Противоопухолевое средство, способ его получения и способ его стабилизации

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ЕГО СТАБИЛИЗАЦИИ Изобретение относится к медицине, а именно к противоопухолевым средствам на основе водного раствора соединений платины, способам получения указанных средств и к способам их стабилизации. Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины осуществляют путем использования смеси основания фторурацила с урацилом и мочевиной, а также за счет использования раствора со сниженной концентрацией протонов.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: СОКИРКО ОЛЕГ СЕРГЕЕВИЧ (UA) 015680 Изобретение относится к медицине, а именно к противоопухолевым средствам на основе водного раствора соединений платины, которые могут быть использованы для лечения злокачественных опухолей, к способам их получения и к способам их стабилизации. Среди противоопухолевых средств, широко применяемых в медицинской практике, одни из наиболее эффективных основаны на водном растворе мономерного комплекса цисплатина. В качестве активного агента в этих средствах выступает ион платины, координированный такими лигандами-носителями,которые поглощаются опухолевыми клетками практически также интенсивно, как и нормальными, и потому средства, содержащие цисплатин, характеризуются не только высокой противоопухолевой активностью, но и высокой токсичностью. Не менее активные, но значительно менее токсичные противоопухолевые средства основаны на водном растворе полимерного комплекса платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Pt-ДПК), представляющего собой продукт реакции цисплатина и ДНК, в котором один из лигандов-носителей иона платины является нуклеотидом, встроенным в структуру двунитчатых спиралей макромолекул ДНК, интенсивно поглощаемых только быстро размножающимися опухолевыми клетками, и поэтому противоопухолевые средства, содержащие соединение Pt-ДНК, с высокой степенью избирательности поражают опухолевые ткани при несущественном повреждении нормальных [Лечение неоперабельных опухолей органов брюшной полости. С.А. Шалимов и др. 1998, с. 103]. Мономерный комплекс цисплатин и полимерный комплекс Pt-ДНК, которые являются основными веществами в средствах, недостаточно растворимы и химически нестабильны в воде, поэтому в средства,основанные на их водных растворах, вводят фармацевтические добавки. В качестве добавок используют фармакологически приемлемые соли, регуляторы pH и другие стабилизирующие агенты, предпочтительно такие, которые за счет собственной биологической активности, проявляемой одновременно со способностью повышать растворимость и химическую устойчивость основного вещества, позволяют обеспечить эффективность лечения при лучшей переносимости. Известное противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты (Pt-ДНК) (активное вещество) включает неассоциированные макромолекулы Pt-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли (вспомогательное вещество) при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%:[см. декларационный патентный Украины 70456, публ. 15.10.2004, заявители Шалимов С.А.,Волченскова И.И., Майданевич Н.Н.]. Как показали исследования, водный раствор известного средства имеет pH 6,5-7,5 и плотность 1,0012-1,0016 г/см 3, при которых неассоциированные молекулы соединения Pt-ДНК имеют наиболее высокую противоопухолевую активность, а фторурацил имеет способность усиливать эту активность и уменьшать токсичность соединения платины при выдерживании полученного средства в интервале температур выше 35C. Снижение температуры способствует основаниям молекул Pt-ДНК вступать во внутримолекулярные взаимодействия кооперативного характера интенсивнее, чем в межмолекулярные взаимодействия с родственными анионами натриевой соли фторурацила, и поэтому пространственные структуры молекул Pt-ДНК необратимо конденсируются Внутримолекулярная конденсация структур, которые содержат очень маленькие атомы платины с плотностью 21,45 г/см 3, приводит к уменьшению пространственных структур молекул Pt-ДНК до таких размеров, что их плавучая плотность превышает плотность раствора, и они под действием силы тяжести оседают в виде рыхлого осадка. При этом анионы фторурацила склоны взаимодействовать в большей мере с протонами раствора, чем с основаниями Pt-ДНК, и поэтому переходят в состояние нейтральных молекул собственного основания, растворимость которого ограничена в воде и которое оседает в виде кристаллов, растворимых при повышении температуры. Осаждение активного и вспомогательного веществ вызывает уменьшение их концентрации в растворе средства и, тем самым, снижает его противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность, ограничивает его применение только местными аппликациями и внутрибрюшными инфузиями, исключая внутривенные, внутриартериальные инфузии и интерстициальный путь введения. Известно использование основания фторурацила как структурного фрагмента тегафура - предшественника фторурацила в организме - для приготовления противоопухолевой композиции, содержащей тегафур и урацил в мольном соотношении 1:4 [патент США 5534513, МПК 7 A61K 31/505, заявитель-1 015680 Известно применение мочевины как диуретика, кератолитика, средства, снижающего внутричерепное и внутриглазное давление [М.М. Туркевич. Фармацевтическая химия, 1973, с. 45], а также в качестве эксципиента, добавляемого в твердые дозированные лекарственные формы для перорального введения. Известно применение высоких концентраций мочевины и повышения pH более чем до 11 для раскручивания спирализованных нитей природной двухцепочечной ДНК [А. Ленинджер. Биохимия, 1976,с. 737]. Известно применение натрия гидроксида в фармации для регулирования pH растворов лечебных средств. Кроме того, известно, что под действием высоких концентраций мочевины и при pH11,0 спирализованые двойные нити нативной ДНК расплетаются [А. Ленинджер. Биохимия, 1976, с. 737]. Однако в известных источниках нет сведений о применении урацила, мочевины и натрия гидроксида как средств, предотвращающих внутримолекулярную конденсацию спирализованых нитей соединений металлов с ДНК. Не известно также о применении мочевины в дозированных формах лечебных препаратов для парентерального введения. Эффективные интервалы концентраций и соотношение активной субстанции, фторурацила и солей в водном растворе средства, которое заявляется, соответствуют соотношениям, установленным при разработке известного средства для внутрибрюшных, внутривенных и внутриартериальных инфузий, которые выдерживаются при температуре 35-40C. Интервалы концентраций урацила и мочевины детерминированы мольным соотношением фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1. Интервалы концентраций натрия гидроксида ограничены снизу значением pH, что исключает возможность протонирования фторурацила, а сверху фармацевтическими требованиями. Известен способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, который содержит натрий хлористый и натрий лимоннокислый, путем растворения волокон при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90C, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до такой же температуры цитратносолевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), добавления к смеси водного раствора натриевой соли фторурацила и термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90C в течение 15-20 мин [см. декларационный патент Украины 70456, публ. 15.10.2004, заявители Шалимов С.А.,Волченскова И.И., Майданевич Н.Н.]. Добавление водного раствора натриевой соли фторурацила к смеси растворов ДНК и ДДП перед термостатированием не способствует усилению межмолекулярных взаимодействий молекул Pt-ДНК с родственными молекулами раствора и ослаблению внутримолекулярных взаимодействий кооперативного характера в них и не исключает возможности взаимодействия анионов фторурацила с протонами раствора при температурах ниже 35C. Именно поэтому известный способ уже при комнатной температуре не предотвращает необратимую внутримолекулярную конденсацию пространственных структур Pt-ДНК и не препятствует протонированию анионов фторурацила в растворе средства. Во избежание этих явлений необходимо перед термостатированием проводить дополнительные технологические операции введения в раствор средства компонентов, которые бы повышали его pH, а также плотность. Кроме того,противоопухолевое средство, полученное известным способом, возможно использовать лишь при температуре 35-37C, так как при снижении температуры активность средства уменьшается. К тому же высокая температура средства усложняет его хранение, транспортировку и использование. Известен способ стабилизации противоопухолевого средства на основе водного раствора цисплатина с концентрацией 0,1-1,0 мг/мл, в котором используют натрий хлористый в количестве 1-20 мг/мл, соляную кислоту до pH 2,0-3,0 и маннит (диуретик) в количестве 2-150 мг/мл [патент СССР 1192596 А,публ. 15.11.1985]. Известны водные растворы соединения Pt-ДНК, стабилизированные натрием хлористым и натрием лимонно-кислым (средством против свертывания крови) в количествах, соответствующих мольному соотношению платины, фосфора ДНК, натрия хлористого и натрия лимонно-кислого 4:6:30:3 [патент Украины 60597, публ. 15.07.2005; 61543, публ. 15.08.2005; 66476 A, публ. 17.05.2004]. Однако наиболее эффективным и наименее токсичным противоопухолевым средством на основе водного раствора соединения Pt-ДНК является средство, описанное выше в патенте Украины 70456,которое стабилизируют натрием хлористым, натрием лимонно-кислым, аммонием хлористым (средством, вызывающим отхаркивающее действие и усиливающим действие диуретинов) и дополнительно стабилизирующим агентом - натриевой солью фторурацила при соотношении компонентов в растворе, указанном выше. Натриевая соль фторурацила усиливает противоопухолевый и ослабляет токсический эффекты основного вещества, так как она способна выступать как в качестве модулятора фармакологического действия макромолекул Pt-ДНК в организме, так и в качестве стабилизатора концентрации макромолекул-2 015680 Однако водный раствор соединения Pt-ДНК в известном средстве имеет pH 6,5-7,5, при котором использование натриевой соли фторурацила позволяет стабилизировать концентрацию Pt-ДНК в растворе при температуре выше 35C. Понижение температуры способствует выделению из раствора макромолекул соединения Pt-ДНК в виде рыхлого осадка и натриевой соли фторурацила в виде кристаллов основания фторурацила, что вызывает уменьшение концентрации основного вещества и стабилизирующего агента в растворе дозированной лекарственной формы средства и отрицательно влияет на его противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность и, кроме того, ограничивает условия его хранения и возможности применения местными аппликациями и внутрибрюшинными инфузиями, исключая внутривенные и внутриартериальные инфузии, эндолимфатические инъекции и интерстициальный путь введения. Исходя из вышеизложенного, перед данным изобретением поставлен ряд задач, которые необходимо решить. Одна из задач, которая стоит перед настоящим изобретением, заключается в создании противоопухолевого средства, в котором путем добавления к известному средству урацила, мочевины и натрия гидроксида обеспечивают возможность предотвращения внутримолекулярной конденсации основного вещества и протонирования вспомогательного вещества и, тем самым, избежать их осаждения и уменьшения их концентрации в растворе в интервале температур 25-15C, чем достигают повышение противоопухолевой активности и терапевтической эффективности средства и расширение его применения. Вторая задача, стоящая перед изобретением, заключается в разработке способа получения противоопухолевого средства, в котором путем использования водных растворов урацила, мочевины и натрия гидроксида при соответствующих технологических условиях достигают, с одной стороны, ослабления интенсивности внутримолекулярных взаимодействий кооперативного характера в молекулах Pt-ДНК и, с другой стороны, усиления интенсивности взаимодействия их оснований с родственными молекулами раствора, а именно с фторурацилом, урацилом и мочевиной, которые обеспечивают возможность создания средства, которое содержит активное вещество Pt-ДНК, молекулы которого не конденсируются при температуре выдерживания готового средства в интервале 25-15C, что, в свою очередь, предупреждает и предотвращает осаждение макромолекул из раствора. Третья задача, стоящая перед изобретением, заключается в создании способа стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с повышенной избирательностью специфического действия и повышенной терапевтической эффективностью. Поставленные задачи решаются предложенным изобретением. Первая задача решается за счет того, что противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты (Pt-ДНК), которое включает неассоциированные макромолекулы Pt-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли, согласно изобретению дополнительно содержит урацил и мочевину в мольном соотношении фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%: а также натрия гидроксида до получения pH 8,4-9,9. При этом плотность раствора составляет 1,0054-1,0058 г/см 3. Поставленная вторая задача решается за счет того, что предложен способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, содержащем натрий хлористый и натрий лимонно-кислый, растворения волокон при механическом перемешивании и нагревания раствора ДНК до 70-90C, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до той же температуры цитратно-солевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90C в течение 15-20 мин и добавления к смеси перед термостатированием водного раствора натриевой соли фторурацила, в котором согласно изобретению перед термостатированием одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводят водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями, которые соответствуют мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с pH 11,0-12,0, а потом раствор средства доводят до pH 8,4-9,9 и до плотности 1,0054-1,0058 г/см 3.-3 015680 Предложенный способ получения противоопухолевого средства разрешает достичь повышенных значений pH и плотности раствора, что исключает возможность взаимодействия фторурацила с протонами раствора, а это, в свою очередь, обеспечивает получение средства с макромолекулами Pt-ДНК, которые не конденсируются, размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении при температуре выдерживания готового средства в интервале 25-15C. При этом повышение плотности раствора предупреждает осаждение макромолекул из раствора средства. Об использовании основания фторурацила, урацила и мочевины в самостоятельном виде или в смеси друг с другом, так же как и об использовании регуляторов pH в качестве средств, которые препятствуют выделению из растворов макромолекулярных соединений металлов с ДНК не известно. Не известно также об использовании мочевины в дозированных лекарственных формах препаратов для парентерального введения. Эффективные интервалы концентраций и соотношения основного вещества и солей в водном растворе, стабилизированном по способу, который заявляется, отвечают концентрациям и соотношениям,установленным при разработке известного способа получения соединения Pt-ДНК в водном растворе для внутрибрюшинных, внутривенных и внутриартериальных инфузий, которые имеют pH 6,5-7,5 и выдерживаются при температуре 35-40C. Интервалы концентраций основания фторурацила, урацила и мочевины детерминированы мольным соотношением нуклеотида Pt-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины, которое составляет 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2). Интервалы концентрации регулятора pH ограничены снизу значениями, которые исключают возможность кристаллизации основания фторурацила, а сверху - фармацевтическими требованиями. Предложенный способ стабилизации не позволяет выделяться из раствора макромолекулам Pt-ДНК и молекулам основания фторурацила, что, в свою очередь, обеспечивает получение противоопухолевых средств с такими концентрациями компонентов, которые не изменяются в их дозированных лекарственных формах при температуре выдерживания готового продукта в интервале 25-5C при длительном хранении. На практике противоопухолевое средство получали следующим образом. Волокна ДНК выдерживали в течение 16-26 ч в цитратно-солевом растворе, который содержал натрий хлористый и натрий лимонно-кислый. Растворяли их при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90C. В нагретый раствор ДНК постепенно вводили нагретый до той же температуры цитратно-солевой раствор цис-дихлородиаминплатины (ДДП). Потом добавляли к смеси водный раствор натриевой соли фторурацила. Одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводили водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями,которые отвечали мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с pH 11,0-12,0, чем раствор средства доводили до pH 8,4-9,9 и плотности 1,00541,0058 г/см 3. После этого смеси растворов ДНК и ДДП в течение 15-20 мин выдерживали при температуре 70-90C. Примеры получения противоопухолевого средства приведены в табл. 1, где примеры 1-3 касаются средства, которое заявляется, а пример 4 - известного средства. Таблица 1 При молекулярных массах урацила 112 гмоль, фторурацила 153 гмоль, мочевины 60 гмоль: для первого примера число молей урацила равняется 2,70/112=0,024; фторурацила - 3,70/153=0,024; мочевины - 1,44/60=0,024; для второго примера число молей для указанных веществ равняется 0,016 и для третьего примера число молей для указанных веществ равняется 0,0016. Таким образом, водный раствор урацила и водный раствор мочевины вводили с концентрациями,которые соответствовали мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1.-4 015680 Характеристики средства, которое заявляется, в зависимости от условий получения сравнивали с характеристиками известного средства. Результаты приведены в табл. 2, где примеры 1-3 относятся к заявляемому средству, а пример 4 - к известному средству. Таблица 2 Различия в водных растворах заявляемого средства и известного подтверждаются разными значениями pH, которые определены потенциометрически, и разными величинами плотности, найденными пикнометрически. Различия в пространственных структурах молекул Pt-ДНК, которые образовываются при температуре ниже 35C в известном средстве и в заявляемом средстве подтверждаются в примерах таблицы их разными размерами в молекулярных структурах, которые по данным электронной микроскопии отличаются один от другого в 2-3 раза. Размер молекулярных структур в примерах заявляемого средства соответствует размеру неассоциированных индивидуальных макромолекул вещества, которое подтверждает отсутствие внутримолекулярной конденсации молекул Pt-ДНК в средстве, выдержанном при температуре 25-15C. Противоопухолевую активность известного средства и заявляемого средства исследовали в тесте цитотоксичности на модели культивированных клеток, полученных из операционного материала больного злокачественной олигодендроастроцитомой головного мозга. Клетки культивировали в питательной смеси стандартного состава: среда Игла (40%), эмбриональная телячья сыворотка (30-40%), глюкоза(800 мг %), инсулин (0,2 ед/мл) при постоянном режиме газового состава и температуре 36,5C в инкубаторе. Через 4 суток после посева в период интенсивного роста клетки контрольной культуры обрабатывали физиологическим раствором, а клетки экспериментальных культур обрабатывали растворами заявляемого средства и раствором известного средства, выдержанных при температурах 25-15C. Время инкубации после обработки культур составило 24 ч. Противоопухолевую активность оценивали по цитотоксичности, которую характеризовали по относительному в сравнении с контролем количеству погибших клеток. Результаты подсчета относительного количества погибших клеток, выраженные в процентах, отображены в табл. 3, в которой приведены под 1 показатели контрольной культуры клеток, обработанной физиологическим раствором, под 2-4 - показатели экспериментальных культур клеток,обработанных растворами заявляемого средства, под 5 - показатели экспериментальных культур клеток, обработанных раствором известного средства. Данные табл. 3 приведены без сведений о концентрации солей натрия хлористого, натрия лимонно-кислого и аммония хлористого. Данные табл. 3 свидетельствуют о том, что при сравнении количественной оценки противоопухолевой активности в тесте цитотоксичности заявляемое средство существенно превосходит известное. Выдержанное при одинаковой температуре 15C и введенное в культуру при одинаковых концентрациях соединения Pt-ДНК 30 мкг/мл и натриевой соли фторурацила 50 мкг/мл известное средство вызывает гибель только 24,2% клеток, тогда как заявляемое - 86,8%. Таким образом, предложенное средство сохраняет свою высокую противоопухолевую активность и терапевтическую эффективность даже при температурах 25-15C, что значительно упрощает его хранение, транспортировку и использование. Предложенное средство может быть использовано в разных дозированных формах. Противоопухолевое заявляемое средство было применено в клинической терапии первичных и метастатических опухолей легких, почек, брюшины и плевры, органов пищеварения и опорнодвигательного аппарата в дозированных формах для внутривенного, внутриартериального и внутрибрюшного введения; в терапии опухолевых поражений головы, шеи и кожи - в дозированных формах для местного применения в виде аппликаций; при опухолях головного мозга - интерстициально с внутриоперационной имплантацией резервуара Оммуа в ложе хирургически удаленной опухоли. Опыт клинического применения заявляемого средства показал, что использование его дозированных форм как для внутрибрюшного и местного применения, так и для внутривенного, внутриартериального и интерстициального введения повышает эффективность химиотерапии, которая выражается в увеличении продолжительности жизни больных и повышении качества жизни во время проведения курса лечения и в отдаленный период времени. При этом каких-нибудь важных клинических или лабораторных проявлений побочных эффектов у больных не было выявлено. Следующая (третья) задача решается данным изобретением за счет того, что предложен способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Pt-ДНК), в соответствии с которым в качестве дополнительного стабилизирующего агента используют смесь основания фторурацила с урацилом и мочевиной в мольном соотношении нуклеотида Pt-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2) при понижении концентрации протонов в растворе до 8,4-9,9. Кроме того, используют соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Pt-ДНК) в концентрации 1,30-1,53 мг/мл, натрий хлористый в количестве 0,80-0,90 мг/мл, натрий лимонно-кислый в количестве 0,40-0,53 мг/мл, аммоний хлористый в количестве 0,15-0,18 мг/мл и дополнительный стабилизирующий агент, согласно изобретению используют комплексPt-ДНК, молекулы которого ниже 35C не выделяются из раствора. В составе средства макромолекулы Pt-ДНК могут содержать одну из ДНК, выделенную из природных источников или синтезированную методами генной инженерии с молекулярной массой, не ограничиваясь этим, 0,3-20 млн Да. Для доведения pH раствора в средствах до 8,4-9,9 используют либо гидроксид натрия, либо гидроксид калия, либо гидроксид аммония, либо какой-нибудь другой фармакологически приемлемый регулятор pH. Заявляемый способ стабилизации был применен в технологии получения противоопухолевых средств, перечисленных в табл. 4, которые отличались друг от друга природой ДНК, предшествующей соединению Pt-ДНК. На практике способ стабилизации противоопухолевых средств осуществляли следующим образом. В водный раствор, содержащий соединение Pt-ДНК, макромолекулы которого ниже 35C не выделяются из раствора, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый и аммоний хлористый, вводили водный раствор дополнительного стабилизирующего агента, содержащий, смесь основания фторурацила, урацила и мочевины. Одновременно вместе с водным раствором стабилизирующего агента дополнительно вводили водный раствор регулятора pH, содержащий натрия гидроксид до pH 11,0-12,0, которым раствор целевого средства доводили до pH 8,4-9,9. Конкретные условия способа стабилизации противоопухолевых средств, представленных в табл. 4,с указанием количеств исходных компонентов в растворе основного вещества, в растворе дополнительного стабилизирующего агента и в растворе регулятора pH приведены в табл. 5, где примеры 1-9 касаются способа, который заявляется, а примеры 10 и 11 - известного способа. Характеристики способа, который заявляется, в зависимости от условий осуществления и температуры выдерживания средства сравнивали с характеристиками известного способа по данным, приведенным в табл. 6, где примеры 1-9 касаются способа, который заявляется, а примеры 10 и 11 - известного способа. Различия в характеристиках заявляемого и известного способов подтверждаются разными интервалами значений pH, измеренными потенциометрически, и отсутствием температурной зависимости концентраций основного вещества и дополнительного стабилизирующего агента, контролируемых методами количественного анализа. Различия в концентрациях, которые возникают при температуре ниже 35C в известном способе, подтверждаются в примерах таблицы уменьшением концентрации соединенияPt-ДНК от 1,50 до 1,04 мг/мл, т.е. на 30,7%, a NaFu от 1,89 до 1,47 мг/мл, т.е. на 22% в водном растворе средства, выдержанном при 15C. При выдерживании средства около 10C концентрация уменьшается для Pt-ДНК от 1,48 до 0,63 мг/мл, т.е. уже на 57,4%, а для NaFu от 1,82 до 1,19 мг/мл, т.е. на 34,4%. Концентрации основного вещества и дополнительного стабилизирующего агента в примерах способа, который заявляется, соответствуют концентрациям в растворах, выдерживаемых при температурах выше 35C, что подтверждает возможность способа обеспечить условия, при которых макромолекулы Pt-ДНК и молекулы основания фторурацила не выделяются из раствора при выдерживании целевого продукта в интервале температур 25-5C. Противоопухолевую активность, которую способны обеспечить заявляемый и известный способы стабилизации средствам, исследовали в тесте цитотоксичности на модели адаптированных для культивирования клеток злокачественной астроцитомы головного мозга человека. Клетки поддерживали в питательной среде Игла с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки, глюкозы и инсулина при постоянном режиме газового состава и температуре 36,5C в инкубаторе. В период интенсивного роста клетки контрольной культуры обрабатывали физиологическим раствором, а клетки экспериментальных культур- растворами средств, стабилизированных по заявляемому и известному способам, которые предварительно выдерживали при температуре 10C. Противоопухолевую активность оценивали по цитотоксичности, характеризуемой относительным по отношению к контролю количеством клеток, погибших через 24 ч после обработки средствами. Результаты подсчета относительного количества погибших клеток,выраженного в процентах, даны в табл. 7, где под 1 приведены показатели контрольной культуры клеток, обработанных физиологическим раствором, под 2-5 - показатели экспериментальных культур,обработанных растворами средств, стабилизированных по заявляемому способу, под 6 - показатели-9 015680 экспериментальной культуры, обработанной раствором средства, стабилизированного по известному способу. Таблица 7 Данные табл. 7 свидетельствуют о том, что при сравнении количественной оценки противоопухолевой активности в тесте цитотоксичности заявляемый способ стабилизации существенно превосходит известный. Выдержанные при одинаковой температуре 10C и примененные в одинаковых объемах 0,02 мл с одинаковыми количествами 1,48 мг/мл Pt-ДНК при температуре выше 35C водные растворы средства, стабилизированного по известному способу, после введения в среду культивирования объемом 1 л создают в ней концентрацию основного вещества всего 12,6 мг/л, которая вызывает гибель только 32,2% клеток, тогда как водные растворы средства, стабилизированного по заявляемому способу, после введения в среду культивирования создают в ней концентрацию Pt-ДНК 29,6 мг/л, которая вызывает гибель 80,4-82,1 % клеток. Таким образом, предложенный способ стабилизации обеспечивает повышенное избирательное специфическое действие комплекса Pt-ДНК и его повышенную терапевтическую эффективность даже при температурах 25-5C, а также обеспечивает расширенные условия хранения средств и расширенный диапазон их применения за счет использования комплекса платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой(Pt-ДНК), макромолекулы которого ниже 35C не выделяются из раствора, за счет использования смеси основания фторурацила с урацилом и мочевиной, а также за счет использования раствора с пониженной концентрацией протонов. Противоопухолевые средства, стабилизированные по заявляемому способу, могут быть использованы в разных дозированных формах. Опыт клинического применения противоопухолевых средств, стабилизированных по заявляемому способу, показал, что их использование в дозированных формах как для внутрибрюшинного и местного путей введения, так и для внутривенного, внутриартериального, эндолимфатического и интерстициального повышает эффективность терапии первичных и метастатических опухолей, локализованных в области головы, шеи, легких, почек, органов пищеварения и опорно-двигательного аппарата. Повышение эффективности выражается в увеличении продолжительности жизни больных и улучшении качества их жизни как во время проведения курсов лечения, так и в отдаленный после лечения период времени. При этом каких -либо серьезных клинических или лабораторных проявлений побочных эффектов у больных не было выявлено.- 10015680 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с полианионом дезоксирибонуклеиновой кислоты, содержащее неассоциированные макромолекулы Pt-ДНК размером 0,05-0,15 мкм в наибольшем измерении, натрий хлористый, натрий лимонно-кислый, аммоний хлористый и фторурацил в виде натриевой соли, которое отличается тем, что оно дополнительно содержит урацил и мочевину в мольном соотношении фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1 при соотношении компонентов в водном растворе, мас.%: а также натрия гидроксид для достижения pH 8,4-9,9. 2. Противоопухолевое средство по п.1, которое отличается тем, что плотность раствора равняется 1,0054-1,0058 г/см 3. 3. Способ получения противоопухолевого средства путем выдерживания в течение 16-26 ч волокон ДНК в цитратно-солевом растворе, который содержит натрий хлористый и натрий лимонно-кислый, растворения волокон при механическом перемешивании и нагревании раствора ДНК до 70-90C, постепенного введения в нагретый раствор ДНК нагретого до той же температуры цитратно-солевого раствора цис-дихлородиаминплатины (ДДП), термостатирования смеси растворов ДНК и ДДП при 70-90C в течение 15-20 мин и добавления к смеси перед термостатированием водного раствора натриевой соли фторурацила, который отличается тем, что перед термостатированием одновременно вместе с водным раствором натриевой соли фторурацила дополнительно вводят водный раствор урацила и водный раствор мочевины с концентрациями, которые соответствуют мольному соотношению фторурацила, урацила и мочевины 1:1:1, и водный раствор натрия гидроксида с pH 11,0-12,0, а потом раствор средства доводят до pH 8,4-9,9 и до плотности 1,0054-1,0058 г/см 3. 4. Способ стабилизации противоопухолевых средств на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой (Pt-ДНК), который отличается тем, что в качестве дополнительного стабилизирующего агента используют смесь основания фторурацила с урацилом и мочевиной в мольном соотношении нуклеотида Pt-ДНК, основания фторурацила, урацила и мочевины 1:(6-12):(0,61,2):(0,6-1,2) при понижении концентрации протонов в растворе до 8,4-9,9. 5. Способ по п.4, который отличается тем, что концентрация комплекса Pt-ДНК составляет 1,30-1,53 мг/мл. 6. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит натрий хлористый в количестве 0,80-0,90 мг/мл. 7. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит натрий лимоннокислый в количестве 0,40-0,53 мг/мл. 8. Способ по п.4, который отличается тем, что средство дополнительно содержит аммоний хлористый в количестве 0,15-0,18 мг/мл. 9. Способ по п.4, который отличается тем, что используют терапевтически приемлемую ДНК, выделенную из природных источников или синтезированную методами генной инженерии, с молекулярной массой 0,3-20 млн Да. 10. Способ по п.4, который отличается тем, что для доведения pH раствора в средствах до 8,4-9,9 используют или гидроксид натрия, или гидроксид калия, или гидроксид аммония, или какой-нибудь другой фармакологически пригодный регулятор pH. 11. Противоопухолевое средство на основе водного раствора соединения платины с дезоксирибонуклеиновой кислотой, которое стабилизировано в соответствии со способом по п.4.