следующих остатков согласно нумерации Kabat: Val или Leu, или Ile в положении 2; Ser или Pro в положении 25; Ile или Leu в положении 27b; Gly в положении 29; Phe или Leu в положении 33 и Phe в положении 71. Кроме того,согласно нумерации Kabat положение 48 может представлять собой Ile или Val. В еще одном воплощении каркасная область легкой цепи (например, FR1, FR2, FR3 по отдельности или последовательность, вмещающая FR1, FR2, и FR3, но исключающая CDR-участки) включает амино-5 018255 кислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более идентична каркасной области легкой цепи последовательности подгруппы Vk I эмбрионального типа, например последовательности DPK9. В одном воплощении вариабельная каркасная область легкой или тяжелой цепи (например, область,вмещающая по меньшей мере FR1, FR2, FR3 и, необязательно, FR4) может быть выбрана из (а) вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи, включающей по меньшей мере 80, 90, 95 или предпочтительно 100% аминокислотных остатков вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи человека, например остаток вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи зрелого антитела человека, человеческой последовательности эмбрионального типа, консенсусной последовательности человека или антитела человека, описанного в настоящем изобретении; (b) вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи, включающей от 20 до 80%, от 40 до 60%, от 60 до 90% или от 70 до 95% аминокислотных остатков вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи человека,например остаток вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи зрелого антитела человека,человеческой последовательности эмбрионального типа, консенсусной последовательности человека; (с) каркасной области, не являющейся человеческой (например, каркасной области грызуна); или (d) каркасной области, не являющейся человеческой, которую модифицировали, например, для удаления антигенных или цитотоксических детерминант, например деиммунизировали или частично гуманизировали. В одном варианте осуществления последовательность вариабельного домена тяжелой цепи включает остатки человека или остатки консенсусной последовательности человека в одном или нескольких из следующих положений (предпочтительно по меньшей мере пять, десять, двенадцать или все): (в FR вариабельного домена легкой цепи) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L,68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L и/или (в FR вариабельного домена тяжелой цепи) 2 Н, 4 Н, 24 Н,36 Н, 37 Н, 39 Н, 43 Н, 45 Н, 49 Н, 58 Н, 60 Н, 67 Н, 68 Н, 69 Н, 70 Н, 73 Н, 74 Н, 75 Н, 78 Н, 91 Н, 92 Н, 93 Н и/или 103 Н (согласно нумерации Kabat). В одном воплощении белок включает по меньшей мере один CDR, не являющийся человеческим,например мышиный CDR, например CDR из P2D10, или его мутантную форму, и по меньшей мере одну каркасную область, которая отличается от каркасной области P2D10 по меньшей мере одной аминокислотой, например по меньшей мере 5, 8, 10, 12, 15 или 18 аминокислотами. Например, белки включают один, два, три, четыре, пять или шесть таких CDR, не являющихся человеческими, и включают по меньшей мере одно аминокислотное отличие по меньшей мере в трех из НС FR1, НС FR2, НС FR3, LC FR1,LC FR2 и LC FR3. В одном варианте осуществления последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи белка включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95,97, 98, 99% или более идентична последовательности вариабельного домена описанного здесь антитела,например P2D10, huP2D10-l или huP2D10-2; или которая отличается по меньшей мере 1 или 5 остатками,но менее чем 40, 30, 20 или 10 остатками от последовательности вариабельного домена описанного здесь антитела, например P2D10, huP2D10-l или huP2D10-2. В одном воплощении один или оба вариабельных домена включают аминокислотные положения в каркасной области, которые получены различным образом и из мышиного антитела (например, P2D10), и из гуманизированного антитела (например, 56-84m и K107) или последовательности эмбрионального типа. Например, вариабельный домен будет включать ряд положений, в которых аминокислота идентична как мышиному антителу, так человеческому антителу (или последовательности эмбрионального типа), поскольку две последовательности идентичны в этих положениях. В оставшихся положениях каркасной области, в которых мышиные и человеческие последовательности различаются по меньшей мере 50, 60, 70, 80 или 90% положений вариабельного домена, предпочтительно идентичны антителу человека(или последовательности эмбрионального типа), нежели мышиной. Ни одно или по меньшей мере одно,два, три или четыре из таких оставшихся положений каркасной области могут быть скорее идентичны мышиному антителу, нежели антителу человека. Например, в НС FR1 одно или два таких положения могут быть мышиными; в НС FR2 одно или два таких положения могут быть мышиными; в FR3 одно,два, три или четыре таких положения могут быть мышиными; в LC FR1 одно, два, три или четыре таких положения могут быть мышиными; в LC FR2 одно или два таких положения могут быть мышиными; вLC FR3 одно или два таких положения могут быть мышиными. В одном воплощении последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи белка включает аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем изобретении, или нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем изобретении (например, с конкретной последовательностью нуклеиновой кислоты или с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность, описанную в настоящем изобретении) или с ее комплементом, например, при условиях пониженной строгости, средней строгости, высокой строгости или очень высокой строгости. Антитело против TWEAK может быть производным или связанным с другой функциональной молекулой, например, с другим пептидом, белком или соединением. Например, антитело может быть функ-6 018255 ционально связано (например, посредством химического соединения, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одним или несколькими другими молекулярными компонентами, среди прочих такими как другое антитело (например, биспецифическое или мультиспецифическое антитело), токсины, радиоизотопы, полимеры, цитотоксические или цитостатические вещества. В еще одном аспекте изобретение предоставляет композиции, например фармацевтические композиции, которые включают фармацевтически приемлемый носитель и антитело против TWEAK, например, антитело против TWEAK, описанное в настоящем изобретении. В еще одном варианте осуществления антитело против TWEAK (например, его фармацевтическая композиция) вводится субъекту, который нуждается в лечении антителом против TWEAK или чье состояние будет улучшено данным антителом. Например, антитело против TWEAK может вводиться субъекту, который имеет воспалительное заболевание, иммунное нарушение, аутоиммунное заболевание,нервное расстройство, новообразование или другое нарушение, описанное в настоящем изобретении, или подвержен его возникновению. В одном воплощении антитело против TWEAK, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания, иммунного нарушения, аутоиммунного заболевания, нервного расстройства, новообразования или другого нарушения, описанного в настоящем изобретении. В еще одном аспекте изобретение раскрывает способ лечения у субъекта болезни, связанной сTWEAK. Способ включает введение субъекту антитела против TWEAK в количестве, достаточном для лечения (например, для улучшения или предупреждения) болезни, связанной с TWEAK. Антитело против TWEAK может вводиться субъекту отдельно или в сочетании с другими терапевтическими средствами, как описано в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления субъект представляет собой млекопитающее, например человека, например человека, имеющего болезнь, связанную сTWEAK, например болезнь, описанную в настоящем изобретении. Антитело может применяться для улучшения одного или нескольких симптомов таких болезней. Термин "лечение" относится к назначению терапии в количестве, способе и/или режиме, эффективных для улучшения или предупреждения состояния, симптома или параметра, связанного с болезнью (например, с болезнью, описанной в настоящем изобретении) или для предупреждения приступа, прогрессии или обострения болезни либо до статистически значимого уровня, либо до уровня, поддающегося обнаружению специалистом в данной области. Таким образом, лечение может достигать терапевтических и/или профилактических результатов. Эффективное количество, способ или режим могут меняться в зависимости от субъекта и могут специально подбираться для субъекта. В одном варианте осуществления антитело против TWEAK, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарства для лечения болезни, связанной сTWEAK. В еще одном аспекте изобретение описывает способ модулирования взаимодействия междуTWEAK и белком-рецептором TWEAK. Например, антитело против TWEAK может применяться для ослабления или подавления связывания между TWEAK и рецептором TWEAK, таким как Fn14. Способ включает контактирование TWEAK или комплекса, который содержит TWEAK, с антителом. Способ может применяться на клетках in vitro, например, в культуре, например, in vitro или ex vivo. Например,клетки, экспрессирующие рецептор TWEAK, можно культивировать in vitro в культуральной среде и стадию контактирования можно осуществлять посредством добавления антитела против TWEAK к культуральной среде. В ином случае процедура может выполняться на клетках, существующих у субъекта,например, в рамках протокола in vivo (например, терапевтического или профилактического). Например,антитело против TWEAK может доставляться локально или системно. В одном воплощении антитело против TWEAK, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарственного средства для модулирования взаимодействия между TWEAK и белком-рецептором TWEAK. Способ может включать контактирование TWEAK с рецепторным комплексом TWEAK или его субъединицей при условиях, которые обеспечивают взаимодействие между TWEAK и рецепторным комплексом TWEAK или его субъединицей, таким образом образуя смесь TWEAK/рецептор TWEAK. Как правило, антитело против TWEAK предоставляется в эффективном количестве, например в таком,что контактирование смеси TWEAK/рецептор TWEAK с антителом против TWEAK модулирует взаимодействие между TWEAK и рецепторным белком, например препятствует (например, ингибирует, блокирует или иным образом уменьшает), или, по меньшей мере, препятствует одной функции TWEAK, например опосредованной TWEAK передаче сигналов. Также данное изобретение описывает нуклеиновые кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные области тяжелой и легкой цепей антител против TWEAK,например которые описаны в настоящем изобретении. Например, изобретение описывает первую и вторую нуклеиновые кислоты, кодирующие вариабельные области тяжелой и легкой цепей P2D10 соответственно. В ином аспекте данное изобретение раскрывает клетки-хозяева и векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, описанные в настоящем изобретении. Также изобретение представляет эпитоп TWEAK, например TWEAK человека, распознаваемыйP2D10, и белки, способные взаимодействовать с эпитопом. Например, белки и пептиды, которые включают эпитоп, могут применяться для создания или отбора других связывающих соединений, которые взаимодействуют с эпитопом, например белков, таких как антитела или малые молекулы. Например,пептид, который содержит эпитоп, может применяться как иммуноген или как мишень при скрининге экспрессионной библиотеки. Также можно оценить соединения по их способности взаимодействовать с пептидом при помощи или картирования, или определения их структуры, оценить соединения по их способности взаимодействовать с эпитопом, например, в отношении зрелого TWEAK. Иллюстративная оценка включает определение способности данного соединения взаимодействовать с TWEAK в присутствии конкурирующего антитела P2D10. Также раскрыты способы доставки или нацеливания in vivo вещества, например терапевтического(включая генетический агент) или цитотоксического вещества, антителом против TWEAK (например,P2D10 или иным антителом, описанным в настоящем изобретении) в клетку или структуру, экспрессирующую TWEAK. В настоящем описании термин "антитело" относится к белку, который включает по меньшей мере одну вариабельную область иммуноглобулина, например аминокислотную последовательность, которая обеспечивает вариабельный домен иммуноглобулина или последовательность вариабельного домена иммуноглобулина. Например, антитело может включать вариабельную область тяжелой (Н) цепи (обозначенную здесь как VH) и вариабельную область легкой (L) цепи (обозначенную здесь как VL). В еще одном примере антитело включает две вариабельные области тяжелой (Н) цепи и две вариабельные области легкой (L) цепи. Термин "антитело" охватывает антигенсвязывающие фрагменты антител (например, одноцепочечные антитела, Fab-фрагменты, F(ab')2-фрагменты, Fd-фрагменты, Fv-фрагменты и dAbфрагменты), а также полноразмерные антитела, например полноразмерные иммуноглобулины типов IgA,IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgE, IgD, IgM (а также их подтипы). Термин "полноразмерное антитело" относится к антителу, имеющему по меньшей мере 96% от длины природного антитела, которое процессируется для удаления какой-либо сигнальной последовательности. Полноразмерное антитело может включать полную длину природного антитела, например остатки от N-концевого остатка природного антитела (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) до его С-концевого остатка."Последовательность вариабельного домена иммуноглобулина" имеет отношение к аминокислотной последовательности, которая может образовывать структуру вариабельного домена иммуноглобулина. Например, последовательность может включать всю аминокислотную последовательность природного вариабельного домена или его часть. Например, последовательность может включать или не включать одну, две или более N- или С-концевых аминокислот или может включать другие изменения, которые согласуются с формированием белковой структуры."Выделенная композиция" относится к композиции, которая отделена по меньшей мере от 90% по меньшей мере одного компонента природного образца, из которого может быть получена данная выделенная композиция. Композиции, полученные искусственно или естественно, могут представлять собой"композиции по меньшей мере" некоторой степени чистоты, если виды или популяция видов, представляющих интерес, по меньшей мере, являются на 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 95, 98 или 99% чистыми в соотношении вес-вес."Эпитоп" имеет отношение к сайту соединения-мишени, который связывается антителом. В случае,когда соединение-мишень представляет собой, например, белок, эпитоп может относиться к аминокислотам (в частности, боковым цепям аминокислот), которые связываются антителом. Перекрывающиеся эпитопы включают по меньшей мере один общий аминокислотный остаток, например по меньшей мере при 2, 3, 4 или 5 общих аминокислотных остатках. В настоящем описании термин "гибридизуется при условиях пониженной строгости, средней строгости, высокой строгости или очень высокой строгости" описывает условия гибридизации и промывки. Руководство по проведению реакций гибридизации можно найти в Current Protocols in Molecular Biology,John WileySons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. В этой ссылке описан водный и безводный способы, и может применяться каждый из них. Особыми упоминаемыми здесь условиями гибридизации являются следующие: 1) условия гибридизации низкой строгости в 6 Х хлориде натрия/цитрате натрия (SSC) примерно при 45 С с последующими двумя промывками в 0,2 Х SSC, 0,1% SDS по меньшей мере при 50 С (температура при промывке может быть увеличена до 55 С при условиях пониженной строгости); 2) условия гибридизации средней строгости в 6 Х SSC примерно при 45 С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2 Х SSC, 0,1% SDS при 60 С; 3) условия гибридизации высокой строгости в 6 Х SSC приблизительно при 45 С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2 Х SSC, 0,1% SDS при 65 С и предпочтительно 4) условия гибридизации очень высокой строгости в 0,5 М фосфате натрия, 7%SDS при 65 С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2 Х SSC, 1% SDS при 65 С. Условия высокой строгости (3) являются предпочтительными условиями, и это те условия, которые следует использовать, если не оговорено иначе."Болезнь, связанная с TWEAK" - это любая болезнь, при которой TWEAK участвует в этиологии,или болезнь, при которой состояние, симптомы или риск появления изменяют посредством предоставления вещества, блокирующего TWEAK. Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, что и обычно подразумеваются средним специалистом в данной области, которой принадлежит это изобретение. Хотя способы и материалы, схожие с описанными в настоящем изобретении или равноценные им, могут применяться в описанных здесь практической деятельности или испытании, подходящие способы и материалы описаны ниже. Кроме того, варианты осуществления данного изобретения,описанные относительно CDR-участков Chothia, также могут быть реализованы при использованииCDR-участков Kabat. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем изобретении, полностью включены в виде ссылок. В случае возникновении конфликта он регулируется настоящей спецификацией, включая определения. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения. Подробное описание изобретенияP2D10 является иллюстративным мышиным антителом, которое специфически связывается сTWEAK человека и подавляет действие TWEAK. Также раскрыты варианты антитела P2D10, включая иллюстративные гуманизированные модификации. Эти антитела, другие антитела против TWEAK и другие блокирующие TWEAK агенты могут применяться для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных TWEAK, например воспалительных заболеваний и других описанных здесь болезней. Антитела против TWEAK. Это изобретение включает последовательности характерных примеров антител против TWEAK, таких как P2D10, huP2D10-l и huP2D10-2. Конкретные антитела, такие как эти, могут быть созданы, например, посредством получения и экспрессии синтетических генов, которые кодируют представленные аминокислотные последовательности, или посредством мутирования генов человека эмбрионального типа для получения гена, который кодирует представленные аминокислотные последовательности. Более того, эти антитела и другие антитела против TWEAK могут быть получены, например, при применении одного или нескольких из следующих способов. Доступны многочисленные способы получения антител, в частности антител человека. Один иллюстративный способ включает скрининг белковых экспрессионных библиотек, например библиотек на основе фагового или рибосомального дисплея. Фаговый дисплей описан, например, в патенте США 5223409; Smith (1985) Science 228:1315-1317; в WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679;WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690 и WO 90/02809. Фаговый дисплей для Fab описан, например, в патентах США 5658727; 5667988 и 5885793. Кроме применения библиотек на основе дисплея, другие способы могут быть использованы для получения антитела, связывающего TWEAK. Например, белок TWEAK или его пептид может применяться в качестве антигена у животного, не являющегося человеком, например у грызуна, например мыши, хомяка или крысы. В одном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, содержит по меньшей мере часть гена человеческого иммуноглобулина. Например, можно создать породы мышей, не вырабатывающих мышиные антитела, с большими фрагментами локусов Ig человека. При применении гибридомной технологии могут продуцироваться и отбираться антигенспецифические моноклональные антитела,полученные на основе генов с желаемой специфичностью. См., например, XenoMouse, Green et al.(1994) Nature Genetics 7:13-21, патент США 20030070185, WO 96/34096 и WO 96/33735. В еще одном воплощении моноклональное антитело получают от животного, не являющегося человеком, и затем модифицируют, например гуманизируют или деиммунизируют. Winter описывает иллюстративный способ прививки CDR, который может применяться для получения гуманизированных антител, описанных в настоящем изобретении (патент США 5225539). Все или некоторые из CDR-участков конкретного антитела человека могут быть заменены по меньшей мере на часть антитела, не являющегося человеческим. Может быть необходимо заменить лишь CDR-участки, требующиеся для связывания,или детерминанты связывания таких CDR-участков для получения подходящего гуманизированного антитела, которое связывается с TWEAK. Гуманизированные антитела могут быть получены посредством замещения последовательностей вариабельной области Fv, которые не вовлекаются непосредственно в связывание антигена, соответствующими последовательностями вариабельных областей Fv человека. Основные способы получения гуманизированных антител представлены у Morrison, S.L. (1985) Science 229:1202-1207, у Oi et al. (1986)BioTechniques 4:214 и в патенте США 5585089; в патенте США 5693761; в патенте США 5693762; в патенте США 5859205 и в патенте США 6407213. Эти методы включают выделение, обработку и экспрессию последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют все вариабельные области Fv иммуноглобулина по меньшей мере одной тяжелой или легкой цепи или их часть. Источники такой нуклеиновой кислоты хорошо известны специалистам в данной области и, например, могут быть получены из гибридомы, продуцирующей антитело против выбранной мишени, как описано выше, из иммуноглобулиновых генов эмбрионального типа, или из синтетических конструкций. Затем рекомбинантная ДНК,кодирующая гуманизированное антитело, может быть клонирована в соответствующий экспрессионный вектор. Человеческие последовательности эмбрионального типа раскрыты, например, у Tomlinson, I.A. et al.(1992) J. Mol. Bio. 227:799-817 и Tomlinson и др. (1995) EMBO J. 14:4628-4638. Руководство V BASE предоставляет подробное руководство по последовательностям вариабельной области иммуноглобулина человека (составлено Tomlinson, I.A. и др. MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK). Эти последовательности могут применяться в качестве источника последовательности человека, например, для каркасных областей и CDR-участков. Также могут использоваться консенсусные каркасные области человека, например, как описано в патенте США 6300064. Также связывающее TWEAK антитело, не являющееся человеческим, можно модифицировать посредством специфической делеции эпитопов человеческой Т-клетки или "деиммунизации" при помощи методов, раскрытых в WO 98/52976 и WO 00/34317. Кратко, вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела можно исследовать на наличие пептидов, которые связываются с классом II МНС; эти пептиды представляют собой потенциальные эпитопы Т-клетки (как определено в WO 98/52976 и WO 00/34317). Для обнаружения потенциальных эпитопов Т-клетки, может применяться компьютерное моделирование, называемое "peptide threading", и дополнительно может быть исследована база данных связывающих пептидов класса II МНС человека для обнаружения мотивов, присутствующих в последовательностях VH и VL, как описано в WO 98/52976 и WO 00/34317. Эти мотивы связываются с любым из 18 основных аллотипов класса II DR МНС и, таким образом, образуют потенциальные эпитопы Т-клетки. Обнаруженные потенциальные эпитопы Т-клетки могут быть удалены посредством замены небольшого количества аминокислотных остатков в вариабельных областях или предпочтительно посредством одной аминокислотной замены. По возможности осуществляют консервативные замены. Часто, но не всегда,может использоваться аминокислота, свойственная положению в последовательностях антитела эмбрионального типа человека. После выявления деиммунизирующих изменений нуклеиновые кислоты, кодирующие VH и VL, могут быть сконструированы посредством мутагенеза или других синтетических способов (например, посредством синтеза de novo, кассетного замещения и так далее). Мутировавшая вариабельная последовательность может, необязательно, быть слита с константной областью человека,например с IgG1 человека или с константными областями . В некоторых случаях потенциальный эпитоп Т-клетки будет включать остатки, о которых известно или предсказано, что они важны для функционирования антитела. Например, потенциальные эпитопы Тклетки обычно смещены к CDR-участкам. Кроме того, потенциальные эпитопы Т-клетки могут встречаться в остатках каркасной области, важных для структуры и связывания антитела. В некоторых случаях изменения для удаления этих потенциальных эпитопов потребуют более пристального изучения, например, посредством создания и испытания цепей с изменениями и без них. Где возможно, потенциальные эпитопы Т-клетки, которые перекрывают CDR-участки, могут быть удалены посредством замен за пределами CDR-участков. В некоторых случаях изменения внутри CDR являются единственно возможными, и таким образом могут быть проверены варианты с этой заменой и без нее. В других случаях замена, требующаяся для удаления потенциального эпитопа Т-клетки, находится в положении остатка в пределах каркасной области, которая могла бы быть критической для связывания антитела. В этих случаях исследуются варианты с этой заменой и без нее. Таким образом, в некоторых случаях разрабатывается несколько вариантов деиммунизированных вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, и проверяются различные комбинации тяжелой/легкой цепи для выявления оптимального деиммунизированного антитела. Затем может быть произведен выбор конечного деиммунизированного антитела посредством оценки связывающей аффинности различных вариантов в сочетании со степенью деиммунизации,в частности с количеством потенциальных эпитопов Т-клетки, оставшихся в вариабельной области. Деиммунизация может применяться для изменения любого антитела, например антитела, которое включает последовательность, не являющуюся человеческой, например синтетическое антитело, мышиное антитело, другое моноклональное антитело, не являющееся человеческим, или антитело, выделенное из дисплейной библиотеки. Также могут применяться другие способы гуманизирования антител. Например, другие способы могут учитывать трехмерную структуру антитела, положения каркасной области, которые находятся в пространственной близости от детерминант связывания, и иммуногенные пептидные последовательности. См., например, WO 90/07861; патенты США 5693762; 5693761; 5585089; 5530101 и6407213;Tempest et al. (1991) Biotechnology 9:266-271. Еще один способ называется "humaneering" и описывается,например, в US 2005008625. Антитело может включать Fc-область человека, например Fc-область дикого типа или Fc-область,которая включает одно или несколько изменений. В одном варианте осуществления изменена константная область, например мутирована, для изменения свойств антитела (например, для увеличения или уменьшения одного или нескольких из следующего: связывание с Fc-рецептором, гликозилирование антитела, количество остатков цистеина, действие эффекторной клетки или функционирование комплемента). Например, константная область IgG1 человека может быть мутировавшей в одном или нескольких остатках, например в одном или нескольких из остатков 234 и 237. Антитела могут нести мутации в СН 2 области тяжелой цепи, что уменьшает или изменяет эффекторную функцию, например связывание Fcрецептора и активацию комплемента. Например, антитела могут иметь мутации, такие как те, что описаны в патентах США 5624821 и 5648260. Также антитела могут нести мутации, которые стабилизи- 10018255 руют дисульфидную связь между двумя тяжелыми цепями иммуноглобулина, такие как мутации в шарнирной области IgG4, которые раскрыты в данной области техники (например, Angal et al. (1993) Mol.Immunol. 30:105-08). Также см., например, US 20050037000. Созревание аффинности. В одном воплощении антитело против TWEAK модифицируют, например,посредством мутагенеза для получения пула модифицированных антител. Затем измененные антитела оценивают для выявления одного или нескольких антител, у которых изменились функциональные свойства (например, улучшилось связывание, улучшилась стабильность, уменьшилась антигенность или возросла стабильность in vivo). В одном воплощении применяют технологию дисплейной библиотеки для отбора или скрининга пула модифицированных антител. Затем распознают антитела с более высокой аффинностью из второй библиотеки, например, при применении повышенной точности или более конкурентных условий связывания и промывки. Также могут применяться другие методы скрининга. В некоторых воплощениях мутагенез нацелен на области, о которых известно, что они находятся на границе связывания или это предполагается. Если, например, выявленные связывающие белки являются антителами, тогда мутагенез может быть направлен на CDR-участки тяжелой или легкой цепи, как описано в настоящем изобретении. Кроме того, мутагенез может быть направлен на каркасные области вблизи CDR-участков или рядом с ними, например на каркасные области, в частности в пределах 10, 5,или 3 аминокислот от границы CDR. В случае с антителами мутагенез также может быть ограничен одним или несколькими CDR-участками, например, для получения пошаговых усовершенствований. В одном варианте осуществления мутагенез применяется для получения антитела, более идентичного одной или нескольким последовательностям эмбрионального типа. Один иллюстративный способ,затрагивающий последовательности эмбрионального типа, может включать выявление одной или нескольких последовательностей эмбрионального типа, которые идентичны (например, наиболее идентичны в определенной базе данных) последовательности выделенного антитела. Затем в выделенном антителе могут быть получены мутации (на аминокислотном уровне) либо пошагово, либо комплексно, либо двумя этими способами вместе. Например, создана библиотека нуклеиновой кислоты, которая включает последовательности, кодирующие некоторые или все возможные мутации эмбрионального типа. Затем оцениваются мутантные антитела, например, для выявления антитела, которое имеет один или несколько дополнительных остатков эмбрионального типа, относящихся к выделенному антителу, и которое, тем не менее, является пригодным (например, имеет функциональную активность). В одном воплощении в выделенное антитело введено столько остатков эмбрионального типа, сколько возможно. В одном воплощении мутагенез применяется для замещения или введения одного или нескольких остатков эмбрионального типа в CDR-участок. Например, остаток эмбрионального типа CDR может быть из последовательности эмбрионального типа, которая идентична (например, наиболее идентична) измененной вариабельной области. После мутагенеза активность (например, связывание или другая функциональная активность) антитела может быть оценена для того, чтобы определить, является ли остаток эмбрионального типа или остатки эмбрионального типа допустимыми. Аналогичный мутагенез может быть осуществлен в каркасных областях. Отбор последовательности эмбрионального типа может осуществляться различными способами. Например, последовательность эмбрионального типа может быть выбрана, если она удовлетворяет установленному критерию избирательности или идентичности, например характеризуется, по меньшей мере,некоторой процентной идентичностью, например по меньшей мере 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,97, 98, 99 или 99,5% идентичности по сравнению с донорным антителом, не являющимся человеческим. Выбор может осуществляться при использовании по меньшей мере 2, 3, 5 или 10 последовательностей эмбрионального типа. В случае с CDR1 и CDR2 выявление идентичной последовательности эмбрионального типа может включать выбор одной такой последовательности. В случае с CDR3 выявление идентичной последовательности эмбрионального типа может включать выбор одной такой последовательности, но может включать и две последовательности эмбрионального типа, которые раздельно существуют в N-концевой части и С-концевой части. В других воплощениях используется несколько или две последовательности эмбрионального типа, например, для образования консенсусной последовательности. В прочих вариантах осуществления антитело может быть модифицировано для получения измененного участка гликозилирования (т.е. измененного относительно исходного или природного участка гликозилирования). В этом контексте "измененный" означает имеющий один или несколько исключенных углеводных фрагментов и/или имеющий один или несколько сайтов гликозилирования, добавленных к исходному антителу. Добавление сайтов гликозилирования к раскрываемым в настоящее время антителам может быть достигнуто посредством изменения аминокислотной последовательности на консенсусные последовательности, содержащие сайт гликозилирования; такие технические приемы хорошо известны в данной области. Другие способы увеличения количества углеводных фрагментов в антителе представляют собой химическое или ферментативное слияние гликозидов с аминокислотными остатками антитела. Эти способы описаны, например, в WO 87/05330 и Aplin and Wriston (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 22:259-306. Удаление любых углеводных фрагментов, присутствующих в антителах, может осуществляться химически или ферментативно, как описано в данной области (Hakimuddin et al. (1987) Arch.mol. 138:350). См., например, в патенте США 5869046 модификацию, которая увеличит время полужизни in vivo посредством обеспечения сохранения эпитопа, связывающего рецептор. В одном варианте осуществления антитело имеет последовательности CDR, которые лишь несущественно отличаются от таковых в P2D10. Незначительные различия включают минимальные аминокислотные изменения, такие как замены 1 или 2 аминокислот вне любой из характерных 5-7 аминокислот в последовательности CDR, например CDR Chothia или Rabat. В основном аминокислоту замещают родственной аминокислотой, имеющей одноименный заряд, гидрофобность или стереохимические характеристики. Такие замены будут находиться в пределах компетентности рядовых специалистов в данной области. В отличие от CDR-участков, в структурных каркасных областях (FR) могут быть произведены более значительные изменения без отрицательного воздействия на связывающие свойства антитела. Изменения в FR-областях включают, но не ограничиваются этим, гуманизирование каркасной области,происходящей не от человека, или конструирование определенных остатков каркасной области, которые являются важными для установления связи с антигеном или для стабилизации сайта связывания, например изменение класса или подкласса константной области, изменение специфических аминокислотных остатков, которые могли бы изменять эффекторную функцию, например связывание Fc-рецептора (Lundet al. (1991) J. Immun. 147:2657-62; Morgan et al. (1995) Immunology 86:319-24), или смену видов, от которых происходит константная область. Антитела против TWEAK могут существовать в виде полноразмерных антител или в виде фрагментов антител, например фрагментов Fab, F(ab')2, Fd, dAb и scFv. Дополнительные формы содержат белок,который включает единственный вариабельный домен, например верблюда, или домен, идентичный домену верблюда. См., например, патент США 20050079574 и Davies et al. (1996) Protein Eng. 9(6):531-7. Продукция антитела. Некоторые антитела, например, Fab', можно продуцировать в бактериальных клетках, например в клетках Е. Coli. Также антитела можно получать в эукариотических клетках. В одном варианте осуществления антитела (например, scFv) экспрессируют в дрожжевых клетках, таких какPichia (см., например, Powers et al. (2001) J. Immunol. Methods. 251:123-35), Hanseula или Saccharomyces. В одном предпочтительном воплощении антитела получают в клетках млекопитающих. Иллюстративные клетки-хозяева млекопитающих для экспрессии антитела включают клетки яичника китайского хомячка (клетки СНО) (включая клетки СНО dhfr, описанные у Urlaub и Chasin (1980) Proc. Natl. Acad.NS0 и клетки SP2, клетки COS и клетку трансгенного животного, например трансгенного млекопитающего. Например, клетка представляет собой клетку эпителия молочной железы. В дополнение к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей разнородный иммуноглобулиновый домен, рекомбинантные экспрессионные векторы могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах(например, репликатор) и гены селектируемого маркера. Ген селектируемого маркера облегчает отбор клеток-хозяев, в которые внедрился вектор (см., например, патенты США 4399216; 4634665 и 5179017). Например, обычно ген селектируемого маркера дает клетке-хозяину, в которую внедрился вектор, устойчивость к лекарственным препаратам, таким как G418, гигромицин или метотрексат. В иллюстративной системе экспрессии антитела рекомбинантный зкспрессионный вектор, кодирующий и тяжелую цепь антитела, и легкую цепь антитела, вводят в клетки СНО dhfr посредством трансфекции, опосредованной фосфатом кальция. В рекомбинантном экспрессионном векторе каждый ген тяжелой и легкой цепей антитела функционально связан с энхансерными/промоторными регуляторными элементами (например, происходящими из SV40, CMV, аденовируса и т.п., как, например, энхансерный регуляторный элемент CMV/промоторный регуляторный элемент AdMLP или энхансерный регуляторный элемент SV40/промоторный регуляторный элемент AdMLP) для достижения высоких уровней транскрипции генов. Рекомбинантный экспрессионный вектор также несет ген DHFR, который предусматривает селекцию клеток СНО, которые были трансфицированы вектором, при применении селекции с метотрексатом/амплификации. Отобранные трансформированные клетки-хозяева культивируют для обеспечения экспрессии тяжелой и легкой цепей антитела, и выделяют антитело из культуральной среды. Стандартные молекулярно-биологические технические приемы применяют для получения рекомбинантного экспрессионного вектора, трансфекции клеток-хозяев, селекции трансформантов, культивирования клеток-хозяев и выделения антитела из культуральной среды. Например, некоторые антитела могут быть выделены посредством аффинной хроматографии со связанной матрицей Protein А или Protein G. Система продукции антитела, которое включает Fc-домен, предпочтительно синтезирует антитела,в которых Fc-область гликозилирована. Например, Fc-домен молекул IgG гликозилирован в аспарагине 297 в домене СН 2. Этот аспарагин представляет собой сайт для модификации олигосахаридами биантенного типа. Было продемонстрировано, что это гликозилирование необходимо для эффекторных функций,опосредованных рецепторами Fc и комплементом Clq (Burton and Woof (1992) Adv. Immunol. 51:1-84;Jefferis et al. (1998) Immunol. Rev. 163:59-76). В одном варианте осуществления Fc-домен получают в экспрессионной системе млекопитающих, которая должным образом гликозилирует остаток, соответст- 12018255 вующий аспарагину 297. Fc-домен или другая область антитела также может включать другие эукариотические посттрансляционные изменения. Также антитела можно получать при помощи трансгенного животного. Например, патент США 5849992 описывает способ экспрессии антитела в молочной железе трансгенного млекопитающего. Трансген сконструирован таким образом, что включает специфический для молока промотор и нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело, представляющее интерес, и сигнальную последовательность для секреции. Молоко, вырабатываемое самками таких трансгенных млекопитающих, содержит секретированное антитело, представляющее интерес. Антитело может быть очищено от молока или может быть непосредственно использовано для некоторых случаев применения. Характеристика. Связывающие свойства антитела могут быть определены посредством любого стандартного способа, например, одним из следующих способов: исследование BIACORE, иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA), резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET), рентгеноструктурная кристаллография, исследование последовательности и сканирующий мутагенез. Способность белка подавлять одну или несколько функций TWEAK может быть оценена in vitro или на модели болезни на животном, например болезни, описанной в настоящем изобретении. Предпочтительно, чтобы антитело имело статистически значимое влияние, что служит признаком того, что антитело ингибирует одну или несколько функций TWEAK. В одном варианте осуществления оценивают подавление антителом способности TWEAK стимулировать продукцию IL-8, ММР-1, PGE2, IL-6, IP-10 и RANTES в фибробластах кожи. См. подходящие условия исследования у Chicheportiche et al. (2002) Arthritis Res. 4(2):126-133. В другом варианте осуществления оценивают способность антитела запрещать TWEAK стимулировать пролиферацию клетки эндотелия. См., например, патент США 2003-0211993, который описывает исследование пролиферации (а также другие полезные испытания) следующим образом: HVEC засевают в 96-луночные планшеты для микротитрования при субконфлюэнции (4000 клеток на лунку) и культивируют в течение ночи в среде CS-C без добавления вспомогательных средств роста, предоставляемых поставщиком. Среды заменяют полными средами или минимальными средами. Клетки культивируют в минимальных средах со следующими добавками (либо без них): TWEAK (100 нг/мл), bFGF, используя разведение ростовой добавки bFGF (Clonetics) от 1/500 до 1/1000 или 1 нг/мл (RD системы), VEGF (10 нг/мл) или сочетания этих факторов. Где указано, также добавляют 10 мкг/мл исследуемого антитела или контрольного антитела. Клетки инкубируют при 37 С с 5% СО 2 в течение трех дней, а пролиферацию оценивали посредством импульсного режима с 3 Н-тимидином в течение последних 10 ч культивирования. Задержанная клетками радиоактивность может быть измерена с помощью BETAPLATE (EGGTWEAK и bFGF, может означать, что антитело является эффективным при блокировании активностиTWEAK. Поверхностный плазменный резонанс (ППР). Связывающее взаимодействие белка, представляющего интерес, и мишени (например, TWEAK) может быть исследовано при использовании ППР. ППР или исследование биомолекулярного взаимодействия (BIA) обнаруживает биоспецифические взаимодействия в реальном времени без мечения любого из участников взаимодействия. Изменения массы на связывающей поверхности (указывающие на явление связывания) BIA-чипа приводят к изменениям показателя преломления света вблизи поверхности(оптический эффект поверхностного плазмонного резонанса (ППР. Изменения преломляющей способности генерируют детектируемый сигнал, который оценивают как указание на взаимодействия в реальном времени между биологическими молекулами. Способы применения ППР описываются, например, в патенте США 5641640; Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky(1991) Anal. Chem. 63:2338-2345; Szabo et al. (1995) Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705 и в онлайнресурсах, предоставляемых BIAcore International AB (Uppsala, Sweden). Данные ППР могут использоваться для обеспечения точного и количественного измерения равновесной константы диссоциации (Kd) и кинетических параметров, включая Kon и Koff, для связывания биомолекулы с мишенью. Также можно напрямую картировать эпитопы посредством оценки способности различных антител конкурировать друг с другом за связывание с TWEAK (например, с TWEAK человека, в частности с растворимым TWEAK человека), применяя хроматографические методы BIAcore (Pharmacia BIAtechnologyHandbook, "Epitope Mapping", Section 6.3.2, (May 1994); также см. Johne et al. (1993) J. Immunol. Methods,160:191-198). Дополнительное основное руководство для оценки антител, например, по вестерн-блотам и исследованиям иммунопреципитации, можно найти в Antibodies: A Laboratory Manual, под редакциейHarlow и Lane, Cold Spring Harbor press (1988. Заболевания, связанные с TWEAK. Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения ряда заболеваний, например заболевания, связанного с TWEAK. Например, антитело может применяться для лечения воспалительных, иммунных или аутоиммунных заболеваний, а также новообразований у пациентов. Примеры воспалительных заболеваний, связанных с TWEAK, включают ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит, воспалительные заболевания кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), псориаз или воспалительный миозит. Кроме того, другие примеры воспалительных заболеваний, которые можно лечить, включают гистиоцитоз клеток Лангерганса, синдром расстройства дыхания у взрослых/облитерирующий бронхиолит, грануломатоз Вегенера, васкулит, кахексию, стоматит, идиопатический гемосидероз легких, дерматомиозит или полимиозит, неинфекционный склерит, хронический саркоидоз с поражением легких, миелодиспластические синдромы/рефрактерную анемию с избыточными эритробластами, язвенный колит, хроническое обструктивное заболевание легких, от среднего до сильного, и гигантоклеточный артериит. Субъекту, который может быть подвержен возникновению этих заболеваний, у которого диагностировано такое заболевание или у которого имеется одно из этих заболеваний, может вводиться антитело против TWEAK в количестве и в течение времени, обеспечивающих общий терапевтический эффект. Антитело против TWEAK может вводиться само по себе или в сочетании с другими веществами. Например, USSN 60/679518 описывает способы введения блокирующего TWEAK вещества в сочетании с веществом, блокирующим TNF-. В случае комбинированной терапии количество и время введения могут быть такими, которые обеспечивают, например, взаимно усиливающийся терапевтический эффект. Более того, введение вещества, блокирующего TWEAK (со вторым веществом или без него), может применяться в качестве первичного лечения, например, терапии первой линии, или в качестве вторичного лечения,например, для субъектов, которые имеют несоответствующий ответ на предшествующее лечение (т.е. на терапию, отличную от терапии с веществом, блокирующим TWEAK). Ревматоидный артрит (РА). Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения ревматоидного артрита и родственных заболеваний. Ревматоидный артрит (РА) - это хроническое воспалительное заболевание, которое вызывает боль, опухание, неподвижность и потерю функции, в первую очередь, в суставах. Часто РА начинается в синовиальной оболочке, мембране, которая окружает сустав, создавая защитный мешочек. У многих индивидуумов, страдающих РА, лейкоциты инфильтрируют из кровотока в синовиальную оболочку, вызывая постоянное нетипичное воспаление(например, синовит). Вследствие этого синовиальная оболочка воспаляется, вызывая нагревание, покраснение, опухание и боль. Коллаген в хряще постепенно разрушается, сужая суставную щель и, в конечном итоге, повреждая кость. Воспаление вызывает эрозийное повреждение кости в пораженной зоне. Во время этого процесса клетки синовиальной оболочки растут и делятся абнормально, делая в обычных условиях тонкую синовиальную оболочку толстой и давая в результате сустав, опухший и отекший на ощупь. По мере того как РА прогрессирует, абнормальные синовиальные клетки могут захватывать и разрушать хрящ и кость в суставе. Окружающая мускулатура, связки и сухожилия, которые поддерживают и стабилизируют сустав, могут стать слабыми и неспособными нормально функционировать. Также РА может вызывать более генерализованную потерю костной массы, что может привести к остеопорозу,делая кости хрупкими и более склонными к переломам. Все эти эффекты вызывают боль, нарушение и деформации, связанные с РА. Участки, которые могут быть поражены, включают запястья, суставы пальцев, колени и подъем свода стопы. Часто могут быть вовлечены многие суставы, и даже может быть поражен позвоночник. Примерно у 25% людей с РА воспаление небольших кровеносных сосудов может служить источником ревматоидных узелков, или вздутий под кожей, которые часто образуются близко к суставам. Также по мере того как заболевание прогрессирует, может накапливаться жидкость, в частности, в лодыжках. Также у многих пациентов с РА развивается анемия, или снижение нормального количества красных кровяных телец. РА включает ряд подтипов болезни, таких как синдром Фелти, серонегативный РА, "классический" РА, прогрессирующий и/или рецидивирующий РА и РА с васкулитом. Некоторые специалисты делят данное заболевание на тип 1 или тип 2. Тип 1, малораспространенная форма, чаще всего длится несколько месяцев и не дает стойкой нетрудоспособности. Тип 2 является хроническим и длится в течение многих лет, иногда всю жизнь. Также РА может проявиться в виде подкожных ревматоидных узелков, висцеральных узелков, васкулита, вызывающего изъязвление ног или множественный мононеврит, в виде плеврального или перикардиального выпота, лимфаденопатии, синдрома Фелти, синдрома Шегрена и эписклерита. Эти подтипы болезни, а также субъекты, у которых проявляется один или несколько из вышеприведенных симптомов, могут быть пролечены при применении антител, описанных в настоящем изобретении. РА может оцениваться с помощью ряда клинических показателей. Некоторые иллюстративные признаки включают критерий Шарпа (TSS), критерий изъязвления Шарпа и индекс нетрудоспособностиHAQ. Описанные здесь способы могут применяться для достижения улучшения по меньшей мере по одному из этих показателей. Терапевтические свойства антитела против TWEAK для лечения РА могут быть оценены на модели животного, например, используя мышиную модель артрита, индуцируемого коллагеном (mCIA) (см., например, Stuart et al., J. Clin. Invest. 69:673-683 (1982). Рассеянный склероз. Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения рассеянного склероза (PC) и родственных заболеваний. PC - это заболевание центральной нервной системы, которое характеризуется воспалением и утратой миелиновых оболочек. Больных с PC можно распознавать с помощью критериев, оценивающих диагноз клинически определенного PC, как определено на симпозиуме по диагностике PC (Poser et al., Ann. Neurol. (1983) 13:227). Кратко, индивидуум с клиническими признаками PC имел два приступа болезни и клинические признаки либо двух патологических изменений, либо клинические признаки одного патологического изменения и параклинические признаки другого, отдельного патологического изменения. Также окончательный PC может быть диагностирован ввиду признаков двух приступов и олигоклональных бэндов IgG в спинномозговой жидкости или при сочетании приступа, клинических признаков двух патологических изменений и олигоклонального бэнда IgG в спинномозговой жидкости. Эффективное лечение рассеянного склероза может исследоваться несколькими различными способами. Следующие параметры могут применяться для оценки эффективности лечения. Используют три основных критерия: EDSS (расширенную шкалу нетрудоспособности), проявление обострения болезни или МРТ (магнитно-резонансную томографию). EDSS представляет собой средство для классификации клинического расстройства, вызванного PC (Kurtzke (1983) Neurology 33:1444). Оцениваются восемь функциональных систем по типу и тяжести неврологического расстройства. Кратко, перед лечением у больных оценивается расстройство в следующих системах: пирамидальная, мозжечковая, ствол мозга,сенсорная, пищеварительный тракт и мочевой пузырь, зрительная, черепно-мозговая и прочие. Последующие исследования проводятся через определенные интервалы. Шкала колеблется в пределах от 0(норма) до 10 (гибель вследствие PC). Снижение EDSS указывает на эффективное лечение (Kurtzke(1994) Ann. Neurol. 36:573-79). Иллюстративной моделью рассеянного склероза на животном является модель экспериментального аутоиммунного энцефалита (ЕАЕ) у мыши, например, как описано у Tuohy et al. (J. Immunol. (1988) 141: 1126-1130), Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401) и Traugott (Cell Immunol. (1989) 119: 114-129). Мышам может вводиться антитело, описанное в настоящем изобретении, перед индуцированием ЕАЕ. У мышей оцениваются характеристические критерии для определения эффективности антитела. Инсульт. Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения субъекта, который перенес инсульт, например, тромбоэмболический или геморрагический инсульт (например, за последние 48, 24, 12, 8 или 2 ч), или для предупреждения инсульта, например, у субъекта с повышенным риском развития инсульта. Иллюстративные способы описаны в USSN 60/653811. Инсульт - это общий термин для острого мозгового нарушения, происходящего в результате поражения кровеносных сосудов. Инсульт можно классифицировать по меньшей мере по двум основным категориям: геморрагический инсульт (обусловленный просачиванием крови за пределы нормальных кровеносных сосудов) и ишемический инсульт (ишемия головного мозга вследствие недостатка кровоснабжения). Некоторые события, которые могут вызывать ишемический инсульт, включают тромбоз,эмболию и системную недостаточную перфузию (с вытекающей ишемией и гипоксией). Обычно инсульт вызывает гибель нейронов и поражение мозга вследствие кислородного голодания и вторичных осложнений. Зону мозга, которая погибает в результате недостатка кровоснабжения или другого повреждения, называют инфарктом. В некоторых случаях лечение, описанное в настоящем изобретении, может применяться для уменьшения или сведения к минимуму размера инфаркта, например,посредством уменьшения вторичных осложнений, которые вызывают гибель нейронов или поражение. Закупорка мозговой артерии, обусловленная тромбом, который нарос на стенке мозговой артерии,обычно называется тромбозом сосудов головного мозга. При церебральной эмболии преграждающее вещество, закупоривающее мозговую артерию, появляется в кровотоке ниже (например, эмбол переносится в мозговую артерию из сердца). Поскольку сложно различить, вызван ли инсульт тромбозом или эмболией, применяется термин тромбоэмболия, чтобы перекрыть оба эти типа инсульта. Системная недостаточная перфузия может возникать как следствие сниженных уровней крови, пониженного гематокрита, низкого кровяного давления или неспособности сердца хорошо перекачивать кровь. Более того, антитело против TWEAK может назначаться в качестве профилактической терапии инсульта или как ее компонент, например, субъекту, который перенес транзиторную ишемическую атаку(ТИА) или у которого проявляются симптомы ТИА. Неврональные нарушения. Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения или предупреждения неврональных нарушений, таких как механические неврональные травмы и нейродегенеративные заболевания. Примеры механических неврональных травм включают повреждение спинного мозга (ПСМ) и черепно-мозговую травму (ЧМТ). Примеры нейродегенеративных нарушений включают боковой амиотрофический склероз (БАС), прогрессирующий бульбарный паралич(ПБП), первичный латеральный склероз (ПЛС), прогрессирующую мышечную атрофию (ПМА), болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона (БХ) и болезнь Альцгеймера. См., например, USSN 60/653813. В од- 15018255 ном варианте осуществления неврональное нарушение характеризуется, прежде всего, разрушением или гибелью нервных клеток, например двигательных нейронов (например, ПЛС), стриарных нейронов базального ганглия и/или кортикальных нейронов (например, болезнь Хантингтона), нейронов черной субстанции (например, болезнь Паркинсона). Рак TWEAK и его рецепторы могут быть вовлечены в развитие, по меньшей мере, нескольких типов рака, например рака поджелудочной железы. Антитело противTWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения или предупреждения злокачественных опухолей (например, аденокарцином) и других неопластических нарушений. См., например, "TREATMENT OF CANCER", USSN 60/685465, поданный 27 мая 2005 г. Фармацевтические композиции. Антитело против TWEAK (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может быть разработано в виде фармацевтической композиции для введения субъекту, например, для лечения заболевания, описанного в настоящем изобретении. Обычно фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель. В данном изобретении "фармацевтически приемлемый носитель" включает любые и все растворители, дисперсионные среды, оболочки, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и пролонгирующие всасывание вещества и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Композиция может включать фармацевтически приемлемую соль, например соль присоединения кислоты или соль присоединения основания (см., например, Berge, S.M., et al.(1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19). Фармацевтическое приготовление смеси представляет собой общепринятую область техники и, более того, описано, например, у Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed.,Lippincott, WilliamsWilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and(ISBN: 091733096X). Фармацевтические композиции могут существовать в разнообразных формах. Они включают, например, жидкую, полутвердую и твердую лекарственные формы, такие как жидкие растворы (например,инъецируемый и инфузионные растворы), дисперсии или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, липосомы и суппозитории. Предпочтительная форма может зависеть от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. Обычно композиции веществ, описанных в настоящем изобретении, находятся в форме инъецируемого или инфузионного раствора. В одном варианте осуществления рецептура антитела против TWEAK разработана со средами для лекарства, такими как хлорид натрия, вторичный кислый фосфат гептагидрат натрия, первичный кислый фосфат натрия, и со стабилизатором. Оно может быть предоставлено, например, в буферном растворе с подходящей концентрацией и может храниться при 2-8 С. Такие композиции могут вводиться парентеральным способом (например, посредством внутривенной, подкожной, внутрибрюшинной или внутримышечной инъекции). Используемые здесь словосочетания "парентеральное введение" и "введенный парентерально" подразумевают способы введения, отличные от энтерального и местного введения, обычно - инъекцией, и включают, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и надчревную инъекцию и инфузию. Композиция может быть приготовлена в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, пригодной для стабильного хранения при высокой концентрации. Стерильные инъецируемые растворы могут быть получены посредством включения агента, описанного в настоящем изобретении, в требуемом количестве в соответствующий растворитель с одним ингредиентом или с комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, в соответствии с требованиями, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии готовят посредством внесения агента,описанного в настоящем изобретении, в стерильное средство доставки, которое содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и лиофильная сушка, которые дают агент, описанный в настоящем изобретении, в виде порошка плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора,предварительно простерилизованного фильтрованием. Характерная текучесть раствора может поддерживаться, например, посредством применения оболочки, такой как лецитин, посредством поддержания требуемого размера частицы в случае дисперсии и посредством применения поверхностно-активных веществ. Пролонгированное всасывание инъецируемых композиций может достигаться посредством включения в композицию агента, который замедляет всасывание, например, моностеаратов и желатина. В некоторых вариантах осуществлении антитело против TWEAK может быть приготовлено с носителем, который защитит соединение от быстрого высвобождения, например композиция с контролируемым высвобождением, включая импланты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут применяться биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды,- 16018255 полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы приготовления таких композиций запатентованы или общеизвестны. См., например, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978). Антитело против TWEAK может быть модифицировано, например, при использовании фрагмента,который улучшает его стабилизацию и/или удержание в круговороте, например в крови, сыворотке или других тканях, например, по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10 или 50 раз. Модифицированное антитело может быть оценено, чтобы определить, может ли оно достигать мест воспаления, например суставов. Например, антитело против TWEAK может быть связано (например, конъюгировано) с полимером,например, по существу, с неантигенным полимером, таким как полиалкиленоксид или полиэтиленоксид. Подходящие полимеры будут в значительной степени варьировать по весу. Могут использоваться полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, колеблющуюся примерно от 200 до 35000 Да (или примерно от 1000 до 15000 и примерно от 2000 до 12500). Например, антитело против TWEAK может быть конъюгировано с водорастворимым полимером,например, с гидрофильным поливиниловым полимером, например, с поливиниловым спиртом или поливинилпирролидоном. Примеры таких полимеров включают гомополимеры полиалкиленоксида, такие как полиэтиленгликоль (PEG) или полипропиленгликоль, полиоксиэтилированные многоатомные спирты, их сополимеры и их блок-сополимеры, при условии, что поддерживается растворимость блок-сополимеров в воде. Дополнительные пригодные полимеры включают полиоксиалкилены, такие как полиоксиэтилен,полиоксипропилен и блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена; полиметакрилаты; карбомеры и разветвленные или неразветвленные полисахариды. В некоторых воплощениях антитело против TWEAK также может быть соединено или иным образом связано с меткой или другим веществом, например с еще одним терапевтическим веществом, таким как цитотоксическое или цитостатическое вещество, хотя во многих воплощениях эта компоновка является излишней. Примеры цитотоксических и химиотерапевтических веществ включают таксол, цитохалазин В, грамицидин D, винбластин, доксорубицин, даунорубицин, майтансиноид (например, майтансинол или майтансиноид DM1, производное майтансина, содержащее сульфгидрильную группу), митоксантрон, митрамицин, актиномицин D, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, таксан, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи. Если антитело против TWEAK используется в сочетании со вторым агентом (например, с антителом против TNF- или другим агентом), два компонента могут быть рецептированы раздельно или совместно. Компоненты могут рецептироваться или использоваться иным образом во взаимно усиливающем эффективном количестве. Также возможно использовать один компонент или оба в количествах,меньших, чем использовалось бы при монотерапии. Например, соответствующие фармацевтические композиции могут смешиваться, например, непосредственно перед введением и вводиться совместно или могут вводиться раздельно, например, в одно и то же время или в разное время. Также можно применять другие агенты, блокирующие TWEAK, например агенты, описанные вUSSN 60/679518. Агент может быть соединением любого типа (например, малой органической или неорганической молекулой, нуклеиновой кислотой, белком или пептидом-миметиком), которое может назначаться субъекту. В одном варианте осуществления блокирующий агент представляет собой биопрепарат,например белок, имеющий молекулярную массу между 5 и 300 кДа. Например, агент, блокирующийTWEAK, может ингибировать связывание TWEAK с рецептором TWEAK. Иллюстративные блокирующие TWEAK агенты, отличные от антител, которые связываются с(например, Fn14), которые конкурируют с TWEAK-R на поверхности клетки за связывание с TWEAK. Прочие терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, также могут предоставляться в виде фармацевтической композиции, например, посредством стандартных способов или способа, описанного в настоящем изобретении. Введение. Антитело против TWEAK может вводиться субъекту, например человеку, посредством ряда способов. Для большинства случаев применения путь введения представляет собой один из следующих: внутривенная инъекция или инфузия (IV), подкожная инъекция (SC), внутрибрюшинно (IP) или внутримышечная инъекция. Также можно использовать внутрисуставную доставку. Также могут использоваться другие пути парентерального введения. Примеры таких путей включают внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, транстрахеальную,подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и эпидуральную и надчревную инъекцию. В некоторых случаях введение может осуществляться непосредственно в участок воспаления, например сустав, или в другое воспаленное место. Путь и/или способ введения антитела также может быть специально приспособлен к частному случаю, например, посредством наблюдения субъекта, например, используя томографию, неврологическое исследование и стандартные параметры, связанные с конкретным заболеванием, например критерии для оценки ревматоидного артрита. Антитело может назначаться в виде фиксированной дозы или в виде дозы мг/кг. Также доза может быть выбрана, чтобы уменьшить или прекратить продукцию антител к антителу против TWEAK. Режимы дозирования приспособлены для обеспечения желаемого ответа, например терапевтического ответа или комбинационного терапевтического эффекта. Как правило, дозы антитела против TWEAK (и необязательно - второго агента) могут применяться для того, чтобы обеспечить субъекта веществом в биодоступных количествах. Например, могут назначаться дозы в пределах 0,1-100, 0,5-100, 1-100, 0,5-20, 0,1-10 или 1-10 мг/кг. Также могут использоваться другие дозы. В настоящем изобретении единица лекарственной формы или "фиксированная доза" относится к физически дискретным единицам, соответствующим однократным дозировкам для пролечиваемых субъектов; каждая единица содержит установленное количество активного соединения, рассчитанного, чтобы давать желаемый терапевтический эффект совместно с требуемым фармацевтическим носителем и необязательно совместно с другим агентом. Могут назначаться однократные или многократные дозировки. В качестве альтернативы или дополнительно может вводиться антитело посредством длительной инфузии. Доза антитела против TWEAK может вводиться, например, с периодическим интервалом на протяжении времени (курса лечения), достаточного для включения по меньшей мере 2, 3, 5, 10 доз или более,например однократно или двукратно ежедневно, или примерно от одного до четырех раз в неделю или предпочтительно раз в неделю, раз в две недели, раз в месяц, например в течение от 1 до 12 недель,предпочтительно от 2 до 8 недель, более предпочтительно примерно от 3 до 7 недель и даже более предпочтительно в течение примерно 4, 5 или 6 недель. Факторы, которые могут влиять на дозировку и распределение во времени, необходимые для эффективного лечения субъекта, включают, например, тяжесть заболевания или нарушения, композицию, путь доставки, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие имеющиеся заболевания. Кроме того, лечение субъекта терапевтически эффективным количеством соединения может включать однократную терапию или предпочтительно может включать серийную терапию. Также могут использоваться модели на животных для определения пригодной дозы, например начальной дозы или режима. Если субъект подвержен развитию воспаления или другого заболевания, описанного в настоящем изобретении, антитело может назначаться прежде полного проявления данной болезни, например, в качестве предупредительной меры. Такое предупредительное лечение может представлять собой однократную дозировку антитела, или лечение может продолжиться (например, многократные дозировки). Например, субъект с повышенным риском заболевания или тот, кто имеет предрасположенность к заболеванию, может лечиться антителом в течение дней, недель, месяцев или даже лет с тем, чтобы предупредить проявление или бурное протекание болезни. Фармацевтическая композиция может включать "терапевтически эффективное количество" компонента, описанного в настоящем изобретении. Такие эффективные количества могут быть определены,исходя из эффекта введенного компонента или комбинационного эффекта компонентов при использовании нескольких веществ. Терапевтически эффективное количество вещества также может варьировать согласно показателям, таким как болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума, и согласно способности соединения вызывать желаемый ответ у индивидуума, например улучшение по меньшей мере одного параметра болезни или улучшение по меньшей мере одного симптома болезни. Терапевтически эффективное количество также является тем параметром, при котором любые токсические или неблагоприятные эффекты данной композиции перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами. Оборудование и наборы для терапии. Фармацевтические композиции, которые включают антитело против TWEAK, могут вводиться при использовании медицинского оборудования. Оборудование может разрабатываться с характеристиками,такими как портативность, хранение при комнатной температуре и удобство применения, с тем, чтобы его можно было применять в экстремальных ситуациях, например, необученному человеку или персоналу службы экстренной помощи в полевых условиях, вдали от медицинских приспособлений и другого медицинского оборудования. Оборудование может включать, например, одно или несколько хранилищ для хранения фармацевтических препаратов, которые содержат антитело против TWEAK, и может быть скомпоновано для доставки одной или нескольких доз антитела. Более того, оборудование может быть скомпоновано для введения второго компонента, например антитела против TNF-, либо в виде единой фармацевтической композиции, которая дополнительно включает антитело против TWEAK, либо в виде двух отдельных фармацевтических композиций. Например, фармацевтическая композиция может вводиться безыгольным подкожным инъектором,таким как устройства, раскрытые в патентах США 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556. Примеры хорошо известных имплантов и модулей включают: патент США 4487603, который раскрывает вживляемый микроинфузионный насос для дозирования лекарственного средства с контролируемой скоростью; патент США 4486194, который раскрывает терапевтическое устройство для введения медикаментов через кожу; патент США 4447233, который раскрывает инфузионный насос для лекарственного средства для доставки лекарства с точной скоростью инфузии; патент США 4447224, который раскрывает регулируемый вживляемый инфузионный аппарат для непрерывной доставки лекарственного препарата; патент США 4439196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарственного препарата, имеющую многокамерные отделения; и патент США 4475196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарственного препарата. Также известно множество других устройств, имплантов, систем доставки и модулей. Антитело против TWEAK может предоставляться в наборе. В одном варианте осуществления данный набор включает (а) контейнер, который содержит композицию, которая включает антитело противTWEAK, и, необязательно, (b) информационный материал. Информационный материал может быть описательным, инструктивным, маркетинговым или другим материалом, который имеет отношение к способам, описанным в настоящем изобретении, и/или к применению агентов для терапевтического благоприятного воздействия. В одном воплощении данный набор также включает второй агент для лечения воспалительного заболевания, например антитело против TNF-. Например, набор включает первый контейнер, который содержит композицию, которая включает антитело против TWEAK, и второй контейнер, который включает второй агент. Информационный материал наборов не ограничен по своей форме. В одном варианте осуществления информационный материал может включать информацию о получении данного соединения, молекулярной массе соединения, концентрации, конечном сроке действия, партии, или информацию о месте производства и так далее. В одном воплощении информационный материал затрагивает способы введения антитела против TWEAK, например, в подходящей дозе, лекарственной форме, или режим введения(например, дозу, лекарственную форму или способ введения, описанный в настоящем изобретении) для лечения субъекта, который подвергался или подвергается возникновению воспалительного или другого заболевания, описанного в настоящем изобретении. Информация может предоставляться в различных форматах, содержать печатный текст, считываемый компьютером материал, видеозапись или аудиозапись или информацию, которая предоставляет ссылку или адрес на основной материал, например, в Интернете. Кроме антитела композиция в наборе может содержать другие ингредиенты, такие как растворитель или буфер, стабилизатор или консервант. Антитело может предоставляться в любом виде, например, в жидком, высушенном или лиофилизированном виде, предпочтительно в значительной степени чистом и/или стерильном. Если компоненты представлены в жидком растворе, жидкий раствор предпочтительно является водным раствором. Если компоненты представлены в сухом виде, восстановление, как правило,осуществляется посредством добавления подходящего растворителя. Растворитель, например, стерильная вода или буфер, может необязательно предоставляться в наборе. Набор может содержать один или несколько контейнеров для композиции или композиций, включающих реагенты. В некоторых вариантах осуществления данный набор включает раздельные контейнеры, разделители или отделения для композиции и информационный материал. Например, композиция может находиться в бутыли, флаконе или шприце, и информационный материал может находиться в пластиковом чехле или пакете. В других вариантах осуществления отдельные части набора находятся внутри одного неразделенного контейнера. Например, композиция находится в бутыли, флаконе или шприце, к которому прикреплен информационный материал в виде наклейки. В некоторых воплощениях набор включает множество (например, группу) одиночных контейнеров, каждый из которых содержит одну или несколько единиц лекарственных форм (например, лекарственную форму, описанную в настоящем изобретении) активных компонентов. Контейнеры могут включать комбинированную единицу дозировки, например единицу, которая включает и антитело против TWEAK, и второй компонент, например, в желаемом соотношении. Например, набор включает множество шприцов, ампул, пакетов из фольги, блистерных упаковок или медицинских приборов, каждый из которых, например, содержит отдельную комбинированную единицу дозы. Контейнеры из наборов могут быть герметичными, влагостойкими (например, непроницаемые для изменений во влажности или испарения) и/или светонепроницаемыми. Необязательно набор включает устройство, пригодное для введения композиции, например шприц или другое подходящее устройство доставки. Устройство может предоставляться предварительно наполненным одним или обоими агентами или может быть пустым, но подходящим для наполнения. Нацеливание на клетки, экспрессируюцщие TWEAK. Антитела против TWEAK, описанные в настоящем изобретении, могут применяться для целевой доставки полезного груза к клетке, экспрессирующей TWEAK, или к ткани, или другой структуре, связанной с TWEAK. Например, антитела могут быть прикреплены к вирусу или вирусоподобной частице,которые доставляют экзогенный ген (например, для генной терапии), или к липосоме, например, к липосоме, которая обволакивает терапевтический агент или экзогенный ген. Иллюстративный способ применения антитела для выявления вируса описан у Roux et al. (1989) Proc Natl Acad Sci USA (1989) 86:90799083. См. также, например, Curr Gene Ther. (2005) 5:63-70 и Hum Gene Ther. (2004) 15:1034-1044. Также антитела против TWEAK согласно данному изобретению могут быть прикреплены к липосомам, содержащим терапевтический агент, например химиотерапевтические агенты. Прикрепление антител к липосомам может быть осуществлено при помощи любых известных перекрестно-сшивающих агентов, таких как гетеробифункциональные перекрестно-сшивающие агенты, которые широко использовались для соединения токсинов или химиотерапевтических агентов с антителами для адресной доставки. Например, конъюгирование с липосомами может осуществляться при применении ориентированного на углевод перекрестно-сшивающего реагента гидразида 4-(4-малеимидофенил)масляной кислоты(МРВН) (Duzgunes et al. (1992) J. Cell. Biochem. Abst. Suppl. 16E 77). Также липосомы, содержащие антитела, могут быть получены посредством хорошо известных способов (см., например, DE 3218121; Epsteinet al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688-92; Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:403034; патенты США 4485045 и 4544545). Диагностическое применение. Антитела против TWEAK могут применяться в диагностическом методе для обнаружения присутствия TWEAK in vitro (например, в биологическом образце, таком как ткань, биопсия) или in vivo (например, у субъекта при визуализации in vivo). Например, человеческие или фактически человеческие антитела против TWEAK могут вводиться субъекту для обнаружения TWEAK у самого субъекта. Например, антитело может быть маркировано, например, детектируемой меткой для МРТ или радиометкой. Может быть проведена оценка субъекта при применении средств для обнаружения детектируемой метки. Например, субъекту может быть проведено сканирование, чтобы определить локализацию антитела у самого субъекта. Например, получают изображение для субъекта посредством ЯМР или других томографических способов. Примеры меток, пригодных для диагностической визуализации, включают радиометки, такие как 131 111I, In, 123I, 99mTc, 32 Р, 33 Р, 125I, 3 Н, 14 С и 188Rh, флуоресцентные метки, такие как флуоресцеин и родамин, активные метки для ядерного магнитного резонанса, позитронно-активные изотопы, обнаруживаемые при помощи сканера для позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), хемилюминофоры, такие как люциферин, и ферментативные маркеры, такие как пероксидаза или фосфатаза. Также могут применяться генераторы излучения короткопробежных частиц, таких как изотопы, детектируемые посредством короткобежных детекторных зондов. Белковый лиганд может быть мечен такими реагентами при применении известных технических приемов. Например, см. технические приемы, относящиеся к мечению антител радиоактивными изотопами, у Wensel и Meares (1983) Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York и Colcher et al. (1986) Meth. Enzymol. 121: 802-816. Для субъекта может быть "получено изображение" in vivo при применении известных способов, таких как радиоизотопное сканирование с использованием, например, гамма-камеры или эмиссионной томографии. См., например, A.R. Bradwell et al., "Developments in Antibody Imaging", Monoclonal Antibodiesfor Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al., (eds.), pp 65-85 (Academic Press 1985). В ином случае может применяться сканер для позитронной эмиссионной поперечной томографии, такой как разработанный Pet VI, расположенный в Brookhaven National Laboratory, в котором радиометка испускает позитроны (например, 11 С, 18F, 15O и 13N). Контрастные вещества для МРТ. Магнитно-резонансная томография (МРТ) использует ЯМР для визуализации характеристик внутренних органов живого субъекта, и она пригодна для прогноза, диагностики, лечения и хирургии. МРТ может применяться без соединений, содержащих радиоактивную метку, по причине видимой выгоды. Некоторые технические приемы для МРТ резюмированы в ЕРО 502814 А. Как правило, для получения изображения используют различия, затрагивающие константы времени релаксации Т 1 и Т 2 протонов воды при различных условиях. Однако эти различия могут быть недостаточными для обеспечения контрастных изображений с высоким разрешением. Различия в этих константах времени релаксации могут быть увеличены посредством контрастных веществ. Примеры таких контрастных веществ включают целый ряд магнитоактивных агентов, парамагнитных агентов (которые главным образом изменяют Т 1) и ферромагнитных или суперпарамагнитных агентов (которые главным образом изменяют Т 2-ответ). Хелаты (например, хелаты EDTA, DTPA и NTA) могут применяться для присоединения (и снижения токсичности) некоторых парамагнитных субстанций(например, Fe3+, Mn2+, Gd3+). Другие агенты могут существовать в виде частиц с диаметром, например,менее чем от 10 мкм до 10 нм. Частицы могут иметь ферромагнитные, антиферромагнитные или суперпарамагнитные свойства. Частицы могут включать, например, магнетит (Fe3O4), -Fe2O3, ферриты и прочие магнитоактивные минеральные соединения переходных элементов. Магнитные частицы могут содержать один или несколько магнитных кристаллов с немагнитным веществом и без него. Немагнитное вещество может содержать синтетические или природные полимеры (такие как сефароза, декстран, декстрин, крахмал и т.п.). Также антитела против TWEAK могут быть помечены индикаторной группой, содержащей ЯМРактивный атом 19F или множество таких атомов, так как (i) в основном все распространенные в природе атомы фтора представляют собой изотоп 19F и, таким образом, в основном все фторсодержащие соединения являются ЯМР-активными; (ii) многие химически активные полифторированные соединения, такие как трифторуксусный ангидрид, доступны коммерчески по относительно низкой цене, и (iii) было обнаружено, что многие фторированные соединения приемлемы, с медицинской точки зрения, для применения у людей, например, перфторированные полиэфиры, используемые для доставки кислорода при заме- 20018255 не гемоглобина. После выдерживания определенного времени для инкубации осуществляют общую МРТ, используя прибор, такой как один из описанных у Pykett (1982) Scientific American, 246:78-88 для обнаружения и визуализации распределения TWEAK. В еще одном аспекте изобретение представляет способ обнаружения присутствия TWEAK в образце in vitro (например, в биологическом образце, таком как сыворотка, плазма, ткань, биопсия). Способ может применяться для диагностирования заболевания, например заболевания, связанного с иммунной клеткой. Способ включает (l) контактирование образца или контрольного образца с антителом противTWEAK и (ii) оценку присутствия TWEAK в образце, например, посредством обнаружения образования комплекса между антителом против TWEAK и TWEAK или посредством обнаружения присутствия антитела или TWEAK. Например, антитело может быть иммобилизовано, например, на подложке, и детектируется удержание антигена на подложке и/или наоборот. Может участвовать контрольный образец. Статистически значимое изменение при образовании комплекса в образце при сравнении с контрольным образцом может служить признаком присутствия TWEAK в образце. Как правило, антитело противTWEAK может использоваться для прикладных задач, которые включают флуоресцентную поляризацию, микроскопию, ELISA, центрифугирование, хроматографию и клеточный сортинг (например, клеточный сортинг с активацией флуоресценции). Пример 1. Последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного P2D10 с подчеркнутыми CDRучастками представляет собой следующее: Это вариабельный домен тяжелой цепи мышиной подгруппы 3D. Последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного P2D10 с подчеркнутыми CDRучастками представляет собой следующее: Это -область легкой цепи мышиной подгруппы 2. Следующие акцепторные каркасные области человека были выбраны для huP2D10: вариабельный домен тяжелой цепи человека, подгруппа 3, 56-84m (регистрационный номер в базе данных NCBI Последовательность вариабельного домена легкой цепи человека подгруппы 2, K107 (регистрационный номер в базе данных NCBI GI:21669075, Akahori et al., непосредственное рассмотрение) с подчеркнутыми CDR-участками представляет собой следующее: В показанных акцепторных последовательностях человека CDR-участки (которые подчеркнуты) той же самой длины и канонических классов, что и таковые в вариабельных доменах muP2D10. Ниже показано выравнивание мышиного P2D10 (верхняя часть) и человеческих акцепторных, 5684m (нижняя часть) вариабельных доменов тяжелой цепи (68,8% сходства): Ниже показано выравнивание мышиного P2D10 (верхняя часть) и человеческих акцепторных K107(нижняя часть, вариабельных доменов легкой цепи, (75,9% сходства): Существует два варианта легкой цепи huP2D10 (L1 и L2). Антитело huP2D10-1 относится к антителу, которое включает H1 из huP2D10 и L1 из huP2D10. Антитело huP2D10-2 относится к антителу, которое включает H1 из huP2D10 и L2 из huP2D10. Ниже показано выравнивание человеческого акцептора, 56-84m (верхняя часть) и вариабельного домена тяжелой цепи H1 из huP2D10 (нижняя часть):CDR-участки подчеркнуты. Тяжелая цепь huP2D10 представляет собой прямой перенос CDR (т.е. в каркасной области нет обратных мутаций). Ниже показано выравнивание человеческого акцептора , K107 (верхняя часть) и вариабельного домена легкой цепи L1 из huP2D10 (нижняя часть):CDR-участки подчеркнуты. Легкая цепь L1 из huP2D10 имеет две обратные мутации, которые отмечены строчными буквами, в каркасной области, показанной выше: L46F в FR2 и Y87F в FR3. Ниже показано выравнивание человеческого акцептора K107 (верхняя часть) и вариабельного домена легкой цепи L2 из huP2D10 (нижняя часть):CDR-участки подчеркнуты. Легкая цепь L2 из huP2D10 представляет собой прямой перенос CDR(без обратных мутаций в каркасной области). Это иллюстративная аминокислотная последовательность тяжелой цепи H1 IgG1 зрелого huP2D10: Нумерация Kabat для участка VH вариабельного домена тяжелой цепи (SED ID NO: 65) показана ниже: Это иллюстративная аминокислотная последовательность легкой цепи L1 зрелого huP2D10 Нумерация Kabat для этого участка VL показана ниже (SEQ ID NO: 67) Это иллюстративная аминокислотная последовательность легкой цепи L2 зрелого huP2D10 Нумерация Kabat для этого участка VL показана ниже (SEQ ID NO: 69) Пример 2. Блокирующее моноклональное антитело к TWEAK, mP2D10, значительно снижает клиническую тяжесть на моделях рассеянного склероза, инсульта и ревматоидного артрита. Была смоделирована фармакокинетика (ФК) моноклонального антитела против TWEAK, mP2D10, исходя из внутривенного (IV) введения.mP2D10 вводили мышам по 1, 10 или 100 мг/кг с помощью IV инъекции. Сывороточные концентрации mP2D10 определяли, применяя ELISA. Профиль ФК изменения концентрации лекарственного вещества исследовали, применяя двухкомпонентную модель с исключением первого порядка или с исключением Михаэлиса-Ментен из основного компонента с объемом VI. Константы скорости двух компонентов составили K12 (уходящий компонент от 1 к 2) и K21 (уходящий компонент от 2 к 1). В модели исключения первого порядка константа скорости выведения представляла собой K10. В модели исключения Михаэлиса-Ментен лекарственный препарат очищали со скоростью VmCl/(Km+C1), где С 1 - концентрация mP2D10 в основном компоненте, Vm и Km - константы. Данные были приведены в соответствие с программным обеспечением ADAPT II (D'Argenio, D.Z. и A. Schumitzky. ADAPT II User's Guide:Angeles, 1997) при использовании оценки методом максимального правдоподобия. В двухкомпонентной линейной модели исключения V1 составил 23,2 мл/кг, K10 составила 0,0096 ч-1,K12 составила 2,501 и K21 составила 1,053. Величина области под кривой (AIC) составила 298, а значение Шварца - 304,2. В двухкомпонентной нелинейной модели исключения V1 составил 0,0235. Vm составила 9,22 мг/кг/ч, Km составила 484,2 мкг/мл. K12 составила 2,348 ч-1, а K21 - 0,966 ч-1. Величина AIC составила 269, а значение Шварца составило 276. ФК mP2D10 прогнозировалась лучше посредством нелинейной модели, нежели посредством линейной модели. Профили динамики изменения концентрации mP2D10 лучше прогнозировались посредством двухкомпонентной модели с исключением Михаэлиса-Ментен, нежели с исключением первого порядка. Специалисты в данной области обнаружат или смогут выявить, используя не более чем стандартные эксперименты, множество вариантов осуществления, равноценных конкретным воплощениям, описанным в настоящем изобретении. Список последовательностей