Способы и составы для борьбы с эктопаразитами

СПОСОБЫ И СОСТАВЫ ДЛЯ БОРЬБЫ С ЭКТОПАРАЗИТАМИ Предложены новые способы и составы для системного контроля заражения животных эктопаразитами при помощи спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли. Снайдер Дэниел Эрл, Уайт Уилльям Хантер (US) Медведев В.Н. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ (US) Эктопаразиты, такие как блохи, вши, мясные мухи, клещи и зудни, представляют собой проблему для человека и подобных животных. Указанные паразиты оказывают серьезное влияние на производительность животноводства, вызывая снижение прироста массы, ухудшение качества кожи, шерсти и мяса и, в некоторых случаях, смерть. Эктопаразиты также вызывают заболевания и недомогания у комнатных животных. Как известно, эктопаразиты переносят бактерии и вирусы, которые являются патогенными для людей. Заболевания, которые вызывают эктопаразиты, включают, например, малярию, лимфатический филяриатоз, трахому, трипаносомоз и речную слепоту. Попытки борьбы с эктопаразитами включали применение инсектицидов и пестицидов. Например,спиносины, которые представляют собой естественные продукты ферментации, применяли в качестве эктопаразитицидов у комнатных животных (Снидер (Snyder), патент США 6664237). Производные спиносинов применяли в сельском хозяйстве (ДеАмикис с соавторами (DeAmicis etal.), патент США 6001981). Спинеторам является общим названием смеси 25-90%, предпочтительно 5090% Подгорец с соавторами (Podhorez et al.), заявка на патент США 2008/0108800 А 1. Согласно описанию спинеторам обеспечивает длительный контроль широкого спектра насекомыхвредителей в различных сельскохозяйственных культурах (Dow AgroSciences Spinetoram Technical Bulletin, November 2006). Сообщалось, что спинеторам зарегистрирован в Новой Зеландии в качестве инсектицида для семечковых плодов ("Dow AgroSciences Receives First Global Registration for Spinetoram Insecticide", Dow AgroSciences Newsroom, Corporate News, August 10, 2007). Несмотря на то что применение спиносинов и других инсектицидов и пестицидов имеет положительный результат, необходимы альтернативные или усовершенствованные составы и способы. Целевые составы и способы могут не только обеспечивать альтернативные терапии, но также преодолевать некоторые ограничения существующих в настоящее время терапий. Указанные ограничения включают проблемы токсичности и безопасности, эффективности (активности и времени действия) и резистентности. На предпочтительное применение инсектицидов и пестицидов также влияют и ограничения введения,которые включают способ и периодичность введения. Например, снижение частоты введения с сохранением эффективности является желательным, так как введение дозировки животным часто является неудобным и/или трудным. Настоящее изобретение охватывает способы и составы для борьбы с эктопаразитами, применяемые на животных, которые обеспечивают альтернативные свойства для борьбы с заражением эктопаразитами. Кроме того, они позволяют преодолеть, по меньшей мере, некоторые ограничения применяемых в настоящее время инсектицидов и пестицидов, в частности обеспечивают эффектив-1 019278 ный длительный, безопасный, системный контроль эктопаразитов. В настоящем изобретении предложены способы контроля заражения животных эктопаразитами путем системного введения эффективного количества спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли животному, а также фармацевтические составы для системного контроля заражения эктопаразитами, содержащие спинеторам или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. В настоящем изобретении также предложены способы контроля заражения блохами собак или кошек путем перорального или парентерального системного введения эффективного количества спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли указанной собаке или кошке, и составы в виде одной или нескольких доз для системного контроля заражения эктопаразитами собак или кошек, содержащие спинеторам или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель в дозированной форме для перорального введения, выбранной из таблетки, капсулы или раствора, с дозировкой спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли от 10 до 60 мг на 1 кг массы тела собаки или кошки. Другим аспектом способов и составов с применением спинеторама является способность обеспечить длительный системный контроль заражения эктопаразитами, что, таким образом, снижая периодичность введения дозировки животному, например не чаще чем раз в одну или две недели или раз в месяц или более. Животное-хозяин может представлять собой млекопитающее или не млекопитающее, например птицу (индейку или цыпленка) или рыбу. В случае если животное-хозяин представляет собой млекопитающее, оно может представлять собой человека или млекопитающее, отличное от человека. Отличные от человека млекопитающие включают домашних животных, таких как домашний скот или домашние животные. Домашний скот включает крупный рогатый скот, верблюдовых, свиней, овец, коз и лошадей. Домашние животные включают собак, кроликов, кошек и других домашних животных, которых заводят и держат в тесном контакте с людьми, как часть связи человек-животное. Эктопаразиты включают насекомых и клещей, которые обычно заражают или инфицируют животных, а также включают их стадии яйца, личинки, куколки, нимфы и имаго. Указанные вредители включают блох, вшей, комаров, зудней, клещей и кровососущих, жалящих или назойливых мух. В частности,объектом являются блохи, в частности Ctenocephalides fells."Контроль" относится к ослаблению или устранению существующего заражения или профилактики заражения у животного-хозяина."Эффективное количество" относится к количеству спинеторама или его соли, достаточному для контроля эктопаразитов, и включает обеспечение значительного снижения заражения эктопаразитами. Указанный контроль может представлять собой результат попадания спинеторама или его конъюгата или соли в организм вредителя с пищей или в результате применения репеллента или действия in vivo вследствие системного присутствия спинеторама или его конъюгата или соли. Содержание спинеторама или его соли в способах и составах составляет от 0,01 до 1000 мг/кг, более предпочтительно от 0,1 до 100 мг/кг, более предпочтительно от 10 до 60 мг/кг массы тела животного. Определение "фармацевтически приемлемый", используемое в настоящем патенте, например, в отношении солей и компонентов состава, например носителей, включает "ветеринарно приемлемый" и,таким образом, независимо включает применение у людей и животных. Фармацевтически приемлемые соли и общие способы их получения известны в данной области техники. См., например, П. Шталь с соавторами (P. Stahl, et al.), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (VCHA/Wiley-VCH, 2002); С.М. Бердж с соавторами (S.M. Berge, et al.), "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977. Примеры солей включают,но не ограничены, солями, полученными в результате стандартных реакций с органическими и неорганическими кислотами, такими как серная, хлороводородная, фосфорная, уксусная, янтарная, лимонная,молочная, малеиновая, фумаровая, холевая, памовая, муциновая, глутаминовая, камфорная, глутаровая,гликолиевая, фталевая, винная, муравьиная, лауриновая, стеариновая, салициловая, метансульфокислота,бензолсульфокислота, сорбиновая, пикриновая, бензойная, циннамовая кислота и т.д. Термин "носитель" используют в настоящем патенте для описания любого ингредиента, отличного от активных компонентов состава. Выбор носителя в значительной степени зависит от факторов, таких как конкретный способ введения, влияние растворителя на растворимость, стабильность и природа дозированной формы. Введение спинеторама или его соли можно проводить системно любым подходящим способом. Примеры подходящих способов включают пероральное, местное (трансдермальное) и парентеральное введение. Выбор способа зависит от особенностей животного-хозяина и природы заражения эктопаразитами. Введение приводит к системному распределению в организме животного-хозяина. Системная эффективность (за счет всасывания паразитами с кровью или применения системного репеллента или действия in vivo) обеспечивают различные способы воздействия по сравнению с применяемыми местно эктопаразитицидами, где способом воздействия является контакт с паразитом на поверхности кожи. Преимущества системного лечения и уничтожения паразитов по сравнению с местным лечением, например нетрансдермальным местным лечением, включают а) пониженное воздействие на человека, проводящего лечение, детей и объектов окружающей среды животного (например, напольного покрытия, ковров, ме-2 019278 бели); b) отсутствие беспокойства, касающегося потери воздействия на животное в воде (озерах, потоках,в ванной и т.д.) или потери в результате трения; с) отсутствие волнения, касающегося УФ-облучения и разложения под его действием; d) отсутствие проблем окисления маслами на коже и т.д.; е) уверенность в том, что введена полная доза (по сравнению с местным, нетрансдермальным применением, когда часть дозы может разбрызгаться, смазаться и/или остаться в дозаторе непосредственно после обработки). Спинеторам и его соли могут входить в состав фармацевтических композиций для системного введения. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения известны в данной области техники. См., например, Remington: The Science and practice of pharmacy (под редакцией А. Дженнаро с соавторами (A. Gennaro, et al.), 19th ed., Mack Publishing Co., 1995). Спинеторам или его соли могут присутствовать в составах в количестве от 1 до 90%, в частности от 5 до 60% массы состава. Термин "фармацевтический состав в виде одной дозы" означает, что одна доза состава эффективно контролирует заражения эктопаразитами в течение длительного времени. Термин "длительное время" включает период, составляющий по меньшей мере 7 дней, предпочтительно период, составляющий по меньшей мере две недели, более предпочтительно по меньшей мере 30 дней. Термин "состав в виде нескольких доз" означает состав, приспособленный для введения требуемого общего количества спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли в раздельных, индивидуальных дозах, как правило, вводимых в течение короткого периода времени, например одного или двух дней. Введение в виде нескольких доз отличается от введения в виде одной дозы тем, что при равенстве или значительной эквивалентности терапевтических преимуществ, введение общей дозы проводят более чем за одно дозирование в течение короткого периода времени. Например, общая требуемая доза может быть введена при помощи нескольких доз путем введения двух, трех или четырех различных, как правило, равных доз, составляющих требуемую дозу, в течение одного или двух дней. В качестве альтернативы введение в виде нескольких доз может быть проведено путем однократного введения общей требуемой дозы, которая затем высвобождается с течением времени. Указанный вариант введения в виде нескольких доз может проходить за счет конкретных частей общей дозы, высвобождаемых в организме в течение времени, в зависимости от кинетики (например, каждые 2, 3, 4 или более часов) или в зависимости от расположения в желудочно-кишечном тракте (например, 50% в желудке, затем 50% в тонком кишечнике). Пероральное введение можно осуществить с помощью капсулы, болюса, таблетки, порошков, пастил, жевательных пластинок, мульти- и наночастиц, гелей, твердого раствора, пленок, спреев или жидких составов. Жидкие формы включают суспензии, растворы, сиропы, лекарственные формы для перорального введения животному (drench) и эликсиры. Указанные составы можно применять в качестве наполнителей мягких или твердых желатиновых капсул, как правило, они содержат носитель, например воду,этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или более эмульгатор и/или суспендирующий агент. Жидкие составы также можно получать путем растворения твердого вещества, например, из сашетов. Пероральные лекарственные формы для животного (drench),как правило, получают путем растворения или суспендирования активного ингредиента в подходящей среде. Пероральное введение можно проводить путем смешения или помещения в пищу животным. Для достижения системного введения спинеторам или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить в кожу, слизистую оболочку или мембрану слизистой оболочки. Один из указанных способов введения представляет собой трансдермальное введение. Стандартные носители включают спирт,воду, минеральное масло, жидкий вазелин, медицинский вазелин, глицерин, полиэтиленгликоль и пропиленгликоль. В состав можно включать усилители проницаемости - см., например, статью в J. PharmSci, 88 (10), 955-958 под авторством Финнина и Моргана (Finnin and Morgan) (October 1999). Также спинеторам или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить парентерально или путем инъекции непосредственно в кровоток, мышцу или во внутренний орган. Подходящие способы парентерального введения включают внутривенный, внутриартериальный, интраперитонеальный, интратекальный, внутрижелудочковый, интрауретральный, надчревный, внутричерепной, внутримышечный и подкожный. Подходящие устройства для парентерального введения включают игольчатые (включая микроигольчатые) инъекторы, безыгольчатые инъекторы и инфузионные средства. Инъецируемые составы можно получать в виде инъецируемого раствора, который может содержать другие вещества, например, достаточное количество солей или глюкозы, для получения раствора, изотонического с кровью. Приемлемые жидкие носители включают растительные масла, такие как кунжутное масло, глицериды,такие как триацетин, сложные эфиры, такие как бензилбензоат, изопропилмиристат и производные жирных кислот пропиленгликоля, а также органические растворители, такие как пирролидин-2-он и глицеринформаль. Составы получают путем растворения или суспендирования спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли в жидкости. Указанные составы могут быть самоконсервируемыми, самостерилизующимися или могут быть нестерильными составами, к которым возможно добавляют консерванты. Парентеральные составы, как правило, представляют собой водные растворы, которые могут содержать наполнители, такие как соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно с рН от 3 до 9), но в некоторых применениях они могут быть более подходящим способом получены в виде стерильного неводного раствора или порошковой или сухой формы, применяемой вместе с подходящим носителем,например, стерильной апирогенной водой. Получение парентеральных составов в стерильных условиях можно легко проводить, например, при помощи стандартных фармацевтических техник, хорошо известных специалистам в данной области техники. Растворимость спинеторама или его фармацевтически приемлемых солей, применяемых для получения парентеральных растворов, можно увеличить путем применения соответствующих техник получения составов, например, введения улучшающих растворимость агентов. Системную активность спинеторама определяли при помощи биоисследований in vitro и in vivo. Во многих исследованиях в качестве вещества сравнения или стандартно применяемого положительного контроля применяли спиносад, также применяли другие стандарты (фипронил, перметрин, имидаклоприд). Спинетопрам применяли в технически активном виде, а также в составе. Исследование жигалок осенних или комнатных мух (ASF, AhsF). Указанное исследование проводили по существу согласно описанию, данному У.Х. Уайтом, С.М. Бауэром, Кс. Жао и др. (White, W.H.,S.M. Bauer, X. Zhao et al.) в Comparison of in vitro and in vivo ectoparasiticide activity of an experimentalMusca domestica (Diptera: Muscidae) under laboratory conditions, J. Econ. Entomol. 100, 155-163 (2007). Исследуемое вещество помещали в ДМСО в 10 мМ концентрации. Проводили двойные разбавления указанным растворителем для получения 10 исследуемых уровней. Вещества разбавляли бычьей сывороткой (жигалки осенние) или 5% раствором глюкозы (комнатные мухи) для получения требуемых концентраций активного вещества, от 200 до 0,39 мкМ. Примерно 3 мл разбавленного исследуемого вещества помещали в пробирку (n=3 для каждого исследуемого уровня), для поглощения жидкости применяли стоматологический тампон. Один стоматологический тампон помещали на небольшое блюдце в 100 мм чашке Петри. Примерно 10 взрослых мух обоих полов анестезировали при помощи диоксида углерода и помещали в каждую чашку Петри. Чашки инкубировали при 27 С и относительной влажности 50-70%. Мухи отходили от анестезии и принимали пищу из стоматологических тампонов, пропитанных веществом. Через 24 ч подсчитывали количество живых/мертвых мух. Для моделирования зависимости дозасмертность и получения данных относительной силы (LD50) по сравнению с проводимыми параллельно контрольными опытами (только сольвент или перметрин) применяли нелинейную регрессию. В табл. 1,представленной ниже, показаны обобщенные данные исследования in vitro спинеторама (технического) относительно стандартных средств против мух. Таблица 1 По сравнению со спиносадом спинеторам проявляет значительно более высокую инсектицидную активность in vitro против взрослых комнатных мух (является в 5,5 раз более активным). Пероральное введение собакам через рот. Получив представленные выше данные, начинали исследование пероральной эффективности у собак. Исследование проводили для оценки 1) эффективности разовой дозы, составляющей 30 мг/кг, против параллельного экспериментального заражения взрослой кошачьей блохой, Ctenocephalid.es felis; взрослыми американскими собачьими клещами, Dermacentor variabilis; и взрослыми бурыми собачьими клещами, Rhipicephalus sanguineus; 2) концентрации в плазме у собак, которым вводили дозу 30 мг/кг; 3) эффективности разовых доз в 50 или 100 мг/кг против экспериментальных заражений взрослыми бурыми собачьими клещами, R. sanguineus. Шестнадцать собак делили на две группы по восемь собак (4 самца:4 самки) на группу. Одной из групп вводили спинеторам, другой группе лечение не проводили. Каждую собаку помещали в конуру из сетки рабицы с бетонным полом как внутри, так и снаружи. В течение исследования собак кормили сухим кормом для собак за исключением дня получения лечения (день 0), когда они получали влажный консервированный корм. Собаки имели доступ к воде ad libitum. Первой группе в день 0 через рот вводили одну или более желатиновую капсулу, содержащую порошок спинеторама, в количестве, составляющем 30 мг/кг, группе, не получавшей лечение, вводили плацебо. Для оценки эффективности более высоких доз (50 и 100 мг/кг) против R. sanguineus собакам из группы, которой вводили дозу 30 мг/кг, повторно вводили дозы в более высоких концентрациях примерно через 2,5 месяца после введения низкой дозы после сбора данных эффективности против блох. Каждую собаку экспериментально заражали примерно 100 взрослыми блохами и 50 клещами каждого вида в дни 1, 5, 12, 19, 28, 35 и 42, дополнительные заражения блохами проводили в дни 49 и 56. Данные нокдаун-эффекта собирали через 24 ч после введения дозы. Все последующие подсчеты проводили через 48 ч после заражения. В случае более высоких доз собак заражали примерно 50 клещами R.sanguineus за день до повторного введения дозы и через 5 дней после повторного введения дозы, подсчет проводили примерно через 24 ч после последнего введения. Активность нокдаун-эффекта (день 1) определяли при помощи подсчетов через 24 ч после введения дозы. Во всех случаях подсчета оставшихся клещей подсчеты проводили через 48 ч после заражения. Образцы крови брали в дни 14, 21, 28 и 35 для определения концентрации спинеторама в плазме. В табл. 2 представлена терапевтическая и остаточная эффективность против блох (средний геометрический процент снижения количества блох) спинеторама после перорального введения собакам в дозировке, составляющей 30 мг/кг. Таблица 2 нокдаун-эффект определяли через 48 ч после введения дозы; представлены известные данные, параллельные контрольные опыты не проводили; 3 но означает "не определяли". При разовой дозировке, составляющей 30 мг/кг у собак, спинеторам проявлял эквивалентный нокдаун-эффект и повышенную остаточную эффективность при сравнении с известными данными, полученными для спиносада против заражений взрослыми кошачьими блохами. Следует отметить, что остаточный контроль (97%) сохраняется на протяжении 8 недель. Спинеторам не демонстрировал статистически значимую активность против различных видов клещей в исследуемых дозах. В целом, эффективность лечения против различных видов клещей трудно интерпретировать вследствие очень низкого количества паразитов, сохранявшихся на контрольных животных, которых не подвергали лечению. Сравнение введения одной и нескольких доз через рот у собак/Ctenocephalides felis. Другое исследование собак проводили для оценки влияния на заражение блохами 1) перорального введения одной разовой дозы, составляющей 60 мг/кг; 2) перорального введения в несколько доз, составляющих 20 мг/кг, три раза в день каждые 2 ч в течение одного дня; 3) перорального введения нескольких доз, составляющих 20 мг/кг, три раза в день каждые 4 ч в течение одного дня; и 4) концентрации спинеторама в плазме после лечения. Четырем лечебным группам по 8 собак в каждой (4 самца: 4 самки) вводили спинеторам, как указано ниже: лечебная группа 1: 60 мг/кг, одна доза; лечебная группа 2: 60 мг/кг (20 мг/кг каждые 2 ч, три раза); лечебная группа 3: 60 мг/кг (20 мг/кг каждые 4 ч, три раза); лечебная группа 4: 0 мг/кг (негативный контроль). Каждую собаку помещали в конуру из сетки рабицы с бетонным полом как внутри, так и снаружи. В течение периода исследования собак кормили сухим кормом для собак за исключением двух дней перед днем лечения и днем лечения (день 0), когда они получали влажный консервированный корм. Собаки имели доступ к воде ad libitum. Собакам, получавшим лечение, через рот вводили одну или более желатиновую капсулу, содержащую порошок технически активного спинеторама, лечебной группе 4 вводили плацебо. Каждую собаку экспериментально заражали примерно 100 блохами в дни 1, 5, 12, 19, 28, 35, 42, 49 и 56. Данные нокдаунэффекта собирали через 24 ч после введения дозы, остаточную эффективность оценивали через 48 ч после каждого последовательного заражения. Подсчет в день 1 применяли для определения первоначальной/нокдаун эффективности, примерно через 24 ч после введения дозы, составляющей 60 мг/кг, или первой из нескольких доз. Образцы крови собирали для определения концентрации спинеторама в плазме. В табл. 3 представлен средний геометрический процент снижения количества живых взрослых блох по сравнению с контрольной группой, не получавшей лечение. Результаты не показывают значительного различия эффективности между введением одной дозы, составляющей 60 мг/кг, и нескольких доз, составляющих 20 мг/кг. 2 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ борьбы с заражением собак или кошек блохами, включающий системное введение указанной собаке или кошке эффективного количества спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли путем перорального введения и необязательно введение одного или нескольких других терапевтических ингредиентов. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное введение проводят не чаще одного раза в месяц в виде одной или нескольких доз. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная блоха является блохой Ctenocephalides felis. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное эффективное количество составляет от 10 до 60 мг/кг массы тела указанной собаки или кошки. 5. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанное введение проводят не чаще чем один раз в две недели в виде одной или нескольких доз. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанное эффективное количество составляет от 10 до 60 мг/кг массы тела указанной собаки или кошки. 7. Фармацевтический состав для системной борьбы с заражением собак или кошек блохами, содержащий спинеторам или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, в пероральной дозированной форме, с дозировкой спинеторама или его фармацевтически приемлемой соли от 10 до 60 мг на 1 кг массы тела указанной собаки или кошки и необязательно один или несколько других терапевтических ингредиентов. 8. Фармацевтический состав по п.7, отличающийся тем, что указанный спинеторам или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в указанном составе в количестве от 5 до 60% массы состава. 9. Фармацевтический состав по п.7, отличающийся тем, что указанный состав представляет собой таблетку или капсулу. 10. Фармацевтический состав по п.7, который вводят не чаще одного раза в две недели в виде одной или нескольких доз. 11. Фармацевтический состав по п.10, который вводят не чаще одного раза в месяц. 12. Состав по п.7, который представляет собой состав в виде одной или нескольких доз. 13. Фармацевтический состав по п.9 в виде жевательной лекарственной формы.