Способы применения рецептора gpr119 для идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта
Формула / Реферат
1. Применение клетки-хозяина или мембраны клетки-хозяина, содержащих GPCR для идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, где клетка-хозяин или ее мембрана предназначены для контакта с тестируемым соединением, где GPCR содержит:
(i) аминокислоты 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислоты 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотную последовательность GPCR, кодируемую полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотную последовательность GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2 по всей своей длине; и
(v) аминокислотную последовательность конститутивно активной версии GPCR, имеющей SEQ ID NO: 2;
и где способность тестируемого соединения стимулировать функционирование рецептора указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
2. Применение по п.1, дополнительно включающее:
(с) приведение соединения, обладающего способностью стимулировать функционирование рецептора, определенное на стадии (b), в контакт in vitro с энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного; и
(d) определение того, стимулирует ли соединение секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного;
где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
3. Применение по п.1, дополнительно включающее:
(с) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного путем измерения уровня GIP в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили соединение, стимулирующее функционирование рецептора на стадии (b);
где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
4. Применение по п.1, дополнительно включающее:
(с) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного, путем измерения уровня костной массы в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили соединение, стимулирующее функционирование рецептора на стадии (b);
где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
5. Применение по п.3 или 4, где позвоночным является человек.
6. Применение по п.3 или 4, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
7. Применение по любому из пп.1-6, где рецептор является рекомбинантным.
8. Применение по любому из пп.1-7, где клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, а указанный вектор экспрессии содержит полинуклеотид, кодирующий GPCR.
9. Применение по любому из пп.1-8, где указанное определение проводят путем измерения уровня вторичного мессенджера.
10. Применение по п.9, где вторичный мессенджер выбран из группы, состоящей из циклического АМФ (цАМФ), циклического ГМФ (цГМФ), инозитол-1,4,5-трифосфата (IP3), диацилглицерина (DAG), активности киназы MAP, активности киназы-1 киназы MAPK/ERK (MEKK1) и Са2+.
11. Применение по п.10, где уровень цАМФ повышается.
12. Применение по любому из пп.1-8, где указанное определение проводят посредством анализа меланофоров путем измерения связывания ГТФγS с мембраной, содержащей указанный GPCR, или посредством анализа репортера.
13. Применение по любому из пп.1-12, где клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего.
14. Применение по любому из пп.1-12, где клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку-хозяина.
15. Применение по любому из пп.1-12, где клетка-хозяин представляет собой меланофор.
16. Применение по любому из пп.1-15, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
17. Применение по любому из пп.1-16, где рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичную SEQ ID NO: 2.
18. Применение по любому из пп.1-17, где рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
19. Способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, включающий в себя следующие стадии:
(a) приведение агониста GPR119 in vitro в контакт с энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного; и
(b) определение того, стимулирует ли агонист GPR119 секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного;
где способность агониста GPR119 стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
20. Способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, включающий в себя стадию:
(а) определения того, увеличивает ли агонист GPR119 уровень GIP у позвоночного, путем измерения уровня GIP в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили агонист GPR119;
где способность агониста GPR119 увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
21. Способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, включающий в себя стадию:
(а) определения уровня костной массы в биологическом образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили агонист GPR119;
где способность агониста GPR119 увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
22. Способ по п.20 или 21, где позвоночным является человек.
23. Способ по п.20 или 21, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
24. Способ по любому из пп.19-23, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
25. Способ по любому из пп.19-23, где агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119.
26. Способ по любому из пп.19-25, где агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119.
27. Способ по любому из пп.19-26, где агонист GPR119 обладает избирательностью по отношению к GPR119, большей, чем к рецептору кортикотропин-рилизинг фактора-1 (CRF-1).
28. Способ по любому из пп.19-27, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 10 мкМ.
29. Способ по любому из пп.19-27, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 1 мкМ.
30. Способ по любому из пп.19-27, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
31. Способ по любому из пп.19-27, где агонист GPR119 является перорально активным и имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
32. Способ по любому из пп.19-31, где агонист GPR119 является перорально активным.
33. Способ по п.19, включающий перед стадией (а) следующие дополнительные стадии in vitro:
(х) приведение тестируемого соединения в контакт с клеткой-хозяином или с мембраной клетки-хозяина, содержащими GPCR, где GPCR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) аминокислот 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотной последовательности GPCR, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотной последовательности GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и
(v) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии GPCR, описанной как SEQ ID NO: 2; и
(у) определение способности тестируемого соединения стимулировать функционирование рецептора;
где способность тестируемого соединения стимулировать функционирование рецептора указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, и где агонист GPR119 стадии (а) представляет собой тестируемое соединение, идентифицированное как стимулирующее функционирование рецептора на стадии (у).
34. Способ по п.20 или 21, включающий перед стадией (а) следующие дополнительные стадии in vitro:
(х) приведение тестируемого соединения в контакт с клеткой-хозяином или с мембраной клетки-хозяина, содержащими GPCR, где GPCR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) аминокислот 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотной последовательности GPCR, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотной последовательности GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и
(v) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии GPCR, описанной как SEQ ID NO: 2; и
(у) определение способности тестируемого соединения стимулировать функционирование рецептора;
где способность тестируемого соединения стимулировать функционирование рецептора указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, и где агонист GPR119 стадии (а) представляет собой тестируемое соединение, идентифицированное как стимулирующее функционирование рецептора на стадии (у).
35. Способ по п.34, где позвоночным является человек.
36. Способ по п.34, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
37. Способ по любому из пп.33-36, где рецептор является рекомбинантным.
38. Способ по любому из пп.33-37, где клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, а указанный вектор экспрессии содержит полинуклеотид, кодирующий GPCR.
39. Способ по любому из пп.33-38, где указанное определение проводят путем измерения уровня вторичного мессенджера.
40. Способ по п.39, где вторичный мессенджер выбран из группы, состоящей из циклического АМФ (цАМФ), циклического ГМФ (цГМФ), инозитол-1,4,5-трифосфата (IP3), диацилглицерина (DAG), активности киназы MAP, активности киназы-1 киназы MAPK/ERK (MEKK1) и Са2+.
41. Способ по п.40, где уровень цАМФ повышается.
42. Способ по любому из пп.33-38, где указанное определение проводят посредством анализа меланофоров путем измерения связывания ГТФγS с мембраной, содержащей указанный GPCR, или посредством анализа репортера.
43. Способ по любому из пп.33-42, где клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего.
44. Способ по любому из пп.33-42, где клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку-хозяина.
45. Способ по любому из пп.33-42, где клетка-хозяин представляет собой меланофор.
46. Способ по любому из пп.33-45, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
47. Способ по любому из пп.33-46, где рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2.
48. Способ по любому из пп.33-47, где рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
49. Применение GPCR для идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, в способе in vitro, включающем в себя следующие стадии:
(а) приведение GPCR в контакт с необязательно меченым известным лигандом рецептора в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения, где GPCR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) аминокислот 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотной последовательности GPCR, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотной последовательности GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и
(v) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии GPCR, описанной как SEQ ID NO: 2; и
(b) детекция комплекса указанного известного лиганда с указанным рецептором; и
(c) определение того, образуется ли в присутствии тестируемого соединения меньше указанного комплекса, чем в отсутствие тестируемого соединения;
где упомянутое определение указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
50. Применение по п.49, где указанный способ дополнительно включает:
(d) приведение соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса in vitro в контакт с энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного; и
(e) определение того, стимулирует ли соединение секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного;
где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
51. Применение по п.49, где указанный способ дополнительно включает:
(d) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного, путем измерения уровня GIP в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили соединение, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса,
где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
52. Применение по п.49, где указанный способ дополнительно включает:
(d) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили соединение, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса,
где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP.
53. Применение по п.51 или 52, где позвоночным является человек.
54. Применение по п.51 или 52, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
55. Применение по любому из пп.49-54, где рецептор является рекомбинантным.
56. Применение по любому из пп.49-55, где клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, а указанный вектор экспрессии содержит полинуклеотид, кодирующий GPCR.
57. Применение по любому из пп.49-55, где известным лигандом является агонист GPR119.
58. Применение по п.57, где агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119.
59. Применение по п.57 или 58, где указанный агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119.
60. Применение по любому из пп.57-59, где агонист GPR119 обладает избирательностью по отношению к GPR119, большей, чем к CRF-1.
61. Применение по любому из пп.57-60, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 10 мкМ.
62. Применение по любому из пп.57-60, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 1 мкМ.
63. Применение по любому из пп.57-60, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
64. Применение по любому из пп.57-63, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
65. Применение по любому из пп.49-64, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
66. Применение по любому из пп.49-65, где рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичную SEQ ID NO: 2.
67. Применение по любому из пп.49-66, где рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
68. Способ по п.19, включающий перед стадией (а) следующие дополнительные стадии in vitro:
(х) приведение GPCR в контакт с необязательно меченым известным лигандом рецептора в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения, где GPCR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) аминокислот 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотной последовательности GPCR, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотной последовательности GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и
(v) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии GPCR, описанной как SEQ ID NO: 2; и
(у) детекция комплекса указанного известного лиганда с указанным рецептором; и
(z) определение того, образуется ли в присутствии тестируемого соединения меньше указанного комплекса, чем в отсутствие тестируемого соединения;
где упомянутое определение указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, и где агонист GPR119 стадии (а) представляет собой тестируемое соединение, определенное на стадии (z) как соединение, в присутствии которого образуется меньше указанного комплекса.
69. Способ по п.20 или 21, включающий перед стадией (а) следующие дополнительные стадии in vitro:
(х) приведение GPCR в контакт с необязательно меченым известным лигандом рецептора в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения, где GPCR содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(i) аминокислот 1-335 SEQ ID NO: 2;
(ii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2;
(iii) аминокислотной последовательности GPCR, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1;
(iv) аминокислотной последовательности GPCR, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и
(v) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии GPCR, описанной как SEQ ID NO: 2; и
(у) детекция комплекса указанного известного лиганда с указанным рецептором; и
(z) определение того, образуется ли в присутствии тестируемого соединения меньше указанного комплекса, чем в отсутствие тестируемого соединения;
где упомянутое определение указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, и где агонист GPR119 стадии (а) представляет собой тестируемое соединение, определенное на стадии (z) как соединение, в присутствии которого образуется меньше указанного комплекса.
70. Способ по п.69, где позвоночным является человек.
71. Способ по п.69, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
72. Способ по любому из пп.68-71, где рецептор является рекомбинантным.
73. Способ по любому из пп.68-72, где клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, а указанный вектор экспрессии содержит полинуклеотид, кодирующий GPCR.
74. Способ по любому из пп.68-73, где известным лигандом является агонист GPR119.
75. Способ по п.70, где агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119.
76. Способ по п.74 или 75, где указанный агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119.
77. Способ по любому из пп.74-76, где агонист GPR119 обладает избирательностью по отношению к GPR119, большей, чем к CRF-1.
78. Способ по любому из пп.74-77, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 10 мкМ.
79. Способ по любому из пп.74-77, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 1 мкМ.
80. Способ по любому из пп.74-77, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
81. Способ по любому из пп.74-80, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
82. Способ по любому из пп.68-81, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
83. Способ по любому из пп.68-82, где рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, по меньшей мере приблизительно на 80% идентичную SEQ ID NO: 2.
84. Способ по любому из пп.68-83, где рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
85. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей агонист GPR119, обладающий эффектом усиления секреции GIP, включающий приготовление эффективного количества агониста GPR119, предварительно идентифицированного как средство, обладающее эффектом усиления секреции GIP, в способе по п.19, с фармацевтически приемлемым носителем в виде фармацевтической композиции.
86. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей агонист GPR119, обладающий эффектом усиления секреции GIP, включающий приготовление эффективного количества агониста GPR119, предварительно идентифицированного как средство, обладающее эффектом усиления секреции GIP, в способе по п.20, с фармацевтически приемлемым носителем в виде фармацевтической композиции.
87. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей агонист GPR119, обладающий эффектом усиления секреции GIP, включающий приготовление эффективного количества агониста GPR119, предварительно идентифицированного как средство, обладающее эффектом усиления секреции GIP, в способе по п.21, с фармацевтически приемлемым носителем в виде фармацевтической композиции.
88. Способ по п.86 или 87, где позвоночным является человек.
89. Способ по п.86 или 87, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
90. Способ по любому из пп.85-89, где агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119.
91. Способ по любому из пп.85-90, где указанный агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119.
92. Способ по п.91, где агонист GPR119 обладает избирательностью по отношению к GPR119, большей, чем к CRF-1.
93. Способ по любому из пп.85-92, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 10 мкМ.
94. Способ по любому из пп.85-92, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 1 мкМ.
95. Способ по любому из пп.85-92, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
96. Способ по любому из пп.85-92, где агонист GPR119 является перорально активным и имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
97. Способ по любому из пп.85-96, где агонист GPR119 является перорально активным.
98. Способ по любому из пп.85-97, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
99. Способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединений, пригодных для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:
(a) приведение агониста GPR119 in vitro в контакт с энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного; и
(b) определение того, стимулирует ли агонист GPR119 секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного;
где способность агониста GPR119 стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой или клеткой, способной секретировать GIP, позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой соединение, пригодное для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединение, пригодное для увеличения костной массы субъекта.
100. Способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединений, пригодных для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:
(а) определения того, увеличивает ли агонист GPR119 уровень GIP у позвоночного, путем измерения уровня GIP в образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили агонист GPR119;
где способность агониста GPR119 увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой соединение, пригодное для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединение, пригодное для увеличения костной массы субъекта.
101. Способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединений, пригодных для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:
(а) определения уровня костной массы в биологическом образце, полученном от позвоночного, которому предварительно вводили агонист GPR119;
где способность агониста GPR119 увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой соединение, пригодное для профилактики или лечения состояния, характеризующегося пониженной костной массой, или соединение, пригодное для увеличения костной массы субъекта.
102. Способ по п.100 или 101, где позвоночным является человек.
103. Способ по п.100 или 101, где позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее.
104. Способ по любому из пп.99-103, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 5000 г на моль.
105. Способ по любому из пп.99-104, где агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119.
106. Способ по любому из пп.99-105, где агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119.
107. Способ по любому из пп.99-106, где агонист GPR119 обладает избирательностью по отношению к GPR119, большей, чем к рецептору кортикотропин-рилизинг фактора-1 (CRF-1).
108. Способ по любому из пп.99-107, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 10 мкМ.
109. Способ по любому из пп.99-107, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 1 мкМ.
110. Способ по любому из пп.99-107, где агонист GPR119 имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
111. Способ по любому из пп.99-107, где агонист GPR119 является перорально активным и имеет ЕС50 менее чем 100 нМ.
112. Способ по любому из пп.99-110, где агонист GPR119 является перорально активным.
113. Применение по любому из пп.1-15, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 10000 г на моль.
114. Способ по любому из пп.19-23, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 10000 г на моль.
115. Способ по любому из пп.33-45, где тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 10000 г на моль.
116. Применение по любому из пп.57-63, где агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение, имеющее молекулярную массу менее чем приблизительно 10000 г на моль.
Текст
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ РЕЦЕПТОРА GPR119 ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЙ, КОТОРЫЕ МОЖНО ИСПОЛЬЗОВАТЬ ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ КОСТНОЙ МАССЫ СУБЪЕКТА Настоящее изобретение относится к способам применения рецептора GPR119 для идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Агонисты рецептора GPR119 можно использовать в качестве терапевтических средств для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, такого как остеопороз,а также для увеличения костной массы субъекта. Агонисты рецептора GPR119 стимулируют костеобразование у субъекта. 016041 Область изобретения Настоящее изобретение относится к способам применения рецептора GPR119 для идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Агонисты рецептораGPR119 можно использовать в качестве терапевтических средств для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, такого как остеопороз, а также для увеличения костной массы субъекта. Агонисты рецептора GPR119 стимулируют костеобразование у субъекта. Уровень техники Нижеследующее обсуждение приводится для облегчения понимания изобретения, однако не подразумевается, или не предполагается, что оно относится к предыдущему уровню техники изобретения. А. Остеопороз. Остеопороз представляет собой заболевание, которое приводит к потере дееспособности и характеризуется уменьшением костной массы и ухудшением микроархитектуры скелета, что приводит к уменьшению прочности кости и развитию предрасположенности пациента к повышенному риску переломов костей. Остеопороз поражает более 75 млн людей в Европе, Японии и Соединенных Штатах и является причиной более 2,3 млн переломов только в Европе и Соединенных Штатах. В Соединенных штатах остеопороз поражает по меньшей мере 25% всех постклимактерических белых женщин, причем данный процент увеличивается до 70% у женщин старше 80 лет. Одна из трех женщин старше 50 лет имеет остеопоретический перелом, что является серьезной социальной и финансовой проблемой для общества. Данное заболевание встречается не только у женщин, оно также может поражать пожилых мужчин. Ожидается, что к 2050 году встречаемость переломов костей тазобедренного сустава во всем мире увеличится у мужчин на 310% и у женщин на 240%. Общий риск зарегистрированных в клинике переломов костей тазобедренного сустава, предплечья и позвоночника на протяжении всей жизни составляет приблизительно 40% и является эквивалентным риску сердечно-сосудистых заболеваний. Таким образом,остеопоретические переломы вызывают значительную смертность и заболеваемость и сопровождаются большими экономическими затратами. Вследствие старения населения число остеопоретических переломов и затраты на их лечение в следующие 50 лет удвоятся, если не будут разработаны эффективные профилактические стратегии (см., например, Atik et al., Clin Orthop Relat Res (2006), 443:19-24; Raisz, J.and Management of Osteoporosis). В. Глюкозозависимый инсулинотропный полипептид (GIP). Глюкозозависимый инсулинотропный полипептид (GIP, также известный как желудочный ингибиторный полипептид) представляет собой пептидный гормон инкретин из 42 аминокислот, который высвобождается из эндокринных К-клеток двенадцатиперстной кишки после проглатывания пищи. Количество высвобождаемого GIP сильно зависит от количества потребляемой глюкозы. Показано, что GIP стимулирует глюкозозависимую секрецию инсулина бета-клетками поджелудочной железы. ДействиеGIP опосредуется специфическим рецептором, сопряженным с G-белком, а именно GIPR. Поскольку GIP содержит аланин в положении 2, он является превосходным субстратом для дипептидилпептидазы-4 (DPP-IV), фермента, регулирующего деградацию GIP. Полноразмерный GIP(1-42) быстро, в течение нескольких минут после секреции из К-клеток пищеварительного тракта, превращается вGIP(3-42), не обладающий биологической активностью. Показано, что ингибирование DPP-IV увеличивает биологическую активность GIP (см., например, Drucker, Cell Metab (2006), 3:153-165; Mcintosh et al.,Regul Pept (2005), 128:159-165; Deacon, Regul Pept (2005), 128:117-124; Ahren et al., Endocrinology (2005),146:2055-2059). Определение полноразмерного биологически активного GIP, например в крови, можно проводить с помощью специфических N-концевых анализов (см., например, Deacon et al., J. Clin Endocrinol Metab (2000), 85:3575-3581). Недавно было показано, что GIP стимулирует остеогенез. Также показано, что GIP активирует рецепторы остеобластов, приводя к увеличению синтеза коллагена типа I и повышению активности щелочной фосфатазы, связанных с остеогенезом. Обнаружено, что GIP ингибирует активность и дифференциацию остеокластов in vitro. Показано, что введение GIP предотвращает уменьшение костной массы, вызванное овариэктомией. У мышей с нокаутом гена рецептора GIP (GIPR) наблюдается уменьшение размера костей, снижение массы костей, изменение микроархитектуры и биохимических свойств костей, а также изменение параметров ремоделирования костей, особенно костеобразования (см., например, Zhongal., Mol Endocrinol (2006), 20:1644-1651). Пригодность GIP для поддержания или увеличения плотности кости или костеобразования была подтверждена Бюро по патентам и товарным знакам США путем выдачи патента США 6410508 на способ лечения пониженной минерализации кости путем введения пептида GIP. Однако существующие в настоящее время агонисты пептида GIP обладают недостаточной биодоступностью при пероральном применении, что негативно влияет на отношение пациента. Эффективный альтернативный подход заключается в разработке перорально активной композиции для увеличения уровня активности эндогенного GIP.GPR119, GenBank, номер доступа ААР 72125, и его аллели; например, мышиный GPR119, GenBank,номер доступа AY288423 и его аллели). Активация GPR119, например, под действием агониста, приводит к увеличению уровня внутриклеточного цАМФ, что согласуется с данными, свидетельствующими о сопряжении GPR119 с G-белками. В патентной литературе GPR119 упоминается как RUP3 (например, вWO 00/31258); GPR119 также называют глюкозозависимым инсулинотропным рецептором (GDIR).D. Рецепторы, сопряженные с G-белком. Хотя у людей обнаружено несколько классов рецепторов, наиболее многочисленным и терапевтически значимым является класс рецепторов, сопряженных с G-белком (GPCR). В человеческом геноме присутствует приблизительно 30000-40000 генов и приблизительно 2% из них кодируют GPCR.GPCR составляют важную область разработки фармацевтических продуктов. Лекарственные средства, обладающие активностью в отношении GPCR, оказывают благоприятное терапевтическое действие на широкий спектр заболеваний человека, включающих в себя боль, когнитивную дисфункцию, гипертонию, язвенные болезни, риниты и астму. Примерно из 500 поставляемых в клинику лекарственных средств более 30% являются модуляторами функции GPCR. Данные лекарственные средства способны воздействовать приблизительно на 30 полностью охарактеризованных GPCR (см., например, Wise et al.,Annu Rev Pharmacol Toxicol (2004), 44:43-66).GPCR имеют общий структурный мотив, содержащий семь последовательностей из 22-24 гидрофобных аминокислот, которые образуют семь альфа-спиралей, каждая из которых пронизывает мембрану (каждый трансмембранный участок имеет номер, например трансмембранный участок-1 (ТМ-1),трансмембранный участок-2 (ТМ-2) и др.). Трансмембранные спирали соединены аминокислотными цепями, находящимися между трансмембранным участком-2 и трансмембранным участком-3, трансмембранным участком-4 и трансмембранным участком-5 и трансмембранным участком-6 и трансмембранным участком-7 на внешней, или "внеклеточной", стороне клеточной мембраны (их называют "внеклеточные" участки 1, 2 и 3 (ЕС-1, ЕС-2 и ЕС-3) соответственно). Трансмембранные спирали также соединены аминокислотными цепями, находящимися между трансмембранным участком-1 и трансмембранным участком-2, трансмембранным участком-3 и трансмембранным участком-4 и трансмембранным участком-5 и трансмембранным участком-6 на внутренней, или "внутриклеточной", стороне клеточной мембраны (их называют "внутриклеточные" участки 1, 2 и 3 (IC-1, IC-2 и IC-3) соответственно). "Карбокси-"("С-") конец рецептора находится во внутриклеточном пространстве, а "амино-" ("N-") конец рецептора находится во внеклеточном пространстве. Как правило, при связывании лиганда с рецептором (данное событие часто называют "активацией" рецептора) происходит изменение конформации рецептора, которое обеспечивает соединение внутриклеточного участка с внутриклеточным "G-белком". Обнаружено, что GPCR являются "промискуитентными" по отношению к G-белкам, т.е. что GPCR могут взаимодействовать более чем с одним G-белком; см. Kenakin, Life Sciences (1988), 43:1095-1101. В настоящее время идентифицированы G-белки Gq, Gs,Gi, Gz и Go, хотя существуют и другие разновидности данного класса. Активируемое лигандом соединение GPCR с G-белком инициирует каскад процессов сигнального пути (называемый "передачей сигнала"). В обычных условиях передача сигнала в конечном счете приводит к активации или ингибированию клеточных функций. Без связи с какой-либо теорией авторы полагают, что с G-белком взаимодействуют петля IC-3 и карбоксильный конец рецептора. Существуют также промискуитентные G-белки, которые связывают несколько классов GPCR с путем фосфолипазы С, такие как G15 или G16 (OffermanrisSimon, J. Biol Chem (1995), 270:15175-80), или химерные G-белки, способные связывать большое число разных GPCR с одним путем, например, с путем фосфолипазы С (MilliganRees, Trends in Pharmaceutical Sciences (1999), 20:118-24). В физиологических условиях присутствующие в клеточной мембране GPCR находятся в состоянии равновесия между двумя разными конформациями: соответствующими "неактивному" состоянию и "активному" состоянию. Рецептор в неактивном состоянии не способен связываться с внутриклеточным путем передачи сигнала и инициировать передачу сигнала, приводящую к биологическому ответу. Изменение конформации рецептора на конформацию, соответствующую активному состоянию, обеспечивает соединение с путем передачи сигнала (через G-белок) и последующий биологический ответ. Активное состояние рецептора можно стабилизировать с помощью лиганда или соединения, такого как лекарственное средство. Сделанные в последнее время открытия, включающие в себя, без ограничения, модификации аминокислотной последовательности рецептора, представляют способы придания рецептору конформации активного состояния и стабилизации ее без применения лигандов и лекарственных средств. Данные способы позволяют эффективно стабилизировать рецептор в активном состоянии путем имитации эффекта связывания лиганда с рецептором. Стабилизацию с помощью таких лиганднезависимых способов называют "конститутивной активацией рецептора".-2 016041 Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к неожиданному открытию, сделанному авторами данного изобретения, которое заключается в том, что введение агониста GPR119 субъекту, например пероральное введение, может влиять на рецептор GPR119, увеличивая уровень GIP у субъекта. Настоящее изобретение описывает способы применения GPR119 для идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, такого как остеопороз, а также соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Агонист GPR119 можно использовать для стимуляции (например, увеличения) костеобразования у субъекта. В некоторых воплощениях субъект представляет собой человека. Нуклеотидная последовательность, кодирующая человеческий полипептид GPR119, описана вSEQ ID NO: 1. Аминокислотная последовательность человеческого полипептида GPR119, кодируемая вышеуказанной нуклеотидной последовательностью, описана в SEQ ID NO: 2. В первом аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(а) приведение тестируемого соединения в контакт с клеткой-хозяином, или с мембраной клеткихозяина, содержащей G-белок-сопряженный рецептор, где G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) из образца человеческой ДНК с использованием специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и 4;(v) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента последовательности по любому из пунктов (i)-(viii); и(b) определение способности тестируемого соединения стимулировать функционированиеG-белок-сопряженного рецептора; где способность тестируемого соединения стимулировать функционирование G-белоксопряженного рецептора указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство,усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающихSEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP. В некоторых воплощениях способ включает в себя идентификацию агониста рецептора. В некоторых воплощениях способ включает в себя идентификацию частичного агониста рецептора. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, которые-3 016041 можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а) и (b), описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(d) приведение соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b), в контакт in vitro с энтероэндокринной клеткой позвоночного, или с клеткой, способной секретировать GIP; и(e) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см., например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью придания способности секретировать GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а) и (b), описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(e) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение,пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы,или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию общего GIP в крови или плазме. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию биоактивного GIP в крови или плазме. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя стадии (а) и (b),описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(e) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы у позвоночного. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы проводят методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA). В некоторых воплощениях указан-4 016041 ное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методомDXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе с помощью DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization TechnicalReport Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а) и (b), описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(d) необязательно предоставление соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(e) приведение соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b), в контакт in vitro с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP; и(f) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см.,например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131-140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью придания способности секретировать GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а) и (b), описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(d) необязательно предоставление соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(f) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение,пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы,или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию общего GIP в крови или плазме. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию биоактивного GIP в крови или плазме. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением ко-5 016041 стной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а) и (b), описанные в первом аспекте, а также следующие стадии:(c) необязательно синтез соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(d) необязательно предоставление соединения, стимулирующего функционирование рецептора, определенное на стадии (b);(f) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы включает в себя измерение уровня костной массы методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе методом DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization Technical Report Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях идентифицированное средство, усиливающее секрецию GIP, или идентифицированное соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или идентифицированное соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта, представляет собой агонист рецептора. В некоторых воплощениях агонист представляет собой частичный агонист. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор связан с G-белком. В некоторых воплощениях активация G-белок-сопряженного рецептора увеличивает уровень внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях G-белок представляет собой Gs. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую геномную ДНК. В некоторых воплощениях полимеразная цепная реакция представляет собой полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Методы ОТ-ПЦР хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую кДНК. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческой ткани, экспрессирующейGPR119. В некоторых воплощениях человеческая ткань, которая экспрессирует GPR119, представляет собой поджелудочную железу или панкреатический островок. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческих клеток, экспрессирующих GPR119. В некоторых воплощениях кДНК получают из бета-клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях кДНК получают из линии клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой SEQ ID NO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах.-6 016041 В некоторых воплощениях жесткие условия гибридизации включают в себя гибридизацию при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5SSC (1SSC=150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрия цитрат),50 мМ фосфат натрия (рН 1,6), 5 раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной, деградированной ДНК из молок лосося, с последующим промыванием при 65 С раствором, содержащим 0,1SSC. Способы проведения гибридизации хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой SEQ IDNO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом,гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ IDNO: 1, представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой GPCR. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является частью гибридного белка,включающего в себя G-белок. Способы получения гибридной конструкции GPCR:G хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, международную заявку WO 02/42461). В некоторых воплощениях клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, в состав которого входит полинуклеотид, кодирующий G-белок-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях вектор экспрессии представляет собой pCMV. Данный вектор помещен в Американскую коллекцию типовых культур (АТСС) 13 октября 1998 г. (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209 USA) в соответствии с положениями "Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры". В АТСС проведен анализ ДНК, который показал, что она является жизнеспособной. АТСС присвоила pCMV следующий номер депонирования: АТСС 203351. Рядовым специалистам в данной области хорошо известно, что можно использовать и другие подходящие векторы экспрессии, многие из которых являются коммерчески доступными (например, от Clontech, Palo Alto,СА; Stratagene, La Jolla, CA; и Invitrogen, Carlsbad, CA). В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой клетку позвоночного. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях клетка-хозяин млекопитающего выбрана из группы, состоящей из клетки 293, клетки 293 Т, клетки СНО,клетки МСВ 3901 и клетки COS-7. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой меланофор. Рядовым специалистам в данной области хорошо известны и другие подходящие клетки-хозяева, причем широкий ряд клеточных линий можно приобрести в Американской коллекцию типовых культур, 10801 UniversityBoulevard, Manassas, VA 20110-2209. В некоторых воплощениях в указанном определении в качестве G-белок-сопряженного рецептора используют Gs-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях указанное определение проводят с использованием G-белоксопряженного рецептора, который через промискуитентный G-белок, такой как G15 или G16, соединен с путем фосфолипазы С. Промискуитентные G-белки хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, Offermanns et al., J. Biol. Chem. (1995), 270:15175-15180). В некоторых воплощениях указанное определение проводят с использованием G-белок-сопряженного рецептора, который че-7 016041 рез химерный G-белок соединен, например, с путем фосфолипазы С. Химерные G-белки хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, Milligan et al., Trends in Pharmaceutical Sciences(1999), 20:118-124; WO 02/42461). В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем измерения уровня вторичного мессенджера. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем измерения уровня вторичного мессенджера, выбранного из группы, состоящей из циклического АМФ (цАМФ), циклического ГМФ(цГМФ), инозитол 1,4,5-трифосфата (IP3), диацилглицерина (DAG), МАР-киназной активности, активности киназы MAPK/ERK 1 (МЕКК 1) и Са 2+. В некоторых предпочтительных воплощениях вторичный мессенджер представляет собой цАМФ. В некоторых воплощениях уровень внутриклеточного цАМФ повышается. В некоторых воплощениях указанное определение проводят с использованием мембраны, содержащей G-белок-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем анализа меланофоров. В некоторых воплощениях уровень диспергирования пигмента увеличивается. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем анализа репортера. В некоторых воплощениях указанный анализ репортера представляет собой анализ репортера CRE-Luc. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем измерения активности, опосредованной увеличением уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем анализа репортера CRE-Luc. В некоторых воплощениях уровень активности люцеферазы повышается. В некоторых воплощениях указанное определение проводят путем измерения связывания ГТФS с мембраной, содержащей G-белок-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях указанный ГТФS метят [35S]. В некоторых воплощениях связывание указанного ГТФS с мембраной, содержащей GPCR,увеличивается. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид при условии, что полипептид не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой липид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного определения структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного предоставления названия или структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения,которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ дополнительно включает в себя стадию необязательного получения или синтеза средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ дополнительно включает в себя стадию получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Во втором аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(a) приведение соединения, идентифицированного по способу первого аспекта, с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP, в контакт in vitro; и(b) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см., например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(a) введение позвоночному соединения, причем указанное соединение идентифицировано способом по первому аспекту и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP,соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме общего GIP. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме биоактивного GIP. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(a) введение позвоночному соединения, причем указанное соединение идентифицировано способом по первому аспекту и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме общего GIP. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме биоактивного GIP. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы у позвоночного. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы проводят методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA). В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методомDXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе с помощью DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization TechnicalReport Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное-9 016041 от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид при условии, что полипептид не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой липид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В третьем аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(a) приведение агониста GPR119 с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP, в контакт in vitro и(b) определение того, действительно ли агонист GPR119 стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность агониста GPR119 стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см., например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(b) определение того, действительно ли агонист GPR119 увеличивает уровень GIP у позвоночного; где способность агониста GPR119 увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение,которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме общего GIP. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме биоактивного GIP. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(b) определение того, действительно ли агонист GPR119 увеличивает уровень костной массы у по- 10016041 звоночного; где способность агониста GPR119 увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что агонист GPR119 представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме общего GIP. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию в крови или плазме биоактивного GIP. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы у позвоночного. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы проводят методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA). В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методомDXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе с помощью DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization TechnicalReport Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой агонист эндогенного GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой частичный агонист GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях низкомолекулярное соединение не является полипептидом. В некоторых воплощениях низкомолекулярное соединение не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях низкомолекулярное соединение не является липидом. В некоторых воплощениях низкомолекулярное соединение не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях агонист GPR119 является доступным при пероральном введении. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ при взаимодействии с человеческим GPR119, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ по данным аденилатциклазного анализа, проводимого с использованием человеческого GPR119, имеющего последовательность SEQ ID NO: 2 (типичный аденилатциклазный анализ описан ниже в примерах 7 и 8). В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ,менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ,менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ,менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ по данным анализа меланофоров, проводимого с использованием человеческого GPR119, имеющего последовательность SEQ ID NO: 2 (типичный анализ меланофоров описан ниже в примере 9). Примеры агонистов GPR119 раскрыты, например, в международной заявке PCT/US2004/001267(опубликованной как WO 03/026661). В некоторых воплощениях способ включает в себя предоставление агониста GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 можно идентифицировать с помощью способа, описанного в первом аспекте. В некоторых воплощениях способ включает в себя проведение способа, описанного в первом аспекте, с целью идентификации агониста GPR119. В некоторых воплощениях способ включает в себя идентификацию агониста GPR119 с помощью способа, описанного в первом аспекте. В четвертом аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(a) приведение G-белок-сопряженного рецептора в контакт с необязательно меченым известным лигандом рецептора в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения, где G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(v) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(vii) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента последовательности по любому из пунктов (i)-(viii);(b) детекция комплекса указанного известного лиганда с указанным рецептором; и(с) определение того, действительно ли в присутствии тестируемого соединения образуется меньше указанного комплекса, чем в отсутствие тестируемого соединения; где указанное определение указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2.- 12016041 В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой лиганд или агонист эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой известный агонист эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой лиганд или агонист эндогенного человеческого рецептора GPR119. В некоторых воплощениях известный лиганд идентичен соединению, раскрытому, например, в международной заявке PCT/US2004/001267 (опубликованной как WO 04/065380); международной заявке PCT/US2004/005555 (опубликованной как WO 04/076413); международной заявке PCT/US2004/022327 (опубликованной как WO 05/007647); международной заявке PCT/US2004/022417 (опубликованной как WO 05/007658); международной заявке(опубликованной как WO 2007/003964) или международной заявке PCT/JP02/09350 (опубликованной какWO 03/026661). В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой эндогенный лиганд эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях необязательно меченый известный лиганд представляет собой меченый известный лиганд. В некоторых воплощениях меченый известный лиганд представляет собой известный лиганд, меченный радиоактивным изотопом. Способы мечения соединения радиоактивным изотопом,такие как мечение известного лиганда G-белок-сопряженного рецептора, данного изобретения хорошо известны квалифицированным специалистам; см., например, международную заявку WO 04/065380 и также, например, приведенный ниже пример 11. Способы детекции комплекса G-белок-сопряженного рецептора с соединением, заведомо являющимся лигандом G-белок-сопряженного рецептора, хорошо известны квалифицированным специалистам; см., например, международную заявку WO 04/065380 и также, например, приведенный ниже пример 12. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) приведение соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса, с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP, в контакт in vitro; и(f) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см.,- 13016041 например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131-140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) введение позвоночному соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса; и(f) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение,пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы,или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) введение позвоночному соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса; и(f) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы включает в себя измерение уровня костной массы методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе методом DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization Technical Report Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) необязательно предоставление соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(f) приведение соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса, с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP, в контакт in vitro; и(g) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, указывает на то, что тестируемое соедине- 14016041 ние представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см.,например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131-140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) необязательно предоставление соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(f) введение позвоночному соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса; и(g) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение,пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы,или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя стадии (а)-(с) четвертого аспекта, а также следующие стадии:(d) необязательно синтез соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(e) необязательно предоставление соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса;(f) введение позвоночному соединения, в присутствии которого на стадии (с) образуется меньшее количество указанного комплекса; и(g) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы включает в себя измерение уровня костной массы методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе методом DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization Technical Report Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую геномную ДНК. В некоторых воплощениях полимеразная цепная реакция представляет собой полимеразную цеп- 15016041 ную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Способы проведения ОТ-ПЦР хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую кДНК. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческой ткани, экспрессирующей GPR119. В некоторых воплощениях человеческая ткань, которая экспрессирует GPR119,представляет собой поджелудочную железу или панкреатический островок. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческих клеток, экспрессирующих GPR119. В некоторых воплощениях кДНК получают из бета-клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях кДНК получают из линии клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой SEQ ID NO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях жесткие условия гибридизации (например, условия высокой жесткости) включают в себя гибридизацию при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5SSC(1SSC=150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрия цитрат), 50 мМ фосфат натрия (рН 1,6), 5 раствор Денхардта,10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной, деградированной ДНК спермы лосося, с последующим промыванием при 65 С раствором, содержащим 0,1SSC. Способы гибридизации хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой SEQ IDNO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом,гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой GPCR. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является частью гибридного белка,включающего в себя G-белок. Способы получения гибридной конструкции GPCR:G хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, международную заявку WO 02/42461). В некоторых воплощениях указанное определение проводят с использованием клетки-хозяина, со- 16016041 держащей G-белок-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях клетка-хозяин содержит вектор экспрессии, который, в свою очередь, содержит полинуклеотид, кодирующий GPCR. В некоторых воплощениях вектор экспрессии представляет собой pCMV. Данный вектор помещен в Американскую коллекцию типовых культур (АТСС) 13 октября 1998 г. (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209USA) в соответствии с положениями "Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры". В АТСС проведен анализ ДНК, который показал, что она является жизнеспособной. АТСС присвоила pCMV следующий номер депонирования: АТСС 203351. Рядовым специалистам в данной области хорошо известно, что можно использовать и другие подходящие векторы экспрессии, многие из которых являются коммерчески доступными (например, отClontech, Palo Alto, CA; Stratagene, La Jolla, CA; и Invitrogen, Carlsbad, CA). В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой клетку позвоночного. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях клетка-хозяин млекопитающего выбрана из группы, состоящей из клетки 293, клетки 293 Т, клетки СНО,клетки МСВ 3901 и клетки COS-7. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой дрожжевую клетку. В некоторых воплощениях клетка-хозяин представляет собой меланофор. Рядовым специалистам в данной области хорошо известны и другие подходящие клетки-хозяева, причем широкий ряд клеточных линий можно приобрести в Американской коллекцию типовых культур, 10801 UniversityBoulevard, Manassas, VA 20110-2209. В некоторых воплощениях указанное определение проводят с использованием мембраны, содержащей G-белок-сопряженный рецептор. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид при условии, что полипептид не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой липид. В некоторых воплощениях тестируемое соединение не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного определения структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного предоставления названия или структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения,которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию необязательного получения или синтеза средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В пятом аспекте данное изобретение описывает способ скрининга тестируемых соединений с целью идентификации средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта, данный способ характеризуется применением Gбелок-сопряженного рецептора, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(c) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2, где GPCR не содержит аминокислотную последовательность(d) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использо- 17016041 ванием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(e) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(g) аминокислотной последовательности по пункту (f), выбранной из группы, состоящей из:(i) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(ii) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(h) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(i) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (a)-(h). В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях способ включает в себя идентификацию агониста рецептора. В некоторых воплощениях способ включает в себя идентификацию частичного агониста рецептора. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В шестом аспекте данное изобретение описывает способ получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта, идентифицированных в соответствии с первым аспектом, вторым аспектом, третьим аспектом, четвертым аспектом или пятым аспектом. В седьмом аспекте данное изобретение описывает применение G-белок-сопряженного рецептора,для скрининга тестируемых соединений как средств, усиливающих секрецию GIPs, соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, где G-белоксопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(c) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2, где GPCR не содержит аминокислотную последовательность(d) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(e) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(g) аминокислотной последовательности по пункту (f), выбранной из группы, состоящей из:(i) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(ii) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(h) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(i) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (a)-(h). В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2.- 18016041 В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой агонист GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой агонист эндогенного GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой агонист человеческого GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой частичный агонист GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой селективный агонист GPR119. В некоторых воплощениях агонист GPR119 представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях агонист GPR119 является доступным при пероральном введении. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ, при взаимодействии с человеческим GPR119, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ при взаимодействии с человеческим GPR119, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2, по данным аденилатциклазного анализа (типичный аденилатциклазный анализ описан ниже в примерах 7 и 8). В некоторых воплощениях агонист GPR119 имеет значение ЕС 50 менее чем приблизительно 10 мкМ, менее чем приблизительно 1 мкМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 75 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 25 нМ, менее чем приблизительно 15 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 4 нМ, менее чем приблизительно 3 нМ, менее чем приблизительно 2 нМ или менее чем приблизительно 1 нМ при взаимодействии с человеческим GPR119, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2, по данным анализа меланофоров (типичный анализ меланофоров описан выше в примере 9). Примеры агонистов GPR119 раскрыты, например, в международной заявке PCT/US2004/001267(опубликованной как WO 03/026661). В восьмом аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(а) приведение соединения, которое стимулирует функционирование G-белок-сопряженного рецептора, где указанный G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) из образца человеческой ДНК с использованием специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и 4;(v) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii); in vitro с энтероэндокринной клеткой позвоночного или с клеткой, способной секретировать GIP,где указанное соединение определено или идентифицировано по способу первого аспекта; и(b) определение способности соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см., например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой клетку поджелудочной железы. Экспрессия GIP в поджелудочной железе описана, например, в Xie et al., Bone 2007. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(а) введение позвоночному соединения, которое стимулирует функционирование G-белоксопряженного рецептора, где указанный G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и 4;(viii) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинук- 20016041 леотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(x) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii); где указанное соединение определено или идентифицировано по способу первого аспекта; и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP,соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию общего GIP в крови, в плазме или в сыворотке. В некоторых воплощениях уровень GIP представляет собой концентрацию биоактивного GIP в крови, в плазме или в сыворотке. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(а) введение позвоночному соединения, которое стимулирует функционирование G-белоксопряженного рецептора, где указанный G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(xi) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(xiii) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii); где указанное соединение определено или идентифицировано по способу первого аспекта; и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы у позвоночного. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы проводят методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA). В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методомDXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Т-показателя в тазобедренном суставе с помощью DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization TechnicalReport Series 921 (2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую геномную ДНК. В некоторых воплощениях полимеразная цепная реакция представляет собой полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Способы проведения ОТ-ПЦР хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую кДНК. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческой ткани, экспрессирующей GPR119. В некоторых воплощениях человеческая ткань, которая экспрессирует GPR119,представляет собой поджелудочную железу или панкреатический островок. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческих клеток, экспрессирующих GPR119. В некоторых воплощениях кДНК получают из бета-клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях кДНК получают из линии клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой SEQ ID NO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях жесткие условия гибридизации включают в себя гибридизацию при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5SSC (1SSC=150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрия цитрат), 50 мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5 раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной, деградированной ДНК из молок лосося, с последующим промыванием при 65 С раствором, содержащим 0,1SSC. Способы проведения гибридизации хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условияхNO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом,гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарнойSEQ ID NO: 1, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью,комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой GPCR. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является частью гибридного белка,включающего в себя G-белок. Способы получения гибридной конструкции GPCR:G хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, международную заявку WO 02/42461). В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях соединение,стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белоксопряженного рецептора, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является липидом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белоксопряженного рецептора, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, представляет собой полипептид. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, представляет собой полипептид при условии, что полипептид не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белоксопряженного рецептора, представляет собой липид. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционирование G-белок-сопряженного рецептора, не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, стимулирующее функционированиеG-белок-сопряженного рецептора, представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного определения структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного предоставления названия или структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения,которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию необязательного получения или синтеза средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состоя- 23016041 ния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта в виде фармацевтического препарата. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В девятом аспекте данное изобретение описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP, соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта, включающий в себя следующие стадии:(а) приведение в контакт соединения, в присутствии которого образуется меньше комплекса Gбелок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, где G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(v) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(vii) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii);in vitro с энтероэндокринной клеткой позвоночного, или с клеткой, способной секретировать GIP,где указанное соединение определено или идентифицировано по способу четвертого аспекта; и(b) определение того, действительно ли соединение стимулирует секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP; где способность тестируемого соединения стимулировать секрецию GIP энтероэндокринной клеткой позвоночного или клеткой, способной секретировать GIP, дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях рецептор содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой ортолог млекопитающих SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является рекомбинантным. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка позвоночного представляет собой энтероэндокринную клетку млекопитающего. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка представляет собой К-клетку. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани тонкого кишечника, обогащенной К-клетками. В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к ткани двенадцатиперстной кишки или тощей кишки (см., например, Sondhi et al., Pharmacogenomics J. (2006), 6:131140). В некоторых воплощениях энтероэндокринная клетка относится к линии энтероэндокринных клеток. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP представляет собой клетку поджелудочной железы. Экспрессия GIP в поджелудочной железе описана, например, Xie et al., Bone 2007. В некоторых воплощениях клетка, способная секретировать GIP, представляет собой рекомбинантную- 24016041 клетку, полученную с целью секреции GIP. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(а) введение позвоночному соединения, в присутствии которого образуется меньше комплекса Gбелок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, где G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(viii) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(x) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:(а') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая по меньшей мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii); где указанное соединение определено или идентифицировано по способу четвертого аспекта; и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень GIP у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень GIP у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP,соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. Данное изобретение также описывает способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP,соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта,включающий в себя следующие стадии:(а) введение позвоночному соединения, в присутствии которого образуется меньше комплекса Gбелок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, где G-белок-сопряженный рецептор содержит аминокислотную последовательность,выбранную из группы, состоящей из:(iii) аминокислот 2-335 SEQ ID NO: 2 при условии, что рецептор не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;(iv) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием образца человеческой ДНК в качестве матрицы и специфических праймеров SEQ ID NO: 3 и SEQ(xi) аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, кодируемой полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(xiii) аминокислотной последовательности по пункту (vi), выбранной из группы, состоящей из:- 25016041 мере приблизительно на 80% идентична SEQ ID NO: 2; и(b') аминокислотной последовательности G-белок-сопряженного рецептора, которая содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот SEQ ID NO: 2;(viii) аминокислотной последовательности конститутивно активной версии G-белок-сопряженного рецептора, описанной как SEQ ID NO: 2; и(ix) биологически активного фрагмента любой из последовательностей, описанных в пунктах (i)(viii); где указанное соединение определено или идентифицировано по способу четвертого аспекта; и(b) определение того, увеличивает ли соединение уровень костной массы у позвоночного; где способность тестируемого соединения увеличивать уровень костной массы у позвоночного дополнительно указывает на то, что тестируемое соединение представляет собой средство, усиливающее секрецию GIP, соединение, пригодное для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединение, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное или млекопитающее представляет собой крысу или мышь с удаленными яичниками. В некоторых воплощениях указанное определение включает в себя измерение уровня костной массы у позвоночного. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы включает в себя измерение уровня костной массы методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение уровня костной массы методом DXA включает в себя измерение Т-показателя методом DXA. В некоторых воплощениях указанное измерение Т-показателя методом DXA включает в себя измерение Тпоказателя в тазобедренном суставе методом DXA. Очевидно, что указанное измерение уровня костной массы можно осуществлять с помощью метода, отличного от DXA, такого как моноэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (SXA) (см., например, World Health Organization Technical Report Series 921(2003), Prevention and Management of Osteoporosis). В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой млекопитающее. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека позвоночное. В некоторых воплощениях позвоночное представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях млекопитающее представляет собой отличное от человека млекопитающее. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую геномную ДНК. В некоторых воплощениях полимеразная цепная реакция представляет собой полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Способы проведения ОТ-ПЦР хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях образец человеческой ДНК представляет собой человеческую кДНК. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческой ткани, экспрессирующей GPR119. В некоторых воплощениях человеческая ткань, которая экспрессирует GPR119,представляет собой поджелудочную железу или панкреатический островок. В некоторых воплощениях кДНК получают из человеческих клеток, экспрессирующих GPR119. В некоторых воплощениях кДНК получают из бета-клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях кДНК получают из линии клеток поджелудочной железы. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой SEQ ID NO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор, кодируемый полинуклеотидом, который можно амплифицировать методом полимеразной цепной реакции, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях жесткие условия гибридизации включают в себя гибридизацию при 42 С в растворе, содержащем 50% формамид, 5SSC (1SSC=150 мМ NaCl, 15 мМ тринатрия цитрат),- 26016041 50 мМ фосфат натрия (рН 7,6), 5 раствор Денхардта, 10% сульфат декстрана и 20 мкг/мл денатурированной, деградированной ДНК из молок лосося, с последующим промыванием при 65 С раствором, содержащим 0,1SSC. Способы проведения гибридизации хорошо известны квалифицированным специалистам. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой SEQ IDNO: 2 или его аллель. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой аллель SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом,гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой ортолог SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной(2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5 нитропиримидин-4-йламин. В некоторых воплощениях GPCR, кодируемый полинуклеотидом, гибридизующимся в условиях высокой жесткости с последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 1, обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой GPCR. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 специфически связывает (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6-[4-(3 изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 представляет собой рецептор, агонистом которого является (2-фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин. В некоторых воплощениях вариант SEQ ID NO: 2 обладает детектируемым уровнем конститутивной активности. В некоторых воплощениях конститутивная активность направлена на увеличение уровня внутриклеточного цАМФ. В некоторых воплощениях конститутивная активность вызывает диспергирование пигмента в меланофорах. В некоторых воплощениях G-белок-сопряженный рецептор является частью гибридного белка,включающего в себя G-белок. Способы получения гибридной конструкции GPCR:G хорошо известны квалифицированным специалистам (см., например, международную заявку WO 02/42461). В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса Gбелок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой низкомолекулярное соединение. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой низкомолекулярное соединение при условии,что оно не является липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой низкомолекулярное соединение при условии, что оно не является полипептидом или липидом. В некоторых воплощениях тестируемое соединение представляет собой полипептид. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой полипептид при условии, что полипептид не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой липид. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, не является антителом или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых воплощениях соединение, в присутствии которого образуется меньше комплекса G-белок-сопряженного рецептора с необязательно меченым известным лигандом рецептора, чем в отсутствие соединения, представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.- 27016041 В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации средств, усиливающих секрецию GIP. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, пригодных для профилактики или лечения состояния, характеризующегося снижением костной массы. В некоторых воплощениях способ представляет собой способ идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой лиганд или агонист эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой известный агонист эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой лиганд или агонист эндогенного рецептора GPR119 человека. В некоторых воплощениях известный лиганд идентичен соединению, раскрытому, например, в международной заявке PCT/US2004/001267 (опубликованной как(опубликованной как WO 2007/003962); международной заявке PCT/GB2006/050182 (опубликованной как WO 2007/003964); или международной заявке PCT/JP02/09350 (опубликованной как WO 03/026661). В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой (2-фтор-4-метансульфонилфенил)-6[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин-4-иламин. В некоторых воплощениях известный лиганд представляет собой эндогенный лиганд эндогенного рецептора GPR119 позвоночного, млекопитающего или человека. В некоторых воплощениях необязательно меченый известный лиганд представляет собой меченый известный лиганд. В некоторых воплощениях меченый известный лиганд представляет собой известный лиганд, меченный радиоактивным изотопом. Способы мечения соединения радиоактивным изотопом,такие как мечение известного лиганда G-белок-сопряженного рецептора, данного изобретения хорошо известны квалифицированным специалистам; см., например, международную заявку WO 04/065380 и также, например, приведенный ниже пример 11. Способы детекции комплекса G-белок-сопряженного рецептора с соединением, заведомо являющимся лигандом G-белок-сопряженного рецептора, хорошо известны квалифицированным специалистам; см., например, международную заявку WO 04/065380 и также, например, приведенный ниже пример 12. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного определения структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях способ дополнительно включает в себя стадию необязательного предоставления названия или структуры средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения,которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию необязательного получения или синтеза средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта, в виде фармацевтического препарата. В некоторых воплощениях указанный способ необязательно включает в себя стадию получения фармацевтической композиции на основе средства, усиливающего секрецию GIP, соединения, пригодного для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, или соединения, которое можно использовать для увеличения костной массы субъекта.- 28016041 Краткое описание чертежей Данное изобретение также иллюстрируется прилагающимися чертежами. На фиг. 1 изображен фармакодинамический анализ влияния агониста GPR119 на уровень GIP в крови мышей дикого типа. 1 А. Динамический анализ, проводимый с использованием соединения 1 в качестве агониста GPR119. 1 В. Динамический анализ, проводимый с использованием соединения 3 в качестве агониста GPR119. 1 С. Дозо-титриметрический анализ, проводимый с использованием соединения 3 в качестве агониста GPR119. На фиг. 2 показано влияние агониста GPR119 на уровень GIP в крови GPR119-дефицитных (с нокаутом по гену GPR119) мышей по сравнению с мышами дикого типа. 2 А. Сравнительный анализ проводят с использованием соединения 1 в качестве агониста GPR119. 2 В. Сравнительный анализ проводят с использованием соединения 2 в качестве агониста GPR119. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение описывает способы применения рецептора GPR119 для идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта. Агонисты рецептораGPR119 можно использовать в качестве терапевтических средств для лечения или профилактики состояния, характеризующегося снижением костной массы, такого как остеопороз, а также для увеличения костной массы субъекта. Настоящее изобретение основано, по меньшей мере, отчасти, на неожиданном открытии, сделанном заявителем, которое заключается в том, что введение агониста GPR119 субъекту,такое как пероральное введение, может влиять на рецептор GPR119, увеличивая уровень GIP у субъекта. Термин "лиганд" в данном описании относится к молекуле (например, тестируемого соединения),которая специфически связывается с полипептидом, таким как GPR119. Лиганд может представлять собой, например, полипептид, липид, низкомолекулярное соединение, антитело. Соединение 1 является типичным лигандом полипептида рецептора GPR119 (химическая структура и химическое название соединения 1 приведены в таблице А). Соединение 1 идентично соединению, раскрытому в международной патентной заявке PCT/US2004/001267 (опубликованной как WO 2004/065380). (2-Фтор-4 метансульфонилфенил)-6-[4-(3-изопропил[1,2,4]оксадиазол-5-ил)пиперидин-1-ил]-5-нитропиримидин 4-иламин (см. табл. А) является типичным лигандом полипептида рецептора GPR119. Соединение 2 является типичным лигандом полипептида рецептора GPR119. Соединение 2 идентично соединению,раскрытому в международной патентной заявке PCT/US2004/022417 (опубликованной какWO 2005/007658). Соединение 3 является типичным лигандом полипептида рецептора GPR119. Соединение 3 идентично соединению, раскрытому в международной патентной заявке PCT/US2004/022327(опубликованной как WO 2005/007647). Эндогенный лиганд представляет собой лиганд, который является эндогенным, природным лигандом нативного полипептида, такого как GPR119. Лиганд может представлять собой "антагонист", "агонист", "частичный агонист", "обратный агонист" или т.п. Таблица А Термин "агонист" в данном описании относится к средству (например, лиганду, тестируемому соединению), которое, связываясь с GPCR, активирует его и инициирует внутриклеточный ответ, опосредованный GPCR. Термин "частичный агонист" в данном описании относится к средству (например, лиганду, тестируемому соединению), которое, связываясь с GPCR, активирует его и инициирует внутриклеточный ответ, опосредованный GPCR, но в меньшей степени, или на более низком уровне, чем полный агонист. Термин "антагонист" относится к средству (например, лиганду, тестируемому соединению), которое связывается, предпочтительно конкурентно, с GPCR приблизительно по тому же участку, что и агонист или частичный агонист, но не вызывает внутриклеточный ответ, инициируемый активной формойGPCR, и, следовательно, может ингибировать внутриклеточный ответ под действием агониста или частичного агониста. Антагонист обычно не уменьшает фоновый внутриклеточный ответ в отсутствие агониста или частичного агониста. Термин "обратный агонист" относится к средству (например, лиганду, тестируемому соединению),которое связывается с GPCR и уменьшает фоновый внутриклеточный ответ, инициируемый активной
МПК / Метки
МПК: G01N 33/50
Метки: соединений, идентификации, gpr119, которые, субъекта, способы, использовать, костной, массы, применения, можно, рецептора, увеличения
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-16041-sposoby-primeneniya-receptora-gpr119-dlya-identifikacii-soedinenijj-kotorye-mozhno-ispolzovat-dlya-uvelicheniya-kostnojj-massy-subekta.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способы применения рецептора gpr119 для идентификации соединений, которые можно использовать для увеличения костной массы субъекта</a>
Конъюгаты, которые можно использовать при лечении рака предстательной железы
Номер патента: 2745
Опубликовано: 29.08.2002
Авторы: Фенг Донг-Мей, Брэди Стефен Ф., Гарски Виктор М.
МПК: A61P 35/00, C07K 14/47, A61K 38/08...
Метки: можно, рака, конъюгаты, лечении, предстательной, которые, использовать, железы
Формула / Реферат:
1. Конъюгат формулы I где олигопептид представляет собой олигопептид, который специфически распознается свободным специфическим агентом предстательной железы (PSA) и способен протеолитически расщепляться ферментативной активностью свободного специфического антигена предстательной железы, XL выбран из связи; R выбран из a) водорода; b) -(C=O)R1a; c) d) е) f) этоксискварата; и g) котининила; R1 и R2 независимо выбраны из водорода, ОН,...
Предупреждение потери и восстановление костной массы некоторыми агонистами простагландина
Номер патента: 3529
Опубликовано: 26.06.2003
Авторы: Кэмерон Кимберли О'киф, Лефкер Брюс Аллен, Томпсон Дейвид Дуэйн, Ки Хуа Зу, Росэйти Роберт Луис
МПК: A61K 31/18, C07C 311/06, A61P 19/08...
Метки: потери, предупреждение, простагландина, массы, восстановление, некоторыми, костной, агонистами
Формула / Реферат:
1. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где n равно числу от 0 до 5; группировка CH3-(CH2)n- возможно моно-, ди- или тризамещена по углероду независимо гидрокси, (C1-C4)алкилом или галогеном-; Q представляет собой -(C2-C6)алкилен-W-(C1-C3)алкилен-, -(C3-C8)алкилен-, причем указанный -(C3-C8)алкилен- возможно замещен заместителями в количестве вплоть до четырех, независимо выбранными из фтора- или...
Предупреждение потери и восстановление костной массы некоторыми агонистами простагландина
Номер патента: 5161
Опубликовано: 30.12.2004
Авторы: Томпсон Дейвид Дуэйн, Кэмерон Кимберли О'киф, Росэйти Роберт Луис, Лефкер Брюс Аллен, Ки Хуа Зу
МПК: A61K 31/197, C07C 233/47, A61P 19/10...
Метки: костной, агонистами, простагландина, предупреждение, некоторыми, восстановление, массы, потери
Формула / Реферат:
1. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, где Y представляет собой H или (C3-C7)циклоалкил; n равно числу от 0 до 5; группировка Y-(CH2)n-C(O)- возможно моно-, ди- или тризамещена по углероду независимо гидрокси или галогеном-; Q представляет собой -(C4-C8)алкилен- или -(C1-C5)алкилен-X; X представляет собой 5- или 6-членное ароматическое кольцо, которое возможно имеет один гетероатом, независимо...
Рецепторный комплекс тканезащитных цитокинов, способы идентификации тканезащитных соединений и их применение
Номер патента: 9745
Опубликовано: 28.04.2008
Авторы: Брайнс Майкл, Фьордализо Фбио, Педерсен Ларс Остергаард, Нильсен Метте, Серами Энтони, Гервин Енс, Сагер Томас, Гецци Пьетро, Коулман Томас, Фрателли Маддалена, Ляйст Марсель
МПК: A61K 38/19, C07K 14/505, A61K 39/00...
Метки: применение, соединений, тканезащитных, способы, рецепторный, идентификации, комплекс, цитокинов
Формула / Реферат:
1. Способ идентификации соединения, которое модулирует тканезащитную активность, включающий в себя: (a) приведение тест-соединения в контакт с рецепторным комплексом тканезащитных цитокинов; (b) измерение уровня активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов; (c) идентификацию тест-соединения, которое повышает или понижает уровень активности рецепторного комплекса тканезащитных цитокинов по сравнению с уровнем активности рецепторного...
Пептиды, которые связываются с рецептором к эритропоэтину, и способы их применения
Номер патента: 10099
Опубликовано: 30.06.2008
Авторы: Земеде Дженет, Тумелти Дэвид, Лалонде Гай, Шац Петер Джей, Иин Кан, Палани Балу, Хольмез Кристофер П.
МПК: A61P 7/06, C07K 14/505, A61K 38/18...
Метки: применения, пептиды, связываются, эритропоэтину, рецептором, способы, которые
Формула / Реферат:
1. Пептид, содержащий примерно от 17 до 40 остатков аминокислот и содержащий последовательность аминокислот где Х0 обозначает остаток, выбранный из метионина (М) и метилового эфира гомосерина (Hsm), a X1 обозначает остаток, выбранный из триптофана (W), 1-нафтилаланина (1-nal) и 2-нафтилаланина (2-nal), где указанный пептид связывается с рецептором к эритропоэтину (ЭПО-рецептором) и активирует его. 2. Пептид согласно п.1, отличающийся тем, что...
Предыдущий патент: Нейропротективное соединение dlhw и его применение
Следующий патент: С-гликолипиды с улучшенным профилем th-1
Случайный патент: Двухколесная ходовая часть для направляемых колеёй транспортных средств