Способ лечения заболеваний, связанных с tweak

011607 Область техники Настоящее изобретение относится к способам и агентам для лечения заболеваний, связанных сTWEAK, включая заболевания сердца, печени, почек, легких, жировой ткани, скелетных мышц, нервные заболевания, заболевания костей, хрящей, кожи, желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы,репродуктивных органов и соединительной ткани. Данное изобретение также относится к способам идентификации агонистов или антагонистов TWEAK для лечения заболеваний, связанных с TWEAK. Кроме того, данное изобретение относится к трансгенным животным, которые экспрессируют экзогенную ДНК, кодирующую полипептид TWEAK или его фрагменты, аналоги или мутеины, и к способам использования таких животных для идентификации агонистов или антагонистов TWEAK. Данное изобретение также относится к способам диагностики заболеваний, в основе которых лежит экспрессияTWEAK. Данное изобретение также относится к способам воздействия на клеточную пролиферацию или дифференциацию клеток-предшественников, используя полипептиды TWEAK, агонисты или антагонисты TWEAK. Предпосылки изобретения Члены семейства лигандов фактора некроза опухоли (TNF), называемые так из-за своего структурного сходства с TNF-, являются ключевыми компонентами различных процессов, таких как воспалительные ответы, клеточный иммунитет и апоптоз. Лиганды TNF могут действовать местно, как мембранно-связанные белки типа II, путем прямого контакта клетка-клетка или как секреторные белки с аутокринной, паракринной или эндокринной функциями. Члены семейства TNF связываются с членами семейства рецепторов TNF (TNF-R) посредством их С-концевого экстрацеллюлярного домена. Различные члены семейства TNF включают в себя TNF, лимфотоксины (LT), Fas, CD27, CD30, CD40, 4-1 ВВ, ОХ-40,TRAMP, CAR-1, TRAIL, GITR, HVEM, остеопротегрин, NGF, TRAIN, Kay (BAFF), APRIL и TWEAK(имеющий родство с TNF и обладающей низкой способностью индуцировать клеточную гибель). Характерным свойством этой семьи рецепторов цитокинов является богатый цистеином экстрацеллюлярный домен, первоначально обнаруженный при молекулярном клонировании двух различных рецепторов TNF. Это семейство генов кодирует гликопротеины, характерные для трансмембранных белков типа I, имеющие лигандсвязывающий экстрацеллюлярный домен, один участок, проходящий через мембрану, и цитоплазматический участок, вовлеченный в активацию клеточных функций. Область связывания лиганда, богатая цистеином, представляет собой коровый домен, прочно соединенный дисульфидными мостиками, который в зависимости от конкретного члена семейства, многократно повторяется. Большинство рецепторов имеют четыре домена, хотя возможно наличие только одного домена, а возможно и шести. Члены семейства TNF играют роль в регуляции иммунной системы, контролируя клеточное выживание и дифференциацию, а также системы экстренной иммунной защиты организма, такой как воспаление. Неоднократные попытки в данной области использовать члены семейства TNF для терапевтических целей могут дать уникальные способы контроля над заболеванием. Например, некоторые лиганды этого семейства могут непосредственно вызывать апоптоз многих трансформированных клеток, например, LT,TNF, лиганд Fas и TRAIL. Активация рецептора с помощью Fas и возможно TNF и CD30 может индуцировать клеточную гибель в нетрансформированных лимфоцитах, проявляя иммунорегуляторную функцию. Способность индуцировать запрограммированную гибель клеток является важным и хорошо изученным свойством некоторых членов семейства TNF. Апоптоз, вызываемый Fas, по-видимому, играет роль в регуляции аутореактивных лимфоцитов на периферии и возможно в тимусе. Также системы TNF и CD30 вовлечены в выживание Т-клеток и клеток анапластической крупноклеточной лимфомы. Гибель этой клеточной линии в ответ на рецепторный сигнал TNF, Fas или LT-S характерна для апоптоза. Семейство лигандов TNF на основании способности индуцировать гибель клеток может быть разделено на три группы. Первая, к которой относятся TNF, лиганд Fas и TRAIL, может эффективно индуцировать гибель клеток многих линий и их рецепторы наиболее вероятно обладают стандартными доменами клеточной гибели. Предположительно, к этой категории также относится лиганд DR-3(TRAMP/WSL-1). К другой группе относятся лиганды, такие как TWEAK, лиганд CD30 и LTalb2, которые инициируют слабый сигнал клеточной гибели в отношении ограниченного небольшого числа клеток. На основании исследований этих систем было сделано предположение, что существует отдельный механизм слабого сигнала гибели клеток. Наконец, есть члены, которые не могут эффективно вызывать гибель клеток. Вероятно, все группы могут оказывать антипролиферативные эффекты на некоторые типы клеток, индуцируя вслед за этим клеточную дифференциацию, например, CD40. Обычно, гибель клеток инициируется вслед за агрегацией доменов клеточной гибели, которые находятся в цитоплазматической части рецепторов TNF. Домен гибели клеток регулирует сборку различных компонентов, передающих сигнал, что приводит к активации каспазного каскада. У некоторых рецепторов канонические домены гибели клеток отсутствуют, например, у рецептора LTb и CD30, другие могут индуцировать гибель клеток, хотя и слабо. Напротив, передача сигналов через другие пути, например, через CD40, необходима для поддержания жизни клетки. До сих пор существует необходимость в дополнительной идентификации и описании функций членов семейства TNF, способствуя, таким обра-1 011607 зом, разработке новых подходов к лечению заболеваний, опосредованных семейством TNF.TWEAK был выделен при скрининге РНК, гибридизованной с эритропоэтиновым зондом. Chicheportiche et al., J. Biol. Chem. 272: 32401-32410 (1997). Пептиды мыши и человека обладают необычно высококонсервативной последовательностью, включающей 93% идентичных аминокислот в рецепторсвязывающем домене. Было показано, что TWEAK эффективно секретируется клетками, высокоэкспрессируемыми в различных тканях, включая сердце, мозг, плаценту, легкие, печень, скелетную мускулатуру, почки, поджелудочную железу, селезенку, лимфатические узлы, тимус, аппендикс и лимфоциты периферической крови. Одним известным рецептором TWEAK является Fn14, ген раннего ответа, регулируемый фактором роста, который снижает клеточную адгезию на экстрацеллюлярном матриксе и уменьшает рост, стимулируемый белками сыворотки, и миграцию (Meighan-Mantha et al., J. Biol. Chem. 274: 33166-33176(1999. Было показано, что Fn14 индуцируется действием FGF, сыворотки теленка и форболового эфира и экспрессируется с достаточно высокими уровнями в тканях сердца, почек, легких, кожи, скелетных мышц, яичников и поджелудочной железы, а также на модели гепатоцеллюлярной карциномы и других линий клеток рака, и с низкими уровнями в здоровых тканях почек.TWEAK вовлечен во многие биологические процессы. Например, было показано, что клетки НТ 29,обработанные IFN- и TWEAK, подвергаются апоптозу; хотя TWEAK обладает невысокой способностью индуцировать апоптоз и индуцирует его лишь у небольшого количества клеточных типов. Chicheporticheet al., J. Biol. Chem. 272: 32401-32410 (1997). В отличие от этого, было показано, что TWEAK индуцирует ангиогенез и пролиферацию эндотелиальных клеток в VEGF-зависимом пути. Lynch et al., J. Biol. Chem. 274: 8455-8459 (1999). Астроциты специфически связываются и стимулируются TWEAK. TWEAK может инфильтрировать воспаленный мозг, воздействуя на поведение астроцитов. Астроциты под действиемTWEAK секретируют большое количество IL-6 и IL-8, а также повышают экспрессию ICAM-1. Saas etTWEAK также вовлечен в регуляцию иммунной системы. При стимуляции IFN- моноциты быстро экспрессируют TWEAK, и антитела против TWEAK, в частности, ингибируют их цитотоксическую активность в отношении клеток сквамозной карциномы человека. Сочетание антител против TWEAK и антител против TRAIL практически полностью ингибирует цитотоксичность. Nakayama et al., J. Exp.Med. 192: 1373-1379 (2000). Наоборот, мРНК TWEAK немедленно исчезает у мышей при введении липополисахарида (LPS), индуктора иммунно-воспалительных ответов. Более того, мРНК TWEAK также снижается при аутоиммунной гемолитической анемии и системной красной волчанке на моделях мышей. Эти данные дают основание предполагать, что подавление экспрессии TWEAK является важным звеном при остром и хроническом воспалении. Chicheportiche et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 279:162-165(2000). До последнего времени в данной области не было достигнуто полного понимания о состояниях или заболеваниях, связанных с экспрессией и активностью TWEAK, включая роль TWEAK как при воспалительных, так и в невоспалительных состояниях. Краткое описание изобретения Настоящее изобретение относится к роли TWEAK в усилении тяжести и в прогрессировании различных патологических состояний, включая заболевания различных тканей и систем органов. Такие патологические состояния включают в себя острую патологию сердца, хроническую сердечную недостаточность, невоспалительную дилатационную кардиомиопатию, застойную сердечную недостаточность,гиперплазию эпителиальных клеток печени, гибель гепатоцитов, фиброз печени, вакуолизацию гепатоцитов, другие повреждения печени, патологию желчных протоков, включая гиперплазию желчных протоков, воспалительные заболевания почек, такие как мультиочаговое воспаление, заболевания почек невоспалительного характера, такие как тубулярная нефропатия, гиперплазия канальцев, гломерулярные кисты, гломерулярная нефропатия, синдром Альпорта, почечная тубулярная вакуолизация, образование гиалиновых цилиндров в почках, почечный фиброз, и воспалительные заболевания легких. В настоящем изобретении определена причинная связь между молекулами TWEAK и некоторыми заболеваниями сердца, печени, почек и легких. Изобретение также описывает связь между TWEAK и поведением клеток-предшественников тканей печени, почечных канальцев, клеток кожи, адипоцитов, скелетных мышц,хрящей и костей, а также клеток различных типов соединительной ткани, таких как стромальные клетки костного мозга и фибробласты. В одном из вариантов осуществления изобретение относится к способам лечения заболеваний, связанных с TWEAK, т.е. заболеваний, протекающих с поражением или другими патологическими состояниями тканей, в которых экспрессируется рецептор TWEAK, например FN14. Эти состояния включают в себя фиброз, кардиомиопатию и заболевания почек, легких, печени, кожи, скелетных мышц, метаболизм липидов (например, ожирение), заболевания желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы, репродуктивных органов, нервной ткани (включая нейродегенерацию), хрящей, кости и соединительной ткани. В предпочтительном варианте осуществления заболевание, связанное с TWEAK, является по своей природе невоспалительным. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобре-2 011607 тение относится к способам лечения состояний, связанных с TWEAK, влияя на взаимодействие полипептида TWEAK с его клеточным рецептором. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к агонистам или антагонистомTWEAK. Такие агонисты или антагонисты TWEAK (т.е. ингибиторы) могут быть антителами противTWEAK или их производными; антителами против рецептора TWEAK или их производными; полипептидными фрагментами TWEAK; аналогами полипептида TWEAK; мутеинами TWEAK; миметикамиTWEAK; белками слияния TWEAK; полипептидными фрагментами рецептора TWEAK; полипептидными аналогами рецептора TWEAK; мутеинами рецептора TWEAK; миметиками рецептора TWEAK; белками слияния рецептора TWEAK; органическими соединениями; и неорганическими соединениями. В других вариантах осуществления данное изобретение относится к агонистам или антагонистамTWEAK и фармацевтическим композициям, которые могут быть использованы для лечения пациентов,нуждающихся в регенерации или обновлении ткани. Изобретение также относится к применению агонистов или антагонистов TWEAK для модуляции поведения популяций клеток-предшественников in vivo или in vitro. Клетки-предшественники могут быть клетками-предшественниками различных типов клеток печени, почечных канальцев, кардиомиоцитов, различных типов клеток легких, различных типов клеток кожи, различных типов клеток скелетных мышц, адипоцитов, различных типов клеток желудочнокишечного тракта, различных типов клеток поджелудочной железы, различных типов клеток нервной ткани, различных типов клеток хряща и кости, различных типов клеток соединительной ткани, включая клетки стромы в костном мозге и фибробласты. Агонисты или антагонисты TWEAK и фармацевтические композиции, содержащие их, могут вводиться in vivo для стимуляции регенерации и обновления ткани во время болезни или поражения ткани, включая, но ими не ограничиваясь, заболевания, вызванные токсическим поражением, вирусным, действием химиотерапии или радиации, и генетические дегенеративные расстройства. В другом варианте осуществления агонисты или антагонисты TWEAK и их фармацевтические композиции могут использоваться в сочетании с клеточной терапией стволовыми клетками или клетками-предшественниками для регенерации ткани и систем органов. В еще одном варианте осуществления под действием агонистов или антагонистов TWEAK и их фармацевтических композиций может увеличиваться численность популяции стволовых клеток или клеток-предшественников in vitro. Популяции клеток-предшественников, численность которых увеличиваются при использовании агонистов или антагонистов TWEAK, могут использоваться для трансплантации в организм при необходимости регенерации или обновления ткани. В других вариантах осуществления данное изобретение относится к способу идентификации агонистов или антагонистов TWEAK, которые могут быть использованы как терапевтические агенты для лечения заболеваний, связанных с TWEAK. В другом варианте осуществления данное изобретение относится к трансгенным животным, экспрессирующим экзогенные ДНК, кодирующие полипептидыTWEAK. Другой вариант осуществления данного изобретения включает в себя применение TWEAK как молекулярного маркера заболевания. Краткое описание фигур Фиг. 1: Роль TWEAK в развитии дилатационной кардиомиопатии. На фиг. А показан тромбоз правого предсердия и желудочка трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg), а также сильнейшая дилатация. На фиг. В для сравнения показано нормальное сердце. Фиг. 2: Сверхсекреция TWEAK в сердце с индуцированным ремоделированием. Поперечный срез сердца при 10 Х увеличении при окрашивании гематоксилином/эозином на 20 день после инфицирования взрослых мышей C57BL/6 аденовирусным вектором, содержащим ДНК sTWEAK мыши, по сравнению с сердцем мышей, инфицированных конструкцией аденовирус-GFP, используемой в качестве контроля. Фиг. 3: Гиперплазия желчных путей и овальных клеток, индуцированная TWEAK, показанная на трансгенных мышах FL-TWEAK (Tg) по сравнению с нетрансгенным потомством (NTg) в возрасте 2 недели и 7 месяцев. Фиг. 4: Гиперплазия желчных путей и овальных клеток, индуцированная TWEAK, показанная усиленным окрашиванием mAb A6, которые специфичны в отношении маркеров в эпителиальных клетках желчных протоков и овальных клетках трансгенных мышей FL-TWEAK (Tg) по сравнению с нетрансгенным потомством (NTg). Фиг. 5: TWEAK индуцирует гиперплазию овальных клеток, что показывает присутствие больших овальных клеток в портальной области трансгенных мышей FL-TWEAK (Tg). Фиг. 6: Вакуоляризация гепатоцитов, вызванная TWEAK, у трансгенных мышей FL-TWEAK (Tg) по сравнению с нетрансгенным потомством (NTg). Фиг. 7: Уровни TWEAK в сыворотке мышей, инфицированных аденовирусным вектором, содержащим ДНК TWEAK мыши. Фиг. 8: Сверхэкспрессия TWEAK в печени индуцирует гибель гепатоцитов и гиперплазию желчных путей. Поперечный срез печени при 20X увеличении, окрашенный гемтоксилином/эозином, на 3 и 11 день после инфицирования взрослых мышей C57BL/6 аденовирусным вектором, содержащим ДНКTWEAK мыши, по сравнению с печенью мышей, инфицированных конструкцией аденовирус-GFP, ис-3 011607 пользуемой в качестве контроля. Фиг. 9: Рецептор Fn14 TWEAK индуцируется после индукции поражения печени с помощью СС 14 у мышей. Гибридизация in situ мРНК Fn14 в печени нормальных мышей и в печени с индуцированным поражением с помощью СС 14 показывает незначительную экспрессию или отсутствие экспрессии в печени нормальных взрослых мышей и значительную индукцию экспрессию Fn14 после поражения. Срезы,окрашенные гематоксилином и эозином (НЕ), соответственно показывают нормальную здоровую печень и пораженную СС 14 ткань печени. Фиг. 10: Экспрессии Fn14 супрессируется в эпителиальных клетках желчного протока на мышиной модели лигирования желчного протока, что показано увеличением окрашивания антисмылового РНК зонда в отношении Fn14, используя гибридизацию in situ. На срезах, окрашенных гематоксилином и эозином (НЕ), видны соответствующие области при микроскопии по методу светлого поля. Фиг. 11: Поперечный срез почек трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg) по сравнению с почкой нетрансгенной мыши (NTg) в возрасте 2 недели, 8 недель и 7 месяцев. Результаты показывают базофильные канальцы в почке мыши TWEAK Tg в возрасте 8 недель и 7 месяцев и дилатацию мочевой области в клубочках, т.е. гломерулярные кисты, с прилежащими базофильными канальцами в возрасте 7 месяцев. Фиг. 12: Поперечный срез почек трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg), окрашенный НЕ. А. Показана гломерулярная нефропатия с базофильным эпителием прилегающих проксимальных канальцев. В. Сегментарная гиперплазия мезангиальных клеток, гипертрофия эпителия капсулы и утолщение капсулы. Фиг. 13: Серийные срезы почек трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg), окрашенные НЕ (сверху) и на ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA) (снизу). Базофильные канальцы соответствуют канальцам с экспрессией PCNA, т.е. пролиферирующим канальцам. Фиг. 14: Серийные срезы почек трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg), окрашенные НЕ, лектином,полученным из Т. Purpureas (маркер проксимальных канальцев) и лектин, полученный из А. Hypogaea,(маркер дистальных канальцев). Результаты показывают, что базофильные канальцы не экспрессируют никаких эпителиальных маркеров. Фиг. 15: Сверхэкспрессия TWEAK в почках индуцирует гиперплазию канальцев и гломерулопатию. Поперченный срез почек с 20X и 40X увеличением при окрашивании гематоксилином/эозином на 11 день после инфицирования взрослых мышей C57BL/6 аденовирусным вектором, содержащим ДНКsTWEAK мыши, по сравнению со срезом почек мышей, инфицированных конструкцией аденовирусGFP, используемой в качестве контроля. Фиг. 16: мРНК TWEAK широкоэкспрессируется в почках у взрослой мыши дикого типа. Поперечный срез почек с 5 Х увеличением при окрашивании гематоксилином или при микроскопии по методу темного поля после гибридизации in situ со смысловыми или антисмысловыми TWEAK зондами. Фиг. 17: мРНК Fn14 экспрессируется в проксимальных канальцах внутреннего коркового слоя взрослой мыши дикого типа. Поперечный срез почек с 5 Х увеличением при окрашивании гематоксилином или при микроскопии по методу темного поля после гибридизации in situ с смысловыми или антисмысловыми Fn14 зондами. Фиг. 18: Роль TWEAK при развитии фиброза почек о чем говорит подавление экспрессии мРНКFn14 в почках при болезне Альпорта. Кратное увеличение уровней мРНК Fn14 показано на двух разных мышах с мутацией, приводящей к болезни Альпорта, являющимися животными дикого типа в возрасте 4,5, 6 и 7 недель. Уровни мРНК определяли гибридизацией с участком гена, содержащим нуклеотидную последовательность, соответствующую части гена Fn14. На 4 и 7 недели показаны результаты повторных экспериментов для каждой из двух мышей (блоки диаграммы обозначены как мышь 1 повтор и мышь 2 повтор, соответственно). На 7 неделе показано снижение мРНК Fn14 при двух вариантах ингибирования заболевания, т.е. при введении sTGFR-Fc и у мышей с нокаутом VLA-1 (на фиг. 18 показано либо введение двум разным мышам sTGFR-Fc (введение sTGFbR), либо две разные мыши Альпорт/VLA-l KO(Альпорт/VLA-1KO. Фиг. 19: Введение антагониста TWEAK при односторонней обструкции мочеточника (UUO) на мышиной модели фиброза почек значительно снижало фиброз почки. Морфометрическая оценка области, окрашенной в синий цвет (фиброзная область) при окрашивании Trichrome-Masson парафиновых срезов почек показал, что содержание коллагена снижено в образцах почек AB.G11 (моноклональное Ab против TWEAK) до сходных уровнях, наблюдаемых в образцах почек sTGF-R-Ig, используемых в качестве положительного контроля. Напротив, в почках, обработанных антителом хомячка (НА 4/8), используемым в качестве изотипического контроля, не наблюдается снижения фиброза почек, как и в почках,обработанных носителем (PBS). Фиг. 20: Трансгенный TWEAK вызывает грануломатозное и лимфогистиоцитарное воспаление в легких. А. Поперечный срез легкого трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg), окрашенный НЕ. В. Поперченный срез легкого мыши sTWEAK Tg, окрашенный НЕ. Фиг. 21: мРНК TWEAK экспрессируется в клетках, расположенных в бронхиолах и альвеолах взрослых мышей дикого типа. Поперечный срез легкого с 10 Х увеличением при окрашивании гематоксилином или при микроскопии по методу темного поля после гибридизации in situ со смысловыми или-4 011607 антисмысловыми TWEAK зондами. Фиг. 22: мРНК Fn14 экспрессируется в бронхиолах и альвеолах взрослых мышей дикого типа. Поперечный срез легкого с 10 Х увеличением при окрашивании гематоксилином или при микроскопии по методу темного поля после гибридизации in situ со смысловыми или антисмысловыми Fn14 зондами. Фиг. 23: Ингибиторный эффект TWEAK на дифференциацию адипоцитов 3T3-L1 in vitro. Клетки 3T3-L1 индуцировали для дифференциации, используя стандартный способ. На 0 день клетки не обрабатывали, обрабатывали контрольным агентом (рекомбинантный растворимый CD40L-FLAG, 100 нг/мл) или различными вариантами TWEAK, 100 нг/мл: рекомбинантный растворимый TWEAK-FLAG человека, рекомбинантный растворимый TWEAK человека, Fc-TWEAK человека, вместе с дексаметазоном и инсулином и ежедневно пополняли. К первой экспериментальной группе одновременно с добавлениемFc-hTWEAK также добавляли блокирующее mAb против TWEAK AB.G11. Клетки окрашивали Oil-red 0 на 7 день. Фиг. 24: Ингибиторный эффект TWEAK на миогенез in vitro. Миобласты С 2 С 12 растили приблизительно до конфлюэнтности в среде для роста, основанной на DMEM, и на 0 день среду заменяли средой для дифференцировки с низким содержанием сыворотки, которая содержала 2% лошадиной сыворотки,для запуска дифференциации. Клетки не обрабатывали или обрабатывали Fc-hTWEAK (100 нг/мл) на 0 день. Образование мышечных трубочек оценивали, используя фазоконтрастную микроскопию, и делали снимки на 6 день дифференциации. К другим экспериментальным группам одновременно с добавлениемFc-hTWEAK добавляли Fn14-Fc или нейтрализующее антитело против TNF, таким образом, демонстрируя тот факт, что ингибиторный эффект Fc-hTWEAK был специфичен для TWEAK и не вызывался TNF. Фиг. 25: TWEAK может связывать мезенхимальные стволовые клетки человека. Мезенхимальные стволовые клетки человека (hMSCs) инкубировали с рекомбинантным белком Fc-TWEAK, а затем с РЕконъюгированными вторыми антителами козла против Fc человека или козла против Fc мыши. Способность Fc-TWEAK связываться с hMSCs определяли с помощью анализа, сортирующего флуоресцентно активированные клетки (FACS). Фоновое окрашивание получали окрашиванием только вторыми антителами (2-е только). Подробное описание изобретения Если не указано иного, научные и технические термины, использующиеся в настоящем изобретении, имеют значения, которые в большинстве случаев понятны специалистам в данной области. Более того, если в данном контексте не требуется иного, термины, использующиеся в единственном числе, могут включать в себя множественное число, а термины, использующиеся во множественном числе, могут включать в себя единственное число. Как правило, номенклатура, использующаяся при описании клеточной и тканевой культуры, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики, вирусологии и химии белков и нуклеиновых кислот и гибридизации и их способов, хорошо известна специалистам в данной области и обычно используется в данной области. Способы и методы по настоящему изобретению обычно осуществляют в соответствии с обычными способами, хорошо известными в данной области, и они описаны в различных общих и более специфических ссылках, которые цитируются и обсуждаются на протяжении настоящего подробного описания, если не указано иного. См., например,Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N. Y. (1989) и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992); и Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N. Y. (1990), которые включены в качестве ссылки. Ферментативные реакции и способы очистки, осуществляемые в соответствии со способами, указанными производителями, являются стандартными для данной области или такими, как описаны здесь. Номенклатура, использующая при описании лабораторных способов и подходов аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, описанных здесь, хорошо известна и, как правило, используется в данной области. При химическом синтезе, химическом анализе, получении фармацевтических препаратов, композиций и способах доставки и лечения пациентов используются стандартные методы. Для того чтобы данное изобретение, описанное здесь, было более понятно, ниже приводится подробное описание. В описании используются следующие термины. Антитело относится к интактному иммуноглобулину или к его антигенсвязывающей части, которая конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. Антигенсвязывающие части могут быть получены способами рекомбинантной ДНК или ферментативным или химическим расщеплением интактных антител. Антигенсвязывающие части включают в себя, в числе других, Fab, Fab', F(ab')2,Fv, dAb и участки, определяющие комплементарность (CDR), антитела с одной цепью (scFv), химерные антитела, диатела и полипептиды, которые содержат по крайней мере часть иммуноглобулина, которая является достаточной для осуществления специфического связывания антигена с этим полипептидом. Фрагмент Fab является моновалентным фрагментом, состоящим из доменов VL, VH, CL и СН 1; фрагмент F(ab')2 является бивалентным фрагментом, содержащим два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; фрагмент Fd содержит домены VH и CH1; фрагмент Fv содержит домены VL и VH одного плеча антитела; и фрагмент dAb (Ward et al., Nature 341: 544-546, 1989) содерит домен VH. Антитело с одной цепью (scFv) представляет собой антитело, в котором области VL и VH-5 011607 образуют пары с получением моновалентных молекул посредством синтетического линкера, который дает им возможность находиться в виде единичной белковой цепи (Bird et al., Science 242: 423-426 (1988) и Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883, (1988. Диатела представляют собой бивалентные, биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессированы на одной полипептидной цепи, но из-за того, что линкер слишком короткий, чтобы образовать пару между этими двумя доменами на одной цепи, домены вынуждены образовывать пары с комплементарными доменами другой цепи и образовывать два сайта, связывающих антиген (см., например, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993), и Poljak et al., Structure 2: 1121-1123 (1994. Один или несколько CDR могут встраиваться в молекулу с помощью ковалентной или нековалентной связи с образованием иммуноадгезина. Иммуноадгезин может содержать CDR как часть длинной полипептидной цепи, может ковалентно присоединять CDR с другой полипептидной цепью или может содержать CDR с образованием нековалентной связи. CDR позволяют иммуноадгезину специфически связываться с конкретным интересующими антигеном. Антитело может содержать один или несколько сайтов связывания. Если антитело содержит более одного сайта связывания, сайты связывания могут быть идентичны друг другу или различаться между собой. Например, природный иммуноглобулин имеет два идентичных сайта связывания, антитело с одной цепью или фрагмент Fab имеет один сайт связывания, тогда как биспецифичные или бифункциональные антитела имеют два различных сайта связывания. Под набором антител понимают все различные виды антител животных или человека. Разнообразие наборов антител является результатом, в числе прочих, рекомбинации генов иммуноглобулинов, различных объединений генов иммуноглобулинов, активности концевой диокситрансферазы и соматических гипермутаций. Химерными антителами являются антитела, которые содержат аминокислотные последовательности других белков и, таким образом, изменены по сравнению с природной формой. Химерные антитела сохраняют по крайней мере одну область аминокислотной последовательности природного антитела,обычно область, содержащую антигенсвязывающий фрагмент (Fab). Примеры химерных антител включают в себя, но ими не ограничиваются, биспецифические антитела и антитела, полученные слиянием с последовательностями других белков, не являющихся иммуноглобулинами. Цис-регуляторный элемент обычно относится к последовательностям, которые регулируют индуцибильную или конститутивную экспрессию последовательностей генов в специфических условиях или в специфических клетках. Примеры клеточных процессов, экспрессия которых регулируются контрольными последовательностями, включают в себя, но ими не ограничиваются, транскрипцию генов,трансляцию белков, сплайсинг информационной РНК, переключение изотипов иммуноглобулинов, гликолизилирование белков, расщепление белков, секрецию белков, внутриклеточную локализацию белков и экстрацеллюлярный белковый хоминг. Цитокины обычно относятся к сигнальным молекулам иммунной системы. Цитокины включают в себя, но ими не ограничиваются, интерлейкины (IL), трансформирующие факторы роста (TGF), фактор некроза опухолей (TNF), лимфотоксины (LT), интерфероны, гранулоцит-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), макрофагальный CSF, гранулоцитарный CSF и факторы, ингибирующие миграцию. Эмбриональные стволовые (ES) клетки относятся к плюрипотентным или мультипотентным клеткам, которые при введении в бластоцит могут способствовать образованию многих или всех тканей животного в пренатальный, постнатальный период или во взрослом состоянии. Животные, которые образуются при введении в бластоцит ES клеток, часто называются химерными животными, так как их соматические и/или зародышевые клетки часто получены как из доноров бластоциста, так и введенных ES клеток. Одним из важных свойств ES клеток является их способность к образованию зародышевых линий животных, что позволяет давать любые желаемые наследуемые свойства потомству химерных животных. Бессмертные ES клетки являются мощным набором для создания животных с заданными нарушениями эндогенных последовательностей генов или для создания животных с чужеродными генами(трансгенные животные). Последовательности, контролирующие экспрессию относятся к последовательностям, которые позволяют осуществлять основную или индуцибильную экспрессию последовательностей генов в специфических условиях или в специфических клетках. Примеры клеточных процессов, экспрессия которых регулируются контрольными последовательностями, включают в себя, но ими не ограничиваются,транскрипцию генов, трансляцию белков, сплайсинг информационной РНК, переключение изотипов иммуноглобулинов, гликолизилирование белков, расщепление белков, секрецию белков, внутриклеточную локализацию белков и экстрацеллюлярный белковый хоминг. Белки слияния относятся к химерным белкам, содержащим аминокислотные последовательности двух или более различных белков. Обычно белки слияния получают рекомбинантными способами in vitro, хорошо известными специалисту в данной области. Однако белки, полученные слиянием, могут быть результатом кроссовером in vivo или других рекомбинантных событий. Молекулы иммуноглобулина человека относятся к иммуноглобулиновым белкам, которые коди-6 011607 руются последовательностями генов иммуноглобулинов человека. Последовательности генов иммуноглобулинов могут экспрессироваться в любой клетке животного, включая человека. Гуманизированные антитела представляют собой антитела, полученные от видов, кроме человека, у которых определенные аминокислоты в основных и константных доменах тяжелых и легких цепей были мутированы так, чтобы избежать или отменить иммунный ответ у человека. В качестве альтернативы, гуманизированные антитела могут быть получены путем слияния константных доменов человеческого антитела и различных доменов животных. Примеры того, как могут быть получены гуманизированные антитела, можно найти в патентах США 6054297, 5886152 и 5877293. Воспаление или воспалительное заболевание относится к главному патологическому процессу,включающему в себя цитологические и гистологические реакции, которые возникают в кровеносных сосудах и расположенных рядом с ними тканях в ответ на повреждение, патологическую стимуляцию или биологические агенты, невоспалительные состояния или заболевание невоспалительного характера относится к любому состоянию или заболеванию, который не имеет воспалительной природы, как описано здесь. Выделенный белок или выделенный полипептид относится к белку или полипептиду, которые в силу своего происхождения или источника получения: (1) не связан с природными компонентами, с которыми он связан в нативном состоянии, (2) свободен от других белков того же вида, (3) экспрессируется клетками других видов или (4) не встречается в природе. Таким образом, полипептид, который синтезируют химическим путем, синтезируют в бесклеточных биологических системах (например, в лизате ретикулоцитов кролика) или синтезируют в клеточных системах, отличных от клеточных систем, из которых полипептид был первоначально выделен, из связанных с ним природных компонентов. Белок также может быть получен, по существу, свободным от связанных с ними в природе компонентов путем выделения, используя способы очистки белка, хорошо известные в данной области. Миметики или миметические пептиды являются непептидными аналогами, которые обычно используются в фармацевтической промышленности как препараты со свойствами, аналогичными свойствам пептида, используемого в качестве образца. Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15: 29 (1986); Veber и Freidinger, TINS p. 392 (1985); и Evans et al., J. Med. Chem. 30: 1229 (1987), которые приведены здесь в качестве ссылки. Миметики зачастую получают с помощью молекулярных моделей, созданных компьютером. Миметические пептиды, которые сходы по своей структуре с пептидами, применяемыми для лечения,могут быть использованы для получения эквивалентного лечебного или профилактического эффекта. Обычно миметики структурно сходы с полипептидами, используемыми в качестве образца (т.е. полипептидом, который обладает желаемыми биохимическими свойствами или фармакологической активностью), например с TWEAK, но имеют одну или несколько пептидных связей, необязательно замененных связями, выбранными из группы, включающей CH2NH,CH2S, СН 2-СН 2, СН=СН (цис и транс), СОСН 2, СН(ОН)СН 2 и CH2SO, способами, хорошо известными в данной области. Для получения более стабильных пептидов также может быть использовано направленное замещение одной или нескольких аминокислот консенсусной последовательности D-аминокислотой того же типа (например, D-лизин взамен L-лизина). Кроме того, ограниченные пептиды, содержащие консенсусную последовательность или по существу идентичный вариант консенсусной последовательности, могут быть получены различными способами, известными в данной области (Rizo and Gierasch, Ann. Rev. Biochem. 61: 387 (1992), приведены здесь в качестве ссылки); например, путем добавления внутренних цистеиновых остатков, способных образовывать дисульфидные мостики, которые циклизируют пептиды. Полипептидные аналоги относятся к полипептидам, которые получают из полипептидов дикого типа, но отличные от них по своей аминокислотной последовательности. Полипептиды с измененной аминокислотной последовательностью могут быть мутеинами, белками слияния или миметиками. Полипептидные аналоги также относятся к полипептидами, которые имеют отличия, но не в аминокислотной последовательности, от полипептидов дикого типа. Эти различия могут быть химическими или биохимическими, включая, но ими не ограничиваясь, типы модуляций, подробно описанных здесь. Полипептидные фрагменты относятся к полипептидам, которые имеют делецию на аминоконце и/или карбоксиконце, но у которых аминокислотная последовательность остается идентичной соответствующим положениям природных последовательности. Фрагменты обычно являются фрагментами длиной по крайней мере из 5, 6, 8 или 10 аминокислот, предпочтительно по крайней мере из 14 аминокислот,более предпочтительно по крайней мере из 20 аминокислот, обычно не менее чем из 50 аминокислот и еще более предпочтительно не менее чем из 70 аминокислот. Клетки-предшественники относятся к клеткам, которые дают развитие одной или нескольким клеточным линиям. К ним относятся стволовые клетки, тотипотентные клетки, плюрипотентные клетки,мультипотентные клетки, бипотентные клетки, эмбриональные клетки или клетки взрослого организма. Также к ним относятся тканеспецифические клетки, включая, но ими не ограничиваясь, клетки, относящиеся к определенной линии дифференцировки, способной претерпевать окончательную дифференцировку, клеткам, которые получают из резидентных клеток ткани, и циркулирующих клеток, которые образуются в специфических тканях. Субъектом является человек или животное. Примером субъекта является пациент.-7 011607 Состояние, связанное с TWEAK относится к любому состоянию, которое является результатом патологической функции или регуляции TWEAK. Данный термин может относиться к любому состоянию, которое напрямую не связано с патологической функцией или регуляцией TWEAK и возникновение которого связано с некоторыми другими механизмами, но где нарушение, увеличение или другое изменение активности TWEAK в определенной степени влияет на это состояние. Состояния, связанные сTWEAK, могут иметь воспалительную или невоспалительную природу и включать в себя, но этим не ограничиваясь, состояния и заболевания, подробно описанные здесь. Векторы относятся к молекулам ДНК, в которые могут быть клонированы, копированы, введены рекомбинантным путем, мутированы или экспрессированы интересующие последовательности ДНК из своих природных клеток. Часто векторы имеют последовательности, контролирующие экспрессию, которые допускают индуцибельную или конститутивную экспрессию последовательностей генов в специфических условиях или в специфических клетках. Примеры векторов включают в себя, но ими не ограничиваются, плазмиды, искусственные хромосомы дрожжей (YAC), вирусы, эписомы, полученные из вируса Эпштейна-Бар (EBV), бактериофаги, космиды и фагемиды. Ксеногенные животные относятся к животным, имеющим значительную часть локусов иммуноглобулинов человека. Зачастую ксеногенные животны несут гомологичные заданных эндогенные локусы иммуноглобулинов, делающих их неспособными экспрессировать их энедогенные гены иммуноглобулинов. Примеры включают в себя мыши линии XenoMouse (Abgenix, Inc., Fremont, California), которые способны к соматическим перестановкам трансгенных генов иммуноглобулинов человека, к гипермутациям различных генов человека, к экспрессии генов иммуноглобулинов и к переключению изотипов иммуноглобулинов. Ксеногенные животные способны к эффективному гуморальному ответу на введение в организм антигена, используя последовательности генов иммуноглобулина человека. Антитела, продуцируемые ксеногенными животными, полностью являются человеческими и могут быть выделены у животных или их потомства, из культивируемых клеток, взятых у животных или их потомства, и из гибридомы, созданной от ксеногенной линии В-лимфоцитов у животных или их потомства. Более того, реогранизованные последовательности генов человека, кодирующие иммуноглобулины в ответ на введение специфического антигена, могут быть выделены обычными рекомбинантными способами. Ксеногенные антитела относятся к антителам, которые кодируются чужеродными локусами иммуноглобулинов. Например, у мыши линии XenoMouse ксеногенные антитела кодируются локусом антител человека. Ксеногенные моноклональные антитела относятся к гомогенным популяциям антител, которые продуцируются в клонированных, иммортализованных клетках, например, гибридоме, полученной от ксеногенных животных. Например, гибридома, полученная от мыши XenoMouse, дает ксеногенные антитела. Фундаментальное понимание болезней делает возможным определение молекулярных механизмов или биохимических путей, лежащих в их основе. Врачи и исследователи, таким образом, могут разработать терапевтические средства и готовить фармацевтические композиции, которые специфически направлены на эти молекулярные механизмы или биохимические пути. К некоторым из самых сложных и ослабляющих здоровье заболеваний, поражающих людей, относятся заболевания сердца, печени, почек, легких, кожи, скелетных мышц, нарушения метаболизма липидов, болезни желудочно-кишечного тракта, нервной системы, поджелудочной железы, репродуктивных органов, хрящей, костей, соединительной ткани и патологии клеток-предшественников или стволовых клеток. В настоящем изобретении преимущественно показаны важные достижения в понимании этих болезней. Более конкретно, данное изобретение относится к трансгенным животным, которые экспрессируют экзогенные белки TWEAK, и впервые показывает связь между экспрессией белка TWEAK и некоторыми патологическими состояниями сердца, печени, почек и легких. Изобретение также относится к способам лечения или профилактики таких патологических состояний, так же как и к способам идентификации агонистов или антагонистов TWEAK для применения их в этих способах. Патологические состояния включают в себя острую патологию сердца, хроническую сердечную недостаточность, невоспалительную дилатационную кардиомиопатию, застойную сердечную недостаточность, гиперплазию эпителиальных клеток печени, гибель гепатоцитов, фиброз печени, вакуолизацию гепатоцитов, поражение печени, патологии желчных протоков, включая гиперплазию желчных протоков, воспалительные заболевания почек, такие как воспаление почек со множественными очагами, заболевания почек невоспалительного характера, такие как тубулярная нефропатия, тубулярная гиперплазия, гломерулярные кисты,гиперплазия почек, утолщение почечной капсулы, гломерулярная нефропатия, синдром Альпорта, почечная тубулярная вакуолизация, образование гиалиновых цилиндров в почках, почечный фиброз, и воспалительные заболевания легких. Изобретение, кроме того, относится к способам обнаружения структурTWEAK или их активности как маркеров заболевания, включая белки TWEAK или их активность, антитела TWEAK и нуклеиновые кислоты TWEAK. Для лечения заболеваний, связанных с TWEAK, описанных здесь, могут использоваться агонисты или антагонисты TWEAK, которые способны изменять активности TWEAK или нарушать взаимодейст-8 011607 вие между мембраносвязанной формой или целого полипептида TWEAK с его клеточными рецепторами. Альтернативно, терапевтические средства и способы лечения нарушают взаимодействие между мембраносвязанной формой или целым полипептидом TWEAK с другим полипептидом TWEAK. Такое взаимодействие может происходить на поверхности клетки, внутри клетки, экстрацеллюлярно или in vitro, при связывании с твердой фазой, или в растворе. В качестве альтернативы, терапевтические средства и способы лечения нарушают взаимодействие между мембраносвязанной формой или целым полипептидомTWEAK и агентами, взаимодействующими с TWEAK. Такими взаимодействующими агентами могут быть белки, нуклеиновые кислоты, сахариды, липиды, жирные кислоты и стероиды. В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения, заболевание, связанное сTWEAK, является невоспалительным. В другом предпочтительном варианте осуществления заболеванием, связанным с TWEAK, является фиброз, кардиомиопатия, болезнь почек, заболевание легких или болезнь печени. В другом предпочтительном варианте осуществления заболеванием, связанным с TWEAK, является заболевание скелетных мышц, заболевание жировой ткани, заболевания желудочно-кишечного тракта,заболевание поджелудочной железы, заболевание репродуктивных органов, заболевание нервной ткани,клеточная смерть, кожное заболевание, заболевание хрящей, заболевание костей или коллагеноз. В другом варианте осуществления агонисты или антагонисты TWEAK могут использоваться для лечения пациентов с заболеванием, болезнью или поражением, при котором требуется обновление или регенерация ткани (например, пациенты с термическими или радиационными ожогами), воздействуя на клетки-предшественники in vivo. Агонисты или антагонисты TWEAK также могут использоваться при лечении пациентов in vivo вместе с трансплантацией клеток-предшественников или ткани. Агонисты или антагонисты TWEAK также могут использоваться для увеличения популяции клеток in vivo или для увеличения популяции клеток-предшественников in vitro для последующей трансплантации пациентам вместе или без дополнительного лечения. Популяции клеток-предшественников, используемые для клеточной терапии in vivo или увеличении числа in vitro, для последующей трансплантации могут быть популяцией эмбриональных клеток или клеток взрослого организма. Клетки-предшественники, выделенные из взрослого организма, могут быть мультипотентными или тканеспецифическими (Lagasse et al., Immunity 14: 425-436 (2001); Jackson et al. J. Clin. Invest. 107: 1355-402 (2001); Anversa и Nadal-Ginard, Nature 415: 240-243 (2002); Gussoni et al., Nature 401: 390-394 (1999); Brazelton et al., Science 290: 1672-1674 (2000);Peterson et al., Science 284: 1168-1170 (1999); Lagasse et al., Nature Medicine 6: 1229-1234 (2000. Болезни сердца являются главной причиной инвалидности и смерти в промышленно развитых странах. В США болезни сердца вызывают приблизительно 40% всех смертельных случаев, составляя приблизительно 750000 смертных случаев ежегодно. Основной нормального функционирования сердца является миокард, состоящий прежде всего из разветвляющихся и анастомозирующих поперечнополосатых мышечных клеток (кардиальные миоциты). Кардиальные миоциты являются гораздо больше промежуточных интерстициальных клеток и составляют более 90% объема миокарда. В нормальном миокарде практически отсутствуют воспалительные клетки и количество коллагена очень мало. Болезни миокарда очень распространены, но возникают вторично при большом числе заболеваний сердца. Примеры болезней миокарда включают в себя воспалительные заболевания (например, миокардиты) и невоспалительные заболевания сердца, такие как дилатационная кардиомиопатия, системные метаболические расстройства, дистрофия мышц и генетические патологии клеток мышечных клеток сердца. Главные типы кардиомиопатии включают в себя дилатационные, гипертрофические и рестриктивные кардиомиопатии. Целью данного изобретения являются способы лечения дилатационной кардиомиопатии, которая обычно имеет невоспалительную природу. В случае невоспалительной дилатационной кардиомиопатии, которая составляет приблизительно 90% клинических случаев болезней миокарда,происходит прогрессивная гипертрофия, расширение сердца и сократительная (систолическая) дисфункция. Дилатационная кардиомиопатия может возникать в любом возрасте, но наиболее часто она возникает у людей в возрасте от 20 до 60 лет. Диагноз часто ставят на основании данных неинвазивного анализа с получением изображения сердца, особенно с помощью двухмерной эхокардиографии. Гистопатология дилатационной кардиомиопатии характеризуется дегенерацией миоцитов с гипертрофией от небольшой до умеренной, отсутствием воспалительных клеток и интерстициальным фиброзом. Дилатационная кардиомиопатия клинически протекает параллельно с медленно развивающейся застойной сердечной недостаточностью, но состояние пациента может резко перейти от стадии с сохраненной компенсаторной функцией до декомпенсаторной стадии. Часто требуется пересадка сердца. 50% пациентов умирают в течение двух лет и 75% - в течение пяти лет. Причиной смерти обычно является прогрессирующая сердечная недостаточность или аритмия, однако, может происходить эмболия, вызванная смещением внутрисердечного тромба. Сердце, в котором происходит дилатационная кардиомиопатия, увеличено, дряблое и весит в два или три раза больше, чем нормальное сердце. Все камеры расширены, с утонченными стенками, фиброзированы и обычно с пристеночными тромбами. В небольшом количестве случаев при дилатационной-9 011607 кардиомиопатии наблюдается митральная или трикуспидальная регургитиация в результате расширения камеры левого желудочка. Мышечные клетки сердца гипертрофированы и их ядра увеличены. К некоторым причинам дилатационной кардиомиопатии относятся миокардиты, злоупотребление алкоголем или других токсических веществ, беременность (перипартальная кардиомиопатия), ишемия, коронарная болезнь артерий, гипертония и генетические причины. Идиопатическая дилатационная кардиомиопатия (IDC) неизвестной этиологии характеризуется расширением одного или обоих желудочков, систолической дисфункцией и часто приводит к застойной сердечной недостаточности. Следует отметить, что термин IDC используется некоторыми специалистами в данной области как аналог термина дилатационная кардиомиопатия, предполагая, что фактически IDC является более широкой категорией дилатационных кардиомиопатии, которые не являются результатом злоупотребления алкоголя, токсического поражения или миокардита. Микроскопически IDC характеризуется гипертрофией миокардиоцитов, кариомегалией и интерстициальным и периваскулярным фиброзом. В отличие от миокардита у пациентов с IDC обычно не встречается некроз и клеточная инфильтрация, что говорит о невоспалительной этиологии. Тот факт, что противовоспалительные препараты, такие как преднизон, абсолютно не эффективны для лечения IDC, согласуется с невоспалительной этиологией IDC. Целью данного изобретения являются способы лечения или профилактики дилатационной кардиомиопатии, связанной с активностью TWEAK. Так как причина дилатационной кардиомиопатии (например, IDC) зачастую не известна, были разработаны определенные подходы для ее лечения. Лечение пациентов обычно направлено на снижение сердечной недостойности, используя физические, диетические и фармакологические способы (например, антагонисты бета-адренорецепторов, антагонисты кальция и антикоагулянты) для контроля симптомов. Также, если возможно, применяется пересадка сердца. Специалистам в данной области не удалось идентифицировать какой-либо иммунологический, гистохимический, морфологический, ультраструктурный или микробиологический маркер, который мог бы использоваться для диагностики IDC. Однако на основании эпидемиологических данных можно сделать предположение, что предрасположение к IDC может быть обусловлено генетически. У 20% пациентов сIDC родственники первого уровня также имеют симптомы IDC, что нередко предполагает семейную передачу. Специалистам в данной области необходимо определить молекулярно-генетические маркерыIDC у пациентов с субклиническими и клиническими болезнями сердца. В настоящее время список генов, связанных с дилатационной кардиомиопатией, включает в себя сердечный тропонин Т, d-саркогликан, сердечный миозин b с тяжелой цепью, актин сердца, атропомиозин, ламин А/С, десмин, рецептор рианодина сердца, десмоплакин, плакоглобин, дистрофин и тафаззин. До сих пор существует потребность в дополнительных генетические факторах, которые могут вносить вклад в развитие дилатационной кардиомиопатии, и в разработке терапевтических средств для их обнаружения. Настоящее изобретение впервые демонстрирует причинную связь между TWEAK и дилатационной кардиомиопатией. Таким образом, целью данного изобретения является способ идентификации дилатационной кардиомиопатии у пациента, путем обнаружения изменений в экспрессии белкаTWEAK, акивности белка TWEAK, экспрессии мРНК TWEAK или хромосомных изменений. Способы и реактивы для обнаружения этих молекулярных маркеров заболевания хорошо известны в данной области и включают в себя иммунологические или иммуногистохимические исследования, ферментативные или другие исследования функций белка и стандартные способы гибридизации, такие как Нозерн-блоттинг,Саузерн-блоттинг, анализ точечного нуклеотидного полиморфизма (SNP) и флуоресцентная гибридизация in situ (FISH). Необходимо отметить, что невоспалительная дилатационная кардиомиопатия характеризуется прогрессивной гипертрофией сердца, расширением и сократительной дисфункцией. Напротив, болезнь Чагаса является редкой формой миокардита и представляет собой воспалительную болезнь сердца, которая возникает у людей и экспериментальных животных вслед за хронической инфекцией, вызванной Trypanosoma cruzi. Изучение болезни Чагаса, которая распространена в Центральной и Южной Америке,позволило идентифицировать антиантитела в сыворотке больных болезнью Чагаса. Joshua Wynne and(5th ed. 1997). Описанные здесь способы направлены на лечение более привычных невоспалительных дилатационных кардиомиопатий, связанных с активностью TWEAK. Почки взрослого человека обрабатывают более 1700 л крови в день и выделяют приблизительно 1 л мочи. Функцией почек является выведение отходов, поддержание метаболизма, водного и солевого баланса и рН гомеостаза, так же эндокринная функция. Болезни почек в большей степени являются причиной заболеваемости, чем смертности, с приблизительно 35000 смертных случаев ежегодно в Соединенных Штатах. Напротив, миллионы людей ежегодно страдают от болезней почек, не приводящих к смерти, таких как инфекции, почечные камни и непроходимость мочевых путей. Как правило, гломерулярные заболевания возникают в результате иммунологических нарушений,тогда как патологии канальцев и интерстициальной ткани обычно связаны с токсинами или инфекционными агентами. Неполный список почечных болезней включает в себя острый нефротический синдром,бессимптомную гематурию или протеинурию, острую почечную недостаточность, хроническую почеч- 10011607 ную недостаточность, поражения почечных канальцев, инфекции мочевых путей, мочекаменную болезнь, непроходимость мочевых путей и фиброз почки. В поражения почек, в которые обычно вовлечены канальцы, также вовлечена интерстициальная ткань. Болезни канальцев могут иметь воспалительный или невоспалительный характер и включают в себя ишемическое или токсическое поражение канальцев. Неполный список тубулярных болезней включает в себя острую почечную недостаточность с некрозом канальцев; воспалительные реакции канальцев и интерстиция (тубулоинтерстициальный нефрит); гиперплазия канальцев; тубулоинтерстициальный фиброз (болезнь, вызывающая рубцевание, в развитии которой принимают участие эпителиальные клетки канальцев и интерстициальные фибробласты, мононуклеарные клетки, клубочковый ультрафильтрат,цитокиновый и хемокиновый компоненты); и аутосомно-доминантная поликистозная болезнь почек(ADPKD) (наследственное заболевание, характеризующееся большими, заполненными жидкостью кистами канальцами и выводящих протоков, вызванное мутацией либо гена PKD1, либо гена PKD2). Гломерулярные болезни представляют собой наиболее опасные болезни почек. Например, хронический гломерулонефрит является самой распространенной причиной хронической почечной недостаточности человека. При так называемых вторичных гломерулярных заболеваниях, клубочки могут повреждаться в результате иммунологических нарушений, таких как системная красная волчанка (SLE), а так же в результате сосудистых нарушений, например, гипертонии и нодозного полиартрита. Также гломерулярный аппарат почек затрагивают нарушения обмена веществ, такие как сахарный диабет (т.е. диабетическая нефропатия) и наследственные заболевания, такие как болезнь Фабри. Первичные гломерулярные болезни включают в себя первичный гломерулонефрит и гломерулопатию. Группа болезней, которые объединены под названием наследственный нефрит, включают в себя семейные почечные заболевания, связанные, прежде всего, с повреждением клубочков. Синдром Альпорта является формой нефрита, которая сопровождается глухотой, связанной с поражением слухового нерва, и различными глазными болезнями, включая вывих хрусталика, задняя катаракта и дистрофия роговицы. Заболевание больше распространено у мужчин из-за его доминантного Х-связанного генотипа. Однако некоторые женщины также страдают этим заболеванием вследствие либо аутосомнодоминантного и рецессивного генотипа. При синдроме Альпорта клубочковый аппарат почек сегментарно поражается пролиферирующими эпителиальными клетками или склеротизируется. Иногда эпителиальные клетки кажутся пенистыми из-за нейтрального жира и скоплений мукополисахаридов. Базальная мембрана клубочков и трубочек неравномерно утолщена или истончена, с расщеплением и расслоением плотной пластинки (lamina densa). Поскольку болезни почек имеют существенное клиническое значение, специалистам в данной области необходимо понимать их физиологические и генетические причины. Кроме того, специалисты в данной области понимают важность разработки новых терапевтических средств для лечения хронических и острых почечных болезней. Данное изобретение впервые показывает причинную связь междуTWEAK и болезнями почек. Таким образом, в одном из вариантов осуществления данное изобретение относится к способам лечения болезней почек. В более предпочтительном варианте осуществления болезнью почек может быть синдром Альпорта. В других более предпочтительных вариантах осуществления данного изобретения характерными признаками болезней почек, лечение которых может осуществляться, являются множественноочаговые воспаления, турбулярная нефропатия, турбулярная гиперплазия, кисты, гломерулярная нефропатия, турбулярная вакуолизация, фиброз или гиалиновые цилиндры. Болезни легких были и остаются самыми распространенными заболеваниями. Первичные респираторные инфекции, такие как бронхит, бронхопневмония и другие типы пневмонии, наиболее часто встречаются в практике врача. Болезни легких могут осложняться экологическими факторами, такими как дым сигарет, загрязнение воздуха и другими вдыхаемыми агентами. Также распространены хронический бронхит, эмфизема, фиброз и злокачественные новообразования легких. Легкие также вторично вовлечены во многие смертельные заболевания; отек легких, ателектаз или бронхопневмония встречаются у тяжело больных пациентов. Астма является хроническим рецидивирующим воспалительным заболеванием, отличительным признаком которого является гиперреактивность дыхательных путей. Характерными симптомы обычно являются эпизодические обратимые бронхоспазмы. Астма возникает в результате повышенной реактивности трахеоброхиального дерева к различным стимулам и часто связана с ответом IgE на внешние аллергены. Существует два главных типа астмы. Первый тип представляет собой экзогенная астма, которая инициируется реакцией гиперчувствительности 1-ого типа, вызываемой действием внешнего антигена. Список заболеваний, относящихся к экзогенной астме, включает в себя атопическую (аллергическую) астму, профессиональную астму и аллергический бронхолегочный аспергиллез. Вторым типом является эндогенная астма, которая возникает в результате неиммунных механизмов, и вызвана факторами, такими как приема аспирина, легочные инфекции, стресс, холод, вдыхание раздражителей и физическая нагрузка. Специалистам в данной области необходимо лучше понимать механизмы болезней легких, включая- 11011607 заболевания, как с воспалительным, так и невоспалительным характером, такие как астма. Более полное понимание облегчит создание улучшенных фармацевтических агентов для лечения заболеваний легких. Настоящее изобретение впервые показывает причинную связь между TWEAK и болезнями легких, и способы их лечения. В более предпочтительных вариантах осуществления данного изобретения характерными признаками болезни легких являются грануломатозное и/или лимфогистоцитарное воспаление. Печень является главным регулятором пищеварения и метаболического гомеостаза, включая обработку аминокислот, углеводов, липидов и витаминов пищи, а так же синтез белков сыворотки, детоксикацию и выделение с желчью эндогенных продуктов жизнедеятельности и загрязняющих ксенобиотиков. Таким образом, болезни печени обычно очень серьезны, иногда опасны для жизни. Печень уязвима в отношении многих типов заболеваний, включая метаболические, токсические,микробные, циркуляторные и неопластические поражения. Токсины или иммунологические нарушения могут вызывать увеличение гепатоцитов, и делать их отечными, с нерегулярными скоплениями цитоплазмы и большими светлыми промежутками. Также задерживаемые желчные вещества могут вызывать появление пенистых и вспученных гепатоцитов. В гепатацитах может происходить накопление веществ,таких как железо, медь и капли жира (стеатоз). В случаях заболеваний печени при алкоголизме и острой жировой печени при беременности, появляются крошечные капли, которые не замещают ядро (известные как микровезикулярный стеатоз). Некроз гепатоцитов в результате серьезного поражения печени, в числе других, может быть охарактеризован как ишемический коагулятивный некроз. Часто отличительными признаками клеточной смерти при токсических состояниях или состояниях, связанных с иммунологическими нарушениями, являются округлые гепатоциты и сморщенные пикнотические в высокой степени эозинофильные тельца Каунсильмена, содержащие фрагментированные ядра (результат апоптоза). Альтернативно, гепатоциты могут становиться осмотически надутыми и с разрывами (литический некроз). Гепатит возникает в результате некоторых патологий печени, связанных с притоком клеток острого или хронического воспаления. Некроз гепатоцитов может предшествовать началу воспаления или наоборот. Фиброз, необратимое последствие поражения печени, обычно является результатом воспалительных или невоспалительных механизмов, таких как прямое токсическое поражение. Характерное выпадение коллагена влияет на поток крови и перфузию гепатоцитов. При развивающемся фиброзе печень разделяется на узлы регенерации гепатоцитов, окруженные рубцовой тканью (цирроз печени). Овальные клетки, называемые так из-за своей морфологии, представляют собой маленькие, пролиферирующие эпителиальные клетки с яйцеобразным ядром и истонченной базофильной цитоплазмой. Овальные клетки обычно находятся в терминальных желчных протоках, которые соединяют внутрипеченочные протоки, расположенные в портальной триаде, с тяжами гепатоцитов. Эти клетки могут быть получены из резидентных клеток-предшественников печени, или клеток-предшественников костного мозга, которые циркулируют и постоянно находятся в печени. Эти клетки-предшественники протоков способны дифференцироваться как в эпителиальные клетки протоков, так и в гепатоциты. В настоящем изобретении показано, что экспрессия TWEAK трансгенных мышей может увеличивать популяцию клеток-предшественников протоков. В результате высокого уровня заболеваемости и смертности при болезнях печени, специалистам в данной области необходимо полное понимание молекулярных и генетических основ этих заболеваний. Идентификация причинных факторов облегчает разработку терапевтических средств для лечения хронических и острых заболеваний печени. Настоящее изобретение показывает причинную связь междуTWEAK и болезнями печени, и преимущественно относится к способам их лечения. В более предпочтительных воплощениях, болезнью печени является эпителиальная гиперплазия, вакуолизация гепатоцитов, поражения желчных протоков в результате фиброза, гибели гепатоцитов или патологии печени. Скелетно-мышечная система является важной системой для принятия положения и передвижения. Скелетные мышцы могут атрофироваться в ответ на отмену введения препаратов, например, глюкокортикоидов, что может быть вторично по сравнению с заболеваниями нерва или отсутствием кровоснабжения. Скелетные мышцы также могут атрофироваться при генетических или дегенеративных заболеваниях. Эти болезни или состояния могут иметь воспалительный или невоспалительный характер. Мышечная дистрофия составляет большую группу наследственных миопатий, характеризующихся атрофией и потерей мышечных волокон в отсутствии нервного заболевания; одной из обычных форм, которая относится к этой группе заболеваний, является мышечная дистрофия Дюшена. Наследственное мышечное заболевание также может встречаться вместе с заболеванием, связанным с накоплением гликогена, таким как дефицит мальтазы, который проявляется мышечной слабостью новорожденных, астеническим телосложением, увеличением сердца и зачастую с ранней смертью от сердечной недостаточности. Наследственные заболевания, приводящие к атрофии мышц, также включают в себя, но ими не ограничиваются, митохондриальные миопатии, липидные миопатии, болезнь центрального стержня и рабдомиолиз. Миопатические состояния также могут возникать у взрослых, одной из наиболее часто наблюдаемых миопатий является алкогольная миопатия. Слабость скелетных мышц также может встречаться как часть нервного заболевания, включая, но ими не ограничиваясь, амиотрофический боковой склероз (ALS). Кроме того,слабость скелетных мышц, также известная как кахексия, является важным патологическим состоянием,- 12011607 наблюдаемым у тяжело больных пациентов со злокачественными заболеваниями и зачастую непосредственно связанна со смертью больного. Заболевания скелетных мышц, которые возникают при воспалительных или аутоиммунных заболеваниях, включают в себя полимиозит, воспалительные миопатии и атрофии, вызванные приемом глюкокортикоидом. Настоящее изобретение устанавливает связь междуTWEAK и способностью миобластов к дифференцировке в мышечные трубочки. Таким образом, объектом настоящего изобретения являются способы лечения заболеваний скелетных мышц, активируя регенерацию скелетных мышц, используя способы in vivo или in vitro. Накопление жировых клеток происходит при ожирении, включая ожирение, связанное с метаболическими расстройствами, такими как диабет II типа. Проростание жировых клеток в органы, так называемая жировая инфильтрация, возникает при различных условиях и является патологическим компонентом мышечной дистрофии. Настоящее изобретение показывает связь между TWEAK и способность преадипоцитов дифференцироваться в адипоциты. Таким образом, объектом данного изобретения являются способы лечения расстройств, связанных с накоплением или недостаточностью адипоцитов, путем модуляции дифференцировки адипоцитов с помощью агонистов или антагонистов TWEAK или их фармацевтических композиций. В способах лечения состояний, связанных с TWEAK, по настоящему изобретению, применяют агонисты или антагонисты TWEAK или содержащие их композиции. Агонисты или антагонисты TWEAK,которые могут быть использованы для лечения состояний, связанных с TWEAK, по данному изобретению, описаны здесь и известны в данной области. Такие средства включают в себя средства, описанные,например, в международных публикациях РСТ WO 98/05783, WO 98/35061, WO 99/19490, WO 00/42073 и WO 01/45730, каждая из которых приведена здесь в качестве ссылки. Антагонисты TWEAK, которые могут использоваться в способах по данному изобретению, включают в себя антитела против TWEAK,такие как человеческие, нечеловеческие, гуманизированные или ксеногенные антитела, как описано здесь, и эти антитела являются поликлональными, моноклональными или синтетическими. Кроме того,антитела могут быть антителами полной длины, их фрагментами или белками слияния, которые содержат антигенраспознающие последовательности.TWEAK антагонисты, которые могут использоваться в способах по данному изобретению, также включают в себя антитела против рецептора TWEAK. Здесь рецептором TWEAK может быть FN14 или другие члены семейства TNF-R, которые связывают TWEAK. Антитела к рецептору TWEAK могут быть человеческими, нечеловеческими, гуманизированными или ксеногенными антителами, как описано здесь, и является многоклональными, моноклональными или синтетическими. Кроме того, антитела могут быть антителами полной длины, их фрагментами или белками, полученными слиянием, которые содержат антигенраспознающие последовательности. Иммунизация животных антигенами TWEAK или рецептора TWEAK может осуществляться любым способом, известным в данной области. См., например, Harlow and Lane, Antibodies: A LaboratoryManual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990. Способы иммунизации животных, но не человека, таких как мыши, крысы, овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот, лошади и тому подобное, хорошо известны в данной области. См., например, Harlow and Lane и патент США 5994619. В предпочтительном воплощении, антиген для стимуляции иммунного ответа вводят с или без адъюванта. Такие адъюванты включают в себя, среди прочего, полный или неполный адъювант Фрейнда, RIBI (дипептиды мурамила) или ISCOM (иммуностимулирующие комплексы). Антиген, выбранный для иммунизации, может быть любым из нижеследующих антигенов: полипептид TWEAK; полипептидный фрагмент TWEAK; мутеин TWEAK; миметик TWEAK; белок слиянияTWEAK; полипептид рецептора TWEAK; фрагмент рецептора TWEAK; мутеин рецептора TWEAK; миметик рецептора TWEAK; белок слияния рецептора TWEAK; клетка, экспрессирующая полипептидTWEAK, его фрагмент, мутеин или белок слияния; или клетка, экспрессирующая полипептид рецептораTWEAK, его фрагмент, мутеин или белок слияния. Иммуноглобулины, возникающие в организме животных в ответ на иммунизацию, могут быть получены из различных тканей или жидкостей животных,включая сыворотку, молоко, асцитную жидкость, селезенку, тимус, клетки периферической крови, эмбриональную печень, костный мозг, перитонеальную жидкость и любые другие ткани или жидкости,содержащие значительные концентрации иммуноглобулинов. Также, могут быть получены и выделены гибридомы, которые продуцируют моноклональные антитела, секретируемые в среду. В предпочтительных вариантах осуществления данного изобретения антитела представляют собой поликлональные антитела, моноклональные антитела или гуманизированные антитела. В более предпочтительном варианте осуществления, гуманизированные антитела включают в себя константную область и каркасные области антитела человека. В другом предпочтительном варианте осуществления антитела представляют собой ксеногенные антитела. В более предпочтительном варианте осуществления ксеногенные антитела являются поликлональными антителами или моноклональными антителами. Ксеногенные антитела представляют собой целые антитела одного вида, которые экспрессируются в совершенно других видах. Например, мышь может экспрессировать ДНК, необходимую для продукции полных антител человека, получаемые антитела являются ксеногенными (т.е. человеческие антитела,продуцируемые мышью). Способы прицельной инактивации (нокаут) дают возможность прекратить нор- 13011607 мальную экспрессию эндогенных генов иммуноглобулин животного. Технологии получения трансгенных животных делают возможным получение животных, которые продуцируют ксеногенные иммуноглобулины. Такие ксеногенные животные могут спариваться с животными с нокаутом генов иммуноглобулинов, описанными выше, что приводит к потомству, которое продуцирует только ксеногенные иммуноглобулины и неэндогенные иммуноглобулины. Экспрессия ксеногенных генов иммуноглобулинов обеспечивает продукцию большого разнообразия антител человека, включая моноклональные антитела. Это происходит потому, что (1) гены экзогенных иммуноглобулинов сохраняют свои цис регуляторные элементы и подвергаются нормальной изменчивости (V), разнообразию (D) и принимают участие (J) в рекомбинантных событиях в организме животного; (2) гены экзогенных иммуноглобулинов экспрессируются таким же образом, как и локусы эндогенных иммуноглобулинов; и (3) получающиеся антитела, по-видимому, поддерживают нормальное развитие В-лимфоцитов и гуморальные ответы. Гены экзогенных иммуноглобулинов могут вводиться животным как полные локусы иммуноглобулинов, как часть локуса иммуноглобулина или как минилокус, в котором более полный экзогенный локус Ig имитирован посредством включения небольшого количества отдельных генов этого локуса Ig. Кроме того, трансгенные животные могут быть спроектированы для экспрессии трансгенов, кодирующих модинфицированные антитела, такие как антитела с одной цепью или химерные антитела. Агонисты TWEAK или антагонисты, которые могут быть использованы в способах по данному изобретению, также могут быть полипептидами TWEAK или их фрагментами, аналогами, мутеинами или миметиками, как описано здесь. Аналоги могут отличаться от природной аминокислоты TWEAK либо последовательностью, либо отличаются без изменения последовательности, либо и то, и другое. В предпочтительном варианте осуществления аналоги полипептида TWEAK являются мутеинами. Способы получения мутеинов хорошо известны в данной области молекулярной биологии, и включают в себя изменение молекул ДНК случайным мутагенезом, сайт-направленным мутагенезом и укорочением. Способы получения мутированной ДНК хорошо известны в данной области и включают в себя мутагенез с помощью полимеразной цепной реакции (PCR), интенсивный (т.е. химический или радиационный) мутагенез, химический синтез ДНК, метод аланинового мутагенеза, мутагенез, направленный на олигонуклеотиды (гибридизация с матричной ДНК in vitro с последующей ферментативной элонгацией), кассетный(рекомбинантный) мутагенез и комбинированный мутагенез (введение случайной вырожденной последовательности в ДНК TWEAK). Полипептиды TWEAK связываются с рецепторами TWEAK, с другими полипептидами TWEAK или с другими агентами, связывающимися с TWEAK. Фрагменты TWEAK могут быть мембраносвязанными и могут быть доставлены в составе фармацевтической композиции, содержащей липосомы и другие клеточные или псевдоклеточные системы доставки. Фрагменты TWEAK также могут быть растворенными полипептидами TWEAK, которые содержат либо усечение, либо внутреннюю делецию, которая удаляет трансмембранный домен. Более того, полипептиды TWEAK, которые могут быть эффективны в способах по данному изобретению, могут либо блокировать ответ TWEAK, либо изменять ответTWEAK. Примерами таких полипептидов TWEAK являются аналоги белка TWEAK, включая мутанты с делециями или усечением, пептиды, содержащие одну или несколько аминокислотных последовательностей, миметики TWEAK, а также полипептиды TWEAK, модинфицированные вне аминокислотной последовательности. Агонисты или антагонисты TWEAK, которые могут быть эффективны в способах по данному изобретению, также могут быть полипептидными рецепторами TWEAK или их фрагментами, аналогами,мутеинами или миметиками, как описано выше. Полипептидный рецептор TWEAK связывается с полипептидами TWEAK, с другими полипептидными рецепторами TWEAK или с другими агентами, взаимодействующими с рецепторами TWEAK. Фрагменты рецептора TWEAK могут быть мембраносвязанными и могут быть доставлены в составе фармацевтической композиции, содержащей липосомы и другие клеточные или псевдоклеточные системы доставки. Фрагменты рецептора TWEAK также могут быть растворенными полипептидами рецептора TWEAK, которые содержат либо усечение, либо внутреннюю делецию, которая удаляет трансмембранный домен. Более того, полипептиды рецептора TWEAK, которые могут быть эффективны в способах по данному изобретению, могут либо блокировать ответTWEAK, либо изменять ответ TWEAK. Примерами таких полипептидов рецептора TWEAK являются аналоги рецепторных белков TWEAK, включая мутанты с делециями или усечением, пептиды, содержащие одну или несколько аминокислотных последовательностей, миметики TWEAK, а также полипептиды рецептора TWEAK, модинфицированные без изменения аминокислотной последовательности. Более того, агонисты или антагонисты TWEAK, которые могут быть эффективны в способах по данному изобретению, могут быть органическими или неорганическими соединениями. Органические соединения могут быть либо маленькими органическими соединениями, такими как соединения из химических библиотек, хорошо известных в данной области. Другие органические соединения включают в себя, но ими не ограничиваются, нуклеиновые кислоты, пептиды, сахариды, липиды и жирные кислоты,стероидные соединения или их производные. Неорганические соединения могут быть на основе кремнезема или на основании других минералов- 14011607 и солей. Органические или неорганические соединения могут связываться с полипептидами TWEAK,полипептидами рецептора TWEAK или другими агентами, взаимодействующими с TWEAK, как описано здесь. Модификации, не затрагивающие последовательность полипептидов TWEAK или полипептидов рецептора TWEAK, могут быть результатом химических преобразований in vivo или in vitro полипептидов, и включая, но ими не ограничиваясь, изменения в сайте ацетилирования, метилирования, фосфорилирования, карбоксилирования, окисления или гликозилирования. Кроме того, химическое преобразование может включать в себя присоединение к органическим полимерам, таким как полиэтиленгликольTWEAK могут быть результатом модификации без изменения аминокислотной последовательности.TWEAK или полипептиды TWEAK могут быть экспрессированы как белок, полученный слиянием. Белки, полученные слиянием, хорошо известны в данной области. Специалист в данной области может выбрать из большого числа различных групп для слияния, включая прокариотические и эукаритоические группы. В соответствии с данным изобретением, любой пациент, включая человека и животных, может подвергаться лечению фармацевтически приемлемым способом фармацевтически эффективным количеством агониста или антагониста TWEAK или композицией, содержащей такие агенты, в период времени,достаточный для лечения состояний, связанных с TWEAK, пациента, которому вводят это количество в течение определенного периода времени. В качестве альтернативы, пациенты могут получать профилактическое эффективное количество агониста или антагониста TWEAK или композиции, содержащей такие агенты, которые эффективно предотвращают развитие состояний, связанных с TWEAK, у субъектов,которым в определенный период времени их вводят. С агонистами или антагонистами TWEAK, которые могут быть эффективны в способах по данному изобретению, могут быть получены фармацевтические композиции способами, описанным здесь, и могут быть доставлены парентеральным путем, инъекцией,через слизистую, перорально, ингаляторно, окулярно, ректально, имплантантом длительного действия,местно, способами длительного высвобождения или покрытием эндопротеза сосуда. Агонисты или антагонисты TWEAK могут находиться в различных подходящих формах, применяемых для введения. К ним относятся, например, твердые, полутвердые и жидкие дозированные формы, такие как жидкие растворы или суспензии, взвеси, гели, кремы, бальзамы, эмульсии, лосьоны, порошки, спреи, пены, пасты, мази,линименты и капли. Кроме того, агонисты или антагонисты TWEAK могут быть доставлены способами генной терапии. Кратко, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие белки или экспрессирующие антисмысловые молекулы, доставляют пациенту, применяя любые векторы, известные в данной области, подходящие для доставки молекул нуклеиновой кислоты к целевым тканям или органам. Обычные векторы включают в себя липосомы, плазмиды и вирусные векторы (например, ретровирусы, аденовирусы и адено-ассоциированные вирусы). Наиболее эффективный путь введения и режим дозирования агонистов или антагонистов TWEAK,или композиций, содержащих их, будет зависеть от желаемого эффекта, лечения, проводимого до этого,если имеет место, состояния здоровья больного, тяжесть его заболевания, ответ на агонисты или антагонисты TWEAK и назначения лечащего врача. Агонисты или антагонисты TWEAK, или соединения, содержащие их, могут вводиться в любых дозированных дозах, приемлемых для фармацевтических препаратов или препаратов, используемых в ветеринарии, однократно или серией введений. Количество агонистов или антагонистов TWEAK, или композиции, содержащие их, которые составляют единичную дозу, может изменяться в зависимости от конкретного пути введения, конкретных агонистов или антагонистов TWEAK, или композиции, уровня дозы и частоты введения. Обычные препараты могут содержать от около 0,01% до около 99%, предпочтительно между около 1% и около 50%,агонистов или антагонистов TWEAK или их композиций (мас./мас.). В качестве примера, не ограничивая диапазон, терапевтически или профилактически эффективного количества агониста или антагониста TWEAK находится между около 0,005-10,00 мг/кг массы тела, более предпочтительно, между около 0,05-1,0 мг/кг массы тела. Агонисты или антагонисты TWEAK, или композиции, их содержащие, могут вводиться самостоятельно или как часть фармацевтического препарата или препарата, используемого в ветеринарии, или как часть препарата, используемого для профилактики, вместе или без адъюванта. Они могут вводиться парентеральным или пероральным путями. Например, они могут вводиться пероральным путем, через легкие, нос, уши, дермальным, окулярным, внутривенным, внутримышечным, внутриартериальным, внутрибрюшинным путем, через слизистую, подъязычным, подкожным, чрескожным, местным или интракраниальным путями, или буккально. Как в фармацевтических препаратах, так и в препаратах для применения в ветеринарии, агонисты или антагонисты TWEAK могут вводиться местно на любую эпителиальную поверхность. К таким поверхностям относятся поверхность рта, глаза, уха, заднего прохода и носа. Фармацевтические композиции могут быть получены обычными способами смешения, растворения, грануляции, получения драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, включения или лиофилизации.- 15011607 Фармацевтические композиции для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены обычным способом, используя один или несколько физиологически приемлемых носителей, включая эксципиенты и дополнительные компоненты, которые способствуют действию активных соединений в препаратах, которые могут быть фармацевтически применены. Соответствующая композиция будет зависеть от предназначенного пути введения. Для введения через слизистую в композиции могут использоваться агенты для проникновения через соответствующий барьер. Такие агенты для проникновения хорошо известны в данной области. Для введения в глаза используются суспензии в соответствующем физиологическом растворе, что хорошо известно в данной области. Для перорального введения композиции с агонистами или антагонистами TWEAK могут быть легко получены объединением активных агентов с обычными фармацевтически приемлемыми носителями. Композиции с агонистами или антагонистами TWEAK могут быть получены в виде таблеток, пилюль,липосом, гранул, сфер, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и тому подобное,для перорального приема пациентами, лечение которых проводится. Агонисты или антагонисты TWEAK, или композиции, их содержащими, также могут содержать любые обычные носители или адъюванты, применяемые в фармацевтических препаратах или препаратах, используемых в ветеринарии. Эти носители и адъюванты включают в себя, например, адъювант Фрейнда, ионно-обменные вещества, окись алюминия, стеарат алюминия, лецитин, буферные агенты,такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, частичные глицеридные смеси насыщенных жирных растительных кислот, вода, соли или электролиты, такие как сульфат протамина, динатрий гидрофосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный клемнезем, магний, трисиликат, вещества на основании целлюлозы и полиэтиленгликоль. Адъюванты для местных форм или форм на основе геля включают в себя, например, натрий карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, блок-полимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен, полиэтиленгликоль и спирты, полученные из воска дерева. Фармацевтические композиции для парентерального применения могут быть получены как твердые эксципиенты, необязательно измельчая полученную смесь, и гранулируя смесь, после добавления вспомогательных веществ, если желательно, с получением таблеток или ядер драже. Подходящие эксципиенты включают в себя наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, манит или сорбит; препараты целлюлозы, такие как, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидроксипропилметил-целлюлоза,карбоксиметилцеллюлоза натрия и/или поливинилпирролидон (PVP). Если желательно могут быть добавлены дезинтегрирующие агенты, такие как поливинилпирролидон с поперечными сшивками, агар или альгиновая кислота или их соли, такая как альгинат натрия. Ядра драже покрывают подходящими покрывающими агентами. Для этой цели могут использоваться концентрированные растворы сахара, которые необязательно могут содержать гуммиарабик,тальк, поливинилпирролидон, карбополовый гель, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лакообразные растворы и подходящие органические растворители или смеси растворителей. К таблеткам или агентам для покрытия драже могут быть добавлены красители или пигменты для идентификации или для того, чтобы различать различные сочетания доз активных соединений. Фармацевтические композиции, которые могут использоваться перорально, включают в себя сборные капсулы, сделанные из желатина, а также мягкие, герметизированные капсулы, сделанные из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Сборные капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителями, такими как лактоза, связывающие агенты, такие как крахмалы,и/или лубриканты, такие как тальк или стеарат магния и, необязательно, стабилизаторы. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Все композиции для перорального введения могут быть подходящим образом дозированы для такого введения. Композиции для буккального применения могут быть в форме таблеток или лепешек, полученных обычным способом. Агонисты или антагонисты TWEAK для ингаляций обычно доставляются в форме аэрозольного спрея, подаваемого из контейнеров с содержимым, находящимся под давлением, или распылителя, используя подходящий пропеллент, например, дихлордифтометан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода иди другой подходящих газ. В случая аэрозоля с содержимым, находящимся под давлением, доза может быть определена с помощью клапана для получения дозированного количества. Капсулы и картриджи, например, желатиновые, для применения в ингаляторе или вдувателе, могут содержать смесь порошка соединения с подходящей основой для порошка, такой как лактоза или крахмал. Композиции с агонистами или антагонистами TWEAK могут быть получены либо для парентерального введения путем инъекции, например, болюсной инъекцией, либо длительной инфузией. Агенты могут быть приготовлены в виде водных растворов, водных суспензий, масляных суспензий или эмульсий,и они могут содержать средства для приготовления композиций, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Композиции для инъекции могут находиться в виде единичной- 16011607 дозированной форме, например, в ампулах, или в контейнерах с множеством доз, с добавлением консерванта. Обычные композиции в виде водных растворов включают в себя физиологически совместимые буферы, такие как раствор Хенкса, раствор Рингера или физиологический солевой раствор. Обычные масляные суспензии могут содержать липофильные растворители или носители, которые включают в себя масла жирных кислот, такие как кунжутное масло или синтетические сложные эфиры жирных кислот,такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные растворы для инъекций могут содержать вещества, повышающие вязкость суспензии, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, сорбит или декстран. Необязательно, суспензии могут также содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, давая возможность получать высококонцентрированные растворы. В качестве альтернативы, агонисты или антагонисты TWEAK могут быть в виде порошка для восстановления перед применением подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода. С агонистами или антагонистами TWEAK также могут быть получены ректальные композиции, такие как суппозитории или клизмы, например, содержащие обычные основы для суппозиториев, такие как масло какао или другие глицериды. Кроме описанных композиций с агонистами или антагонистами TWEAK также могут быть получены композиции в форме депо. Такие композиции длительного действия могут вводиться путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или внутримышечной инъекцией. Таким образом, например, соединения могут быть смешаны с подходящими полимерными или гидрофобными веществами(например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионно-обменными смолами, или как слаборастворимые производные, например, как слаборастворимая соль. Фармацевтический носитель агонистов или антагонистов TWEAK, которые являются гидрофобными, представляет собой систему нескольких растворителей, содержащую бензиловый спирт, непротонное поверхностно-активное вещество, водорастворимый органический полимер и водную фазу. Система,содержащая несколько растворителей, может быть системой VPD. VPD система представляет собой раствор 3% мас./об. бензилового спирта, 8% мас./об. неполярного поверхностно-активного вещества полисорбат 80 и 65% мас./об. полиэтиленгликоля 300, доведенный до объема в абсолютном этаноле. СистемаVPD (VPD:5W) содержит VPD, разведенный 1:1 5% декстрозой в водном растворе. В этой системе нескольких растворителей хорошо растворяются гидрофобные соединения, и само по себе она является низкотоксичной при системном применении. Естественно, пропорции системы нескольких растворителей могут значительно изменяться, не влияя на их свойства растворимости и токсичности. Более того,компоненты этой системы могут изменяться: например, вместо полисорбата 80 можно использовать другие низкотоксичные неполярные поверхностно-активные вещества; может изменяться размер фракции полиэтиленгликоля; полиэтиленгликоль может быть заменен другими биосовместимыми полимерами,например, поливинилпирролидоном; и декстроза может быть заменена другими сахарами или полисахаридами. Альтернативно, могут использоваться другие системы доставки гидрофобных фармацевтических соединений. Примерами средств доставки или носителей гидрофобных лекарственных средств являются липосомы и эмульсии. Также могут использоваться определенные органические растворители, такие как диметилсульфоксид, хотя они являются более токсичными. Кроме того, агонисты или антагонисты TWEAK могут быть доставлены, используя системы длительного высвобождения, такие как полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащих терапевтический агент. Доступны различные вещества с длительным высвобождением, и они хорошо известны в данной области. Капсулы с длительным высвобождением могут, в зависимости от своей химической природы, высвобождать соединения в течения периода от нескольких недель до более чем 100 дней. В зависимости от химической природы и биологической стабильности агониста или антагонистаTWEAK, могут использоваться дополнительные приемы для стабилизации белка. Фармацевтические композиции также могут содержать подходящие твердые или гелеобразные носители или эксципиенты. Примеры таких носителей или эксциентов включают в себя, но ими не ограничиваются, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы,желатин и полимеры, такие как полиэтиленгликоли. Агонисты или антагонисты TWEAK могут быть представлены как соли с фармацевтически приемлемыми противоионами. Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с большим количеством кислот, включая, но ими не ограничиваясь, хлористо-водородную, серную, уксусную, молочную,винную, яблочную, янтарную и так далее. Соли, которые более растворимы в водных или других протонных растворителях, соответствуют формам свободного основания. С агонистами или антагонистами TWEAK также могут быть получены фармацевтические композиции, которые эффективны для покрытия эндопротезов сосудов, для лечения заболеваний сердца, связанных с TWEAK. Настоящее изобретение также относится к способу идентификации агонистов или антагонистовTWEAK. Такие агонисты или антагонисты TWEAK могут быть эффективны для лечения состояний, свя- 17011607 занных с TWEAK, т.е. заболеваний, с поражением или другими патологическими состояниями тканей в которых экспрессируется рецептор TWEAK, например, FN14. Эти состояния включают в себя фиброз и заболевания сердца (например, кардиомиопатии), почек, легких, печени, кожи, скелетных мышц, липидного обмена (например, ожирение), желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы, репродуктивных органов, нервной ткани (включая нейродегенерацию), хряща, кости и соединительной ткани. Такие агонисты или антагонисты TWEAK также эффективны для стимуляции обновления ткани, модулируя поведение клеток-предшественников in vivo или in vitro в соответствии с настоящим изобретением. В одном из вариантов осуществления, способ идентификации антагониста TWEAK включает в себя стадии: 1) введения исследуемому трансгенному животному, которое экспрессирует экзогенную ДНК,кодирующую полипептид TWEAK или его фрагмент, аналог, мутеин или миметик, с соединением, которое возможно является антагонистом TWEAK; 2) сравнение фиброзной ткани, сердечной ткани, почек,печени, легких, кожи, скелетных мышц, жировой ткани, органов желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы, репродуктивных органов, нервной ткани, хрящевой ткани, костной или соединительной ткани исследуемого трансгенного животного с тем же органом или тканью указанных животных, экспрессирующих экзогенную ДНК, но не получавшим это соединение; и 3) определение эффекта данного соединения на фиброзную ткань, сердечную ткань, почки, печень, легкие, кожу, скелетные мышцы, жировую ткань, органы желудочно-кишечного тракта, поджелудочную железу, репродуктивные органы,нервную ткань, хрящевую ткань, костную или соединительную ткань. В другом варианте осуществления трансгенное животное является либо млекопитающим, либо не является млекопитающим, как описано здесь. Трансгенные животные, описанные здесь, экспрессируют экзогенные ДНК, кодирующие полипептиды TWEAK, где экспрессия приводит к развитию заболевания, связанного с TWEAK. В примерах были получены трансгенные мыши, экспрессирующие экзогенные белки TWEAK либо в измененной растворимой форме, либо в виде полной мембранно-связанной формы. У мышей, экспрессирующих экзогенные белки TWEAK, наблюдали фенотип, который включал в себя невоспалительную дилатационную кардиомиопатию, застойную сердечную недостаточность, гиперплазию эпителиальных клеток печени,вакуолизацию гепатоцитов, поражение печени и воспалительные заболевания почек, такие как мультиочаговое воспаление, невоспалительные заболевания почек, такие как тубулярная нефропатия, кисты,гломерулярная нефропатия, гиперплазия почечных канальцев, фиброз почек и воспалительные заболевания легких. Более того, у мышей дикого типа, которых инфицировали вирусными векторами, экспрессирующими экзогенные белки TWEAK, также наблюдали гиперплазию желчных протоков, гибель гипатоцитов, фиброз печени и поражение печени. Обладая такими животными, специалисты в данной области имеют мощный способ поиска препаратов. В частности, животные, которые экспрессируют экзогенные белки TWEAK, являются модельной системой для применения способа при поиске агонистов или антагонистов TWEAK, которые могут быть эффективны для профилактики или лечения заболеваний, связанных с TWEAK, описанных здесь. В предпочтительном варианте осуществления животные, которые могут быть эффективны в качестве таких модельных систем, являются либо млекопитающими, либо не являются млекопитающими. В более предпочтительном варианте осуществления млекопитающими являются мыши, крысы, хомячки,кролики, собаки, кошки, коровы, свиньи, козлы, лошади, овцы, морские свинки и приматы. В другом более предпочтительном варианте осуществления животные, не являющиеся млекопитающими, представляют собой птиц, рыб, амфибий, насекомых и беспозвоночных. Экзогенная ДНК, кодирующая полипептид TWEAK, экспрессируется в трансгенных животных с помощью контролирующей экспрессию последовательности, которая контролирует экспрессию экзогенной ДНК у животного. Контролирующие экспрессию последовательности, которые контролируют транскрипцию, включают в себя, например, промоторы, энхансеры сайтов, прекращающих транскрипцию,области, контролирующие локусы, сигналы, процессирующие РНК-полимеразу и элементы, перестраивающие хроматин. Контролирующие экспрессию последовательности, которые контролируют посттранскрипционные события, включают в себя донорные и акцепторные сайты и последовательности,которые модифицируют время полураспада транскрибируемой РНК, например, последовательности с непосредственным добавлением poly(А) или сайты связывания РНК-связывающих белков. Контролирующие экспрессию последовательности, которые контролируют трансляцию, включают в себя сайты связывания рибосом, последовательности, которые непосредственно направлены на экспрессию полипептида в определенный клеточный компартмент или внутри него, и последовательности в 5' и 3' нетранслируемых областях, которые модифицируют скорость или эффективность транскрипции. Предпочтительными контролирующими экспрессию последовательностями, в случае экспрессиTWEAK у трансгенных мышей, включают в себя вирусные элементы, высокоэкспрессирующие белок,такие как промоторы и/или энхансеры, полученные из ретровирусных LTR, цитомегаловируса (CMV)(такие как промотор/энхансер CMV), вируса обезьян 40 (SV40) (такие как протомотор/энхансер SV40),аденовируса, (например, главный последний промотор аденовируса (AdMLP, полиомы и сильные белки млекопитающих, такие как нативные иммуноглобулины и промоторы актина. В одном из вариантов- 18011607 осуществления, ДНК, кодирующие полипептиды TWEAK, контролируются промотором альфа антитрипсина (ААТ). Более подробное описание вирусных элементов, контролирующих экспрессию, и их последовательности, можно найти, например, в патентах США 5168062; 4510245 и 4968615. Экзогенные ДНК также могут экспрессироваться в трансгенных животных из элементов, котролирующих тканеспецифическую экспрессию, включая промоторы. Такие специфические элементы контроля экспрессии хорошо известны в данной области. Не ограничивающие примеры подходящих тканеспецифических промоторов включают в себя альбуминовый промотор, специфичный для печени (Pinkert etal., Genes Dev. 1: 268-277 (1987, промоторы, характерные для лимфоидной ткани (например, Calame andEaton, Adv. Immunol. 43: 235-275 (1988); Winoto and Baltimore, EMBO J. 8: 729-733 (1989); Banerji et al.,Cell 33: 729-740 (1983); и Queen and Baltimore, Cell 33:741-748 (1983, промоторы, характерные для нервной ткани (например, Byrne and Ruddle, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5473-5477 (1989, промоторы,характерные для поджелудочной железы (например, Edlund et al., Science 230: 912-916 (1985, промоторы, характерные для молочных желез (например, патент США 4873316 и европейская патентная заявка 264166) и промотры, регулирующие развитие (например, Kessel and Gruss, Science 249: 374-379 (1990);Campes and Tilghman, Genes Dev. 3: 537-546 (1989. Другие неограничивающие примеры тканеспецифических промоторов включают в себя промотор тяжелой цепи альфа миозина сердечной ткани ( МНС),промотор кератина-14 кожной ткани (K14), промотор поверхностного белка С ткани легких (SPC) и промоторы ткани почек Ksp-кадгерин и почечного белка, регулирующего андрогены (KAP). Экзогенная ДНК может быть экспрессирована из индуцибильного эукариотического промотора, такого как металлотиониновый (МТ) промотор, или других индуцибильных эукариотических промоторов, хорошо известных в данной области. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полипептиды TWEAK, экспрессирующиеся в трансгенных животных по данному изобретению, могут быть целыми полипептидами TWEAK. В другом варианте воплощения, полипептиды, экспрессируемые в трансгенных животных, являются фрагментами полипептида TWEAK. В одном из предпочтительных вариантах воплощения фрагменты полипептида TWEAK являются растворимыми TWEAK. В другом варианте воплощения данное изобретение относится к трансгенным животным, которые экспрессируют экзогенно ДНК, кодирующее полипептиды TWEAK, в тканях, выбранных из группы,включающей в себя: сердце; кровь; сосуды; легкие; печень; почки; мозг; плаценту; скелетные мышцы; поджелудочную железу; селезенку; лимфу; тимус; аппендикс; лимфоциты периферической крови; желудочно-кишечный тракт; нейроны; кожу; адипоциты; хрящ; кости; соединительную ткань. В одном из вариантов осуществления ДНК TWEAK экспрессируется из конститутивного промотора. В другом варианте осуществления ДНК экспрессируется из индуцибильного промотора. В другом варианте осуществления ДНК экспрессируется из тканеспецифического промотора. Настоящее изобретение также относится к способам идентификации агонистов TWEAK, которые могут действовать как терапевтические агенты для лечения заболеваний, связанных с TWEAK или для стимулирования обновления ткани, модулируя поведение клеток-предшественников in vivo или in vitro в соответствии с настоящим изобретением. Возможные агонисты могут быть введены нормальным животным и их эффект на системы органов может оцениваться. Фиброзная ткань, сердечная ткань, почки, печень, легкие, кожа, скелетные мышцы, жировая ткань, органы желудочно-кишечного тракта, поджелудочная железа, репродуктивные органы, нервная ткань, хрящевая ткань, костная или соединительная ткань обработанных животных затем сравнивали с той же тканью необработанного животного; таким образом определяли, индуцирует ли соединение биологический эффект на любую указанную ткань. Данное изобретение также относится к способу идентификации генов, регулируемых TWEAK, которые могут действовать в качестве терапевтических мишеней для лечения заболеваний, связанных сTWEAK. Например, перепрофилирование RNA может быть осуществлено у трансгенных мышейTWEAK по сравнению с нормальными животными в различных тканях и таким образом могут быть идентифицированы мишени для действия препарата. Кроме того, целью настоящего изобретения являются способы, влияющие на стволовые клеткипредшественники или дифференциацию, включая дифференциацию стволовых мезенхимальных клеток,которые преобразуются в мышечные клетки, хрящевые клетки, костные клетки или клетки соединительной ткани, такие как клетки стромы, фибробласты, адипоциты и клетки кожи. Также целью данного изобретения являются способы воздействия на пролиферативную или дифференциальную способность овальных клеток, которые могут давать эпителиальные клетки желчных протоков или гепатоциты и клетки-предшественники почек, которые могут давать клетки эпителия канальцев. Примеры Для лучшего понимания данного изобретения приводятся нижеследующие примеры. Эти примеры даны в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения границ данного изобретения любым способом. Пример 1. Получение трансгенных мышей с TWEAK. Для идентификации активности TWEAK и биологических последовательностей сигнальных путейTWEAK в целевом(ых) органе(ах) in vivo, были созданы две конструкции, экспрессирующие TWEAK у- 19011607 мышей и они использовались для сверхэкспрессии белков TWEAK у нормальных мышей (С 57 В 1/6DBA/2) F1 и (С 57 В 1/6SJL/J) F2, используя обычные трансгенные способы. R.S. Williams and P.D. Wagner, J. Applied Physiology 88: 1119-1126 (2000). Использовались следующие конструкции, экспрессирующие TWEAK: (1) кДНК TWEAK аминокислот 101-249 SEQ ID NO:1, кодирующую растворимую форму мышиного TWEAK (обозначен как sTWEAK) в направлении 5'-3' после сигнальной последовательностиIgG мыши, вводили в вектор экспрессии СН 269 (вектор, полученный из вектора PCDEP4 (Invitrogen) и содержащий дополнительную последовательность SV40 poly А) после промотора альфа-антитипсина(ААТ) человека и бета-глобинового интрона и перед последовательностью гормона роста человека (hGH)poly А; и (2) кДНК, кодирующую весь трансмембранный белок (обозначен как FL-TWEAK), соответствующую аминокислотам 1-249 SEQ ID NO:1, вводили в вектор экспрессии pBlueScript (как описано вDesplat-Jego et al., J. Neuroimmunology 133: 116-123 (2002, содержащий дополнительный сайт SV40 poly А. Последовательность FL-TWEAK и дополнительный сайт poly А затем выделяли и клонировали в другой вектор; перед ними вставляли фрагмент регуляторной области, содержащий энхансер АроЕ - промотор ААТ человека, для создания вектора экспрессии СА 300. Было показано, что промотор ААТ непосредственно транскрибируется в основном в печени и с низкими уровнями в других тканях, включая почки. Р. Koopman et al., Genes Dev. 3: 16-25 (1989). В случае трансгенной конструкции sTWEAK, с помощью ПЦР концевой ДНК, используя зонды,соответствующие последовательности нуклеотидов 468-488 (5' праймер) и последовательности нуклеотидов 693-713 (3' праймер) комплементарной цепи SEQ ID NO: 2, были идентифицированы 23 независимых родоначальника трансгенной линии. Кроме того, ELISA сыворотки на содержание TWEAK показал, что 10 из этих 23 животных-родоначальников имели определяемые уровни TWEAK в своей сыворотке, в количестве от 0,06 до 3,0 мкг/мл. Оставшиеся 13 животных-родоначальников не имели определяемых уровней TWEAK в сыворотке, т.е. уровни были 10 нг/мл. Девять из 10 родоначальников сPCR+ TWEAK+ в сыворотке заболевали приблизительно в возрасте 4-5 месяца. Была отмечена потеря веса, согнутое положение тела, взъерошенный мех и выпучивание глаз. Пять из этих родоначальников неожиданно умирали и, следовательно, для эксперимента убивали только оставшихся четырех с признаками заболевания. Напротив, только 1 животное из 13 родоначальников с PCR+ с негативной сывороткой заболевало или умирало. Также 0 из 4 PCR- детенышей одного помета заболевали/умирали. В случае трансгенной конструкции FL-TWEAK, с помощью ПЦР и Нозерн-блоттинга концевой ДНК было идентифицировано два родоначальника трансгенной линии, экспрессирующие мРНКTWEAK в печеночной ткани. Кроме того, анализ ELISA сыворотки в отношении TWEAK показал, что ни один из этих двух животных-родоначальников не имел определяемые уровни TWEAK в своей сыворотке, т.е. уровни были меньше 10 нг/мл. Мыши родоначальники FL-TWEAK Tg не имели клинически видимого фенотипа. Пример 2. Сверхэкспрессия TWEAK у мышей, инфицированных вектором аденовируса с экзогенной ДНК, кодирующей TWEAK. Для идентификации биологических эффектов сверхэкспресси TWEAK in vivo, самки взрослых мышей C57BL/6 в возрасте 8-10 недель инфицировали аденовирусным вектором с дефектом репликации, с промотором цитомегаловируса (CMV), несущим кДНК либо мышиный TWEAK (Adeno-TWEAK), либо зеленый флуоресцентный белок медузы (GFP), используя стандартные способы, использующие аденовирус, как описано Tao et al., Molecular Therapy 3: 28-35 (2001). Аденовирусный вектор, содержащий GFP (Adeno-GFP), использовали как отрицательный контроль. Для определения была ли мышь успешно инфицирована адено-TWEAK конструкцией, определяли уровни белка TWEAK в сыворотке и контролировали их в различные моменты времени, используя стандартный анализ. Системную сверхэкспрессию мышиного sTWEAK у взрослых мышей индуцировали тканевыми изменениями по крайней мере в трех главных органах: печени, почках и сердце. См. табл. 1. Фенотип этих мышей, экспрессирующих аденовирусную конструкцию, сравнивали с фенотипом мышей TWEAK Tg примера 1, как показано на табл. 1. Эти наблюдения более подробно описаны в примерах, следующих ниже.- 20011607 Таблица 1 Сверхэкспрессия TWEAK, индуцированная реконструкцией тканей у взрослых мышей Пример 3. Дилатационная кардиомиопатия, вызванная sTWEAK и FL-TWEAK. Четыре выживших родоначальника примера 1, PCR+, TWEAK+ в сыворотке, убивали для проведения эксперимента и исследовали на явные морфологические патологии. См. табл. 2. Макроскопическое исследование в момент вскрытия показало увеличение сердца, у некоторых размер сердца был в 2-3 раза больше размера нормальных животных. Так как увеличение размера сердца наблюдали у нескольких независимых трансгенных родоначальников sTWEAK, невозможно, чтобы такое увеличение размера сердца было связано с независимыми результатами вскрытия. Более того, химический анализ сыворотки трансгенных мышей sTWEAK показал увеличение специфической креатинкиназы сердца. Таблица 2 Трансгенные мыши sTWEAK Фенотип с увеличенным сердцем также наблюдали у отдельных мышей трансгенной линии FLTWEAK, полученной последовательным обратным скрещиванием линии C57BL/6. См. табл. 3. У трансгенного FL-TWEAK-негативного потомства не было выявлено патологий сердца. Таблица 3 Трансгенные мыши FL-TWEAK Эти данные, взятые вместе, убедительно показывают, что фенотип с увеличенным сердцем не связан с TWEAK. Гистопатологический анализ сердца трансгенных мышей sTWEAK и FL-TWEAK показал сходные данные. Микроскопия с низким разрешением сердца трансгенной мыши FL-TWEAK (Tg) в сравнении с нормальным сердцем трансгенного негативного (NTg) потомства показана на фиг. 1. Показанное сердце трансгенных мышей FL-TWEAK характерно для трансгенных мышей sTWEAK (PCR+, TWEAK+ в сыворотке). В сердце трансгенных мышей наблюдается дилатационная кардиомиопатия, отличительным признаком которой является дилатация желудочков и предсердий. Наряду с этим дефектом был отмечен тромбоз предсердия и желудочка у большого числа животных (фиг. 1). Исследование у некоторых животных ткани легких и печени показало закупорку кровеносных сосудов. Микроскопия с высоким разрешением выявила другие гистопатологические нарушения в сердце,- 21011607 включая гипертрофию миокардиоцитов и кариомегалию. Необходимо отметить, что гистопатологический анализ желудочков трансгенных мышей TWEAK не показал следов воспаления. Следовательно,наблюдаемая кардиомиопатия, связанная с TWEAK, по своему характеру является невоспалительной. Химический анализ сыворотки всего объема крови трансгенных мышей sTWEAK (3 родоначальника и 1 потомство) показал патологически высокие уровни креатинкиназы (СК), особенно в сердце (т.е.MB тип СК), подтвержденные значительным уровнем сердечного напряжения/повреждения. У самок мышей C57BL/6 в возрасте 8-10 недель, инфицированных Adeno-TWEAK (см. пример 2),наблюдалась дилатационная кардиомиопатия, которая возникала на третий день после инфицирования,по сравнению с мышами, инфицированными негативным контролем, вирусом Adeno-GFP. У мышей, инфицированных TWEAK, сердце имело расширенные камеры, как показано на гистопатологической картине (фиг. 2). Анализируя данные, было показано, что TWEAK играет важную роль в развитии кардиомиопатий,включая дилатационную кардиомиопатию, и застойной сердечной недостаточности (CHF). Пример 4. Гиперплазия эпителиальных клеток печени, вакуолизация гепатоцитов, гибель гепатоцитов, гиперплазия желчных путей, фиброз печени и поражение печени, вызванные TWEAK. Роль TWEAK в гиперплазии эпителиальных клеток печени и вакуолизации гепатоцитов, а также поражение мышей дикого типа, инфицированных аденовирусом, содержащим ДНК, экспрессирующую полипептид sTWEAK, была показана на трансгенных мышах sTWEAK и FL-TWEAK. В печени мышей TWEAK Tg в возрасте 2 недели примера 1 наблюдали значительную гиперплазию желчных путей и овальных клеток по сравнению с мышами NTg. См. фиг. 3. Как показано на табл. 4,печень трансгенных мышей-родоначальниц FL-TWEAK имела умеренную гиперплазию желчных путей и овальных клеток даже при уровне TWEAK в сыворотке 10 нг/мл. У трансгенных мышей FL-TWEAK,полученных обратным скрещиванием начальной линией C57BL/6, наблюдали значительную гиперплазию желчных путей и овальных клеток (табл. 4). Таблица 4 Трансгенные мыши FL-TWEAK Аналогично, у трансгенных родоначальников sTWEAK, которые имели уровни TWEAK в сыворотке между 0,2 и 3,0 г/мл, наблюдалось значительная гиперплазия желчных путей и овальных клеток Эта гиперплазия желчных путей и овальных клеток подтверждена иммуногистохимическим (IHC) окрашиванием срезов печени FL-TWEAK Tg, полученные у мышей Tg примера 1, с помощью A6 mAb,который дифференцировал эпителиальные клетки желчных протоков и овальных клеток от гепатоцитов(Engelhardt et al., Differentiation 45: 29-37 (1990. На фиг. 4 показано увеличение A6 положительных клеток, связанных с портальными областями, а также расширение паренхимы печени в FL-TWEAK Tg по сравнению с NTg. Большее накопление гематоксилина и эозина в окрашенных срезах FL-TWEAK Tg мыши также ясно указывает на явное увеличение количества овальных клеток, расположенных рядом с желчными путями в портальных областях (фиг. 5). Иммуногистохимия в отношении ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) подтвердила увеличение количества пролиферирующих клеток желчных путей и овальных клеток у мышей TWEAK Tg no сравнению с мышами NTg уже в возрасте 2 неде- 22011607 ли. Позже, т.е. в возрасте между 8 неделей и 7 месяцем (не показано), наблюдалось увеличение количества пролиферирующих гепатоцитов у мышей TWEAK Tg по сравнению с мышами NTg. Более того, какFL-TWEAK, так и sTWEAK индуцировали гепатоцеллюлярную вакуолизацию мышей Tg примера 1 в возрасте 7 месяцев по сравнению с потомством NTg (фиг. 6). У мышей C57BL/6 и BALB/c SCID в возрасте 8-10 недель, сверхэкспрессирующие sTWEAK, при введении вируса Adeno-TWEAK, как в примере 2, наблюдали значительные уровни TWEAK в сыворотке. См. фиг. 7, на которой показан эффект, возникающий при введении различных доз аденовируса, на измеренные уровни TWEAK в сыворотке. Мышей инфицировали либо внутривенно 1011 частицами аденовируса на мышь (показано как линия В), либо внутривенно 1010 частицами аденовируса на мышь(показано как линия J) или внутримышечно 1011 частиц аденовируса на мышь (показано как линия Н). У мышей, инфицированных Adeno-sTWEAK, наблюдалось поражение печение, с желтухой в сыворотки, на 3 и 7 день у мыши C57BL/6 линии и на 3 и 4 день у мыши BALB/c SCID линии. Несколько мышей линии BALB/c SCID умерли на 4 день. Более того, у мышей C57BL/6, инфицированных Adeno-sTWEAK, как описано в примере 2, также происходила гибель гепатоцитов уже на 2-3 день после введения, что показывает высокий уровень аспартат-аминотрансферазы (AST) и аланин аминотрансферазы (ALT) маркерных ферментов печени в печени мышей, инфицированных TWEAK (Adeno-sTWEAK) по сравнению с печенью мышей, инфицированных GFP (Adeno-GFP) на 3 день (см. табл. 6 и фиг. 8). На 7 день после инфицирования количество обоих ферментов печени увеличивалось у мышей, обработанных Adeno-GFP, что следует ожидать в результате воспаления, вызванном одним только аденовирусным вектором. Смерть гепатоцитов также наблюдается в печени мышей, инфицированных TWEAK, что показывает гистологическая морфология,отличающаяся округлыми гепатоцитами и сморщенными, пикнотическими, в высокой степени эозинофильными тельцами Каунсильмена, содержащими фрагментированные ядра (фиг. 8). У мышей, которым вводили Adeno-sTWEAK, кроме того, развивается сильная гиперплазия желчных путей, которая достигает пика на 7 день после инфицирования и остается хорошо видимой на 11 день (фиг. 8). В печени мышей, инфицированных TWEAK, наблюдались гиперпластические структуры, экспрессирующие маркер A6, специфичный для эпителиальных клеток желчных путей и овальных клеток, что было идентифицировано с помощью микроскопией по методу светлого пятна. Таблица 6 Количество ферментов печени у животных, инфицированныхFn14, являющийся клеточным рецептором TWEAK, был индуцирован после введения в печень токсинов, таких как галактозамин (GalN) и тетрахлорид углерода (CCl4). На фиг. 9 показано, что Fn14 не определяется в печени здоровых взрослых мышей в анализе гибридизации in situ (ISH), используя зонд в отношении Fn14, и при микроскопии методом темного поля. Однако Fn14 индуцировался в высокой степени при поражении CCl4. Сходные результаты были получены после повреждения GalN (не показано). У мышей C57BL/6, инфицированных Adeno-TWEAK, как описано в примере 2, в гепатоцитах и некоторых гиперпластических структурах также в высокой степени идуцировался Fn14, что отмечалось в печени Adeno-sTWEAK по сравнению с печенью контрольных мышей Adeno-GFP (данные не показаны). Кроме того, была показана роль Fn14 на модели желчных путей, в которых поражение печени у мышей C57BL/6 в возрасте 10 недель индуцировали лигированием желчных путей, как описано Liu et al.,Hepatology 28: 1260-1268 (1999); Olynyc et al., Am. J. Pathol. 152: 347-352 (1998). Общий желчный проток лигировали на 0 день проводя хирургическую операцию и пять мышей C57BL/6 в возрасте 10 недель затем подвергали эвтаназии на 4 день и 8 день после операции. Затем готовили парафиновые срезы печени и определяли экспрессию TWEAK и Fn14 с помощью гибридизации in situ, используя антисмысловые зонды TWEAK и FN14 мыши с радиоактивной меткой, содержащие весь ген FN14. Как показано на фиг. 10, на 4 день Fn14 активно экспрессировался в эпителиальных клетках желчных путей, но не в гепатоцитах. На 8 день экспрессия Fn14 в эпителиальных клетках желчных путей значительно снижалась, но у некоторых мышей определяли низкие уровни экспрессии Fn14 (данные не показаны). Однако экспрессия TWEAK не изменялась и не определялась на моделях с лигированными желчными протоками. Эти результаты показали, что экспрессия Fn14 стимулируется в эпителиальных клетках желчных путей в ответ на определенные факторы, поражающие печень, и таким образом, играют важную роль в развитии фиброза печени. Анализ этих наблюдений показал, что TWEAK является важным фактором гиперплазии эпители- 23011607 альных клеток печени, вакуолизации гепатоцитов, поражения печени, гибели гепатоцитов, гиперплазии клеток желчных путей и фиброза печени. Пример 5. Заболевания почек, вызванные FL-TWEAK и sTWEAK. У трансгенных мышей FL-TWEAK примера 1 наблюдали явное заболевание почек, включая умеренное мультиочаговое воспаление, тубулярную нефропатию, кисты, гломерулярную нефропатиию, тубулярную базофилию, тубулярную дилатацию, тубулярную вакуолизацию и образование гиалиновых цилиндров. У мышей C57BL/6, инфицированных Adeno-TWEAK в возрасте 10 недель, как описано в примере 2,наблюдали гломерулярную нефропатию и тубулярную гиперплазию по сравнению с отрицательным контролем у мышей, инфицированных Adeno-GFP. Также, в результате увеличения экспрессии Fn14 на мышиной модели болезни Альпорта была показана роль TWEAK в синдроме Альпорта. Более того, рольTWEAK при фиброзе почек была показана на мышиной модели односторонней обструкции мочеточника,вызывающей фиброз почек, при введении антагониста TWEAK. Расширение интерстиции коркового слоя обычно возникает при отеке или инфильтрации при остром или хроническом воспалении клеток и фиброзе ткани. У трансгенных мышей FL-TWEAK примера 1 наблюдается тубулярная нефропатия и умеренное мультиочаговое воспаление интерстиции. Более конкретно, в поперечном срезе почек при сравнении почек нетрансгенных мышей и почек трансгенных мышей FL-TWEAK в возрасте 8 недель отчетливо видна тубулярная базофилия (фиг. 11, снимки, расположенные в середине). Гломерулярная нефропатия может отличаться лейкоцитарной инфильтрацией, как нейрофильной,так и моноцитарной, и пролиферацией эндотелия, эпителиальных и мезангиальных клеток. У трансгенных мышей FL-TWEAK, как описано в примере 1, наблюдается явная гломерулярная нефропатия вследствие повышенного содержания мезангиальных клеток и гипертрофии эпителия капсулы и умеренного утолщения капсулы с базофилией подлежащего эпителия канальцев (фиг. 12). Также у трансгенных мышей FL-TWEAK наблюдается дилатация мочевого пространства, что приводит к образованию гломерулярных кист с умеренным перигломерулярным фиброзом (фиг. 11, нижний снимок справа), по сравнению с нормальной морфологией клубочков мыши (фиг. 11, верхний снимок справа). Базофилия канальцев, наблюдаемая у мышей FL-TWEAK Tg, показывает увеличение РНК в цитоплазме клеток этих канальцев, т.е. транскрипционную активность, и предполагает, что эти клетки являются пролиферирующими. Окрашивание ядерным антигеном пролиферирующих клеток (PCNA) подтверждает, что в почках мышей TWEAK-Tg, как описано в примере 1, находится группа пролиферирующих клеток канальцев и что эти клетки соответствуют базофильным канальцам (фиг. 13). Для определения, являются ли базофильные канальцы проксимальными или дистальными, три серии тканевых срезов мышей TWEAK Tg окрашивали (1) гематоксилином и эозином (НЕ) для выявления расположения базофильных канальцев, (2) лектином, специфичным для проксимальных канальцев (лектин Т. Purpureas) и (3) лектином,специфичным для дистальных канальцев. На фиг. 14 показано, что базофильные (пролиферирующие) канальцы у мышей TWEAK Tg, как описано в примере 1, не экспрессируют эпителиальные маркеры,характерные для проксимальных, не дистальных канальцев. Наличие пролиферирующих канальцев, у которых отсутствуют некоторые эпителиальные маркеры,у мышей TWEAK Tg согласуется с моделью вызванного поражения почек, где клетки, полученные из S3 сегмента проксимального канальца, демонстрируют свойства клеток-предшественников, т.е. они начинают пролиферировать и экспрессировать маркеры мезинхимальных клеток, характерные для дедифференцирования. Последующее дифференцирование этих клеток может играть роль в восстановлении ткани путем регенерации новых канальцев (Witzgall et al., J. Clin. Invest. 93: 2175-2188 (1994. Альтернативно, может происходить пролиферирование и дифференцирование существующих клетокпредшественников, которые находятся в S3 области. Наличие пролиферирующих клеток, у которых отсутствуют некоторые эпителиальные маркеры, у мышей TWEAK Tg также согласуется с моделью развития почек, где эпителиальные канальцы образуются из мезенхимальных клеток-предшественников, которые подвергаются дифференцировке, и, следовательно, приобретают эпителиальные маркеры и свойства, характерные для канальцев. Аналогично, инфицирование мышей C57BL/6 в возрасте 10 недель вирусом Adeno-sTWEAK, как описано в примере 2, вызывает гломерулярную нефропатию и базофилию эпителия канальцев, а также случайное утолщение и гиперплазию гломерулярной капсулы на 11 день после инфицирования (фиг. 15). Это отличается от нормальной гистологии, наблюдаемой у мышей отрицательного контроля, инфицированных Adeno-GFP. Более того, базофилия, которая указывает на пролиферацию эпителиальных клеток,наблюдается на 3 день, но своего пика достигает приблизительно через неделю после введения. Было показано, что мРНК TWEAK широко экспрессируется в почках взрослой мыши C57BL/6(фиг. 16) и было показано, что мРНК Fn14 экспрессируется в проксимальных канальцах внутреннего коркового слоя/наружной части мозгового слоя (фиг. 17), как показано гибридизацией in situ (ISH), используя антисмысловые зонды TWEAK и Fn14 с радиоактивной меткой, визуализируя микроскопией по методу темного поля, что согласуется с ролью TWEAK при заболеваниях почек. Также было показано,- 24011607 что мРНК Fn14 индуцируется в почках мышей в модели синдрома Альпорта. На фиг. 18 показано увеличение мРНК Fn14 у двух мышей с синдромом Альпорта по сравнению с животными дикого типа при развитии заболевания у мышей с синдромом Альпорта в возрасте от 4 до 7 недель. Роль TWEAK на модели болезни Альпорта у мыши непосредственно исследовали введением антагониста TWEAK, белка слияния Fn14-Fc мыши. Мышам двух групп, состоящих из 5 мышей с нокаутом Альпорта (КО), полученные в соответствии с Cosgrove et al., Genes Dev. 10 (23): 2981-2992 (1996), вводили контрольный IgG2a (muP1.17) или белок слияния muFN14-Fc (полученный Biogen (Cambridge. Используемый контрольный IgG2a представляет собой белок миеломы мыши Р 1.17, полученный из гибридомы и очищенный стандартными способами очистки mAb. Белок muFN14-Fc представляет собой белок слияния экстрацеллюлярного домена Fn14 мыши и области Fc IgG2a мыши. Белок слияния получали либо из клеток эмбриональной почки человека 293 или из клеток яичника китайского хомячка (СНО) и очищали стандартными способами очистки mAb. Первое введение осуществляли мышам в возрасте три недели с дозой 100 мкг белка внутрибрушинным путем (IP). Введение продолжали осуществлять в течение следующих четырех недель в той же дозе два раза в неделю. Мышей убивали в конце 7-ой недели(возраст 7 недель). Почки отделяли и помещали в парафин и замораживали. Степень фиброза и воспаления почек оценивали по морфологии клубочков при окрашивании НЕ парафиновых срезов, активных миофибробластов при окрашивании актином гладких мышц и активных моноцитов при окрашиванииCD11b замороженных срезов. Срезы, окрашенные актином гладких мышц и CD11b, использовали для количественной оценки окрашенных областей для определения степени фиброза и воспаления, соответственно, с помощью компьютерной программы MetaMorph. Результаты анализа показали, что состояние клубочков у мышей, которым вводили FN14-FC, значительно улучшалось (59% клубочков с патологией у контрольных мышей, которым вводили Ig, по сравнению лишь с 39% клубочков с патологией у мышей,которым вводили Fn14-Fc, значение Р=0,03). Патология клубочков характеризуется серповидностью и/или фиброзом клубочков. Кроме того, фиброз кортикальной области почек у мышей, которым вводилиFN14-FC, был значительно меньше при измерении окрашивания альфа-актином гладких мышц, значение р = 0,04. Общей тенденцией также было снижение моноцитарной инфильтрации у мышей, которым вводили FN14-FC. Эти результаты ясно показывают, что введением мышам FN14-Fc с болезнью Альпорта снижает фиброз кортикальной области почек и улучшает общую морфологию клубочков. Роль TWEAK также исследовали на мышиной модели односторонней обструкции мочеточника, вызывающей фиброз почек, при введении антагониста TWEAK, моноклональных антител против TWEAK хомяка. На модели мыши с прогрессирующим фиброзом почек, мочеточник лигировали, что приводило к односторонней обструкции мочеточника (UUO). (Klahr et al., Am J Kidney Dis 18: 689-699 (1991); Moriyama et al., Kidney Int 54 (1): 110-119 (1998. UUO вызывала прогрессивный нефросклероз без острой почечной недостаточности у мыши, так как почка без обструкции мочеточника могла относительно нормально поддерживать функцию почек. Тогда как в почке с обструкцией мочеточника быстро развивался фиброз клубочков, почка без обструкции адаптивно гипертрофировалась. Действие вводимого антагониста TWEAK на UUO-вызванный фиброз почек оценивалась морфометрически. Использовали четыре группы из восьми самцов мышей C57BL/6 без вирусного антигена(Jackson Laboratories, Bar Harbor ME) в возрасте 8-10 недель. Мышей разделяли на следующие группы введения: только PBS (VEH), контрольное антитело хомячка против гемоцианина лимфы улитки (KLH)(HA4/8; приобретено у BD Biosciences (San Jose, антитела хомячка против мышиного TWEAK (AB.G11; получено от Biogen (Cambridge, растворимого рецептора TGF- Ig мыши (TGF-, положительный контроль; получено от Biogen (Cambridge и без введения (UNOP). Для индукции фиброза почек левый мочеточник асептически изолировали и перерезали в почке на оперируемой стороне на 0 день, как описано Hammad et al., Kidney Int 58: 242-250 (2000). Мышам следующих групп: PBS, HA4/8 и AB.G11 (анти-TWEAK mAb) осуществляли дополнительные введения на 2,6 и 9 день после хирургического вмешательства и мышам группы sTGF-R-Ig на 1, 3, 6 и 8 день. На 10 день после операции левую лигированную почку удаляли и разрезали пополам, делая разрез поперек через центр почечной лоханки, и готовили для получения парафиновых срезов. Парафиновые срезы почки окрашивали Trichrome-Masson на коллаген. Для количественной оценки коллагена и определения степени фиброза прооперированных почек на срезах, окрашенных TrichromeMasson, с помощью программы Metamorph измеряли области, окрашенные в голубой цвет (фиг. 19). Неожиданно на срезах почки животных, которые получали моноклональные антитела противTWEAK (AB.G11), было обнаружено 42% снижение содержания коллагена по сравнению с животными,которым вводили PBS, и 30% снижение содержания коллагена по сравнению с животными контроля,которые получали антитела (НА 4/8). Напротив, в почках животных, которым вводили растворимый рецептор TGF- Ig (TGF-R) было только 33% снижение количества коллагена по сравнению с животными,которым вводили PBS, и 19% снижение количества коллагена по сравнению с животными контроля, которые получали антитела (НА 4/8). Эти результаты ясно показывают, что введение антагониста TWEAK,такого как моноклональные антитела против TWEAK, гораздо эффективней снижают фиброз почек по сравнению с растворимый рецептор TGF- Ig (TGF-R).- 25011607 Анализ полученных в этом эксперименте результатов показал, что TWEAK играет важную роль в воспалительных заболеваниях почек, таких как мультиочаговое воспаление, и невоспалительные заболевания почек, таких как тубулярная нефропатия, кисты, гломерулярная нефропатия, синдром Альпорта,тубулярная базофилия, тубулярная дилатация, тубулярная вакуолизация, образование гиалиновых цилиндров, тубулярная гиперплазия и фиброз почек. Пример 6. Воспалительные заболевания легких, вызываемые TWEAK. В поперечных срезах легких трансгенных мышей FL-TWEAK и контрольных мышей, как описано в примере 1, наблюдается выраженное грануломатозное и лимфогистиоцитарное воспаление как у мышейFL-TWEAK, так и у sTWEAK Tg (фиг. 20). Также была обнаружена эндогенная экспрессия TWEAK в клетках легких, выстилающих брохиолы и альвеолы нормальных мышей, как показано анализом гибридизации in situ (ISH), используя антисмысловые зонды TWEAK с радиоактивной меткой, визуализированные микроскопией по методу темного поля (ISH) (фиг. 21). С помощью ISH, используя антисмысловые зонды Fn14 с радиоактивной меткой, визуализируя микроскопией по методу темного поля, было показано, что мРНК Fn14 экспрессируется в высокой степени в легких взрослых мышей C57BL/6, что согласуется с ролью TWEAK при заболеваниях легких(фиг. 22). Анализ этих данных показал, что TWEAK является важным фактором, вызывающим воспалительные заболевания легких, включая грануломатозное и лимфогистиоцитарное воспаление. Пример 7. TWEAK ингибирует как адипогенез, так и миогенез. Эффект TWEAK на клеточную дифференциацию исследовали, используя две модели in vitro адипогенеза и миогенеза, хорошо известные в данной области (Green и Meuth, Cell 3: 127-133 (1974); Yaffe andSaxel, Nature 270: 725-727 (1977. Для адипогенеза сначала выращивали клетки 3T3-L1 до конфлюэнтности в модинфицированной по Дульбекко среде Игла (DMEM) для роста и затем индуцировали для адипогенеза в соответствии со способами, известными в данной области. Green and Kehinde, Cell 5: 19-27 (1976). Кратко, клетки стимулировали на 0 день средой DMEM, модинфицированной средой MDI, содержащей дексаметазон, инсулин иIBMX в течение двух дней, а затем средой DMEM только с инсулином в течение еще двух дней. На 5 день клетки культивировали в нормальной среде DMEM для роста и адипогенез оценивали на 7 день окрашиванием Oil-Red. Для миогенеза клетки С 2 С 12 растили приблизительно до конфлюэнтности в среде DMEM для роста и на 0 день, меняли на среду для дифференциации с низким содержанием сыворотки, содержащим 2% сыворотки лошади для стимуляции дифференциации (Yaffe and Saxel, Nature 270: 725-727 (1977. Образование миотрубочек оценивали, используя фазоконтрастый микроскоп, и делали снимки на 6 день дифференциации. Для оценки действия TWEAK на эти два пути дифференцировки на 0 день добавляли различные варианты рекомбинантного TWEAK человека (TWEAK-FLAG, TWEAK или Fc-TWEAK) до конечной концентрации 100 нг/мл и каждый день обновляли. TWEAK ингибировал как адипогенез, так и миогенез в обеих системах (фиг. 23 и 24). Специфичность ингибиторного эффекта TWEAK подтверждали, используя в качестве нейтрализующего агента либо моноклональные антитела против TWEAK хомячкаAB.G11, либо hFn14-Fc. Эти результаты показали, что TWEAK играет важную роль в клеточной дифференцировке. Настоящее изобретение, таким образом, относится к способам воздействия на клеточную дифференциацию клеток-предшественников, описанных здесь, используя полипептиды, пептиды, агонисты или антагонисты TWEAK, описанные здесь. Пример 8. Связывание TWEAK с мезинхимальными стволовыми клетками человека. Мезинхимальные стволовые клетки человека (hMSCs) (Cambrex Corp., East Rutherford, NJ) культивировали в среде MSCGM (Cambrex) и выращивали их, инкубируя с PBS, содержащим 5 мМ EDTA, и готовили для анализа по сортировке флуоресцентно активированных клеток (FACS). Клетки инкубировали в буфере FACS, содержащем PBS и 1% FBS вместе с 100 нг/мл Fc-TWEAK в течение 1 ч на льду. После промывки дважды буфером FACS, клетки затем инкубировали с фикоэритрин-конъюгированными вторыми козьими антителами против Fc человека или козьими антителами против Fc мыши с разбавлением 1:200 (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) (фиг. 25). Фоновое окрашивание измеряли окрашиванием только вторичными антителами, как показано в виде пунктирной линии. Как показано на фиг. 25, TWEAK связывался с мезинхимальными клетками человека, что видно как измерение характера окрашивания Fc-TWEAK по сравнению с изображением, полученным при обработке только вторым антителом. Таким образом, способность TWEAK связывать мезенхимальные клетки(клетки-предшественники, способные дифференцироваться в мышечные клетки, а также в клетки хряща,кости, соединительной ткани, такие как клетки стромы, фибробласты, адипоциты и клетки кожи), что показывает, что TWEAK играет важную роль в дифференциации этих типов клеток, как в моделях нормальной, так патологической ткани.- 26011607 Пример 9. Fn14 экспрессируются в нейрональных стволовых клетках. Экспрессию Fn14 оценивали в мозге эмбрионов мышей в возрасте 13,5 день в смеси основных линий C57BL/6 и 129/Sve. Мозг подвергали гибридизации in situ, используя антисмысловой Fn14 зонд. Положительный сигнал определяли в субвентрикулярной зоне желудочков эмбриона, что коррелировало с расположением стволовых клеток (данные не показаны). Эти результаты показывают, что Fn14 играет важную роль в клеточной дифференциации. Пример 10. Способы идентификации терапевтических агентов для лечения заболеваний, связанных с TWEAK. Для идентификации антагонистов TWEAK, которые могут действовать как терапевтические агенты для лечения заболеваний, связанных с TWEAK, по настоящему изобретению, были получены животные для исследования, такие как мыши, экспрессирующие экзогенную ДНК, кодирующую полипептидTWEAK, его фрагмент, аналог, мутеин или миметик. Животным затем вводили соединение, которое предположительно может действовать как терапевтический агент для лечения заболеваний, связанных сTWEAK. Фиброзную ткань, сердечную ткань, почки, печень, легкие, кожу, скелетные мышцы, жировую ткань, органы желудочно-кишечного тракта, поджелудочную железу, репродуктивные органы, нервную ткань, хрящевую ткань, костную или соединительную ткань исследуемого животного затем сравнивали с той же тканью указанного животного, которое экспрессирует ДНК, но которому не вводили соединение; и, таким образом, определяли, влияет ли соединение на заболевание, связанное с TWEAK, фиброзной ткани, сердечной ткани, почек, печени, легких, кожи, скелетных мышц, жировой ткани, желудочнокишечного тракта, нервной ткани, хрящевой ткани, костной или соединительной ткани. Для идентификации агонистов TWEAK, которые действуют как терапевтические агенты для лечения заболеваний, связанных с TWEAK, по настоящему изобретению, исследуемому животному, например, мыши, которое экспрессирует экзогенную ДНК, кодирующую полипептид TWEAK, его фрагмент,аналог, мутеин или миметик, вводили соединение, которое вероятно может действовать как терапевтический агент для лечения заболеваний, связанных с TWEAK. Фиброзную ткань, сердечную ткань, почки,печень, легкие, кожу, скелетные мышцы, жировую ткань, органы желудочно-кишечного тракта, поджелудочную железу, репродуктивные органы, нервную ткань, хрящевую ткань, костную или соединительную ткань исследуемого животного затем сравнивали с той же тканью указанного животного, которому не вводили соединение; и, таким образом, определяли, индуцирует ли соединение какое-либо биологическое изменение указанных тканей, описанных здесь, в результате передачи сигналов TWEAK in vivo. Все публикации и патентные заявки, перечисленные в этом подробном описании, приведены здесь в качестве ссылки, как если бы каждая публикация или патентная заявка была конкретно и отдельно указана как приведенная в качестве ссылки. Хотя вышеуказанное изобретение для иллюстрации было подробно описано и для большего понимания были приведены примеры, понятно, что специалисту в данной области будет понятно в свете методик настоящего изобретения, что определенные изменения и модификации могут быть сделаны не выходя за рамки или отходя от сущности описанного здесь, включая прилагаемую формулу изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение антагониста TWEAK для получения лекарственного средства для лечения патологического состояния, выбранного из группы, включающей нейродегенеративное заболевание, заболевание,связанное с поражением ткани или дегенерацией, кардиомиопатию, заболевание печени, заболевание почек и воспалительное заболевание легких. 2. Применение по п.1, где антагонист TWEAK включает:(b) антитело против рецептора TWEAK;(c) полипептидный фрагмент рецептора TWEAK. 3. Применение по п.2, где антагонист TWEAK включает полипептидный фрагмент рецептораTWEAK, включающий фрагмент рецептора TWEAK Fn14, слитый с доменом Fc. 4. Применение по п.2, где антагонист TWEAK включает антитело против TWEAK. 5. Применение по п.2, где антагонист TWEAK включает антитело против рецептора TWEAK. 6. Применение по п.4 или 5, где антитело представляет собой антитело человека или является гуманизированным. 7. Применение по п.4 или 5, где антитело представляет собой моноклональное антитело. 8. Применение по п.4 или 5, где антитело представляет собой полноразмерное антитело. 9. Применение по п.4 или 5, где антитело представляет собой фрагмент антитела или слитый белок,включающий антигенраспознающую последовательность антитела. 10. Применение по п.1, где лекарственное средство вводят парентерально. 11. Применение по п.1, где пациентом является человек. 12. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой невоспалительное нейродегенеративное заболевание. 13. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой заболевание, связанное с поражением ткани или дегенерацией, и антагонист TWEAK вызывает дифференциацию пересаженных клеток-предшественников.- 29011607 14. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой дилатационную кардиомиопатию или застойную сердечную недостаточность. 15. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой фиброз печени или патологическое состояние, связанное с гиперплазией эпителиальных клеток печени, вакуолизацией гепатоцитов, повреждением печени, гибелью гепатоцитов или гиперплазией желчевыводящих протоков. 16. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой воспалительное патологическое состояние почек. 17. Применение по п.16, где воспалительное патологическое состояние почек представляет собой мультиочаговое воспаление. 18. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой невоспалительное патологическое состояние почек. 19. Применение по п.18, где невоспалительное патологическое состояние почек представляет собой тубулярную нефропатию, кисты, гломерулярную нефропатию, синдром Альпорта, тубулярную базофилию, тубулярную дилатацию, тубулярную вакуолизацию, образование гиалиновых цилиндров, тубулярную гиперплазию или почечный фиброз. 20. Применение по п.1, где патологическое состояние представляет собой грануломатозное или лимфогистиоцитарное воспаление легких. 21. Применение агониста TWEAK для получения лекарственного средства для обеспечения регенерации или обновления ткани у пациента. 22. Применение по п.21, где агонист TWEAK включает белок, содержащий полноразмерный полипептид TWEAK, антитело против рецептора TWEAK, или представляет собой фрагмент полипептидаTWEAK. 23. Применение по п.21, где агонист TWEAK вызывает рост популяции клеток печени, легких, кожи, поджелудочной железы, нервной или сердечной ткани. 24. Применение по п.21, где лекарственное средство предназначено для использования в лечении в виде комбинации с клетками-предшественниками или с трансплантацией ткани. 25. Применение (i) агониста TWEAK, который представляет собой фрагмент полипептида TWEAK,(ii) антагониста TWEAK, который включает полипептидный фрагмент рецептора TWEAK, (iii) антитела против TWEAK или рецептора TWEAK для получения лекарственного средства для воздействия на популяцию клеток-предшественников in vivo. 26. Способ обеспечения дифференцировки клеток-предшественников, включающий обработку клеток-предшественников in vitro антагонистом TWEAK, который вызывает их дифференцировку. 27. Способ по п.26, где антагонист TWEAK представляет собой:(b) антитело против рецептора TWEAK или(c) белок, включающий полипептидный фрагмент рецептора TWEAK. 28. Способ по п.27, где антагонист TWEAK включает растворимый полипептидный фрагмент рецептора TWEAK. 29. Способ по п.27, где антагонист TWEAK представляет собой Fn14-Fc. 30. Способ ингибирования дифференцировки клеток-предшественников или обеспечения клеточной пролиферации, включающий обработку клеток-предшественников in vitro агонистом TWEAK, который ингибирует дифференцировку клеток-предшественников адипоцитов или миоцитов или обеспечивает пролиферацию клеток почечных канальцев, эпителиальных клеток печени, овальных клеток или клеток желчных путей. 31. Способ по п.30, где агонист TWEAK включает полноразмерный полипептид TWEAK, фрагмент полипептида TWEAK или антитело против рецептора TWEAK. 32. Способ по любому из пп.26-29, где указанные клетки-предшественники выбраны из группы,включающей в себя:(h) клетки-предшественники, полученные из взрослого организма. 33. Способ по любому из пп.26-29, где указанные клетки-предшественники представляют собой недифференцированные адипозные, миогенные, хрящевые, костные или клетки соединительной ткани. 34. Способ по любому из пп.26-29, где клетки-предшественники представляют собой клеткипредшественники молочных протоков, клетки-предшественники скелетной мускулатуры, преадипоциты или мезинхимальные стволовые клетки. 35. Способ по любому из пп.26-29, где клетки-предшественники представляют собой невральные