Мотивы химических модификаций для ингибиторов и миметиков мкрнк

МОТИВЫ ХИМИЧЕСКИХ МОДИФИКАЦИЙ ДЛЯ ИНГИБИТОРОВ И МИМЕТИКОВ мкРНК Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам с химическими характеристиками,обеспечивающими улучшенную стабильность, активность и/или токсичность в отношении их применения в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК. Перекрестная ссылка на родственные заявки По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США 61185033, поданной 8 июня 2009 г., которая включена в качестве ссылки в полном объеме. Область изобретения Настоящее изобретение относится к химическим мотивам ингибиторов и миметиков микроРНК(мкРНК или miR), а конкретно к химически модифицированным смысловым и антисмысловым полинуклеотидам мкРНК, преимуществами которых являются активность, стабильность и/или токсичность при введении пациенту. Предшествующий уровень техники МикроРНК (miR) участвуют в ряде биологических процессов, включая регуляцию и поддержание сердечной функции (см., Chien K.R., Molecular Medicine: MicroRNAs and the tell-tale heart, Nature 447,389-390 (2007. Таким образом, miR представляют собой относительно новый класс терапевтических мишеней для таких состояний, как, наряду с другими, гипертрофия сердца, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность, повреждение сосудов и патологический сердечный фиброз. miR представляют собой небольшие, не кодирующие белок РНК, длиной приблизительно от 18 до приблизительно 25 нуклеотидов, действующие как репрессоры мРНК-мишеней, способствуя их разрушению, когда их последовательности полностью комплементарны, или посредством ингибирования трансляции, когда их последовательности содержат несоответствия. Зрелая цепь мкРНК, когда она связана со своей РНК-мишенью за счет комплементарности пар оснований, встроена в индуцируемый РНК-комплекс сайленсинга (RISC). На функцию мкРНК можно воздействовать терапевтически с помощью антисмысловых полинуклеотидов или полинуклеотидов, которые имитируют функцию мкРНК ("миметик мкРНК"). Однако если полинуклеотиды вводят в интактные клетки, их атакуют и разрушают нуклеазы, что приводит к потере активности. Хотя в попытке избежать их разрушения получены аналоги полинуклеотидов, например,посредством замен в 2' положении (В. Sproat et al., Nucleic Acids Research 17 (1989), 3373-3386), модификации часто влияют на активность полинуклеотида в отношении его планируемого биологического действия. Такая сниженная активность в каждом случае может быть результатом неспособности модифицированного полинуклеотида формировать стабильный дуплекс с РНК-мишенью и/или исчезновения взаимодействия с клеточным аппаратом. Для эффективного воздействия на функцию мкРНК в терапевтическом смысле необходимы химические характеристики или мотивы для улучшенных характеристик стабильности, активности и/или токсичности ингибиторов мкРНК и миметиков мкРНК. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащим химические характеристики,обеспечивающие улучшенную стабильность, активность и/или токсичность при использовании их в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК. В одном из аспектов изобретение относится к полинуклеотиду с одной или несколькими модификациями нуклеотидов в положениях 2' и по меньшей мере с одной концевой или "кэпирующей" модификацией. Мотив химических модификаций может устранить необходимость в целиком связанных фосфотиоатными связями полинуклеотидах и/или полноразмерных антисмысловых или смысловых последовательностях мкРНК. Полинуклеотид представляет собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК и, как продемонстрировано в настоящем документе, обеспечивает улучшенную активность по сравнению с немодифицированными полирибонуклеотидами и/или по сравнению с другими возможными модификациями полинуклеотидов. Например, полинуклеотид может представлять собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК с одной или с комбинацией модификаций в положении 2', как описано в настоящем документе, таких как модификации, выбранные из О-алкила (например, О-метила или ОМе), галогена (например, фтора), дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты, а в некоторых вариантах осуществления, по существу, все или все положения 2' нуклеотидов модифицированы. В некоторых вариантах осуществления концевая или кэпирующая модификация может представлять собой 5' и/или 3' фосфотиоатный монофосфат, и/или группу без основания, или другую кэпирующую структуру, как описано в настоящем документе. Полинуклеотид не обязательно должен быть полностью связан фосфотиоатными связями, но там, где такие связи присутствуют, такие связи можно создавать, например, между двумя концевыми нуклеотидами на 5'-конце и двумя концевыми нуклеотидами на 3'-конце. Нуклеотидная последовательность может быть полноразмерной по отношению к зрелой мкРНК или полноразмерной антисмысловой мкРНК (зрелая форма), но в некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит укороченную последовательность мкРНК или укороченную антисмысловую последовательность мкРНК. Такие модифицированные укороченные последовательности могут демонстрировать высокие уровни активности даже при сравнении с более длинными (немодифицированными или модифицированными обычным способом) аналогами. Полинуклеотид может представлять собой антагомир с антисмысловой последовательностью,комплементарной (всем или частям) miR-15b, miR-21, miR-208a или другим, как описано в настоящем документе. Во втором аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции или составу, содержащим полинуклеотид по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтическую композицию можно получить в виде фармацевтически приемлемых форм, включая коллоидную дисперсную систему, макромолекулярный комплекс, нанокапсулу, микросферу, гранулу, эмульсию "маслов-воде", мицеллу, смешанную мицеллу или липосому. Композиция может содержать конъюгаты с холестерином и другими молекулами, такими как направленные лиганды, для доставки полинуклеотида в клетки-мишени млекопитающих. В третьем аспекте изобретение относится к способу лечения пациента с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК. Например, состояние может представлять собой одно или несколько из гипертрофии сердца, инфаркта миокарда, сердечной недостаточности, повреждения сосудов и патологического сердечного фиброза. Такие состояния подвергают лечению, предотвращают или облегчают посредством введения полинуклеотидов и композиций по изобретению. Таким образом, изобретение относится к применению модифицированных полинуклеотидов и композиций по изобретению для лечения состояний, связанных с экспрессией мкРНК или мРНК. Описание чертежей Фиг. 1 представляет собой таблицу, в которой приведены характерные параметры модификаций мкРНК. Представленная последовательность представляет собой антисмысловую последовательность(полноразмерную и укороченную) зрелой miR-15b. Описание сокращений предоставлено в табл. 3. Условное обозначение для каждой иллюстративной РНК включает:мкРНК-мишень (например, 15b); структуру в 2' (О-метил, ОМе; или O-метил и фтор, Me/F; или O-метил и дезокси, Ме/Н; или закрытая нуклеиновая кислота, ЗНК); размер полинуклеотида (FL для полноразмерного или 16-членного олигонуклеотида) и структуру на конце или внутренние связи, включая РО для связанных фосфодиэфиром, PS для связанных фосфотиоатом, PSEO для связанных фосфотиоатом поочередно, PSEC для фосфотиоатного концевого кэпа, структуру без основания и POS для 5' и 3' фосфотиоатного монофосфата. На фиг. 2 представлены результаты тестов in vitro для модифицированных полинуклеотидов на фиг. 1 в клетках HeLa при двух концентрациях, 10 нМ (левый столбец в каждом наборе) и 0,1 нМ (правый столбец в каждом наборе), с использованием анализа с двумя люциферазами. Чем больше значение отношения люцифераз, тем лучше активность ингибитора. Результаты сгруппированы по длине 16 членных и полноразмерных олигонуклеотидов. Химические соединения с наилучшей эффективностью представлены в табл. 4. На фиг. 3 представлены результаты для модифицированных фосфотиоатным монофосфатом полинуклеотидов при прямом сравнении с фосфодиэфирным или фосфотиоатным каркасом при 10 нМ (левый столбец в наборе) и 0,1 нМ (правый столбец в наборе) в анализе с двумя люциферазами. РО связаны фосфодиэфиром, PS связаны фосфотиоатом и POPOS связаны фосфодиэфиром с концевым фосфотиоатным монофосфатом на 3'- и 5'-концах. На фиг. 4 представлен нокаут miR-15b у мышей с полинуклеотидами 5-14 из табл. 5. Определяли избыток miR-15b в печени (левый столбец в наборе) и сердце (правый столбец в наборе) и данные сравнивали с данными мышей с инъекцией физиологического раствора. На фиг. 5 представлено ингибирование miR-208a модифицированными антисмысловыми полинуклеотидами в кардиомиоцитах неонатальных крыс. Результаты на фиг. 5 представляют собой количественную ПЦР для экспрессии МНС. В левом столбце представлены результаты при 100 нМ ингибитора,а в правом столбце представлены результаты при 1 нМ ингибитора. На фиг. 6 представлено ингибирование miR-21 антисмысловыми полинуклеотидами с различными модификациями в анализе с двумя люциферазами. На фиг. 7 представлено распределение четырех различных модифицированных антисмысловых полинуклеотидов miR-15b в ткани in vivo после инъекции мышам в указанных дозах. Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащим химические характеристики,обеспечивающие улучшенную стабильность, активность и/или токсичность в отношении их применения в качестве ингибиторов мкРНК или миметиков мкРНК. Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям и составам, содержащим полинуклеотиды, и к способам лечения пациентов с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК или мРНК. Модифицированные полинуклеотиды. Полинуклеотид содержит одну или несколько модификаций нуклеотидов в положениях 2' и по меньшей мере одну концевую модификацию или "кэп", как подробнее описано ниже. Полинуклеотид представляет собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК и демонстрирует улучшенную активность по сравнению с немодифицированными полирибонуклеотидами и/или по сравнению с другими возможными модификациями полинуклеотидов. Как используется в настоящем документе, ингибитор мкРНК представляет собой полинуклеотид с последовательностью, которая является антисмысловой, комплементарной или частично комплементар-2 022757 ной, как описано в настоящем документе, зрелой одноцепочечной мкРНК или ее части. Миметик мкРНК представляет собой полинуклеотид с последовательностью, соответствующей (идентичной или, по существу, идентичной, как описано в настоящем документе) зрелой одноцепочечной мкРНК или ее части. Полинуклеотид содержит одну или несколько модификаций нуклеотидов (в отношении 2'гидроксила) в положениях 2'. Введение модифицированных в положении 2' нуклеотидов в антисмысловые олигонуклеотиды, например, может увеличить устойчивость олигонуклеотидов к нуклеазам и их термостабильность с комплементарной РНК. Различные модификации в положениях 2' могут быть независимо выбраны из модификаций, обеспечивающих повышенную чувствительность к нуклеазам, без опасности для молекулярных взаимодействий с РНК-мишенью или с клеточным аппаратом. Такие модификации можно выбирать на основании их повышенной активности in vitro или in vivo. В настоящем документе описаны характерные способы определения увеличенной активности (например, IC50) ингибирования мкРНК. В некоторых вариантах осуществления модификацию в положении 2' можно независимо выбирать из О-алкила (который может являться замещенным), галогена, дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты. В определенных вариантах осуществления, по существу, все или все положения 2' нуклеотидов модифицированы, например, в виде независимо выбранных из О-алкила (например, O-метила), галогена(например, фтора), дезокси (Н) и закрытой нуклеиновой кислоты. Например, каждую из модификаций в положении 2' можно независимо выбрать из О-метила и фтора. В характерных вариантах осуществления каждый из пуриновых нуклеотидов содержит 2'-OMe, а каждый из пиримидиновых нуклеотидов содержит 2'-F. В определенных вариантах осуществления от одного до приблизительно пяти положений 2' или приблизительно от одного до приблизительно трех положений 2' оставлены немодифицированными (например, в виде 2'-гидроксилов). Модификации в положении 2' по изобретению также включают небольшие углеводородные заместители. Углеводородные заместители включают алкил, алкенил, алкинил и алкоксиалкил, где алкил(включая алкильную часть алкокси), алкенил и алкинил могут быть замещенными или незамещенными. Алкил, алкенил и алкинил могут представлять собой алкил, алкенил или алкинил от С 1 до C10, такими как С 2 или С 3. Углеводородные заместители могут содержать один, или два, или три неуглеродных атома, которые можно независимо выбирать из N, О и/или S. Модификации в положении 2' могут дополнительно включать алкил, алкенил и алкинил в виде О-алкила, О-алкенила и О-алкинила. Характерные модификации в положении 2' по изобретению включают замены на 2'-O-алкил (С 1-3 алкил, такой как 2'-ОМе или 2'-OEt), 2'-О-метоксиэтил (2'-О-МОЕ), 2'-О-аминопропил (2'-O-АР), 2'-Одиметиламиноэтил (2'-O-DMAOE), 2'-O-диметиламинопропил (2'-O-DMAP), 2'-О-диметиламиноэтилоксиэтил (2'-O-DMAEOE) или 2'-O-N-метилацетамидо (2'-O-NMA). Модификация в положении 2' может представлять собой ОМе во всех остатках нуклеотидов или во всех пуриновых нуклеотидах. В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере одну модификацию 2'-галогеном (например, вместо 2'-гидроксила), такую как 2'-фтор, 2'-хлор, 2'-бром и 2'-йод. В некоторых вариантах осуществления модификация 2'-галогеном представляет собой фтор. Полинуклеотид может содержать от 1 до приблизительно 20 модификаций 2'-галогеном (например, фтором), или от 1 до приблизительно 10, или от 1 до приблизительно 5 модификаций 2'-галогеном (например, фтором). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит все нуклеотиды с 2'-фтором или 2'-фтор на всех пиримидиновых нуклеотидах. В определенных вариантах осуществления группы 2'-фтор являются независимо ди-, три- или неметилированными. Полинуклеотид может содержать одну или несколько модификаций 2'-дезокси (например, Н для 2'гидроксила), но может содержать от 1 до приблизительно 20 модификаций 2'-дезокси, или от 1 до приблизительно 10, или от 1 до приблизительно 5 модификаций 2'-дезокси. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит все нуклеотиды с 2'-дезокси. В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько "конформационно заторможенных" модификаций нуклеозидом с бициклическим сахаром (BSN), которые придают увеличенную термостабильность комплексам, сформированным полинуклеотидом, содержащим BSN,и комплементарной ему цепью микроРНК-мишени. Например, в одном из вариантов осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько остатков закрытых нуклеиновых кислот (LNA). LNA описаны, например, в патентах США 6268490, 6316198, 6403566, 6770748, 6998484, 6670461 и 7034133, которые, таким образом, все в полном объеме включены в качестве ссылки. "Закрытые нуклеиновые кислоты" (LNA) представляют собой модифицированные нуклеотиды или рибонуклеотиды, содержащие дополнительный мостик между 2' и 4' атомами углерода в группе сахара рибозы, что приводит к "закрытой" конформации. В одном из вариантов осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько LNA со структурой, представленной в структуре А. В другом варианте осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько LNA со структурой, представленной в структуре В. В еще одном варианте осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько LNA со структурой, представленной в структуре С. Другие подходящие модификации BSN, которые можно использовать в полинуклеотидах по изобретению, включают модификации, описанные в патентах США 6403566 и 6833361, которые оба полностью включены в настоящий документ в качестве ссылки. В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит приблизительно от 1 до приблизительно 10 закрытых нуклеиновых кислот или от 2 до приблизительно 5 закрытых нуклеиновых кислот. В характерных вариантах осуществления полинуклеотид содержит положения 2', модифицированные в виде 2'-ОМе. Альтернативно, в положении 2' в виде 2'-ОМе модифицированы пуриновые нуклеотиды, при этом пиримидиновые нуклеотиды модифицированы в положении 2' в виде 2'-фтора. Полинуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну концевую модификацию или "кэп". Кэп может представлять собой 5'- и/или 3'-кэпирующую структуру. Термины "кэп" или "концевой кэп" включают химические модификации по любому концу полинуклеотида (в отношении рибонуклеотидов с концами) и включают модификации по связи между двумя последними нуклеотидами на 5'-конце и двумя последними нуклеотидами на 3'-конце. Как описано в настоящем документе, кэпирующая структура повышает устойчивость олигонуклеотида к экзонуклеазам без опасности для молекулярных взаимодействий с РНК-мишенью или клеточным аппаратом. Такие модификации можно выбирать на основании их увеличенной активности in vitro или in vivo. В настоящем документе описаны характерные способы определения увеличенной активности (например, IC50) ингибирования мкРНК. Кэп может находиться на 5'-конце (5'-кэп), или на 3'-конце (3'-кэп), или может присутствовать на обоих концах. В определенных вариантах осуществления 5'- и/или 3'-кэп независимо выбран из фосфотиоатного монофосфата, остатка (группы) без основания, фосфотиоатной связи, 4'-тионуклеотида, карбоциклического нуклеотида, фосфодитиоатной связи, инвертированного нуклеотида или инвертированной группы без основания (2'-3' или 3'-3'), фосфодитиоатного монофосфата и метилфосфонатной группы. Фосфотиоатная или фосфодитиоатная связь(и), когда они являются частью кэпирующей структуры, в основном, находятся между двумя концевыми нуклеотидами на 5'-конце и двумя концевыми нуклеотидами на 3'-конце. В определенных вариантах осуществления полинуклеотид кроме одной или нескольких модификаций в положении 2', как описано выше, содержит по меньшей мере один концевой фосфотиоатный монофосфат. Фосфотиоатный монофосфат может способствовать более высокой активности ингибиторов мкРНК и миметиков мкРНК, ингибируя действие экзонуклеаз, а в некоторых вариантах осуществления устраняет необходимость в полностью связанных фосфотиоатом полинуклеотидов и/или полноразмерных ингибиторов. Фосфотиоатный монофосфат может находиться на 5'- и/или 3'-конце олигонуклеотида. Фосфотиоатный монофосфат определен приведенными ниже структурами, где В представляет собой основание, a R представляет собой модификацию в положении 2', как описано выше В определенных вариантах осуществления в дополнение к фосфотиоатному монофосфату на 5'и/или 3'-конце полинуклеотид содержит все положения 2', модифицированные в виде 2'-ОМе, или, альтернативно, пуриновые нуклеотиды в положении 2' модифицированы в виде 2'-OMe, при этом пиримидиновые нуклеотиды в положении 2' модифицированы в виде 2'-фтор. Как продемонстрировано в настоящем документе для ингибиторов miR-15b, полинуклеотид в этих вариантах осуществления не обязательно должен быть полностью связан фосфотиоатными связями и/или не обязательно должен быть полноразмерным (относительно соответствующей зрелой последовательности мкРНК). Фосфотиоатные связи могут присутствовать в некоторых вариантах осуществления, например, между последними двумя нуклеотидами на 5'- и/или 3'-конце (например, в качестве части кэпирующей структуры) или как чередующиеся с фосфодиэфирными связями. В этих или других вариантах осуществления полинуклеотид на одном из 5'- и 3'-концов или на обоих 5'- и 3'-концах может содержать по меньшей мере один концевой остаток без основания. Группа без основания не содержит общеизвестных пуриновых или пиримидиновых оснований нуклеотидов, таких как аденозин, гуанин, цитозин, урацил или тимин. Таким образом, в таких группах без основания отсутствует основание нуклеотида, или они содержат в 1' положении другие, не являющиеся основанием нуклеотида, группы. Например, нуклеотид без основания может представлять собой обращенный нуклеотид без основания, например, когда обращенный фосфоамидит без основания связан с 5'-амидитом (вместо 3'-амидита), что приводит к фосфатной связи 5'-5'. Структура обращенного нуклеозида без основания для 5'- и 3'-конца полинуклеотида представлена ниже. Полинуклеотиды с такими кэпирующими структурами без оснований с модификациями 2'-ОМе могут быть особенно эффективными, как показано в настоящем документе для miR-21 (фиг. 6) Фосфотиоатные связи используют для того, чтобы сделать полинуклеотиды более устойчивыми к расщеплению нуклеазами. Хотя параметры химических модификаций, описываемые в настоящем документе, могут включать фосфотиоатные связи (включая их в виде кэпирующей структуры, как описано), в определенных вариантах осуществления внутренние фосфотиоатные связи оказываются необязательными вследствие описанных 2'-модификации и кэпирующей модификации. Однако в определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит одну или несколько внутренних фосфотиоатных связей (отличных от связей в кэпе). Например, полинуклеотид может быть частично связанным фосфотиоатными связями, например, фосфотиоатные связи могут чередоваться с фосфодиэфирными связями. Полинуклеотид может содержать полноразмерную или укороченную последовательность мкРНК или полноразмерную или укороченную антисмысловую последовательность мкРНК, по существу, состоять из или состоять из них. Как используется в настоящем документе, термин "полноразмерная" по отношению к последовательности мкРНКотносится к длине зрелой последовательности мкРНК или ее антисмысловой копии. Таким образом, ингибиторы и миметики, описываемые в настоящем документе,могут представлять собой укороченные или полноразмерные (смысловые или антисмысловые) зрелые последовательности мкРНК или могут содержать эти последовательности в комбинации с другими полинуклеотидными последовательностями. Например, ингибиторы и миметики в некоторых вариантах осуществления могут соответствовать последовательностям пре-мкРНК и при-мкРНК или их частям или могут содержать другие последовательности, не являющиеся мкРНК. В определенных вариантах осуществления мотив химических модификаций, описываемый в настоящем документе, делает полноразмерные антисмысловые или смысловые (зрелые) последовательности мкРНК необязательными. Длина полинуклеотида в определенных вариантах осуществления составляет от 5 до 25 нуклеоти-5 022757 дов, от 8 до 18 нуклеотидов или от 12 до 16 нуклеотидов. В определенных вариантах осуществления длина полинуклеотида составляет приблизительно 8 нуклеотидов или менее, приблизительно 10 нуклеотидов или менее, приблизительно 12 нуклеотидов или менее или приблизительно 16 нуклеотидов или менее. В некоторых вариантах осуществления длина полинуклеотида составляет приблизительно 16 нуклеотидов. Полинуклеотид может содержать нуклеотидную последовательность, сконструированную для имитации зрелой мкРНК, такой как зрелые мкРНК, приведенные в табл. 1 ниже, или нацеливания на нее. Полинуклеотид в этих или других вариантах осуществления также может быть направлен или альтернативно его можно сконструировать так, чтобы он был направлен на формы пре-мкРНК или при-мкРНК. В определенных вариантах осуществления последовательность полинуклеотида, сконструированного для ингибирования мкРНК, может содержать от 1 до 5 (например, 2, 3, или 4) несоответствий относительно полностью комплементарной последовательности мкРНК (представленной в табл. 1 ниже). В определенных вариантах осуществления последовательность полинуклеотида, сконструированного для имитации мкРНК, может содержать от 1 до 5 (например, 2, 3, или 4) замен нуклеотидов относительно зрелой последовательности мкРНК (представленной в табл. 1 ниже). Такие антисмысловые и смысловые последовательности можно вводить, например, в кшРНК или другие структуры РНК, содержащие стеблевые и петлевые участки. Такие последовательности, в частности, можно использовать для имитации функции мкРНК или воздействия на нее для лечения или облегчения, наряду с другими, гипертрофии сердца, инфаркта миокарда, сердечной недостаточности (например, застойной сердечной недостаточности), повреждения сосудов и/или патологического сердечного фиброза. Характерные виды терапевтической применимости мкРНК описаны в ссылках на патенты US и РСТ, приведенных в табл. 1 ниже, каждая из которых, таким образом, в полном объеме включена в качестве ссылки. Зрелые и препроцессированные формы мкРНК описаны в ссылках на патенты, приведенных ниже, и такие описания, таким образом, также включены в качестве ссылки. Таблица 1 В определенных вариантах осуществления полинуклеотид содержит антисмысловую последовательность, полностью или частично комплементарную (как описано) всей или части при-, пре- или зрелой miR-15b, miR-208a или miR-21.miR-15b, включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в WO 2009/062169, таким образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК miR-15b человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению,представляет собой (от 5' к 3'):miR-208a, включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в WO 2009/018492, таким образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК miR-208a человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению,представляет собой (от 5' к 3'):miR-21, включая ее структуру и процессинг и ее потенциал для лечения (наряду с другими) гипертрофии сердца, сердечной недостаточности или инфаркта миокарда, описаны в WO 2009/058818, таким образом, в полном объеме включенной в качестве ссылки. Последовательность пре-мкРНК miR-21 человека, которую можно использовать для конструирования ингибирующей мкРНК по изобретению, представляет собой (от 5' к 3'):GGCUGUCUGA СА. Если мкРНК-мишень представляет собой miR-15b, miR-208a или miR-21, то полинуклеотид может везде содержать 2'-ОМе или 2'-ОМе и 2'-F, как описано, и может содержать фосфотиоатные монофосфатные кэпы на 5'- и 3'-концах, и/или остатки без оснований на 5'- и/или 3'-концах, и/или кэпированные фосфотиоатными связями концы. Полинуклеотид может быть частично связан фосфотиоатными связями или быть полностью связанным фосфодиэфирными связями, отличными от необязательного наличия фосфотиоатных концевых кэпов. Антисмысловой полинуклеотид может быть полностью комплементарным укороченной зрелой последовательности мкРНК, такой как приблизительно 8, приблизительно 10,приблизительно 12, приблизительно 14, приблизительно 15, приблизительно 16, приблизительно 17 или приблизительно 18 нуклеотидов в длину (например, приблизительно от 14 до приблизительно 18 нуклеотидов в длину). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит полноразмерную антисмысловую последовательность (относительно зрелой мкРНК) или состоит из (или, по существу, состоит) нее. В этом контексте термин "по существу состоит из" означает, что на 5'-конце и/или 3'-конце можно добавлять дополнительные нуклеотиды, так как от 1 до 3 нуклеотидов на каждом конце, при условии,что не будет затронута активность и/или специфичность полинуклеотида в отношении его мишени. Последовательность/структуру полинуклеотида можно выбирать из фиг. 1 или табл. 2 ниже. Сокращения приведены в табл. 3. Таблица 2 Синтез полинуклеотидов, включая модифицированные полинуклеотиды посредством твердофазно-8 022757Ser. 1980; (7):215-23. Композиции, составы и доставка. Полинуклеотид можно вводить в ряд макромолекулярных агрегатов или композиций. Такие комплексы для доставки могут включать разнообразные липосомы, наночастицы и мицеллы, сформулированные для доставки пациенту. Комплексы могут включать одну или несколько фузогенных или липофильных молекул для инициации проникновения через клеточную мембрану. Такие молекулы описаны,например, в патентах США 7404969 и 7202227, которые, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме. В композиции или составе можно использовать множество терапевтических полинуклеотидов, каждый независимо, как описано в настоящем документе. Например, в композиции или составе можно использовать от 1 до 5 ингибиторов мкРНК и/или миметиков мкРНК, каждый независимо, как указано выше, например, на основании табл. 1, 2 и фиг. 1. Полинуклеотиды по изобретению могут быть включены в состав различных фармацевтических композиций. Фармацевтические композиции следует получать в форме, подходящей для назначенного применения. Как правило, это включает получение композиций, которые, по существу, не содержат пирогенов, а также других примесей, которые опасны для людей или животных. Характерные системы для доставки/составления включают коллоидные дисперсные системы, макромолекулярные комплексы, нанокапсулы, микросферы, гранулы и основанные на липидах системы, включая эмульсии "масло-в-воде",мицеллы, смешанные мицеллы и липосомы. Коммерчески доступные жировые эмульсии, подходящие для доставки нуклеиновых кислот по изобретению в ткани сердечной и скелетных мышц, включают интралипид (Intralipid), липосин (Liposyn), липосин II, липосин III, нутрилипид (Nutrilipid) и другие подобные липидные эмульсии. Предпочтительной коллоидной системой для применения в качестве носителя для доставки in vivo является липосома (т.е. искусственная мембранная везикула). Получение и использование таких систем хорошо известно в данной области. Характерные составы также описаны в US 5981505; US 6217900; US 6383512; US 5783565; US 7202227; US 6379965; US 6127170; US 5837533; US 6747014 и WO03/093449, которые, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме. В фармацевтических композициях и составах для получения стабильных и позволяющих захват клетками-мишенями носителей для доставки можно использовать подходящие соли и буферы. Водные композиции по настоящему изобретению содержат эффективное количество носителя для доставки, содержащего последовательности ингибирующих полинуклеотидов или полинуклеотидов мкРНК (например, липосомы или другие комплексы), растворенного или диспергированного в фармацевтически приемлемом носителе или водной среде. Фразы "фармацевтически приемлемый" или "фармакологически приемлемый" относятся к молекулярным структурам и композициям, не вызывающим при введении животному или человеку неблагоприятных, аллергических или других нежелательных реакций. Как используется в настоящем документе, "фармацевтически приемлемый носитель" может включать один или несколько растворителей, буферов, растворов, диспергирующих сред, покрытий, антибактериальных и противогрибковых средств, изотонических и задерживающих всасывание средств и т.п., приемлемых для применения в формулировании фармацевтических средств, таких как фармацевтические средства, подходящие для введения людям. Использование таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области. В композиции также можно добавлять дополнительные активные ингредиенты. Введение или доставку фармацевтических композиций по настоящему изобретению можно проводить любым путем при условии, что ткань-мишень достижима этим путем. Например, введение можно проводить посредством интрадермальной, подкожной, внутримышечной, интраперитонеальной или внутривенной инъекции или посредством прямой инъекции в ткань-мишень (например, сердечную ткань). Фармацевтические композиции, содержащие ингибиторы мкРНК, или экспрессирующие конструкции, содержащие последовательности мкРНК, также можно вводить посредством катетерных систем или систем, изолирующих коронарный кровоток для доставки терапевтических средств в сердце. Различные катетерные системы для доставки терапевтических средств в сердце и коронарные сосуды известны в данной области. Некоторые неограничивающие примеры способов, основанных на доставке посредством катетеров, или способов изоляции коронарного кровотока, пригодных для использования по настоящему изобретению, описаны в патентах США 6416510; 6716196; 6953466, WO 2005/082440,WO 2006/089340, патентных публикациях США 2007/0203445, 2006/0148742 и 2007/0060907, которые все, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме. Композиции или составы также можно вводить парентерально или интраперитонеально. В качестве иллюстрации можно получать растворы конъюгатов в виде свободного основания или фармакологически приемлемой соли в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Также можно получать дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях и в маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты, как правило, содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов. Фармацевтические формы, подходящие для использования посредством инъекций или доставки посредством катетера включают, например, стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовляемых для немедленного приема препаратов стерильных инъецируемых растворов или дисперсий. В основном, эти препараты являются стерильными и жидкими в том смысле, что их легко инъецировать. Препараты должны быть стабильными в условиях получения и хранения и должны быть защищены от разлагающего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Подходящие растворители или диспергирующие среды могут включать, например, воду, этанол, полиол (например,глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, посредством использования покрытия,такого как лецитин, поддерживая требуемый размер частиц в случае дисперсии, и посредством использования поверхностно-активных веществ. Предотвращения действия микроорганизмов можно добиваться различными антибактериальными противогрибковыми средствами, например парабенами, хлорбутанолом, фенолом, сорбиновой кислотой, тимеросалом и т.п. Во многих случаях предпочтительно включать в состав средства придания изотоничности, например сахара или хлорид натрия. Пролонгированного всасывания инъецируемых композиций можно добиваться использованием в композициях средств,задерживающих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина. Стерильные инъецируемые растворы можно получать, добавляя конъюгаты в подходящем количестве в растворитель вместе с любыми другими ингредиентами (например, как перечислено выше) по желанию. Как правило, дисперсии получают, добавляя различные стерилизованные активные ингредиенты в стерильный носитель, который содержит основную диспергирующую среду и другие желаемые ингредиенты, например, как перечислено выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъецируемых растворов предпочтительные способы получения включают способы вакуумной сушки и лиофилизации, позволяющие получать порошок активного ингредиента(ов) и любой желаемый дополнительный ингредиент из его предварительно стерильно профильтрованного раствора. После формулирования растворы предпочтительно вводят способом, подходящим для лекарственной формы и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы можно легко вводить в ряде лекарственных форм, таких как инъецируемые растворы, капсулы с высвобождением лекарственного средства и т.п. Например, для парентерального введения в водном растворе раствор, как правило, подходящим образом забуферивают и сначала делают изотоническим жидкий разбавитель, например, с использованием соответствующего солевого раствора или глюкозы. Такие водные растворы можно использовать, например, для внутривенного, внутримышечного, подкожного и интраперитонеального введения. Предпочтительно, как известно специалистам в данной области, используют стерильные водные среды, особенно с учетом настоящего описания. В качестве иллюстрации однократную дозу можно растворять в 1 мл изотонического раствора NaCl и или добавлять в 1000 мл жидкости для подкожного введения или инъецировать в планируемый участок введения (см., например, "Remington'sPharmaceutical Sciences" 15th Edition, стр. 1035-1038 и 1570-1580). В зависимости от состояния субъекта,подвергаемого лечению, необходимо проводить некоторые изменения дозы. Лицо, отвечающее за введение, в любом случае должно определять подходящую для конкретного индивидуума дозу. Кроме того,для введения человеку препараты должны удовлетворять стандартам стерильности, пирогенности, общей безопасности по требованиям стандартов FDA Office of Biologics. Способы лечения. Изобретение относится к способу доставки полинуклеотидов в клетки млекопитающего и к способам лечения, облегчения или предотвращения прогрессирования состояния у представляющего собой млекопитающего пациента. Как правило, способ включает введение полинуклеотида или композиции,содержащей его, представляющему собой млекопитающего пациенту. Как уже описано, полинуклеотид может представлять собой ингибитор мкРНК или миметик мкРНК (например, с нуклеотидной последовательностью, сконструированной для ингибирования экспрессии или активности мкРНК). Таким образом, пациент может находиться в состоянии, связанном с экспрессией РНК, такой как экспрессия мкРНК. Такие состояния включают, например, гипертрофию сердца, инфаркт миокарда, сердечную недостаточность (например, застойную сердечную недостаточность), повреждение сосудов, рестеноз или патологический сердечный фиброз. Таким образом, изобретение относится к применению модифицированных полинуклеотидов и композиций по изобретению для лечения таких состояний и для получения лекарственных средств для таких способов лечения, как описано. мкРНК, вовлеченные в состояния, такие как гипертрофия сердца, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность (например, застойная сердечная недостаточность), повреждение сосудов, рестеноз и/или патологический сердечный фиброз, а также последовательности для воздействия на функцию мкРНК описаны в WO 2008/016924, WO 2009/058818, WO 2009/018492, WO 2009/018493, WO 2009/012468, WO 2009/062169 и WO 2007/070483, каждая из которых, таким образом, включена в качестве ссылки в полном объеме. Такие мкРНК и последовательности дополнительно перечислены в табл. 1, а модифицированные полинуклеотиды на основе этих последовательностей приведены в табл. 2, на фиг. 1 и описаны в настоящем документе. В определенных вариантах осуществления у пациента присутствует один или несколько факторов риска, включая, например, длительную неконтролируемую гипертензию, нескорректированное заболевание клапанов, хроническую стенокардию, недавно перенесенный инфаркт миокарда, наследственную предрасположенность к заболеванию сердца и патологическую гипертрофию. Альтернативно или дополнительно, у пациента могут диагностировать наличие генетической предрасположенности, например, к гипертрофии сердца, или у него в семейном анамнезе может присутствовать, например, гипертрофия сердца. В этом аспекте настоящее изобретение может относиться к улучшенной переносимости физической нагрузки, сниженной частоте госпитализации, лучшему качеству жизни, сниженной заболеваемости и/или сниженной смертности у пациентов с сердечной недостаточностью или гипертрофией сердца. Далее настоящее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже дополнительными примерами, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Специалисты в данной области с учетом настоящего описания должны понимать, что в конкретных описанных вариантах осуществления можно осуществлять множество изменений и тем не менее получать аналогичный или сходный результат без отклонения от сущности и объема изобретения. Примеры Синтезирована панель ингибиторов мкРНК (одноцепочечных олигонуклеотидов), направленных к мкРНК miR-15b. Последовательности и параметры модификаций представлены в табл. 3 ниже с сокращениями. Таблица 3 Список молекул, синтезированных для скрининга для оптимизации химического состава Синтезировано три различных обратно комплементарных ингибитора РНК с различной длиной по отношению к зрелой miR-15b, 8 н., 16 н. и полноразмерный (22 н.). Химические модификации в этом примере включали 2'-ОМе, 2'-F, 2'-дезокси, связь посредством фосфотиоата и ЗНК, которые объединяли в специфические мотивы. Мотивы включали фосфотиоатные связи между двумя основаниями на каждом конце (концевое кэпирование фосфотиоатом). Дополнительные модификации включали концевое кэпирование остатками без оснований (обратный мотив без основания с фосфатной связью 5'-5' на 5'-конце и/или с фосфатной связью 3'-3' на 3'-конце, как описано в настоящем документе) или фосфотиоатными монофосфатами на обоих 3'- и 5'-концах. Структуры синтезированных полинуклеотидов представлены на фиг. 1. Пример 1. Ингибирование miR-15b in vitro. Панель тестировали в клетках HeLa при двух концентрациях 10 и 0,1 нМ. Данные получали в анализе с двумя люциферазами. Посредством этого анализа не тестируют ингибирование мкРНК напрямую,а точнее тестируют действие ингибированной мкРНК, которое выявляют как увеличение под действием люциферазы Renilla. Вторая люцифераза, люцифераза светляка, не подвержена ингибированию мкРНК, и ее применяют в качестве внутреннего контроля. Чем больше значение отношения люцифераз, тем лучше активность ингибитора. См., Vermeulen A., et al., Double-stranded regions are essential design components ofpotent inhibitors of RISC function RNA 13:723-730 (2007). Результаты скрининга представлены на фиг. 2. На фиг. 2 предоставлены результаты, сгруппированные по длине: 16-членные и полноразмерные олигонуклеотиды. Одним заметным химическим мотивом являлся 2'-ОМе с фосфотиоатным монофосфатом. На фиг. 3 представлено прямое сравнение фосфотиоатного монофосфата с фосфодиэфирным или фосфотиоатным каркасом. Для полноразмерных ингибиторов при концентрации 10 нм он эквивалентен со сравниваемыми веществами, но при концентрации 0,1 нМ они являются намного более активными. Для длины 16 нуклеотидов ингибиторы без фосфотиоатного монофосфата вообще не демонстрируют значительной активности. Также неожиданным является то, что полностью фосфотиоатная молекула также не является такой же активной; таким образом, по-видимому, этот способ концевого кэпирования вносит значительный вклад в активность. Наиболее эффективные четырнадцать ингибиторов из каждого скрининга выбирали для определения IC50, и они перечислены в табл. 4. Таблица 4 Молекулы трансфицировали в клетки HeLa при шести концентрациях в диапазоне от 100 нМ до 1 пМ. Через 48 ч очищали общую РНК и проводили количественную ПЦР для определения уровней miR15b и контрольной РНК. Рассчитывали IC50, и они представлены в таблице ниже. Молекулы, содержащие концевые фосфотиоатные монофосфаты, перечислены полужирным шрифтом в табл. 5. Таблица 5 Пример 2. Ингибирование miR-15b in vivo. Синтезировали десять ингибиторов (полинуклеотидов 5-14 из табл. 5), направленных к miR-15b, и тестировали у нормальных мышей на воздействие на уровни miR-15b. Мышам (n=4) дозировали 80 мг/кг посредством инъекции в хвостовую вену при низком давлении и через четверо суток ткани анализировали на уровни miR-15b. Анализировали печень и сердце и данные сравнивали с мышами, которым инъецировали физиологический раствор. В печени и сердце ингибиторы с фосфотиоатными монофосфатными кэпами (POS) продемонстрировали сильное ингибирование miR-15b (см. фиг. 4). То, что эти молекулы без каких-либо внутренних фосфотиоатных связей или конъюгирования с холестерином были способны продемонстрировать такое действие в сердце, было достаточно неожиданным. Эти эксперименты демонстрируют, что существуют уникальные мотивы модификаций, которые увеличивают активность ингибиторов мкРНК. Стабильность к нуклеазам может быть важным признаком, так как молекулы, полностью связанные фосфодиэфирными связями с модификациями 2'-ОМе являются менее эффективными, чем молекулы с фосфотиоатными связями. По-видимому единственным исключением является то, когда концы кэпированы нуклеозидами без оснований или концевыми фосфотиоатными монофосфатами. Даже в виде 16-членного олигомера IC50 этой кэпированной на конце молекулы составляет 80 пМ, тогда как IC50 полноразмерного полинуклеотида составляет 18 0 пМ. Этот параметр модификаций: полинуклеотид с 2'-ОМе с концевыми фосфотиоатными монофосфатами представляет собой уникальный мотив. Пример 3. Ингибирование miR-208a. Получали полноразмерные и 16-членные ингибиторы miR-208a и тестировали в кардиомиоцитах новорожденных крыс через 48 ч после трансфекции по экспрессии bMHC (определяемой количественной ПЦР). Ингибиторы тестировали при 100 и 1 нМ. Тестируемые ингибиторы включали положения 2', модифицированные в виде всех 2'-ОМе; А и G,модифицированные в виде 2'-ОМе, с С и U модифицированными в виде 2'-F; и дезокси-А и -G, с 2'-ОМеC и U. Кэпирующие структуры включали остатки без оснований и кэпирование фосфотиоатным монофосфатом.miR-208 необходим для положительной регуляции экспрессии bMHC в ответ на нагрузку на сердце и для репрессию генов быстрых скелетных мышц в сердце. См. WO 2009/018492 и 2008/016924, каждый из которых, таким образом, включен в качестве ссылки. Результаты представлены на фиг. 5. Как продемонстрировано, модифицированные в положении 2' полинуклеотиды с концевым кэпированием были эффективными в отношении ингибирования miR-208a,даже в концентрации 1 нМ. Пример 4. Ингибирование miR-21. Ингибиторы miR-21 (с концевым кэпированием) тестировали in vitro при 100 нМ с использованием анализа с двумя люциферазами в клетках HeLa. Результаты представлены на фиг. 6. Как продемонстрировано, ингибиторы со всеми 2'-ОМе с концевыми кэпами без оснований или кэпированными на концах фосфотиоатным монофосфатом были особенно эффективными. В отношении miR-15b, miR208 и ингибиторов miR-21 синтезировали полинуклеотиды, представленные в приведенной ниже табл. 6. Таблица 6 Синтезировали четыре ингибитора miR-15b (табл. 7) и инъецировали мышам для оценки их биораспределения в тканях. Мышей обрабатывали ангиотензином II (Ang II) человека, вводимым посредством осмотического насоса, который подкожно имплантировали на спине. Через семь суток после обработкиAng II мышам дозировали 10,33 мг/кг, 11 мг/кг, 13,3 мг/кг, 133 мг/кг или 30,33 мг/кг. Последняя доза означает, что мышам 3 последовательных суток дозировали по 0,33 мг/кг. На сутки 4 животных умерщвляли и ткани обрабатывали для анализа биораспределения. В течение режима дозирования обработку Ang II продолжали. В табл. 7 перечислены последовательность и конкретные модификации каждого из олигонуклеотидов, используемых в этом эксперименте. Соединение 10134 содержало ЗНК и 2'-дезоксинуклеотиды и полностью фосфотиоатный каркас. Соединение 10115 содержало модификации 2'-ОМе и полностью фосфотиоатный каркас. Соединение 10623 содержало модификации 2'-ОМе, полностью фосфотиоатный каркас и 3' и 5' фосфотиоатный монофосфат. Соединение 10624 содержало модификации 2'-ОМе, чередующиеся фосфотиоатные и фосфодиэфирные связи и 3' и 5' фосфотиоатный монофосфат. Таблица 7 На фиг. 7 приведено накопление ингибиторов в сердце, печени, почках и легких. При сравнении кэпированных 2'-ОМе олигонуклеотидов с некэпированными количество ингибитора, доставляемого во все органы часто являлось более высоким при кэпировании с модификацией POS. Эффект был наибольшим при наименьшей дозе 10,33 мг/кг. Доставка в почки при всех четырех параметрах модификаций оставалась фактически эквивалентной. Полностью модифицированный фосфотиоатный каркас по сравнению с чередующимися модификациями также продемонстрировал наибольшую доставку в сердце, печень и легкие. Все публикации, патенты и патентные заявки, описываемые и цитируемые в настоящем документе,полностью включены в качестве ссылки. Следует понимать, что описываемое изобретение не ограничено конкретными описываемыми способами, протоколами и материалами, так как они могут варьировать. Также следует понимать, что используемая в настоящем документе терминология предназначена только с целью описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, которое ограничено только приложенной формулой изобретения. Специалистам в данной области очевидны, или им с применением не более чем общепринятого экспериментирования станут очевидны множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описываемого в настоящем документе. Подразумевается, что такие эквиваленты включены посредством приложенной формулы изобретения. Ссылки Приведенные ниже ссылки, таким образом, полностью включены в качестве ссылки для всех целей.miR-15b, причем полинуклеотид содержит последовательность 5'-GTGCTGCT-3' и его длина не превышает десяти нуклеотидов и включает одну или несколько внутренних фосфотиоатных связей и один или несколько остатков закрытых нуклеиновых кислот. 2. Полинуклеотид по п.1, который полностью связан фосфотиоатными связями. 3. Полинуклеотид по п.1, включающий по меньшей мере один концевой фосфотиоатный монофосфат. 4. Полинуклеотид по п.1, который целиком состоит из остатков закрытых нуклеиновых кислот. 5. Полинуклеотид по п.1, который состоит из последовательности 5'-GTGCTGCT-3' и полностью связан фосфотиоатными связями и целиком состоит из закрытых нуклеиновых кислот. 6. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый носитель. 7. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе коллоидной дисперсной системы, макромолекулярного комплекса, нанокапсулы, микросферы, гранулы, эмульсии "масло-в-воде",мицеллы, смешанной мицеллы или липосомы. 8. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе для интрадермальной доставки, подкожной доставки, внутримышечной доставки, интраперитонеальной или внутривенной доставки. 9. Фармацевтическая композиция по п.6, которая находится в составе для введения посредством сердечной катетерной системы. 10. Применение фармацевтической композиции по п.6 для лечения пациента с состоянием, связанным с экспрессией мкРНК. 11. Применение по п.10, где состояние представляет собой гипертрофию сердца, инфаркт миокарда,сердечную недостаточность, повреждения сосудов или патологический сердечный фиброз. 12. Применение по п.10 или 11, при котором композицию вводят посредством сердечного катетера.