Резистентные к гербицидам растения подсолнечника, полинуклеотиды, кодирующие резистентные к гербицидам большие субъединицы белков ацетогидроксикислотной синтазы, и применение растений и полинуклеотидов

РЕЗИСТЕНТНЫЕ К ГЕРБИЦИДАМ РАСТЕНИЯ ПОДСОЛНЕЧНИКА,ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, КОДИРУЮЩИЕ РЕЗИСТЕНТНЫЕ К ГЕРБИЦИДАМ БОЛЬШИЕ СУБЪЕДИНИЦЫ БЕЛКОВ АЦЕТОГИДРОКСИКИСЛОТНОЙ СИНТАЗЫ,И ПРИМЕНЕНИЕ РАСТЕНИЙ И ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ Описаны резистентные к гербицидам растения подсолнечника, изолированные полинуклеотиды,кодирующие резистентную к гербицидам и дикого типа большую субъединицу полипептидов ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL), и аминокислотные последовательности этих полипептидов. Описаны кассеты экспрессии и векторы трансформации, содержащие полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением, а также растения и клетки-хозяева,трансформированные при помощи полинуклеотидов. Также описаны способы применения полинуклеотидов для повышения резистентности растений к гербицидам и способы борьбы с бурьянами поблизости резистентных к гербицидам растений. Данное изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, особенно к гербицид-резистентным растениям подсолнечника и новым полинуклеотидным последовательностям, кодирующим дикого типа и имидазолинон-резистентную большую субъединицу белков ацетогидроксикислотной синтазы. Предпосылки создания изобретения Ацетогидроксикислотная синтаза (AHAS; ЕС 4.1.3.18, также известная как ацетолактат-синтаза илиALS), является первым ферментом, который катализирует биохимический синтез аминокислот с разветвленной цепью: валина, лейцина и изолейцина (Singh (1999) "Biosynthesis of valine, leucine and isoleucine," в Plant Amino Acid, Singh, B.K., ред., Marcel Dekker Inc. New York, New York, стр. 227-247). AHAS это место действия пяти структурно разных семейств гербицидов, включая сульфонилмочевины (Tan и др. (2005) Pest Manag. Sci. 61:246-57; Mallory-Smith и Retzinger (2003) Weed Technology 17:620-626;(2005) Pest Manag. Sci. 61:246-57; Mallory-Smith и Retzinger (2003) Weed Technology 17:620-626). Гербициды на основе имидазолинона и сульфонилмочевины широко применяют в современном сельском хозяйстве благодаря их эффективности при очень низких нормах дозировки и относительной нетоксичности у животных. Ингибируя активность AHAS, эти семейства гербицидов предотвращают дальнейший рост и развитие восприимчивых к их действию растений, включая множество видов бурьянов. К нескольким примерам коммерчески доступных гербицидов на основе имидазолинона относятся PURSUIT(имазетапир), SCEPTER (имазахин) и ARSENAL (имазапир). Примеры гербицидов на основе сульфонилмочевины включают хлорсульфурон, метсульфуронметил, сульфометуронметил, хлоримуронэтил,тифенсульфуронметил, трибенуронметил, бенсульфуронметил, никосульфурон, этаметсульфуронметил,римсульфурон, трифторсульфуронметил, триасульфурон, примисульфуронметил, циносульфурон, амидосульфурон, флазасульфурон, имазосульфурон, пиразосульфуронэтил и галосульфурон. Преимущественными являются гербициды на основе имидазолинона благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности при применении путем распыления на широкой области выращивания растений. Способность распылять гербицид на широкой области выращивания растений уменьшает затраты,связанные с созданием и обслуживанием посевной площади, и уменьшает потребность в подготовке участка к применению таких химикалий. Распыление сверх желательных стойких к действию гербицидов видов также обуславливает возможность достичь максимально возможного урожая желательных видов из-за отсутствия конкурентных видов. Однако способность применять такие методы распыления зависит от наличия резистентных к имидазолинону видов желательных растений в области обработки путем распыления. Среди главных сельскохозяйственных культур, некоторые стручковые виды, такие, как соя, являются естественно стойкими к гербицидам на основе имидазолинона из-за их способности быстро метаболизировать соединения гербицидов (Shaner и Robinson (1985) Weed Sci. 33: 469-471). Другие культуры,такие, как зерновые (Newhouse и др. (1992) Plant Physiol. 100: 882886) и рис (Barrette и др. (1989) CropSafeners for Herbicides, Academic Press, New York, стр. 195-220) имеют некоторую восприимчивость к гербицидам на основе имидазолинона. Различная чувствительность к гербицидам на основе имидазолинона зависит от химической природы конкретного гербицида и различного метаболизма соединения от токсичной до нетоксичной форм в каждом растении (Shaner и др. (1984) Plant Physiol. 76: 545-546; Brown и др., (1987) Pestic. Biochem. Physiol. 27: 24-29). Разные физиологические отличия растений, такие, как поглощение и перемещения, также играют важную роль в чувствительности (Shaner и Robinson (1985)Weed Sci. 33: 469-471). Растения, устойчивые к имидазолинонам, сульфонилмочевинам и триазолпиримидинам, были успешно получены при помощи мутагенеза семян, микроспор, пыльцы и калуса в Zea mays, ArabidopsisHeredity 84: 91-96; Wright и Penner (1998) Theor. Appl Genet, 96:612-620; Патент США . 5 545 822). Во всех случаях, единственный частично доминантный ген ядра обусловливал резистентность. Четыре стойкие к имидазолинону растения пшеницы были также предварительно отделены после мутагенеза семянTriticum aestivum L. cv. Fidel (Newhouse и др. (1992) Plant Physiol. 100: 882-886). Исследования наследственности подтвердили, что единственный частично доминантный ген обусловливал резистентность. На основании исследований аллелей авторы пришли к выводу, что мутации в четырех идентифицированных линиях были расположены в том же локусе. Один из генов резистентности культивара Фиделя обозначали как FS-4 (Newhouse и др. (1992) Plant Physiol. 100: 882-886). Популяции растений природного происхождения, которые, как было обнаружено, были резистентными к гербицидам на основе имидазолинона и/или сульфонилмочевины, также были применены для выведения резистентных к гербицидам селективных линий подсолнечника. Недавно путем использования зародышевой плазмы, полученной из дикой популяции подсолнечника обыкновенного (Helianthusannuus), были разработаны две линии подсолнечника, которые являются резистентными к гербициду на основе сульфонилмочевины, в качестве источников признака резистентности к гербициду (Miller и AlKhatib (2004) Crop Sci. 44: 1037-1038). Ранее White и др. 2002) Weed Sci. 50: 432-437) заявили, что отдельные растения из дикой популяции подсолнечника обыкновенного из штата Южная Дакота, США,являлись поперечно резистентными к гербицидам на основе имидазолинона и сульфонилмочевины. Анализ части кодирующей области большой субъединицы генов ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL) отдельных растений из этой популяции обнаружил точечную мутацию, приводящую к аминокислотному замещению Ala-Ha-Val в AHASL белке подсолнечника, которое отвечает Ala205 в AHASL белке Arabidopsis thaliana дикого типа (White и др. (2003) Weed Sci. 51:845-853). Ранее Al-Khatib и Miller 2000)Crop Sci. 40:869) сообщили про продуцирование четырех селекционных линий подсолнечника, резистентных к имидазолинону. Компьютерное моделирование трехмерной конформации комплекса AHAS - ингибитор предполагает несколько аминокислот в предложенном кармане связывания ингибитора как сайты, где вызванные мутации, вероятно, обусловили бы селективную резистентность к имидазолинонам (Ott и др. (1996) J.Mol. ВЫ. 263: 359-368). Растения табака, полученные при помощи некоторых из этих рационально разработанных мутаций в предложенных сайтах связывания фермента AHAS, фактически продемонстрировали специфическую резистентность к отдельному классу гербицидов (Ott и др. (1996) J. Mol. Biol. 263: 359-368). Про резистентность растений к гербицидам на основе имидазолинона также сообщалось в ряде патентов. В патентах США 4761373, 5331107, 5304732, 6211438, 6211439, 6222100, как правило описывается использование измененного гена AHAS, чтобы вызвать резистентность к гербицидам у растений, и, в частности, раскрываются определенные устойчивые к имидазолинону линии зерновых. В Патенте США 5013659 описываются растения, проявляющие резистентность к гербицидам вследствие мутаций, по меньшей мере, в одной аминокислоте в одном или более консервативных участках. Мутации, описанные в нем, кодируют либо поперечную резистентность к имидазолинонам и сульфонилмочевинам, либо специфическую резистентность к сульфонилмочевинам, но специфическая резистентность к имидазолинону не описана. В патентах США 5731180 и 5767361 обсуждается изолированный ген,имеющий единственное замещение аминокислоты в аминокислотной последовательности AHAS дикого типа, что приводит к имидазолинон-специфической резистентности. Кроме того, растения риса, являющиеся резистентными к гербицидам, которые препятствуют AHAS, были выведены путем селекционирования мутаций, а также путем отбора резистентных к гербицидам растений из совокупности рисовых растений, полученных путем культивирования пыльников. См., патенты США 5545822, 5736629,5773703, 5773704, 5952553 и 6274796. У растений, как у всех других исследуемых организмов, фермент AHAS состоит из двух субъединиц: большой субъединицы (каталитическая роль) и малой субъединицы (регуляторная роль) (Duggleby и Pang (2000) J. Biochem. Mol. Biol. 33: 1-36). AHAS большая субъединица (также известная под названием AHASL) может быть закодирована единственным геном как в случае Arabidopsis и риса или многими членами генного семейства, как в кукурузе, каноле и хлопке. Специфические замены одного нуклеотида в большой субъединице придают ферменту ступень нечувствительности к одному или нескольким классам гербицидов (Chang и Duggleby (1998) Biochem J. 333: 765-777). Например, пшеница обыкновенная, Triticum aestivum L., содержит три гомологичных гена большой субъединицы ацетогидроксикислотной синтазы. Каждый из генов проявляет значительную экспрессию,основанную на реакции гербицида и биохимических данных от мутантов в каждом из этих трех геновS10-17). Кодирующие последовательности всех трех генов разделяют большую гомологичность на нуклеотидном уровне (WO 03/014357). Путем секвенирования генов AHASL от нескольких разновидностейTriticum aestivum молекулярной основой стойкости к гербицидам в большинстве IMI-устойчивых (имидазолинон-устойчивых) линиях, как установлено, была обнаружена мутация S653(At)N, включая замещение серина на аспарагин в положении, эквивалентном серину при аминокислоте 653 в Arabidopsis thaliana (WO 03/014356; WO 03/014357). Эта мутация происходит вследствие полиморфизма одного нуклеотида (SNP - single nucleotide polymorphism) в последовательности ДНК, которая кодирует белок AHASL. Также известно, что множественные AHASL встречаются в образцах двудольных растений. Недавно Kolkman и др. 2004) Theor. Appl. Genet. 109: 1147-1159) сообщили про идентификацию, клонирование и секвенирование трех AHASL генов (AHASL1, AHASL2 и AHASL3) из резистентных к гербицидам и дикого типа генотипов подсолнечника (Helianthus annuus L.). Kolkman и др. сообщили, что устойчивость к гербицидам была вызвана либо Prol97Leu (с использованием номенклатуры аминокислотных положений Arabidopsis AHASL) замещением, либо Ala205Val замещением в белке AHASL1, и каждое из этих замещений обеспечивало резистентность как к гербицидам на основе имидазолинона, так и к гербицидам на основе сульфонилмочевины. Принимая во внимание их высокую эффективность и низкую ток-2 020462 сичность, гербициды на основе имидазолинона являются преимущественными для применения в сельском хозяйстве. Однако, возможность применять гербициды на основе имидазолинона в конкретной системе выращивания сельскохозяйственных культур зависит от наличия имидазолинон-резистентных видов указанного сельскохозяйственного растения. Для получения таких имидазолинон-резистентных видов, селекционеры растений должны выводить селекционные линии с имидазолинон-резистентным свойством. Таким образом, необходимы дополнительные имидазолинон-резистентнные селекционные линии и виды сельскохозяйственных растений, а также способы и композиции для получения и применения имидазолинон-резистентных селекционных линий и видов. Краткое описание изобретения Данное изобретение обеспечивает растения подсолнечника, имеющие повышенную резистентность к гербицидам в сравнении с растением подсолнечника дикого типа. В частности, растения подсолнечника в соответствии с данным изобретением имеют повышенную резистентность к гербицидам на основе имидазолинона, в сравнении с растением подсолнечника дикого типа. Резистентные к гербицидам растения подсолнечника в соответствии с данным изобретением содержат по меньшей мере одну копию гена или полинуклеотида, кодирующего гербицид-резистентную большую субъединицу ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL). Такой гербицид-резистентный AHASL белок содержит треонин в аминокислотном положении 107 или эквивалентном положении. Резистентное к гербицидам растение подсолнечника в соответствии с данным изобретением может содержать одну, две, три, четыре, пять, шесть или больше копий гену или полинуклеотида, кодирующий гербицид-резистентный AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Растения подсолнечника в соответствии с данным изобретением также включают семена и потомство растений, содержащие по меньшей мере одну копию гена или полинуклеотида, кодирующего гербицид-резистентный AHASL белок данного изобретения. В данном воплощении, данное изобретение обеспечивает гербицид-резистентные растения подсолнечника, происходящие из линии подсолнечника, обозначенной в данной заявке как S4897, и ее потомство и производные, обладающие гербицид-резистентными характеристиками S4897. Генетическая линия,обозначенная в данной заявке как GM40, была получена из S4897 и обладает ее гербицид-резистентными характеристиками. Образец семян GM40 линии был депонирован в Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection - АТСС) под патентным депозитарным номером АТСС (АТССPatent Deposit Number)РТА-6716. Таким образом, растение подсолнечника в соответствии с данным изобретением, обладающее гербицид-резистентными характеристиками GM40, или растение подсолнечника, имеющее патентный депозитарный номер АТССРТА-6716, также обладают гербицидрезистентными характеристиками S4897. S4897 растения подсолнечника, GM40 растения подсолнечника и растения подсолнечника, имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-6716, и их потомство и производные, обладающие гербицид-резистентными характеристиками S4897, GM40, или растение подсолнечника, имеющее патентный депозитарный номер АТССРТА-6716, содержат в своем геноме ген AHASL1, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID : 1, который кодирует AHASL1 белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID: 2. По сравнению с аминокислотной последовательностью AHASL1 белка (SEQ ID : 4), которая кодируется AHASL1 геном (SEQ ID : 3) из дикого растения подсолнечника, аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID : 2, имеет одну аминокислотное отличие от аминокислотной последовательности дикого типа. В аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID : 2,треонин находится в аминокислотном положении 7. Это положение соответствует положению 107 в полновесном AHASL1 белке подсолнечника, который кодируется нуклеотидной последовательностью,представленной в SEQ ID : 12 (номер доступа AY541451). В аминокислотной последовательности дикого типа AHASL1 в соответствии с данным изобретением (SEQ ID : 4), это эквивалентное аминокислотное положение имеет аланин. Если не указано иное, то аминокислотные положения, приведенные в данной заявке для AHASL белков подсолнечника, отвечают аминокислотным положениям полновесной аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID : 12. В другом воплощении данное изобретение обеспечивает гербицид-резистентные растения подсолнечника, представляющие собой линию подсолнечника, обозначенную в данной заявке как GM1606. Образец семян генетического материала GM1606 депонирован в АТСС под патентным депозитарным номером АТССРТА-7606. Таким образом, данное изобретение обеспечивает гербицид-резистентные растения подсолнечника, имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-7606, и их потомство и производные, обладающие гербицид-резистентными характеристиками растений подсолнечника, имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-7606. Подобно растениям подсолнечника S4897 иGM1606, содержат в своих геномах ген AHASL1, кодирующий AHASL1 белок, содержащий треонин в положении 107 в полновесном AHASL1 белке подсолнечника. Аналогично, растения подсолнечника,имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-7606, и их потомство и производные, обладающие гербицид-резистентными характеристиками растений подсолнечника, имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-7606, содержат в своих геномах ген AHASL1, кодирующий AHASL1 белок,содержащий треонин в положении 107 в полновесном AHASL1 белке подсолнечника. Данное изобретение дополнительно обеспечивает изолированные полинуклеотиды и изолированные полипептиды для (Helianthus annuus) AHASL белков подсолнечника. Полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением охватывают нуклеотидные последовательности, кодирующие гербицидрезистентный и дикого типа AHASL белки, включая белки, кодирующиеся AHASL1, AHASL2 иAHASL3 генами, но не ограничиваясь ими. Гербицид-резистентные AHASL белки подсолнечника в соответствии с данным изобретением представляют собой гербицид-резистентные AHASL белки, содержащие аминокислоту, отличающуюся от аланина, в положении 107 полновесного AHASL1 белка подсолнечника или в эквивалентном положении. Преимущественно, аминокислотой в положении 107 или в эквивалентном положении является треонин. Полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением охватывают нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID : 1 и 3, нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID : 2 и 4, и фрагменты и варианты указанных нуклеотидных последовательностей, кодирующие белки, обладающие активностью AHAS. Данное изобретение обеспечивает кассеты экспрессии для экспрессии полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением в растениях, растительных клетках и других нечеловеческих клеткаххозяевах. Кассеты экспрессии содержат промотор, который может экспрессироваться в растении, растительной клетке или других рассматриваемых клетках-хозяевах, функционально связанный с полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением, который кодирует белок AHASL дикого типа или гербицид-резистентный белок AHASL. В случае необходимости для направления экспрессии на хлоропласт,кассета экспрессии может также содержать функционально связанную направленную на хлоропласт последовательность, кодирующую транзитный пептид хлоропласта, чтобы направить экспрессированый белок AHASL на хлоропласт. Кассеты экспрессии в соответствии с данным изобретением можно применять в способе для повышения устойчивости к гербициду растения и клетки-хозяина. Указанный способ включает трансформирование растения или клетки-хозяина при помощи кассеты экспрессии в соответствии с данным изобретением, где кассета экспрессии содержит промотор, что может экспрессироваться у растения или в клетке-хозяине, который рассматривается, и промотор, функционально связанный с полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением, кодирующий гербицид-резистентный AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Способ дополнительно включает восстановление трансформированного растения из трансформированной растительной клетки. Данное изобретение обеспечивает способ повышения AHAS активности в растении, который включает трансформирование растительной клетки при помощи полинуклеотидной конструкции, которая содержит нуклеотидную последовательность, функционально связанную с промотором, который запускает экспрессию в растительной клетке, и восстановление трансформированного растения из трансформированной растительной клетки. Нуклеотидную последовательность выбирают из тех нуклеотидных последовательностей, которые кодируют гербицид-резистентный или дикий AHASL белки в соответствии с данным изобретением, особенно нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID : 1 и 3, и нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID : 2 и 4, и их фрагменты и варианты. Растение, полученное в соответствии с данным способом, имеет повышенную AHAS активность по сравнению с нетрансформированным растением. Данное изобретение обеспечивает способ получения резистентного к гербициду растения, который включает трансформирование растительной клетки при помощи полинуклеотидной конструкции, содержащей нуклеотидную последовательность, функционально связанную с промотором, который запускает экспрессию в растительной клетке, и восстановление трансформированного растения из указанной трансформированной растительной клетки. Нуклеотидную последовательность выбирают из тех нуклеотидных последовательностей, которые кодируют гербицид-резистентный или дикий AHASL белки в соответствии с данным изобретением, особенно нуклеотидные последовательности, представленные в SEQID : 1, нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID : 2, и их фрагменты и варианты. Резистентное к гербициду растение, полученное в соответствии с данным способом, имеет повышенную резистентность, по сравнению с нетрансформированным растением по меньшей мере к одному гербициду, особенно гербициду на основе имидазолинона. Данное изобретение обеспечивает способ повышения устойчивости к гербицидам у стойкого к гербицидам растения. Способ применяют для повышения резистентности растения, которое уже является резистентным к уровню гербицида, который бы уничтожал или в значительной степени поражал растение дикого типа. Такое устойчивое к гербицидам растение может представлять собой устойчивое к гербицидам растение, которое было создано методами генной инженерии для устойчивости к гербицидам,или устойчивое к гербицидам растение, которое было разработано при помощи методов, в которых не задействуют рекомбинантную ДНК, такое, как, например, растения подсолнечника S4897, GM40, иGM1606 в соответствии с данным изобретением. Указанный способ включает трансформирование устойчивого к гербицидам растения при помощи полинуклеотидной конструкции, которая содержит нуклеотидную последовательность, функционально связанную с промотором, который запускает экспрессию в растительной клетке, и восстановление трансформированного растения из трансформированной растительной клетки. Нуклеотидную последовательность выбирают из тех нуклеотидных последовательностей, которые кодируют гербицид-резистентные AHASL белки в соответствии с данным изобретением, особенно нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID : 1, нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID : 2,и их фрагменты и варианты. Данное изобретение обеспечивает векторы трансформации, содержащие выбираемый ген-маркер в соответствии с данным изобретением. Выбираемый ген-маркер содержит промотор, который запускает экспрессию в клетке-хозяине, функционально связанный с полинуклеотидом, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую резистентный к гербицидам AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Вектор трансформации может дополнительно содержать ген, который рассматривается, который будет экспрессироваться в клетке-хозяине, и может также, по желанию, включать направленную на хлоропласт последовательность, функционально связанную с полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением. Данное изобретение дополнительно обеспечивает способы применения векторов трансформации в соответствии с данным изобретением для выбора клеток, трансформированных при помощи гена, который рассматривается. Такие способы включают трансформирование клетки-хозяина при помощи вектора трансформации путем действия на клетку того уровня количества гербицида на основе имидазолинона,которая могла бы разрушать или ингибировать рост нетрансформированной клетки-хозяина, и идентификацию трансформированной клетки-хозяина по ее способности расти в присутствии гербицида. В одном воплощении данного изобретения, клетка-хозяин - это растительная клетка, а выбираемый генмаркер содержит промотор, который запускает экспрессию в растительной клетке. Данное изобретение обеспечивает способ для контроля бурьянов поблизости от резистентных к гербицидам растений в соответствии с данным изобретением, включая гербицид-резистентные растения подсолнечника, описанные выше, и растений, трансформированных при помощи гербицид-резистентныхAHASL полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением. Такие трансформированные растения содержат в своих геномах, по меньшей мере, одну кассету экспрессии, содержащей промотор, который запускает экспрессию в растительной клетке, где промотор функционально связан с полинуклеотидомAHASL в соответствии с данным изобретением. Указанный способ включает применение эффективного количества гербицида к бурьянам и к резистентному к гербицидам растению, причем резистентное к гербицидам растение имеет повышенную резистентность, по меньшей мере, к одному гербициду, особенно гербициду на основе имидазолинона по сравнению с растением дикого типа или нетрансформированным растением. Растения в соответствии с данным изобретением могут быть трансгенными или нетрансгенными. Пример нетрансгенного растения подсолнечника, имеющего повышенную резистентность к гербицидам на основе имидазолинона и/или гербицидов на основе сульфонилмочевины, включает растения подсолнечника S4897, GM40 или GM1606 и растения подсолнечника, имеющие патентный депозитарный номер АТССРТА-6716 или РТА-7606; или мутантное, рекомбинантное или генетически модифицированное производное S4897, GM40 или GM1606 растение подсолнечника, имеющее патентный депозитарный номер АТССРТА-6716 или РТА-7606, или двух и более S4897, GM40, GM1606 растений подсолнечника, имеющих патентный депозитарный номер АТССРТА-6716, и растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-7606; или какого-либо потомства S4897, GM40 илиGM1606, растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-6716 РТА 7606, двух или более S4897, GM40, GM1606 растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-6716 и растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-7606; или растения, которое является потомством какого-либо из этих растений; или растения, обладающего характеристикой гербицидной резистентности S4897, GM40, GM1606 растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-6716, и/или растения подсолнечника, имеющего патентный депозитарный номер АТССРТА-7606. Данное изобретение также обеспечивает растения, растительные органы, растительные ткани, растительные клетки, семена и нечеловеческие клетки-хозяева, трансформированные по меньшей мере при помощи одного полинуклеотида, кассеты экспрессии или вектора трансформации в соответствии с данным изобретением. Такие трансформированные растения, растительные органы, растительные ткани,растительные клетки, семена и нечеловеческие клетки-хозяева имеют повышенную устойчивость или резистентность по меньшей мере к одному гербициду, на уровнях гербицидов, которые разрушают или ингибируют рост нетрансформированного растения, растительной ткани, растительной клетки или нечеловеческой клетки-хозяина, соответственно. Преимущественно трансформированные растения, растительные ткани, растительные клетки и семена в соответствии с данным изобретением являются Arabidopsis thaliana, подсолнечником и другими сельскохозяйственными растениями. Данное изобретение дополнительно обеспечивает изолированные полипептиды, содержащие имидазолинон-резистентный и дикого типа AHASL белки подсолнечника. Изолированные полипептиды содержат аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID2 и 4, аминокислотные последовательности, кодированные нуклеотидными последовательностями, представленными в SEQ ID: 1 и 3, и фрагменты и варианты указанных аминокислотных последовательностей, которые кодируют белки, обладающие AHAS активностью. Краткое описание фигур На фиг. 1 показана линеаризованная нуклеотидная последовательность нуклеотидных последовательностей резистентного к гербицидам гена подсолнечника AHASL1 (SEQ ID : 1), гена подсолнечника AHASL1 дикого типа (SEQ ID : 3), GenBank Accession No. U16280 (SEQ ID : 5), GenBank Accession No. AY541451 (SEQ ID : 11) и GenBank Accession No. AY124092 (SEQ ID : 13). Сайт одной мутации у (SEQ ID : 1) обозначен звездочкой. Мутация представляет собой транзицию G-на-А в нуклеотидном положении 21 SEQ ID : 1. На фиг. 2 показана линеаризованная аминокислотная последовательность гербицид-резистентногоAHASL1 белка подсолнечника (SEQ ID : 2), AHASL1 белка подсолнечника дикого типа (SEQ ID : 4),GenBank Accession No. U16280 (SEQ ID : 6), GenBank Accession No. AY541451 (SEQ ID : 12) и GenBank Accession No. AY 124092 (SEQ ID : 14). Звездочкой обозначен сайт одного аминокислотного замещения (Ala-на-Thr), найденного в резистентном к гербицидам AHASL1 белке подсолнечника. Этот сайт замещения соответствует аминокислотному положению 7 в неполном AHASL1 аминокислотном остатке, представленном в SEQ ID : 2. Эквивалентным положением этого замещения в полновесномAHASL1 аминокислотном остатке подсолнечника, представленного в SEQ ID : 12, является 107. Фиг. 3 представляет собой фотоиллюстрацию, на которой показана повышенная устойчивость к гербицидам растений подсолнечника S4897 (правая сторона) по сравнению с устойчивыми к гербицидам растениями подсолнечника IMISUN-1 (Al-Khatib и Miller (2000) Crop Sci. 40:869-870) в оранжерейном исследовании. Растения подсолнечника S4897 и IMISUN-1 обрабатывали имазамоксом путем распыления в количестве 200 г ai/ar. Контрольные растения подсолнечника дикого типа не выживали после обработки распылением имазамоксом в количествах 100 или 200 г ai/ar (не показано). Фотографию делали через несколько дней после обработки растений распылением. Фиг. 4 является графической иллюстрацией гербицидного поражения в оранжерейном тесте после обработки растений подсолнечника IMISUN-1, дикого типа и S4897 распылением имазамокса в количествах 100 (левый столбец) или 200 г ai/ га (темные столбцы). На этой фигуре показано, что гербицидрезистентные растения подсолнечника S4897 имеют значительно большую резистентность или устойчивость к количествам имазамокса по сравнению с гербицид-резистентными растениями IMISUN-1 и растениями дикого типа. Гербицидное поражение оценивали через 17 дней после нанесения имазамокса. Известно, что у растений IMISUN-1 аланин замещен на валин в аминокислоте 190 (Kolkman и др. (2004)Theor. Appl. Genet. 109: 1147-1159). Фиг. 5 представляет собой фотоиллюстрацию, на которой показана повышенная устойчивость к гербицидам растений подсолнечника S4897 (правая сторона) по сравнению с гербицид-резистентными растениями подсолнечника IMISUN-1 в оранжерейном исследовании, описанном в примере 4. Фиг. 6 представляет собой фотоиллюстрацию, на которой показана повышенная устойчивость к гербицидам растений подсолнечника S4897 по сравнению с растениями подсолнечника Clearfield, вид А, в оранжерейном исследовании, описанном в примере 5. Фиг. 7 является графической иллюстрацией сравнения ингибирования AHAS при помощи "Раптор" для растений подсолнечника вида не-Clearfield, вида Clearfield и S4897, как описано в примере 5. Фиг. 8 является графической иллюстрацией сравнения ингибирования AHAS при помощи "Глин" для растений подсолнечника вида не-Clearfield, вида Clearfield и S4897, как описано в примере 5. Фиг. 9 является графической иллюстрацией влияния нанесения имазапира на листья, когда рост растений составлял 14 дней после обработки двух мутантов подсолнечника. Средний рост (% от необработанных участков), представленный в виде квадратов и планок погрешностей, которые представляют стандартное отклонение средних значений. Фигура 10 является графической иллюстрацией влияния нанесения имазапира на листья на индекс фитотоксичности (PI) через 14 дней после обработки двух мутантов подсолнечника. Среднее значение PI представлено в виде квадратов и планок погрешностей, которые представляют собой стандартное отклонение средних значений. Фиг. 11 является графической иллюстрацией влияния нанесения имазапира на накопление биомассы через 14 дней после обработки двух мутантов подсолнечника. Среднее значение сухой биомассы (% необработанных участков) представлено в виде квадратов и планок погрешностей, которые представляют собой стандартное отклонение средних значений. Фиг. 12 является графической иллюстрацией влияния нанесения имазапира на корневую биомассу через 14 дней после обработки двух мутантов подсолнечника. Среднее значение сухой массы корней (% от необработанных участков) представлено в виде квадратов и планок погрешностей, которые представляют собой стандартное отклонение средних значений. Перечень последовательностей Нуклеотидные и аминокислотные последовательности, приведенные в приложенном перечне последовательностей, указаны с использованием стандартных буквенных сокращений для нуклеотидных оснований и трехбуквенного кода для аминокислот. При изображении нуклеотидных последовательно-6 020462 стей придерживаются стандартного метода, в соответствии с которым начало находится на 5' конце последовательности и далее движутся вперед (то есть, слева направо в каждой линии) до 3' конца. Показана только одна цепь каждой последовательности нуклеиновых кислот, тем не менее понятно, что комплементарная цепь должна быть включена путем какой-либо ссылки на указанную цепь. При изображении аминокислотных последовательностей придерживаются стандартного метода, в соответствии с которым начало находится на конце последовательности с аминогруппой, и далее движутся вперед (то есть, слева направо в каждой линии) до конца с карбоксигруппой.SEQ ID : 1 представляет собой неполную нуклеотидную последовательность, кодирующую резистентный к гербицидам AHASL1 белок из линии подсолнечника S4897.SEQ ID : 2 представляет собой неполную аминокислотную последовательность резистентного к гербицидам AHASL1 белка, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, представленной вSEQ ID : 3 представляет собой неполную нуклеотидную последовательность, кодирующуюAHASL1 белок дикого типа из линии подсолнечника ВТК 47.SEQ ID : 4 представляет собой неполную аминокислотную последовательность AHASL1 белка дикого типа, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, представленной у SEQ ID : 3.SEQ ID : 5 представляет собой нуклеотидную последовательность, GenBank Accession No.SEQ ID : 6 представляет собой аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью GenBank Accession No. U16280.SEQ ID : 7 представляет собой нуклеотидную последовательность HA1U409 праймера, описанного в примере 2.SEQ ID : 8 представляет собой нуклеотидную последовательность HA1L1379 праймера, описанного в примере 2.SEQ ID : 9 представляет собой нуклеотидную последовательность HA1U1313 праймера, описанного в примере 2.SEQ ID : 10 представляет собой нуклеотидную последовательность HA1L2131 праймера, описанного в примере 2.SEQ ID : 11 представляет собой нуклеотидную последовательность GenBank Accession No.SEQ ID : 12 представляет собой аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью GenBank Accession No. AY541451.SEQ ID : 13 представляет собой нуклеотидную последовательность GenBank Accession No.SEQ ID : 14 представляет собой аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью GenBank Accession No. AY124092. Подробное описание изобретения Данное изобретение относится к растениям подсолнечника, обладающим повышенной резистентностью к гербицидам по сравнению с растением подсолнечника дикого типа. Резистентные к гербицидам растения подсолнечника получали, как описано в данной заявке ниже, подвергая растения подсолнечника дикого типа (по отношению к резистентности к гербицидам) действию мутагена, позволяя растениям дозревать и размножаться и выбирая потомственные растения, которые показали повышенную резистентность к гербициду на основе имидазолинона, по сравнению с резистентностью растения подсолнечника дикого типа. Данное изобретение обеспечивает резистентные к гербицидам линии подсолнечника,которые в данной заявке имеют названия S4897, GM40 и GM1606. Из S4897 гербицид-резистентных растений подсолнечника и растений подсолнечника дикого типа ВТК 47, кодирующий участок большой субъединицы гена ацетогидроксикислотной синтазы (которая обозначается как AHASL1) выделяли при помощи амплификации путем полимерной цепной реакции(ПЦР) и секвенировали. Путем сравнения полинуклеотидных последовательностей резистентных к гербицидам и дикого типа растений подсолнечника было открыто, что кодирующий участок AHASL1 полинуклеотидной последовательности из резистентного к гербицидам растения подсолнечника отличался отAHASL1 полинуклеотидной последовательности растения дикого типа на один нуклеотид, транзицию G на А в нуклеотиде 21 (SEQ ID : 1). Указанная транзиция G на А в AHASL1 полинуклеотидной последовательности приводит к замещению аланина на треонин в аминокислоте 7 (SEQ ID : 2) в консервативном участке предполагаемой аминокислотной последовательности гербицид-резистентного AHASL1 белка подсолнечника (SEQ ID : 2), по сравнению с эквивалентным аминокислотным положениемAHASL1 белка дикого типа линии подсолнечника BTK47 (то есть, аминокислоты 7 SEQ ID : 4). Из-за того, что нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID : 1, не соответствует полновесному кодирующему участку AHASL белка, аминокислотная последовательность, которая кодируется таким образом, как представлено у SEQ ID : 2, также является меньшей, чем полновесная. Для облегчения сравнения с другими AHASL аминокислотными последовательностями подсолнечника, аминокислотные положения AHASL белков подсолнечника, приведенные в данной заявке, если иное не ука-7 020462 зано или не следует из контекста, где такие последовательности имеются, отвечают аминокислотным положениям полновесной аминокислотной последовательности AHASL1 белка подсолнечника, который кодируется нуклеотидной последовательностью с GenBank Accession No. AY541451 (SEQ ID : 12). Соответственно, замещение аланин на треонин в аминокислотном положении 7 SEQ ID : 2 соответствует аминокислотному положению 107 в аминокислотной последовательности SEQ ID : 12. Таким образом, данное изобретение описывает аминокислотное замещение, которое может быть применено для получения гербицид-резистантных AHASL белков подсолнечника, полинуклеотидов, которые кодируют такие белки, и гербицид-резистантных растений, растительных тканей, растительных клеток и семян. Из-за того, что аланин, который находится в аминокислотном положении 107 в полновесных AHASL1 белках подсолнечника дикого типа или эквивалентном положении, находится на участке аминокислот, который является консервативным во всех видах растений, то ожидается, что замещение другой аминокислоты, преимущественно, треонина, для этого же консервативного аланина в другихAHASL белках подсолнечника (например, AHASL2 и AHASL3) также будет придавать устойчивость к гербицидам. Таким образом, полинуклеотид, кодирующий AHASL белок подсолнечника, может быть подвергнут мутациям в соответствии с каким-либо способом, известным из уровня техники, таким, как,например, сайт-направленый мутагенез, для получения полинуклеотида подсолнечника, кодирующегоAHASL белок, где треонин находится в положении 107 или в эквивалентном положении. Полинуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности, кодирующиеся таким образом, отвечают AHASL1, AHASL2 и AHASL3 генам подсолнечника, представленным в GenBank Accession .AY541458; все из которых приведены в данной заявке путем ссылок. Соответственно, такие полинуклеотиды и гербицид-резистентные AHASL белки, кодирующиеся таким образом, применяют для получения гербицид-резистентных растений, растительных клеток, растительных тканей и семян при помощи способов, описанных в данной заявке. Данное изобретение дополнительно охватывает изолированные AHASL2 и AHASL3 полинуклеотиды подсолнечника, кодирующие гербицид-резистентные AHASL2 и AHASL3 белки, соответственно. Каждый из таких гербицид-резистентных AHASL2 и AHASL3 белков содержит аминокислоту, отличающуюся от аланина, в положении 107 или в эквивалентном положении. Преимущественно, у таких гербицид-резистентных AHASL2 и AHASL3 белков, аминокислотой, которая находится в положении 107 или эквивалентном положении, является треонин. Изобретение дополнительно относится к изолированным молекулам полинуклеотидов, содержащих нуклеотидные последовательности, кодирующие большую субъединицу белков ацетогидроксикислотной синтазы (AHASL) и к таким AHASL белкам. Данное изобретение раскрывает выделение и нуклеотидную последовательность полинуклеотида, кодирующего резистентный к гербицидам AHASL1 белок подсолнечника из резистентного к гербицидам растения подсолнечника, которое получали путем химического мутагенеза растений подсолнечника дикого типа. Резистентные к гербицидам AHASL1 белки в соответствии с данным изобретением имеют замещение аланин на треонин в положении 107 или в эквивалентном положении в их соответствующих аминокислотных последовательностях по сравнению с соответственной аминокислотной последовательностью дикого типа. Данное изобретение дополнительно описывает выделение и нуклеотидную последовательность полинуклеотидной молекулы, кодирующейAHASL1 белок подсолнечника дикого типа. Данное изобретение обеспечивает изолированные полинуклеотидные молекулы, кодирующиеAHASL белки подсолнечника (Helianthus annuus L.). В частности, данное изобретение обеспечивает изолированные полинуклеотидные молекулы, содержащие нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID : 1 и 3, нуклеотидные последовательности, кодирующие AHASL белки, содержащие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID : 2 и 4, и фрагменты и варианты таких нуклеотидных последовательностей, кодирующие функциональные AHASL белки. Изолированные резистентные к гербицидам AHASL полинуклеотидные молекулы в соответствии с данным изобретением содержат нуклеотидные последовательности, кодирующие резистентные к гербицидам AHASL белки. Такие полинуклеотидные молекулы могут быть применены в полинуклеотидных конструкциях для превращения растений, особенно сельскохозяйственных растений, для повышения резистентности указанных растений к гербицидам, в частности гербицидам, которые, как известно, ингибируют AHAS активность, более конкретно, к гербицидам на основе имидазолинона. Такие полинуклеотидные конструкции могут быть применены в кассетах экспрессии, векторах экспрессии, векторах трансформации, плазмидах и подобных. Трансгенные растения, полученные после трансформации при помощи таких полинуклеотидных конструкций, показывают повышенную резистентность к AHASингибирующим гербицидам, таким как, например, гербициды на основе имидазолинона и гербициды на основе сульфонилмочевины. Композиции в соответствии с данным изобретением включают нуклеотидные последовательности,кодирующие AHASL белки. В частности, данное изобретение обеспечивает изолированные полинуклеотидные молекулы, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID : 2 и 4, и их фрагменты и варианты и кодирующие полипеп-8 020462 тиды, имеющие AHAS активность. Дополнительно обеспечены полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, которая кодируется полинуклеотидной молекулой, описанной в данной заявке, например, такую, которая представлена в SEQ ID : 1 и 3, и ее фрагменты и варианты, кодирующие полипептиды, обладающие AHAS активностью. Изобретение охватывает изолированные или в значительной степени очищенные композиции нуклеиновых кислот или белков. "Изолированная" или "очищенная" полинуклеотидная молекула или белок,или их биологически активная часть, являются в значительной степени или существенно свободными от компонентов, которые обыкновенно сопровождают полинуклеотидную молекулу или белок или взаимодействуют с ними в их окружающей естественной среде. Таким образом, изолированная или очищенная полинуклеотидная молекула или белок являются в значительной степени свободными от другого клеточного материала, или культуральной среды, при получении при помощи рекомбинантных методов, или в значительной степени свободны от химических прекурсоров или других химических соединений при химическом синтезе. Преимущественно, "изолированная" нуклеиновая кислота является свободной от последовательностей (преимущественно, последовательностей, кодирующих белок), которые естественно окружают нуклеиновую кислоту (то есть, последовательности, расположенные на 5' и 3' концах нуклеиновой кислоты) в геномной ДНК организма, из которого получена нуклеиновая кислота. Например, в разных вариантах воплощения изолированная полинуклеотидна молекула может содержать менее, чем,приблизительно, 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb или 0,1 kb нуклеотидных последовательностей, которые естественно окружают полинуклеотидную молекулу в геномной ДНК клетки, из которой получена нуклеиновая кислота. Белок, который являются в значительной степени свободным от клеточного материала, включает препараты белка, содержащие менее чем приблизительно, 30, 20, 10, 5 или 1% (по сухой массе) контаминирующего белка. При получении белка в соответствии с данным изобретением или его биологически активной части с помощью рекомбинантных методов, преимущественная культуральная среда содержит менее чем приблизительно 30, 20, 10, 5 или 1% (за сухой массой) химических прекурсоров или химических соединений, которые не являются рассматриваемым белком. Данное изобретение обеспечивает изолированные полипептиды, содержащие AHASL белки. Изолированные полипептиды содержат аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID : 2 и 4, аминокислотных последовательностей, которые кодируются нуклеотидными последовательностями, представленными в SEQ ID : 1 и 3, и функциональные фрагменты и варианты указанных аминокислотных последовательностей, которые кодируют AHASL полипептид, обладающий AHAS активностью. Под "функциональными фрагментами и вариантами" подразумевают фрагменты и варианты иллюстративных полипептидов, обладающих AHAS активностью. В конкретных воплощениях данного изобретения способы включают применение устойчивых к гербицидам или резистентных к гербицидам растений. Под термином "устойчивое к гербицидам" или"резистентное к гербицидам" растение следует подразумевать растение, которое является устойчивым или резистентным по меньшей мере к одному гербициду на уровне, который обычно разрушал бы или ингибировал бы рост нормального растения или растения дикого типа. В одном воплощении данного изобретения устойчивые к гербицидам растения в соответствии с данным изобретением содержат устойчивый к гербицидам или резистентный к гербицидам AHASL белок. Под термином "устойчивый к гербицидам AHASL белок" или "резистентный к гербицидам AHASL белок" следует подразумевать, что такой AHASL белок проявляет более высокую AHAS активность по сравнению с AHAS активностьюAHASL белка дикого типа в присутствии по меньшей мере одного гербицида, который, как известно,препятствует AHAS активности при концентрации или уровне гербицида, который, как известно, ингибирует AHAS активность AHASL белка дикого типа. Дополнительно AHAS активность такого устойчивого к гербицидам или резистентного к гербицидам AHASL белка может в данной заявке иметь название"устойчивая к гербицидам" или "резистентная к гербицидам" AHAS активность. Для данного изобретения термины "устойчивый к гербицидам" и "резистентный к гербицидам" употребляют как взаимозаменяемые и, как предполагается, имеющие эквивалентное значение и эквивалентную область. Аналогично, термины "устойчивость к гербицидам" и "резистентность к гербицидам" употребляют как взаимозаменяемые и, как предполагается, имеющие эквивалентное значение и эквивалентную область. Аналогично, термины "имидазолинон-резистентный", "резистентный к имидазолинону" и "резистентность к имидазолинону" употребляют как взаимозаменяемые и, как предполагается,имеющие эквивалентное значение и эквивалентную область, что и термины "имидазолинонустойчивый", "устойчивый к имидазолинону" и "устойчивость к имидазолинону" соответственно. Данное изобретение охватывает резистентные к гербицидам AHASL полинуклеотиды и резистентные к гербицидам AHASL белки. Под термином "резистентный к гербицидам AHASL полинуклеотид" следует подразумевать полинуклеотид, кодирующий белок, обладающий гербицид-резистентной AHAS активностью. Под термином "резистентный к гербицидам AHASL белок" следует подразумевать белок или полинуклеотид, обладающий гербицид-резистентной AHAS активностью. Дополнительно признано, что устойчивый к гербицидам или резистентный к гербицидам AHASL белок может быть введен в растение путем трансформирования растения или его предшественника при помощи нуклеотидной последовательности, кодирующей устойчивый к гербицидам или резистентный к гербицидам AHASL белок. Такие устойчивые к гербицидам или резистентные AHASL белки кодируются устойчивыми к гербицидам или резистентными к гербицидам AHASL полинуклеотидами. Альтернативно, устойчивый к гербицидам или резистентный к гербицидам AHASL белок может встречаться у растения в результате естественного происхождения или может быть вызван мутацией в эндогенном AHASL гене в геноме растения или его предшественника. Данное изобретение обеспечивает растения, растительные ткани, растительные клетки и клеткихозяева с повышенной резистентностью или устойчивостью по меньшей мере к одному гербициду, особенно гербициду на основе имидазолинона или сульфонилмочевины. Преимущественное количество или концентрация гербицида представляют собой "эффективное количество" или "эффективную концентрацию". Под "эффективным количеством" и "эффективной концентрацией" подразумевают количество и концентрацию, соответственно, достаточные для уничтожения или ингибирования роста подобных, дикого типа, растения, растительной клетки или клетки-хозяина, тем не менее, указанное количество не уничтожает или не ингибирует в значительной степени рост гербицид-резистентных растений, растительных тканей, растительных клеток и клеток-хозяев в соответствии с данным изобретением. Типично,эффективное количество гербицида представляет собой количество, которое традиционно применяют в системах сельскохозяйственного производства для уничтожения рассматриваемых бурьянов. Такое количество известно специалистам в данной области. Под термином "подобное, дикого типа, растение, растительная ткань, растительная клетка или клетка-хозяин" подразумевают растение, растительную ткань, растительную клетку или клетку-хозяин,соответственно, которая не имеет характеристик резистентности к гербицидам и/или определенному полинуклетиду в соответствии с данным изобретением, который описан в данной заявке. Поэтому при употреблении термина "дикого типа" не подразумевают, что растение, растительная клетка или иная клеткахозяин не содержат рекомбинантную ДНК в своем геноме, и/или не имеют характеристик резистентности к гербицидам, которые отличаются от описанных в данной заявке. Как употребляется в данной заявке, если четко не указано иное, термин "растение" предназначен для обозначения растения какой-либо стадии развития, а также какой-либо части или частей растения,которая может быть прикреплена к или отделена от целого интактного растения. Такие части растения включают органы, ткани и клетки растений, но не ограничиваются ими. Примеры конкретных частей растения включают стебель, листья, корень, соцветие, цветок, цветок компактного соцветия, фрукт, цветоножку, плодоножку, тычинку, пыльник, рыльце, столбик, завязь, лепесток, чашелистик, плодолистик,концовку корня, корневой чехлик, корневую волосинку, листовые волосинки, волосинки семян, пыльцевое зернышко, микроспору, семядолю, гипокотиль, эпикотиль, ксилему, флоему, паренхиму, эндосперм,клетку-спутник, замыкающую клетку и любые другие известные органы, ткани и семена растения. Более того, признано, что семена - это растение. Растение в соответствии с данным изобретением включают как нетрансгенные растения, так и трансгенные растения. Под термином "нетрансгенное растение" подразумевают растение, в геноме которого не хватает рекомбинантной ДНК. Под термином "трансгенное растение" подразумевают растение,геном которого содержит рекомбинантную ДНК. Такое трансгенное растение может быть получено путем введения рекомбинантной ДНК в геном растения. Когда такая рекомбинантная ДНК включена в геном трансгенного растения, потомство растения может также содержать рекомбинантную ДНК. Потомство растения, содержащее по меньшей мере часть рекомбинантной ДНК по меньшей мере одного предшествующего трансгенного растения, также представляет собой трансгенное растение. Данное изобретение обеспечивает гербицид-резистентную линию подсолнечника, которая в данной заявке имеет название S4897, ее потомство и производные, обладающие гербицид-резистентными характеристиками S4897. Депонирование семян подсолнечника GM40, полученного из линии подсолнечникаS4897, обладающего гербицид-резистентными характеристиками S4897, было осуществлено в патентном депозитарии американской коллекции типовых культур (Patent Depository of the American Type CultureCollection -ATCC), Mansassas, VA 20110 USA 17 мая 2005 p., обозначено патентным депозитарным номером американской коллекции типовых культур РТА-6716. Депонирование линии подсолнечника GM40 было сделано на срок по крайней мере 30 лет, и по крайней мере 5 лет после последнего запроса для обеспечения образца депозита, полученного АТСС. Дополнительно заявители удовлетворили все условия 37 C.F.R.1.801-1.809, включая обеспечение указания жизнеспособности образца. Данное изобретение обеспечивает гербицид-резистентную линию подсолнечника, которая в данной заявке имеет название GM1606. Депонирование семян подсолнечника GM1606 было осуществлено в патентном депозитарии американской коллекции типовых культур (Patent Depository of the American Type Culture Collection - ATCC),Mansassas, VA 20110 USA 19 мая 2006 p., обозначено патентным депозитарным номером американской коллекции типовых культур РТА-7606. Депонирование линии подсолнечника GM40 было сделано на срок по крайней мере 30 лет и по крайней мере 5 лет после последнего запроса для обеспечения образца депозита, полученного АТСС. Дополнительно заявители удовлетворили все условия 37 C.F.R.1.8011.809, включая обеспечение указания жизнеспособности образца. Данное изобретение обеспечивает резистентные к гербицидам растения подсолнечника, полученные путем мутационного селекционирования. Растения подсолнечника дикого типа были мутагенизированы путем воздействия на растения мутагена, особенно химического мутагена, более конкретно, этилметансульфоната (EMS). Тем не менее, данное изобретение не ограничивается гербицид-резистентными растениями подсолнечника, которые получают способом мутагенеза, включая химический мутаген EMS. Любой способ мутагенеза, известный из уровня техники, может быть применен для получения резистентных к гербицидам растений подсолнечника в соответствии с данным изобретением. Такие способы мутагенеза могут включать, например, применение какого-либо одного или более из таких мутагенов: излучение, такое, как рентгеновское излучение, гамма излучение (например, кобальта 60 или цезия 137),нейтроны, (например, продукт деления ядра ураном 235 в атомном реакторе), бета излучение (например,эмитированное из радиоизотопов, таких, как фосфор 32 или углерод 14), и ультрафиолетовое излучение(преимущественно, от 2500 до 2900 нм), и химические мутагены, такие, как основные аналоги (например, 5-бромурацил), родственные соединения (например, 8-этоксикафеин), антибиотики (например,стрептонигрин), алкилирующие агенты (например, сернистые иприты, азотистые иприты, эпоксиды, этиленамины, сульфаты, сульфонаты, сульфоны, лактоны), азид, гидроксиламин, азотистую кислоту или акридины. Резистентные к гербицидам растения также могут быть получены путем применения способов тканевых культур для того, чтобы выбрать растения, содержащие резистентные к гербицидам мутации, и потом восстанавливает из них резистентные к гербицидам растения. См., например, патенты США 5773702 и 5859348, оба из них полностью включены в эту заявку путем ссылок. Дополнительные детали мутационного селекционирования можно найти в "Principals of Cultivar Development" Fehr, 1993 Macmillan Publishing Company, описание которой включено в данную заявку путем ссылки. Анализ AHASL1 гена растения подсолнечника линий S4897 и GM1606 обнаружил ту мутацию, которая приводит к замещению треонина на аланин, найденному в аминокислотном положении 7 вAHASL1 аминокислотной последовательности дикого типа для SEQ ID : 4. Аминокислотное положение 7 в SEQ ID : 2 и 4 соответствует аминокислотному положению 107 в полновесной аминокислотной последовательности AHASL1 белка подсолнечника, представленного в SEQ ID : 12. Таким образом, данное изобретение описывает, что замещение другой аминокислоты на аланин в аминокислотном положении 107, или в эквивалентном положении, в белке AHASL может привести к тому, что растение подсолнечника буде иметь повышенную резистентность к гербициду, особенно гербициду на основе имидазолинона и/или сульфонилмочевины. Как описано у примере 6 ниже, аланин в аминокислотном положении 107 встречается в консервативном участке AHASL белков. Аналогично, были описаны аминокислотные замещения в других консервативных участках AHASL белков, которые, как известно, придают гербицидную резистентность растению, содержащему такой AHASL белок. Соответственно, гербицид-резистентные растения подсолнечника в соответствии с данным изобретением включают растения подсолнечника, содержащие в их геномах по меньшей мере одну копию AHASL полинуклеотида, кодирующего гербицид-резистентный AHASL белок, содержащий треонин в аминокислотном положении 107 или эквивалентном положении, но не ограничиваются ними. Растения подсолнечника в соответствии с данным изобретением дополнительно включают растения, содержащие, по сравнению с AHASL белком дикого типа, треонин или другую аминокислоту, что отличается от аланин у, в аминокислотном положении 107 или эквивалентном положении, и одну или более дополнительные аминокислотные замещения в AHASL белке по сравнению с AHASL белком дикого типа, где такое растение подсолнечника имеет повышенную резистентность по меньшей мере до одного гербицида по сравнению с растением подсолнечника дикого типа. Такие растения подсолнечника содержат AHASL белки, содержащие треонин или другую аминокислоту, которая отличается от аланина,в аминокислотном положении 107 или эквивалентном положении и по меньшей мере один компонент,выбранный из группы, которая состоит из: аланина, треонина, гистидина, лейцина, аргинина, изолейцина, глутамина, или серина в аминокислотном положении 182 или эквивалентном положении; изолейцина или другой аминокислоты, которая отличается от треонина в аминокислотном положении 188 или эквивалентном положении; аспартата или валина в аминокислотном положении 190 или эквивалентном положении; лейцина в аминокислотном положении 559 или эквивалентном положении; и аспарагина, треонина, фенилаланина или валина в аминокислотном положении 638 или эквивалентном положении. Данное изобретение обеспечивает AHASL белки с аминокислотными замещениями в конкретных аминокислотных положениях в пределах консервативных участков AHASL белков подсолнечника, описанных в данной заявке. Дополнительно специалист в данной области признает, что такие аминокислотные положения могут изменяться в зависимости от того, добавлены ли аминокислоты или удалены из,например, N-терминального конца аминокислотной последовательности. Таким образом, данное изобретение охватывает аминокислотные замещения в описанном положении или эквивалентном положении(например, "аминокислотное положение 107 или эквивалентное положение"). Под "эквивалентным положением" подразумевают положение, которое находится в пределах того же самого консервативного участка, что и иллюстративное аминокислотное положение. Такие консервативные участки известны из уровня техники (см. таблицу, приведенную ниже) или могут быть определены при помощи многоразовой линеаризации последовательностей, как описано в данной заявке, или при помощи способов, известных из уровня техники. Дополнительно данное изобретение обеспечивает AHASL полипептиды, содержащие аминокислотные замещения, которые, как известно, придают растению резистентность по меньшей мере к одному гербициду, особенно гербициду на основе имидазолинона и/или гербицида на основе сульфонилмочевины. Такие AHASL полипептиды включают, например, те,которые содержат треонин в аминокислотном положении 107 и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, которая состоит из аланина,треонина, гистидина, лейцина, аргинина, изолейцина, глутамина, или серина в аминокислотном положении 182 или эквивалентном положении; изолейцина или другой аминокислоты, иной, чем треонин, в аминокислотном положении 188 или эквивалентном положении; аспартата или валин у в аминокислотном положении 190 или эквивалентном положении; аспартата или валина в аминокислотном положении 190 или эквивалентном положении; лейцина в аминокислотном положении 559 или эквивалентном положении; и аспарагина, треонина, фенилаланина или валина в аминокислотном положении 638 или эквивалентном положении. Данное изобретение дополнительно обеспечивает изолированные полинуклеотиды, кодирующие такие AHASL полипептиды, а также кассеты экспрессии, векторы трансформации,трансформированные клетки-хозяева, трансформированные растения и способы, включающие такие полинуклеотиды. Данное изобретение обеспечивает способы для повышения устойчивости или резистентности растений, растительной ткани, растительной клетки или другой клетки-хозяина к по меньшей мере одному гербициду, который препятствует активности AHAS фермента. Преимущественно, такой AHASингибирующий гербицид представляет собой гербицид на основе имидазолинона, гербицид на основе сульфонилмочевины, гербицид на основе триазолопиримидина, гербицид на основе пиримидинилоксибензоата, гербицид на основе сульфониламинокарбонилтриазолинона или их смесь. Преимущественно,такой AHAS-ингибирующий гербицид представляет собой гербицид на основе имидазолинона, гербицид на основе сульфонилмочевины, гербицид на основе триазолопиримидина, гербицид на основе пиримидинилоксибензоата, гербицид на основе сульфониламинокарбонилтриазолинона или их смесь. Для данного изобретения, к гербицидам на основе имидазолинона принадлежат, не ограничиваясь приведенными, PURSUIT (имазетапир), CADRE (имазапик), RAPTOR (имазамокс), SCEPTER (имазахин), ASSERT (имазетабенз), ARSENAL (имазапир), производные какого-либо из вышеуказанных гербицидов,или смесь двух или большего количества указанных выше гербицидов, например, таких, как имазапир/имазамокс (ODYSSEY). Более конкретно, гербицид на основе имидазолинона может быть выбран,но не ограничен, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислотой, 2-(4 изопропил-4 метил- 5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-3-хинолинкарбоновой кислотой, 5-этил-2-(4-изопропил 4-метил-5-оксо-2 имидазолин-2-ил)никотиновой кислотой,2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2 имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислотой,2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2 имидазолин-2-ил)-5-метилникотиновой кислотой и смесью метил 6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2 имидазолин-2-ил)-м-толуата и метил 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-п-толуата, но не ограничивается ними. Применение 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2 ил)никотиновой кислоты и 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты является преимущественным. Применение 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2 имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты является особенно преимущественным. Для данного изобретения, гербициды на основе сульфонилмочевины включают, не ограничиваясь приведенными, хлорсульфурон, метсульфуронметил, сульфометуронметил, хлоримуронэтил, тифенилсульфуронметил, трибенуронметил, бенсульфуронметил, никосульфурон, этаметсульфуронметил, римсульфурон, трифлусульфуронметил, триасульфурон, примисульфуронметил, циносульфурон, амидосульфуон, флазасульфурон, имазосульфурон, пиразосульфуронэтил, галосульфурон, азимсульфурон,циклосульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон метил, форамсульфурон, йодсульфурон, оксасульфурон, мезосульфурон, просульфурон, сульфосульфурон, трифлоксисульфурон,тритосульфурон, производное какого-либо из указанных выше гербицидов, и смесь двух или более из указанных выше гербицидов. Гербициды на основе триазолопиримидина в соответствии с данным изобретением включает, не ограничиваясь приведенными, клорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам и пеноксулам. Гербициды на основе пиримидинилоксибензоата в соответствии с данным изобретением включают, не ограничиваясь приведенными, биспирибак, пиритиобак, пириминобак,пирибензоксим и пирифталид. Гербициды на основе сульфониламинокарбонилтриазолинона включают,не ограничиваясь приведенными, флукарбазон и пропоксикарбазон. Известно, что гербициды на основе пиримидинилоксибензоата тесно связаны с гербицидами на основе пиримидинилтиобензоата и обобщены под заголовком названия последнего компанией Weed Science Society of America. Соответственно, гербициды в соответствии с данным изобретением дополнительно включают гербициды на основе пиримидинилтиобензоата, включая гербициды на основе пиримидинилоксибензоата, описанные выше, но не ограничиваясь ими. Данное изобретение обеспечивает способы повышения AHAS активности в растениях, которые включают трансформирование растений при помощи полинуклеотидной конструкции, содержащей про- 12020462 мотор, функционально связанный с AHASL1 нуклеотидной последовательностью в соответствии с данным изобретением. Указанные способы включают введение полинуклеотидной конструкции в соответствии с данным изобретением по меньшей мере в одну растительную клетку и восстановление из трансформированного растения. Указанные способы включают применение промотора, способного запускать экспрессию гена в растительной клетке. Преимущественно такой промотор представляет собой конститутивный промотор или преимущественный для ткани промотор. Указанные способы применяют для усиления или повышения резистентности растения по меньшей мере к одному гербициду, который препятствует каталитической активности AHAS фермента, особенно гербициду на основе имидазолинона. Данное изобретение обеспечивает кассеты экспрессии для экспрессии полинуклеотидов данного изобретения в растениях, растительных тканях, растительных клетках и других клетках-хозяевах. Кассеты экспрессии содержат промотор, который может экспрессироваться в рассматриваемых растении, растительной ткани, растительной клетке или другой клетке-хозяине, функционально связанных с полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полновесную (то есть, содержащую транзитный пептид хлоропласта) или зрелый AHASL1 белок (то есть, без транзитного пептида хлоропласта). Если экспрессия является желательной в пластидах или хлоропластах растений или растительных клеток, кассета экспрессии может также содержать функционально связанную хлоропласт-направленную последовательность, кодирующую транзитный пептид хлоропласта. Кассеты экспрессии в соответствии с данным изобретением применяют в способе усиления устойчивости к гербициду растения или клетки-хозяина. Указанный способ включает трансформирование растения или клетки-хозяина при помощи кассеты экспрессии в соответствии с данным изобретением, где кассета экспрессии содержит промотор, который может экспрессироваться в рассматриваемых растении или клетке-хозяине, и указанный промотор, функционально связанный с полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующий резистентный к имидазолинону AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Употребление в данной заявке термина "нуклеотидные конструкции" не предназначено для ограничения данного изобретения полинуклеотидными конструкциями, содержащими ДНК. Специалисты в данной области признают, что полинуклеотидные конструкции, особенно полинуклеотиды и олигонуклеотиды, состоящие из рибонуклеотидов и комбинаций рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов могут также быть применены в способах, описанных в данной заявке. Таким образом, полинуклеотидные конструкции в соответствии с данным изобретением охватывают все полинуклеотидные конструкции,которые могут быть применены в способах в соответствии с данным изобретением для трансформации растений, включая те, которые состоят из дезоксирибонуклеотидов, рибонуклеотидов и их комбинаций,но не ограничиваются ими.Такие дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды включают как молекулы,которые встречаются в природе, так и синтетические аналоги. Полинуклеотидные конструкции в соответствии с данным изобретением также охватывают все формы полинуклеотидных конструкций, включая одно-цепочечные формы, двух цепочечные формы, шпильки, структуры стебли-и-петли и т.п., но не ограничиваясь ими. Дополнительно, специалистам в данной области понятно, что каждая нуклеотидная последовательность, описанная в данной заявке, также охватывает комплемент той приведенной нуклеотидной последовательности. Дополнительно, каждая нуклеотидная последовательность, описанная в данной заявке, также охватывает комплемент той приведенной нуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением, может использовать полинуклеотидную конструкцию, способную направлять в трансформированном растении экспрессию по меньшей мере одного белка или по меньшей мере одной РНК, такой как, например, антисмысловая РНК, комплементарная к по меньшей мере части иРНК. Типично, такая полинуклеотидная конструкция состоит из кодирующей последовательности для белка или РНК, функционально связанной с 5' и 3' транскрипционными регуляторными участками. Альтернативно, также признано, что способы в соответствии с данным изобретением могут использовать полинуклеотидную конструкцию, не способную направлять в трансформированном растении экспрессию белка или РНК. Дополнительно, признано, что для экспрессии полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением в клетке-хозяине, которая рассматривается, полинуклеотид является типично функционально связанным с промотором, способным запускать ген экспрессии в клетке-хозяине, которая рассматривается. Способы в соответствии с данным изобретением для экспрессии полинуклеотидов в клетке-хозяине не зависят от конкретного промотора. Указанные способы включают применение какого-либо промотора,известного из уровня техники и способного запускать ген экспрессии в клетке-хозяине, которая рассматривается. Данное изобретение охватывает AHASL полинуклеотидные молекулы и их фрагменты и варианты. Полинуклеотидные молекулы, которые представляют собой фрагменты этих нуклеотидных последовательностей, также включены в данное изобретение. Под термином "фрагмент" подразумевают часть нуклеотидной последовательности, кодирующий AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Фрагмент AHASL нуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением может ко- 13020462 дировать биологически активную часть AHASL белка или он может быть фрагментом, который может быть использован как гибридизационный зонд или праймер ПЦР, с использованием описанных ниже методов. Биологически активная часть AHASL белка может быть получена путем выделения части одной из AHASL нуклеотидных последовательностей в соответствии с данным изобретением, экспрессии закодированной части AHASL белка (например, путем рекомбинантной экспрессии in vitro), и оценки активности закодированной части AHASL1 белка. Полинуклеотидные молекулы, которые являются фрагментами AHASL нуклеотидной последовательности, содержат по меньшей мере приблизительно 15, 20, 50,75, 100, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 или 1100 нуклеотидов или вплоть до количества нуклеотидов, которые присутствуют в полновесной нуклеотидной последовательности, описанной в данной заявке (например, 1178 нуклеотидов для обеих SEQ ID : 1 и 3) в зависимости от предполагаемого применения. Фрагмент AHASL нуклеотидной последовательности, кодирующий биологически активную частьAHASL белка в соответствии с данным изобретением, будет кодировать по меньшей мере приблизительно, 15, 25, 30, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300 или 350 соседних аминокислот или вплоть до общего количества аминокислот, которые присутствуют в полновесном AHASL1 белке в соответствии с данным изобретением (например, 392 аминокислот для обеих SEQ ID : 2 и 4). Фрагменты AHASL1 нуклеотидной последовательности, полезные как гибридизационный зонд для ПЦР праймеров, в основном,не должны кодировать биологически активную часть AHASL1 белка. Полинуклеотидные молекулы, представляющие собой варианты нуклеотидных последовательностей, описанных в данной заявке, также включены в данное изобретение. "Варианты" AHASL нуклеотидных последовательностей в соответствии с данным изобретением включают те последовательности,которые кодируют AHASL белки, описанные в данной заявке, но которые консервативно отличаются изза вырожденности генетического кода. Указанные аллельные варианты естественного происхождения могут быть определены путем применения хорошо известных способов молекулярной биологии, например, при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) и методов гибридизации, как описано ниже. Вариантные нуклеотидные последовательности также включают синтетически полученные нуклеотидные последовательности, такие, как последовательности, полученные, например, при применении сайтнаправленого мутагенеза, но которые все еще кодируют AHASL1 белок, раскрытый в данном изобретении, как описано ниже. Как правило, варианты нуклеотидных последовательностей в соответственно с изобретением будут иметь по меньшей мере приблизительно, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ,или 99%идентичности к определенной нуклеотидной последовательности, описанной в данной заявке. Вариантная AHASL нуклеотидная последовательность будет кодировать AHASL белок соответственно,содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере приблизительно 70,75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичности к аминокислотной последовательностиAHASL белка, описанного в данной заявке. Дополнительно, специалист далее поймет, что путем мутации могут быть введены изменения в нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением, что, таким образом, приводит к изменениям в аминокислотной последовательности закодированных AHASL белков без изменения биологической активности AHASL белков. Таким образом, изолированная полинуклеотидная молекула,кодирующая AHASL белок, имеющий последовательность, которая отличается от последовательностиSEQ ID : 1 или 3, соответственно, может быть создана путем введения одного или более нуклеотидных замещений, добавлений или делеций в соответствующую нуклеотидную последовательность, описанную в данной заявке, таким образом, что одну или более аминокислотных замещений, добавлений или делеций вводят в закодированный белок. Мутации могут быть введены при помощи стандартных способов, таких, как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Такие вариантные нуклеотидные последовательности также включены в данное изобретение. Например, преимущественно, консервативные аминокислотные замещения могут быть осуществлены в одном или более предусмотренных, преимущественно заменимых аминокислотных остатках."Заменимый" аминокислотный остаток представляет собой остаток, который может быть изменен в последовательности дикого типа AHASL белка (например, последовательности SEQ ID : 2 и 4, соответственно) без изменения биологической активности, в то время как "незаменимый" аминокислотный остаток является необходимым для биологической активности. "Консервативное аминокислотное замещение" представляет собой замещение, при котором аминокислотный остаток заменяют на аминокислотный остаток, имеющий подобную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющие подобные боковые цепи, были определены в уровне техники. Указанные семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, такие, как лизин, аргинин, гистидин), с кислотными боковыми цепями (например, такие, как аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота), с незаменимыми полярными боковыми цепями (например, такие, как глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), с неполярными боковыми цепями (например, такие, как аланин, валин, лейцин, изолейцин,пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), с бета-разветвленными боковыми цепями (например, такие, как треонин, валин, изолейцин) и с ароматическими боковыми цепями (например, такие, как тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Такие замещения могли бы быть сделаны для консервативных аминокислотных остатков или для аминокислотных остатков, которые находятся в пределах консервативного фрагмента. Белки в соответствии и изобретением могут быть изменены разными способами, включая замещения, делеции, усекания и инсерции аминокислот. Способы для таких манипуляций хорошо известны из уровня техники. Например, варианты аминокислотной последовательности AHASL1 белка могут быть получены путем мутаций в ДНК. Способы для мутагенеза и изменений нуклеотидной последовательности хорошо известны из уровня техники. См., например, Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488492; Kunkel и др. (1987) Methods in Enzymol. 154:367-382; Патент США 4 873 192; Walker and Gaastra,eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) и ссылки, приведенные в них. Инструкции относительно соответствующих аминокислотных замещений, которые не влияют на биологическую активность белка, который рассматривается, можно обнаружить в модели Dayhoff и др. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), которая включена в данную заявку путем ссылки. Консервативные замещения, такие, как обмен одной аминокислоты на другую, обладающую подобными свойствами, могут быть преимущественными. Альтернативно, вариантные AHASL нуклеотидные последовательности могут быть сделаны путем введения мутаций случайным образом во всей или в части AHASL кодирующей последовательности,таких, как мутагенез насыщения, и полученные мутанты могут быть отсортированы по AHAS активности для определения мутантов, которые сохранили AHAS активность, включая AHAS активность резистентности к гербицидам. После мутагенеза, закодированный белок может быть рекомбинантно экспрессирован, и активность белка может быть определена с использованием стандартных методов анализа. Таким образом, нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением включают последовательности, описанные в данной заявке, а также их фрагменты и варианты. AHASL нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением и их фрагменты и варианты могут быть применены в качестве зондов и/или праймеров для определения и/или клонирования AHASL гомологов в других растениях. Такие зонды могут быть применены для выявления транскриптов или геномных последовательностей, кодирующих те же самые или идентичные белки. Таким образом, такие способы, как ПЦР, гибридизация и подобные, могут быть применены для определения таких последовательностей, обладающих значительной идентичностью с последовательностями в соответствии с данным изобретением. См., например, Sambrook и др. (1989) Molecular Cloning:Protocols: A Guide to Methods and Applications (Academic Press, NY). AHASL нуклеотидные последовательности, изолированные на основании идентичности их последовательностей к AHASL1 нуклеотидных последовательностей, представленных в данной заявке, или к их фрагментам и BapiaHTaM, включены в данное изобретение. В способе гибридизации все или часть из известных AHASL нуклеотидных последовательностей могут быть применены для отсортировки кДНК или геномных библиотек. Способы для конструирования таких кДНК и геномных библиотек, в основном, известны из уровня техники и описаны у Sambrook и др.(1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, NY). Так называемые гибридизационные зонды могут представлять собой геномные ДНК фрагменты, кДНК фрагменты, РНК фрагменты или другие олигонуклеотиды, и могут быть мечеными при помощи групп,которые обнаруживаются, таких как 32 Р, или какой-либо иной маркер, который обнаруживается, такой,как другие радиоизотопы, флуоресцентное соединение, фермент, или ферментный кофактор. Зонды для гибридизации могут быть получены путем меток синтетических олигонуклеотидов, основанных на известной AHASL нуклеотидной последовательности, описанной в данной заявке. Дополнительно могут быть использованы вырожденные праймеры, разработанные на основе консервативных нуклеотидов или аминокислотных остатках в известной AHASL нуклеотидной последовательности или закодированной аминокислотной последовательности. Зонд обычно включает участок нуклеотидной последовательности,которая гибридизуется в жестких условиях по меньшей мере приблизительно до 12, преимущественно приблизительно 25, более преимущественно приблизительно 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350,400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 или 1178 последовательных нуклеотидов AHASL нуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением, их фрагмента или варианта. Получение зондов для гибридизации, в основном, известное из уровня техники, описано у Sambrook и др. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York),которое включено в данную заявку путем ссылки. Например, целая AHASL последовательность, описанная в данной заявке, или одна или более ее частей может быть применена в качестве зонда, способного специфически гибридизоваться к соответствующим AHASL последовательностям и деформационным РНК. Способы гибридизации включают гибридизационный скрининг покрытых библиотек ДНК (или пятна или колонии; см., например, Sambrook и др. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview,New York). Гибридизация таких последовательностей может быть выполнена в жестких условиях. Под "жесткими условиями" или "жесткими условиями гибридизации" подразумевают условия, при которых зонд гибридизуется к его целевой последовательности в ощутимо большей степени, чем к другим последовательностям (например, по меньшей мере, 2-кратно по сравнению с базовым уровнем). Жесткие условия зависят от последовательности и будут разными при разных обстоятельствах. Как правило, жесткие условия будут такими, при которых концентрация соли составляет менее чем приблизительно 1,5 М ионов Na, обычно, приблизительно, от 0,01 до 1,0 М ионов Na (или других солей) при рН 7,0-8,3 и температура составляет по меньшей мере приблизительно 30 С для коротких зондов(например, 10-50 нуклеотидов) и по меньшей мере приблизительно 60 С для длинных зондов (например,более чем 50 нуклеотидов). Жесткие условия могут также быть достигнуты путем добавления дестабилизирующих средств, таких как формамид. Иллюстративные слабые условия жесткости включают гибридизацию с буферным раствором, содержащим 30-35% формамида, 1 М NaCl, 1% SDS (натрия додецилсульфата) при 37 С, и промывание 1X до 2 Х SSC (20X SSC = 3,0 М NaCl/0,3 M тринатрия цитрата) при 50-55 С. Иллюстративные умеренные условия жесткости включают гибридизацию в 40-45% формамиде,1,0 М NaCl, 1% SDS при 37 С, и промывание 0,5 Х до 1X SSC при 55 до 60 С. Иллюстративные сильные условия жесткости включают гибридизацию в 50% формамиде, 1 М NaCl, 1% SDS при 37 С, и промывание в 0,1 Х SSC при 60-65 С. Необязательно, промывные буферы могут содержать приблизительно от 0,1 до 1% SDS. Продолжительность гибридизации обычно составляет менее чем приблизительно 24 ч, обычно приблизительно от 4 до 12 ч. Специфичность типично является функцией постгибридизационных промывок, критическими факторами являются ионная сила и температура концевого промывочного раствора. Для гибридов ДНК-ДНКTm может быть приблизительно определена из уравнения Meinkoth и Wahl (1984) Anal. Biochem. 138:267284: Tm = 81,5C + 16,6 (log M) + 0,41 (% ГЦ) - 0,61 (% форм) - 500/L; где M - молярность одновалентных катионов, % ГЦ - процент гуанозиновых и цитозиновых нуклеотидов в ДНК, % форм - процент формамида в растворе для гибридизации и L - длина гибрида в парах оснований, Tm - температура (при определенной ионной силе и рН), при которой 50% комплементарной целевой последовательности гибридизуется до прекрасно подобранного зонда. Tm уменьшается приблизительно на 1 С для каждого 1% несоответствия; таким образом, Tm, гибридизация, и/или условия промывки могут быть подобраны таким образом, чтобы гибридизоваться до последовательностей желаемой идентичности. Например, если ищут последовательности с 90% идентичностью, Tm можно уменьшить на 10 С. Вообще, жесткие условия выбирать таким образом, чтобы температура составляла приблизительно на 5 С ниже, чем температура плавления (Tm) для определенной последовательности и ее комплемента при конкретной ионной силе и конкретном рН. Однако в сильно жестких условиях можно использовать гибридизацию и/или промывку при 1, 2, 3, или 4 С ниже, чем температура плавления (Tm); в условиях средней жесткости можно использовать гибридизацию и/или промывку при 6, 7, 8, 9 или 10 С ниже, чем температура плавления (Tm); в низких условиях жесткости можно использовать гибридизацию и/или промывку при 11, 12, 13, 14, 15 или 20 С ниже, чем температура плавления (Tm). При помощи уравнения, гибридизации и состава растворов для промывки и желательной Tm специалисты в данной области поймут, что изменения в жесткости гибридизации и/или растворах для промывки неразделимо связаны. Если желательная степень несоответствия приводит к Tm менее, чем 45 С (водный раствор) или 32 С (раствор формамида), желательно увеличить концентрацию SSC таким образом, чтобы могла быть использована более высокая температура. Исчерпывающее руководство по гибридизации нуклеиновых кислот найдено у Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes, Part I, Chapter 2 (Elsevier, New York); и Ausubel и др., eds. (1995) Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 2(Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York). См. Sambrook и др. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York). Признано, что полинуклеотидные молекулы и белки в соответствии с данным изобретением охватывают полинуклеотидные молекулы и белки, содержащие нуклеотид или аминокислотную последовательность, которая в достаточной степени идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID : 1 и/или 3, или аминокислотной последовательности SEQ ID : 2 и/или 4. Термин "в достаточной степени идентичный" употребляют в данной заявке для того, чтобы отнести первую аминокислотную или нуклеотидную последовательность, содержащую достаточное или минимальное количество идентичных или эквивалентных (например, с одинаковой боковой цепью) аминокислотных остатков или нуклеотидов, ко второй аминокислотной или нуклеотидной последовательности, таким образом, чтобы первая и вторая аминокислотная или нуклеотидная последовательности имели одинаковый структурный домен и/или одинаковую функциональную активность. Например, аминокислотные или нуклеотидные последовательности, содержащие одинаковый структурный домен, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 45, 55 или 65% идентичности, преимущественно 75% идентичности, более преимущественно 85,95 или 98% идентичности, определены в данной заявке как в достаточной степени идентичные. Для определения процента идентичности между двумя аминокислотными последовательностями или двумя нуклеиновыми кислотами, последовательности линеаризуют в целях оптимального сравнения. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой функцию количества одинаковых положений, поделенную на последовательности (то есть процент идентичности = количест- 16020462 во одинаковых положений/общее количество положений (например, положений, которые перекрываются)100). В одном воплощении, две последовательности имеют одинаковую длину. Процент идентичности между двумя последовательностями может быть определен с использованием технологии, подобной описанным ниже, с разрешительными интервалами или без них. При расчете процента идентичности обычно рассчитывают точные пары совпадений. Определения процента идентичности последовательности между двумя последовательностями может быть произведено, используя математический алгоритм. Преимущественный, не ограничивающий пример математического алгоритма, который используют для сравнения двух последовательностей,представляет собой алгоритм Karlin и Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264, модифицированный как у Karlin и Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Такой алгоритм включен вNBLAST и XBLAST программы Altschul и др. (1990) J. Mol. Biol. 215:403. Нуклеотидные поиски BLAST можна производить при помощи программы NBLAST, балл = 100, длина слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных полинуклеотидным молекулам в соответствии с данным изобретением. Поиски нуклеотида BLAST могут быть выполнены при помощи программы NBLAST,балл = 50, длина = 3, с получением аминокислотных последовательностей, гомологичных молекулам белка в соответствии с данным изобретением. Чтобы получить выравнивания с промежутками в целях сравнения, можна применять Gapped BLAST, как описано в Altschul и др. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389. Альтернативно, можно применять PSI-BLAST, чтобы выполнить повторный поиск, который выявляет отдаленные взаимоотношения между молекулами. См. Altschul и др. (1997) выше. При применении BLAST, Gapped BLAST, PSI-BLAST программ, можно использовать параметры по умолчанию соответствующих программ (например, XBLAST и NBLAST). См. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Другой преимущественный, не ограничивающий пример математического алгоритма, который используют для сравнения последовательностей, представляет собой алгоритм Myers и Miller (1988) CABIOS 4:11-17. Такой алгоритм включен в ALIGN программу (версия 2.0), которая является частью пакета программного обеспечения для линеаризации последовательностей GCG. При использовании ALIGN программы для сравнения аминокислотных последовательностей, РАМ 120 таблица масс остатков, может быть использован штраф длины промежутка 12, и штраф промежутка 4. Выравнивания могут также быть осуществлены вручную путем проверки. Если не указано иное, значения идентичности/схожести последовательности, представленные тут,относятся к значению, полученному с использованием всей длины последовательностей в соответствии с изобретением и линеаризации при помощи алгоритма Clustal W (Nucleic Acid Research, 22(22): 46734680, 1994), при помощи программы AlignX, включенной в пакет программного обеспечения Vector NTISuite Версия 7 (InforMax, Inc., Bethesda, MD, USA) с использованием параметров по умолчанию; или любой эквивалентной программы. Под "эквивалентной программой" подразумевают любую программу сравнения последовательности, которая для любых двух рассматриваемых последовательностей производит выравнивание, имеющее идентичные пары нуклеотидных или аминокислотных остатков и идентичный процент идентичности последовательности при сравнении с соответствующим выравниванием,сделанным при помощи AlignX в пакете программного обеспечения Vector NTI Suite Версия 7.AHASL нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением включают как последовательности естественного происхождения, так и мутантные формы, особенно мутантные формы, кодирующие AHASL белки, обладающие гербицид-резистентной AHAS активностью. Аналогично,белки в соответствии с данным изобретением охватывают как белки, которые встречаются в природе, так и их варианты и модифицированные формы. Такие варианты продолжают иметь желательную активность AHAS. Очевидно, мутации, которые будут осуществлены в последовательности ДНК, кодирующей этот вариант, не должны содержать последовательность вне рамки считывания и, желательно, не будут создавать комплементарные участки, которые могли создать вторичную структуру иРНК. См., публикацию патентной заявки ЕР 75444. Делеции, инсерции и замещения последовательностей белков, включенные в данную заявку, как ожидается, не вносят радикальных изменений в характеристики белка. Тем не менее, в случае, если тяжело заранее предвидеть точный эффект замещения, делеции или инсерции, для специалиста в данной области будет очевидным, что эффект будет оцениваться при помощи рутинных скрининговых анализов. Таким образом, активность может быть оценена при помощи анализов AHAS активности. См., например,Singh и др. (1988) Anal. Biochem. 171:173-179, включенную в данную заявку путем ссылки. Вариантные нуклеотидные последовательности и белки также охватывают последовательности и белки, полученные мутагенными и рекомбинантными методами, такими, как тасование ДНК. По такому методу можно манипулировать одной или большим количеством разных AHASL кодирующих последовательностей, чтобы создать новый AHASL белок, имеющий преимущественные свойства. Таким образом, получают библиотеки рекомбинантных полинуклеотидов из совокупности полинуклеотидов с родственными последовательностями, содержащие участки последовательности, имеющие существенную идентичность последовательности и могут быть гомологично рекомбинированы in vitro или in vivo. Например, используя данный подход, мотивы последовательности, кодирующие домен, который рассматривается, могут быть перетасованы между геном AHASL в соответствии с данным изобретением и дру- 17020462 гими известными генами AHASL для получения нового гена, кодирующего белок с улучшенным свойством, который рассматривается, как, например, увеличение Km в случае фермента. Стратегии для такого тасования ДНК известны из уровня техники. См., например, Stemmer (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:10747-10751; Stemmer (1994) Nature 370:389-391; Crameri и др. (1997) Nature Biotech. 15:436-438;Crameri и др. (1998) Nature 391:288-291; и Патенты США 5 605 793 и 5 837 458. Нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением можно применять для выделения соответствующих последовательностей из других организмов, особенно других растений,более конкретно других двудольных. Таким образом, можно применять такие способы, как ПЦР, гибридизация и т.п., для идентификации таких последовательностей на основании гомологичности последовательностей к последовательностям, представленным в данной заявке. Последовательности, выделенные на основании их идентичности ко всем полинуклеотидным последовательностям AHASL, представленным в данной заявке, или к их фрагментам, охвачены данным изобретением. Таким образом, изолированные последовательности, кодирующие AHASL белок, которые гибридизуются в жестких условиях до последовательности, описанной в данной заявке, или ее фрагментов, охвачены данным изобретением. В методе ПЦР могут быть разработаны олигонуклеотидные праймеры для использования в реакциях для амплификации соответствующих последовательностей ДНК из кДНК или геномной ДНК, извлеченной из какого-либо растения, которое рассматривается. Способы разработки ПЦР праймеров и ПЦР клонирования являются общеизвестными из уровня техники и описаны Sambrook и др. (1989) MolecularMethods Manual (Academic Press, New York). Известные способы ПЦР включают способы, где используют парные праймеры, гнездовые (nested) праймеры, отдельные специфические праймеры, вырожденные праймеры, ген-специфические праймеры, вектор-специфические праймеры, частично-несогласованные праймеры и т.п., но не ограничиваются ими.AHASL полинуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением обеспечиваются в кассетах экспрессии для экспрессии в растении, которое рассматривается. Кассета буде содержать 5' и 3' регуляторные последовательности, функционально связанные с последовательностьюAHASL1 в соответствии с данным изобретением. Под термином "функционально связанный" подразумевают функциональную связь между промотором и второй последовательностью, причем последовательность промотора инициирует и опосредствует транскрипцию последовательности ДНК, которая соответствует второй последовательности. Обычно "функционально связанный" означает, что последовательности нуклеиновых кислот, будучи связанными, являются заменимыми и, в случае необходимости, присоединяются к двум кодирующим белки участкам, заменимым в той же самой рамке считывания. Кассета может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген, для котрансформации в организме. Альтернативно, дополнительный ген(ы) могут быть представлены на многоразовых кассетах экспрессии. Такая кассета экспрессии предлагается с великим множеством сайтов рестрикции для вставкиAHASL полинуклеотидной последовательности, чтобы пребывать под транскрипционным регулированием регуляторных участков. Кассета экспрессии может дополнительно содержать выбираемые генымаркеры. Кассета экспрессии будет включать в 5'-3' направлении транскрипции, транскрипционный и трансляционный участок инициирования (то есть промотор), AHASL полинуклеотидную последовательность в соответствии с данным изобретением, и транскрипционный и трансляционный участок терминации (то есть, участок терминации), функциональный в растениях. Промотор может быть нативным или аналогичным, или посторонним или гетерологичным, к растению-хозяину и/или к AHASL1 полинуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением. Дополнительно, промотор может быть естественной последовательностью или, альтернативно, синтетической последовательностью. В случае, когда промотор является "посторонним" или "гетерологичным" к растению-хозяину, считается, что промотор не найден в нативном растении, в которое вводится промотор. В случае, когда промотор является"посторонним" или "гетерологичным" к AHASL полинуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением, считается, что промотор не является нативным промотором или промотором, который встречается в природе, для функционально связанной AHASL полинуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением. Как используется в данной заявке, химерный ген содержит кодирующую последовательность, функционально связанную с участком инициирования транскрипции,которая является гетерологичной к кодирующей последовательности. В то время как преимущественной является экспрессия AHASL полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением при помощи гетерологичных промоторов, можно использовать нативные промоторные последовательности. Такие конструкции изменили бы уровни экспрессии AHASL белка в соответствии с изобретением или в растении или растительной клетке. Таким образом, изменяется фенотип растения или растительной клетки. Участок терминации может быть нативным к участку инициирования транскрипции, может быть нативным к функционально связанной AHASL последовательности, которая рассматривается, может быть нативным к растению-хозяину или может быть получен из другого источника (то есть, посторонней или гетерологичной к промотору, AHASL полинуклеотидной последовательности, которая рассматривается, растения-хозяина или какой-либо их комбинации). Ручные участки терминации получают из Tiплазмид А. tumefaciens, таких, как участки терминации октопинсинтазы и нопалинсинтазы. См. также(1991) Genes Dev. 5:141-149; Mogen и др. (1990) Plant Cell 2:1261-1272; Munroe и др. (1990) Gene 91:151158; Ballas и др. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; и Joshi и др. (1987) Nucileic Acid Res. 15:96279639. Там, где это целесообразно, ген(ы) может быть оптимизирован для увеличения экспрессии в трансформированном растении. Таким образом, гены могут быть синтезированы с использованием преимущественных для растений кодонов для улучшения экспрессии. См., например, Campbell и Gowri (1990) PlantPhysiol. 92:1-11 для обсуждения использования преимущественного для хозяина кодона. В уровне техники известны способы синтеза преимущественных для растений генов. См., например, патенты США 5 380 831 и 5 436 391, и Murray и др. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498, включенные в данную заявку путем ссылки. Дополнительные модификации последовательности, как известно, усиливают экспрессию генов в клеточном хозяине. К ним принадлежат извлечения последовательностей, кодирующих поддельные сигналы полиадениляции, экзон-интронные сигналы сайтов соединения, транспозон-подобные повторения и др. такие хорошо охарактеризованные последовательности, которые могут быть вредными для экспрессии генов. Содержание Г-Ц последовательности может быть приспособлено к уровням, средним для данного клеточного хозяина, как вычислено относительно известных генов, которые экспрессируются в клетке-хозяине. При возможности, последовательность модифицируют, чтобы чтобы избежать предполагаемых шпильковых вторичных структур иРНК. Нуклеотидные последовательности для повышения генной экспрессии также могут быть применены в векторах экспрессии растений. Они включают интроны кукурузного AdhI, интронный ген (Callis и др. Genes and Development 1:1183-1200, 1987), и лидерные последовательности, (W-последовательность) из вируса табачной мозаики (ВТМ), вируса хлоротичной пятнистости кукурузы и вируса люцерновой мозаики (Gallie и др. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987 и Skuzeski и др. Plant Mol. Biol. 15:65-79, 1990). Первый интрон из неразвитого t-1 локуса кукурузы, как показано, повышает экспрессию генов в химерных генных конструкциях. Патенты США 5424412 и 5593874 раскрывают применение специфических интронов в конструкциях генной экспрессии, и Gallie и др. (Plant Physiol. 106:929-939, 1994) также показали, что интроны являются полезными для регулирования генной экспрессии на тканеспецифической основе. Для дополнительного повышения или для оптимизации AHAS большой субъединицы генной экспрессии, векторы экспрессии растения в соответствии с данным изобретением также могут содержать ДНК последовательности, имеющие матричные участки прикрепления (MAR - matrix attachmentregion). Растительные клетки, трансформированные при помощи таких модифицированных систем экспрессии, далее могут показывать сверхэкспрессию или конститутивную экспрессию нуклеотидной последовательности в соответствии с данным изобретением. Кассеты экспрессии могут дополнительно содержать 5' лидерских последовательностей в конструкции кассеты экспрессии. Такие лидерские последовательности могут функционировать для увеличения трансляции. Лидеры трансляции известны в данной области и включают: лидеров пиконавируса,например, лидера EMCV (5' некодирующий участок Encephalomyocarditis) (Elroy-Stein и др. (1989) Proc.- Tobacco Etch Virus) (Gallie и др. (1995) Gene 165(2):233-238), лидера MDMV (вирус карликовой мозаики кукурузы - Maize Dwarf Mosaic Virus) (Virology 154:9-20), и белок, связывающий тяжелую цепь человеческого иммуноглобулина, (BiP) (Macejak и др. (1991) Nature 353:90-94); нетранслированого лидера из иРНК белка оболочки вируса мозаики люцерны (AMV RNA 4) (Jobling и др. (1987) Nature 325:622-625); лидера вируса мозаики табака (TMV) (Gallie и др. (1989) у Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, NewYork), pp. 237-256); и лидера вируса хлоротичной пятнистости кукурузы (MCMV - maize chlorotic mottlevirus) (Lommel и др. (1991) Virology 81:382-385). См. также, Della-Cioppa и др. (1987) Plant Physiol. 84:965-968. Могут также быть применены другие способы, известные для увеличения трансляции, например интроны и т.п. При получении кассеты экспрессии можно манипулировать различными фрагментами ДНК, для обеспечения последовательностей ДНК должной ориентации и, если это целесообразно, в должной рамке считывания. Для этого, можно применять адаптеры или линкеры для присоединения фрагментов ДНК или можно осуществлять другие манипуляции для того, чтобы обеспечить удобные сайты рестрикции,удаления лишней ДНК, удаления сайтов рестрикции и т.п. С этой целью можно применять in vitro мутагенез, репарацию праймера, рестрикцию, отжиг, повторные замещения, например, транзиции и трансверсии. В практике изобретения может быть использован ряд промоторов. Промоторы можно выбирать на основании желательного результата. Нуклеиновые кислоты можна комбинировать с конститутивными,желательными для тканей, или другими промоторами для экспрессии в растениях. К таким конститутивным промоторам принадлежат, например, промотор оболочки Rsyn7 промотора и другие конститутивные промоторы, описанные в WO 99/43838 и патенте США 6072050; промотор CaMV 35S оболочки (Odell и др. (1985) Nature 313:810-812); рисовый актин (McElroy и др. (1990)(1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last и др. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten и др. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); промотор ALS (патент США 5 659 026) и т.п. К другим конститутивным промоторам принадлежат, например, описанные в патентах США 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463, 5608142 и 6177611. Чтобы направить увеличенную экспрессию AHASL1 в пределах определенной растительной ткани можно использовать преимущественные для тканей промоторы. Такие преимущественные для тканей промоторы включают, не ограничиваясь приведенными, преимущественные для листьев промоторы,преимущественные для корней промоторы, преимущественные для семян промоторы и преимущественные для стеблей промоторы. К преимущественным для тканей промоторов относятся Yamamoto и др.(1993) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590; и Guevara-Garcia и др. (1993) Plant J. 4(3):495-505. Такие промоторы могут быть модифицированы, если необходимо, для слабой экспрессии. В одном варианте воплощения рассматриваемые нуклеиновые кислоты направлены на хлоропласт для экспрессии. В таком способе, при котором нуклеиновая кислота, которая рассматривается, непосредственно не вводится в хлоропласт, кассета экспрессии будет дополнительно содержать направленную на хлоропласт последовательность, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую хлоропластный транзитный пептид для направления генного продукта, который рассматривается, на хлоропласты. Такие транзитные пептиды известны из уровня техники. Что касается направленных на хлоропласт последовательностей, то "функционально связанный" означает, что последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая транзитный пептид (то есть, направленная на хлоропласт последовательность),связывается с полинуклеотидом AHASL в соответствии с данным изобретением таким образом, что эти две последовательности являются заменимыми и находятся в той же рамке считывания. См., например,Von Heijne и др. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark и др. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550;Della-Cioppa и др. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer и др. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; and Shah и др. (1986) Science 233:478-481. В то время как AHASL белки в соответствии с данным изобретением включают нативный хлоропластовый транзитный пептид, какой-либо хлоропластовый транзитный пептид, известный из уровня техники, может быть связан с аминокислотной последовательностью зрелого AHASL белка в соответствии с данным изобретением путем функционального связывания направленной на хлоропласт последовательности к 5'-концу нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый AHASL белок в соответствии с данным изобретением. Направленные на хлоропласт последовательности известны из уровня техники и включают хлоропластную малую субъединицу рибулозо-1,5-бифосфат карбоксилазы (Rubisco) (de Castro Silva Filho и др.(1996) Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell и др. (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5(энолпирувил)шикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS) (Archer и др. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789810); триптофансинтазу (Zhao и др. (1995) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); пластоцианин (Lawrence и др. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); хоризматсинтазу (Schmidt и др. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); и белок, связывающий легкий хлорофилл a/b (LHBP) (Lamppa и др. (1988) J. Biol.(1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah и др. (1986) Science 233:478-481. Способы трансформации хлоропластов известны из уровня техники. См., например, Svab и др.(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8526-8530; Svab и Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913917; Svab и Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606. Способ основан на частичной поставке ДНК, содержащей выбираемый маркер и направленные ДНК на геном пластиды через гомологичную рекомбинацию. Дополнительно, можно достигнуть трансформации пластиды трансактивацией молчаливого пластидного трансгена путем экспрессии в определенной ткани ядерно-закодированной и пластид-направленной РНК-полимеразы. Про такую систему сообщалось в McBride и др. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305. Нуклеиновые кислоты, которые рассматриваются, которые могут быть направлены на хлоропласт,могут быть оптимизированы для экспрессии в хлоропласты с учетом отличий в использовании кодона между ядром растения и эти органоидом. Таким способом, рассматриваемые нуклеиновые кислоты можно синтезировать с использованием кодонов, преимущественных для хлоропластов. См., например, па- 20020462 тент США 5380831, включенный в данную заявку путем ссылки. Как описано в данной заявке, AHASL нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением применяют для повышения устойчивости растений к гербицидам, содержащие в их геномах ген, кодирующий устойчивый к гербицидам AHASL белок. Такой ген может представлять собой эндогенный ген или трансген. Дополнительно, в конкретных воплощениях последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с данным изобретением могут быть собраны с любой комбинацией рассматриваемых полинуклеотидных последовательностей для создания растения с желательным фенотипом. Например, полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением могут быть скомпонованы с какими-либо другими полинуклеотидами, кодирующими полипептиды, обладающие пестицидной и/или инсектецидной активностью, такими как, например, белки Bacillus thuringiensis токсина (описанные в патентах США 5366892; 5747450; 5737514; 5723756; 5593881 и Geiser и др. (1986) Gene 48:109). Полученные комбинации также могут включать множественные копии какого-либо одного из рассматриваемых полинуклеотидов. Признано, что при помощи этих нуклеотидных последовательностей могут быть сконструированы антисмысловые конструкции, комплементарные по меньшей мере к части информационной РНК (иРНК) для AHASL полинуклеотидных последовательностей. Антисмысловые нуклеотиды конструируют для гибридизации с соответствующей иРНК. Можно создать модификации антисмысловых последовательностей, пока последовательности гибридизуются из и взаимодействуют с экспрессией соответствующей иРНК. Таким способом можно использовать антисмысловые конструкции, имеющие 70%, преимущественно 80%, более преимущественно 85% идентичности последовательности к соответствующим антисмысловым последовательностям. Дополнительно можно использовать части антисмысловых нуклеотидов для того, чтобы запустить экспрессию целевого гена. Обычно можно использовать последовательности по меньшей мере с 50 нуклеотидами, 100 нуклеотидами, 200 нуклеотидами или более. Нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением можно также использовать в смысловой ориентации для того, чтобы подавить экспрессию эндогенных генов в растениях. Способы подавления генной экспрессии в растениях с использованием нуклеотидных последовательностей в смысловой ориентации известны из уровня техники. Способы, как правило, включают трансформацию растений при помощи ДНК конструкции, содержащей промотор, который запускает экспрессию в растении, функционально связанный по меньшей мере с частью нуклеотидной последовательности, которая соответствует транскрипта эндогенного гена. Как правило, такая нуклеотидная последовательность имеет существенную идентичность последовательности к последовательности транскрипта эндогенного гена, преимущественно более, чем приблизительно 65% идентичности последовательности, более преимущественно более чем приблизительно 85% идентичности последовательности, наиболее преимущественно более чем приблизительно 95% идентичности последовательности. См., патенты США 5283184 и 5034323; включенные в данную заявку путем ссылки. В то время как резистентные к гербицидам AHASL1 полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением применяют как выбираемые гены-маркеры для трансформации растений, кассеты экспрессии в соответствии с данным изобретением могут включать другой выбираемый ген-маркер для выбора трансформированных клеток. Выбираемые гены-маркеры, включая такие из данного изобретения, используют для выбора трансформированных клеток или тканей. Гены-маркеры включают гены, кодирующие резистентность к антибиотикам, такие, как гены, кодирующие неомицинфосфотрансферазу IINatl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551; Oliva и др. (1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka и др. (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 (Springer-Verlag, Berlin); Gill и др. (1988) Nature 334:721-724. Такие описания включены в данную заявку путем ссылки. Вышеуказанный перечень генов-маркеров не является ограничивающим. Любой выбираемый генмаркер может быть использован в данном изобретении. Изолированные полинуклеотидные молекулы, содержащие нуклеотидную последовательность, кодирующую AHASL белки в соответствии с данным изобретением могут быть использованы в векторах для трансформации растений, таким образом, чтобы созданные растения имели повышенную резистент- 21020462 ность к гербицидам, особенно к гербицидам на основе имидазолинона. Изолированные AHASL полинуклеотидные молекулы в соответствии с данным изобретением могут быть использованы в векторах отдельно или в комбинации с нуклеотидной последовательностью, кодирующей малую субъединицуAHAS (AHASS) фермента, в придании растениям резистентности к гербицидам. См. патент США 6348643; включенный в данную заявку путем ссылки. Данное изобретение также относится к вектору экспрессии растений, содержащему промотор, направляющий экспрессию в растении, функционально связанный с изолированной полинуклеотидной молекулой в соответствии с данным изобретением. Изолированная полинуклеотидная молекула содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую AHASL белок, особенно AHASL белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID : 2 или 4, или ее функциональный фрагмент и вариант. Вектор экспрессии растений в соответствии с данным изобретением не зависит от конкретного промотора, за исключением того, что такой промотор способен запускать экспрессию гена в растительной клетке. Преимущественные промоторы включают конститутивные промоторы и преимущественные для тканей промоторы. Векторы трансформации в соответствии с данным изобретением могут быть применены для получения растений, трансформированных при помощи рассматриваемого гена. Вектор трансформации будет содержать выбираемый ген-маркер в соответствии с данным изобретением и ген, который рассматривается, который будет введен и типично экспрессирован в трансформированном растении. Такой выбираемый ген-маркер содержит гербицид-резистентный AHASL полинуклеотид в соответствии с данным изобретением, функционально связанный с промотором, направляющим экспрессию гена в растительной клетке. Для применения в растениях и растительных клетках, вектор трансформации содержит выбираемый ген-маркер, содержащий гербицид-резистентный AHASL полинуклеотид в соответствии с данным изобретением, функционально связанный с промотором, направляющим экспрессию гена в растительной клетке. Гены, рассматриваемые в данном изобретении, отличаются в зависимости от желаемого результата. Например, могут представлять интерес различные изменения в фенотипе, включая изменение состава жирных кислот в растении, изменение содержания аминокислот растения, изменение защитных механизмов растения к насекомым и/или патогенам и т.п. Этих результатов можно достичь путем обеспечения экспрессии гетерологичных продуктов или увеличения экспрессии эндогенных продуктов в растениях. Альтернативно, указанных результатов можно достичь путем обеспечения снижения экспрессии одного или нескольких эндогенных продуктов, особенно ферментов или кофакторов в растении. Эти изменения приводят к изменению в фенотипе трансформированного растения. В одном воплощении данного изобретения, рассматриваемые гены включают гены резистентности к насекомым, таких, как, например, гены токсичного белка Bacillus thuringiensis (патенты США 5366892; 5747450; 5736514; 5723756; 5593881 и Geiser и др. (1986) Gene 48: 109).AHASL белки или полипептиды в соответствии с данным изобретением могут быть выделены, например, из растений подсолнечника и могут быть применены в композициях. Также изолированная полинуклеотидная молекула, кодирующая AHASL белок в соответствии с данным изобретением, может быть изменена для экспрессии AHASL белка в соответствии с данным изобретением в микробе, таком,как Е. coli или дрожжи. Экспрессированный AHASL белок может быть очищен от экстрактов Е. coli или дрожжей при помощи какого-либо способа, известного специалисту в данной области. Данное изобретение также относится к способу создания трансгенного растения, являющегося резистентным к гербицидам, который включает трансформирование растения при помощи вектора экспрессии растения, содержащего промотор, направляющий экспрессию в растении, функционально связанный с изолированной полинуклеотидной молекулой в соответствии с данным изобретением. Изолированная полинуклеотидная молекула содержит нуклеотидную последовательность, кодирующуюAHASL белок в соответствии с данным изобретением, в частности AHASL белок, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID : 2, аминокислотную последовательность,которая кодируется SEQ ID : 1, или функциональный фрагмент и вариант указанных аминокислотных последовательностей. Данное изобретение также относится к нетрансгенным растениям подсолнечника, трансгенным растениям, полученным в соответствии со способами данного изобретения, и прямого потомства и другого потомства таких нетрансгенных и трансгенных растений, где указанные растения проявляют усиленную или повышенную резистентность к гербицидам, которые препятствуют AHAS ферменту, особенно гербицидам на основе имидазолинона и сульфонилмочевины.AHASL полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением, особенно те, что кодируют гербицид-резистентные AHASL белки, применяют в способах повышения резистентности устойчивых к гербицидам растений. В одном воплощении данного изобретения, устойчивые к гербицидам растения содержат устойчивый к гербицидам или резистентный к гербицидам AHASL белок. Устойчивые к гербицидов растения включают как растения, трансформированные при помощи устойчивых к гербицидамAHASL нуклеотидных последовательностей, так и растения, содержащие в их геномах эндогенный ген,кодирующий устойчивый к гербицидам AHASL белок. Нуклеотидные последовательности, кодирующие устойчивые к гербицидов AHASL белки и устойчивые к гербицидам растения, содержащие эндогенный ген, кодирующий устойчивый к гербицидам AHASL белок, включают полинуклеотиды и растения в соответствии с данным изобретением и полинуклеотиды и растения, известные из уровня техники. См.,например, патенты США 5013659, 5731180, 5767361, 5545822, 5736629, 5773703, 5773704, 5952553 и 6274796; все из которых включены в данную заявку путем ссылки. Такие способы повышения резистентности устойчивых к гербицидам растений включают трансформирование устойчивого к гербицидам растения при помощи по меньшей мере одной полинуклеотидной конструкции, содержащей промотор,направляющий экспрессию в растительной клетке, и функционально связанный с резистентным к гербицидам AHASL полинуклеотидом в соответствии с данным изобретением, особенно таким как полинуклеотид, кодирующий резистентный к гербицидам AHASL белок, представленный в SEQ ID : 1, полинуклеотиды, кодирующие аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID : 2, и фрагменты и варианты указанных полинуклеотидов, кодирующие полипептиды, обладающие гербицидрезистентной AHAS активностью. Имеются многочисленные векторы трансформации растений и способы трансформирования растений. См., например, An, G. и др. (1986) Plant Pysiol, 81:301-305; Fry, J. и др. (1987) Plant Cell Rep. 6:321325; Block, M. (1988) Theor. Appl Genet.76:767-774; Hinchee, и др. (1990) Stadler. Genet. Symp.203212.203212; Cousins, и dp. (1991) Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494; Chee, P. P. и Slightom, J. L. (1992) Gene. 118:255-260; Christou, и др. (1992) Trends. Biotechnol. 10:239-246; D'Halluin, и др. (1992) Bio/Technol. 10:309-314; Dhir, и др. (1992) Plant Physiol. 99:81-88; Casas и др. (1993) Proc. Nat. Acad Sci. USA 90:1121211216; Christou, P. (1993) In Vitro Cell. Dev. Biol.-Plant; 29P:119-124; Davies, и др. (1993) Plant Cell Rep. 12:180-183; Dong, J. A. and Mchughen, A. (1993) Plant Sci. 91:139-148; Franklin, С I. и Trieu, T. N. (1993)Plant. 16:225-230; Christou, P. (1994) Agro. Food. Ind. Hi Tech. 5: 17-27; Eapen и др. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman, и др. (1994) Bio-Technology 12: 919923; Ritala, и др. (1994) Plant. Mol. Biol. 24:317325; и Wan, Y. С. и Lemaux, P. G. (1994) Plant Physiol. 104:3748. Способы в соответствии с данным изобретением включают введение полинуклеотидной конструкции в растение. Под "введением" подразумевают предоставление растению полинуклеотидной конструкции таким образом, что конструкция получает доступ к внутренней части растительной клетки. Способы в соответствии с данным изобретением не зависят от конкретного способа введения нуклеотидной конструкции в растение, а состоят только в том, что нуклеотидная конструкция получает доступ к внутренней части по меньшей мере одной растительной клетки. Способы для введения нуклеотидной конструкции в растение известны из уровня техники, включая способы стабильной трансформации, способы транзиторной трансформации и опосредованные вирусом способы, но не ограничиваясь ими. Под термином "стабильная трансформация" подразумевают, что нуклеотидная конструкция, введенная в растение, интегрируется в геном растения и способна к унаследованию ее потомством. Под термином "транзиторная трансформация" подразумевают, что нуклеотидная конструкция, веденная в растение, не интегрируется в геном растения. Для трансформирования растений и растительных клеток нуклеотидные последовательности в соответствии с данным изобретением вставляют с использованием стандартных технологий в любой вектор, известный из уровня техники, который является приемлемым для экспрессии нуклеотидных последовательностей в растении или растительной клетке. Выбор вектора зависит от преимущественного способа трансформирования и вида целевого растения, которое трансформируют. В воплощении данного изобретения AHASL1 нуклеотидная последовательность является функционально связанной с растительным промотором, известным для высокоуровневой экспрессии в растительной клетке, и эту конструкцию далее вводят в растение, чувствительное к гербициду на основе имидазолинона, и трансформированное растение регенерируют. Трансформированное растение является устойчивым к действию того уровня гербицида на основе имидазолинона, который бы уничтожал или значительно поражал нетрансформированное растение. Указанный способ может быть применен к растению какого-либо вида; однако наиболее полезно, когда этот способ применяют к сельскохозяйственным растениям. Методологии для конструирования кассет экспрессии растений и введения посторонних нуклеиновых кислот в растения, в основном, известны из уровня техники и были описаны ранее. Например, посторонняя ДНК может быть введена в растение, используя плазмидные векторы, вызывающие опухоли(Ti). Другие способы, которые используют для доставки посторонней ДНК, включают применение PEG опосредованного протопластного трансформирования, електропорацию, микроинъекции и биолистику или бомбардирование микрочастицами для прямого ДНК введения. Такие способы известны из уровня техники, (патент США 5405765, Vasil и др.; Bilang и др. (1991) Gene 100: 247-250; Scheid и др., (1991)Molecular Biology (Schuler and Zielinski, eds.) Academic Press, Inc. (1989). Способ трансформирования зависит от растительной клетки, которую трансформируют, приемлемости использованных векторов,уровня экспрессии генных продуктов и других параметров. Другие приемлемые способы введения нуклеотидных последовательностей в растительные клетки и последующей инсерции в геном растения включают: микроинъекцию, как описано в Crossway и др.Ford (1995) Annals of Botany 75:407-413 (рис); Osjoda и др. (1996) Nature Biotechnology 14:745-750 (кукуруза через Agrobacterium tumefaciens); все из них включены в данную заявку путем ссылки. Полинуклеотиды в соответствии с данным изобретением могут быть введены в растения при контакте растений с вирусами или вирусными нуклеиновыми кислотами. Обычно такие способы включают введения полинуклеотидной конструкции в соответствии с данным изобретением в вирусную молекулу ДНК или РНК. Признано, что AHASL белок в соответствии с данным изобретением может сначала синтезироваться как часть вирусного полипротеина, а позднее вследствие протеолиза in vivo или in vitro может образовываться желательный рекомбинантный белок. Дополнительно признано, что промоторы в соответствии с данным изобретением также охватывают промоторы, которые используют для транскрипции вирусными РНК полимеразами. Способы для введения полинуклеотидных конструкций в растение и экспрессии белка, закодированного в них, с участием вирусных молекул ДНК или РНК, известны из уровня техники. См., например, патенты США 5889191, 5889190, 5866785, 5589367 и 5316931; включенные в данную заявку путем ссылки. Клетки, которые были трансформированы, могут быть выращены в растении в соответствии с традиционными способами. См., например, McCormick и др. (1986) Plant Cell Reports 5:81-84. После этого такие растения можно выращивать и опылять при помощи той же трансформированной линии или различных линий, и идентифицировать полученный гибрид, имеющий конститутивную экспрессию определенной фенотипной характеристики. Можно вырастить два или более поколений, чтобы гарантировать стабильную поддержку и унаследование экспрессии желательной фенотипной характеристики, а потом собрать семена, чтобы гарантировать достижение экспрессии желательной фенотипной характеристики. Таким образом, данное изобретение обеспечивает трансформированные семена (также имеющие название "трансгенные семена"), которые содержат полинуклеотидную конструкцию в соответствии с данным изобретением, например кассету экспрессии в соответствии с данным изобретением, устойчиво включенное в их геном. Данное изобретение может быть применено для трансформации каких-либо видов растений, включая однодольные и двудольные, но не ограничиваясь ими. Примеры рассматриваемых видов растений,включают кукурузу или маис (Zea mays), Brassica sp. (например, В. napus, В. rapa, B.juncea), особенно те виды Brassica, которые используют как источники масла семян, люцерну (Medicago sativa), рис (Oryza(Saccharum spp.), овес, ячмень, овощи, декоративные и хвойные растения, но не ограничиваются ими. Преимущественно, растения в соответствии с данным изобретением представляют собой сельскохозяйственные растения (например, такие, как подсолнечник, Brassica sp., хлопок, сахарная свекла, соя, арахис, люцерна, сафлора, табак, кукуруза, рис, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, сорго, просо, и т.д.). Резистентные к гербицидам растения в соответствии с данным изобретением применяют в способах борьбы с бурьянами. Таким образом, данное изобретение дополнительно обеспечивает способ борьбы с бурьянами поблизости резистентного к гербицидам растения в соответствии с данным изобретением. Способ включает применение эффективного количества гербицида к бурьянам и к резистентному к гербицидам растению, причем указанное растение имеет повышенную резистентность по меньшей мере к одному гербициду, особенно к гербициду на основе имидазолинона или сульфонилмочевины, по сравнению с растением дикого типа. В таком способе борьбы с бурьянами, резистентные к гербицидам растения в соответствии с данным изобретением представляют собой преимущественно сельскохозяйственные растения, включая такие, как подсолнечник, люцерна, Brassica sp., соя, хлопок, сафлор, арахис, табак, помидоры, картофель, пшеница, рис, кукуруза, сорго, ячмень, рожь, просо, и сорго, но не ограничиваясь приведенными. При обеспечении растений, обладающими повышенной резистентность к гербицидам, особенно гербицидам на основе имидазолинона и сульфонилмочевины, можно использовать целый ряд препаратов для защиты растений от бурьянов таким образом, чтобы увеличить рост растения и уменьшить конкуренцию по питательным веществам. Гербицид может быть применен отдельно для до-экстренного, постэкстренного контроля бурьянов, контроля бурьянов перед посадкой и при посадке на площадях, окружающих растение, описанные тут, или может быть применена гербицидная композиция на основе имидазолинона, содержащая другие добавки. Гербицид может также быть применен для обработки семян. К добавкам, содержащимся в составе гербицидной композиции или составе на основе имидазолинона и сульфонилмочевины, относятся другие гербициды, детергенты, адьюванты, средства для распространения, средства прикрепления, стабилизаторы и т.п. Гербицид может быть влажным или сухим препаратом и может содержать сыпучие порошки, эмульгирующие концентраты и жидкие концентраты, но не ограничивается ими. Гербициды и препараты гербицидов могут быть применены в соответствии с традиционными способами, например, путем распыления, орошения, распорошения, покрытия или аналогичным образом. Данное изобретение обеспечивает нетрансгенные и трансгенные семена с повышенной резистентностью по меньшей мере к одному гербициду, особенно AHAS-ингибирующему гербициду. Более конкретно, гербицидам на основе имидазолинона и сульфонилмочевины. Такие семена включают, например,нетрансгенные семена подсолнечника, обладающие характеристиками резистентности к гербицидам растения подсолнечника S4897, растения подсолнечника GM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716, или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606, и трансгенные семена, содержащие полинуклеотидную молекулу в соответствии с данным изобретением, кодирующую гербицид-резистентный AHASL белок. Данное изобретение обеспечивает способы получения резистентного к гербицидам растения, особенно резистентного к гербицидам растения подсолнечника, путем обыкновенного селекционирования растений, которые включают половое размножение. Указанные способы включают скрещивание первого растения, которое является резистентным к гербициду, с другим растением, которое не является резистентным к гербициду. Первое растение может представлять собой какое-либо из резистентных к гербицидам растений в соответствии с данным изобретением, включая, например, трансгенные растения, содержащие по меньшей мере один из полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением, кодирующих гербицид-резистентный AHASL белок, и нетрансгенные растения подсолнечника, обладающие характеристиками устойчивости к гербицидам растения подсолнечника S4897, растения подсолнечникаGM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716 или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606. Другое растение может представлять собой любое растение, способное давать жизнеспособные потомственные растения (то есть, семена) при скрещивании с первым растением. Как правило, но не обязательно, первое и второе растения являются растениями одного вида. Способы в соответствии с данным изобретением могут дополнительно включать одно или более поколений обратного скрещивания потомственных растений первого кросса с растением той же линии или генотипа, что и первое или второе растение. Альтернативно, потомство первого кросса или любого последующего кросса может быть скрещено с третьим растением, которое является растением линии или генотипа, иных, чем первое или второе растение. Способы в соответствии с данным изобретением могут дополнительно включать отбор растений,обладающих характеристиками устойчивости к гербицидам первого растения. Данное изобретение дополнительно обеспечивает способы повышения резистентности к гербицидам растения, особенно гербицид-резистентного растения подсолнечника, путем обыкновенного селекционирования растений, содержащие половое размножение. Указанные способы включают скрещивание первого растения, которое является резистентным к гербициду, со вторым растением, которое может быть резистентным или не резистентным к гербициду, или может быть резистентным к другому гербициду или гербицидам, чем первое растение. Первое растение может представлять собой любое из резистентных к гербицидам растений в соответствии с данным изобретением включая, например, трансгенные растения, содержащие, по меньшей мере, один из полинуклеотидов в соответствии с данным изобретением, кодирующие гербицид-резистентный AHASL, и нетрансгенные растения подсолнечника, обладающие характеристиками устойчивости к гербицидам растения подсолнечника S4897, растения подсолнечника GM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716 или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА 7606. Второе растение может представлять собой любое растение, способное давать жизнеспособные потомственные растения (то есть, семена) при скрещивании с первым растением. Как правило, но не обязательно, первое и второе растения являются растениями одного вида. Потомственные растения, полученные этим способом в соответствии с данным изобретением, имеют повышенную резистентность к гербициду по сравнению с первым или вторым растением или обоими. Если первое или второе растения являются резистентными к разным гербицидам, потомственные растения будут иметь объединенные характеристики устойчивости к гербицидам первого или второго растения. Способы в соответствии с данным изобретением могут дополнительно включать одно или более поколений обратного скрещивания потомственных растений первого кросса с растением той же линии или генотипа, что и первое или второе растения. Альтернативно, потомство первого кросса или какого-либо последующего кросса может быть скрещено с третьим растением, которое является растением линии или генотипа, иных, чем первое или второе растения. Способы в соответствии с данным изобретением могут дополнительно включать отбор растений, обладающих характеристиками устойчивости к гербицидам первого растения, другого растения или как первого, так и второго растения. Растения в соответствии с данным изобретением могут быть трансгенными или не-трансгенными. Пример не-трансгенного растения подсолнечника с повышенной резистентностью к имидазолинону представляет собой растение подсолнечника S4897, растение подсолнечника GM40, растение подсолнечника GM1606, растение подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716, или растение подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606; или мутантное, рекомбинантное или созданное методами генной инженерии производное растения подсолнечника S4897, растения подсолнечника GM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716, или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606; или какого-либо потомства растения подсолнечника S4897, растения подсолнечникаGM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716, или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606; или растения, которое является потомством какого-либо из этих растений; или растения, обладающего характеристиками устойчивости к гербицидам растения подсолнечника S4897, растения подсолнечникаGM40, растения подсолнечника GM1606, растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-6716, или растения подсолнечника с патентным депозитарным номером АТСС РТА-7606. Данное изобретение также обеспечивает растения, органы растений, растительные ткани, растительные клетки, семена и нечеловеческие клетки-хозяева, трансформированные по меньшей мере одной молекулой полинуклеотида, кассетой экспрессии, или вектором трансформации в соответствии с данным изобретением. Такие трансформированные растения, органы растений, растительные ткани, растительные клетки, семена и нечеловеческие клетки-хозяева имеют повышенную устойчивость или резистентность по меньшей мере к одному гербициду, при уровнях последнего, которые уничтожают или ингибируют рост нетрансформированного растения, растительной ткани, растительной клетки и нечеловеческой клетки-хозяина, соответственно. Преимущественно трансформированными растениями, растительными тканями, растительными клетками и семенами в соответствии с данным изобретением являются Arabidopsis thaliana и сельскохозяйственные культуры. Данное изобретение обеспечивает способы, которые включают применение AHAS-ингибирующего гербицида, который выбирают из группы, состоящей из гербицидов на основе имидазолинона, гербицидов на основе сульфонилмочевины, гербицидов на основе триазолопиримидина, гербицидов на основе пиримидинилоксибензоата, гербицидов на основе сульфониламинокарбонилтриазолинона и их смесей. В указанных способах AHAS-ингибирующий гербицид может быть применен любым из способов, известных из уровня техники, включая обработку семян, обработку почвы и обработку листьев, но не ограничиваясь этим. Перед применением AHAS-ингибирующий гербицид может быть превращен в обычно используемые композиции, например, растворы, эмульсии, суспензии, пудры, порошки, пасты и гранулы. Форма применения зависит от определенной предполагаемой цели; в каждом случае, она должна обеспечивать тонкодисперсное и равномерное распределение соединений в соответствии с изобретением. Композиции получают известным способом (см., например, обзор US 3060084, ЕР-А 707445 (для жидких концентратов), Browning, "Agglomeration", Chemical Engineering, Dec. 4, 1967, 147-48, Perry'sKnowles, Chemistry and Technology of Agrochemical Formulations, Kluwer Academic Publishers, Dordrecht,1998 (ISBN 0-7514-0443-8), например, путем увеличения объема активного соединения при помощи вспомогательных веществ, приемлемых для формулирования агрохимикалий, таких как растворители и/или носители, по желанию, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества и диспергирующие агенты,консерванты, противовспенивающие агенты, средства от замерзания, копозиции для обработки семян, а также необязательно красители и/или связующие вещества и/или гелеобразующие агенты. Примерами приемлемых растворителей являются вода, ароматические растворители (например, такие, как Solvesso продукты, ксилол), парафины (например, минеральные фракции), спирты (например,такие, как метанол, бутанол, пентанол, бензиловый спирт), кетоны (например, такие как циклогексанон,гамма-бутиролактон), пирролидоны (NMP, NOP), ацетаты (гликоля диацетат), гликоли, диметиламиды жирных кислот, жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот. В принципе, также можно применять смеси растворителей. Примерами приемлемых носителей являются почвенные природные минералы (например, такие,как каолины, глины, тальк, мел) и почвенные синтетические минералы (например, високодиспергированный кремнезем, силикаты). Приемлемыми эмульгаторами являются неионные и анионные эмульгаторы (например, такие, как полиоксиэтиленовые эфиры жирных спиртов, алкилсульфонаты и арилсульфонаты). Примерами диспергирующих агентов являются лигнинсульфитные отработанные щелочи и метилцеллюлоза. Приемлемыми применяемыми поверхностно-активными веществами являются щелочные, щелочноземельные, аммониевые соли лигно-сульфониевой кислоты, нафталинсульфониевой кислоты, фенолсульфониевой кислоты, дибутил-нафталинсульфониевой кислоты, алкиларилсульфонаты, алкилсульфаты, алкилсульфонаты, сульфаты спиртов жирного ряда, жирные кислоты и сульфатированные гликольэфиры спиртов жирного рядя, дополнительно, продукты конденсации сульфонированного нафталина или производных нафталина с формальдегидом, продукты конденсации нафталина или нафталинсульфоновой кислоты с фенолом и формальдегидом, полиоксиэтиленоктилфенольные эфиры, этоксилированные изооктилфенол, октилфенол, нонилфенол, алкилфенил-полигликолевые эфиры, трибутилфенилполигликолевый эфир, тристеарилфенил-полигликолевый эфир, алкиларилполиэфирные спирты,конденсаты окиси этилена/ спирта жирного ряда и спирта, этоксилированное касторовое масло, полиоксиэтиленалкиловые эфиры, этоксилированный полиоксипропилен, полигликольэфирный ацетат лауриловых спиртов, сложные эфиры сорбита, лигнинсульфитные отработанные щелочи или метилцеллюлоза. Вещества, приемлемые для получения растворов, которые могут быть непосредственно распылены,эмульсий, паст или масляных дисперсий, представляют собой фракции минерального масла и точкой кипения от средней до высокой, такие, как керосин или дизельное топливо, дополнительно, каменноугольные масла и масла растительного или животного происхождения, алифатические, циклические и ароматические углеводороды, например, такие, как толуол, ксилол, парафин, тетрагидронафталин, алкированные нафталины или их производные, метанол, этанол, пропанол, бутанол, циклогексанол, циклогексанон, изофорон, очень полярные растворители, например диметилсульфоксид, N-метилпирролидон и вода. Средства от замерзания, такие как глицерин, этиленгликоль, пропиленгликоль, и бактерицидные агенты также могут быть добавлены к копозиции. Приемлемые противовспенивающие агенты представляют собой, например, противовспенивающие агенты на основе кремния или стеарата магния. Приемлемые консерванты представляют собой, например, дихлорофен и ензилалкохолполуформаль. Копозиции для обработки семян могут дополнительно содержать связующие вещества и, необязательно, красители. Связующие вещества могут быть добавлены для улучшения прилипания активных материалов к семенам после обработки. Приемлемые связующие вещества представляют собой блок-кополимеры ЕО/РО поверхностно-активных веществ, но также поливиниловые спирты, поливинилпирролидоны, полиакрилаты, полиметакрилаты, полибутены, полиизобутилены, полистирол, полиэтиленамины, полиэтиленамиды, полиэтиленимины (Lupasol, Polymin), полиэфиры, полиуретаны, поливинилацетат, тилозу и кополимеры, которые получают из указанных полимеров. Необязательно, композиция также может содержать красители. Приемлемыми красителями или пигментами композиций для обработки семян являются родамин В, C.I. красный пигмент 112, C.I. красный растворитель 1, голубой пигмент 15:4, голубой пигмент 15:3, голубой пигмент 15:2, голубой пиг- 27020462 мент 15:1, голубой пигмент 80, желтый пигмент 1, желтый пигмент 13, красный пигмент 112, красный пигмент 48:2, красный пигмент 48:1, красный пигмент 57:1, красный пигмент 53:1, оранжевый пигмент 43, оранжевый пигмент 34, оранжевый пигмент 5, зеленый пигмент 36, зеленый пигмент 7, белый пигмент 6, коричневый пигмент 25, основной фиолетовый 10, основной фиолетовый 49, кислотный красный 51, кислотный красный 52, кислотный красный 14, кислотный голубой 9, кислотный желтый 23, основной красный 10, основной красный 108. Примером приемлемого гелеорбразующего агента является караген (Satiagel). Порошки, материалы для рассеивания и продукты для распыления могут быть получены путем смешивания или одновременного измельчения активных веществ с твердым носителем. Гранулы, например покрытые гранулы, импрегнированные гранулы и гомогенные гранулы, могут быть получены путем связывания активных соединений к твердым носителям. Примерами твердых носителей являются минеральные земли, такие, как силикагели, силикаты, тальк, каолин, атаклей, известняк, известь, мел, болюс, лесс, глина, доломит, диатомовая земля, кальция сульфат, магния сульфат, магния оксид, грунтовые синтетические материалы, удобрения, такие как, например, аммония сульфат, аммония фосфат, аммония нитрат, мочевины, и продукты растительного происхождения, такие, как мука из злаковых растений, мука из древесной коры, древесная мука и мука из гороховой скорлупы, целлюлозные порошки и другие твердые носители. В основном, копозиции содержат от 0,01 до 95 мас.%, преимущественно от 0,1 до 90 мас.%, AHASингибирующего гербицида. В этом случае, AHAS-ингибирующие гербициды применяют с чистотой от 90 до 100%, преимущественно от 95 до 100% (в соответствии со спектром ЯМР). С целью обработки семян соответствующие копозиции могут быть разведены в 2-10 раз с получением концентраций в готовых к применению препаратах от 0,01 до 60 мас.% активного соединения, преимущественно от 0,1 до 40 мас.%.AHAS-ингибирующий гербицид может быть применен отдельно в форме его композиций или формах применения, полученных из него, например, в форме растворов, которые непосредственно распыляют, порошков, суспензий или дисперсий, эмульсий, масляных дисперсий, паст, продуктов, которые распыляют, материалов для распространения, или гранул, путем разбрызгивания, распыления, опыления,рассеивания или поливания. Формы применения полностью зависят от намеченных целей; они должны обеспечить в каждом случае наилучшее возможное распространение AHAS-ингибирующего гербицида в соответствии с изобретением. Водные формы применения могут быть получены из эмульсионных концентратов, паст или смачиваемых порошков (порошки, которые могут быть разбрызганы, масляные дисперсии) путем добавления воды. Для получения эмульсий, паст или масляных дисперсий, вещества, в чистом виде или растворенные в масле или растворителе, могут быть гомогенизированы в воде при помощи увлажняющего средства, вещества для повышения клейкости, диспергирующего вещества или эмульгатора. Также можно получить концентраты, состоящие из активного вещества, увлажняющего средства, вещества для повышения клейкости, диспергирующего вещества или эмульгирующего вещества и, если приемлемо, растворителя или масла, такие концентраты являются приемлемыми для разведения водой. Концентрации активного соединения в готовых к применению препаратах могут быть изменены в относительно широких пределах. В основном, они составляют от 0,0001 до 10%, преимущественно от 0,01 до 1 мас.%.AHAS-ингибирующий гербицид также может быть успешно применен в процессе сверхмалого объема (ULV), можно применять копозиции, содержащие более 95 мас.% активного соединения, или даже применять активное соединение без вспомогательных веществ. Далее приведены примеры композиций: 1. Продукты для разбавления водой для нанесения на листья. С целью обработки семян, такие продукты можно применять к семенам разбавленными или неразбавленными. А) Водорастворимые концентраты (SL, LS) Десять частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида растворяли в 90 частях по массе воды или водорастворимого растворителя. Альтернативно, добавляли увлажняющие агенты или другие вспомогательные агенты. AHAS-ингибирующий гербицид растворяли при разбавлении водой, в соответствии с чем получали композицию с 10% (мас.) AHAS-ингибирующего гербицида.B) Диспергируемые концентраты (DC) Двадцать частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида растворяли в 70 частях по массе циклогексанона с добавлением 10 частей по массе диспергирующего вещества, например поливинилпирролидона. Разбавление водой приводило к получению дисперсии, в соответствии с чем получали композицию с 20% (мас.) AHAS-ингибирующего гербицида.C) Эмульгирующиеся концентраты (ЕС) Пятнадцать частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида растворяли в 7 частях по массе ксилола с добавлением кальция додецилбензолсульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 частей по массе). Разбавление водой приводило к получению эмульсии, в соответствии с чем получали композицию с 15% (мас.) AHAS-ингибирующего гербицида.D) Эмульсии (EW, ЕО, ES) Двадцать пять частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида растворяли в 35 частях по массе ксилола с добавлением кальция додецилбензолсульфоната и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 частей по массе). Указанную смесь вводили в 30 частей по массе воды при помощи эмульгирующей машины (например, Ultraturax) и превращали в гомогенную эмульсию. Разбавление водой приводило к получению эмульсии, в соответствии с чем получали композицию с 25% (мас.) AHASингибирующего гербицида.E) Суспензии (SC, OD, FS) В шаровой мельнице с непрерывным перемешиванием 20 частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида измельчали с добавлением 10 частей по массе диспергирующих агентов, увлажняющих агентов и 70 частей по массе воды или органического растворителя с получением тонкодисперсной суспензии AHAS-ингибирующего гербицида. Разбавление водой приводило к получению стойкой суспензииAHAS-ингибирующего гербицида, в соответствии с чем получали композицию с 20% (мас.) AHASингибирующего гербицидаF) Вододиспергируемые гранулы и водо-растворимые гранулы (WG, SG) Пятьдесят частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида тщательно измельчали с добавлением 50 частей по массе диспергирующих агентов и увлажняющих агентов и превращали в вододиспергируемые или водо-растворимые гранулы при помощи технических средств (например, таких, как экструзия, скруббер с распыляющим орошением, псевдоожиженный слой). Разбавление водой приводило к получению устойчивой дисперсии или раствора AHAS-ингибирующего гербицида, в соответствии с чем получали композицию с 50% (мас.) AHAS-ингибирующего гербицида.G) Вододиспергируемые порошки и водо-растворимые порошки (WP, SP, SS, WS) Семьдесят пять частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида измельчали в ротор-статорной мельнице с добавлением 25 частей по массе диспергирующих агентов, увлажняющих агентов и силикагеля. Разбавление водой приводило к получению устойчивой дисперсии или раствора AHASингибирующего гербицида, в соответствии с чем получали композицию с 75% (мac.) AHASингибирующего гербицида.I) Гелевые копозиции (GF) В шаровой мельнице с непрерывным перемешиванием 20 частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида измельчали с добавлением 10 частей по массе диспергирующих агентов, 1 части по массе гелеобразующих агентов, увлажняющих агентов и 70 частей по массе воды или органического растворителя с получением тонкодисперсной суспензии AHAS-ингибирующего гербицида. Разбавление водой приводило к получению устойчивой суспензии AHAS-ингибирующего гербицида, в соответствии с чем получали композицию с 20% (мас/ мас.) AHAS-ингибирующего гербицида. Указанная гелевая композиция является приемлемой для применения при обработке семян. 2. Продукты для применения неразбавленными для нанесения на листья. С целью обработки семян, такие продукты можно применять к семенам разбавленными.A) Распыляемые порошки (DP, DS) Пять частей по массе AHAS-ингибирующего гербицида тонкодисперсно измельчали и гомогенно перемешивали с 95 частями по массе тонкоизмельченного каолина. Это приводило к получению распыляемых продуктов, содержащих 5% (мас.) AHAS-ингибирующего гербицида.B) Гранулы (GR, FG, GG, MG) Половину части по массе AHAS-ингибирующего гербицида тонкодисперсно измельчали и перемешивали с 95,5 частями по массе носителей, в соответствии с чем получали композицию с 0,5% (мас.)AHAS-ингибирующего гербицида. Наиболее распространенными способами являются экструзия, высушивание распылением или псевдоожиженный слой. Это приводило к получению гранул, предназначенных для применения неразбавленными для нанесения на листья. Традиционные копозиции для обработки семян включают, например, текучие концентраты FS, растворы LS, порошки для сухой обработки DS, водо-диспергируемые порошки для суспензионной обработки WS, водо-растворимые порошки SS и эмульсию ES и ЕС и гелевую композицию GF. Указанные копозиции могут быть применены к семенам разбавленными или неразбавленными. Применение ко семенам проводят перед посевом,или непосредственно на семена. В преимущественном воплощении FS композицию применяют для обработки семян. Как правило,FS композиция может содержать 1-800 г/л активного ингредиента, 1-200 г/л поверхностно-активного вещества, от 0 до 200 г/л агента от замерзания, от 0 до 400 г/л связывающего агента, от 0 до 200 г/л пигмента и до 1 л растворителя, преимущественно воды. Данное изобретение включает нетрансгенные и трансгенные семена резистентных к гербицидам растений в соответствии с данным изобретением. Такие семена включают, например, нетрансгенные семена подсолнечника, обладающие характеристиками устойчивости к гербицидам растения с патентным депозитарным номером АТСС NCIMB 41262, и трансгенные семена, содержащие полинуклеотидную молекулу в соответствии с данным изобретением, кодирующую IMI белок. Для обработки семян, резистентных к гербицидам растений в соответствии с данным изобретением