Антагонисты в1 рецептора брадикинина (варианты), фармацевтическая композиция, лекарственное средство, способ лечения заболеваний (варианты)

009294 Область техники, к которой относится изобретение Изобретение относится к области химии природных соединений, биохимии, медицине и фармакологии, конкретно к новым биологически активным пептидам и конъюгированым пептидам, являющимся антагонистами В 1 рецептора брадикинина. Данный класс пептидов неожиданным образом оказался толерантным к замещению аминокислотами на N-конце и/или конъюгированию с различными носителями на N-конце в отношении сохранения биологической активности, что привело к образованию терапевтически эффективных пептидов и/или конъюгатов пептидов с резко замедленными профилями эффективности по сравнению с известными пептидами того же класса, что дает возможность их использования в качестве перспективных терапевтических или профилактических агентов, например, при лечении или снятии симптомов воспаления или боли. Сведения о предшествующем уровне техники Больше чем два миллиона человек только в Соединенных Штатах Америки становятся нетрудоспособными из-за хронической боли в любой произвольно взятый день (см. Т. М. JessellD. D. Kelly, Painand Analgesia (Боль и обезболивание) в монографии Principles Of Neural Science (Принципы неврологии),третье изд. (под ред. Е. R. Kandel, J. H. Schwartz, Т. М. Jessell, (1991. К сожалению, современные препараты для лечения боли только частично эффективны и многие также являются причиной изменения образа жизни, слабости и/или опасных побочных эффектов. Например, нестероидные противовоспалительные лекарственные препараты ("NSAIDs"), такие как аспирин, ибупрофен и индометацин, умеренно эффективны против воспалительной боли, но они являются также токсичными для почек, и высокие дозы имеюттенденцию вызывать желудочно-кишечное раздражение, изъязвление, кровотечение, повышенный риск сердечно-сосудистых событий и спутанность сознания. У пациентов, которых лечат опиоидами,часто бывает спутанность сознания и запор, и длительное применение опиоидов связано с толерантностью и зависимостью. Местные анестезирующие препараты, такие как лидокаин и микселитин, одновременно подавляют боль и вызывают потерю нормального восприятия. Кроме того, при систематическом применении местные анестезирующие препараты связаны с вредными сердечно-сосудистыми эффектами. Таким образом, в настоящее время имеется неудовлетворенная потребность в лечении хронической боли. Боль представляет собой ощущение, основанное на сигналах, получаемых от окружающей среды и передаваемых и воспринимаемых нервной системой (в качестве обзора см. Millan M. J., The induction ofpain: an integrative review (Индукция боли, сводный обзор). Prog. Neurobiol., 57: 1-164 (1999. Вредные стимулы, такие как тепло и контакт, приводят к тому, что специализированные сенсорные рецепторы в коже посылают сигналы в центральную нервную систему ("ЦНС"). Данный процесс называется ноцицепция, и периферические сенсорные нейроны, которые опосредуют его, являются ноцицепторами. В зависимости отсилы сигнала от ноцицептора(ов), а также извлечения и формирования данного сигнала посредством ЦНС субъект может или не может ощущать вредный стимул как болевой. Когда чье-либо ощущение боли соответствующим образом калибруется относительно интенсивности стимула, боль осуществляет свою защитную функцию. Однако некоторые типы повреждения ткани вызывают феномен, известный как гипералгезия или проноцицепция, при котором относительно безвредные стимулы воспринимаются как интенсивно болевые, поскольку болевые пороги субъекта снижены. Как воспаление, так и повреждение нервов могут вызвать гипералгезию. Так, субъекты, пораженные воспалительными состояниями, такими как солнечные ожоги, остеоартрит, колит, кардит, дерматит, миозит, неврит,воспалительная болезнь кишки, коллагеновые сосудистые заболевания (которые включают ревматоидный артрит и волчанку) и т.п., часто испытывают усиленные ощущения боли. Аналогично травма, хирургическое вмешательство, ампутация, абсцесс, каузалгия, коллагеновые сосудистые заболевания, демиелинизирующие заболевания, тригеминальная невралгия, рак, хронический алкоголизм, инсульт, таламический болевой синдром, диабет, герпетические инфекции, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), токсины и химиотерапия вызывают повреждения нервов, которые приводят в результате к усиленной боли. Поскольку механизмы, посредством которых ноцицепторы преобразуют внешние сигналы при нормальных и гипералгезивных состояниях, становятся более понятными, процессы, участвующие в гипералгезии, могут быть направлены на то, чтобы ингибировать снижение болевого порога и, таким образом, снизить уровень испытываемой боли. Брадикинин (ВК) и родственный пептид каллидин (Lys-BK) (см. табл. 3) опосредуют физиологические воздействия кининов на сердечно-сосудистую и почечную системы. Однако активные пептиды ВК и каллидин быстро разрушаются пептидазами в плазме и других биологических жидкостях и теми, которые высвобождаются из ряда клеток, поэтому полупериод существования ВК, как показано, составляет приблизительно 17 с (1). ВК и каллидин быстро метаболизируются в организме карбоксипептидазой N,которая удаляет карбоксиконцевой остаток аргинина с образованием дез-Arg-BK или дез-Arg-каллидина. Дез-Arg-каллидин находится в группе преобладающих кининов у человека и опосредует патофизиологические эффекты кининов в организме человека. В дополнение к тому, что он представляет собой очень сильный провоспалительный пептид, дез-Arg-BK или дез-Arg-каллидин, как известно, вызывает вазодилатацию, проницаемость сосудов и бронхоконстрикцию (в качестве обзора см. статью Regoli и Barabe,-1 009294Pharmacology of Bradykinin and Related Kinins (Фармакология брадикинина и родственных кининов),Pharmacological Reviews, 32(1): 1-46, (1980. Кроме того, дез-Arg-BK и дез-Arg-каллидин, по-видимому,являются особенно важными медиаторами воспаления и воспалительной боли, а также участвуют в ее поддержании. Имеется также важное доказательство, заключающееся в сверхпродукции дез-Argкаллидина при состояниях, в которых боль представляет собой основную характеристику, таких как септический шок, артрит, стенокардия и мигрень. Мембранные рецепторы, которые опосредуют плейотропное действие кининов, относятся к двум различным классам, названным В 1 и В 2. Оба класса рецепторов были клонированы и секвенированы из множества источников, включая человека (см. статьи Menke et al., Expression cloning of a human b1 bradykinin receptor (Клонирование экспрессии человеческого рецептора брадикинина В 1), J. Biol. Chem.,269:21583-21586 (1994); Hess et al., Cloning and pharmacological characterization of a human bradykinin (BK2) receptor (Клонирование и фармакологическая характеризация человеческого рецептора брадикинина(BK-2, Biochem. Biophys. Res. Commun., 184, 260-268 (1992. Они представляют собой типичные Gбелок-связанные рецепторы, имеющие семь предполагаемых участков перекрывания мембраны. В различных тканях рецепторы ВК связаны с каждым известным вторым переносчиком. Рецепторы В 2, которые имеют повышенную аффинность к ВК, по-видимому, являются наиболее распространенной формой брадикининовых рецепторов. В основном все нормальные физиологические ответы и многие патофизиологические ответы на брадикинин опосредуются рецепторами В 2. С другой стороны, рецепторы В 1 обладают повышенной аффинностью к дез-Arg-BK (см. табл. 3) по сравнению с ВК, тогда как дез-Arg-BK неактивен в отношении рецепторов В 2. Кроме того, рецепторы В 1 в норме не экспрессируются во многих тканях. Индукция их экспрессии происходит при травме или повреждении ткани, а также при определенных типах хронических воспалений или системном инсульте(см. статью Marceau F. et al., Kinin B1 receptors: a review (Рецепторы кинина B1, обзор). Immunpharmacology, 30:1-26, (1995. Более того, у кроликов, крыс и свиней происходит повышенная регуляция ответов,опосредованных рецепторами В 1, от нулевого уровня после введения бактериального липополисахарида(LPS) или воспалительных цитокинов (см. статью Marceau et al., (1998. Свойства кининов вызывать боль, связанные с индуцируемой экспрессией рецепторов В 1, делают рецептор В 1 интересной мишенью при разработке противовоспалительных, антиноцицептивных, антигипералгезических и анальгетических агентов, которые могут быть специфически направлены на травмированные ткани при минимальном воздействии на нормальные ткани. Хотя идентифицирован ряд пептидных антагонистов, направленных на рецептор В 1, их разработке в качестве терапевтических анальгетиков препятствуют малоэффективные полупериоды существования, обусловленные очень быстрым разложением тканевыми и сывороточными пептидазами, и эффективный почечный клиренс. Совсем недавно было показано, что пептидные аналоги, имеющие замены в виде неприродных аминокислот, устойчивы к пептидазам в анализах стабильности in vitro (в качестве обзора см. статьи Regoli et al, Bradykinin receptors and their antagonists (Брадикининовые рецепторы и их антагонисты), European Journal of Pharmacology, 348:1-10 (1998); Stewart J. M. et al, Bradykinin antagonists: present progressDevelopment and Applications (Устойчивые к метаболизму антагонисты брадикинина, создание и применение), Biol. Chem., 382:37-41, (2001. Ковалентное конъюгирование белков с полиэтиленгликолем (ПЭГ) широко признано как подход к существенному увеличению in vivo полупериодов существования терапевтических белков в системе кровообращения. ПЭГилирование достигает данного эффекта в основном путем замедления почечного клиренса, поскольку молекула ПЭГ значительно увеличивает гидродинамический радиус белка (см. статьюZalipsky, S. et al., Use of functionalized poly (ethylene glycol)s for modification of polypeptides (Применение функционализированных полиэтиленгликолей для модификации полипептидов) в сборнике Poly(ethyleneglycol) chemistry: Biotechnical and biomedical applications (Химия полиэтиленгликолей - применение в биотехнологии и биомедицине), под ред. J. M. Harris, (1992), Plenum Press, New York, c. 347-370). Дополнительные преимущества, часто обусловленные ПЭГилированием белков, включают повышенную растворимость, устойчивость к протеолитическому разложению и пониженную иммуногенность терапевтического полипептида. Положительные эффекты ПЭГилирования белков подтверждаются производством ряда ПЭГилированных белков, включая ПЭГ-аденозиндезаминазу (Adagen/Enzon Corp.), ПЭГ-Lаспарагиназу (Oncaspar/Enzon Corp.), ПЭГ-Интерферон -2b(PEG-Intron/Schering/Enzon), ПЭГИнтерферон -2 а (PEGASYSTM/Roche) и PEG-G-CSF (Neulasta/Amgen), а также многие другие, проходящие клинические испытания. С другой стороны, ПЭГилирование маленьких терапевтических пептидов обнаруживает однозначные проблемы и широко не применялось. Одним из самых больших препятствий ПЭГилирования пептидов является то, чтобы в конечном конъюгате сохранялась биологическая активность. Поскольку терапевтические пептиды часто включают минимальную последовательность, необходимую для активности, и вследствие этого очень малы, они относительно интолерантны к заменам. Молекулы ПЭГ непропорционально больше, чем сам пептид и, следовательно, они с большей-2 009294 вероятностью будут стерически нарушать специфические взаимодействия связывания пептида с рецептором, необходимые для проявления активности. Таким образом, способность пептида переносить ПЭГилирование и при этом сохранять достаточную специфическую активность, чтобы быть эффективным терапевтическим агентом, является совершенно непредсказуемой и должна определяться эмпирическим путем (см. статью Morpurogo et al., Selective Alkylation and Acylation of - and -Amino Groups with PEGor Optimized Bioconjugates (Селективное алкилирование и ацилирование - и -аминогрупп с помощью ПЭГ в аналоге соматостатина, специальные химические методы получения оптимизированных биоконъюгатов), Bioconjugate Chem., 13:1238-1243, (2002. Очевидно, что необходимы новые, безопасные и эффективные терапевтические препараты для лечения воспаления и боли. Было бы полезно иметь специфический пептидный антагонист В 1, который способен лучше переносить системное воздействие при лечении за счет увеличения периода существования в кровотоке (замедленного клиренса), растворимости, стабильности и/или снижения иммуногенности молекулы. Увеличенный период существования в кровотоке приводил бы в результате к режиму с менее частым дозированием, и схема менее частого дозирования была бы более удобной как для врачей,так и для пациентов и была бы особенно полезной для тех пациентов, которые сами принимают препарат. Другие преимущества менее частого дозирования могут включать уменьшение количества лекарственного препарата, вводимого пациентам, и повышенный уровень удобства. Сущность изобретения Соответственно, объектом настоящего изобретения является получение новых связывающих агентов рецептора В 1 с очевидно улучшенными фармакокинетическими свойствами in vivo по сравнению с известными пептидными антагонистами В 1, при этом в достаточной мере обладающими активностью антагонистов рецептора В 1, чтобы они были терапевтически эффективными для лечения или предупреждения воспаления, боли и других опосредуемых В 1 состояний, включая, но без ограничения перечисленным, астму и аллергические риниты. Данные агенты представлены в настоящем изобретении в форме новых пептидных антагонистов и конъюгированных пептидных антагонистов рецептора В 1. В одном из вариантов осуществления новые пептидные антагонисты рецептора В 1, соответствующие настоящему изобретению, включают последовательность аминокислот, как показано в любой из SEQ ID NONO: 1554. Согласно некоторым вариантам осуществления данного изобретения, один или более и предпочтительно от одного до девяти остатков аминокислот, независимо выбранных из любых двадцати генетически кодируемых L-аминокислот или стереоизомерных D-аминокислот, будут связаны с одним из или обоими концами пептидных последовательностей, как показано в SEQ ID NONO: 15-54. В другом варианте осуществления настоящее изобретение представляет также конъюгированные пептиды, которые обладают очевидно улучшенными фармакокинетическими свойствами in vivo по сравнению с известными пептидными антагонистами В 1, при этом они в достаточной мере связываются и антагонистически действуют на активность рецептора В 1, чтобы их можно был использовать терапевтически. Один из аспектов изобретения включает конъюгированный пептид формулы I в которойF означает носитель, ковалентно связанный с X1 или Y1 (предпочтительно, когда F представляет собой молекулу ПЭГ или ее производное);X1 и Y1 в каждом случае независимо друг от друга означают пептиды формулы -L1-Р 1 и -L2-P2, соответственно;L1 и L2 в каждом случае независимо друг от друга означают линкеры;n означает от 0 до 3; и Р 1 и Р 2 в каждом случае независимо друг от друга означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1. Предпочтительно, когда Р 1 и Р 2 включают последовательность аминокислот, как показано в любой из SEQ ID NONO: 5-26, 43-60, и ее производные. Другим объектом настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции, содержащей материалы наполнителя-носителя, включающие диспергированный в них конъюгированный пептид, соответствующий изобретению. Другим объектом настоящего изобретения является разработка терапевтических способов лечения,которые заключаются во введении нуждающемуся в этом млекопитающему фармацевтически эффективного количества композиции, включающей наполнители и по меньшей мере один пептид и/или конъюгированный пептид, соответствующий изобретению. Пептиды и/или конъюгированные пептиды, соответствующие изобретению, обладают терапевтической ценностью в плане лечения заболеваний, опосредованных активацией В 1, включая, но без ограничения перечисленным, воспаление и состояния хронической боли воспалительной и невропатической природы, септический шок, артрит, остеоартрит, стенокардию, астму, аллергический ринит и мигрень.-3 009294 Пептиды и/или конъюгированные пептиды, соответствующие изобретению, могут быть использованы с терапевтическими или профилактическими целями путем изготовления их с соответствующими материалами фармацевтического носителя и введения эффективного количества нуждающемуся в этом пациенту, такому как человек (или другое млекопитающее). Дополнительные пептиды и/или конъюгированные пептиды могут быть результатом консервативных модификаций последовательностей аминокислот пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов, описанных в данном контексте. Консервативные модификации будут давать пептиды и/или конъюгированные пептиды, имеющие функциональные, физические и химические характеристики, подобные характеристикам пептидов и/или конъюгированных пептидов, из которых получены данные модификации. Такие консервативно модифицированные формы пептидов и/или конъюгированных пептидов, описанные в данном контексте, также рассматривают как вариант осуществления настоящего изобретения. Другой аспект изобретения относится к способу получения конъюгированного пептида как описано в данном контексте, включающего стадии реакции соединения, имеющего структуруX1 и Y1 в каждом случае независимо друг от друга означают пептиды формулы -L1-Р 1 и -L2-P2, соответственно;L1 и L2 в каждом случае независимо друг от друга означают линкеры;n означает от 0 до 3; и Р 1 и Р 2 в каждом случае независимо друг от друга означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1,с носителем (F), который дает конъюгированный пептид формулы F-[(Х 1)], F-[(Х 1)]-F, F-[(Х 1)-(Y1)n],1F-(Х )-(Y1)n или F-(Х 1)-(Y1)n-F. Предпочтительно, когда F представляет собой молекулу ПЭГ или ее производное. Более предпочтительно, когда Р 1 и Р 2 в каждом случае независимо друг от друга означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1, включающие по меньшей мере одну из пептидных последовательностей, представленных в SEQ ID NONO: 5-60. Даже более предпочтительно, когда X1 означает пептид, как показано в SEQ ID NONO: 27-41. Дополнительные аспекты и преимущества настоящего изобретения будут очевидны при рассмотрении детального описания изобретения, которое следует далее. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Настоящее изобретение основано на неожиданном обнаружении того факта, что класс пептидов,как правило, рассматриваемый как совершенно интолерантный к замещению, в данном случае может быть замещен аминокислотами на N-конце и/или конъюгирован с различными носителями на N-конце с образованием терапевтически эффективных пептидов и/или конъюгатов пептидов с резко замедленными профилями эффективности по сравнению с известными пептидами того же класса, и, следовательно, это дает возможность их применения для лечения воспаления и боли. Таким образом, пептиды и/или конъюгаты пептидов, соответствующие настоящему изобретению, дают огромное терапевтическое преимущество относительно известных пептидных антагонистов В 1. Более подробно, авторы обнаружили, что ранее описанные недостатки известных пептидных антагонистов В 1 в плане их терапевтического применения преодолимы путем замены аминокислот на N-конце и/или конъюгирования пептидных антагонистов с носителями, такими как, но без ограничения перечисленным, молекулы полиэтиленгликоля (ПЭГ), при использовании пептидильных или непептидильных линкеров определенного размера и композиции, которая максимально повышает антагонистическую активность и специфичность при пролонгировании эффективного полупериода существования in vivo. Кроме того (или альтернативно), было обнаружено,что, несмотря на немного пониженную in vitro активность, которую дают антагонисты пептида В 1,конъюгированные с более крупными полимерами ПЭГ, увеличенные полупериоды существования в кровотоке крупных ПЭГ-конъюгатов, обеспечивают существенно более сильное воздействие и пролонгированную эффекгивность in vivo по сравнению с пептидными конъюгатами, конъюгированными с менее крупными полимерами ПЭГ. Кроме того, авторы обнаружили, что размер молекулы ПЭГ, присоединенной к пептидному антагонисту рецептора В 1, является критическим параметром в оптимизации присущей антагонисту активности и эффективного полупериода существования in vivo. Например, ацетилированный пептидный антагонист В 1 продемонстрировал эффективность в соответствующих моделях болиin vivo в течение максимум 4 ч после многократного дозирования. Неожиданно тот же самый пептид,конъюгированный с молекулой ПЭГ молекулярной массы 5 и 20 кДа описанным в данном контексте образом, продемонстрировал эффективность в период до 2 суток и по меньшей мере 4 суток, соответственно, после однократной болюсной инъекции. Перед тем как описать пептидные и конъюгированные с носителем или ПЭГ пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1, соответствующие настоящему изобретению, и способы их получения и применения, следует иметь в виду, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными пептидными и/или конъюгированными пептидными антагонистами, поскольку пептидные и/или конъюгированные пептидные антагонисты и методики, предусматриваемые настоящим изобретением, могут,-4 009294 конечно, несколько варьировать. Следует иметь в виду, что терминология, используемая в данном контексте, служит только для целей описания конкретных вариантов осуществления, и не предусмотрено,что она является ограничивающей, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения. Пептиды, связывающие рецептор брадикинина В 1, рассматриваемые в плане конъюгирования с носителем в целях и таким образом, как описано в данном контексте, включают, но без ограничения перечисленным, новые пептидные антагонисты, связывающие В 1, описанные в данном контексте, а также пептидные антагонисты, связывающие В 1, известные в области техники, включая, но без ограничения перечисленным, любой пептид, описанный в любой из следующих публикаций (каждая из которых таким включена в виде ссылки во всей своей полноте): Regoli et al., Bradykinin receptors and their antagonists(Брадикининовые рецепторы и их антагонисты), Eur. J. of Pharma., 348:1-10 (1998); Neugebauer W. et al.,Kinin B1 receptor antagonists with multi-enzymatic resistance properties (Антагонисты рецептора кинина В 1 со свойствами ферментной полирезистентности), Can. J. Physiol. Pharmacol., 80:287-292, (2002); Stewart J.M. et al., Bradykinin antagonists: present progress and future prospects (Антагонисты брадикинина, развитие в настоящее время и будущие перспективы), Immunopharmacology, 43:155-161, (1999); Stewart J. M. et al.,Metabolism-Resistant Bradykinin Antagonists: Development and Applications (Устойчивые к метаболизму антагонисты брадикинина, развитие и применение), Biol. Chem., 382:37-41, (2001); Публикация РСТ WO 98/07746 и Патенты США NoNo: 4693993, 4801613, 4923963, 5648336, 5834431, 5849863, 5935932,5648333, 5385889, 5444048 и 5541286. Термины, используемые на протяжении данного описания, определены следующим образом, пока не ограничено иным образом в определенных случаях. Остатки природных аминокислот описывают тремя путями: полное название аминокислоты, стандартный трехбуквенный код или стандартный однобуквенный код в соответствии с представленной ниже схемой. Если четко не указано иначе, предполагается, что обозначение в данном контексте природной или неприродной аминокислоты охватывает как D-, так и L-изомер аминокислоты. Сокращенные названия,используемые в данном контексте для неприродных аминокислот, такие же, как описано в патенте СШАNo. 5834431, публикации РСТ WO 98/07746, и статье Neugebauer et al. (2002), все из которых таким образом включены в виде ссылки во всей своей полноте. Кроме того, сокращение "Dab" и "D-Dab" предназначено для обозначения L- и D-изомера неприродной аминокислоты, D-2-аминомасляной кислоты, соответственно. Сокращение "3'Pal и "D-3'Pal" предназначено для обозначения L- и D-изомера неприродной аминокислоты, 3'-пиридилаланина, соответственно. Кроме того, сокращение "Igl" предназначено для включения как "Igla", так и "Iglb" (-(1-инданил)глицина и -(2-инданил)глицина, соответственно). Аналогично "Dlgl" предназначено для того, чтобы включить как "D-lgla", так и "D-lglb" (D-изомеры -(1 инданил) глицина и -(2-инданил)глицина, соответственно). Предпочтительно, как используют в данном контексте, чтобы Igl означало Iglb и D-lgl означало D-lglb. Термином "пептид, конъюгированный с носителем" или "конъюгированный пептид" обозначают соединение, которое обладает биологической активностью и которое при введении млекопитающему дает терапевтический эффект. Две части включают (1) по меньшей мере один пептидный антагонист В 1 и (2) по меньшей мере один носитель, как определено в данном контексте ниже, ковалентно связанный с остатком самого пептида или с пептидильным или непептидильным линкером (включая, но без ограничения перечисленным ароматические линкеры), который ковалентно связан с остатком пептида. Термином "пептид, конъюгированный с ПЭГ" или "ПЭГилированныйй пептид" обозначают соединение, которое обладает биологической активностью и которое при введении млекопитающему дает терапевтический эффект. Две части включают (1) по меньшей мере один пептидный антагонист В 1 и (2) по меньшей мере одну молекулу полиэтиленгликоля (ПЭГ), ковалентно связанную с остатком самого пептида или с пептидильным или непептидильным линкером (включая, но без ограничения перечисленным,ароматические линкеры), который ковалентно связан с остатком пептида. Термином "полиэтиленгликоль" или "ПЭГ" обозначают соединение полиалкиленгликоля или его производное, содержащее или не содержащее связывающие агенты или дериватизацию с помощью свя-5 009294 зывающих либо активирующих групп (например, с помощью тиоловой, трифлатной, трезилатовой, азиридиновой, оксирановой, ортопиридилдисульфидной, винилсульфоновой, йодацетамидной или малеимидной группы). ПЭГ является хорошо известным водорастворимым полимером, который коммерчески доступен или может быть получен посредством полимеризации этиленгликоля с раскрытием цикла согласно способам, хорошо известным в области техники (см. монографию Sandier and Karo, Polymer Synthesis (Синтез полимеров), Academic Press, New York, т. 3, с. 138- 161). В настоящей заявке термин "ПЭГ" используют в широком смысле, чтобы охватить любую молекулу полиэтиленгликоля от моно- до полифункциональной формы безотносительно размера или модификации на конце ПЭГ, и она может быть представлена формулой в которой n составляет от 20 до 2300 и X означает Н или концевую модификацию, например С 1-4 алкил. Предпочтительно, когда ПЭГ, используемый в изобретении, оканчивается на одном из концов гидрокси- или метоксигруппой, т.е. X означает Н или СН 3 ("метоксиПЭГ"). Отмечено, что, когда X = СН 3,другой конец ПЭГ, который показан в формуле II, оканчивается ОН, ковалентно связывается с активирующей группой посредством эфирной кислородной связи. Когда X = Н, оба конца ПЭГ присоединяются к активирующим группам посредством эфирных связей, приводя к образованию линейных бифункциональных ПЭГ. При использовании в химической структуре термин "ПЭГ" включает вышеприведенную формулу II без атома водорода показанной гидроксильной группы, оставляя атом кислорода доступным для реакции со свободным атомом углерода линкера с образованием эфирной связи. Более детально, для того, чтобы конъюгировать ПЭГ с пептидом, ПЭГ должен быть в "активированной" форме. Активированный ПЭГ может быть представлен формулой III в которой ПЭГ (как определено выше) ковалентно присоединяется к атому углерода активационной группы (А) с образованием эфирной связи, и (А) содержит реакционную группу, которая может реагировать с амино-, имино- или тиоловой группой на остатке аминокислоты пептида или линкерной молекулы,ковалентно связанной с пептидом. Способы получения активированных ПЭГов хорошо известны в области техники, например, см. патенты США 5643575, 5919455, 5932462 и публикацию РСТ WO 95/06058 (все из которых таким образом включены в виде ссылки во всей их полноте). Подходящие активированные ПЭГи можно получить с помощью ряда обычных реакций. Например, N-гироксисукцинимидный сложный эфир ПЭГ (M-NHSПЭГ) можно получить из ПЭГ-монометилового эфира (который коммерчески производится фирмой Union Carbide) посредством реакции с N,N'-дициклогексилкарбодиимидом (DCC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) согласно методу Buckmann и Merr, (см. Makromol. Chem., 182:1379-1384, (1981. Другие активированные ПЭГи, такие как ПЭГ-альдегиды, могут быть получены из коммерческого источника,например , Nektar Therapeutics (Huntsville, Al) или Enzon, Inc. (Piscataway, N. J.). Примерами предпочтительных активированных ПЭГ для целей настоящего изобретения являются ПЭГ-пропионовый альдегид и ПЭГ-бутиральдегид, которые коммерчески производятся фирмой Nektar Therapeutics (Huntsville, Al). ПЭГ-пропионовый альдегид представлен формулой ПЭГ-СН 2 СН 2 СНО и описан в патенте США 5252714, который полностью включен в виде ссылки в данном контексте. Кроме того, для получения димерных конъюгатов могут быть использованы бифункциональные ПЭГ-альдегиды. Дополнительные предпочтительные реакционные с амином ПЭГи включают: метокси-ПЭГсукцинимидилпропионат (мПЭГ-SPA) и метокси-ПЭГ-сукцинимидобутаноат (мПЭГ-SBA), мПЭГбензотриазолкарбонат или мПЭГ-п-нитрофенилкарбонат, который производится в виде соединений различной молекулярной массы фирмой Nektar Therapeutics (Huntsville, Al), Enzon, Inc. (Piscataway, N.J.),или NOF Corporation (Tokyo, Japan). Дополнительные предпочтительные активированные молекулы ПЭГ включают тиоловые реакционные функциональности, включая, но без ограничения перечисленным,ПЭГ-винилсульфоны, представленные формулой ПЭГ-CH2CH2SO2-CH=CH2, мПЭГ-йодацетатом и мПЭГ-тиоэфирами, приведенными ниже: Другим предпочтительным активированным ПЭГ для генерации конъюгированных с ПЭГ пептидов, соответствующих настоящему изобретению, является ПЭГ-малеимид. Такие соединения, как малеимидомонометокси-ПЭГи особенно эффективны для генерации ПЭГ-конъюгированных пептидов, соответствующих изобретению. Даже более предпочтительным активированным ПЭГ для генерации конъюгированных с ПЭГ пептидов, соответствующих настоящему изобретению, является поливалентный ПЭГ, имеющий более, чем один активированный остаток. Предпочтительные поливалентные молекулы ПЭГ включают, но без ог-6 009294 раничения перечисленным, молекулы, представленные ниже: ПЭГ любой молекулярной массы можно использовать так, как это желательно на практике, например от приблизительно 1000 Дальтон (Да) до 100000 Да (n составляет 20-2300). Число повторяющихся звеньев в ПЭГ приблизительно соответствует молекулярной массе, выраженной в дальтонах. Предпочтительно, когда объединенная молекулярная массы ПЭГ на активированном линкере пригодна для фармацевтического применения. Так, объединенная молекулярная масса молекул ПЭГ не должна превышать 100000 Да. Предпочтительно, когда объединенная или общая молекулярная масса ПЭГ, используемого в конъюгированном с ПЭГ пептиде, соответствующем настоящему изобретению, составляет от приблизительно 3000 до 60000 Да (общее n составляет от 70 до 1400), более предпочтительно от приблизительно 8800 до 36000 Да (общее n составляет приблизительно от 200 до приблизительно 820). Наиболее предпочтительная объединенная масса для ПЭГ составляет от приблизительно 20000 до 24000 Да (общее n составляет от приблизительно 450 до приблизительно 540). В настоящем изобретении могут быть использованы другие полиалкиленгликолевые соединения,такие как полипропиленгликоль. Другие подходящие полиалкиленгликолевые соединения включают, но не ограничены заряженными или нейтральными полимерами следующих типов: декстран, коломиновые кислоты или другие полимеры на углеводной основе, полимеры аминокислот и производные биотина. Термин "включающий (содержащий)" означает, что пептид или конъюгированный пептид может включать дополнительные молекулярные структуры, включая, но без ограничения перечисленным, аминокислоты, на одном из или обоих N- или С-концах данной последовательности. Конечно, данные молекулярные структуры не должны существенным образом нарушать активность пептида или конъюгированного пептида.-7 009294 Как используют в данном контексте, термин "нативный пептид" относится к неконъюгированному пептидному антагонисту В 1, описанному в данном материале или известному в области техники. Термины "дериватизация" и "производное (дериват)" или "дериватизированный" включают процессы и полученные в результате пептиды или конъюгированные пептиды, соответственно, в которых (1) пептид или конъюгированный пептид имеет циклическую часть, например перекрестную сшивку между цистеиниловыми остатками в конъюгированном пептиде; (2) пептид или конъюгированный пептид перекрестно сшит или имеет центр перекрестной сшивки, например пептид или конъюгированный пептид имеет цистеиниловый остаток и, таким образом, формирует перекрестно-сшитые димеры в культуре илиin vivo; (3) N-конец конъюгированного пептида имеет концевую группу -NH2, замещенную -NRR1,NRC(O)R1, -NRC(O)OR1, -NRS(O)2R1, -NHC(O)NHR, сукцинимидной группой или замещенным либо незамещенным бензилкарбонил-NH-, где R и R1, а также заместители в цикле такие, как определено ниже;(5) С-конец замещен группой -C(O)R или -NR3R4, где R2, R3 и R4 такие, как определено ниже; и (6) конъюгированные пептиды, в которых отдельные молекулы аминокислот модифицированы обработкой агентами, способными реагировать с выбранными боковыми цепями или концевыми остатками. Производные дополнительно описаны ниже. Термин "В 1" означает В 1 рецептор брадикинина (см. статью Judith M Hall, A review of BK receptors(Обзор рецепторов ВК), Pharmac. Ther. 56:131-190, (1992. Если специально не указано иначе, термин В 1 или В 1 рецептор брадикинина предусмотрен для обозначения человеческого В 1 (hB1) рецептора брадикинина. Предпочтительно, когда hB1 представляет собой рецептор дикого типа. Более предпочтительно,когда hB1 представляет собой брадикининовый рецептор, описанный в GenBank Accession no. AJ238044. Термин "пептид", как в основном используют в данном контексте, относится к молекулам из 4-40 аминокислот, причем молекулы из 10-20 аминокислот являются предпочтительными и из 15-18 аминокислот - наиболее предпочтительными. Термин "дипептид", как используют в данном контексте, относится к молекуле из двух аминокислот. Термин "трипептид", как используют в данном контексте, относится к молекуле из трех аминокислот. Структурный анализ взаимодействия типа белок-белок может быть также использован для того,чтобы предсказать пептиды, которые имитируют активность больших белковых лигандов. В данном анализе кристаллическая структура позволяет предположить идентичность и относительную ориентацию важных остатков белкового лиганда, на основании которого может быть сконструирован аналогичный пептид. См. например, статью Takasaki et al., Nature Biotech., т. 15, с. 1266-1270, (1997). Данные аналитические методы также могут быть использованы для исследования взаимодействия рецепторного белка и пептида, конъюгированного с носителем пептида или конъюгированного с ПЭГ пептида, соответствующих настоящему изобретению, которое позволяет предположить дальнейшую модификацию пептида или пептидных конъюгатов с целью повышения аффинности связывания. Как используют в данном контексте, термины "эффективное количество" и "терапевтически эффективное количество" при использовании в отношении пептидного, конъюгированного с носителем пептидного или конъюгированного с ПЭГ пептидного антагониста В 1 относятся к количеству или дозе, достаточным для получения желательного результата (т.е. для терапии пептидными, конъюгированными с носителем пептидными или конъюгированными с ПЭГ пептидными антагонистами В 1, соответствующими настоящему изобретению). В контексте настоящего изобретения желательный результат является желательным уменьшением воспаления и/или боли, например, или поддержкой наблюдаемого снижения уровня одной или более биологических активностей В 1. Более конкретно, терапевтически эффективное количество представляет собой количество пептида и/или конъюгированного пептида, достаточное для ингибирования в течение некоторого периода времени одного или более клинически определенных патологических процессов, ассоциированных с рассматриваемым состоянием, например воспалением или болью, у субъекта, которое лечат in vivo агентом(ами). Эффективное количество может варьировать в зависимости от конкретного выбранного пептидного и/или конъюгированного пептидного антагониста В 1, и оно также зависит от множества факторов и состояний, связанных с субъектом, проходящим лечение, и тяжестью нарушения. Например, если пептидный и/или конъюгированный пептидный антагонист В 1 предназначен для введения in vivo, такие факторы, как возраст, масса тела и состояние здоровья пациента, а также кривые зависимости доза-ответ и данные по токсичности, полученные в предклинических исследованиях на животных, должны быть в числе прочих приняты во внимание. Если агент(ы) предназначен для контактирования с клетками in vitro, следует также разработать множество предклинических исследований in vitro для оценки таких параметров, как всасывание, полупериод существования, доза, токсичности и т.п. Определение эффективного количества или терапевтически эффективного количества для заданного агента в значительной мере находится в компетенции специалистов в области техники. Термин "фармакологически активный" означает, что субстанция, описанная таким образом, определена, как обладающая активностью, которая воздействует на медицинский параметр или болезненное состояние (например, боль). В контексте изобретения данный термин, как правило, относится к вызываемому В 1 или опосредуемому В 1 заболеванию или патологическому медицинскому состоянию или нарушению и, более конкретно, к антагонизму воспалению или боли.Ligtet. al, British Journal of Pharmacology, 2000, 130, 131) относятся к молекуле, которая блокирует, препятствует, уменьшает, снижает или каким-либо образом нарушает биологическую активность ассоциированного белка, представляющего интерес. Предпочтительный "антагонист" или "ингибитор", соответствующий настоящему изобретению, представляет собой молекулу, которая связывается и ингибирует В 1 с IC50 (50% ингибирующая концентрация) 500 нМ или меньше в анализах активности В 1 in vitro. Более предпочтительный "антагонист" или "ингибитор", соответствующий настоящему изобретению, представляет собой молекулу, которая связывается и ингибирует В 1 с IC50 100 нМ или меньше в анализах активности В 1 in vitro. Наиболее предпочтительный "антагонист" или "ингибитор", соответствующий настоящему изобретению, представляет собой молекулу, которая связывается и ингибирует В 1 с IC50 50 нМ или меньше в анализах активности В 1 in vitro и предупреждает, облегчает или снимает боль, как измеряют с помощью по меньшей мере одной в целом приемлемой модели боли на животном in vivo и/или ингибирует биохимические стимулы в модели отека, воспаления или боли на животном in vivo. Кроме того, в данном контексте охватываются также физиологически приемлемые соли пептидов или конъюгированных пептидов, соответствующих изобретению. Выражения "физиологически приемлемые соли" и "фармакологически приемлемые соли", как используют в данном контексте, являются взаимозаменяемыми и предусматривают включение любых солей, которые, как известно или позднее показано, являются фармацевтически приемлемыми (т.е. используемыми при лечении теплокровного животного). Некоторыми конкретными примерами являются: ацетат, трифторацетат; гидрогалиды, такие как гидрохлорид и гидробромид, сульфат, цитрат, тартрат, гликолят, оксалат, соли неорганических и органических кислот, включая, но без ограничения перечисленным, хлористо-водородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, фосфорную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, яблочную кислоту, уксусную кислоту, щавелевую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, молочную кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, салициловую кислоту, бензойную кислоту, фенилуксусную кислоту, миндальную кислоту и т.п. Когда соединения,соответствующие изобретению, включают кислотную функцию, такую как карбоксигруппа, подходящие фармацевтически приемлемые катионные пары для карбоксигруппы хорошо известны специалистам в области техники и включают щелочные, щелочно-земельные, аммонийные катионы и катионы четвертичного аммония и т.п. Относительно дополнительных примеров "фармакологически приемлемых солей" см. ниже и статью Bergeet al., J. Pharm. Sci., 66:1, (1977). Термин "защитная группа", как правило" относится к группам, хорошо известным в области техники, которые используют для предупреждения протекания нежелательных реакций, таких как нуклеофильные, электрофильные, окислительные, восстановительные и т.п., выбранных реакционных групп,таких как карбокси-, амино-, гидрокси-, меркаптогруппа и т.п. Предпочтительные защитные группы указаны в данном контексте в соответствующих местах. Примеры защитных групп аминогруппы включают,но без ограничения перечисленным, аралкил, замещенный аралкил, циклоалкенилалкил и замещенный циклоалкенилалкил, аллил, замещенный аллил, ацил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, силил и т.п. Примеры аралкила включают, но без ограничения перечисленным, бензил, орто-метилбензил, тритил и бензгидрил, который может быть необязательно замещенным галогеном, алкилом, алкокси-, гидрокси-,нитро-, ациламиногруппой, ацилом и т.п., а также соли, такие как соли фосфония и аммония. Примеры арильных групп включают фенил, нафтил, инданил, антраценил, 9-(9-фениофлуоренил), фенантренил,дуренил и т.п. Примеры циклоалкенилалкильных или замещенных циклоалкенилалкильных радикалов,предпочтительно имеющих 6-10 атомов углерода, включают, но без ограничения перечисленным, циклогексенилметил и т.п. Подходящие ацильные, алкоксикарбонильные и аралкоксикарбонильные группы включают бензилоксикарбонил, т-бутоксикарбонил, изобутоксикарбонил, бензоил, замещенный бензоил,бутирил, ацетил, трифтораецетил, трихлорацетил, фталоил и т.п. Для того чтобы защитить одну и ту же аминогруппу, можно использовать смесь защитных групп, например, первичная аминогруппа может быть защищена как арал кильной группой, так и арал коксикарбонильной группой. Защитные группы амина могут также образовывать гетероциклическое кольцо с атомом азота, к которому они присоединены, например, 1,2-бис(метилен) бензол, фталимидил, сукцинимидил, малеимидил и т.п., и при этом данные гетероциклические группы могут далее включать присоединенные арильные и циклоалкильные циклы. Кроме того, гетероциклические группы могут быть моно-, ди- или тризамещенными, как, например,нитрофталимидил. Аминогруппы могут быть также защищены от нежелательных реакций, таких как окисление, посредством образования аддитивной соли, такой как гидрохлорид, толуолсульфоновой кислоты, трифторуксусной кислоты и т.п. Многие защитные группы аминогрупп подходят также для защиты карбокси-, гидрокси- и меркаптогрупп, например, аралкильных групп. Алкильные группы также являются подходящими группами для защиты гидрокси- и меркаптогрупп, например трет-бутил. Силильные защитные группы представляют собой атомы кремния, необязательно замещенные одной или более алкильных, арильных и аралкильных групп. Подходящие силильные защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, третбутилдиметилсилил, диметилфенилсилил, 1,2-бис-(диметилсилил)бензол, 1,2-бис(диметилсилил) этан и дифенилметилсилил. Силилирование аминогрупп дает моно- или дисилиламиногруппы. Силилирование-9 009294 аминоспиртовых соединений может привести к образованию N,N,О-трисилильных производных. Удаление силильной функции из функции силилового эфира легко осуществить, например, при использовании реагента на основе гидроксида металла или фторида аммония, либо как отдельной стадии реакции, либоin situ в процессе реакции со спиртовой группой. Походящими силилирующими агентами являются, например, триметилсилилхлорид, трет-бутилдиметилсилилхлорид, фенилдиметилсилилхлорид, дифенилметилсилилхлорид или их комбинированные продукты с имидазолом или ДМФ (диметилформамидом). Способы силилирования аминов и удаления силильных защитных групп хорошо известны специалистам в области техники. Способы получения данных производных аминов из соответствующих аминокислот,амидов аминокислот или сложных эфиров аминокислот также хорошо известны специалистам в области органической химии, включая химию аминокислот/сложных эфиров аминокислот или аминоспиртов. Защитные группы удаляют в условиях, которые не воздействуют на остальную часть молекулы. Данные способы хорошо известны в области техники и включают кислотный гидролиз, гидрогенолиз и т.п. Предпочтительный способ включает удаление защитной группы, например удаление бензилоксикарбонильной группы посредством гидрогенолиза с использованием палладия на угле в подходящей системе растворителей, такой как спирт, уксусная кислота и т.п. или их смесей. Трет-бутоксикарбонильную защитную группу можно удалить при использовании неорганической или органической кислоты, такой как HCl или трифторуксусная кислота, в подходящей системе растворителей, такой как диоксан или метиленхлорид. Полученная в результате соль амина может быть легко нейтрализована с образованием свободного амина. Карбоксизащитная группа, такая как метил, этил, бензил, трет-бутил, 4 метоксифенилметил и т.п. могут быть удалены в условиях гидролиза или гидрогенолиза, хорошо известным специалистам в данной области. Следует отметить, что соединения, соответствующие изобретению, могут содержать группы, которые могут находиться в таутомерных формах, как циклические и нециклические амидиновые и гуанидиновые группы, замещенные гетероатомом гетероарильные группы (Y1 = О, S, NR) и т.п., которые проиллюстрированы в следующих примерах и, хотя в данном контексте названа, описана, представлена и/или заявлена одна форма, предусмотрено,чтобы все таутомерные формы были неотъемлемо включены в данное название, описание, представление и/или пункт формулы изобретения. Пролекарственные формы соединений, соответствующих данному изобретению, также предусмотрены данным изобретением. Пролекарственная форма представляет собой активное или неактивное соединение, которое химически модифицируется посредством физиологического воздействия in vivo, такого как гидролиз, метаболизм и т.п. в соединение, соответствующее данному изобретению, после введения пролекарственной формы пациенту. Пригодность и методики, включенные в получение и применение пролекарственных форм, хорошо известны специалистам в данной области техники. В плане общего обсуждения пролекарственных форм, включающих сложные эфиры, см. монографии Svensson и Tunek,Drug Metabolism Reviews (Обзоры по метаболизму лекарственных препаратов), 165, (1988) и BundgaardDesign of Prodrugs (Констриурование пролекарственных форм), Elsevier, (1985). Примеры замаскированного аниона карбоксилата включают множество сложных эфиров, таких как алкиловый (например, метиловый, этиловый), циклоалкиловый (например, циклогексиловый), аралкиловый (например, бензиловый,р-метоксибензиловый) и алкилкарбонилоксиалкиловый (например, пивалоилоксиметиловый). Амины были замаскированы как арилкарбонилоксиметилзамещенные производные, которые расщепляются эстеразами in vivo, высвобождая свободный лекарственный препарат и формальдегид (см. статью Bundgaard, J. Med. Chem., 2503, (1989. Кроме того, лекарственные препараты, содержащие кислую NH группу, такую как имидазол, имид индол и т.п., были замаскированы N-ацилоксиметиловыми группами (см. монографию Bundgaard Design of Prodrugs (Конструирование пролекарственных форм), Elsevier, (1985. Гидроксигруппы были замаскированы как сложные и простые эфиры. Заявка ЕР 039051 (Sloan and Little,4/11/81) раскрывает пролекарственые формы основания Манниха гидроксамовой кислоты, их получение- 10009294 и применение. Структура конъюгированных пептидов Общие положения. Конъюгированные с носителем пептиды, соответствующие настоящему изобретению, могут быть описаны следующей формулой в которойX1 и Y1 в каждом случае независимо друг от друга означают пептиды формулы -L1-P1 и -L2-P2, соответственно;L1 и L2 в каждом случае независимо друг от друга отсутствуют или представляют собой линкеры,имеющие от 0 до 9 остатков аминокислот;n означает от 0 до 3; и Р 1 и, если имеется, Р 2 в каждом случае независимо друг от друга означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1. Конъюгированные с носителем пептиды формулы IV будут содержать предпочтительные варианты осуществления, в которых Р 1 и, если имеется, Р 2 в каждом случае независимо друг от друга представляют собой пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1, имеющие последовательность пептида, как показано в любой из SEQ ID NONO: 5-60, и ее производные. Дополнительные предпочтительные варианты осуществления конъюгированных с носителем пептидов будут включать конъюгированные с носителем пептиды формулы IV, в которой Р 1 и, если имеется,Р 2 определены формулой где а 0 представляет собой основную или нейтральную ароматическую, алифатическую, гетероциклическую или алициклическую аминокислоту, дипептид или трипептид, включающий либо один, либо два остатка, имеющих основные боковые цепи, или отсутствует; а 1, а 2, а 3 и а 4 в каждом случае независимо друг от друга представляют собой основные или нейтральные ароматические, алифатические, гетероциклические или алициклические аминокислоты; а 6 представляет собой Ser; а 5, а 7 и а 8 в каждом случае независимо друг от друга означают ароматические, алифатические, гетероциклические или алициклические аминокислоты при условии, что по меньшей мере одна из а 5, а 7 и а 8 выбрана из Chg, Cpg, Igla, Iglb, Niga и Nigb в D- или L-конфигурации; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14 в каждом случае независимо друг от друга означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Более предпочтительно, когда Р 1 и, если имеется, Р 2 определены формулой где а 0 представляет собой основную аминокислоту, дипептид, включающий либо один, либо два остатка с основными боковыми цепями, или отсутствует; а 1 означает основную аминокислоту; а 2 означает Pro; а 3 означает Hyp; а 4 означает Gly; а 5 и a8 означает инданиламинокислоту; а 6 означает Ser; а 7 означает D-инданиламинокислоту; а 8 означает Cpg; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14 в каждом случае независимо друг от друга означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Еще более предпочтительно, когда Р 1 и, если присутствует, Р 2 определены формулой где а 0 означает основную аминокислоту, дипептид, содержащий либо одну, либо две основные боковые цепи, или отсутствует; а 1 означает основную аминокислоту; а 2 означает Pro; а 3 означает Hyp; а 4 означает Gly; а 5 означает Cpg; а 6 означает Ser;- 11009294 а 7 означает DTic; а 13 означает Cpg; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14 в каждом случае независимо друг от друга означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Еще более предпочтительно, когда конъюгированные с носителем пептиды, соответствующие настоящему изобретению, включают конъюгированные с носителем пептиды формулы IV, в которой n=0 иX1 означает пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидов, как показано в SEQ ID NONO:27-41,и их производные. Настоящее изобретение представляет также конъюгированные с ПЭГ пептиды, которые связывают и антагонистически действуют на активность рецепторов брадикинина В 1 (В 1) и которые обладают очевидно улучшенными фармакокинетическими свойствами in vivo по сравнению с неконъюгированными пептидными антагонистами В 1. Конъюгированные с ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, могут быть описаны следующей формулой (V): в которойX1 и Y1 в каждом случае независимо друг от друга означают пептиды формулы -L1-Р 1 и -L2-P2, соответственно;F представляет собой молекулу ПЭГ, ковалентно связанную с X1 или Y1;L1 и L2 в каждом случае независимо друг от друга отсутствуют или представляют собой линкеры,имеющие от 0 до 9 остатков аминокислот;n составляет от 0 до 3; и Р 1 и, если присутствует, Р 2, в каждом случае независимо друг от друга, означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1. Конъюгированные с ПЭГ пептиды формулы V будут включать предпочтительные варианты осуществления, в которых Р 1 и, если присутствует, Р 2, в каждом случае независимо друг от друга, означают пептидные антагонисты рецептора брадикинина В 1, имеющие пептидную последовательность, как показано в любой из SEQ ID NONO: 5-60, и их производные. Дополнительные предпочтительные варианты осуществления конъюгированных с ПЭГ пептидов будут включать ПЭГ-конъюгаты формулы V, в которой Р 1 и, если присутствует, Р 2 определены формулой в которой а 0 представляет собой основную или нейтральную ароматическую, алифатическую, гетероциклическую или алициклическую аминокислоту, основной дипептид или трипептид или отсутствует; а 1, а 2, а 3 и а 4, в каждом случае независимо друг от друга, представляют собой основные или нейтральные ароматические, алифатические, гетероциклические или алициклические аминокислоты; а 6 представляет собой Ser; а 5, а 7 и а 8, в каждом случае независимо друг от друга, означают ароматические, алифатические, гетероциклические или алициклические аминокислоты при условии, что по меньшей мере одна из а 5, а 7 и а 8 выбрана из Chg, Cpg, Igla, Iglb, Niga и Nigb в D- или L-конфигурации; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14, в каждом случае независимо друг от друга, означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Более предпочтительно, когда Р 1 и, если присутствует, Р 2 определены формулой в которой а 0 представляет собой основную аминокислоту, основной дипептид или отсутствует; а 1 означает основную аминокислоту; а 2 означает Pro; а 3 означает Hyp; а 4 означает Gly; а 5 и а 8 означает инданиламинокислоту; а 6 означает Ser; а 7 означает D-инданиламинокислоту; а 8 означает Cpg; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14, в каждом случае независимо друг от друга, означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Еще более предпочтительно, когда Р 1 и, если присутствует, Р 2 определены формулой в которой а 0 означает основную аминокислоту, основной дипептид или отсутствует;- 12009294 а 1 означает основную аминокислоту; а 2 означает Pro; а 3 означает Hyp; а 4 означает Gly; а 5 означает Срд; а 6 означает Ser; а 7 означает DTic; а 8 означает Cpg; и а 9, а 10, а 11, а 12, а 13 и а 14 в каждом случае независимо друг от друга означают любую природную аминокислоту или отсутствуют. Еще более предпочтительно, когда конъюгированные с ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, включают конъюгированные с ПЭГ пептиды формулы V, в которой n=0 и X1 означает пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидов, имеющих последовательность аминокислот, как показано в SEQ ID NONO: 27-41, и их производные. Еще более предпочтительные конъюгированные с ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, включают соединения, в которых n=0 и Х 1 означает пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидов, имеющих последовательность аминокислот, как показано в SEQ ID NONO: 27-41, и их производные. Еще более предпочтительно, когда конъюгированные с ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, могут быть описаны следующей формулой или ее физиологически приемлемой солью, в которойR в каждом случае независимо означает -(X1)-(Y1)n, где R ковалентно связано с F';X1 и Y1, в каждом случае независимо друг от друга, означают пептиды формулы -L1-P1 и -L2-P2, соответственно;L1 и L2 в каждом случае независимо друг от друга отсутствуют или означают линкеры, имеющие от 0 до 9 остатков аминокислот;Z означает 2-8; и Р 1 и Р 2 в каждом случае независимо друг от друга означают пептидные антагонисты В 1 рецептора брадикинина. Еще более предпочтительно когда конъюгированные с ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, включают конъюгированные с ПЭГ пептиды формулы VI, в которой n равно О, Z означает 4-8 и X1 представляет собой пептид, выбранный из группы, состоящей из пептидов, имеющих последовательность аминокислот, как показано в SEQ ID NONO: 27-41, и их производные. В качестве части настоящего изобретения рассматривают пептидные конъюгаты, имеющие последовательности пептидов, которые представляют собой фрагменты (т.е. "субпоследовательности"), аналоги и производные Р 1 и, если присутствует, Р 2, как определено в данном контексте, и где данные конъюгированные пептиды в значительной мере эквивалентны в отношении активности против В 1 in vitro и/илиin vivo пептидным конъюгатам, специально описанным в данном контексте. Термин "аналог" предназначен для обозначения молекул, представляющих одну или более замен,делеций и/или добавлений аминокислот, полученных из линейного ряда аминокислот пептидов, конъюгированных пептидов (неконъюгированных Р 1 и, если присутствует, Р 2) и/или любых пептидильных линкеров (L) пептидов, конъюгированных с носителем или ПЭГ, представленных формулами (IV) и (V), соответственно, которые при этом дают в результате молекулы, в значительной мере эквивалентные в отношении активности против В 1 in vitro и/или in vivo no сравнению с аналогичными неконъюгированными пептидами или конъюгированными пептидами, специально описанными в данном контексте. Аналоги конъюгированных пептидов, соответствующие данному изобретению, будут, как правило,иметь одну или более замен, делеций и/или инсерций аминокислот в последовательности (Р) (Р 1 и/или,если присутствует Р 2) либо (L) (L1 и/или, если присутствует, L2). В общем считают маловероятным, что консервативные замены аминокислот нарушают структуру и/или функцию полипептида и они, как правило, включают замеш,ение одной аминокислоты другой, которая близка по структуре и/или функции(например, аминокислоты с боковыми цепями, близкими по размеру, заряду и/или форме). Природа данных замен хорошо известна специалистам в данной области техники и итоги иллюстративных замен аминокислот приведены в табл. 1 и 2 Таблица 1. Замены аминокислот Основные: Изменение с A, F, H, I, L, М, Р, V, W или Y на С более предпочтительно, если новый цистеин сохраняется в виде свободного тиола. Желательные замены аминокислот (как консервативные, так и неконсервативные) могут быть определены специалистами в данной области техники в то время, когда данные замены желательны. Например, замены аминокислот могут быть использованы для идентификации важных остатков пептидной последовательности или для повышения либо снижения аффинности неконъюгированных или конъюгированных пептидных молекул, описанных в данном контексте. В ряде вариантов осуществления консервативные замены аминокислот охватывают также остатки неприродных аминокислот, которые, как правило, включают посредством химического синтеза пептидов. Как отмечено в предшествующем разделе, природные остатки можно разделить на классы на основе общих свойств боковой цепи, которые могут быть использованы для модификации последовательности. Например, неконсервативные замены могут включать обмен представителя одного из данных классов на представителя другого класса. Данные замещенные остатки могут быть введены в участки пептида, который гомологичен нечеловеческим ортологам, или в негомологичные участки молекулы. Кроме- 14009294 того, можно также сделать модификации, используя Р или G с целью воздействия на ориентацию цепи. При осуществлении данных модификаций можно принимать во внимание коэффициент гидрофобности аминокислот. Для каждой аминокислоты определяли коэффициент гидрофобности на основе их характеристик гидрофобности и заряда, они составляют: для изолейцина (+4,5); валина (+4,2); лейцина(+3,8); фенилаланина (+2,8); цистеина/цистина (+2,5); метионина (+1,9); аланина (+1,8); глицина (-0,4); треонина (-0,7); серина (-0,8); триптофана (-0,9); тирозина (-1,3); пролина (-1,6); гистидина (-3,2); глутамата (-3,5); глутамина (-3, 5); аспартата (-3,5); аспарагина (-3,5); лизина (-3,9) и аргинина (-4,5). Важность коэффициента гидрофобности аминокислот в создании интерактивной биологической функции белка принимают во внимание в области техники. См. статью Kyte et al., J. Mol. Biol., 157:105131, (1982). Известно, что некоторые аминокислоты могут быть замещены другими аминокислотами,имеющими близкий коэффициент ии уровень гидрофобности и все еще сохраняют аналогичную биологическую активность. Для получения изменений на основе коэффициента гидрофобности предпочтительна замена аминокислот, коэффициенты гидрофобности которых лежат в пределах 2, особенно предпочтительны те, которые имеют значения 1, и еще более особенно предпочтительно те, которые имеют значения 0,5. В области техники также учитывают, что замена подобных аминокислот может быть эффективно осуществлена на основе гидрофильности. Самая высокая локальная средняя гидрофильность белка, если руководствоваться гидрофильностью соседних с ним аминокислот, коррелирует с его иммуногенностью и антигенностью, т.е. с биологической особенностью белка. Для остатков аминокислот определены следующие значения гидрофильности: аргинин (+3,0); лизин(-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5); триптофан (-3,4). Для получения изменений на основе близких значений гидрофильности предпочтительна замена аминокислот, значения гидрофильности которых лежат в пределах +2, особенно предпочтительны те, которые имеют значения 1, и еще более особенно предпочтительно те, которые имеют значения 0,5. Можно также идентифицировать эпитопы из первичных последовательностей аминокислот на основе гидрофильности. Данные участки называют также "эпитопные участки ядра". Компетентный специалист сможет определить подходящие аналоги неконъюгированных и/или конъюгированных пептидов, приведенных в данном контексте, при использовании хорошо известных методик. Специалисту в области техники следовало бы также знать, что можно заменить химически близкие аминокислот остатками, имеющимися в нативном пептиде при сохранении активности (консервативные замены остатков аминокислот). Вследствие этого даже области, которые могут быть важны для биологической активности или структуры, могут являться объектом консервативныхзамен аминокислотбез нарушения биологической активности или без вредного воздействия на структуру неконъюгированного пептида или конъюгированного пептида. Кроме того, специалист в области техники может ознакомиться с исследованиями структурыфункции для идентификации остатков в последовательности неконъюгированного и/или конъюгированного пептида, важных для активности или структуры. В свете такого сравнения можно предсказать важность остатков аминокислот в пептидной последовательности. Специалист в области техники может выбрать проведение замен химически близкими аминокислотами данных предсказанных важных остатков аминокислот неконъюгированных и/или конъюгированных пептидов, соответствующих настоящему изобретению. Ряд научных публикаций посвящен предсказанию вторичной структуры. См. статьи Moult J., Curr.Op. in Biotech., 7(4):422-427, (1996), Chou et al., Biochemistry, 13(2):222-245, (1974); Chou et al., Biochemistry, 113(2):211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol., 47:45-148 (1978); Chou et al.,Ann. Rev. Biochem., 47:251-276 и Chou et al., Biophys. J., 26:367-384, (1979). Более того, в настоящее время имеются компьютерные программы для помощи в предсказании вторичной структуры. Дополнительные способы предсказания вторичной структуры включают "поточную обработку данных" (см. статьи Jones D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3):377-87, (1997); Sippl et al., Structure, 4(1):15-9,(1996,"профильный анализ" (см. статьи Bowie et al., Science, 253:164-170 (1991); Gribskov et al., Meth.Enzym., 183:146-159, (1990); Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84 (13):4355-8, (1987 и "эволюционное связывание" (см. статьи Home, выше и Brenner, выше). Аналоги и производные пептидов и/или конъюгированных пептидов, соответствующие изобретению, будут использованы для тех же целей, что используют аналогичные пептиды и/или конъюгированные пептиды, специально описанные в данном контексте (т.е. антагонисты активности В 1 in vitro и/илиin vivo). Пептиды. Пептиды, соответствующие настоящему изобретению, включают пептиды, содержащие последовательности, представленные с SEQ ID NONO: 15-35 и 39-54. Пептидные последовательности Р 1 и, если присутствует, Р 2 (Р) в конъюгированных с носителем или ПЭГ пептидах, соответствующих настоящему изобретению, включают, как отмечено, пептиды, которые связывают и антагонистически воз- 15009294 действуют (например, снижают) активность В 1. Предпочтительные конъюгированные с носителем или ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, содержат по меньшей мере одну пептидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NONO: 5-60 и ее производных. Более предпочтительно, когда конъюгированные с носителем или ПЭГ пептиды, соответствующие настоящему изобретению, содержат по меньшей мере одну пептидную последовательность, выбранную из группы,состоящей из SEQ ID NONO: 27-41 и ее производных. Таблица 3. Пептиды брадикинина Носители. Термин "носитель", как используют в данном контексте, относится к молекуле, которая препятствует разложению и/или увеличивает полупериод существования, снижает токсичность или повышает биологическую активность терапевтического пептида или белка. Носители, используемые в контексте настоящего изобретения, известны в области техники (например, см. Публикацию РСТ WO 98/07746, которая включена таким образом в виде ссылки во всей своей полноте), и все они легко доступны для специалистов в данной области техники. В контексте настоящего изобретения предпочтительные носители включают, но без ограничения перечисленным, полиметиленгликоль, полигидроксипроиленгликоль, полипропиленгликоли и оксиды, полиметилпропиленгликоль, полигидрроксипропиленоксид, полипропиленгликоли с неразветвленной и разветвленной цепью и их производные, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль и их монометиловые эфиры, моноцетиловые эфиры, моно-н-бутиловые эфиры, моно-трет-бутилэфиры и моноолеиловые эфиры, сложные эфиры полиалкиленгликолей и карбоновых кислот и продукты дегидратационной конденсации полиалкиленгликолей с аминами и другие полиалкиленоксиды и гликоли и их производные, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, поливинилацетат, сополимер поли(винилацетат-совиниловый спирт), поливинилоксазолидон, поливинилметилоксазолидон и поливинилметиловый эфир, полиакриловые кислоты, полиметакриловые кислоты, полигидроксиэтилметакрилаты, полиакриламид и полиметакриламид и их другиеамиды, поли(N,N-диметилакриламид) и поли(N-изопропилакриламид), поли(N-ацетамидоакриламид) и поли(N-ацетамидометакриламид) и другие N-замещенные производные амидов. В одном из аспектов изобретения необходимо присутствие по меньшей мере одного носителя (F),присоединенного к группе непептидильного линкера или остатку аминокислоты пептидильного линкера,который ковалентно слит с пептидным антагонистом В 1. В контексте настоящего изобретения предпочтительный носитель представлен молекулой ПЭГ, как определено в данном контексте. Еще более предпочтительный носитель представляет собой поливалентную молекулу ПЭГ, как определено в данном контексте.- 19009294 Конъюгированные с носителем или ПЭГ молекулы, специально описанные или представленные в ссылках в данном контексте, могут быть незначительно модифицированы на участках, отмеченных как(X1)-(Y1)n (как определено выше), для формирования аналога, соответствующего изобретению, при условии, что антагонизм в отношении В 1 сохраняется в существенной мере. Что касается отношений конъюгированных с носителем или ПЭГ пептидов, соответствующих настоящему изобретению и их аналогов, предпочтительно, чтобы не больше, чем три неконцевых остатка на участке (Р) были различными. Более предпочтительно, когда аналоги, предусмотренные настоящим изобретением, включают молекулы, содержащие до двух замен, инсерций или делеций аминокислот в любом определенном положении участка (Р) конъюгированного с носителем или ПЭГ пептида, соответствующего настоящему изобретению. Наиболее предпочтительно, когда расхождение последовательности конъюгированного с носителем или ПЭГ пептида, соответствующего настоящему изобретению, и ее рассматриваемого аналога, в особенности, на заданном участке (Р) представлено в форме одной или более "консервативных модификаций". Линкеры. Термин "линкер", как используют в данном контексте, относится к L и, если присутствует, L , как показано либо в формуле IV, либо V (см. выше) и сокращенно обозначается в данном контексте (L). Предпочтительно, когда (L) по своей природе представляет собой пептидил (т.е. получен из аминокислот, связанных друг с другом пептидными связями) и состоит из от 1 до 9 аминокислот. Более предпочтительно, когда (L) состоит из от 1 до 9 аминокислот, где аминокислоты выбраны из двадцати природных аминокислот. В еще более предпочтительном варианте осуществления 1-9 аминокислот пептидильного линкера выбраны из цистеина, глицина, аланина, пролина, аргинина, аспарагина, глутамина и лизина. Еще более предпочтительно, когда пептидильный линкер состоит из большинства аминокислот, которые стерически незаблокированы, таких как глицин и аланин, связанных пептидной связью. Таким образом, предпочтительные пептидильные линкеры представляют собой поли(Gly)1-8, в особенности (Gly)3 (SEQ ID NO: 61), (Gly)5 (SEQ ID NO: 62) и (Gly)7 (SEQ ID NO: 63), а также поли (Gly-Ala)2-4 и поли(Ala)1-8. Другие специфические примеры пептидильных линкеров включают (Gly)5Lys (SEQ ID NO: 64) и (Gly)5LysArg (SEQ ID NO: 65). Другие комбинации Gly и Ala также предпочтительны. В качестве объяснения вышеприведенной номенклатуры, например, (Gly)5Lys означает Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Lys. Пептидильный линкер может содержать N-концевой цистеин, другой тиол или нуклеофил для конъюгирования с носителем. Более предпочтительный линкер содержит N-концевой остаток цистеина или гомоцистеина или другую 2-аминоэтантиоловую или 3-аминопропантиоловую группу для конъюгирования с функцмонализированными малеимидом, йодацетамидом или тиоэфиром носителями. Обработка исходного аддукта 3-сульфанилсукцинимида (1 с), образованного при реакции пептида с ПЭГ, активированным малеимидом, избытком основания превращает менее стабильный аддукт сукцинимида в гидролитически стабильную 6-метилкарбамоил-5-оксотиоморфолин-3-карбоксамидную форму (1d, см. схему 1). Альтернативно для стереоселетивного конъюгирования могут быть использованы коммерчески доступные тиоэфир- или йодацетамидо-ПЭГи (Nektar Therapeutics, Huntsville, AL), как представлено на схемах 2 и 3. Схема 1 Другой предпочтительный линкер представляет собой большой гибкий линкер, содержащий случайную последовательность Gdy/Ser/Thr (GSGSATGGSGSTASSGSGSATH; SEQ ID NO: 66), который оценивают, как приблизительно имеющий размер 1 к ПЭГ. Кроме того, пептидильный линкер может включать непептидильный сегмент, такой как алифатическую молекулу из 6 атомов углерода формулы-СН 2-СН 2- СН 2-СН 2-СН 2-СН 2- (жесткий линкер: AEAAAKEAAAKEAAAKAGG; SEQ ID NO: 67). Альтернативно в X1 и, если присутствует, в Y1 может быть непептидильный линкер, содержащий реакционный нуклеофил. Например, можно использовать алкильные линкеры, такие как -NH-(CH2)SC(O)-, где s = 2-20. Данные алкильные линкеры могут быть далее замещены любой стерически неблокирующей группой, такой как низший алкил (например, С 1-С 6), низший ацил, галоген (например, Cl, Br),CN, NH2, фенил и т.п. Иллюстративные непептидильные линкеры представляют собой линкеры на основе ПЭГ (см. ниже): В которых n такое, что линкер имеет молекулярную массу 100-5000 килодальтон (кДа), предпочтительно 100-500 кДа, m составляет 1-3. Предпочтительно, когда непептидильный линкер является ароматическим. Линкеры могут быть изменены для образования производных таким же образом, как описано в данном контексте. Кроме того, молекулы ПЭГ могут быть присоединены к N-концевому амину или аминам выбранной- 21009294 боковой цепи путем либо восстановительного алкилирования при использовании альдегидов ПЭГ, либо ацилирования при использовании гидроксисукцинимидо- или карбонатных эфиров ПЭГ. В данном подходе может быть использован любой из вышеописанных линкеров. Альтернативно подходящим образом функционализированный ПЭГ может быть присоединен непосредственно к любому из пептидных антагонистов рецептора брадикинина В 1, как показано в SEQ ID NONO: 5-26 или SEQ ID NONO: 43-60, либо непосредственно к остатку аминокислоты пептидильного линкера, который ковалентно слит с любым из пептидных антагонистов рецептора брадикинина В 1, как показано в SEQ ID NONO: 5-26 или 43-60. Следует принимать во внимание, что, поскольку носитель и/или целевые пептиды могут быть поливалентными, способом, соответствующим изобретению, возможно получить множество структур носитель:пептид. Так пример, одновалентный носитель и одновалентный пептид будут образовывать конъюгат 1:1; двухвалентный пептид и одновалентный носитель могут образовать конъюгаты, в которых пептидные конъюгаты несут две молекулы носителя, тогда как двухвалентный носитель и одновалентный пептид могут образовать структуры, в которых два пептидных элемента присоединены к одной молекуле носителя; использование носителей с более высокими валентностями может привести к формированию кластеров пептидных элементов, связанных с одной молекулой носителя, тогда как пептиды с более высокими валентностями могут стать покрытыми множеством молекул носителя. Пептидные молекулы могут иметь больше, чем одну реакционную группу, которая будет реагировать с активированным носителем, и нужно всегда учитывать возможность формирования сложных структур, когда желательно образование простых структур, таких как аддукты 1:1 носителя и пептида, или использовать двухвалентные носители для получения аддуктов пептид:носитель:пептид, будет полезным использовать заданные соотношения активированного носителя и пептидного материала, их заданные концентрации и проводить реакцию в заданных условиях (таких как продолжительность, температура рН и т.п.) с тем, чтобы получить пропорцию описанного продукта, а затем отделить описанный продукт от других продуктов реакции. Условия реакции, пропорции и концентрации реагентов можно получить относительно просто в экспериментах методом проб и ошибок, которые находятся в компетенции обычного квалифицированного специалиста при соответствующем масштабировании при необходимости. Очистку и разделение продуктов аналогично осуществляют известными методиками, хорошо известными квалифицированным специалистам в данной области техники. При этом, как используют в описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста ясно не требуется иначе. Так, например, ссылка на "конъюгированный с носителем пептидный антагонист" или "конъюгированный с ПЭГ пептидный антагонист" включает смеси данных конъюгатов, и ссылка на "способ лечения" включает ссылку на один или более способов лечения того типа, который будет известен специалистам в области техники или станет им известен по прочтении данного описания и т.п. Обычные варианты ПЭГилирования посредством конъюгирования мПЭГ-малеимида с тиоловой группой пептидов и полипептидов, имеющих остатки аминокислоты цистеина проводят в фосфатном буфере с использованием или без использования органического растворителя. Высокая растворимость ПЭГилированных пептидов и полипептидов и потенциальная нестабильность пирролидин-2,5-дионового цикла в воде затрудняют применение данного способа для крупномасштабного получения и очистки ПЭГилированных пептидов и белков. Вследствие этого авторы раскрывают в данном материале новые неводные условия конъюгирования мПЭГ-малеимида с тиоловой группой пептидов и полипептидов,имеющих цистеиновые остатки. Новый способ дает в результате средние до высоких выходы ПЭГилированных пептидов и полипептидов и сочетает введение по Michael и аминолиз в одной емкости (см. схему 4). Оба условия приводят в результате к непосредственному выделению ПЭГилированных пептидов и полипептидов посредством осаждения. Схема 4- 22009294 В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления метанол (МеОН) может быть заменен растворителем, включающим один или более из следующих растворителей: метанол, этанол, изопропиловый спирт,н-пропанол, н-бутанол, дихлорметан (ОСМ), ацетонитрил(AcN), тетрагидрофуран(ТНР), диметилформамид (ДМФ), диметилацетамид (DMAc) и N-метилпирролидон (NMP). В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления ТВМЕ может быть заменен растворителем, включающим один или более из следующих растворителей: диэтиловый эфир, метилизопропиловый эфир и диизопропиловый эфир. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакция 1), как представлено на схеме 4, может быть проведена при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 60 С. Предпочтительно,когда реакция 1), как представлено на схеме 4, может быть проведена при температуре от приблизительно 30 С до приблизительно 50 С. Более предпочтительно, когда реакция 1), как представлено на схеме 4,может быть проведена при температуре от приблизительно 35 С до приблизительно 45 С. Наиболее предпочтительно, когда реакция 1), как представлено на схеме 4, может быть проведена при комнатной температуре. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакция 2), как представлено на схеме 4, может быть проведена при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 60 С. Предпочтительно,когда реакция 2), как представлено на схеме 4, может быть проведена при температуре от приблизительно 30 С до приблизительно 50 С. Более предпочтительно, когда реакция 2), как представлено на схеме 4,может быть проведена при температуре от приблизительно 35 С до приблизительно 45 С. Наиболее предпочтительно, когда реакция 2), как представлено на схеме 4, может быть проведена при комнатной температуре. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакция осаждения, как представлено на схеме 4,может быть проведена в течение по меньшей мере 10 мин. Более предпочтительно, когда реакция осаждения, как представлено на схеме 4, может быть проведена в течение по меньшей мере 60 мин. Наиболее предпочтительно, когда реакция осаждения, как представлено на схеме 4, может быть проведена в течение приблизительно 60 мин. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакция осаждения, фильтрации и/или очистки, как представлено на схеме 4, может быть проведена больше, чем один раз. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 4, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакции осаждения и/или очистки могут быть проведены больше, чем один раз. Частично защищенные пептиды являются особенно эффективными реагентами для данной стратегии, поскольку они дают возможность селективной модификации специфических участков полифункциональных пептидов. Защитные группы удаляют с конъюгатов ПЭГ, используя принятые способы снятия защиты, известные специалистам в области синтеза пептидов. Частично защищенные пептиды, пригодные для данного применения, можно получить при использовании ортогональные защитных стратегий, хорошо известных специалистам, компетентным в области синтеза пептидов. Иллюстрация синтеза и конъюгирования частично защищенных пептидных антагонистов рецептора брадикинина В 1 представлена на схеме 5. Аналоги, у которых амины боковой цепи служат в качестве центров конъюгирования,можно получить из легко доступных ортогонально защищенных основных аминокислот. Схема 5- 23009294 Частично защищенные формы антагонистических пептидов В 1, таких как перечислены в табл. 3(SEQ ID NONO: 5-60), могут быть конъюгированы с молекулами ПЭГ при использовании аналогичных способов. В одном варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, боковые цепи аминов частично защищенных пептидов 5 с замаскированы трет-бутилкарбамоильными (Вос) группами, и полученные в результате пептиды реагируют с любым из ранее описанных альдегидов ПЭГ в органических растворителях, таких как 1,2-дихлорэтан (DCE), N,N-диметилформамид (ДМФ) или их смеси. Образование промежуточного имина можно ускорить добавлением дегидратирующего агента, такого как порошковые 4 молекулярные сита. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1-24 ч полученный в результате имин восстанавливают добавлением 1-4 эквивалентов триацетоксиборогидрида натрия или цианоборогидрида натрия. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, могут быть проведены при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 60 С. Предпочтительно, когда реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 50 С. Более предпочтительно, когда реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при температуре от приблизительно 35 С до приблизительно 45 С. Большинство реакций с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при комнатной температуре. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, боковые цепи аминов частично защищенных пептидов 5 с замаскированы трет-бутилкарбамоильными (Вос) группами, и полученные в результате пептиды реагируют с любым из ранее описанных реагентов на основе N-гидроксисукцинимида ПЭГ или п-нитрофенилового эфира ПЭГ в органических растворителях, таких как 1,2 дихлорэтан (DCE), N,N-диметилформамид (ДМФ), дихлорметан, N-метилпирролидин (NMP) или их смеси. Активированные сложные эфиры ПЭГ могут быть либо монофункциональными, либо линейными бифункциональными вариантами, оба их которых коммерчески доступны у таких производителей, как Nektar или NOF. Кроме того, разветвленный полифункциональный активированный ПЭГ сложный эфир, содержащий 3-6 гидроксисукцинимидных или нитрофенилэфирных групп, особенно подходит для получения конъюгатов, соответствующих настоящему изобретению. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, могут быть проведены при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 60 С при времени реакции, лежащим в интервале от приблизительно 4 ч до приблизительно 10 дней. Предпочтительно, когда реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 50 С при времени реакции, лежащим в интервале от приблизительно 12 ч до приблизительно 5 дней. Более предпочтительно, когда реакции с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при температуре от приблизительно 35 С до приблизительно 45 С при времени реакции, лежащим в интервале от приблизительно 1 до приблизительно 5 дней. Большинство реакций с частично защищенными пептидами, такими как 5 с, как представлено на схеме 5, могут быть проведены при комнатной температуре при времени реакции, лежащим в интервале от приблизительно 1 до приблизительно 4 дней. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления удаление защитных групп боковой цепи, как представлено на схеме 5, может быть проведено при температуре от приблизительно 20 С до приблизительно 60 С. Данную реакцию можно осуществить в совместимом растворителе, таком как дихлорметан, используя от приблизительно 5% трифторуксусной кислоты (ТФА) до 50% ТФА по объему. Предпочтительно, когда вызываемое кислотой удаление защитной группы, как представлено на схеме 5, может быть проведено при температуре от приблизительно 0 С до приблизительно 40 С при использовании от приблизительно 10 до приблизительно 25% ТФА по объему. Более предпочтительно, когда вызываемое кислотой удаление защитной группы, как представлено на схеме 5, может быть проведено при температуре от приблизительно 0 С до приблизительно 25 С при использовании от приблизительно 10 до приблизительно 20% ТФА по объему в дихлорметане. Наиболее предпочтительно, когда вызываемое кислотой удаление защитной группы, как представлено на схеме 5, может быть проведено при комнатной температуре при использовании приблизительно 20% ТФА по объему в дихлорметане. В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления продукты 5d, представленные на схеме 4, могут быть очищены ВЭЖХ (высокоэффективной хроматографией) с обращенной фазой, эксклюзионной хроматографией по размеру, ионообменной хроматографией или мембранным диализом. Более предпочтительно, когда можно использовать две или более из вышеупомянутых методик либо в комбинации, либо последовательно, чтобы получить очищенные конъюгаты, соответствующие настоящему изобретению.- 24009294 В другом варианте осуществления способа, представленного на схеме 5, в сочетании с любым из выше- или нижеописанных вариантов осуществления способ очистки осуществляют больше одного раза. Производные. В данном контексте рассматривают также производные пептидов и/или конъюгированных пептидов, соответствующих настоящему изобретению. Данные производные могут дополнительно улучшать растворимость, всасывание, биологический полупериод существования и т.п. конъюгированных с носителем или ПЭГ пептидов, описанных в данном контексте. Введенные группы могут альтернативно элиминировать или ослаблять нежелательные свойства пептидов и/или конъюгированных пептидов, описанных в данном контексте. Иллюстративные производные включают конъюгированные с носителем или ПЭГ пептиды, в которых: 1. Пептиды и/или конъюгированные пептиды либо их какая-либо часть является циклической. Например, пептидная часть пептида и/или конъюгированного пептида может быть модифицирована так,чтобы она содержала два или более остатков цистеина (например, в пептидильном линкере), которая могла бы быть циклизована путем формирования дисульфидной связи. В плане цитирования ссылок относительно получения циклизованных производных см. WO 00/24782. 2. Пептид и/или конъюгированный с носителем или ПЭГ пептид перекрестно сшит или сделан способным к перекрестному сшиванию молекул. Например, пептидная часть конъюгированного пептида может быть модифицирована так, чтобы она содержала один остаток Cys и, таким образом, была способна к формированию межмолекулярной дисульфидной связи с подобной молекулой. 3. Одна или более пептидильных [-C(O)NR-] связей (пептидных связей) замеш,ена непептидильной связью. Иллюстративные непептидильные связи представлены -СН 2-карбаматом [-CH2-OC(O)NR-], фосфонатом, -СН 2-сульфонамидом [-CH2-S(O)2NR-], мочевиной [-NHC(O)NH-], -СН 2-вторичным амином и алкилированным пептидом [-C(O)NR6-], где R6 означает низшие алкилы. 4. N-концевой остаток цистеина конъюгированного пептида в X1 может быть замещен N-концевой дериватизирующей группой. Иллюстративные N-концевые дериватизирующие группы включают -NHR1,где R1 означает моноалкил. Дериватизацию функциональными агентами используют для перекрестного сшивания конъюгированных с носителем пептидов или их функциональных производных с нерастворимой в воде поддерживающей матрицей или другими макромолекулярными носителями. Обычно используемые перекрестносшивающие агенты включают, например, 1,1-бис(диазоацетил)-2-фенилэтан, глутаральдегид, N-гидроксисукцинимидные сложные эфиры, например, эфиры 4-азидосалициловой кислоты, гомобифункциональные имидоэфиры, включая дисукцинимидиловые эфиры, такие как 3,3'-дитио-бис-(сукцинимидилпропионат) и бифункциональные малеимиды, такие как бис-N-малеимидо-1,8-октан. Дериватизирующие агенты, такие как метил-3-[(п-азидофенил)дитиопропиоимидат, дают фотоактивируемые промежуточные продукты, которые способны образовывать перекрестные связи в присутствии света. Альтернативно для иммобилизации белка используют реакционные нерастворимые в воде матрицы, такие как углеводы, активированные цианогенбромидом, и реакционные субстраты, описанные в ПатентахСША NoNo 3969287, 3691016, 4195128, 4247642, 4229537 и 4330440. Углеродные (олигосахаридные) группы легко можно присоединить к центрам, известным как центры гликозилирования белков. Как правило,О-связанные олигосахариды присоединены к остаткам серина (Ser) или треоинина (Thr), тогда как Nсвязанные олигосахариды присоединены к остаткам аспарагина (Asn), когда они являются частью последовательности Asn-Aaa-Ser/Thr, где Ааа может быть любой аминокислотой за исключением пролина. Ааа предпочтительно означает одну из девятнадцати природных аминокислот, отличных от пролина. Структуры N-связанных или О-связанных олигосахаридов и сахарных остатков, обнаруженных в каждом типе,различны. Одним типом сахара, который обычно обнаруживают на обоих, является N-ацетилнейраминовая кислота (называемая сиалиловой кислотой). Сиаловая кислота обычно является концевым остатком обоих, как N-связанных, так и О-связанных олигосахаридов и, вследствие своего отрицательного заряда, может обусловливать кислые свойства гликозилированного конъюгированного пептида. Данный центр(ы) могут быть введены в линкер конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих изобретению. Такие центры могут быть дополнительно гликозилированы синтетическими или полусинтетическими способами, известными в области техники. Другие возможные модификации включают гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп остатков серила или треонила, окисление атома серы в цистеине, метилирование -аминогрупп боковых цепей лизина, аргинина и/или гистидина (см. монографию Creighton, Proteins:Structure and Molecule Properties (Белки, структурные и молекулярные свойства), W. H. FreemanCo.,San Francisco, с. 79-86 (1983. Если в данном контексте не указано иначе, синтез пептидов и/или конъютированных пептидов,описанных в данном контексте, включающий получение соответствующих производных аминокислот,их активацию и связывание с образованием пептидов, и способы очистки пептидов и определения их чистоты включены в общую часть знаний по химии пептидов, как в основном описано в монографииHouben-Weyl "Methoden der Organischen Chemie" (Методы органической химии), т. 16, части I и II, (1974) для синтеза в растворенной фазе. Для синтеза твердофазным методом в области техники также известны подходящие методики, которые включают описанные в монографии Merrifield, Chem. Polypeptides (Хи- 25009294 мия полипептидов), с. 335-361 (под ред. Katsoyannis и Panayotis), (1973); статьях Merrifield, J. Am. Chem.Young, Solid Phase Peptide Synthesis (Твердофазный синтез пептидов), (1969); Патенте США No. 3941763; работах Finn et al., The Proteins (Белки), (3 изд.), т. 2, с. 105-253, (1976) и Erickson et al., The Proteins (Белки), (3 изд.), т. 2, с. 257-527, (1976). Химик, компетентный в области синтеза пептидов, мог бы синтезировать описанные пептиды стандартными методами в растворе или ручными либо автоматизированными твердофазными методами. Твердофазный синтез является предпочтительной методикой получения отдельных пептидов вследствие его экономической эффективности. Фармацевтические композиции Общее. Настоящее изобретение представляет также способы применения фармацевтических композиций соответствующих изобретению пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов, например, для предупреждения или лечения воспаления и боли (включая, но без ограничения перечисленным,воспалительную боль и ассоциированную гипералгезию и аллодинию). Пептиды и/или конъюгированные с носителем пептиды, соответствующие изобретению также имеют терапевтическую ценность в плане предупреждения или лечения других болевых состояний, ассоциированных или опосредованных активацией В 1, включая, но без ограничения перечисленным, таламический болевой синдром, диабет,токсины и химиотерапию, септический шок, артрит, смешанный сосудистый и несосудистый синдромы,общее воспаление, артрит, ревматические заболевания, волчанку, остеоартрит, воспалительные нарушения кишки, воспалительные глазные нарушения, воспалительные или нестабильные нарушения мочевого пузыря, псориаз, кожные болезни с воспалительными компонентами, солнечные ожоги, кардит, воспалительную болезнь кишки, дерматит, миозит, неврит, коллагеновые сосудистые заболевания, хронические воспалительные состояния, повреждение или дисфункцию эпителиальной ткани, простой герпес, диабетическую невропатическую боль, послегерпетическую невралгию, каузалгию, симпатически поддерживаемую боль, синдромы деафферентации, головную боль напряжения, стенокардию, мигрень, боль при хирургических операциях, нарушения висцеральной подвижности в респираторных, мочеполовых, желудочно-кишечных или сосудистых областях, раны, ожоги, аллергический ринит, астму, аллергические кожные реакции, зуд, витилиго, общие желудочно-кишечные нарушения, колит, изъязвление желудка,рак двенадцатиперстной кишки или вазомоторный либо аллергический ринит. Изобретение представляет также применение пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих изобретению, для предупреждения или лечения острой боли, зубной боли, боли в спине, боли в нижнем отделе спины, боли при травме, боли при хирургических операциях, боли, появляющейся в результате ампутации или абсцесса, каузалгии, демиелинизирующих заболеваний, невралгии тройничного нерва, рака, хронического алкоголизма, инсульта, таламического болевого синдрома, диабета, синдрома приобретенного иммунодефицита ("СПИДа"), токсинов и химиотерапии, общей головной боли, мигрени, кластерной головной боли, смешанного сосудистого и несосудистого синдромов, головной боли напряжения, общего воспаления, артрита, ревматических заболеваний, волчанки, остеоартрита,воспалительных нарушений кишки, воспалительных глазных нарушений, воспалительных или нестабильных нарушений мочевого пузыря, псориаза, кожных болезней с воспалительными компонентами,солнечных ожогов, кардита, дерматита, миозита, неврита, коллагеновых сосудистых заболеваний, хронических воспалительных состояний, воспалительной боли и ассоциированной гипералгезии и аллодинии, невропатической боли и ассоциированной гипералгезии и аллодинии, диабетической невропатической боли, каузалгии, симпатически поддерживаемой боли, синдромов деафферентации, астмы, аллергического ринита, повреждения или дисфункции эпителиальной ткани, простого герпеса, послегерпетической невралгии, нарушений висцеральной подвижности в респираторных, мочеполовых, желудочнокишечных или сосудистых областях, ран, ожогов, аллергических кожных реакций, зуда, витилиго, общих желудочно-кишечных нарушений, колита, изъязвления желудка, рака двенадцатиперстной кишки и бронхиальных нарушений. Соответственно настоящее изобретение также относится к применению одного или более пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих изобретению, для изготовления лекарственного средства для лечения нарушения, такого как острая боль, зубная боль, боль в спине, боль в нижнем отделе спины, боль при травме, боль при хирургических операциях, боль, появляющаяся в результате ампутации или абсцесса, каузалгия, демиелинизирующие заболевания, невралгия тройничного нерва, рак, хронический алкоголизм, инсульт, таламический болевой синдром, диабет, синдром приобретенного иммунодефицита ("СПИД"), токсины и химиотерапия, общая головная боль, мигрень, кластерная головная боль, смешанный сосудистый и несосудистый синдром, головная боль напряжения, общее воспаление, артрит, ревматические заболевания, волчанка, остеоартрит, воспалительные нарушения кишки, воспалительные глазные нарушения, воспалительные или нестабильные нарушения мочевого пузыря,псориаз, кожные болезни с воспалительными компонентами, солнечные ожоги, кардит, дерматит, миозит, неврит, коллагеновые сосудистые заболевания, хронические воспалительные состояния, воспалительная боль и ассоциированная гипералгезия и аллодиния, невропатическая боль и ассоциированная гипералгезия и аллодиния, диабетическая невропатическая боль, каузалгия, симпатически поддерживаемая боль, синдромы деафферентации, астма, аллергический ринит, повреждение или дисфункция эпите- 26009294 лиальной ткани, простой герпес, послегерпетическая невралгия, нарушения висцеральной подвижности в респираторных, мочеполовых, желудочно-кишечных или сосудистых областях, раны, ожоги, аллергические кожные реакции, зуд, витилиго, общие желудочно-кишечные нарушения, колит, изъязвление желудка, рак двенадцатиперстной кишки и бронхиальные нарушения. Как используют в данном контексте, "терапия" или "лечение" представляет собой подход к получению благоприятного или желательного клинических результатов. Для целей данного изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не ограничены, одним или более из следующих параметров: улучшение или облегчение любого аспекта боли и/или воспаления, включая острую, хроническую, воспалительную, невропатическую или боль после хирургического вмешательства. Для целей данного изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают,но без ограничения один или более из следующих факторов: в том числе снижение тяжести, облегчения одного или более симптомов, ассоциированных с болью и/или воспалением, включая любой из аспектов боли и/или воспаления (таких как сокращение продолжительности боли и/или воспаления и/или уменьшения чувствительности либо ощущения боли). Данные фармацевтические композиции или лекарственные средства могут быть предназначены для введения посредством инъекции или для перорального, легочного, назального, чрескожного или других форм введения. В целом изобретение охватывает фармацевтические композиции, содержащие эффективные количества по меньшей мере одного пептида и/или по меньшей мере одного конъюгированного с носителем пептида, соответствующего изобретению (в количествах, эффективных для предупреждения,облегчения или устранения боли или любых других медицинских состояний, представленных в данном контексте) вместе с фармацевтически приемлемыми разбавителями, наполнителями, консервантами, солюбилизаторами, эмульгаторами, вспомогательными компонентами и/или носителями. Данные композиции включают разбавители с различным содержанием буферов (например, трис-HCl, ацетатного, фосфатного), рН и ионной силой, дополнительные компоненты, такие как детергенты и солюбилизирующие агенты (например, Твин 80, Полисорбат 80), антиоксиданты (например, аскорбиновую кислоту, метабисульфит натрия), консерванты (например, тимеросол, бензиловый спирт) и наполняющие субстанции(например, лактозу, маннит); введение материала в гранулированные препараты пептидов, конъюгированных с полимерным носителем, таким как полимолочная кислота, полигликолевая кислота и т.п., или в липосомы. Можно также использовать гиалуроновую кислоту, и это может дать эффект, способствующий увеличению продолжительности действия в кровотоке. Данные композиции могут, кроме того, влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость клиренса in vivo конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих настоящему изобретению. См. например,Remington's Pharmaceutical Sciences (Справочник по фармацевтическим наукам Ремингтона), 18 изд.,Mack Publishing Co., Easton, PA, с. 1435-1712, (1990), который в данном контексте включен в виде ссылки. Композиции можно получить в жидкой форме или в виде высушенного порошка (такого как лиофилизированная форма). Предусмотрены также имплантируемые препараты с замедленным высвобождением, а также чрескожные препараты. Пероральные дозированные формы. Для применения в данном контексте предусмотрены пероральные твердые дозированные формы, которые в основном описаны в главе 89 Remington's PharmaceuticalSciences (Справочника по фармацевтическим наукам Ремингтона), см. выше, который в данном контексте включен в виде ссылки. Твердые дозированные формы включают таблетки, капсулы, пилюли, пастилки или лепешки, облатки или пеллеты. Кроме того, для изготовления настоящих композиций можно использовать липосомальную или протеиноидную инкапсуляцию (такую как, например, протеиноидные микросферы, описанные в Патенте США No. 4925673). Может быть использована липосомальная инкапсуляция, и липосомы могут быть дериватизированы различными полимерами (см. например, патент США No. 5013556). Описание возможных твердых дозированных форм приведено в главе 10, написанной Marshall K., в монографии Modern Pharmaceutics (Современные фармацевтические препараты), под ред. G. S. Banker and С. Т. Rhodes, (1979), включенной в данном контексте в виде ссылки. Как правило,препарат будет включать конъюгированный с носителем пептид, соответствующий изобретению, а также инертные ингредиенты, которые обеспечивают защиту от среды желудка и высвобождение конъюгированного с носителем пептида в кишке. Специально предусмотрены также пероральные дозированные формы самих пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих изобретению. В этом плане при необходимости пептиды и/или конъюгированные с носителем пептиды могут быть химически модифицированы таким образом, чтобы пероральная доставка была эффективной. Возможно также использование соли модифицированной алифатической аминокислоты, такой как N-(8-[2-гидроксибензоил]амино)каприлатнатрия(SNAC), в качестве носителя для усиления всасывания конъюгированных с носителем пептидов, соответствующих изобретению. См. Патент США No. 5792451 под названием "Oral Drug Delivery Composition and Methods" (Композиция для пероральной доставки лекарственных препаратов и способы). Пептиды и/или конъюгированные с носителем пептиды, соответствующие изобретению, могут быть включены в препарат в виде тонких мультичастиц в форме гранул или пеллет с размером частиц приблизительно один миллиметр. Препарат материла для введения в виде капсул также может быть по- 27009294 рошком в форме легко спрессованных вставок или даже в форме таблеток. Терапевтический препарат можно изготовить прессованием. Могут быть включены все красители и вкусовые агенты. Например, можно получить пептид и/или конъюгированный с носителем пептид или его любое производное (например, посредством инкапсуляции в липосомах или микросферах), а затем дополнительно ввести в пищевой продукт, такой как охлажденный напиток, содержащий красители и вкусовые агенты. Можно разбавить или увеличить объем пептида и/или конъюгированного с носителем пептида, соответствующего изобретению, инертным материалом. Данные разбавители могли бы включать углеводы,в частности, маннит, -лактозу, безводную лактозу, целлюлозу, сахарозу, модифицированные декстраны и крахмал. Некоторые неорганические соли могут быть также использованы в качестве наполнителей,включая трифосфат кальция, карбоната магния и хлорид натрия. Ряд коммерчески доступных разбавителей представлен Fast-Flo, Emdex, STA-Rx 1500, Emcompress и Avicell. В состав терапевтического препарата в твердой дозированной форму могут быть включены разрыхлители. Материалы, используемые в качестве разрыхлителей, включают, но без ограничения перечисленным, крахмал, в том числе коммерчески производимый разрыхлитель на основе крахмала Explotab. Можно также использовать гликолят крахмала натрия, Амберлит, карбоксиметилцеллюлозу натрия,ультрамилопектин, альгинат натрия, апельсиновую цедру, кислую карбоксиметилцеллюлозу, натуральную губку и бентонит. Другую форму разрыхлителей представляют нерастворимые катионообменные смолы. Порошки камедей можно использовать в качестве разрыхлителей и в качестве связующих агентов, и они могут включать такие порошки камедей, как агар, карайю или трагакант. Альгиновую кислоту и ее натриевую соль также используют в качестве разрыхлителей. Можно использовать связующие агенты для того, чтобы удерживать вместе компоненты фармацевтической композиции для образования твердой таблетки, и они включают материалы из натуральных продуктов, такие как акация, трагакант, крахмал и желатин. Другие агенты включают метилцеллюлозу(МС), этилцеллюлозу (ЕС) и карбоксиметилцеллюлозу (СМС). Как поливинилпирролидон (PVP), так и гидроксипропилметилцеллюлозу (НРМС) можно использовать в спиртовых растворах для грануляции терапевтического агента. В препарат может быть включен антифрикционный агент для предупреждения прилипания в процессе изготовления. Скользящие агенты могут быть использованы как слой между терапевтическим препаратом и стенкой штампа, и они могут включать, но без ограничения перечисленным стеариновую кислоту, в том числе ее магниевые и кальциевые соли, политетрафторэтилен (PTFE), жидкий парафин, растительные масла и воска. Могут быть также использованы растворимые смазывающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия, лаурилсульфатмагния, полиэтиленгликоль различных молекулярных масс, Карбовакс 4000 и 6000. Возможно добавление скользящих агентов, которые могли бы улучшить свойства текучести конъюгированного с носителем пептида при изготовлении и с целью способствовать прессованию. Данные скользящие агенты могут включать крахмал, тальк, пирогенный оксид кремния и гидратированный силикоалюминат. Чтобы помочь растворению пептида и/или конъюгированного с носителем пептида, соответствующего изобретению, в водной среде, можно добавить поверхностно-активное вещество в качестве смачивающего агента. Данные поверхностно-активные вещества могут включать анионные детергенты, такие как лаурилсульфат натрия, диоксилсульфосукцинат натрия и диоктилсульфонат натрия. Могут быть использованы катионные детергенты, и они могут включать хлорид бензалкония или хлорид бензетония. Перечень потенциальных неионных детергентов, которые могут быть включены в препарат в качестве поверхностно-активных веществ, содержит лауромакрогол 400, полиоксил 40 стеарат, полиоксиэтилен,гидрогенизированное касторовое масло 10, 50 и 60, глицеролмоностеарат, полисорбат 40, 60, 65 и 80,сложный эфир сахарозы и жирной кислоты, метил целлюлозу и карбоксиметил целлюлозу. Данные поверхностно-активные вещества могут присутствовать в препарате либо в виде монокомпонента, либо в виде смеси в различных соотношениях. В препарат могут быть также включены вспомогательные агенты для усиления всасывания пептидов и/или конъюгированного с носителем пептида. Вспомогательные агенты, потенциально обладающие данным свойством, включают различные жирные кислоты, такие как, например, олеиновая кислота, линолевая кислота и линоленовая кислота. Может потребоваться препарат с контролируемым высвобождением. Пептид и/или конъюгированный с носителем пептид, соответствующий изобретению, могут быть введены в инертную матрицу, которая обеспечивает высвобождение путем механизмов либо диффузии, либо вытекания, например в камеди. В препарат можно также ввести медленно разрушающиеся матрицы, например, альгинаты или полисахариды. Другую форму пептида и/или конъюгированного с носителем пептида, соответствующего изобретению, с контролируемым высвобождением получают способом на основе терапевтической системы Oros (фирмы Alza Corp.), т.е. лекарственный препарат заключают в полупроницаемую мембрану,которая позволяет воде проникнуть и вытолкнуть лекарственный препарат через маленькое отверстие вследствие осмотических эффектов. Некоторые энтеросолюбильные покрытия также обладают эффектом- 28009294 задержанного высвобождения. Легочные формы доставки. В данном контексте предусмотрена также легочная доставка фармацевтической композиции, соответствующей изобретению. Пептид и/или конъюгированный с носителем пептид (или его производные) доставляют в легкие млекопитающего путем вдыхания и перехода через эпителиальную выстилку легких в кровоток. Сообщения, относящиеся к легочной доставке макромолекул,которые могут быть полезны в этом плане, включают статьи Adjei et al., Pharma. Res., т. 7, с. 565-569,(1990); Adjei et al., Intematl. J. Pharmaceutics, т. 63, с. 135-144 (1990) (по ацетату лейпролида); Braquet etDelivery II, Keystone, Colorado (1990) (по рекомбинантному гормону роста человека); Debsetal., J. Immunol., т. 140, с. 3482-3488 (1988) (по интерферону- и фактору некроза опухолей а) и Патент США No. 5284656 (по гранулоцитарному колониестимулирующему фактору). Для применения изобретения на практике предусмотрен широкий круг медицинских устройств,разработанных для легочной доставки терапевтических продуктов, включая, но без ограничения перечисленным, распылители, дозированные ингаляторы и порошковые ингаляторы, все из которых знакомы специалистам в области техники. Некоторые конкретные примеры коммерчески производимых устройств, пригодных для практической реализации изобретения, представляют собой распылитель Ultravent, производимый фирмой Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Missouri; распылитель Acorn II, производимый фирмой Marquest Medical Products, Englewood, Colorado; дозированный ингалятор Ventolin, производимый фирмой Glaxo Inc., Research Triangle Park, North Carolina, и порошковый ингалятор Spinhaler, производимый фирмой Fisons Corp., Bedford, Massachusetts. Для всех данных устройств требуется использование препаратов, пригодных для отмеривания описанных в данном контексте пептидов и/или конъюгированных с носителем пептидов и/или их производных. Как правило, каждый препарат специфичен в отношении типа используемого устройства и может кроме разбавителей, наполнителей, вспомогательных агентов и/или носителей, используемых в терапии,включать применение соответствующего материала пропеллента. Фармацевтически приемлемые носители для данных легочных композиций включают углеводы, такие как трегалоза, маннит, ксилит, сахароза, лактоза и сорбит. Другие ингредиенты для применения в препаратах могут включать DPPC, DOPE, DSPC и DOPC. Можно использовать природные или синтетические поверхностно-активные вещества. Возможно использование ПЭГ (даже отдельно от его применения в дериватизации пептида). Могут быть также использованы декстраны, такие как циклодекстран,соли желчных кислот, целлюлоза и производные целлюлозы. Аминокислоты также могут быть использованы, например, в буферном составе. Кроме того, предусмотрено применение липосом, микрокапсул или микросфер, аддуктов или других типов носителей. Препараты, пригодные для применения с распылителем, как струйного, так и ультразвукового типа,будут, как правило, включать описанный пептид и/или конъюгированный с носителем пептид, растворенный в воде в концентрации приблизительно 0,1-25 миллиграмм (мг) биологически активного агента/миллилитр (мл) раствора. Препарат может также включать буфер и простой сахар (например, для стабилизации пептида и регуляции осмотического давления). Препарат для распыления может также содержать поверхностно-активное вещество для снижения или предупреждения поверхностной индуцируемой агрегацией белка, вызываемой распылением раствора при формировании аэрозоля. Препараты для применения с дозированным ингаляционным устройством будут в основном включать тонко диспергированный порошок, содержащий пептид и/или конъюгированный с носителем пептид, суспендированный в пропелленте с помощью поверхностно-активного вещества. Пропеллент может быть любым принятым материалом, используемым для данной цели, таким как хлорфторуглерод, гидрохлорфторуглерод, гидрофторуглерод или углеводородом, включая трихлорфторметан, дихлорфторметан,дихлортетрафторэтанол и 1,1,1,2-тетрафторэтан или их комбинации. Подходящие поверхностноактивные вещества включают сорбит-триолеат и соевый лецитин. В качестве поверхностно-активного вещества можно также использовать олеиновую кислоту. Препараты для дозирования из порошкового ингаляционного устройства будут включать тонко диспергированный сухой порошок, содержащий описанные пептиды и/или конъюгированные с носителем пептиды, и может также включать инертный наполнитель, такой как лактоза, сорбит, сахароза, маннит, трегалоза или ксилит в количествах, которые облегчают рассеивание порошка из устройства, например, от 50 до 90% от массы препарата. Назальные дозированные формы. Предусмотрена также назальная доставка пептида и/или конъюгированных с носителем пептидов. Назальная доставка пептиду и/или конъюгированным с носителем пептидам, соответствующим изобретению, проходить в кровоток непосредственно после введения терапевтического продукта в нос без необходимости депонирования продукта в легком. Препараты для назальной доставки включают препараты с декстраном или циклодекстраном. Предусмотрена также дос- 29009294 тавка путем транспорта через другие слизистые оболочки. Доставка с помощью насоса. В ряде вариантов осуществления настоящего изобретения предусмотрена локализованная доставка пептидов и/или конъюгированных пептидов, соответствующих настоящему изобретению, для лечения или предупреждения В 1-опосредованных нарушений. Одним из способов локализованной доставки, предусматриваемым изобретением, является инъекция агента в локальную область, в которой действует агент. Другой способ локализованной доставки включает введение катетера, чтобы направить лекарственный препарат(ы) в желательную область тела, и использование насоса для того, чтобы заставить лекарственный препарат(ы) дигаться через катетер. Насосы для лекарственных препаратов для наружного ношения, используемые с имплантированным внутри катетером хорошо известны специалистам в данной области. Еще один способ локализованной доставки включает имплантируемые устройства для доставки лекарственных препаратов. Имплантируемые насосы, разработанные, чтобы преодолеть недостатки методик, в которых используют системы наружного насоса и катетера, хорошо известны специалистам в данной области. Имплантируемые насосы для доставки лекарственных препаратов часто включают резервуар для хранения лекарственного препарата, инъекционный порт для обеспечения инъекции свежих лекарственных препаратов, а также удаления старого лекарственного препарата из резервуара с регулярными интервалами и (необязательно) катетер для доставки лекарственного препарата в желательную область. Предпочтительные имплантируемые устройства включают, но не ограничены, имплантатом Duros(фирма Adza Corporation, Mountain View, CA), инфузионной системой SynchroMed I или II Infusion System (фирмы Medtronic, Inc., Minneapolis) и т.п. Дополнительно (или альтернативно) настоящее изобретение представляет пептиды и/или конъюгированные пептиды для применения в любом из различных препаратов с медленным или задержанным высвобождением или в препаратах микрочастиц, ранее упомянутых выше и/или известных компетентному специалисту. Дозировки. Эффективные дозировки пептидов и/или конъюгированных пептидов, соответствующих изобретению, предназначенные для введения, можно определить с помощью процедур, хорошо известных специалистам в данной области, которые направлены на такие параметры, как полупериод биологического существования, биодоступность и токсичность. В предпочтительных вариантах осуществления специалист в области техники определяет диапазон эффективных доз с использованием данных рутинных исследований in vitro и in vivo, хорошо известных в области техники. Например, анализы клеточных культур in vitro, такие как иллюстративные анализы, описанные в примере 6 ниже, будут представлять данные, на основании которых специалист в области техники может легко установить среднюю ингибирующую концентрацию (IC) или среднюю эффективную концентрацию (ЕС) пептида или конъюгированного пептида, необходимую для блокирования некоторого количества В 1-индуцированной активности (например, 50%, IC50; или 90%, IC90). Затем специалист в области техники и может выбрать подходящие дозы, используя фармакокинетические данные, полученные на основании рутинных моделей на животных, таких как иллюстративные фармакокинетические данные, описанные в примере 9 ниже, чтобы получить минимальную концентрацию в плазме (Cmin) пептида, которая равна или превосходит установленное значение IC. Схема дозирования, включенная в способ лечения указанного заболевания или нарушения, будет определена лечащим врачом с учетом различных факторов, которые модифицируют действие терапевтических агентов, таких как возраст, состояние, масса тела, пол и диета пациента, тяжесть состояния, которое лечат, время введения и другие клинические факторы. Как правило, суточная схема должна лежать в интервале 1,0-10000 микрограмм (мкг) пептида и/или конъюгированного с носителем пептида/килограмм (кг) массы тела,предпочтительно 1,0-1000 мкг/килограмм (кг) массы тела и наиболее предпочтительно 1,0-150 мкг/килограмм (кг) массы тела. Комбинированная терапия. В другом аспекте настоящее изобретение включает способ лечения (или в других вариантах осуществления предупреждения) боли и/или воспаления либо любого состояния или нарушений, ассоциированного с активацией В 1, заключающийся во введении количества пептида и/или конъюгированного пептида, соответствующего настоящему изобретению, и количества NSAID. Термин"NSAID" относится к нестероидному противовоспалительному соединению. Относительные количеств и соотношения пептидного антагониста и/или конъюгированного пептидного антагониста и NSAID могут варьировать. В некоторых вариантах осуществления будут вводить достаточно пептида(ов) и/или конъюгированного пептида(ов), чтобы иметь возможность уменьшить нормальную дозу NSAID, требующуюся для того, чтобы вызвать ослабление боли или воспаления в той же мере. В некоторых вариантах осуществления достаточное количество пептида(ов) и/или конъюгированного пептида(ов), соответствующего настоящему изобретению, будет введено так, чтобы обеспечить возможность снизить нормальную дозуNSAID, требующуюся для того, чтобы вызвать ослабление боли или воспаления в той же мере, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по менышей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере при- 30