Штаммы бактерий и композиции для увеличения целостности эпителия и уменьшения кишечной проницаемости при лечении и/или профилактике кишечных расстройств

ШТАММЫ БАКТЕРИЙ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ ЦЕЛОСТНОСТИ ЭПИТЕЛИЯ И УМЕНЬШЕНИЯ КИШЕЧНОЙ ПРОНИЦАЕМОСТИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКЕ КИШЕЧНЫХ РАССТРОЙСТВ Изобретение относится к штамму молочнокислых бактерий Lactobacillus rhamnosus (DN 116 0044) CNCM I-4316 и штамму бифидобактерий Bifidobacterium bifidum (DN 154 0062) CNCMI-4319, а также к композициям для увеличения целостности эпителия, для уменьшения кишечной проницаемости и для лечения и/или профилактики кишечных расстройств.(71)(73) Заявитель и патентовладелец: КОМПАНИ ЖЕРВЭ ДАНОН (FR) Область техники Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим штаммы молочнокислых бактерий,для применения при повышении трансэпителиального сопротивления. Такие композиции, в частности,подходят для лечения и/или профилактики запора и/или болезни раздраженной кишки. Предпосылки изобретения Синдром раздраженной кишки (IBS), или спастическая толстая кишка, представляет собой функциональное кишечное расстройство, характеризуемое хронической болью в брюшной полости, дискомфортом, метеоризмом и изменением функции опорожнения кишечника в отсутствие какой-либо выявляемой органической причины. Может преобладать диарея или запор или они могут чередоваться (классифицируясь соответственно как IBS-D и IBS-С). IBS может начаться после инфекции (постинфекционный,IBS-PI), вызывающего стресс жизненного события или начала созревания организма без каких-либо других медицинских показателей. При IBS обычные клинические тесты не выявляют отклонений от нормы,хотя кишечник может быть более чувствительным к определенным раздражителям, таким как тестирование с раздуванием баллона.IBS представляет собой очень распространенное состояние, поражающее приблизительно 15% населения в любое время. Этим состоянием страдают примерно вдвое больше женщин, чем мужчин. IBS является источником хронической боли, усталости и других симптомов, и он увеличивает расходы пациента на лечение и связан с периодической потерей трудоспособности. Исследователи сообщили, что высокое распространение IBS в сочетании с увеличением затрат делает заболевание с высокими социальными затратами. Он также рассматривается как хроническое заболевание и может существенно влиять на качество жизни страдающего заболеванием пациента. Хотя в настоящее время нет специфического лечения по поводу IBS, существуют способы лечения,которые направлены на попытки облегчить симптомы, включая подбор рациона питания, медикаментозную терапию и психологические вмешательства. Сообщалось, что пробиотики, в частности штаммы молочнокислых бактерий, благоприятны при лечении и/или профилактике IBS. Примеры таких штаммов раскрыты в WO 2007/036230, WO 03/010297 и WO 2009/080800. Когда происходит нарушение барьера кишечной слизистой оболочки, происходит утечка воды и белка плазмы в просвет кишечника и перемещение кишечных бактерий в системную циркуляцию. Эти факторы обычно способствуют развитию местных воспалительных процессов или даже могут привести к системной септицемии. Известно, что бактериальный липополисахарид (LPS) вызывает повышенную проницаемость слизистой оболочки in vivo. Было обнаружено, что LPS способствует нарушению барьерной функции кишечника посредством окислительного механизма и ведет к увеличению проницаемости,которую можно оценить измерением разности потенциала, наблюдаемой с апикальной и базальной сторон монослоя, называемой трансэпителиальным электрическим сопротивлением (TEER). Все больше данных свидетельствуют о том, что некоторые пробиотические и симбиотические бактерии уменьшают нарушение барьерной функции кишечника (уменьшая проницаемость) in vitro (Resta-Lenert and Barrett,2006; Miyauchi et al., 2008) и in vivo и содействуют облегчению симптомов IBS и IBD. Лактобациллы и бифидобактерии анализировали в отношении этого свойства (посредством оценки TEER). Из этого исследования следует, что увеличение барьерного сопротивления, измеряемого TEER, зависит от штамма. Существует потребность в других штаммах, которые благоприятствуют барьерной целостности и/или уменьшают проницаемость, о чем обычно свидетельствуют оценки TEER. Имеется потребность в штаммах, которые улучшают такие свойства. Краткое изложение сущности изобретения Изобретение направлено по меньшей мере на одну указанную выше потребность обеспечением композиции, содержащей по меньшей мере один штамм бактерий, выбранный из группы, состоящей из лактобацилл и бифидобактерий, для применения при увеличении трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) кишечных эпителиальных клеток, где указанный штамм выбран из группы, состоящей из DN 116 0044 (CNCM (Национальной Коллекции культур микроорганизмов) 1-4316, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.) и DN 154 0062 (CNCM 1-4319, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.). Изобретение также относится к композиции, содержащей по меньшей мере один штамм бактерий,выбранных из группы, состоящей из штаммов DN 116 004 4 (CNCM 1-4316, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.) и DN 154 0062 (CNCM 1-4319, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2 010 г.), для применения при лечении и/или профилактике кишечного расстройства, предпочтительно лечении и/или профилактике расстройства кишечной проницаемости; или лечении и/или профилактике расстройства, выбранного из группы, состоящей из IBS, IBD и кишечной инфекции; или лечении и/или профилактике расстройства, обнаруживаемого у пожилых людей, маленьких детей или людей, страдающих ожирением. Изобретение также относится к композиции, содержащей по меньшей мере один штамм бактерий,выбранный из группы, состоящей из штаммов DN 116 0044 (CNCM 1-4316, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.) и DN 154 0062 (CNCM 1-4319, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.), для применения при введении пациентам, страдающим расстройством, выбранным из группы, состоящей из IBD и IBS. Изобретение также относится к штамму молочнокислых бактерий, выбранному из группы, состоящей из DN 116 0044 (CNCM 1-4316, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.) иDN 154 0062 (CNCM 1-4319, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.). Изобретение также относится к композициям, содержащим такой штамм. В соответствии с одним аспектом изобретение относится к указанной выше композиции для применения при уменьшении кишечной проницаемости. Подробное описание Определения. В настоящем описании применение соединения или композиции предназначено для охвата самого применения, необязательно в связи с изобретением, но также любой информации, связанной с соединением или композицией с коммерческими или юридическими последствиями, например, рекламирование,инструкции или рекомендации на упаковке композиций, инструкции или рекомендации при коммерческой поддержке, такой как информационные листы, брошюры, стенды, документация, поданная в подтверждение нормативных регистрационных свидетельств в отношении безопасности, эффективности или защиты прав потребителя, например, в таких административных инстанциях как EFSA (Европейская Ассоциация по безопасности пищевых продуктов) в Европе. В настоящем описании термин "или" не является исключающим. Штаммы бактерий. Штаммами бактерий по изобретению являются лактобациллы, выбранные из DN 116 0044(CNCM 1-4316, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.) и DN 154 0062(CNCM 1-4319, зарегистрированного и сданного на хранение 19 мая 2010 г.). Все бактериальные штаммы, указанные в настоящем описании, были предварительно депонированы в соответствии с Будапештским договором, в CNCM (Collection Nationale de Cultures deMicroorganismes (Национальной Коллекции культур микроорганизмов), 25 rue du Docteur Roux, Paris) как Международном уполномоченном депозитарии. Настоящее изобретение также включает применение указанных выше штаммов, а также мутантных штаммов или генетически трансформированных штаммов, полученных из любого из материнских штаммов, предпочтительно еще обладающих активностью в отношении TEER. Эти мутантные или генетически трансформированные штаммы могут представлять собой штаммы, в которых один или более эндогенных ген(ов) материнского штамма был(и) мутирован(ы), например, для модификации некоторых из его метаболических свойств (например, способность ферментировать сахара, устойчивость к кислотности, выживание при транспортировке в желудочно-кишечном тракте, пост-окисление или продукция метаболитов). Они могут также представлять собой штаммы, полученные в результате генетической трансформации материнского штамма одним или более представляющим интерес генами, например, для придания указанному штамму дополнительных физиологических признаков, или для обеспечения возможности экспрессировать представляющие терапевтический или вакцинный интерес белки, введение которых желательно посредством указанных штаммов. Композиции. В композициях по изобретению указанные штаммы могут использоваться в форме цельных бактерий, которые могут быть живыми или нет. Альтернативно, они могут использоваться в форме бактериального лизата или в форме бактериальных фракций; бактериальные фракции, подходящие для этого применения, могут быть выбраны, например, тестированием их свойств на TEER. Предпочтительно бактериальные клетки присутствуют в виде живых, жизнеспособных клеток. Композиции по изобретению могут быть представлены в любой форме, подходящей для введения, в частности перорального введения. Это включает, например, твердые формы, полутвердые формы, жидкости и порошки. Как правило, предпочтительны жидкие композиции для более легкого введения, например в виде напитков. Композиция может, например, содержать по меньшей мере 105 КОЕ, предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ на 1 г сухой массы по меньшей мере одного штамма бактерий, предпочтительно штаммов бактерий, как указано выше. Их предпочтительно выбирают из группы, состоящей из лактобацилл и бифидобактерий. Когда бактерии представлены в форме живых бактерий, то композиция может обычно содержать от 105 до 1013 колониеобразующих единиц (КОЕ), предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ, более предпочтительно по меньшей мере 107 КОЕ, еще более предпочтительно по меньшей мере 108 КОЕ и наиболее предпочтительно по меньшей мере 109 КОЕ на 1 г сухой массы композиции. В случае жидкой композиции это соответствует обычно 104-1012 КОЕ, предпочтительно по меньшей мере 105 КОЕ, более предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ, еще более предпочтительно по меньшей мере 107 КОЕ и наибо-2 024443 лее предпочтительно по меньшей мере 109 КОЕ/мл. Примерами композиций по изобретению являются питательные композиции, включая пищевые продукты, в частности молочные продукты. Композиция может, например, представлять собой молочный продукт, предпочтительно ферментированный молочный продукт. Введение в форме ферментированного молочного продукта имеет дополнительное преимущество низких уровней лактозы, что дополнительно благоприятно при IBS. Необязательно могут присутствовать другие штаммы молочнокислых бактерий. Ферментированный продукт может присутствовать в форме жидкости или присутствовать в форме сухого порошка, полученного сушкой ферментированной жидкости. Предпочтительно ферментированный продукт представляет собой свежий продукт. Свежий продукт, который не подвергался стадиям интенсивной термической обработки,имеет преимущество, заключающееся в том, что присутствующие бактериальные штаммы представлены в живой форме. Предпочтительно ферментированный продукт представляет собой молочный продукт,более предпочтительно, ферментированное молоко и/или ферментированную сыворотку. Предпочтительно питательная композиция представляет собой йогурт или ферментированное молоко в застывшей,перемешанной или питьевой форме. Предпочтительно ферментированный продукт представляет собой сыр. Предпочтительно ферментированный продукт представляет собой ферментированный овощ, такой как ферментированная соя, злаки и/или фрукты в застывшей, перемешанной или питьевой формах. Предпочтительно настоящая питательная композиция представляет собой питательную смесь для грудных детей, молочную смесь для вскармливания маленьких детей или питательную смесь для перехода от грудного на искусственное вскармливание или для прикорма. Предпочтительно настоящая композиция представляет собой нутрицевтический или фармацевтический продукт, питательную добавку или лечебный пищевой продукт. Питательные композиции по изобретению также включают пищевые добавки и спортивное питание. "Пищевая добавка" означает продукт, полученный из соединений, обычно используемых в продуктах питания, но который представлен в форме таблеток, порошка, капсул, порции или любой другой формы, обычно не связанной с продуктами питания, и которая оказывает благоприятное воздействие на здоровье пациента. "Спортивное питание" представляет собой продукт питания, который также оказывает благоприятное воздействие на здоровье пациента. В частности, пищевые добавки и спортивное питание оказывают физиологический эффект - защитный или лечебный - против заболевания, например против хронического заболевания. Пример. Оценки некоторых штаммов бактерий с использованием TEER. Суспензии культур промывали PBS (забуференным фосфатом солевым раствором). В последующем, к апикальной стороне монослоев клеток Т 84 добавляли бактерии (100 КОЕ/лунка). В анализе тестировали 96 штаммов, включая 64 бифидобактерии и 32 лактобациллы. После 2-часовой инкубации добавляли или не добавляли LPS (L4516, - ЕРЕС - 0127: В 8) с апикальной стороны в концентрации 40 нг/мл. Затем после инкубации в течение 2 и 4 ч измеряли величину TEER для оценки эпителиальной барьерной функции. Все эксперименты выполняли независимо три раза и в трех повторах в присутствии и в отсутствие LPS. Величину Т 84 в t=0 устанавливали на 100%. В отсутствие LPS TEER в Т 4 составило 98,7% и в Т 6 100,2%. В присутствии LPS контрольный Т 84 в Т 4 составил 56,2%, по сравнению с t=0; в Т 6 контрольный Т 84 составил 46,7%. Результаты показали, что штаммы, значительно увеличивающие целостность эпителия, по данным измерения TEER, как в присутствии, так и в отсутствие повреждающего LPS встречались очень редко. Были идентифицированы: один штамм L.rhamnosus, DN 116 0044 (CNCM 1-4316, зарегистрированный и сданный на хранение 19 мая 2010 г.), а также один штамм В.bifidum, DN 154 0062 (CNCM 1-4319, зарегистрированный и сданный на хранение 19 мая 2 010 г.), проявляющие улучшенные свойства TEER. Такие контрольные штаммы, как NCC2705 и ВВ 536, по существу, не проявили каких-либо улучшений. Таблица 1 Результаты определения TEER выбранных бактерий, проявляющих наилучшие результаты (в условиях повреждения) Таблица 2 Результаты определения TEER выбранных бактерий, проявляющих наилучшие результаты (в условиях отсутствия повреждения) ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Штамм молочнокислых бактерий Lactobacillus rhamnosus (DN 116 0044) CNCM 1-4316, подходящий для применения в молочном продукте. 2. Штамм бифидобактерий Bifidobacterium bifidum (DN 154 0062) CNCM 1-4319, подходящий для применения в молочном продукте. 3. Композиция для увеличения целостности эпителия и уменьшения кишечной проницаемости по данным измерения трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) кишечных эпителиальных клеток, содержащая штамм по п.1 и/или штамм по п.2 и подходящий носитель. 4. Композиция для уменьшения кишечной проницаемости при лечении и/или профилактике кишечного расстройства, или расстройства, выбранного из синдрома раздраженной кишки (IBS), болезни раздраженной кишки (IBD) и кишечной инфекции, или расстройства, обнаруживаемого у пожилых людей или маленьких детей, содержащая штамм по п.1 и/или штамм по п.2 и подходящий носитель. 5. Композиция по п.4, где кишечное расстройство вызвано повышенной кишечной проницаемостью. 6. Композиция по любому из пп.3-5 для введения пациентам, страдающим расстройством, выбранным из IBD и IBS. 7. Композиция по любому из пп.3-6, выполненная в форме для перорального введения. 8. Композиция по любому из пп.3-7, где композиция представляет собой молочный продукт, предпочтительно ферментированный молочный продукт. 9. Композиция по любому из пп.3-8, содержащая на 1 г сухой массы по меньшей мере 105 КОЕ,предпочтительно по меньшей мере 106 КОЕ штамма по п.1 и/или штамма по п.2.