Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

1. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в качестве иммуномодулятора в вакцинах для инфекционных болезней.

2. Применение по п.1, где иммуномодулятор представляет собой EtxB, не содержащий полного токсина.

3. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой болезнь, инфекционным агентом которой является представитель семейства вирусов герпеса.

4. Применение по п.3, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей HSV-1, HSV-2, EBV (вирус Эпштейна-Барра), VZV (вирус ветряной оспы), CMV (цитомегаловирус), HHV-6 (герпес-вирус человека), HHV-7 и HHV-8.

5. Применение по п.4, где инфекционный агент выбирают из группы, включающей HSV-1, HSV-2, CMV или EBV.

6. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус гриппа.

7. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус парагриппа.

8. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой респираторно-синцитиальный вирус.

9. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус гепатита.

10. Применение по п.9, где инфекционный агент выбирают из группы, включающей вирусы гепатита A, B, C и D.

11. Применение по п.10, где инфекционный агент представляет собой вирус гепатита A или вирус гепатита C.

12. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой менингит.

13. Применение по п.12, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae типа B и Streptococcus pneumoniae.

14. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой пневмонию или инфекцию дыхательных путей.

15. Применение по п.14, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей Streptococcus pneumoniae, Legonella pneumophila и Mycobacterium tuberculosis.

16. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой болезнь, которая передается половым путем.

17. Применение по п.16, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей Neisseria gonnorheae, ВИЧ-1, ВИЧ-2 и Chlamydia trachomatis.

18. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой заболевание желудочно-кишечного тракта.

19. Применение по п.18, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические и энтероаггрегирующие E. coli, ротавирусы, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Helicobacter pylori, Bacillus cereus, Campylobacter jejuni и Vibrio cholerae.

20. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой неглубокую инфекцию.

21. Применение по п.20, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и Streptococcus mutants.

22. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой паразитарную болезнь.

23. Применение по п.22, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы, включающей малярию, Trypanasoma spp., Toxoplasma gondii, Leishmania donovani и Oncocerca spp.

24. Композиция вакцины, предназначенной для иммунопрофилактики инфекционной болезни, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и где композиция вакцины включает антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, причем антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту этого инфекционного агента.

25. Композиция вакцины по п.24, где инфекционная болезнь представляет собой HSV-1-инфекцию и где антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту HSV-1.

26. Композиция вакцины по п.24 или 25, где иммуномодулятор представляет собой EtxB, не содержащий полного токсина.

27. Композиция вакцины по пп.24, 25 или 26, где иммуномодулятор и антигенная детерминанта представляют собой различные фрагменты.

28. Композиция вакцины по пп.24, 25 или 26, где иммуномодулятор и антигенная детерминанта связаны бифункциональным перекрестно-сшивающим реагентом.

29. Набор для вакцинации млекопитающего против инфекционной болезни, включающий

а) иммуномодулятор вакцины, выбранный из EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, и

б) антигенную детерминанту инфекционной болезни для совместного введения с указанным иммуномодулятором вакцины.

30. Способ предупреждения или лечения болезни у хозяина, предусматривающий стадию инокуляции хозяина вакциной, которая включает по меньшей мере одну антигенную детерминанту и иммуномодулятор, где иммуномодулятор представляет собой EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина.

31. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, для повышающей регуляции продуцирования антител на поверхностях слизистых оболочек.

32. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в качестве иммуномодулятора в вакцине для пролонгирования презентации антигена и достижения более продолжительной иммунологической памяти у млекопитающего.

33. Композиция вакцины, применяемой для иммунопрофилактики в отношении инфекционной болезни, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом, где вакцина содержит антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, причем антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту указанного инфекционного агента и иммуномодулятор пролонгирует презентацию антигенной детерминанты и обеспечивает более продолжительную иммунологическую память.

34. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в сочетании с антигеном или антигенной детерминантой для направленного переноса антигена или антигенной детерминанты в цитозоль или ядро антигенпрезентирующей клетки.

35. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в сочетании с антигеном или антигенной детерминантой для повышающей регуляции презентации указанной антигенной детерминанты или антигенной детерминанты, полученной из указанного антигена, молекулами класса I MHC.

36. Композиция вакцины, включающая

а) EtxB, CtxB и

б) антиген EBV,

предназначенная для лечения и/или предупреждения связанных с EBV болезней.

37. Терапевтическая композиция, включающая EtxB, CtxB, предназначенная для лечения связанных с EBV болезней.

 

Текст

Смотреть все

1 Настоящее изобретение относится к иммуномодулятору для применения в вакцине, которая предназначена для применения в отношении широкого спектра инфекционных агентов. Кроме того, настоящее изобретение относится к композиции вакцины, включающей иммуномодулятор, предпочтительно в комбинации с антигеном, и к способу вакцинации с использованием указанной композиции вакцины. Токсин холеры (Ctx) и близкий к нему теплолабильный энтеротоксин Е. coli (Etx) являются сильными иммуногенами и специфичными в отношении слизистой оболочки адъювантами. Однако их собственная токсичность делает их непригодными для применения на человеке. Например, хотя Ctx наиболее широко используется в качестве специфичного в отношении слизистой оболочки адъюванта на экспериментальных животных, он не пригоден для применения на людях из-за его выраженной способности вызывать диарею. Были предприняты попытки отделить их токсичность от активности в качестве адъювантов, например, используя компоненты Ctx и Etx для замещения их собственных голотоксинов. Веротоксин Е. coli (Vtx) представляет собой еще один известный бактериальный токсин.Ctx и Etx представляют собой гетерогексамерные протеины, состоящие из ферментативно активной субъединицы А и пентамерной субъединицы В. Известно, что Ctx и Etx связываются с GM1-ганглиозидом (GM1), гликосфинголипидом, который повсеместно присутствует на поверхности клеток млекопитающих. Vtx связывается с Gb3, который представляет собой аналогичный тип рецептора для GM1. С целью решения проблемы токсичности при разработке вакцины ранее была изучена активность в качестве адъюванта нетоксичных субъединиц В. Однако во многих публикациях описаны эксперименты, в которых использовали поступающие в продажу препараты Ctx иEtx. Эти препараты неизбежно загрязнены небольшим, но значительным с биологической точки зрения количеством активного токсина, в результате чего присущая субъединице В активность в качестве адъюванта не может быть отделена от активности в качестве адъюванта полного токсина (Wu и Russel, Infection and Immunity 61: 314-322 (1993), US-5182109). Последующие исследования с использованием рекомбинантной субъединицы CtxB (rCtxB) позволили предположить, что CtxB является неэффективным в качестве специфичного в отношении слизистой оболочки адъюванта и только добавление нативного голотоксина может вызвать сильные сопутствующие ответы (Tamura и др.,Vaccine 12: 419-426 (1994. В других исследованиях было высказано предположение о том,что у rCtxB отсутствуют способности к АДФрибозилированию и цАМФ-стимулированию,характерные для голотоксина, и, поскольку ме 004794 2 ханизм действия адъювантов связан с этими способностями, CtxB не может применяться в качестве адъюванта (Vajdy и Lycke, Immunology 75: 488-492 (1992), Lycke и др., Eur. J. Immunol. 22% 2277-2281 (1992), Douce и др., Infection andImmunity 65: 2821-2828 (1997. В другом исследовании установлено, что интраназальное введение овальбумина при использовании rCtxB в качестве адъюванта привело к низким гуморальным иммунным ответам. Нетоксичное производное Ctx с мутацией в субъединице А также привело к слабым ответам на сопутствующие антигены, в то время как присутствие активной субъединицы А очень сильно повышало активность адъюванта, что позволяет предположить, что активная субъединица А имеет решающее значение (Douce и др. (1997), выше). Также было установлено, что rCtxB иrEtxB могут применяться для повышения толерантности к гетерологичным антителам (Sun и др., Proc. Natl. Acad. Sci. 91: 4610-4614 (1994),Sun и др., Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 7196-7201Acad. Sci. 94: 5290-5295 (1997), эти данные позволяют предположить, что эти молекулы не могут применяться в качестве адъювантов. Основа создания настоящего изобретения Несмотря на то, что согласно современному уровню техники CtxB и EtxB являются плохими адъювантами и фактически могут действовать в качестве толерогенов, в настоящем исследовании изучено применение rEtxB (не содержащего ни остатка голотоксина, ни субъединицы А) в интраназальной вакцине для вируса герпеса простого (HSV) при моделировании на мышах, и неожиданно было обнаружено, что он обладает способностью стимулировать защитные иммунные ответы на контрольное заражение вирусом. В частности, при создании настоящего изобретения обнаружено, чтоI) агенты, такие как EtxB и CtxB, стимулируют высокие уровни продуцирования местного(в слизистой оболочке) антитела (хотя иммунизация с использованием rEtxB стимулировала продуцирование более низких титров общего сывороточного антитела, чем иммунизация с использованием комбинация Ctx/CtxB);II) распределение полученных антител смещено к несвязывающим комплемент антителам, прежде всего, S-IgA и IgG1;III) такие агенты, как EtxB и CtxB, также стимулируют местные и системные Тклеточные пролиферативные ответы;IV) агенты, такие как CtxB и EtxB, имеют тенденцию к сдвигу иммунного ответа от Тh1 связанного ответа к Th2-связанному ответу;V) когда агенты, такие как CtxB и EtxB,применяют в качестве иммуномодуляторов, некоторые вредные воздействия Тh2-связанных 3 ответов, такие как образование IgE, устраняются;VI) rEtxB является более эффективным иммуномодулятором, чем rCtxB;VII) агенты, такие как EtxB и CtxB, обладают способностью изменять путь, посредством которого антигенпрезентирующая клетка интернализует и процессирует антиген, что приводит к увеличению персистентности антигена;VIII) если агент, такой как EtxB и CtxB,связывают с антигеном, то появляется возможность изменить путь процессинга антигена, изменяя связь с иммуномодулятором; иCtxB иммуномодулирующие свойства в отношении популяций лейкоцитов in vitro. Эти важные открытия являются основой различных объектов настоящего изобретения и позволяют заявителям предположить, что чистые EtxB, CtxB и VtxB, а также другие агенты,которые обладают способностью связываться или имитировать эффект связывания с GM1 илиGb3, могут оказаться ценными в качестве иммуномодуляторов для применения в вакцинах,предназначенных для профилактической и терапевтической вакцинации против вызываемойHSV-1 инфекции, а также других инфекций,предупреждение или лечение которых облегчается при использовании иммуномодуляций указанных выше типов. Стимуляция иммунных ответовEtxB, CtxB, VtxB и другие агенты, которые обладают способностью связываться или имитировать эффект связывания с GM1 или Gb3,могут действовать в качестве иммуномодуляторов и стимулировать специфические иммунные реакции в ответ на контрольное заражение антигеном. Согласно первому объекту настоящего изобретения предложено применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; в качестве иммуномодулятора вакцин для инфекционных болезней. Согласно второму объекту настоящего изобретения предложена композиция вакцины для инфекционной болезни, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом,причем композиция вакцины включает антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из группы, включающей(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; причем антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту указанного инфекционного агента. Антиген и иммуномодулятор могут быть связаны, например, ковалентно или могут быть связаны генетически с образованием одного эффективного агента. Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения антиген и иммуномодулятор могут быть химически конъюгированы. Например, антиген и иммуномодулятор могут быть химически конъюгированы с помощью гетеробифункциональных перекрестно-сшивающих реагентов. Для практического воплощения этого объекта изобретения предпочтительным является раздельное введение (при котором антиген и иммуномодулятор не связаны), поскольку оно позволяет осуществлять раздельное введение различных фрагментов. Согласно третьему объекту настоящего изобретения предложен набор для вакцинации млекопитающего, такого как человек или другое млекопитающее, являющееся объектом ветеринарии, от инфекционной болезни, которая включает а) один из следующих агентов:(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, и б) антигенную детерминанту, которая представляет собой антигенную детерминанту инфекционной болезни, предназначенную для совместного введения с иммуномодулятором для вакцины. Композиция вакцины по второму объекту изобретения и набор по третьему объекту изобретения могут применяться в способе профилактической или терапевтической вакцинации,где "профилактическую вакцину" вводят необработанным индивидуумам с целью предупреждения развития болезни, а "терапевтическую вакцину" вводят индивидуумам, уже подвергшимся инфекционному заражению, для того,чтобы уменьшить или минимизировать инфекцию, или для того, чтобы избежать иммунопатологических последствий болезни. Агенты, такие как EtxB, обладают способностью изменять природу иммунного ответа,если инфекция уже имеет место. Включающая такой агент терапевтическая вакцина (т.е. вакцина, которая не должна содержать антиген), 5 может найти конкретное применение в случаях,когда иммунный ответ не является достаточным, для того, чтобы победить инфекцию. Это применение может быть особенно ценным при лечении хронического заболевания, например болезни, возбудители которой выбраны из группы, включающей вирусы герпеса, вирусы гепатита, ВИЧ, ТВ (туберкулезная палочка) и паразиты. Согласно четвертому объекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения болезни у хозяина, предусматривающий стадию инокуляции этого хозяина вакциной, включающей по меньший мере одну из антигенных детерминант и иммуномодулятор,причем иммуномодулятор представляет собой(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3. Вакцина может быть упакована для совместного введения и может вводиться многочисленными различными путями, такими как интраназальное, оральное, внутивагинальное, уретральное или окулярное введение. Интраназальная иммунизация является предпочтительной. Когда вакцину вводят интраназально, она может быть введена в виде аэрозоля или в жидкой форме. Антигенная детерминанта и иммуномодулятор могут вводиться пациенту в виде однократной дозы или в виде множественных доз. Согласно первому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют для борьбы с болезнью, инфекционный агент которой является представителем семейства вирусов герпеса. Например, инфекционный агент может быть выбран из группы,включающей HSV-1, HSV-2, EBV (вирус Эпштейна-Барра), VZV (вирус ветряной оспы),CMV (цитомегаловирус), HHV-6 (гепес-вирус человека), HHV-7 и HHV-8. В частности, инфекционные агенты могут представлять HSV-1,HSV-2, CMV или EBV. Согласно этому первому варианту осуществления антигенная детерминанта предпочтительно представляет собой антигенную детерминанту самого раннего, раннего или позднего продукта гена (например, поверхностного гликопротеина) вируса герпеса. Если инфекционный агент представляет собой HSV-1 или HSV-2, антигенная детерминанта может представлять собой антигенную детерминанту продукта гена, выбранного из 6 следующей группы: gD, gB, gH или gC или связанный с латентностью транскрипт (LAT). Если инфекционный агент представляет собой EBV, антигенная детерминанта может представлять собой антигенную детерминантуgp340 или gp350 или латентный протеин (например, EBNA-1, 2, 3 А, 3 В, 3 С и LP, LMP-1, 2 А и 2 В или EBER). Согласно второму варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют для борьбы с болезнью, инфекционный агент которой является вирусом гриппа. Согласно этому второму варианту осуществления антигенная детерминанта предпочтительно представляет собой антитигенную детерминанту протеина оболочки вируса (например,гемагглютинин и нейраминидазу) или внутренний протеин (например, нуклеопротеин). Согласно третьему варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют для борьбы с болезнью, инфекционный агент которой является вирусом парагриппа. Согласно четвертому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют для борьбы с болезнью, инфекционный агент которой является респираторносинцитиальным вирусом. Согласно пятому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют для борьбы с болезнью, инфекционный агент которой является вирусом гепатита. Например, инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей вирусы гепатита А, В, С и D. Особенно предпочтительными инфекционными агентами могут быть возбудители гепатита А или С. Согласно шестому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае менингита. Согласно шестому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae типа В и Streptococcus pneumoniae. Согласно седьмому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и 7 способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае пневмонии или инфекции дыхательных путей. Согласно седьмому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей Streptococcus pneumoniae, Legonella pneumophila и Mycobacterium tuberculosis. Согласно восьмому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае болезни, которая передается половым путем. Согласно восьмому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей Neisseriagonnorheae, ВИЧ-1, ВИЧ-2 и Chlamydia trachomatis. Согласно девятому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае заболевания желудочнокишечного тракта. Согласно девятому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей энтеропатогенные, энтеротоксигенные и энтероинвазивные Е. coli, ротавирусы, Salmonella enteritidis,Salmonella typhi, Helicobacter pylorvi, Bacilluscereus, Campylobacter jejuni и Vibrio cholerae. Если инфекционный агент выбирают из группы, включающей энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические и энтероагрегирующие Е. coli, то антигенная детерминанта может представлять собой антигенную детерминанту бактериального токсина или фактора адгезии. Согласно десятому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае неглубокой инфекции. Согласно десятому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и Streptococcus mutants. Согласно одиннадцатому варианту осуществления иммуномодулятор по первому объекту изобретения, вакцину по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения и способ по четвертому объекту изобретения применяют в случае паразитарной болезни. Согласно одиннадцатому варианту осуществления инфекционный агент может быть выбран из группы, включающей Trypanasoma spp., Toxoplasma gondii, Leishmania donovani и Oncocerca spp. Стимуляция иммунных ответов в слизистой оболочкеEtxB, CtxB и VtxB и другие агенты, которые обладают способностью связываться или имитировать эффект связывания с GM1 илиGb3, могут осуществлять специфическую повышающую регуляцию продуцирования антител в слизистой оболочке. Иммуномодулятор вакцины по первому объекту изобретения, композиция вакцины по второму объекту изобретения, набор по третьему объекту изобретения особенно эффективны в отношении болезней, при которых защиту от инфекции или лечение in vivo осуществляют,вызывая иммунный ответ в слизистой оболочке; например в отношении болезней, при которых в процессе заражения инфекционный агент связывается со слизистой оболочкой, образует в ней колонии или проникает через слизистую оболочку. Примеры таких болезней включают болезни, которые вызываются вирусами (ВИЧ,HSV, EBV, CMV, вирус гриппа, вирус кори,вирус эпидемического паротита, ротавирус и т.д.), болезни, вызываемые бактериями (Е. coli,Salmonella, Shigella, Chlamydia, N. gonnorhoea,T. pallidium, виды Streptococcus, включая, виды,которые вызывают зубной кариес), и болезни,вызываемые паразитами. Согласно предпочтительному варианту осуществления второго объекта настоящего изобретения предложена вакцина против HSV1-инфекции, которая включает по меньшей мере одну антигенную детерминанту HSV-1 и иммуномодулятор, причем иммуномодулятор представляет собой(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы,опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3. Предпочтительно иммуномодулятор представляет собой EtxB. Согласно предпочтительному варианту осуществления третьего объекта настоящего изобретения предложен набор для вакцинации млекопитающего против HSV-1,включающий а) иммуномодулятор вакцины, который представляет собой(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, и б) по меньшей мере одну антигенную детерминанту HSV-1 для совместно введения с иммуномодулятором вакцины. Пятым объектом изобретения является применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, для повышающей регуляции продуцирования антител на поверхности слизистой. Продуцирование не связывающих комплемент сывороточных антител также может быть подвергнуто повышающей регуляции. Предпочтительно согласно пятому объекту изобретения получают S-IgA. Согласно этому пятому объекту агент может применяться в сочетании с одной или несколькими антигенной(ыми) дерминантой(ами). Понижающая регуляция патологических компонентов иммунных ответов При создании изобретения также установлено, что когда в качестве иммуномодулятора применяют чистый EtxB согласно описанному способу, то это позволяет избежать вредных воздействий, связанных с Тh2-клеточными ответами, таких как получение высоких титров потенциально патологического IgE. Несмотря на это, иммунный ответ, вызванный применением EtxB (или CtxB, или VtxB) в качестве иммуномодулятора, вероятно, является предпочтительным с точки зрения индукции Тh2 связанных цитокинов. Другими словами, EtxB(или CtxB) индуцирует сдвиг ответов от Тh1 клеточного ответа к Th2-клеточному ответу. Это позволяет заявителям предположить, чтоEtxB, CtxB, или VtxB, а также другие агенты,которые обладают способностью связываться или имитировать эффект связывания с GM1 илиGb3, могут оказаться способными осуществлять понижающую регуляцию патологических компонентов иммунного ответа, связанных как с активацией Тh1, так и с активацией Th2. Согласно шестому объекту изобретения предложено применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, для понижающей регуляции патологических компонентов связанных с Th2 иммунных ответов. Также могут подвергаться понижающей регуляции патологические компоненты связанных с Тh1 иммунных ответов. Известно, что EtxB и CtxB связываются сGM1 и индуцируют различные воздействия на популяции лимфоцитов, включая специфическое истощение CD8+ Т-клеток и связанную с 10 этим активацию В-клеток (WO 97/02045). Отсюда можно предположить, что EtxB и CtxB изменяют баланс иммунных ответов таким образом, что связанные с Тh1 воспалительные реакции подвергаются понижающей регуляции, а связанные с Th2 реакции подвергаются повышающей регуляции. Тh1-клеточные реакции включают секрецию -IFN (-интерферон) путем Т-клеточной активации, приводящей к активации макрофагов и реакции замедленной гиперчувствительности. Такие реакции могут быть важной причиной патологии при инфекциях,вызываемых различными патогенами. Тh2 клеточные реакции включают Т-клеточную активацию в отношении продуцирования цитокинов, таких как IL-4, IL-5, IL-10, и известно, что они усиливают секрецию высоких титров антител, прежде всего, IgA. При создании изобретения неожиданно установлено, что когда в качестве иммуномодулятора используют EtxB согласно описанному способу,то это позволяет избежать вредных воздействий,связанных с Th2-клеточными ответами, таких как получение высоких титров потенциально патологического IgE. Таким образом, EtxB иCtxB способны осуществлять понижающую регуляцию патологических компонентов иммунного ответа, связанных как с активациейTh1 так и с активацией Th2. Такие реакции предпочтительно модулируют продуцирование высоких титров несвязывающих комплемент сывороточных антител и продуцирование секреторного IgA на поверхностях слизистых оболочек. Применение агента по шестому объекту изобретения особенно важно для терапевтической вакцинации при болезнях, включающих иммунопатологические механизмы. Примерами таких болезней являются болезни, вызываемыеHSV-1, HSV-2, ТВ и ВИЧ. Первый и шестой объекты изобретения могут быть объединены. Другими словами,агенты, такие как EtxB, могут применяться одновременно и как иммуномодулятор, и как терапевтический агент. Например, при болезнях,включающих иммунопатологические механизмы, применение включаемых в вакцину агентов,таких как EtxB или CtxB, может служить не только для ограничения инфекции, но также для устранения патологических болезненных процессов. Таким образом, иммуномодулирующий агент может действовать в качестве как профилактического, так и терапевтического средства. Примеры инфекций, при которых, вероятно,вакцинация с помощью такого способа может оказаться особенно важной, включают болезни,которые вызываются семейством вирусов герпеса, патогенами желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей. Иммуномодуляция пути процессинга антигена а) Пролонгированная презентация. При создании изобретения также было обнаружено, что когда EtxB (или CtxB или VtxB) 11 применяют в качестве иммуномодулятора, изменяется интернализация антигена и путь его процессинга. Присутствие субъединицы В вызывает пролонгированную презентацию, вероятно, путем изменения направленной миграции антигена внутри антигенпрезентирующей клетки, в результате чего разложение антигена замедляется и, следовательно, он сохраняется в течение более длительных периодов времени. Эта связанная с презентацией антигена особенность В-субъединицы означает, что вакцины,включающие агент по настоящему изобретению, должны повышать персистентность антигена и обеспечивать более продолжительную иммунологическую память. Согласно седьмому объекту настоящего изобретения предложено применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, в качестве иммуномодулятора в вакцине для пролонгированной презентации антигена и для обеспечения более продолжительной иммунологической памяти у млекопитающего. Согласно восьмому объекту настоящего изобретения предложена композиция вакцины для применения в отношении инфекционной болезни, которая включает антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; где антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту указанной инфекционной болезни и где иммуномодулятор пролонгирует презентацию антигенной детерминанты и обеспечивает более продолжительную иммунологическую память. б) Внутриклеточная направленная миграция антигена к пути, связанному с MHC-I или МНС-II. Как указывалось выше, антиген и иммуномодулятор в терапевтической или профилактической вакцине могут быть связаны, например, ковалентно или генетически, с образованием одного эффективного агента. При создании изобретения установлено, что существует возможность направить антиген к различным компартментам клетки и в результате этого изме 004794 12 нить пути презентации антигена путем изменения связи антигена с иммуномодулятором. Путем осуществления определенной связи антигена или антигенной детерминанты с иммуномодулятором можно облегчить транслокацию антигена через эндосомальную мембрану в цитозоль. Авторы изобретения предположили,что это должно повысить загрузку пептидами антигена молекул класса I главного комплекса гистосовместимости (МНС). Таким образом,конъюгат антиген-иммуномодулятор можно применять для специфического усиления активации цитотоксических Т-клеток (CTL). Индукция CTL важна для предупреждения и лечения многих болезней, прежде всего тех, которые вызываются вирусами, внутриклеточными бактериями и паразитами. Связь в конъюгате антиген-иммуномодулятор может также быть выбрана таким образом, чтобы антиген доставлялся в ядро. Согласно девятому объекту изобретения предложен конъюгат, включающий антиген или антигенную детерминанту и иммуномодулятор,выбранный из(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3. Согласно десятому объекту изобретения предложена композиция вакцины, предназначенной для применения против инфекционной болезни, причем инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом, где композиция вакцины содержит конъюгат, включающий антиген или антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; причем антиген или антигенная детерминанта представляет собой антиген или антигенную детерминанту указанного инфекционного агента. Антиген или антигенная детерминанта могут быть связаны с иммуномодулятором различными методами, включая генетическое сцепление или химическое конъюгирование. Согласно первому предпочтительному варианту осуществления конъюгат представляет собой слитый протеин, полученный генетическим сцеплением антигена или антигенной детерми 13 нанты с иммуномодулятором. Предпочтительно антиген или антигенную детерминанту связывают с С-концом иммуномодулятора. Согласно второму предпочтительному варианту осуществления антиген или антигенную детерминанту химически конъюгируют с иммуномодулятором. Предпочтительно антиген или антигенную детерминанту химически конъюгируют с иммуномодулятором с помощью бифункционального перекрестно-сшивающего реагента, такого как гетеробифункциональный перекрестно-сшивающий реагент. Более предпочтительно перекрестно-сшивающий реагент представляет собой сложный N(малеимидобутироксил)сукцинимидный эфир (GMBS) или N-сукцинимидил-(3 пиридилдитио)пропионат (SPDP). Композиция вакцины может вводиться многочисленными различными путями, такими как интраназальное, оральное, внутивагинальное, уретральное или окулярное введение. Интраназальная иммунизация является предпочтительной. Согласно одиннадцатому объекту настоящего изобретения предложено применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; в конъюгате с антигеном или антигенной детерминантой для направленного переноса антигена или антигенной детерминанты в цитозоль или ядро антигенпрезентирующей клетки. Согласно двенадцатому объекту настоящего изобретения предложено применение(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина;(III) агента, оказывающего воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; в конъюгате с антигеном или антигенной детерминантой для повышающей регуляции презентации этой антигенной детерминанты или антигенной детерминанты, полученной из указанного антигена, с помощью молекул класса IMHC. Предпочтительно применение конъюгата согласно двенадцатому объекту изобретения осуществляют в сочетании с применением агента по пятому объекту изобретения для того,чтобы стимулировать сильные CTL-ответы и осуществлять повышающую регуляцию продуцирования антител в слизистой оболочке. Эта активность особенно важна для предупрежде 004794EtxB представляет собой предпочтительный иммуномодулятор Как предполагалось ранее, EtxB и CtxB обладают сходными свойствами. Однако при создании настоящего изобретения было обнаружено, что rEtxB является более сильным и эффективным иммуномодулятором, чем rCtxB. Таким образом, предпочтительным иммуномодулятором являются EtxB или агенты, имитирующие воздействия EtxB. ЕВVEBV представляет собой один из восьми известных вирусов герпеса человека. Заражение обычно происходит в раннем детстве; однако,клинические симптомы, как правило, на этой стадии слабые или не обнаруживаются. Первичное заражение EBV на более поздних жизненных стадиях связано с инфекционным мононуклеозом (ИМ), который представляет собой второе наиболее часто встречающееся в США юношеское заболевание. EBV также обладает онкогенным потенциалом. Существует выраженная связь между EBV и эндемической лимфомой Беркитта (БЛ) и недиференцированной назофарингиальной карциномой (НФК). Кроме того, большая часть лимфом, возникающих у пациентов с нарушенным иммунитетом, вызывается EBV, причем установлено, что существует связь между определенными лимфомами Ходжкина и EBV. Латентно зараженные EBV клетки экспрессируют небольшое количество так называемых "латентных" протеинов. Они включают шесть ядерных протеинов (EBNA-1, 2, 3 А, 3 В,3 С и LP), три интегральных мембранных протеина (LMP-1, 2A и 2 В) и две неполиаденилированных РНК вирусного происхождения (EBER),которые оказывают влияние на сплайсинг РНК. Латентный мембранный протеин 1 EBV(LMP-1) присутствует в плазменной мембране зараженных клеток. Он также экспрессируется при назофарингиальных карциномах (НФК) иEBV-позитивных лимфомах Ходжкина (HD),что свидетельствует о роли LMP-1 в развитии этих опухолей. Ген LMP-1 может изменять фенотип незараженных клеток, вызывая повышающую регуляцию маркеров активации клеточной поверхности, усиливая тем самым пролиферацию клеток. LMP-1 также может изменять пути проведения сигналов и обладает антиапоптозными действиями. Точно установлено, что никакого клеточного иммунного ответа в отношении этого вирусного антигена не обнаружено ни у каких-либо здоровых носителей, ни у имеющих опухоли пациентов. У многих вирусов животных в процессе эволюции развились механизмы, позволяющие избежать выявление иммунной системой хозяина. Как правило, эти механизмы включают взаимодействие с системой транслокации свя 15 занного с ТАР пептида. Возможно, что у EBV в процессе эволюции развились аналогичные механизмы, позволяющие избегать выявления иммунной системой, что позволяет ему сохранять персистентность в хозяине. Это объясняет, почему определенные клеточные иммунные ответы не могут распознать латентный протеин EBVEBNA1, и может объяснить обнаруженное отсутствие таких ответов в отношении LMP-1. Согласно тринадцатому объекту изобретения предложена композиция вакцины, которая включает а) один из следующих агентов:(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3, и б) антиген EBV,которая предназначена для лечения и/или предупреждения связанных с EBV болезней. Конкретная композиция вакцины по четырнадцатому объекту изобретения включаетCtxB, который обладает GM1-связывающей активностью. Согласно четырнадцатому объекту изобретения предложена терапевтическая композиция вакцины, которая включает(I) EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина;(III) агент, оказывающий воздействие на внутриклеточные сигналы, опосредованные связыванием GM1 или связыванием Gb3; для применения при лечении связанных сEBV болезней. Конкретная терапевтическая композиция по тринадцатому объекту изобретения включаетCtxB, который обладает GM1-связывающей активностью. Основываясь на известных данных о том,что EtxB образует "двойную шапочку" с LMP-1 и что EtxB усиливает фрагментацию LMP-1,теоретически можно предположить, что EtxB (и другие агенты типа CtxB, которые обладаютGM1-связывающей активностью) могут применяться для стимуляции анти-EBV иммунных ответов. Эта активность может найти применение в вакцинах для предупреждения связанных с EBV болезней и в терапевтических обработках для лечения таких болезней, если они развились. 16 Не вдаваясь в теорию, можно предположить, что когда EtxB образует "двойную шапочку" с LMP-1, антиген процессируется другим внутриклеточным путем, который позволяет антигену обойти нормальный путь процессинга, который блокируется вирусом, в результате чего антиген эффективно презентируется на поверхности клеток. Действие EtxB также может привести к тому, что на поверхности клеток могут презентироваться эпитопы антигена,отличные от тех, которые презентируются, если антиген процессируется обычным путем. Вакцина по тринадцатому объекту изобретения может применяться для предупреждения заражения EBV или развития связанных с EBV болезней у зараженных EBV индивидуумов. Вакцина может также включать специальный адъювант или агент (такой как EtxB или CtxB),который сам по себе может действовать как адъювант. Агенты, специфичные для четырнадцатого объекта настоящего изобретения, могут применяться по отдельности (т.е. без антигена) для лечения связанной с EBV болезни, которая уже развилась у пациента. Предпочтительным агентом, предназначенным для применения согласно тринадцатому и четырнадцатому объектам изобретения, является EtxB. Антиген EBV представляет собой антиген,который может быть получен из самого EBV,или антиген, который должен экспрессироваться зараженной EBV клеткой-хозяином под действием EBV. Предпочтительно антиген представляет собой латентный мембранный протеинEBV. Особенно предпочтительными являются антигены LMP-1, LMP-2A, LMP-2B и EBNA-1, а также их антигенные фрагменты. Антиген может быть выделен непосредственно из зараженных EBV клеток или может быть получен синтетическим или рекомбинантным путем. Тринадцатый и четырнадцатый объекты изобретения особенно пригодны для лечения и/или предупреждения следующих болезней: инфекционный мононуклеоз, лимфома Беркитта, назофарингиальная карцинома и лимфомы Ходжкина. Вероятно, эти объекты изобретения особенно пригодны для лечения и/или предупреждения назофарингиальной карциномы и лимфом Ходжкина. Вакцина или терапевтическая композиция по тринадцатому и четырнадцатому объектам изобретения могут применяться для предупреждения развития или для лечения связанной сEBV болезнью у пациента-млекопитающего путем введения пациенту иммунологически эффективного количества. Пациент-млекопитающее может представлять собой, например, здоровый инфицированный EBV или неинфицированный индивидуум,индивидуум с иммунодефицитом или индивидуум со связанной с EBV болезнью. 17 Вакцина может вводиться любым приемлемым путем. Агент и антиген могут вводиться совместно или вводиться по отдельности пациенту-млекопитающему. Агент и антиген могут находиться по отдельности или могут быть связаны, например, ковалентно или генетически связаны, с образованием одного эффективного агента.GM-1- и Gb3-связанные сигналы Не вдаваясь в теорию, можно предположить, что GM-1- и Gb3-связывание может непосредственно или косвенно запускать внутриклеточные сигналы. При создании изобретения получены данные, которые позволяют предположить, что по меньшей один другой рецептор вовлечен в связанное с GM1 проведение внутриклеточного сигнала. Может оказаться, что связывание EtxB (или CtxB) с GM1 облегчает связывание с протеином, который запускает внутриклеточный сигнал. Пока не известно,какой механизм специфично запускает внутриклеточный сигнал, это может быть фосфорилировние GM1 или протеина. Когда EtxB/CtxB связывает GM1 на поверхности клетки, связанный GM1 интернализируется везикулами (Williams и др., Immunology Today 20: 95-101(1999. Известно, что GM1 и другие гликолипиды (такие как Gb3) предпочтительно локализованы в "мембранных скоплениях", в которых также обнаружены рецепторы играющего решающее значение протеина. Отсюда представляется возможным, что интернализация GM1 в результате связывания В-субъединицей вызывает образование "двойной шапочки" таких протеинов, что приводит к запуску их способности опосредовать внутриклеточные сигналы. Определения Адъювант представляет собой вещество,которое, в отличие от носителя, неспецифично усиливает иммунный ответ на антиген, целью которого является направление антигена к требуемому сайту. Понятие "иммуномодулятор" в контексте настоящего описания используется для обозначения агента, который действует аналогично адъюванту, стимулируя определенные иммунные ответы, но который также направляет иммунный ответ в определенном направлении. Понятие "совместное введение" применяют для обозначения того, что место и время введения антигена и иммуномодулятора являются такими, которые необходимы для стимуляции иммунного ответа. Таким образом, если антиген и иммуномодулятор могут быть введены в один и тот же момент времени и в одну и ту же область, то это может иметь преимущества по сравнению с введением антигена и иммуномодулятора в различное время и/или в различные области. Например, антиген и иммуномодулятор могут вводиться вместе на первой стадии и затем иммунный ответ может быть 18 усилен на второй стадии путем введения одного антигена. Понятие "антигенная детерминанта" в контексте настоящего описания относится к сайту на антигене, который распознается антителом или Т-клеточным рецептором. Предпочтительно она представляет собой короткий пептид, полученный из протеина антигена или представляющий собой его часть, однако, также подразумевается, что понятие включает гликопептидные и углеводные антигенные детерминанты. Понятие также включает модифицированные последовательности аминокислот или углеводов, которые стимулируют ответы, распознаваемые целым организмом. Существуют многочисленные известные методы, с помощью которых можно идентифицировать антигенные детерминанты данного инфекционного агента. Например, потенциально защитные антигены могут быть идентифицированы по увеличению иммунных ответов в зараженных или выздоравливающих пациентах, в зараженных или выздоравливающих животных, или путем мониторинга in vitro иммунных ответов на содержащие антиген препараты. Например,I) образцы сыворотки, полученные из зараженных или выздоравливающих пациентов или зараженных или выздоравливающих животных, могут быть подвергнуты скринингу в отношении всех клеточных лизатов инфекционного агента или лизатов клеток, зараженных указанным агентом, с помощью стандартного метода Вестерн-блоттинга для обнаружения антигена(ов), распознаваемого(ых) иммунной сывороткой;II) образцы сыворотки, полученные из зараженных или выздоравливающих пациентов или зараженных или выздоравливающих животных, могут быть подвергнуты скринингу в отношении частично или полностью очищенных антигенов инфекционного агента или лизатов клеток, зараженных указанным агентом,путем стандартного метода ELISA, в котором частично или практически полностью очищенные антигены применяют для сенсибилизации лунок микропланшетов, или путем иммуноблоттинга для обнаружения того (тех) антигена(ов), который(ые) распознается(ются) иммунной сывороткой;III) образцы сыворотки, полученные из зараженных или выздоравливающих пациентов или зараженных или выздоравливающих животных, могут быть подвергнуты скринингу в отношении всех клеточных лизатов, полученных из рекомбинантных экспрессионных систем, кодирующих один или несколько представляющих интерес антигенов, и с использованием стандартных методов ELISA или Вестернблоттинга для обнаружения антигена(ов), распознаваемого(ых) иммунной сывороткой;IV) образцы сыворотки, полученные из зараженных или выздоравливающих пациентов или зараженных или выздоравливающих животных, могут быть подвергнуты скринингу в отношении экспрессионной библиотеки, содержащей клонированные гены представляющего интерес инфекционного агента, с использованием обнаружения с помощью иммуноблоттинга колонии для того, чтобы идентифицировать,какие клоны экспрессируют антигены или их фрагменты, которые распознаются иммунной сывороткой; илиV) PBL из крови зараженных или выздоравливающих пациентов или PBL клеток лимфатических узлов, клеток селезенки или клеток собственной пластинки слизистой оболочки зараженных или выздоравливающих пациентов могут культивироваться in vitro в присутствии частично или практически полностью очищенных антигенов, полученных либо из инфекционного агента, либо из лизатов клеток, зараженных этим агентом, либо из рекомбинантной экспрессионной системы, кодирующей один или несколько антигенов, таким образом, чтобы обнаружить антигенспецифические пролиферативные реакции Т-клеток. В альтернативном варианте возможно выявить продукты генов, которые играют важную роль для выживания патогенов in vivo, например, с помощью метода мутагенеза с использованием меченного ключа (signature-tagged), разработанного Холденом (Holden), или путем обнаружения продуктов гена, которые специфично индуцируются in vivo, например, с помощью такого метода, как IVET (In vivo Expression Technology),разработанного Мекаланосом (Mekalanos), или дифференциальной индукции флуоресценции,разработанной Фалкоу (Falkow), для идентификации поднабора генов, среди которых могут находиться потенциальные защитные антигены. С использованием этих методов продукты генов могут быть подвергнуты скринингу, как описано выше. Гены могут быть клонированы в экспрессионных векторах, и могут быть выделены антигены, предназначенные для включения в композиции вакцины вместе с агентами, которые модулируют связанную с гликосфинголипидом активность. Существуют многочисленные методы, с помощью которых возможно выделять антигены данного инфекционного агента. Например, компоненты поверхности инфекционного агента, включающие один или несколько потенциально защитных антигенов,могут быть экстрагированы из агента или клеток, зараженных агентом, с помощью процедур,которые позволяют выделить антигены. Этот метод может включать применение методик разрушения клеток с целью лизиса клеток, таких как облучение ультразвуком и/или экстракция детергентом. Для получения образованных антигенов могут применяться центрифугирова 004794 20 ние, ультрафильтрация или осаждение. Получение антигена, содержащего гликопротеины HSV-1,описанное у Richards и др., J. Infect. Dis. 177: 14511457 (1998), является примером такого метода. Кроме того, антигены инфекционного агента или клеток, зараженных этим агентом,могут быть экстрагированы с помощью различных методик, включая экстракцию мочевиной,щелочную или кислотную экстракцию или экстракцию детергентом с последующим хроматографическим разделением, но не ограничено указанными методиками. Материал, полученный в свободном объеме хроматографической колонки или в элюированных пиках, который включает один или несколько потенциально защитных антигенов, может применяться в композициях вакцин. В альтернативном варианте гены, кодирующие один или несколько потенциально защитных антигенов, могут быть клонированы в различных экспрессионных векторах, пригодных для продуцирования антигенов. Они включают бактериальные или эукариотические экспрессионные системы, например Escherichiacoli, Bacillus spp., Vibrio spp., Sacarromyces cervisiae, линии клеток млекопитающих и насекомых. Антигены могут быть выделены обычными методами экстракции, разделения и/или хроматографии. Обозначения "CtxB", "EtxB" и "VtxB" в контексте настоящего описания включают природные и рекомбинантные формы молекулы. Особенно предпочтительной является рекомбинантная форма. Рекомбинантная форма молекулы может быть получена согласно методу, при котором ген или гены, кодирующие определенную полипептидную цепь (или цепи), которая образует протеин, встраивают в приемлемый вектор и затем используют для заражения приемлемого хозяина. Например, ген, кодирующий полипептидную цепь, на основе которой образуется EtxB, может быть встроен, например, в плазмиду рММ 68, которую затем используют для заражения клеток-хозяев, таких как Vibriosp.60. Протеин очищают и выделяют хорошо известным методом. Из генов дикого типа с помощью хорошо известных методов могут быть получены мутантные гены, экспрессирующие активный мутантный протеин CtxB, EtxB или VtxB. Обозначения "CtxB", "EtxB" и "VtxB" также включают мутантные молекулы и другие синтетические молекулы (содержащие частиCtxB, EtxB или VtxB), которые сохраняют способность связываться с GM1 или Gb3 или способность имитировать эффекты связывания с 21 Для производства антител различные хозяева, включая коз, кроликов, крыс, мышей и т.д., могут быть иммунизированы путем инъекции GM1 или Gb3 или их любого производного или гомолога. В зависимости от видов-хозяев для усиления иммунологического ответа могут применяться различные адъюванты. Такие адъюванты включают минеральные гели Фрейнда,такие как гидроксид алюминия, и поверхностноактивные вещества, такие как лизолецитин,плурониевые полиолы, полианионы, пептиды,масляные эмульсии, гемоцианин лимфы улитки и динитрофенол, но не ограничены ими. БСЖparvum являются потенциально приемлемыми для человека адъювантами. Гуманизированные моноклональные антитела являются предпочтительными согласно настоящему изобретению. Моноклональные антитела могут быть получены с помощью методов, которые обеспечивают получение молекул антител с помощью непрерывного культивирования линий клеток. Они включают методы с использованием гибридом, впервые описанные Koehler и Milstein, Nature, 256: 495-497Sci. 80: 2026-2030 (1983 и метод EBVгибридом (Cole и др. (1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss Inc., стр. 77-96), но не ограничены ими. Кроме того, могут быть использованы методы, разработанные для получения "химерных антител", предусматривающие сплайсинг генов мышиного антитела с генами человеческого антитела с получением молекулы с требуемой антигенной специфичностью и биологической активностью (Morrison и др., Proc. Natl. Acad. Sci. 81: 6851-6855 (1984);Neuberger и др., Nature 312: 604-608 (1984); Takeda и др., Nature 314: 452-454 (1985. В альтернативном варианте методики, описанные для получения одноцепочечных антител (патент US 4946779), могут быть адаптированы для получения одноцепочечных антител, специфических в отношении компонента, представляющего собой мишень для взаимодействия. Антитела также могут быть получены путем индукции in vivo в популяции лимфоцитов или с помощью скрининга рекомбинантных библиотек иммуноглобулинов или панелей высокоспецифических связывающих реагентов,как описано у Orlandi и др., Proc. Natl. Acad. Sci. 86: 3833-3837 (1989) и у Winter G. и Milstein С.,Nature 349: 293-299 (1991. Также могут быть получены фрагменты антитела, которые содержат специфические антигенсвязывающие сайты GM1 или Gb3. Например, такие фрагменты включают F(аb')2 фрагменты, которые могут быть получены расщеплением пепсином молекулы антитела, иFab-фрагменты, которые могут быть полученыF(ab')2-фрагментов, но не ограничены ими. В альтернативном варианте могут быть сконструированы экспрессионные библиотекиFab, позволяющие быстро и легко идентифицировать моноклональные Fab-фрагменты с требуемой специфичностью (Huse W.D. и др., Science 256:1275-1281 (1989. Пептидные библиотеки или библиотеки органических соединений могут быть созданы с помощью комбинаторной химии и затем подвергнуты скринингу в отношении их способности связываться с GMl/Gb3. Синтетические соединения, природные продукты и другие источники потенциально биологически активных веществ могут быть подвергнуты скринингу разнообразными путями, очевидными специалистам в данной области.GM1 или Gb3 или их фрагменты могут применяться для скрининга пептидов или молекул с помощью любого из многочисленных методов скрининга. Молекула может представлять собой свободную молекулу в растворе, связанную с твердой подложкой, расположенную на клеточной поверхности или локализованную внутриклеточно молекулу. Может быть оценено отсутствие активности или образование связанных комплексов между GM1 или Gb3 и агентом,подлежащим тестированию. Другой путь определения связывания сGM1/Gb3 может быть основан на использовании очищенного GM1/Gb3 для сенсибилизации титрационных микропланшетов. После блокады исследуемый агент вносят на планшет и позволяют ему вступать во взаимодействие до отмывки и обнаружения с помощью специфических антител к этому агенту. Конъюгация антител либо непосредственная, либо косвенная, с ферментом или радиоактивной меткой позволяют затем количественно оценивать связывания с помощью методов, основанных либо на колориметрическом анализе, либо на оценке радиоактивности (ELISA и РИА соответственно). Другой путь определения связывания сGM1/Gb3 может быть основан на использовании связывания фрагмента сахарила GM1/Gb3 с приемлемым носителем колонки с целью проведения стандартной аффинной хроматографии. Удаление известных соединений, внесенных в колонку с растворителем, может использоваться в качестве доказательства активности связывания, или в другом варианте, если в колонку вносят смеси соединений, элюция и последующий анализ могут позволить определить способности агентов связывать ганглиозид. В случае протеинов анализ может включать секвенирование пептида, и картирование после расщепления трипсином, и последующие сравнения с доступными базами данных. В случае, если элюированные протеины не могут быть идентифицированы этим методом, то для получения дополнительных характеристик соединения могут 23 применяться стандартные биохимические анализы, например определение массы с помощью масс-спектрометрии с лазерной десорбцией. Продукты, не относящиеся к протеинам, элюированные из обладающих аффинностью к GM1 колонок, могут быть проанализированы с помощью ЖХВР и масс-спектрометрии отдельных гомогенных пиков. Другой путь определения способности к связыванию с GM1/Gb3 и точной аффинности взаимодействия может быть основан на использовании плазменного поверхностного резонанса, ранее описанного у Kuziemko и др., Biochem. 35: 6375-6384 (1996. В альтернативном варианте для идентификации потенциально активных агентов, которые связываются с GM1 или Gb3, может применяться демонстрация с помощью фага. Демонстрация с помощью фага представляет собой протокол молекулярного скрининга с использованием рекомбинантного бактериофага. Метод включает трансформацию бактериофага геном, который кодирует соответствующий лиганд (в данном случае потенциально активный агент), способный взаимодействовать сGM1/Gb3 (или с их производным или гомологом) или нуклеотидной последовательностью(или ее производным или гомологом), кодирующей лиганд. Трансформированный бактериофаг (который предпочтительно связан с твердой подложкой) экспрессирует соответствующий лиганд (такой как потенциально активный агент) и демонстрирует его на оболочке фага. Элемент или элементы (такие как клетки),несущие молекулы-мишени, которые распознают потенциально активный агент, выделяют и амплифицируют. Затем эффективные потенциально активные агенты характеризуют. Демонстрация с помощью фага имеет преимущества по сравнению с обычными методами скрининга,основанными на аффинности лигандов. На поверхности фага потенциально активный агент демонстрируется в трехмерной конфигурации,что более соответствует его конфигурации,встречающейся в естественных условиях. Это позволяет осуществить для целей скрининга связывание, характеризующееся большей специфичностью и более высокой аффинностью. Другой метод скрининга, обеспечивающий широкомасштабный скрининг агентов, обладающих пригодной аффинностью связывания сGM1 или Gb3, основан на методе, описанном детально в WO 84/03564. В целом, большое количество различных небольших пептидных тестируемых соединений синтезируют на твердом субстрате, таком как пластиковые иглы или некоторые другие поверхности. Пептидные тестируемые агенты подвергают взаимодействию с компонентами фрагментов, представляющих собой мишень для взаимодействия. Затем связанный компонент, представляющий собой мишень для взаимодействия, выявляют с помощью 24 специально адаптированных методов, известных в данной области. Очищенный компонент,представляющий собой мишень для взаимодействия, затем также может быть использован для непосредственной сенсибилизации планшетов для применения в вышеуказанных методах скрининга лекарственных средств. В альтернативном варианте не нейтрализующие антитела могут использоваться для захвата пептида и иммобилизации на твердой подложке. Согласно всем объектам изобретения агент, обладающий GM1-связывающей активностью или Gb3-связывающей активностью,также может обладать способностью образовывать поперечные связи с рецепторами GM1 илиGb3. EtxB является одним из таких агентов, который обладает способностью образовывать поперечные связи с рецепторами GM1, что следует из его пентамерной формы. Известны различные методы идентификации агентов, которые оказывают влияние на внутриклеточные сигналы, опосредованныеGM1/Gb3-связыванием, но которые сами не связываются с GM1 или Gb3. Например, если для агента обнаружена способность осуществлять повышающую регуляцию CD25 или МНС класса II на поверхности В-клеток, или осуществлять повышающую регуляцию CD25, или усиливать апоптоз CD8+ -Т-клеток, или осуществлять повышающую регуляцию секреции IL-10 моноцитами, но у агента не обнаружена способность связывать GM1 или Gb3 (например, с помощью одного из описанных выше анализа связывания), то отсюда можно сделать заключение,что агент обладает способностью имитировать эффект GМ 1/Gb3-связывания. Ниже изобретение проиллюстрировано со ссылкой на примеры и прилагаемые чертежи, на которых показано на фиг. 1 - стимуляция общего Ig и IgA в сыворотке (MS) и IgA в глазных смывах (EW) мышей, иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1/rEtxB,на фиг. 2 - Т-клеточная пролиферацияHSV-1 в присутствии 1-20 мкг EtxB,на фиг. 4 - титр сывороточного Ig к HSV-1 в мышах после введения гликопротеинов HSV-1 трижды с 10-дневными интервалами с различными количествами rEtxB или rCtxB в качестве адъюванта,на фиг. 5 - снижение распространения вируса, клинических симптомов болезни и латентности у мышей, иммунизированных с помощьюHSV-1/rEtxB, 25 на фиг. 6 - распределение изотипа Ig в MS после заражения HSV-1 или иммунизации с помощью Gp HSV-1 в присутствии EtxB или CtxB в качестве иммуномодулятора,на фиг. 7 - распределение подклассов Ig после интраназального введения Gp HSV-1 с использованием rEtxB или rCtxB в качестве иммуномодулятора,на фиг. 8 - иммуногенное действие различных количеств rEtxB или rCtxB на титр HSV-1 специфического IgA в глазных смывах после введения гликопротеинов HSV-1,на фиг. 9 - ответ сывороточного иммуноглобулина после иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеинов (gp)имитаторов (mock) по отдельности или в присутствии адъюванта,на фиг. 10 - титр слизистого IgA в глазных смывах после интраназальной иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеиновимитаторов по отдельности или в присутствии адъюванта,на фиг. 11 - титр слизистого IgA в вагинальных смывах после интраназальной иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеинов-имитаторов (gp) по отдельности или в присутствии адъюванта,на фиг. 12 - титры HSV-1-специфического иммуноглобулина в сыворотке мышей, иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1 в присутствии различных доз rEtxB в качестве адъюванта,на фиг. 13 - титры IgA в глазных смывах мышей, иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1 в присутствии различных концентраций rEtxB,на фиг. 14 - титры IgA в вагинальных смывах мышей, иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1 в присутствии различных концентраций rEtxB,на фиг. 15 - распределение подклассов IgG при сывороточном гуморальном иммунном ответе на HSV-1 после интраназальной иммунизации Ctx/CtxB или rEtxB или окулярного заражения HSV-1,на фиг. 16 - продуцирование цитокина в культурах клеток лимфатических узлов, взятых из мышей, которых либо заражали HSV-1 путем окулярной скарификации, либо иммунизированных с помощью интраназального введения гликопротеинов HSV-1 с использованиемCtx/CtxB или rEtxB в качестве адъюванта, и на фиг. 17 - уровень защиты от окулярного заражения HSV-1 для мышей, иммунизированных путем интраназального введения смесиHSV-1 или гликопротеинов-имитаторов в присутствии rEtxB в качестве имуномодулятора. Пример 1. rEtxB может применяться в сoчетании с gp HSV-1 для иммунизации. Мышей иммунизировали интраназально трижды, каждый раз используя по 10 мкг гликопротеинов HSV-1 (Gp) в присутствии 10 или 20 26 мкг rEtxB. Контролем служили либо необработанные животные, либо животные, которым давали препарат вирусного гликопротеина(имитатор), полученный из культуры клеток неинфицированной ВИЧ ткани. Титры антител выражали в виде процента титров после заражения. Продуцирование общего Ig и IgA в сыворотке и IgA в глазных смывах стимулировали с помощью гликопротеинов HSV-1/rEtxB (фиг. 1). При создании изобретения также обнаружено,что столь низкие дозы rEtxB, как 0,1 мкг, также обладают эффективностью в отношении стимуляции таких ответов. Кроме того, обнаружена пролиферация Тлимфоцитов у иммунизированных мышей, полученных из шейного лимфатического узла (который расположен в области вакцинации) и из брыжеечного лимфатического узла (который расположен на удалении от области вакцинации) при их культивировании in vitro с HSV-1,но не тогда, когда их культивировали с имитатором Gp HSV-1 или без антигена (фиг. 2). Пролиферация в ответ на введение GpHSV-1 Т-лимфоцитов из MLN и CLN мышей,иммунизированных с помощью Gp HSV-1 и различных количеств EtxB, показана на фиг. 3. Продуцирование сывороточного Ig к HSV-1 в мышах после введения гликопротеинов HSV-1 с 3-дневными интервалами с различными количествами EtxB (или CtxB) показанo на фиг. 4. И, наконец, установлено, что у мышей,иммунизированных с помощью HSV-1/rEtxB,снижается по сравнению с контролем распространение вируса после скарификации роговицы HSV-1 (фиг. 5 а) и уменьшается распространение местных симптомов (отек и заболевание века), распространение на тройничный узел(энцефалит) и латентность (5 б). Пример 2. rCtxB и rEtxB действуют в качестве иммуномодуляторов. Когда EtxB применяют в качестве иммуномодулятора, то происходит сдвиг в распределении изотипа Ig (фиг. 6). Распределение подклассов Ig отличается в зависимости от того,используют ли в качестве иммуномодулятораrCtxB или rEtxB (фиг. 7). Пример 3. rEtxB является более эффективным иммуномодулятором, чем rCtxB. Титры HSV-1-специфического IgA (фиг. 8) оказываются более высокими после стимуляции с помощью rEtxB/Gp HSV-1, чем после стимуляции rCtxB Gp HSV-1. Пример 4. (Фиг. 9). Мышей иммунизировали трижды интраназально только гликопротеинами HSV-1, препаратом-имитатором гликопротеинов HSV-1 (полученным путем использования культуры клеток незараженной ткани и подвергания их таким же режимам обработки, которые применялись для выделения и очистки протеинов HSV-1) или 27 гликопротеинами HSV-1 в сочетании с различными предполагаемыми специфичными в отношении слизистой оболочки адъювантами. В каждом случае доза гликопротеинов HSV-1 составляла 10 мкг на иммунизацию, и их объединяли с 10 мкг рекомбинантного EtxB или CtxB в качестве адъюванта или со смесью, состоящей из 0,5 мкг Ctx и 10 мкг CtxB. Через 3 недели после конечной иммунизации брали образцы крови и определяли с помощью ELISA общий титр антител к HSV-1. Количества антител выражали в виде процента титров антител, стимулированных окулярной инфекцией, которую вызывали скарификацией с использованием 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16. Данные (приведенные на фиг. 9) свидетельствуют о том, что наиболее сильный гуморальный иммунный ответ стимулировался тогда, когда антиген объединяли со смесью полного Ctx и CtxB. Однако высокий уровень ответа также стимулировался, когда в качестве адъюванта использовали rEtxB. В противоположность этому, rCtxB проявил себя как слабый адъювант. Пример 5. (Фиг. 10). Мышей иммунизировали согласно примеру 4. Продуцирование секреторного IgA в глазе оценивали с помощью смывов слез в течение нескольких последовательных дней, и затем эти образцы объединяли и подвергали анализу с помощью ELISA с использованием специфических идентифицирующих антител к IgA. Количества антител выражали в виде процента титров антител, стимулированных окулярной инфекцией, которую вызывали скарификацией с использованием 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16. Данные (приведенные на фиг. 10) ясно показывают, что высокие уровни секретируемых антител к HSV-1 продуцировались после иммунизации в присутствии либо Ctx/CtxB, либо EtxB. В отличие от результатов анализов сывороточных гуморальных иммунных ответов, не обнаружено различий в титрах антител, полученных в глазах, между животными, иммунизированными с использованием как Ctx/CtxB, так и EtxB в качестве адъювантов. Так же, как и для сывороточного антитела получено четкое доказательство того, что rCtxB является очень слабым адъювантом. Пример 6. (Фиг. 11). Мышей иммунизировали согласно примеру 4. Продуцирование секреторного IgA во влагалище оценивали с помощью смывов, полученных из половой системы в течение нескольких последовательных дней, и затем эти образцы объединяли и подвергали анализу с помощью ELISA с использованием специфических идентифицирующих антител к IgA. Количества антител выражали в виде конечных титров, которые рассчитывали с помощью метода линейной регрессии. Данные ясно показывают, что высокие уровни секретируемых антител к HSV1 продуцировались в удаленных областях сли 004794 28 зистой оболочки после иммунизации в присутствии либо Ctx/CtxB, либо EtxB. Во влагалище наиболее высокие титры антител получены после иммунизации в присутствии EtxB. Низкие титры были получены после иммунизации в присутствии Ctx/CtxB, и очень незначительная секреция провоцировались при использовании в качестве адъюванта rCtxB. Пример 7. (Фиг. 12). Мышей иммунизировали трижды интраназально либо с помощью только гликопротеиновHSV-1 (10 мкг), либо в присутствии повышающихся концентраций rEtxB в качестве адъюванта. Через 3 недели после последней иммунизации брали образцы крови и определяли с помощью ELISA общий титр антител к HSV-1. Количества антител выражали в виде процента титров антител, стимулированных окулярной инфекцией, которую вызывали скарификацией с использованием 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16. Данные четко свидетельствуют о том, что способность rEtxB запускать гуморальные иммунные ответы на добавление гетерологичных антигенов представляет собой зависящее от дозы явление, причем максимальная реактивность происходит при дозе rEtxB примерно 20-50 мкг. Кроме того, ясно, что при использовании дозrEtxB 20 мкг и выше титр антител к HSV-1,стимулированный интраназальным заражением,сопоставим или превышает титр, который стимулируется заражением живым вирулентным вирусом. Пример 8. (Фиг. 13). Мышей иммунизировали согласно примеру 7. Продуцирование секреторного IgA в глазе оценивали с помощью смывов слез, полученных в течение нескольких последовательных дней, и затем эти образцы объединяли и подвергали анализу с помощью ELISA с использованием специфических идентифицирующих антител кIgA. Количества антител выражали в виде процента титров антител, стимулированных окулярной инфекцией, которую вызывали скарификацией с использованием 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16. Данные свидетельствуют о том,что наиболее сильные IgA-ответы в глазе стимулировались тогда, когда гликопротеины HSV1 использовали в сочетании с дозой rEtxB 20 мкг или выше. Однако при использовании такой дозы титры полученных IgA были ниже, чем те,которые инициировались при заражении глаза вирусом. Пример 9. (Фиг. 14). Мышей иммунизировали согласно примеру 7. Продуцирование секреторного IgA во влагалище оценивали с помощью смывов, полученных из половой системы в течение нескольких последовательных дней, и затем эти образцы объединяли и подвергали анализу с помощью ELISA с использованием специфических идентифицирующих антител к IgA. Количества антител выражали в виде конечных титров, которые рассчитывали с помощью метода линей 29 ной регрессии. Данные свидетельствует о том,что оптимальные гуморальные иммунные ответы на HSV-1 стимулируются во влагалище, когда в качестве адъюванта используют дозыrEtxB 20 мкг или выше. Пример 10. (Фиг. 15). Мышей заражали либо 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16 путем скарификации роговицы,либо иммунизировали трижды интраназально 10 мкг гликопротеинов HSV-1 в сочетании сCtx/CtxB или rEtxB. Через 3 недели после последней инокуляции брали образцы сыворотки и анализировали с помощью ELISA в отношении присутствия IgG1 и IgG2a к HSV-1. Количества антител выражали в виде конечных титров, которые рассчитывали с помощью метода линейной регрессии (фиг. 7 а). Данные ясно показывают, что на природу гуморального иммунного ответа на HSV-1 влияет путь, посредством которого антиген презентируется иммунной системе. Заражение HSV-1, в основном, активирует связанное с Тh1 продуцирование антител,что характеризуется высокими титрами комплементсвязывающего изотипа антитела IgG2a. Заражение стимулирует относительно низкие титры связанного с Th2 изотипа IgG, т.е. IgG1. Этот профиль иммунного ответа ясно виден,когда данные выражают в виде соотношенияIgG1:IgG2a, как показано на фиг. 7 б. Величина отношения после заражения существенно ниже 1. Интраназальная иммунизация в присутствии в качестве адъюванта Ctx/CtxB запускает выделение главным образом связанного с Th2 IgG1. Также получают достаточно высокие титрыCtx/CtxB способствует активации Th1- и Тh2 клеток. Активация обоих ответов и относительная доминантность Th2 отражается величиной отношения IgG1:IgG2a, которая составляет примерно 3. Интересно отметить, что природа ответа на HSV-1, стимулированного rEtxB в качестве адъюванта, практически полностью является Th2-доминантной. Получены высокие титры IgGl и только очень небольшие количества IgG2a. Этот сильный сдвиг в отношении реактивности Th2 отражает величина отношенияIgG1:IgG2a, которая составляет примерно 9. Пример 11. (Фиг. 16). Мышей заражали либо 105 БОЕ HSV-1 штамма SC16 путем скарификации роговицы,либо иммунизировали трижды интраназально 10 мкг гликопротеинов HSV-1 в сочетании сCtx/CtxB или rEtxB. Через 3 недели после последней инокуляции лимфатические узлы удаляли из животных и использовали для получения суспензий отдельных клеток, которые культивировали либо в присутствии убитых HSV-1,либо вирусного препарата-имитатора из культуры клеток незараженной ткани. На 4-7 дни культивирования образцы клеток выделяли и подвергали анализу ELISA для выявления секреции цитокинов. Данные ясно свидетельствует 30 о том, что Т-клетки в культурах обладали способностью реагировать на HSV-1, но практически не реагировали на вирусные препаратыимитаторы. Клетки лимфатических узлов, полученных из мышей, которые были зараженыTh1 цитокин -интерферон (-IFN). Клетки лимфатических узлов, полученных из мышей,которые были иммунизированы интраназально,продуцировали высокие титры связанных с Th2 цитокинов IL-4 и IL-10. Кроме того, и Ctx/CtxB,и rEtxB приводили к активации Т-клеток, которые секретировали -IFN, при стимуляции invitro HSV-1. Это свидетельствует о том, что хотя ответ на эти адъюванты, в основном, направлен на продуцирование Th2-цитокинов, некоторая активация Тh1 также имеет место. Эти данные согласуются с результатами, полученными при анализе гуморальных иммунных ответов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в качестве иммуномодулятора в вакцинах для инфекционных болезней. 2. Применение по п.1, где иммуномодулятор представляет собой EtxB, не содержащий полного токсина. 3. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой болезнь, инфекционным агентом которой является представитель семейства вирусов герпеса. 4. Применение по п.3, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей HSV-1, HSV-2, EBV (вирус Эпштейна-Барра), VZV (вирус ветряной оспы),CMV (цитомегаловирус), HHV-6 (геpпес-вирус человека), HHV-7 и HHV-8. 5. Применение по п.4, где инфекционный агент выбирают из группы, включающей HSV1, HSV-2, CMV или EBV. 6. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус гриппа. 7. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус парагриппа. 8. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой респираторно-синцитиальный вирус. 9. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент представляет собой вирус гепатита. 10. Применение по п.9, где инфекционный агент выбирают из группы, включающей вирусы гепатита А, В, С и D. 31 11. Применение по п.10, где инфекционный агент представляет собой вирус гепатита А или вирус гепатита С. 12. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой менингит. 13. Применение по п.12, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей Neisseria meningitidis, Haemophilusinfluenzae типа В и Streptococcus pneumoniae. 14. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой пневмонию или инфекцию дыхательных путей. 15. Применение по п.14, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающейpneumoniae,Legonella pneumophila и Mycobacterium tuberculosis. 16. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой болезнь, которая передается половым путем. 17. Применение по п.16, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей Neisseria gonnorheae, ВИЧ-1, ВИЧ 2 и Chlamydia trachomatis. 18. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой заболевание желудочно-кишечного тракта. 19. Применение по п.18, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические и энтероаггрегирующие Е. coli, ротавирусы, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Helicobacter pylori, Bacillus cereus, Campylobacterjejuni и Vibrio cholerae. 20. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой неглубокую инфекцию. 21. Применение по п.20, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и Streptococcus mutants. 22. Применение по п.1 или 2, где инфекционная болезнь представляет собой паразитарную болезнь. 23. Применение по п.22, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и инфекционный агент выбирают из группы,включающей малярию, Trypanasoma spp., Toxoplasma gondii, Leishmania donovani и Oncocercaspp. 24. Композиция вакцины, предназначенной для иммунопрофилактики инфекционной болезни, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом и где композиция вакцины включает антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из EtxB, CtxB 32 или VtxB, не содержащих полного токсина,причем антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту этого инфекционного агента. 25. Композиция вакцины по п.24, где инфекционная болезнь представляет собой HSV-1 инфекцию и где антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту HSV1. 26. Композиция вакцины по п.24 или 25,где иммуномодулятор представляет собой EtxB,не содержащий полного токсина. 27. Композиция вакцины по пп.24, 25 или 26, где иммуномодулятор и антигенная детерминанта представляют собой различные фрагменты. 28. Композиция вакцины по пп.24, 25 или 26, где иммуномодулятор и антигенная детерминанта связаны бифункциональным перекрестно-сшивающим реагентом. 29. Набор для вакцинации млекопитающего против инфекционной болезни, включающий а) иммуномодулятор вакцины, выбранный из EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, и б) антигенную детерминанту инфекционной болезни для совместного введения с указанным иммуномодулятором вакцины. 30. Способ предупреждения или лечения болезни у хозяина, предусматривающий стадию инокуляции хозяина вакциной, которая включает по меньшей мере одну антигенную детерминанту и иммуномодулятор, где иммуномодулятор представляет собой EtxB, CtxB или VtxB, не содержащие полного токсина. 31. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, для повышающей регуляции продуцирования антител на поверхностях слизистых оболочек. 32. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в качестве иммуномодулятора в вакцине для пролонгирования презентации антигена и достижения более продолжительной иммунологической памяти у млекопитающего. 33. Композиция вакцины, применяемой для иммунопрофилактики в отношении инфекционной болезни, где инфекционная болезнь вызывается инфекционным агентом, где вакцина содержит антигенную детерминанту и иммуномодулятор, выбранный из EtxB, CtxB илиVtxB, не содержащих полного токсина, причем антигенная детерминанта представляет собой антигенную детерминанту указанного инфекционного агента и иммуномодулятор пролонгирует презентацию антигенной детерминанты и обеспечивает более продолжительную иммунологическую память. 34. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в сочетании с антигеном или антигенной детерминантой для направленного переноса антигена или антиген 33 ной детерминанты в цитозоль или ядро антигенпрезентирующей клетки. 35. Применение EtxB, CtxB или VtxB, не содержащих полного токсина, в сочетании с антигеном или антигенной детерминантой для повышающей регуляции презентации указанной антигенной детерминанты или антигенной детерминанты, полученной из указанного антигена, молекулами класса I MHC. 36. Композиция вакцины, включающая а) EtxB, CtxB, и б) антиген EBV,предназначенная для лечения и/или предупреждения связанных с EBV болезней. 37. Терапевтическая композиция, включающая EtxB, CtxB, предназначенная для лечения связанных с EBV болезней.(EW) по сравнению с контролем у мышей после иммунизации HSV-1 или препаратами Gp-имитаторов(mock) при использовании различных количеств rEtxB Титр сывороточного Ig к HSV-1 в мышах после введения гликопротеинов HSV-1 трижды с 10-дневными интервалами с различными количествами rEtxB или rCtxB в качестве адъювантаrEtxB или Gp-имитатором (mock) в сочетании с 20 мкг rEtxB (С),при культивировании in vitro с HSV-1, имитатором или без антигена Снижение распространения вируса из глаза после скарификации роговицы мышей с использованием HSV-1 (SC16) Клинические симптомы болезни после скарификации роговицы мышей с использованием HSV-1 (SC16) Т-клеточная пролиферация клеток из MLN и CLN мышей,иммунизированных интраназально (i.n.) с помощью Фиг. 6 Воздействие различных количеств rEtxB или rCtB в качестве адъюванта на уровень HSV-1-специфического IgA в глазных смывах после обработки гликопротеинами HSV-1 36 Титр слизистого IgA в глазных смывах после интраназальной иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеиновимитаторов (gp) пo отдельности или в присутствии адъюванта Титр слизистого IgA в вагинальных смывах после интраназальной иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеинов-имитаторов (gp) по отдельности или в присутствии адъювантаHSV-1 в присутствии различных доз rEtxB в качестве адъюванта Фиг. 8 Ответ сывороточного иммуноглобулина после иммунизации мышей с помощью HSV-1 или гликопротеинов-имитаторов(gp) по отдельности или в присутствии адъюванта Титры IgA в глазных смывах мышей, иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1 в присутствии различных концентраций rEtxB Распределение подклассов IgG при сывороточном гуморальном иммунном ответе на HSV-1 после интраназальной иммунизацииCtx/CtxB или rEtxB или окулярного заражения HSV-1 Фиг. 13 Титры IgA в вагинальных смывах мышей,иммунизированных с помощью гликопротеинов HSV-1 в присутствии различных концентраций rEtxB Фиг. 15 Продуцирование цитокина в культурах клеток лимфатических узлов, взятых из мышей, которых либо заражали HSV-1 путем окулярной скарификации, либо иммунизировали с помощью интраназального введения гликопротеинов HSV-1 с использованием Ctx/CtxB или rEtxB в качестве адъюванта Фиг. 16 Уровень защиты от окулярного заражения у мышей, иммунизированных интраназально смесью HSV-1 или гликопротеиновимитаторов в присутствии rEtxB в качестве адъюванта

МПК / Метки

МПК: A61K 39/12, A61P 33/02

Метки: вакцина

Код ссылки

<a href="https://eas.patents.su/20-4794-vakcina.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Вакцина</a>

Похожие патенты