Состав для полоскания рта, включающий цетилпиридинийхлорид и амфотерное поверхностно-активное вещество

1 Настоящее изобретение относится к составу для полоскания рта, включающему цетилпиридинийхлорид (ЦПХ) и амфотерное поверхностно-активное вещество. Применение катионных антибактериальных препаратов типа ЦПХ в гигиенических составах для полости рта широко рекламируется как средство снижения численности бактерий,образующих зубной налет и поэтому может быть полезно для профилактики и/или лечения запаха изо рта, периодонтита, зубного налета,зубного камня и/или кариеса. К недостаткам известных составов для полоскания рта, включающих ЦПХ, можно отнести их пониженную активность вследствие пассивации ЦПХ, вызываемой наличием в указанных составах каких-либо анионных составляющих. Хотя ранее было предложено использовать совместно с катионными антибактериальными препаратами неионные поверхностно-активные вещества, однако, к настоящему времени обнаружено, что многие из указанных поверхностноактивных веществ снижают активность средств для полоскания рта, включающих ЦПХ. Неожиданно было обнаружено, что определенные поверхностно-активные вещества из группы амфотерных амидобетаинов более совместимы с ЦПХ, чем неионные поверхностноактивные вещества, такие как сложные полиэтоксилированные эфиры сорбита, поликонденсаты этиленоксида (полоксамеры) и полиэтоксилированные гидрированные касторовые масла. Согласно настоящему изобретению предлагается состав для полоскания рта, включающий бактериостатически эффективное количество ЦПХ, приемлемый для полости рта носитель или эксципиент, и амидобетаин формулыR1 и R2 - независимо друг от друга алкилы,содержащие от 1 до 4 атомов углерода, предпочтительно метил; а - целое число от 1 до 4, предпочтительно 3;b - целое число от 1 до 4, предпочтительно 1. В качестве амидобетаина могут быть использованы кокоамидоэтилбетаин, кокоамидопропилбетаин или лаурамидобетаин или их смеси. Предпочтительно использовать в качестве амидобетаина кокоамидопропилбетаин, наиболее совместимый с ЦПХ в составах для полоскания рта. Допустимое содержание ЦПХ в составе для полоскания рта составляет от 0,005 до 10%,предпочтительно от 0,01 до 5%, более предпочтительно от 0,02 до 2,5% по массе. 2 Допустимо совместное присутствие с бетаином другого поверхностно-активного вещества, представленного неионным, другим амфотерным или катионогенным поверхностноактивным веществом или их смесями. В качестве неионного поверхностноактивного вещества могут быть использованы,например, полиэтоксилированные сложные эфиры сорбита, такие как PEG(40) диизостеарат сорбитана, и продукты, продаваемые фирмой ICI под торговой маркой Твин; продукты поликонденции этиленоксида и пропиленоксида (полоксамеры), такие как продукты,продаваемые фирмой BASF-Wyandotte под торговой маркой "Pluronic"; продукты конденсации пропиленгликоля; полиэтоксилированное гидрированное касторовое масло, такое как кремофоры; и сложные эфиры сорбитана и жирных кислот. В качестве альтернативного амфотерного поверхностно-активного вещества могут быть использованы, например, линейные производные имидазолина, такие как продукт, продаваемый фирмой Miranol под торговой маркойMiranol C2M, и линейные алкилбетаины, такие как продукт, продаваемый фирмой Albright+Wilson под торговой маркой "EmpigenBB", а также их смеси. В качестве катионогенных поверхностноактивных веществ могут быть использованы соль этил-N-кокоил-L-аргината D,L-2-пирролидон-5-карбоновой кислоты, продаваемая фирмой Ajinomoto Co. Inc. под торговой маркой САЕ, и кокамидопропил-РG-димонийхлоридфосфат и лаурамидпропил-PG-димонийхлоридфосфат, продаваемые фирмой Mona Corporation под торговыми марками Monaquat PTC иMonaquat PTL соответственно. От 50 до 100% поверхностно-активного вещества может быть представлено амидобетаином. Предпочтительно, чтобы от 65 до 90% поверхностно-активного вещества было представлено амидобетаином. Более предпочтительно, чтобы амидобетаин был единственным поверхностно-активным веществом. Допустимое общее содержание поверхностно-активного вещества в составе для полоскания рта составляет от 0,01 до 20%, предпочтительно от 0,05 до 10%, более предпочтительно от 0,1 до 5 мас.%. Состав для полоскания рта может иметь водную основу, включающую воду или смеси воды с этанолом и возможно другую жидкость,такую как глицерин или пропиленгликоль. Состав для полоскания рта может быть приготовлен в форме готовой к употреблению; в виде концентрированного раствора, который потребитель может разбавить непосредственно перед употреблением; или же в твердом виде, в форме таблеток или подушечек, которые потребитель 3 может растворить непосредственно перед употреблением. Подушечки и таблетки могут быть приготовлены таким образом, чтобы при растворении давать негазированный раствор, или же за счет добавления подходящей газирующей смеси, например карбоната/бикарбоната натрия и лимонной кислоты, при их растворении образуется шипучая жидкость для полоскания рта. Состав может содержать подходящие добавки, такие как увлажнители, загустители, отдушки, подсластители, красители и консерванты из тех, которые обычно используются в гигиенических составах для полости рта в соответствующих целях и совместимы с ЦПХ и указанными выше поверхностно-активными веществами. В качестве загустителей, например неионных загустителей, могут быть использованы такие как, например, простые эфиры (C1-6)алкилцеллюлозы, например метилцеллюлозы; простые эфиры гидрокси(С 1-6)алкилцеллюлозы,например гидроксиэтилцеллюлозы и гидроксиметилцеллюлозы; простые эфиры (С 1-6)алкилцеллюлозы, модифицированные (С 2-6)алкиленоксидами, например гидроксипропилметилцеллюлозы; и их смеси. Также могут быть использованы другие загустители, такие как натуральные и синтетические смолы и смолоподобные вещества, такие как Irish Moss (ирландский мох), смола трагакант, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы,поливинилпирролидон,крахмал и загущающие кремнеземы. Допустимое содержание загустителя составляет от 0,01 до 30%, предпочтительное от 0,1 до 15%, более предпочтительное от 1 до 5% от массы состава. В составах согласно настоящему изобретению возможно использование таких увлажнителей, как, например, глицерин, сорбит, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, или их смесей с содержанием увлажнителя от 5 до 70%,предпочтительно от 5 до 30%, более предпочтительно от 10 до 30% от массы состава. Составы согласно настоящему изобретению могут также включать средства против кариеса, например, источники фторид-ионов, такие как фториды щелочных металлов или аминов, например фторид натрия, фторид олова (II). В качестве других источников фторид-ионов могут быть использованы монофторфосфаты щелочных металлов, например монофторфосфат натрия, возможно, в сочетании с реагентами типа глицерофосфата кальция, который, как известно, повышает активность монофторфосфатов (GB 1384375, Beecham Group). Допустимое содержание фторид-ионов в составе составляет от 50 до 2500 млн. ч. (ррт), предпочтительное от 100 до 1500 млн. ч., наиболее предпочтительное от 100 до 250 млн. ч. Составы согласно настоящему изобретению могут также включать другие активные реагенты, обычно используемые в составах для 4 гигиены полости рта, например, альтернативные реагенты против зубного налета, такие как хлоргексидин или триклозан, в дополнение к ЦПХ; реагенты против зубного камня, такие как тетра- или дипирофосфаты щелочных металлов или их смеси, триполифосфаты щелочных металлов или дифосфонат азациклогептана; или обезболивающие реагенты, такие как ацетат стронция, хлорид стронция или соли калия, такие как нитрат калия, хлорид калия или лимоннокислый калий. Подобные реагенты могут входить в состав в концентрациях, обеспечивающих необходимый терапевтический эффект и совместимых с ЦПХ. Составы для полоскания рта согласно настоящему изобретению должны иметь рН, приемлемый для полости рта, обычно в интервале от 4 до 10, например от 5,5 до 8. Составы для полоскания рта согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены путем смешения исходных составляющих,взятых в необходимом соотношении в любом удобном порядке с последующим доведением рН состава до желаемого значения, если это потребуется. Настоящее изобретение предусматривает также способ борьбы сбактериями в полости рта и профилактику или лечение запаха изо рта,периодонтита, зубного налета, зубного камня и/или кариеса путем применения состава согласно настоящему изобретению в полости рта. Сущность изобретения поясняется следующими примерами. Пример 1. Использование неионного поверхностно-активного вещества. Средство для полоскания рта следующего состава: Кремофор RH60 ЦПХ Отдушка Этанол Кремофор RH60 - полиэтоксилированное гидрированное касторовое масло, содержащее в среднем 60 этоксизвеньев в полиэтоксилированной цепи. Пример 2. Использование неионного поверхностно-активного вещества. Средство для полоскания рта следующего состава: Кремофор RH60 ЦПХ Отдушка Этанол Пример 3. Использование кокоамидопропилбетаина. Средство для полоскания рта следующего состава: Кокоамидопропилбетаин ЦПХ Отдушка Этанол Пример 4. Использование кокоамидопропилбетаина. Средство для полоскания рта следующего состава: Кокоамидопропилбетаин ЦПХ Отдушка Этанол Пример 5. Использование кокоамидопропилбетаина. Средство для полоскания рта следующего состава: Кокоамидопропилбетаин ЦПХ Отдушка Этанол Пример 6. Использование кокоамидопропилбетаина и неионного поверхностноактивного вещества. Средство для полоскания рта следующего состава: Кокоамидопропилбетаин Кремофор RH60 ЦПХ Отдушка Этанол Пример 7. Использование кокоамидопропилбетаина. Средство для полоскания рта следующего состава: Кокоамидопропилбетаин ЦПХ Отдушка Этанол Пример 8. Лабораторные исследования на зубной эмали и дисках из гидроапатита. Диски из гидроапатита или бычью зубную эмаль с известной площадью поверхности готовили, помещая 7,62 см (3 дюйма) хлопковой нити на поверхность диска или в пустой корневой канал зуба. При использовании дисков из гидроапатита нить приклеивали к диску при помощи лака для ногтей. При использовании бычьей зубной эмали на открытую поверхность зубного дентина наносили тонкую пленку поливинилсилоксана низкой плотности (например,Репросила), что обеспечивало фиксацию нити и изолировало открытую поверхность дентина,препятствуя проникновению к ней ЦПХ. Затем зубы или диски из гидроапатита помещали в стерильные бюксы (по одному в каждый бюкс) и вводили в каждый бюкс из пипетки по 5 мл отфильтрованной смешанной человеческой слюны. После этого зубы выдерживали при постоянной температуре 37 С в течение ночи. На следующий день каждый зуб в отдельности ополаскивали деионизированной водой (25 мл) в течение 15 с. Затем следовала обработка в течение одной минуты составом для полоскания рта, содержащим ЦПХ, или простым раствором ЦПХ (10 мл). После этого зуб трижды ополаскивали деионизированной водой (25 мл), удаляли пленку Репросила и хлопковую нить и погружали зуб на 3 мин в 5 мл смеси, содержавшей 50% ацетонитрила, 30% тетрагидрофурана,19,9% деионизированной воды и 0,1% пентансульфоновой кислоты, для извлечения ЦПХ,связавшегося с зубом/диском. В полученном растворе определяли содержание ЦПХ на соответствующем жидкостном хромотографе высокого разрешения. Таким образом определяли показатели связывания. Показатели удержания определяли путем аналогичной процедуры, отличавшейся тем, что перед погружением в смесь ацетонитрила, тетрагидрофурана и пентансульфоновой кислоты зуб помещали в 5 мл отфильтрованной смешанной человеческой слюны на 2 ч при 37 С, после чего процедуру продолжали,как и при определении показателей связывания. При исследовании связывания с дисками из гидроапатита ЦПХ из составов для полоска 7 ния рта в сравнении с простыми растворами было обнаружено, что в составе для полоскания рта связывание ЦПХ снижается примерно на 66%: Состав для полоскания рта по примеру 1: 1,68 мкг/см 2 ЦПХ связалось с диском простой 0,05% раствор ЦПХ в воде: 5,36 мкг/см 2 ЦПХ связалось с диском (n=5). Это означает, что компоненты состава для полоскания рта снижают связывание ЦПХ. Для того чтобы установить, какой из компонентов наиболее отрицательно влияет на связывания ЦПХ, мы испытали состав для полоскания рта по примеру 1, исключая из него по одному из компонентов. Состав для полоскания рта по примеру 1: 1,62 мкг/см 2 ЦПХ связалось с диском Состав для полоскания рта по примеру 1 без Кремофора RH60 (солюбилизатор) 2,611 мкг/см 2 ЦПХ связалось с диском (n=5). Также для того чтобы установить, какой из компонентов отрицательно влияет на связывание ЦПХ, мы изучили простые 0,05% растворы ЦПХ, содержавшие только по одному из компонентов: простой 0,05% раствор ЦПХ в воде 5,52 мкг/см 2 ЦПХ связалось с диском простой 0,05% раствор ЦПХ + Кремофор(n=5). Таким образом, было обнаружено, что наибольшее влияние на снижение связывания ЦПХ оказывает солюбилизатор КремофорRH60. С точки зрения связывания/удержания ЦПХ на бычьей зубной эмали были исследованы различные солюбилизаторы. При различных содержаниях в составе для полоскания рта по примеру 1 были исследованы такие солюбилизаторы, как Твин 80, Твин 20, Плюроник F127,Плюроник F108, Кремофор RH40 и КремофорRH60, но ни один из них не проявил себя лучше,чем Кремофор RH60 при содержании 0,2%(п=10). Исходя из этого мы исследовали другой солюбилизатор Тегобетаин (кокоамидопропилбетаин) при различных его содержаниях (0,2, 0,4 и 1%) в сравнении с Кремофором RH60 в составах для полоскания рта по примеру 1: Состав для полоскания рта по примеру 3: 1,44 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Состав для полоскания рта по примеру 1: 0,60 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Этот обнадеживающий результат, полученный при содержании кокоамидопропилбетаина 0,2%, убедительно подтвердил, что это поверхностно-активное вещество повышает удержание ЦПХ на бычьей зубной эмали. Дальнейшее исследование измененных составов дало следующие результаты: 8 Состав для полоскания рта по примеру 2: 0,58 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Состав для полоскания рта по примеру 4: 0,93 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Состав для полоскания рта по примеру 2: 1,23 мкг/см 2 ЦПХ связалось с бычьей зубной эмалью. Состав для полоскания рта по примеру 4: 2,54 мкг/см 2 ЦПХ связалось с бычьей зубной эмалью. Эти результаты показывают, что кокоамидопропилбетаин значительно лучше совместим с ЦПХ, чем неионные поверхностно-активные вещества и обычно повышает связывание и удержание ЦПХ на бычьей зубной эмали. Другое исследование показало, что более высокое содержание кокоамидопропилбетаина также предпочтительно: Состав для полоскания рта по примеру 5: 0,95 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Состав для полоскания рта по примеру 1: 0,68 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Два дополнительно проведенных исследования с использованием смесей солюбилизаторов дали следующие результаты: Состав для полоскания рта по примеру 6: 2,56 мкг/см 2 ЦПХ связалось с бычьей зубной эмалью. Состав для полоскания рта по примеру 1: 1,62 мкг/см 2 ЦПХ связалось с бычьей зубной эмалью. Состав для полоскания рта по примеру 6: 1,15 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Состав для полоскания рта по примеру 1: 0,68 мкг/см 2 ЦПХ удержалось на бычьей зубной эмали. Полученные результаты указывают на то,что поверхностно-активные вещества из группы амфотерных амидобетаинов как сами по себе,так и в смеси с другими поверхностноактивными веществами повышают связывание и удержание ЦПХ на бычьей зубной эмали по сравнению с составами для полоскания рта, содержащими только неионное поверхностноактивное вещество, такое как Кремофор RH60. Пример 9. Лабораторные исследования на клетках слизистой оболочки. Клетки слизистой оболочки щеки человека собрали полипропиленовым шпателем и перенесли в 20 мл промежуточного слюнного солевого (RSS) буферного раствора (50 мМ хлорида натрия, 1,1 мМ хлорида кальция, 0,6 мМ дигидроортофосфата калия), хранящегося во льду. Затем клетки трижды промыли центрифугированием в 20 мл RSS-буфера и вновь суспендировали в RSS-буфере с окончательной концентрацией 1 мл в пробе. Все оставшиеся клеточ 9 ные конгломераты разрушили наложением ультразвука. Количество клеток затем определили с помощью гемоцитометра. Составы для полоскания рта по примерам 1 и 6 и клеточную суспензию нагрели до 37 С в термостате. Затем клеточную суспензию поместили в стеклянные пробирки (аликвоты по 0,5 мл), подвергли центрифугированию и слили супернатант. К клеткам, оставшимся в осадке после центрифугирования, добавили по 0,5 мл составов для полоскания рта и быстро перемешали с вращением для того, чтобы суспендировать клетки в составах для полоскания рта. Полученные суспензии термостатировали при 37 С, осторожно встряхивая. Через пять минут клетки отделяли центрифугированием и трижды промывали в 2 мл RSSбуфера. Затем к каждому осадку после центрифугирования добавляли по 1,5 мл смеси для извлечения ЦПХ (50% ацетонитрила, 30% тетрагидрофурана, 20% воды с 0,1% пентансульфоновой кислоты), интенсивно перемешивали с вращением и оставляли на пять минут. После этого образцы центрифугировали и супернатант анализировали на содержание ЦПХ на жидкостном хроматографе высокого разрешения. Получили следующие результаты: Состав для полоскания рта по примеру 1: 6,07 мкг связанного ЦПХ/100000 клеток. Состав для полоскания рта по примеру 6: 9,57 мкг связанного ЦПХ/100000 клеток. Эти результаты показали, что поверхностно-активный амидобетаин в сочетании с другим поверхностно-активным веществом значительно повышает связывание ЦПХ с клетками слизистой оболочки в сравнении с подобный продуктом, не содержащим амидобетаина. Пример 10. Показатели микробиологической устойчивости. Диски из гидроапатита покрывали пленкой, погружая в слюну. Затем диски погружали в исследуемые растворы на две минуты и дваждыополаскивали деионизированной водой. Исследуемые растворы испытывали без разбавления и при разбавлении 1 к 5. Затем диски помещали на поверхность чашек с агар-агаром, зараженным Propionobacter acnes. Использовали агар-агар марки Brain Heart Infusion, а чашки термостатировали при 37 С в течение двух суток без доступа воздуха. Для определения микробиологической активности оставшегося на дисках ЦПХ измеряли зоны ингибирования. Состав для полоскания рта по примеру 1 обеспечил зоны ингибирования 18,65 при разбавлении 1 к 5 и 21,08 без разбавления. Состав для полоскания рта по примеру 6 обеспечил зоны ингибирования 20,11 при разбавлении 1 к 5 и 23,58 без разбавления. Нейтральный состав для полоскания рта,не содержавший ЦПХ, но содержавший кокоамидопропилбетаин, не проявил никакой актив 001234 10 ности как без разбавления, так и при разбавлении 1 к 5, а 0,05% раствор ЦПХ обеспечил зоны ингибирования 20,98 при разбавлении 1 к 5 и 24,83 без разбавления. Полученные результаты показали, что поверхностно-активный амидобетаин в сочетании с другим поверхностно-активным веществом способствует повышенному удержанию ЦПХ на дисках из гидроапатита и обеспечивает микробиологическую активность этого удержанного ЦПХ. Эти результаты дополняют результаты исследования связывания и удержания на зубной эмали и дисках из гидроапатита, полученные в примере 8. Пример 11. Микробиологическая активность. Жизнеспособность клеток позволяют оценивать механизмы, чувствительные к изменению мембранного потенциала. У бактерий клеточные приспособления обмена веществ и энергии расположены на внутренней цитоплазмической мембране. Когда мембрана подвергается физическому или химическому воздействию, ее потенциал уменьшается и следует гибель бактерии. В качестве показателя жизнеспособности бактерий использовали флуоресцентные пробы методом цитометрии в потоке. Для таких исследований наиболее чувствительным и сильным реагентом является триметиноксонол бис-1-3 дибутилбарбитуровой кислоты (DiBAC4(3. Он также приемлем с точки зрения большого расхода при цитометрическом анализе в потоке. Отрицательно заряженный оксоноловый краситель подвергается зависящему от потенциалов распределению между цитоплазмой и внешней клеточной мембраной и проникает в деполяризованные (т.е. мертвые) клетки, где связывается с богатыми липидами составляющими. Его накопление усиливает флуоресценцию. ЦПХ, являясь катионным четвертичным соединением аммония, воздействует на клеточную мембрану, что приводит к ее поражению. Такое поражение, в свою очередь, приводит к повышению поглощения оксонола (DiBAC4(3 и соответствующему усилению флуоресценции,указывающей на гибель клеток. Так как ЦПХ является основным активным реагентом исследуемых составов для полоскания рта, мы решили испытать их сравнительную эффективность против мутантов Стрептококка, используя оксонол (DiBAC4(3 и поточный цитометр BioradBryte. Применяли следующую процедуру: Состав для полоскания рта по примеру 7,состав для полоскания рта по примеру 1 и контрольный раствор ЦПХ+амидобетаин по 100 мкл каждого добавляли к 2 мл PBS, содержавшим примерно 107 мутантов СтрептококкаNCTC 10904 в мл. К каждому из этих трех растворов добавляли по 10 мкл раствора оксонола концентрации 1 мг/мл. Изменение флуоресценции измеряли в течение 20 мин на поточном цитометре Biorad Bryte. Для каждого из трех исследованных растворов строили график зависимости среднего номера флуоресцентного канала (возбуждение 470-495/излучение 520-550 нм) от времени. График, приведенный на фиг. 1,показывает более высокую флуоресценцию мутантов Стрептококка в присутствии состава для полоскания рта по примеру 7 в сравнении с составом для полоскания рта по примеру 1. Это указывает на значительно большее поражение клеток мутантов Стрептококка (при р 0,05) составом, содержащим амидобетаин, по сравнению с составом, не содержащим его. Эти результаты дополнительно подтверждают преимущества использования амидобетаина совместно с ЦПХ. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Состав для полоскания рта, включающий бактериостатически эффективное количество цетилпиридинийхлорида, приемлемый для полости рта носитель или эксципиент и амидобетаин, соответствующий формулеR1 и R2 - независимо друг от друга алкилы,содержащие от 1 до 4 атомов углерода; а - целое число от 1 до 4; иb - целое число от 1 до 4. 2. Состав по п.1, в котором амидобетаин выбирают из кокоамидоэтилбетаина, кокоамидопропилбетаина, лаурамидобетаина или их смесей. 3. Состав по п.2, в котором амидобетаин представляет собой кокоамидопропилбетаин. 4. Состав по любому из пп.1-3, в котором содержание цетилпиридинийхлорида составляет от 0,005 до 10% от массы состава для полоскания рта. 12 5. Состав по любому из пп.1-4, в котором амидобетаин присутствует совместно с другим поверхностно-активным веществом, выбранным из неионного, другого амфотерного, катионогенного поверхностно-активного вещества или их смесей. 6. Состав по п.5, в котором от 50 до 100% поверхностно-активного вещества присутствует в виде амидобетаина. 7. Состав по п.5, в котором от 65 до 90% поверхностно-активного вещества присутствует в виде амидобетаина. 8. Состав по любому из пп.1-4, в котором амидобетаин является единственным поверхностно-активным веществом. 9. Состав по любому из пп.1-8, в котором общее содержание поверхностно-активного вещества составляет от 0,01 до 20% от массы состава для полоскания рта.