Лечение неврита зрительного нерва

ЛЕЧЕНИЕ НЕВРИТА ЗРИТЕЛЬНОГО НЕРВА Настоящие изобретение относится к способу лечения больного демиелинизирующим невритом зрительного нерва (ДНЗН), предусматривающему последовательное или одновременное введение стероидного соединения и белка интерферона-бета. Обнаружено, что раннее активное лечение IFN- полезно при таком режиме лечения, где, например, белок интерферона-бета вводят в совокупной недельной дозе более 12 ММЕ. Способ по изобретению особенно подходит для лечения пациентов на ранних стадиях ДНЗН и оказывает положительное влияние на этих больных. В частности, ДНЗН, при котором проявится положительное влияние лечения по настоящему изобретению, может находиться на субклинической стадии. 013816 Область, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к лечению неврита зрительного нерва. Конкретнее изобретение относится к применению IFN-бета в схемах лечения и в изготовлении лекарственного препарата для лечения больных невритом зрительного нерва, например изолированным демиелинизирующим невритом. Уровень техники Неврит зрительного нерва - частая причина потери зрения у молодых людей, кроме того, неврит зрительного нерва часто является первым проявлением рассеянного склероза. Обнаружено, что приблизительно у 75% пациентов, поступивших с невритом зрительного нерва, в течение 15 лет развиваются явные клинические проявления рассеянного склероза (ЯКПРС). Таким образом, офтальмологи могут оказаться первыми, кто предположит диагноз рассеянного склероза.PC - воспалительное аутоиммунное заболевание, характеризующееся демиелинизацией и гибелью аксонов. Значительная часть больных PC впервые обращается к врачу по поводу неврита зрительного нерва(НЗН), который характеризуется повреждением зрительного нерва. Клинические исследования, в частности, проведенные Optic Neuritis Study Group (ONTT), помогли внести ясность в естественное течение неврита зрительного нерва и его лечение. Эти исследования показали, что по сравнению с пероральным приемом преднизолона или плацебо, внутривенное (в/в) введение метилпреднизолона позволяет быстрее восстановить зрение, однако в дальнейшем периоде различия в остроте зрения сглаживаются (описание протокола ONTT и результатов, см., например, в Current Opin Neurol., 1995, Feb.; 8(1):72-6). У пациентов,которых лечили в/в введением метилпреднизолона, развитие в последующем явных клинических признаков рассеянного склероза задерживается на срок до 2 лет. Однако сравнение через 3 года больных,получавших лечение, с теми, кто получал плацебо, не выявило различий в частоте возникновения явных клинических признаков рассеянного склероза (ЯКПРС). Таким образом, сохраняется потребность улучшить существующие протоколы лечения неврита зрительного нерва. Дополнительные клинические исследования навели на мысль об использовании интерферона-бета(IFN-бета) применительно к невриту зрительного нерва или для лечения 1-го клинического события у пациентов из группы риска для предупреждения развития ЯКПРС: например, в статье Balcerand Galetta,Semin Ophthalmol., 2002, Mar.; 17(1):4-10, предлагается лечить демиелинизирующий неврит зрительного нерва у больных при высоком риске развития ЯКПРС в/в введением метилпреднизолона с последующим назначением преднизона внутрь и IFN-бета 1 а, 30 микрограммов (мкг) внутримышечно (в/м) 1 раз в неделю или 22 мкг подкожно (п/к) 1 раз в неделю. В исследовании CHAMPS было изучено раннее применение IFN-бета 1 а, 30 мкг в/м в неделю, чтобы снизить частоту развития ЯКПРС после 1-го клинического события у больных из группы риска (МРТкритерии: 2 Т 2-очагов) и больных из группы высокого риска (9 Т 2-очагов, 1 очага, в котором накапливается гадолиний). Подобным образом в исследовании ETOMS изучали раннее применение IFN-бета, 22 мкг п/к в неделю, для снижения частоты развития ЯКПРС после 1-го клинического события у больных из группы риска (у пациента имеется 4 Т 2-очагов или 3 очага, один из которых расположен инфратенториально или накапливает гадолиний). Ни один из доступных для лечения неврита зрительного нерва в настоящее время медикаментозных способов лечения не является полностью удовлетворительным. Соответственно, цель настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить более совершенное лечение неврита зрительного нерва. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к новому и более совершенному способу лечения больных НЗН,в частности больных демиелинизирующим невритом зрительного нерва (ДНЗН). Способ предусматривает последовательное или одновременное введение иммунодепрессивного соединения, такого как стероидное соединение, и белка интерферона-бета. Обнаружено, что раннее активное лечение IFN- оказывает положительное влияние применительно к такому режиму лечения. Способ согласно изобретению особенно подходит для лечения больных на ранних стадиях НЗН и оказывает положительное влияние на этих больных. В частности, НЗН на ранних стадиях, при котором проявится положительное влияние лечения по настоящему изобретению, может еще находиться в субклинической стадии в момент лечения,то есть выявляться только с помощью диагностических инструментов. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение основано на данных клинического испытания, показавшего, что IFN-бета имеет благоприятный эффект у больных с проявлениями ранних стадий НЗН, в частности ранних стадий ДНЗН. Обнаружено, что ранние стадии ДНЗН связаны со структурными изменениями, которые относятся к гибели аксонов зрительного нерва. Эти структурные изменения можно выявить и охарактеризовать количественно с помощью анализа серийной оптической когерентной томографии (сОГТ), при котором измеряется толщина слоя нервных волокон сетчатки (СНВС). Так как дегенерация аксонов во время прогрессирования НЗН и PC постепенно приводит к снижению плотности (толщины) СНВС, сОГТ может-1 013816 использоваться при НЗН и PC для оценки афферентной зрительной системы на гибель и выживание аксонов, а также оценки ответа на лечение. Неожиданно в настоящем изобретении было обнаружено, что наблюдаемые ранние изменения при НЗН, например изменения в клинически непораженном глазу больных ДНЗН, можно остановить, ослабить и потенциально обратить вспять с помощью раннего активного лечения IFN- 1a в комбинации с лечением НЗН по стандартным протоколам, таким как протокол ONTT,основанным на иммунодепрессивных соединениях, в том числе стероидных лекарственных средств. Соответственно, один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения больного невритом зрительного нерва (НЗН), предусматривающему последовательное или одновременное введение стероидного соединения и белка интерферона-бета, где белок интерферона-бета вводится в совокупной недельной дозе более 12 ММЕ. Предпочтительно неврит зрительного нерва, который подвергается лечению, является демиелинизирующим невритом зрительного нерва (ДНЗН). В следующем предпочтительном варианте осуществления пациент, которого лечат по схеме согласно настоящему изобретению, не имеет явных клинических признаков рассеянного склероза(ЯКПРС). В предпочтительном варианте осуществления НЗН может являться изолированным проявлением (изолированный неврит зрительного нерва, клинически изолированный синдром). У пациента,поступившего с НЗН, ЯКПРС впоследствии может развиться или не развиться. Таким образом, применительно к настоящему изобретению НЗН и в частности ДНЗН может быть связан с любым воспалительным заболеванием ЦНС или может не быть связан с генерализованным воспалительным заболеванием ЦНС. Термин воспалительное заболевание ЦНС включает конкретные демиелинизирующие воспалительные заболевания ЦНС, например PC, прогрессирующую многоочаговую лейкоэнцефалию, острый диссеминированный энцефаломиелит или другие родственные заболевания. В предпочтительном варианте осуществления пациент, которого лечат по схеме согласно настоящему изобретению, подвергается невысокому риску развития явных клинических признаков рассеянного склероза (ЯКПРС), например, определяемых по МРТ-критериям. Например, в предпочтительном варианте осуществления пациент, которого лечат согласно схеме по настоящему изобретению, не имеет 3 или более поражений белого вещества диаметром свыше 3 мм и предпочтительно не имеет 2 или более поражений белого вещества диаметром свыше 3 мм. Более предпочтительно, если у пациента нет ни одного очага поражения белого вещества диаметром свыше 3 мм. В предпочтительном варианте осуществления пациент, которого лечат согласно схеме по настоящему изобретению, имеет риск развития явных клинических признаков рассеянного склероза (ЯКПРС),который в течение 10 лет после того, как впервые был диагностирован НЗН, составляет не более 30, 28,26, 24, 22 или даже 20%. В другом варианте осуществления пациент, которого лечат согласно схеме по настоящему изобретению, имеет низкий профиль риска развития явных клинических признаков рассеянного склероза(ЯКПРС) потому, что пациент является мужчиной, и/или он поступил с отеком диска зрительного нерва,кровоизлияниями или экссудатами, когда ему был впервые диагностирован НЗН, и/или он не ощущает боли в пораженном глазу. В другом варианте осуществления пациент, которого лечат согласно схеме согласно настоящему изобретению, может иметь высокий риск гибели аксонов и/или гибели ганглиев сетчатки на момент первого поступления по поводу НЗН. Пациент, имеющий высокий риск гибели аксонов и/или гибели ганглиев сетчатки на момент первого поступления по поводу НЗН, может, например, быть пациентом, зрение которого не улучшилось в течение 3-4 недель на фоне в/в пульс-терапии стероидами, и/или у него имеются признаки гибели аксонов, такие как снижение толщины СНВС по меньшей мере на 5, 10, 20 или даже 30% в среднем по данным ОКТ, такой как серийная оптическая когерентная томография (сОКТ) или сканирующая лазерная поляриметрия (SLP). Кроме того, подразумевается, что пациенты с гибелью более 5% аксонов или даже более 10 или 15% на момент первого поступления по поводу НЗН могут получить пользу при лечении согласно схеме по настоящему изобретению. Такую гибель аксонов можно измерить инвазивными или неинвазивными методами до или после первичного лечения иммунодепрессивными средствами, такими как стероиды. Предпочтительно in vivo измеряют биомаркеры гибели аксонов. Термину рассеянный склероз в соответствии с сущностью настоящего изобретения можно дать такое же определение, как в классификации DSM-IV (Diagnosis and Statistical Manual of InflammatoryCNS Disorders, Fourth Edition, American Psychiatric Association, Washington D.C., 1994). В дополнительном предпочтительном варианте осуществления ДНЗН клинически проявляется только в одном зрительном нерве. Под клинически проявляется подразумевается, что пациент имеет по меньшей мере один симптом, такой как ухудшение физиологической функции органа (например, снижение четкости зрения), который он может субъективно осознавать, или физиологическая функция органа у пациента снижена настолько, что это можно выявить функционально. Физиологическая функция органа,которая может быть установлена по отношению к зрительному нерву, включает, например, остроту зрения, восприятие зрительных контрастов, цветовое зрение и поле зрения. В одном варианте осуществления у пациента, который будет подвергаться лечению, НЗН не прояв-2 013816 ляется клинически. В случаях, когда НЗН не проявляется клинически, у пациента не будет сниженной четкости зрения, однако патологический процесс, например гибель аксонов, может быть обнаружен подходящими диагностическими способами, такими как ОКТ, SLP, зрительные вызванные потенциалы или паттерн-электроретинограмма. В другом варианте осуществления у пациента, который будет подвергаться лечению по изобретению, толщина СНВС к началу лечения снижена не более чем на 30 мкм, предпочтительно не более чем на 25, 20 или 15 мкм по меньшей мере в одном глазу. В другом варианте осуществления у пациента, который будет подвергаться лечению по изобретению, толщина СНВС снижена по меньшей мере на 10 или 5 мкм по меньшей мере в одном глазу. В одном варианте осуществления настоящего изобретения используемый белок интерферона-бета является интерфероном-бета 1 а, например Avonex или Rebif. В другом варианте осуществления настоящего изобретения белок интерферона-бета представляет собой интерферон-бета 1b, например Betaferon. В следующих вариантах осуществления изобретения белок интерферон-бета представляет собой модифицированный белок интерферон-бета, такой как формы интерферона-бета длительного действия. В частности, интерферон-бета длительного действия может быть выбран из пэгилированного интерферонабета, слитого белка интерферон-бета-HAS или интерферон-бета-Fc. В предпочтительном варианте осуществления IFN слит с константной областью молекулы Ig. Предпочтительно он слит с областями тяжелых цепей, например, подобных доменам СН 2 и CH3 человеческого IgG1. Другие изоформы молекул Ig также пригодны для создания составных белков по настоящему изобретению, такие как изоформы IgG2, IgG3 или IgG4, или другие классы Ig, такие как IgM или IgA. Составные белки могут быть мономерными или мультимерными, гетеро- или гомомультимерными. В дополнительном предпочтительном варианте осуществления функциональное производное содержит по меньшей мере один остаток, соединенный с одной и более функциональными группами, которые представляют собой одну и более боковую цепь на аминокислотных остатках. Предпочтительно остаток является остатком полиэтиленгликоля (ПЭГ). Пэгилирование может быть выполнено известными способами, такими как описанные, например, в WO 99/55377. В одном варианте осуществления настоящего изобретения доза интерферона-бета составляет по меньшей мере 44 мкг на п/к введение. Предпочтительно интерферон-бета вводят по меньшей мере 3 раза в неделю. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления интерферон-бета вводят по 44 мкг п/к 3 раза в неделю. Согласно изобретению белок интерферона-бета может титроваться до дозы, составляющей по меньшей мере 44 мкг п/к 3 раза в неделю, в пределах интервала, составляющего не более 28 дней или не более 21 или 14, или даже не более 7 дней после завершения лечения стероидом. Иммунодепрессивное соединение, используемое по настоящему изобретению, может, например,быть выбрано из иммунодепрессантов с необязательно антипролиферативной/противоопухолевой активностью, например митоксантрона, метотрексата, азатиоприна, циклофосфамида или стероидов. Например, иммунодепрессанты могут вводиться человеку в следующих диапазонах доз: циклофосфамид 500-1500 мг/м 2 в/в; метотрексат - до 20 мг внутрь; митоксантрон - 12 мг/м 2 в/в или азатиоприн - 2 мг/кг перорально. В предпочтительном варианте осуществления иммунодепрессивное соединение представляет собой стероидное соединение. Стероидное соединение, используемое по настоящему изобретению, может быть выбрано из группы, состоящей, например, из метилпреднизолона, преднизона или дексаметазона, или средства, усиливающего секрецию стероидов, такого как АКТГ. Стероиды могут вводиться человеку в следующих диапазонах доз: метилпреднизолон - 1-2 мг в/в или 24-48 мг перорально; преднизон - 1 мг/кг перорально или АКТГ - до 100 ММЕ. В предпочтительном варианте осуществления стероидное соединение является метилпреднизолоном. Введение стероидного соединения и белка интерферона-бета может быть последовательным или одновременным. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения введение иммунодепрессивного соединения, такого как стероидное соединение, и белка интерферона-бета осуществляется последовательно. Предпочтительно лечение иммунодепрессивным соединением предшествует введению белка интерферона-бета. По настоящему изобретению стероидное соединение может вводиться в виде отдельных доз. В предпочтительном варианте осуществления стероидное соединение вводится по меньшей мере в виде двух отдельных доз. В другом предпочтительном варианте осуществления стероидное соединение вводится по протоколу Optic Neuritis Treatment Trial (ONTT) (Beck R.W. Optic Neuritis Study Group. The Optic Neuritis Treatment Trial., Arch. Ophthalmol., 1988; 106:1051-53). Режим лечения по настоящему изобретению может быть объединен с применением дополнительных соединений, эффективных при PC в виде монотерапии или в комбинации. Таким образом, в одном-3 013816 варианте осуществления настоящего изобретения пациенту дополнительно вводят соединение для лечения PC (или лекарственное средство для лечения PC). Подразумевается, что термин интерферон-бета (IFN-бета или IFN-), использующийся в настоящем изобретении, включает интерферон фибробластов человека, который может быть природным, то есть полученным очисткой природного источника, или полученным методами рекомбинантной ДНК из прокариотических источников (например, Escherichia coli, E. coli) или из эукариотических клеток-хозяев,например из дрожжей или клеток млекопитающих. Предпочтительными хозяевами для производства рекомбинантного IFN-бета являются клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО) или клетки человека. IFN-бета может быть гликозилированным или негликозилированным. Термин интерферон-бета, который используется в данном документе, включает природный интерферон-бета, а также интерферон-бета, полученный рекомбинантными методами от прокариотических (например, Е. coli) или эукариотических (например, СНО) хозяев. Если IFN-бета, используемый по настоящему изобретению, негликозилирован (например, синтезирован Е. coli), предпочтительно вводить более высокие количества IFN-бета, чтобы получить биологический или фармакологический эффект, сопоставимый с эффектом гликозилированного IFN-бета. Например, чтобы получить сопоставимую активность,предпочтительно вводят количество негликозилированного IFN-бета, которое приблизительно в 10 раз превышает количество гликозилированного IFN-бета. Термин интерферона-бета, который используется в данном документе, также включает функциональные производные, мутеины, аналоги и фрагменты или составные белки IFN-бета. Таким образом, подразумевается, что термины интерферон (IFN)и интерферон-бета (IFNбета) , которые используются в данном документе, включают интерферон фибробластов, в частности,человеческого происхождения, полученный выделением из биологических жидкостей или полученный методами рекомбинантной ДНК из прокариотических или эукариотических клеток-хозяев, а также его соли, функциональные производные, варианты, аналоги и активные фрагменты. Предпочтительно IFN-бета, который будет использоваться в пределах объема настоящего изобретения, представляет собой Avonex, Betaseron или более предпочтительно Rebif .Rebif (интерферон бета-1a) является очищенным гликопротеином, который состоит из 166 аминокислот и имеет молекулярную массу приблизительно 22500 Да. Его производят с помощью методов рекомбинантной ДНК, используя генно-инженерные клетки яичника китайского хомячка, в которые был введен ген интерферона-бета человека. Аминокислотная последовательность Rebif идентична последовательности природного интерферона-бета, полученного из фибробластов человека. Природный интерферон-бета и интерферон бета-1 а (Rebif) гликозилированы, каждый содержит один N-связанный остаток сложного углевода. При использовании стандартного образца, калиброванного по стандарту природного интерферонабета Всемирной организации здравоохранения (Second International Standard for Interferon, Human Fibroblast GB 23902531) было установлено, что Rebif обладает специфической активностью, равной приблизительно 270 миллионов международных единиц (млн ME) антивирусной активности на миллиграмм интерферона бета-1 а, определенной по биологической in vitro пробе на цитопатическое действие с использованием клеток WISH и вируса везикулярного стоматита. Таблица для перевода ММЕ в мкг IFN-бета При использовании этого метода 44 мкг Rebif приблизительно соответствуют 12 ММЕ антивирусной активности. Современные средства для лечения PC включают средства, модифицирующие течение заболевания,то есть модифицирующие протекание PC, модулирующие или подавляющие иммунную систему. Соответственно, средства для лечения PC в соответствии с сущностью настоящего изобретения включают 4 иммуномодулирующих средства, одобренных FDA для лечения рецидивирующего-ремиттирующего рассеянного склероза: 3 интерферона-бета (Betaseron, Berlex; Avonex, Biogen; Rebif, Serono) и глатимарер ацетат (Copaxone, Amgen). Средства для лечения PC в соответствии с сущностью настоящего изобретения также включают одобренное FDA иммунодепрессивное средство для лечения прогрессирующего PC - митоксантрон (Novantrone, Amgen).IFN-бета, пригодный для применения по настоящему изобретению, представляет собой имеющийся в продаже интерферон, например Rebif (Serono), Avonex (Biogen) или Betaferon (Schering). Применение интерферона человеческого происхождения также предпочтительно по настоящему изобретению. Подразумевается, что термин интерферон, который используется в данном документе, включает его соли, функциональные производные, варианты, аналоги и активные фрагменты.Rebif (рекомбинантный интерферон-бета человека) является последней разработкой в интерферонотерапии рассеянного склероза (PC) и представляет собой важное достижение в лечении. Rebif - интерферон (IFN)-4 013816 бета 1 а, полученный из клеточных линий млекопитающих. Установлено, что при подкожном введении 3 раза в неделю интерферон бета-1a эффективен при лечении рецидивирующего-ремиттирующего рассеянного склероза. Интерферон бета-1 а может оказывать положительное влияние на течение PC в отдаленном периоде за счет снижения числа и тяжести рецидивов и за счет снижения тяжести и активности заболевания, измеренной с помощью МРТ. Дозирование IFN-бета в лечении рецидивирующего-ремиттирующего PC по изобретению зависит от типа используемого IFN-бета. По настоящему изобретению, если IFN является рекомбинантным IFN-бета 1b, полученным из Е. coli и продающимся под торговой маркой Betaseron, он может предпочтительно вводиться подкожно через день в дозе приблизительно 250-300 мкг или 8-9,6 ММЕ на человека. Согласно настоящему изобретению, если IFN является рекомбинантным IFN-бета 1 а, полученным из клеток яичника китайского хомячка (клеток СНО) и продающимся под торговой маркой Avonex, он может предпочтительно вводиться внутримышечно один раз в неделю в дозе приблизительно 30-33 мкг или 6-6,6 ММЕ на человека. Согласно настоящему изобретению, если IFN является рекомбинантным IFN-бета 1 а, полученным из клеток яичника китайского хомячка (клеток СНО) и продающимся под торговой маркой Rebif, он может предпочтительно вводиться подкожно 3 раза в неделю в дозе 22-44 мкг или 6-12 ММЕ на человека. Предпочтительно выбирается доза 44 мкг или 12 ММЕ на введение. Белки IFN-бета по настоящему изобретению могут включать производные, варианты и мутеиныIFN-бета. Термин функциональные производные, который используется в данном документе, охватывает производные IFN-бета и его варианты или мутеины и составные белки, которые могут быть получены известными способами с помощью функциональных групп, последние могут присутствовать в виде боковых цепей на N- или С-концевых остатках или группах. Эти функциональные производные включаются в изобретение при условии, что они остаются фармацевтически приемлемыми, то есть они не лишают белок активности, которая, по существу, подобна или лучше активности IFN-бета, и не придают токсичные свойства композициям, содержащим этот белок. Эти производные могут, например, содержать боковые цепи полиэтиленгликоля, которые могут улучшать другие свойства белка, такие как стабильность, период полураспада, биодоступность, переносимость организмом человека или иммуногенность. Чтобы достичь этой цели, IFN-бета может быть связан, например, с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Пэгилирование может быть выполнено известными способами, описанными, например, в WO 92/13095. В частности, ПЭГ-IFN может быть получен согласно идеям WO 99/55377. Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления функциональное производноеIFN-бета содержит по меньшей мере один остаток, соединенный минимум с одной функциональной группой, которая присутствует на аминокислотных остатках в виде минимум одной боковой цепи. Вариант осуществления, в котором остаток представляет собой остаток полиэтиленгликоля (ПЭГ), является высоко предпочтительным. По настоящему изобретению к IFN-бета также могут быть присоединены несколько остатков ПЭГ. Другие производные включают алифатические эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп, полученные реакцией с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, N-ацильные производные свободных аминогрупп аминокислотных остатков, образованные с ацильными остатками (например, алканоильные или карбоциклические ароильные группы) или O-ацильные производные свободных гидроксильных групп (например, групп остатков серила или треонила), образованные с ацильными остатками. Варианты или мутеины, которые используются в пределах объема настоящего изобретения, относятся к аналогам IFN-бета, в которых не менее одного аминокислотного остатка природного IFN-бета замещено различными аминокислотными остатками или удалено, или один и более аминокислотный остаток добавлен к последовательности природного IFN-бета, без существенного снижения активности полученных в результате продуктов по сравнению с IFN-бета дикого типа. Эти мутеины получают с помощью известных методов синтеза и/или сайт-направленного мутагенеза или любого другого известного метода, подходящего для этого. Термины вариант или мутеин по настоящему изобретению охватывают белки, кодируемые нуклеиновой кислотой, таких как ДНК или РНК, которая при строгих условиях гибридизирована с ДНК или РНК, кодирующей IFN-бета, как раскрыто, например, в патенте США 4738931. Термин строгие условия относится к условиям гибридизации и последующей промывки, которые средние специалисты в данной области техники традиционно относят к строгим. См. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, выше, Interscience, N.Y.,6.3 и 6.4 (1987, 1992). Примеры строгих условий включают, без ограничения, условия промывки на 12-20 С ниже расчетной Tm исследуемого гибрида, например 2SSC и 0,5% SDS в течение 5 мин, 2SSC и 0,1% SDS в течение 15 мин; 0,1SSC и 0,5% SDS при 37 С в течение 30-60 мин, а затем 0,1SSC и 0,5% SDS при 68 С в течение 30-60 мин. Средним специа-5 013816 листам в этой технике известно, что строгие условия также зависят от длины последовательностей ДНК,олигонуклеотидных зондов (например, 10-40 оснований) или использования смешанных олигонуклеотидных зондов. Если используются смешанные зонды, предпочтительно вместо SSC использовать тетраметиламмония хлорид (ТМАС). См. Ausubel выше. Идентичность отражает взаимосвязь между двумя или более полипептидными последовательностями или двумя или более полинуклеотидными последовательностями, определенными в результате сравнения последовательностей. В целом идентичность относится к точному соответствию нуклеотида к нуклеотиду или аминокислоты к аминокислоте этих двух полинуклеотидов или двух полипептидных последовательностей, соответственно, по отношению к длине сравниваемых последовательностей. Для последовательностей, не имеющих точного соответствия, может быть определен % идентичности. В целом эти две последовательности, которые будут сравниваться, выравнивают, чтобы получить максимальную корреляцию между последовательностями. Выравнивание может включать введение пробелов в одну или в обе последовательности, чтобы увеличить степень выравнивания. Процент идентичности можно определить по отношению к полной длине каждой сравниваемой последовательности(так называемое глобальное выравнивание), что наиболее подходит для последовательностей одинаковой или очень близкой длины, или процент идентичности можно определить по отношению к более короткой, определенной длине (так называемое локальное выравнивание), что более подходит для последовательностей неравной длины. Способы сравнения идентичности и гомологии двух и более последовательностей известны в данной области техники. Таким образом, программы, доступные в Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 9.1 (Devereux J. et al., 1984), например программы BESTFIT и GAP, могут использоваться, чтобы определить % идентичности между двумя полинуклеотидами, а также % идентичности и % гомологии между двумя полипептидными последовательностями. BESTFIT использует алгоритм локальной гомологии Smith и Waterman (1981) и обнаруживает одну область наибольшего подобия между двумя последовательностями. В данной области техники также известны другие программы для определения идентичности и/или подобия между последовательностями, например семейство программ BLAST (Altschul S.F.et al., 1990, Altschul S.F. et al., 1997, доступны через домашнюю страницу NCBI, находящуюся по адресуwww.ncbi.nlm.nih.gov) и FASTA (Pearson W.R., 1990). Любой такой вариант или мутеин предпочтительно имеет последовательность аминокислот, в достаточной степени дублирующую последовательность IFN-бета, чтобы иметь активность, по существу,подобную активности IFN-бета. Функциональный анализ для того, чтобы оценить, есть ли у какого-нибудь варианта или мутеина активность, подобная таковой IFN-бета, является, например, анализом, измеряющим активность влияния интерферона на цитопатический эффект вируса везикулярного стоматита в клетках WISH, например анализом, описанным Youcefi et al., 1985. Таким образом, возможно определить, имеет ли какой-нибудь мутеин, по существу, такую же активность, что IFN-бета, посредством обычного экспериментирования. В предпочтительном варианте осуществления любой такой вариант или мутеин имеет по меньшей мере 40% идентичность или гомологию с последовательностью IFN-бета, которая раскрыта, например, в патенте США 4738931. Более предпочтительно вариант или мутеин имеет по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% идентичность или гомологию с последовательностью IFN-бета. Мутеины IFN-бета, которые могут применяться по настоящему изобретению, или кодирующая их нуклеиновая кислота охватывают конечный набор, по существу, подобных последовательностей в качестве замещенных пептидов или полинуклеотидов, которые средний специалист в данной области техники может получать в обычном порядке без неуместного экспериментирования на основании идей и рекомендаций, присутствующих в настоящем документе. Предпочтительные изменения в мутеинах по настоящему изобретению являются такими, которые известны как консервативные замены. Консервативные замены аминокислот полипептидов IFN-бета могут включать синонимичные аминокислоты в пределах группы, которая имеет достаточно схожие физико-химические свойства, так что замена одного члена группы другими позволяет сохранить биологическую функцию молекулы (Grantham, 1974). Ясно, что в последовательностях, определение которых дано выше, также могут быть произведены вставки и делеции аминокислот без изменения функции этих последовательностей, особенно если вставки или делеции затрагивают только несколько аминокислот,например менее 30 и предпочтительно менее 10, и не удаляют и не перемещают аминокислоты, которые важны для функциональной конформации, например остатки цистеина. Белки и мутеины, полученные в результате таких делеции и/или вставок, находятся в пределах объема настоящего изобретения. Предпочтительно синонимичные группы аминокислот представляют собой те, которые определены в табл. I. Более предпочтительно синонимичные группы аминокислот представляют собой те, которые определены в табл. II; и наиболее предпочтительно синонимичные группы аминокислот представляют собой те, которые определены в табл. III.-6 013816 Таблица I Предпочтительные группы синонимичных аминокислот Таблица II Более предпочтительные группы синонимичных аминокислот-7 013816 Таблица III Наиболее предпочтительные группы синонимичных аминокислот Примеры создания замен аминокислот в белках, которые могут использоваться для получения мутеинов IFN-бета для применения по настоящему изобретению, включают стадии любых известных способов, таких как представленные в патентах США 4959314, 4588585 и 4737462, выданных Mark et al.; 5116943, выданному Koths et al., 4965195, выданному Namen et al.; 4879111, выданному Chong et al.; и 5017691, выданному Lee et al.; и белки с замещенным лизином, представленные в патенте США 4904584 (Shaw et al.). Недавно был описан особый вариант интерферона. Так называемые консенсусные интерфероны представляют собой не встречающиеся в природе варианты IFN (патент США 6013253). Консенсусные интерфероны также могут использоваться по изобретению. Термин функциональные производные IFN-бета, который используется в данном документе,включает производные, которые могут быть получены с помощью функциональных групп, которые присутствуют в виде боковых цепей на N- или С-концевых остатках или группах, способами, известными в данной области техники; такие функциональные производные включены в изобретение при условии, что они остаются фармацевтически приемлемыми, то есть они не снижают биологическую активность белков, которая описана выше, иначе говоря способность связываться с соответствующим рецептором и инициировать передачу сигналов от рецептора, и не придают токсичных свойств композициям, содержащим их. Производные могут иметь химические остатки, такие как углеводные или фосфатные остатки,при условии, что такое производное сохраняет биологическую активность белка и остается фармацевтически приемлемым. Например, производные могут включать алифатические эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп, полученные реакцией с аммиаком или с первичными или вторичными аминами,N-ацильные производные свободных аминогрупп аминокислотных остатков, образованные с ацильными остатками (например, алканоильными или карбоциклическими ароильными группами) или O-ацильные производные свободных гидроксильных групп (например, групп остатков серила или треонила), образованные с ацильными остатками. Такие производные могут также включать, например, боковые цепи полиэтиленгликоля, которые могут маскировать антигенные сайты и удлинять время пребывания молекулы в жидкостях организма. Особо важное значение имеет белок, который был дериватизирован или объединен с комплексообразующим средством, чтобы обеспечить длительность действия. Например, по настоящему изобретению-8 013816 могут использоваться пэгилированные версии или генно-инженерные белки, проявляющие длительную активность в организме. Пэгилированная версия интерферона бета-1a описана в WO 99/55377 и считается включенной в определение интерферона-бета по настоящей заявке. Согласно настоящему изобретению для лечения неврита зрительного нерва также может использоваться соль IFN-бета. Термин соли в данном документе относится как к солям карбоксильных групп, так и к солям присоединения кислоты, образованных аминогруппами белков, описанными выше, или к их аналогам. Соли карбоксильной группы могут быть образованы способами, известными в данной области техники, и включают неорганические соли, например соль натрия, кальция, аммония, трехвалентного железа или цинка и т.п., и соли с органическими основаниями, такие как соли, образованные, например, с аминами,такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и т.п. Соли присоединения кислоты включают, например, соли с неорганическими кислотами, например хлористо-водородной или серной кислотой, и соли с органическими кислотами, например уксусной или щавелевой кислотой. Конечно,любые такие соли должны сохранять биологическую активность IFN-бета, которая может быть измерена,например, в биологической пробе, как разъяснено выше. Термин слитый белок относится к полипептиду, содержащему IFN-бета или его вариант или мутеин, или фрагмент, слитый с другим белком, который, например, обладает длительным временем пребывания в жидкостях организма. Таким образом, IFN-бета может быть слит с другим белком, полипептидом или тому подобным, например иммуноглобулином или его фрагментом. Поэтому в следующем варианте осуществления IFN-бета содержит слияние с иммуноглобулином,то есть IFN-бета представляет собой составной белок, содержащий IFN-бета целиком или его часть, слитую с целой молекулой иммуноглобулина или с ее частью. Способы создания составных белков иммуноглобулинов известны в данной области техники, например, они описаны в WO 01/03737. Специалист в данной области техники поймет, что полученный в результате составной белок по изобретению сохраняет биологическую активность IFN-бета. Слияние может быть прямым или осуществляться посредством короткого линкерного пептида, длина которого может составлять всего лишь 1-3 аминокислотных остатка или более, например 13 аминокислотных остатков. Указанный линкер может быть, например, трипептидом с последовательностью E-F-M (Glu-Phe-Met) или линкерной последовательностью из 13 аминокислот, содержащей Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met, или линкером, богатым GlySer, введенным между последовательностью IFN-бета и последовательностью, полученной из последовательности иммуноглобулина. Полученный в результате слитый белок имеет улучшенные свойства, такие как удлиненное время пребывания в жидкостях организма (период полураспада), усиленную специфичную активность, повышенный уровень экспрессии, или облегчается очистка слитого белка. В дополнительном предпочтительном варианте осуществления IFN-бета слит с константной областью молекулы Ig, часто называемой Fc-участком иммуноглобулина. Предпочтительно IFN-бета слит с областями тяжелых цепей, например, доменами СН 2 и CH3 IgG1 человека. Другие изоформы молекул Ig также подходят для создания слитых белков по настоящему изобретению; сюда относятся изоформыIgG2 или IgG4 или другие классы Ig, подобные IgM или IgA, например. Слитые белки могут быть мономерными или мультимерными, гетеро - или гомомультимерными. Способы получения белков, слитых с иммуноглобулинами, известны в данной области техники, например, из патента ЕР 526452 или из патента США 5155027. Слитые белки Ig, содержащие остатки IFN-бета, описаны, например, в патенте ЕР 227110, патенте США 5541087, заявкахWO 97/24137 или 00/23472. Фрагмент по настоящему изобретению относится к любому подклассу IFN-бета, то есть к более короткому пептиду, который сохраняет желаемую биологическую активность, измеримую, например, в биологической пробе, описанной выше. Фрагменты можно легко получить, удаляя аминокислоты с любого конца молекулы и проверяя полученный в результате продукт на свойства агониста рецептора. Протеазы для удаления одной аминокислоты за один раз с N- или С-конца полипептида известны, и, следовательно, определенные фрагменты, которые сохраняют желаемую биологическую активность, могут быть определены, например, в тесте, описанном Youcefi et al., 1985, и такое определение включает только обычное экспериментирование. Хотя настоящее изобретение предусматривает рекомбинантные методы для создания вышеупомянутых производных, эти производные также могут быть получены обычными способами синтеза белков,которые известны специалистам в данной области техники.IFN-бета или его вариант/мутеин, функциональное производное, активный фрагмент или слитый белок, имеющий активность IFN-бета, предпочтительно вводят системно и предпочтительно подкожно или внутримышечно. В объем настоящего изобретения также включены внутрикожный, чрезкожный(например, состав с замедленным высвобождением), внутривенный, пероральный, внутричерепной, эпидуральный, местный, ректальный и интраназальный пути введения. Также может использоваться любой другой терапевтически эффективный путь введения, например всасывание через эпителиальные или эндотелиальные ткани, или может использоваться генотерапия, где пациенту вводится (например, посредством вектора) молекула ДНК, кодирующая IFN-бета, которая вы-9 013816 зывает экспрессию и секрецию IFN-бета in vivo. Из IFN-бета может быть приготовлена фармацевтическая композиция вместе с фармацевтически приемлемым носителем, наполнителями или т.п. Подразумевается, что определение фармацевтически приемлемый охватывает любой носитель,который не снижает эффективность биологической активности активного ингредиента и нетоксичен для хозяина, которому он вводится. Например, для парентерального введения из активного белка (белков) может быть приготовлена стандартная дозированная лекарственная форма для инъекций в растворителях, таких как физиологический раствор, раствор глюкозы, сывороточный альбумин и раствор Рингера. Термин лечить, который используется в данном документе, означает облегчать или ослаблять симптомы, устранять этиологию симптомов временно или постоянно, или предупреждать, или замедлять появление симптомов названного расстройства или состояния. Термин лечение, который используется в данном документе, также включает термин профилактика расстройства, что, например, проявляется задержкой начала появления симптомов расстройства в существенной с медицинской точки зрения степени. Лечение расстройства, например, проявляется облегчением симптомов, связанных с расстройством, или ослаблением повторно возникающих симптомов расстройства. Дозировка, введенная человеку в виде одной или нескольких доз, может меняться в зависимости от ряда факторов, включая фармакокинетические свойства IFN-бета, путь введения, состояние и особенности (пол, возраст, масса тела, здоровье, размер) пациента, степень выраженности симптомов, сопутствующие лечения, частоту введения. Специалисты в медицине могут производить корректировку установленных диапазонов доз и манипулировать этими диапазонами. Предпочтительные дозы и режимы по настоящему изобретению выбраны из группы, состоящей из 12 ММЕ (44 мкг) IFN-бета 3 раза в неделю, 12 ММЕ (44 мкг) ежедневно, 24 ММЕ (88 мкг) 3 раза в неделю, 24 ММЕ (88 мкг) ежедневно. Эти дозы предпочтительно вводятся подкожно. Кроме того, предпочтительно вводить 100 мкг (приблизительно 27 ММЕ) IFN-бета 1 раз в неделю внутримышечно. Суточные дозы также могут быть разделены на несколько введений или вводиться в формах с длительным высвобождением, чтобы получить желаемые результаты. При втором и последующих введениях может использоваться доза, равная, меньше или больше начальной или предыдущей дозы, введенной индивидууму. Согласно дополнительному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения лечение IFN-бета может быть объединено с лечением другим средством, которое применимо для леченияPC (средство для лечения PC). По отношению к рекомбинантному IFN-бета эти средства могут вводиться одновременно, раздельно или последовательно. Например, современные средства для лечения PC могут модифицировать лечение, то есть модифицировать протекание PC, модулировать или подавлять иммунную систему. Таким образом, средства для лечения PC в соответствии с сущностью настоящего изобретения включают глатимарера ацетат (Copaxone, Amgen), а также иммунодепрессивное средство,одобренное FDA для лечения прогрессирующего PC, - митоксантрон (Novantrone, Amgen). Кроме того,по настоящему изобретению могут использоваться средства для лечения PC, находящиеся в стадии разработки, такие как агонисты рецептора сфингозин-1-фосфата (S1P); измененные пептидные лиганды; иммунодепрессанты; ингибиторы аденозиндеаминазы; иммуноглобулин G для внутривенного введения; моноклональные антитела к поверхностным Т-клеточным маркерам; цитокины, стимулирующие ТН 2; соединения, ингибирующие экспрессию цитокинов, стимулирующих ТН 1; антиспастические средства; антагонисты АМРА-глутаматных рецепторов; ингибиторы экспрессии VCAM-1 или антагонисты ее лиганда; антагонисты фактора-ингибитора миграции макрофагов; ингибиторы катепсина S и ингибиторыmTOR. Таким образом, средства для лечения PC в соответствии с сущностью настоящего изобретения включают: анстиспастические средства, включая баклофен, диазепам, пирацетам и дантролен; например, антиспастические средства могут вводиться человеку в следующих диапазонах доз: баклофен - до 100 мг внутрь, диазепам - до 20 мг внутрь, пирацетам - до 24 мг внутрь, дантролен - до 100 мг внутрь, ламотригин - до 100 мг/сут, рилузол - до 100 мг внутрь, тизанидин - до 12 мг внутрь, клонидин - до 0,1 мг внутрь,бета-блокаторы (например, пропанолол) - до 160 мг внутрь, ципрогептадин - до 8 мг внутрь, орфенадрин- до 100 мг внутрь и каннабиноиды (например, дронабинол) - до 5 мг внутрь; ингибиторы аденозиндеаминазы, например кладрибин; например, ингибиторы аденозиндеаминазы,такие как кладрибин, могут вводиться человеку в диапазоне доз до 0,07 мг/кг в сутки; измененные пептидные лиганды, такие как глатирамер, например, в форме ацетата; глатирамер, например, может вводиться человеку в диапазоне доз до 20 мг п/к или до 50 мг внутрь; антагонисты АМРА-глутаматных рецепторов,например 2,3-дигидрокси-6-нитро-7 сульфамоилбензо(f)хиноксалин, [1,2,3,4,-тетрагидро-7-морфолин-ил-2,3-диоксо-6-(трифторметил)хиноксалин-1-ил]метилфосфонат, 1-(4-аминофенил)-4-метил-7,8-метилендиокси-5 Н-2,3-бензодиазепин или(-)1-(4-аминофенил)-4-метил-7,8-метилендиокси-4,5-дигидро-3-метилкарбамоил-2,3-бензодиазепин; ингибиторы катепсина S; ингибиторы катепсина S, например соединение, раскрытое в WO 03/20721,- 10013816 может, например, вводиться человеку в диапазоне доз 0,1-100 мг/кг в сутки; иммуноглобулин G (например, раскрытый в Neurology, 1998, May, 50 (5): 1273-81); например, иммуноглобулин G может вводиться человеку в диапазоне доз до 400 мг/кг в/в; моноклональные антитела к различным Т-клеточным поверхностным маркерам, например натализумаб (Antegren, Tysabri) или алемтузумаб; например, моноклональные антитела к различным Т-лимфоцитарным поверхностным маркерам могут вводиться человеку в следующих диапазонах доз: натализумаб - до 3 мг/кг в/в, алемтузумаб - до 30 мг п/к или в/в; цитокины, активирующие ТН 2, например IL-4, IL-10 или соединения, которые ингибируют экспрессию цитокинов, активирующих ТН 1, например ингибиторы фосфодиэстеразы, такие как пентоксифилин; ламотригин, рифлузол, тизанидин, клонидин, бета-блокаторы, ципрогептадин, орфенадрин или каннабиноиды; например, цитокины, активирующие ТН 2, могут вводиться человеку в следующих диапазонах доз: IL-4 - до 3 llg/кг п/к или IL-10 - до 20 р. g/кг п/к; соединения, которые ингибируют экспрессию цитокинов, активирующих ТН 1, такие как ингибитор фосфодиэстеразы пентоксифилин, могут вводиться человеку в диапазоне доз до 4 мг внутрь; ингибиторы экспрессии VCAM-1 или антагонисты ее лиганда, например антагонисты интегрина а 4I VLA-4, и/или альфа-4-бета-7 интегрины, например натализумаб (ANTEGREN); агонисты рецептора S1P, такие как агонисты рецептора S1P, раскрытые в ЕР 627406 А 1 (например,соединения приведенной там формулы I), ЕР 0778263 А 1 (например, соединения приведенной там формулы III), WO 02/18395 (например, соединения приведенных там формул IVa или IVb), WO 02/076995(например, соединения приведенной там формулы V), JP 2002316985 (например, соединения приведенной там формулы VIII), WO 03/2914 (например, соединения приведенных там формул III и IX); подходящие для вышеупомянутых соединений дозы и пути введения можно легко извлечь из вышеупомянутых документов; ингибиторы mTor; например, ингибиторы mTor, например рапамицин или его производное, например 40-0-(2-гидроксиэтил)рапамицин, может вводиться в диапазоне доз приблизительно 0,1-25 мг/кг в сутки; антитела к фактору, ингибирующему миграцию макрофагов (анти-MIF); противовоспалительные средства, такие как противовоспалительные соединения, описанные в США 5540938, например фампридин; противовоспалительные соединения, описанные в WO 01/45698,например симвастатин; противовоспалительные соединения, описанные в WO 9967230, например CDP323; противовоспалительные соединения, описанные в WO-2004043965, например MLN3897; противовоспалительные соединения, описанные в WO 03070711; противовоспалительные соединения, описанные в WO 01/47920; противовоспалительные соединения, описанные в WO 03/068230, например дескар пирфенидон; противовоспалительные соединения, описанные в WO 9848802, например ксалипроден; противовоспалительные соединения, описанные в WO 0228866, например тенсиролимус; противовоспалительные соединения, описанные в WO 99/55678, например лаквинимод; противовоспалительные соединения, описанные в ЕР-727406, WO 2004/028251 и 2004/028251, например финголимод; противовоспалительные соединения,описанные в WO-02080897, например терифлуномид. Врач, клиницист или ветеринар среднего уровня компетентности легко смогут определить и назначить эффективное количество отдельных активных ингредиентов, которое требуется, чтобы облегчить,противостоять или остановить прогрессирование состояния. Оптимальная точность в достижении концентрации активных ингредиентов в пределах диапазона, который обеспечивает эффективность без токсичности, требует режима, основанного на кинетике доступности активных игредиентов в участкахмишенях. На основании полного описания настоящего изобретения специалистам в данной области техники станет ясно, что то же самое может быть выполнено в пределах широкого диапазона эквивалентных параметров, концентраций и условий, не отступая от сущности и объема изобретения и без неуместного экспериментирования. Хотя это изобретение описано в связи с конкретными вариантами осуществления, подразумевается,что изобретение допускает дополнительные модификации. Предполагается, что настоящая заявка распространяется на любые разновидности, применения или адаптацию изобретения, которые в целом следуют принципам изобретения, и включает такие отступления от настоящего раскрытия, которые входят в известную или обычную практику в области техники, к которой относится изобретение, и могут быть применены к существенным признакам, сформулированным выше, как следует из объема прилагающейся формулы изобретения. Все ссылки, процитированные в данном документе, включая журнальные статьи или рефераты,опубликованные или неопубликованные заявки на патент США или патенты других стран, выданные патенты США или патенты других стран, или любые другие ссылки, включены в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки, включая все данные, таблицы, чертежи и текст, представленные в процитированных ссылках. Кроме того, содержание ссылок в полном объеме, процитированных внутри ссылок, процитированных в данном документе, также в полном объеме включено посредством ссылки.- 11013816 Ссылка на известные стадии способов, обычные стадии способов, известные способы или обычные способы ни в коей мере не являются признанием того, что любой аспект, описание или вариант осуществления настоящего изобретения раскрыт, сообщен или предложен в соответствующей области техники. Предшествующее описание конкретных вариантов осуществления настолько полно раскрывает общую сущность изобретения, что другие могут, используя знания, находящиеся в пределах компетентности в данной области техники (включая содержимое ссылок, процитированных в данном документе),легко модифицировать и/или адаптировать такие конкретные варианты осуществления к различным применениям без неуместного экспериментирования, не отступая от общей концепции настоящего изобретения. Поэтому предполагается, что такая адаптация и модификации находятся в пределах значения диапазона эквивалентов раскрытых вариантов осуществления, основанных на идеях и рекомендациях, представленных в данном документе. Следует понимать, что фразеология или терминология данного документа предназначена для целей описания, а не ограничения, так что терминология или фразеология настоящего описания изобретения должны интерпретироваться специалистом в данной области техники в свете идей и рекомендаций, представленных в данном документе, в комбинации с познаниями среднего специалиста в данной области техники. Пример 1. Оценка влияния подкожного введения интерферона-бета-1 а на сохранение аксонов при неврите зрительного нерва с помощью оптической когерентной томографии. Цель: оценить влияние подкожного введения интерферона-бета-1a (Rebif) на гибель/сохранение аксонов при демиелинизирующем неврите зрительного нерва (НЗН), вызванном рассеянным склерозом(PC), используя оптическую когерентную томографию (ОКТ). Представлен анализ случая. Методы: пациента подвергли стандартному нейроофтальмологическому обследованию, включавшему оценку остроты зрения, дефекта афферентной зрачковой реакции, внутриглазного давления и исследование цветового зрения. Степень поражения головного и спинного мозга оценивали с помощью МРТ. Для целей анализа каждый глаз разделяли на 12 секторов и измерение параметров ОКТ проводили исходно и через 3, 6, 9 и 12 месяцев. Результаты: 35-летний белый мужчина поступил с односторонним НЗН правого глаза и получал лечение высокой дозой метилпреднизолона внутривенно по протоколу Optic Neuritis Treatment Trial. Симптомы отсутствовали более 4 лет, затем больной поступил с НЗН левого глаза и крупным очагом в головном мозге, который давал усиленный сигнал. ОКТ выявила отчетливое снижение толщины СНВС правого глаза и небольшое снижение толщины СНВС левого глаза. После того как был поставлен диагноз рецидивирующего-ремиттирующего PC, пациенту был назначен метилпреднизолон, а затем - Rebif,44 мкг п/к 3 раза в неделю. Зрение улучшилось, МРТ-очаг исчез, на его месте осталась небольшая область со сниженной интенсивностью сигнала. Анализ серийной ОКТ выявил продолжающуюся гибель аксонов правого глаза, но медленное увеличение толщины СНВС в некоторых секторах левого глаза. Лечение Rebif переносилось хорошо, и в течение последних 24 месяцев рецидивы отсутствовали, новых МРТ-очагов не обнаружено. Заключения: ОКТ - надежный и неинвазивный способ количественной оценки гибели/сохранения аксонов. Наши предварительные наблюдения у больных НЗН указывают на то, что даже в отсутствии клинических симптомов толщина СНВС в непораженном глазу может постепенно уменьшаться. Данные,полученные при анализе этого случая, указывают на то, что ОКТ-изменения при НЗН могут останавливаться в своем развитии и потенциально обращаться вспять в случае раннего и активного лечения IFN бета-1a п/к. Ранняя диагностика и активное лечение IFN-бета могут улучшить клинические результаты в отдаленном периоде. Пример 2. Нейропротективное действие in vivo при частом введении высоких доз интерферона: исследование серийной оптической когерентной томографии при рассеянном склерозе и неврите зрительного нерва. Цель: оптическая когерентная томография (ОКТ) измеряет толщину слоя нервных волокон сетчатки(СНВС). В данном исследовании серийную ОКТ выполняли больным рецидивирующим-ремиттирующим рассеянным склерозом (РРРС) и невритом зрительного нерва (НЗН), чтобы оценить изменения аксонов на фоне частого п/к введения высоких доз интерферона бета-1 а (Rebif). Методы: в это продолжающееся открытое решающее исследование включали пациентов (N=18), у которых имелся РРРС и односторонний НЗН, и исключали пациентов, у которых исходно имелся отек зрительного нерва, или если они одновременно получали другие DMT. Пациенты получали в/в пульстерапию метилпреднизолоном по протоколу Optic Neuritis Treatment Trial. После пульс-терапии сразу назначали Rebif, 22 мкг 3 раза в неделю; в пределах 2 недель дозу титровали до 44 мкг 3 раза в неделю. Толщину СНВС измеряли в 12 секторах каждого глаза; ОКТ-статус определяли исходно и через 3, 6, 9 и 12 месяцев. Изменения по сравнению с исходным состоянием в каждый момент времени сравнивали с помощью парных t-критериев раздельно для каждого глаза. Данные МРТ анализировали на корреляцию с данным ОКТ для каждого типа глаза. Ответ (увеличение 4% от исходного) анализировали по секторам и для каждого типа глаза. Результаты: наши предварительные наблюдения за больными НЗН свидетельствуют, что помимо- 12013816 быстрой гибели аксонов в пораженном глазу у больных может происходить субклиническая гибель аксонов в клинически непораженном глазу, даже в отсутствие клинических симптомов. Хотя в клинически пораженном глазу толщина СНВС статистически значимо снижалась в 5 секторах через 3 месяца и в 6 секторах на момент последней явки (до 12 месяцев), в клинически непораженном глазу не наблюдалось статистически значимых изменений через 3 месяца и к моменту последней явки. Заключение: наши результаты свидетельствуют, что лечение метилпреднизолоном и Rebif сохраняет толщину СНВС в непораженном глазу и тем самым может обеспечить нейропротективный эффект. Наши данные указывают на применимость ОКТ для ранней диагностики НЗН и PC и допускают раннее и активное лечение, которое может затормозить, остановить и/или потенциально обратить вспять субклинические ОКТ-изменения при НЗН и может улучшить прогноз в отдаленном периоде. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение белка интерферона-бета для изготовления лекарственного средства для лечения пациента с невритом зрительного нерва (НЗН), включающее последовательное или одновременное введение иммунодепрессивного соединения и введение белка интерферон-бета в совокупной недельной дозе более 12 ММЕ. 2. Применение по п.1, где совокупная недельная доза равна или более 16 ММЕ, равна или более 20,равна или более 24, равна или более 28, равна или более 32, равна или более 36 или равна или более 40 ММЕ. 3. Применение по п.1 или 2, где неврит зрительного нерва (НЗН) является демиелинизирующим невритом зрительного нерва (ДНЗН). 4. Применение по любому из пп.1-3, где у пациента нет явных клинических признаков рассеянного склероза (КПРС). 5. Применение по любому из пп.1-4, где пациент не подвергается высокому риску развития явных клинических признаков рассеянного склероза по МРТ-критериям. 6. Применение по любому из пп.1-5, где у пациента нет трех или более, предпочтительно двух или более очагов поражения белого вещества диаметром свыше 3 мм. 7. Применение по любому из пп.1-6, где у пациента нет очага поражения белого вещества диаметром свыше 3 мм. 8. Применение по любому из пп.1-7, где у пациента нет перивентрикулярного или яйцевидного очага поражения белого вещества. 9. Применение по любому из пп.1-8, где НЗН клинически проявляется только в одном зрительном нерве. 10. Применение по любому из пп.1-9, где НЗН не проявляется клинически. 11. Применение по любому из пп.1-10, где НЗН является изолированным клиническим симптомом. 12. Применение по любому из пп.1-11, где в начале лечения пациент имеет уменьшение толщины СНВС не более чем на 30 мкм, предпочтительно не более чем 25, 20, 15 или 10 мкм по меньшей мере в одном глазу. 13. Применение по любому из пп.1-12, где пациент имеет уменьшение толщины СНВС по меньшей мере на 10, 7,5 или 5 мкм по меньшей мере в одном глазу. 14. Применение по любому из пп.1-13, где интерферон-бета представляет собой интерферон бета 1 а. 15. Применение по любому из пп.1-14, где интерферон-бета представляет собой интерферон бета 1b. 16. Применение по любому из пп.1-15, где белок интерферон-бета вводят подкожно. 17. Применение по любому из пп.1-16, где белок интерферон-бета вводят внутримышечно. 18. Применение по любому из пп.1-17, где интерферон-бета представляет собой модифицированный интерферон-бета. 19. Применение по любому из пп.1-18, где интерферон-бета представляет собой интерферон-бета длительного действия. 20. Применение по любому из пп.1-19, где интерферон-бета длительного действия выбран из пэгилированного интерферона-бета или слитых белков, полученных слиянием интерферон-бета с Fc-фрагментом иммуноглобулина. 21. Применение по любому из пп.1-20, где доза интерферона-бета составляет по меньшей мере 44 мкг на п/к введение. 22. Применение по любому из пп.1-21, где интерферон-бета вводят по меньшей мере три раза в неделю. 23. Применение по любому из пп.1-22, где доза интерферона-бета составляет по меньшей мере 44 мкг на п/к введение три раза в неделю. 24. Применение по любому из пп.1-23, где интерферон-бета титруют до дозы, составляющей по меньшей мере 44 мкг п/к три раза в неделю, в пределах интервала, не превышающего 28 дней, предпоч- 13013816 тительно не более чем через 21 день, после завершения лечения иммунодепрессивным соединением. 25. Применение по любому из пп.1-24, где иммунодепрессивное соединение представляет собой стероидное соединение. 26. Применение по любому из пп.1-25, где стероидное соединение выбрано из группы, состоящей из метилпреднизолона, преднизона или дексаметазона или средств, усиливающих секрецию стероидов,например АКТГ. 27. Применение по любому из пп.1-26, где стероидное соединение представляет собой метилпреднизолон. 28. Применение по любому из пп.1-27, где введение осуществляют последовательно. 29. Применение по любому из пп.1-28, где введение иммунодепрессивного соединения предшествует введению белка интерферона-бета. 30. Применение по любому из пп.1-29, где иммунодепрессивное соединение вводят по меньшей мере двумя отдельными дозами. 31. Применение по любому из пп.1-30, где иммунодепрессивное соединение представляет собой стероидное соединение. 32. Применение по любому из пп.1-31, где стероидное соединение вводят согласно протоколу исследования Optic Neuritis Treatment Trial (ONTT). 33. Применение по любому из пп.1-32, где последовательно или одновременно вводят дополнительное соединение для лечения PC. 34. Применение по любому из пп.1-33, где дополнительное соединение для лечения PC выбрано из группы, состоящей из агонистов рецептора сфингозин-1-фосфата (S1P); измененных пептидных лигандов; иммунодепрессантов; ингибиторов аденозиндеаминазы; иммуноглобулина G для в/в введения, моноклональных антител к поверхностным Т-клеточным маркерам; цитокинов, активирующих ТН 2; соединений, которые ингибируют экспрессию цитокинов, активирующих ТН 1; антиспастических средств; антагонистов АМРА-глутаматных рецепторов; ингибиторов экспрессии VCAM-1 или антагонистов ее лиганда; антител к фактору, ингибирующему миграцию макрофагов; ингибиторов катепсина S и ингибиторов mTOR.