Иммуногенная композиция

Изобретение относится к иммуногенным композициям, содержащим капсулярный полисахарид или олигосахарид из S. aureus типа 5 и/или 8 с О-ацетилированием на 30-100%. Описаны также вакцины, способы лечения с использованием иммуногенной композиции, содержащей капсулярные полисахариды типа 5 и/или 8 с О-ацетилированием на 30-100%, и способы изготовления иммуногенной композиции, содержащей капсулярные полисахариды типа 5 и/или 8 с О-ацетилированием на 30-100%. Область изобретения Настоящее изобретение относится к области стафилококковых иммуногенных композиций и вакцин, к их изготовлению и к применению таких композиций в медицине. Более конкретно, оно относится к вакцинным композициям, содержащим полисахариды из S. aureus типа 5 и/или 8, в которых степень Оацетилирования составляет 30-100%. Предложены также способы лечения или предупреждения стафилококковых инфекций с использованием таких вакцин. Предшествующий уровень техники В связи с тем что все больше используются внутрисосудистые устройства, в последние годы увеличивается количество вне- и внутрибольничных инфекций. Внутрибольничные (нозокомиальные) инфекции представляют собой основную причину заболеваемости и смертности, в частности, в США, где они ежегодно поражают более 2 млн пациентов. Согласно различным исследованиям приблизительно 6% пациентов в США поражаются инфекцией во время их нахождения в больнице. В 1992 г. экономическое бремя в США составило более 4,5 млрд долларов (Emori and Gaynes, 1993, Clin. Microbiol. Rev. 6; 428). Наиболее частыми инфекциями являются инфекции мочевых путей (UTI - 33% от общего количества инфекций), за ними следует пневмония (15,5%), инфекции в месте хирургического вмешательства(14,8%) и первичные инфекции системы кровообращения (13%) (Emori and Gaynes, 1993, Clin. Microbiol.Staphylococcus aureus, коагулазонегативные стафилококки (в основном Staphylococcus epidermidis),Enterococcus spp., Esherichia coli и Pseudomonas aeruginosa являются основными нозокомиальными патогенами. Хотя эти патогены вызывают почти одинаковое количество инфекций, тяжесть вызываемых ими расстройств в совокупности с частотой изолятов, резистентных к антибиотикам, склоняет чашу весов в сторону S. aureus и S. epidermidis как наиболее важных нозокомиальных патогенов.Staphylococcus aureus чаще всего является причиной нозокомиальных инфекций со значительной заболеваемостью и смертностью (Romero-Vivas et al. 1995, Infect. Dis. 21; 1417). Он является причиной ряда случаев остеомиелита, эндокардита, септического артрита, пневмонии, абсцессов и синдрома токсического шока.S. epidermidis представляет собой нормальный кожный комменсал, который также является важным оппортунистическим патогеном, ответственным за инфекции имплантируемых медицинских устройств и инфекции в месте хирургического вмешательства. Медицинские устройства, инфицированные S. epidermidis, включают сердечные кардиостимуляторы, шунты спинно-мозговой жидкости, катетеры для непрерывного амбулаторного перитонеального диализа, ортопедические устройства и искусственные клапаны сердца. Инфекции S. aureus и S. epidermidis лечат антибиотиками, причем лекарственным средством выбора является пенициллин, а ванкомицин используют в случае изолятов, чувствительных к метициллину. Процентная доля стафилококковых штаммов, демонстрирующих широкий спектр резистентности к антибиотикам, увеличивается с 1980-х годов (Panlilo et al. 1992, Infect. Control. Hosp. Epidemiol. 13; 582),ставя под угрозу эффективную антимикробную терапию. Кроме того, недавнее появление штамма S. aureus, резистентного к ванкомицину, вызывает опасения, что возникнут и распространятся штаммы S. aureus, резистентные к метициллину, в отношении которых эффективная терапия недоступна. Был исследован альтернативный подход к использованию антител против стафилококковых антигенов в пассивной иммунотерапии. Разрабатывается терапия, включающая введение поликлональных антисывороток (WO 00/15238, WO 00/12132), а также лечение моноклональным антителом против липотейхоевой кислоты (WO 98/57994). Альтернативным подходом может быть применение активной вакцинации для формирования иммунного ответа против стафилококков. Идентифицированы несколько кандидатов для включения в качестве вакцинных компонентов. Они включают фибронектинсвязывающий белок (US 5840846), аналог главного комплекса гистосовместимости МНС II (US 5648240), фибриногенсвязывающий белок (US 6008341), GehD (US 2002/0169288), коллагенсвязывающий белок (US 6288214), SdrF, SdrG и SdrH (WO 00/12689), мутантные экзотоксины SEA и SEB (WO 00/02523) и витронектинсвязывающий белок с молекулярной массой 52 кДа (WO 01/60852). Геном S. aureus секвенирован, и множество кодирующих последовательностей идентифицировано(ЕР 786519, WO 02/094868). То же самое справедливо для S. epidermidis (WO 01/34809). В продолжение этого подхода другие исследователи идентифицировали множество белков, которые распознаются гипериммунными сыворотками от пациентов, страдающих стафилококковой инфекцией (WO 01/98499, WO 02/059148). Первое поколение вакцин против S. aureus или против экзобелков, которые он продуцирует, были удовлетворительными с ограниченным успехом (Lee 1996 Trends Microbiol. 4; 162). Потребность в разработке эффективных вакцин против стафилококковых инфекций остается. Описание чертежей Фиг. 1 - полипептидные последовательности белков для включения в иммуногенную композицию. В табл. 1 приведена информация о том, какой белок представлен каждой SEQ ID. Фиг. 2 - нуклеотидные последовательности, кодирующие белки для включения в иммуногенную композицию. В табл. 1 приведена информация о том, какой белок кодируется каждой SEQ ID. Фиг. 3 - очистка -токсина в нативных условиях. Блок А демонстрирует окрашенный кумасси гель после SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия) образцов, полученных в процессе очистки -токсина. Полоса 1 - маркеры молекулярной массы, полоса 2 растворимая фракция, содержащая сверхэкспрессированный -токсин, полоса 3 - поток через колонкуNi-NTA, полоса 4 - фракции, элюируемые 10% буфером В, полоса 5 - фракции, элюируемые 20% буфером В, полоса 6 - фракции, элюируемые 30% буфером В, полоса 7 - фракции, элюируемые 50% буфером В, полоса 8 - фракции, элюируемые 75% буфером В, полосы 9 и 10 - фракции, элюируемые 100% буфером В, полоса 11 - бактерии в момент Т=0 перед индукцией, полоса 12 - бактерии в момент Т=4 ч после индукции, полоса 13 - клеточный лизат, полоса 14 - растворимая фракция, полоса 15 - нерастворимая фракция. Блок В демонстрирует окрашенный кумасси гель после SDS-PAGE 10, 5, 2 и 1 мкл очищенного-токсина. Фиг. 4 - очистка SdrC в денатурирующих условиях. Блок А демонстрирует окрашенный кумасси гель после SDS-PAGE образцов, полученных в процессе очистки -токсина. Полоса М - маркеры молекулярной массы, полоса Старт супернатант, отделенный от нерастворимой фракции, содержащей сверхэкспрессированный SdrC, полоса FT1 - поток через колонку Ni-NTA, полоса С - фракции, элюируемые промывочным буфером С, полоса D - фракции, элюируемые буфером D, полоса Е - фракции, элюируемые буфером Е. Блок В демонстрирует окрашенный кумасси гель после SDS-PAGE 1, 2, 5 и 10 мкл очищенного SdrC. Фиг. 5 - результаты ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) для антисывороток против стафилококковых белков в планшетах, покрытых очищенными белками. Мышиный пул до - результат с использованием объединенных сывороток, полученных от мышей до инокуляции. Мышиный пул послеIII - результат с использованием объединенных сывороток, полученных от мышей после иммунизации. Кроличий пул до - результат с использованием объединенных сывороток, полученных от кроликов до инокуляции. Кроличий пул после III - результат с использованием объединенных сывороток, полученных от кроликов после иммунизации. Контр. - отрицательный контроль. Фиг. 6 - результаты ELISA для мышиных антисывороток, полученных против стафилококковых белков в планшетах, покрытых убитыми стафилококками. Блок А - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. aureus серотипа 5. Блок В - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. aureus серотипа 8. Блок С - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. epidermidis. Линия с квадратиками показывает результат ELISA с использованием антисывороток от мышей, трижды подвергнутых иммунизации указанным стафилококковым белком. Линия с ромбиками показывает результат ELISA для неиммунных мышиных сывороток. Фиг. 7 - Результаты ELISA для кроличьих антисывороток, полученных против стафилококковых белков в планшетах, покрытых убитыми стафилококками. Блок А - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. aureus серотипа 5. Блок В - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. aureus серотипа 8. Блок С - использованы планшеты, покрытые убитыми целыми клетками S. epidermidis. Линия с квадратиками показывает результат ELISA с использованием антисывороток от кроликов,трижды подвергнутых иммунизации указанным стафилококковым белком (за исключением HarA, где была сделана только одна иммунизация). Линия с ромбиками показывает результат ELISA для неиммунных кроличьих сывороток. Подробное описание изобретения В настоящем изобретении раскрыты иммуногенные композиции, содержащие полисахариды из S.aureus типа 5 и/или 8, где капсулярный полисахарид или олигосахарид типа 5 и/или типа 8 Оацетилирован на 30-100%. В конкретных воплощениях иммуногенная композиция по изобретению дополнительно содержит PNAG (поли-N-ацетилированный глюкозамин) или стафилококковый(ые) белок(белки). PNAG является высококонсервативным у грамположительных бактерий и обеспечивает защиту против широкого спектра бактерий, тогда как полисахариды типа 5 и типа 8 являются мощными иммуногенами, которые вызывают иммунный ответ против большинства штаммов S. aureus, которые чаще всего являются причиной нозокомиальной инфекции. Полисахариды. Иммуногенные композиции по изобретению содержат PNAG и полисахариды из S. aureus типа 5 и типа 8, каждый из которых или оба О-ацетилированы на 30-100%. Поли-N-ацетилированный глюкозамин (PNAG).PNAG представляет собой полисахаридный межклеточный адгезин и состоит из полимера -(16)связанного глюкозамина, возможно замещенного N-ацетильным и/или О-сукцинильным составляющи-2 020459 ми. Этот полисахарид присутствует как в S. aureus, так и в S. epidermidis и может быть выделен из любого источника (Joyce et al. 2003, Carbohydrate Research 338; 903; Maira-Litran et al. 2002, Infect. Imun. 70; 4433). Например, PNAG может быть выделен из штамма MN8m S. aureus (WO 04/43407). ПолучениеdPNAG описано в WO 04/43405. Недавно было показано, что полисахарид, ранее известный как поли-N-сукцинил(16)глюкозамин (PNSG), не имеет ожидаемую структуру, поскольку идентификация N-сукцинилирования не была корректной (Maira-Litran et al. 2002, Infect. Imun. 70; 4433). Поэтому полисахарид, который формально известен как PNSG и, как теперь установлено, представляет собой PNAG, также охвачен термином PNAG.PNAG может быть разных размеров, варьирующих от свыше 400 до 75-400 кДа, до 10-75 кДа, до олигосахаридов, состоящих из вплоть до 30 повторяющихся звеньев (-(16)-связанный глюкозамин,возможно замещенный N-ацетильным и О-сукцинильным составляющими). В иммуногенной композиции по изобретению может быть использован полисахарид или олигосахарид PNAG любого размера,например размером свыше 40 кДа. Нужного размера можно достичь любым способом, известным в данной области, например микрофлюидизацией, обработкой ультразвуком или химическим расщеплениемPNAG может иметь разную степень ацетилирования в результате замещения ацетатом по аминогруппам. PNAG, продуцируемый in vitro, почти полностью замещен по аминогруппам (95-100%). Альтернативно, может быть использован деацетилированный PNAG с N-ацетилированием менее чем на 50, 40, 30, 20, 10 или 5%. Использование деацетилированного PNAG обеспечивает опсонический киллинг грамположительных бактерий, возможно S. aureus и/или S. epidermidis (WO 04/43405). В одном воплощении PNAG имеет размер от 40 до 300 кДа и деацетилирован так, что менее 50, 40, 30, 20, 10 или 5% аминогрупп N-ацетилированы. В одном из воплощений PNAG не О-сукцинилирован или О-сукцинилирован менее чем по 25, 20,15, 10, 5, 2, 1 или 0,1% остатков. Термин "деацетилированный PNAG (dPNAG)" относится к полисахариду или олигосахаридуPNAG, в котором менее 50, 40, 30, 20, 10 или 5% аминогрупп ацетилированы. Используемый здесь термин "PNAG" охватывает как ацетилированные, так и деацетилированные формы сахарида. В одном из воплощений PNAG деацетилирован с образованием dPNAG химической обработкой нативного полисахарида. Например, нативный PNAG обрабатывают основным раствором до повышения рН до более 10. Например, PNAG обрабатывают 0,1-5, 0,2-4, 0,3-3, 0,5-2, 0,75-1,5 или 1 М NaOH, KOH или NH4OH. Обработку проводят в течение по меньшей мере 10 или 30 мин или 1, 2, 3, 4, 5,10, 15 или 20 ч при температуре 20-100, 25-80, 30-60 или 30-50 или 35-45 С. dPNAG может быть получен, как описано в WO 04/43405. В одном из воплощений полисахарид(ы), входящий(ие) в состав иммуногенной композиции по изобретению, конъюгирован(ы) с белком-носителем, как описано ниже, или, альтернативно, не конъюгирован(ы). Полисахариды из S. aureus типа 5 и типа 8. Большинство штаммов S. aureus, вызывающих инфекцию у человека, содержат полисахариды типа 5 или типа 8. Приблизительно 60% человеческих штаммов представляют собой штаммы типа 8 и приблизительно 30% представляют собой штаммы типа 5. Структуры антигенов капсулярных полисахаридов типа 5 и типа 8 описаны в Moreau et al. Carbohydrate Res. 201; 285 (1990) и Fournieret al. Infect.Immun. 45; 87 (1984). Оба имеют FucNAcp в их повторяющейся структурной единице, а также ManNAcA,которые могут быть использованы для введения сульфгидрильной группы. Недавно (Jones Carbohydrate Research 340, 1097-1106 (2005 методом ЯМР (ядерный магнитный резонанс) спектроскопии структура капсулярных полисахаридов была скорректирована: тип 5 тип 8 Полисахариды могут быть экстрагированы из соответствующего штамма S. aureus способами, общеизвестными специалистам в данной области, например способами, описанными в US 6294177 или Infection and Immunity (1990) 58(7); 2367. Например, АТСС 12902 представляет собой штамм S. aureus типа 5 и АТСС 12605 представляет собой штамм S. aureus типа 8. Полисахариды имеют нативный размер или, альтернативно, их размер может быть изменен, например, микрофлюидизацией, обработкой ультразвуком или химической обработкой. Изобретение также охватывает олигосахариды, производные полисахаридов S. aureus типа 5 и 8. Капсулярный полисахарид или олигосахарид типа 5 и/или 8, входящий в иммуногенную компози-3 020459 цию по изобретению, О-ацетилирован. В одном из воплощений степень О-ацетилирования капсулярного полисахарида или олигосахарида типа 5 составляет 10-100, 20-100, 30-100, 40-100, 50-100, 60-100, 70-100,80-100, 90-100, 50-90, 60-90, 70-90 или 80-90%. В одном из воплощений степень О-ацетилирования капсулярного полисахарида или олигосахарида типа 8 составляет 10-100, 20-100, 30-100, 40-100, 50-100, 60100, 70-100, 80-100, 90-100, 50-90, 60-90, 70-90 или 80-90%. В одном из воплощений степень Оацетилирования капсулярных полисахаридов или олигосахаридов типа 5 и типа 8 составляет 10-100, 20100, 30-100, 40-100, 50-100, 60-100, 70-100, 80-100, 90-100, 50-90, 60-90, 70-90 или 80-90%. Степень О-ацетилирования полисахарида или олигосахарида может быть определена любым методом, известным в данной области, например методом протонного ЯМР (Lemercinier and Jones 1996, Carbohydrate Research 296; 83-96, Jones and Lemercinier 2002, J. Pharmaceutical and Biomedical analysis 30; 1233-1247, WO 05/033148 или WO 00/56357). Еще один широко используемый метод описан в Hestrin(1949) J. Biol. Chem. 180; 249-261. О-Ацетильные группы могут быть удалены гидролизом, например обработкой основанием, таким как безводный гидразин (Konadu et al. 1994; Infect. Immun. 62; 5048-5054) или обработкой 0,1 н. NaOH в течение 1-8 ч. Для поддержания высоких уровней О-ацетилирования полисахарида или олигосахарида типа 5 и/или 8 обработки, которые могут привести к гидролизу О-ацетильных групп, минимизируют. Например, минимизируют обработку при экстремальных значениях рН. Полисахариды типа 5 и 8, входящие в иммуногенную композиция по изобретению, возможно конъюгированы с белком-носителем, как описано ниже, или, альтернативно, не конъюгированы. Иммуногенные композиции по изобретению, альтернативно, содержат полисахарид либо типа 5,либо типа 8. Антиген 336 S. aureus. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению содержит антиген 336 S. aureus,описанный в US 6294177. Антиген 336 содержит -связанный гексозамин, не содержит О-ацетильные группы и специфически связывается с антителами против S. aureus типа 336, депонированными в Американской коллекции типовых культур под номером АТСС 55804. В одном из воплощений антиген 336 представляет собой полисахарид, который имеет нативный размер, или, альтернативно, его размер может быть изменен, например, микрофлюидизацией, обработкой ультразвуком или химической обработкой. Изобретение также охватывает олигосахариды, получаемые из антигена 336. Антиген 336, будучи включенным в иммуногенную композицию по изобретению, возможно конъюгирован с белком-носителем, как описано ниже, или, альтернативно, не конъюгирован. Полисахариды из S. epidermidis типа I, II и III. Штаммы АТСС-31432, SE-360 и SE-10 S. epidermidis характерны для трех разных капсулярных типов, I, II и III соответственно (Ichiman and Yoshida 1981, J. Appl. Bacteriol. 51; 229). Капсулярные полисахариды, экстрагированные из каждого серотипа S. epidermidis, являются полисахаридами типов I, II и III. Полисахариды могут быть экстрагированы несколькими способами, в том числе способом, описанным вUS 4197290, или как описано в Ichiman et al. 1991, J. Appl. Bacteriol. 71; 176. В одном из воплощений изобретения иммуногенная композиция содержит полисахариды или олигосахариды из S. epidermidis типа I, и/или II, и/или III. Полисахариды имеют нативный размер или, альтернативно, их размер может быть изменен, например, микрофлюидизацией, обработкой ультразвуком или химическим расщеплением. Изобретение также охватывает олигосахариды, экстрагированные из штаммов S. epidermidis. Эти полисахариды не конъюгированы или возможно конъюгированы, как описано ниже. Конъюгирование полисахаридов. Среди проблем, связанных с использованием полисахаридов в вакцинации, существует проблема,заключающаяся в том, что полисахариды сами по себе являются плохими иммуногенами. Стратегии,разработанные для преодоления этой недостаточной иммуногенности, включают связывание полисахарида с крупными белками-носителями, которые обеспечивают неспецифическую Т-клеточную помощь. В одном из воплощений полисахариды, используемые в изобретении, связаны с белком-носителем, который обеспечивает неспецифическую Т-клеточную помощь. Примеры этих носителей, которые могут быть использованы для связывания с полисахаридными или олигосахаридными иммуногенами, включают дифтерийный и столбнячный анатоксины (DT, DT Crm197 и ТТ), гемоцианин лимфы улитки (KLH),экзопротеин A Pseudomonas aeruginosa (rEPA) и очищенное белковое производное туберкулина (PPD),белок D из Haemophilus influenzae, пневмолизин или фрагменты любого из вышеуказанных. Фрагменты,подходящие для использования, включают фрагменты, охватывающие Т-хелперные эпитопы. В частности, фрагмент белка D возможно будет содержать N-концевую 1/3 белка. Белок D представляет собой белок Haemophilus influenzae, связывающий IgD (EP 0594610 В 1). Альтернативный белок-носитель для использования в иммуногенной композиции по изобретению представляет собой единичный стафилококковый белок или его фрагмент либо слитый белок, содержащий по меньшей мере или точно 1, 2, 3 или 4 или более стафилококковых белков или их фрагментов,-4 020459 перечисленных в приведенном ниже разделе. Новый белок-носитель, который может быть особенно предпочтительным для применения в контексте стафилококковой вакцины, представляет собой стафилококковый -анатоксин. Нативная форма может быть конъюгирована с полисахаридом, поскольку процесс конъюгации снижает токсичность. Возможно, генетически детоксифицированный -токсин, такой как варианты His35Leu или His 35 Arg,используют в качестве носителя, поскольку остаточная токсичность ниже. Альтернативно, -токсин химически детоксифицируют путем обработки поперечно-связывающим реагентом, формальдегидом или глутаральдегидом. Генетически детоксифицированный -токсин возможно химически детоксифицирован, возможно путем обработки поперечно-связывающим реагентом, формальдегидом или глутаральдегидом, для дополнительного снижения токсичности. Полисахариды могут быть связаны с белком(ами)-носителем(ями) любым известным способом (например, как описано Likhite в патенте США 4372945, Armor et al. в патенте США 4474757, WO и Jenningset al. в патенте США 4356170). Возможно, осуществляют химическое конъюгирование с использованиемCDAP (см. WO 95/08348). Цианилирующий реагент 1-циано-диметиламинопиридиния тетрафторборат (CDAP) возможно используют для синтеза конъюгатов полисахарид-белок. Реакция цианилирования может быть осуществлена в относительно мягких условиях, которые позволяют избежать гидролиза чувствительных к щелочам полисахаридов. Этот синтез делает возможным прямое связывание с белком-носителем. Полисахарид может быть солюбилизирован в воде или физиологическом растворе. CDAP может быть растворен в ацетонитриле и сразу добавлен к раствору полисахарида. CDAP взаимодействует с гидроксильными группами полисахарида с образованием цианатного эфира. После стадии активации добавляют белок-носитель. Аминогруппы лизина взаимодействуют с активированным полисахаридом с образованием изомочевинной ковалентной связи. После реакции сочетания затем добавляют большой избыток глицина, чтобы заблокировать остаточные активированные функциональные группы. Продукт затем пропускают через колонку для гельпроникающей хроматографии для удаления непрореагировавшего белка-носителя и остаточных реагентов. Белки. Иммуногенная композиция по изобретению, возможно, дополнительно содержит стафилококковый белок, например белок из S. aureus или S. epidermidis. Некоторые воплощения по изобретению содержат белки и из S. aureus, и из S. epidermidis. Иммуногенные композиции по изобретению содержат выделенный белок, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 85%-ную идентичность, возможно по меньшей мере 90%-ную идентичность, по меньшей мере 95%-ную идентичность, по меньшей мере 9799%-ную или полную идентичность с любой последовательностью, представленной на фиг. 1. Если в данном описании конкретно упоминается белок, то он, возможно, относится к рекомбинантному полноразмерному белку или, возможно, зрелому белку, в котором удалена любая сигнальная последовательность. Белок может быть выделен непосредственно из стафилококкового штамма или может быть получен по технологии рекомбинантных ДНК. В иммуногенную композицию по изобретению могут быть включены иммуногенные фрагменты белка. Они представляют собой фрагменты, содержащие по меньшей мере 10 аминокислот, по меньшей мере 20 аминокислот, по меньшей мере 30 аминокислот,по меньшей мере 40 аминокислот, по меньшей мере 50 аминокислот или по меньшей мере 100 аминокислот, взятые последовательно из аминокислотной последовательности этого белка. Кроме того, такие иммуногенные фрагменты типично иммунологически реакционноспособны с антителами, вырабатываемыми против стафилококковых белков, или с антителами, вырабатываемыми в результате инфицирования хозяина-млекопитающего стафиллококками, или содержат Т-клеточные эпитопы. В одном из воплощений иммуногенные фрагменты также включают фрагменты, которые при введении в эффективной дозе (либо сами по себе, либо в виде гаптена, связанного с носителем) вызывают защитный иммунный ответ против стафилококковой инфекции, возможно защитный против инфекции S. aureus и/или S. epidermidis. Такой иммуногенный фрагмент может включать, например, белок без N-концевой лидерной последовательности, и/или трансмембранный домен, и/или С-концевой заякоривающий домен. В одном из воплощений иммуногенный фрагмент по изобретению содержит, по существу, весь внеклеточный домен белка, который имеет по меньшей мере 85, 90, 95, 97 или 99%-ную идентичность с последовательностью, выбранной из последовательностей, представленных на фиг. 1, по всей длине последовательности фрагмента. В одном из воплощений иммуногенные композиции по изобретению могут содержать слитые белки стафилококковых белков или фрагменты стафилококковых белков. Такие слитые белки могут быть получены рекомбинантно и могут содержать одну часть по меньшей мере из 2, 3, 4, 5 или 6 стафилококковых белков, например комбинации стафилококковых белков, перечисленных ниже. Альтернативно, слитый белок может содержать множество частей по меньшей мере из 2, 3, 4 или 5 стафилококковых белков. Они могут представлять собой комбинацию разных стафилококковых белков или их фрагментов в одном и том же белке. Альтернативно, изобретение также охватывает индивидуальные слитые белки из стафи-5 020459 лококковых белков или их фрагментов, такие как слитый белок с гетерологичными последовательностями, такими как провайдер Т-клеточных эпитопов или метки очистки, например -галактозидазу, глутатион-S-трансферазу, зеленые флуоресцентные белки (GFP), эпитопные метки, такие как FLAG, myc tag,полигистидин, или вирусные поверхностные белки, такие как гемагглютинин вируса гриппа, или бактериальные белки, такие как столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, CRM197. Слитый белок может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в виде свободного белка или он может представлять собой белок-носитель, связанный с сахаридом. Белки. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению дополнительно содержит один или более белков, упомянутых ниже, или их иммуногенные фрагменты. Многие белки попадают в категории белков, связывающихся с внеклеточными компонентами, белков-транспортеров или токсинов и регуляторов вирулентности. Иммуногенная композиция по изобретению, возможно, дополнительно содержит стафилококковый белок, связывающийся с внеклеточным компонентом, или стафилококковый белок-транспортер, или стафилококковый токсин, или регулятор вирулентности. Иммуногенная композиция по изобретению, возможно, содержит по меньшей мере или точно 1, 2, 3, 4, 5 или 6 стафилококковых белков. В приведенной ниже таблице указаны номера SEQ ID предпочтительных белковых последовательностей и последовательностей ДНК, которые находятся соответственно на фиг. 1 и 2. SA обозначает последовательность S. aureus, a SE обозначает последовательность S. epidermidis. Таблица 1 Белки, связывающиеся с внеклеточными компонентами. Белки, связывающиеся с внеклеточными компонентами, представляют собой белки, которые связываются с внеклеточными компонентами хозяина. Этот термин охватывает адгезины, но не ограничивается ими. Примеры белков, связывающихся с внеклеточными компонентами, включают рецептор ламининаDenmark 14-17th 2000), SSP-1 (Veenstra et al. 1996, J. Bacteriol. 178; 537), SSP-2 (Veenstra et al. 1996, J. Bacteriol. 178; 537), 17 кДа гепаринсвязывающий белок HBP (Fallgren et al. 2001, J. Med. Microbiol. 50; 547),витронектинсвязывающий белок (Li et al. 2001, Curr. Microbiol. 42; 361), фибриногенсвязывающий белок,коагулаза, Fig (WO 97/48727) и MAP (US 5648240).SitC/MntC/связывающий белок слюны представляет собой ABC белок-транспортер, который является гомологом адгезина PsaA у S. pneumoniae. Он представляет собой высокоиммуногенный липопротеин 32 кДа, который распределяется через бактериальную клеточную стенку (Cockayne et al., Infect. Immun. 1998 66; 3767). Он экспрессируется в S. aureus и S. epidermidis в виде липопротеина 32 кДа, и гомолог 40 кДа присутствует в S. hominis. У S. epidermidis он является компонентом железо-регулируемого оперона. Он демонстрирует значительную гомологию как с адгезинами, включающими FimA Streptococcus parasanguis, так и с липопротеинами семейства ABC транспортеров с выясненными или предполагаемыми функциями переноса металла железа. Таким образом, SitC включен как в виде внеклеточного связывающего белка, так и в виде транспортера ионов металла. Связывающий белок слюны, раскрытый в US 5801234, также представляет собой форму SitC и может быть включен в иммуногенную композицию по изобретению.ClfA и ClfB. Оба этих белка обладают фибриногенсвязывающей активностью и инициируют образование колоний S. aureus в присутствии плазмы крови. Они содержат мотив LPXTG, общий с белками, ассоциированными с клеточной стенкой.ClfA описан в US 6008341, a ClfB описан в WO 99/27109. Коагулаза (FbpA). Эта коагулаза представляет собой фибриногенсвязывающий белок, который инициирует образование колоний S. aureus в присутствии плазмы крови. Он описан в ссылках, относящихся к коагулазе:Phonimdaeng et al. (J. Gen. Microbio. 1988, 134:75-83), Phonimdaeng et al. (Mol. Microbiol. 1990; 4:393-404),Cheung et al. (Infect. Immun. 1995; 63:1914-1920) и Shopsin et al. (J. Clin. Microbiol. 2000; 38:3453-3456). В одном из воплощений фрагменты для включения в иммуногенную композицию по изобретению включают зрелый белок, в котором удален сигнальный пептид (аминокислоты от 27 до С-конца). Коагулаза имеет три разных домена. Аминокислоты 59-297, представляющие собой область свернутой спирали, аминокислоты 326-505, представляющие собой изобилующую пролином и глицином область, и С-концевой домен от аминокислоты 506 до аминокислоты 645, который имеет конформацию бета-слоя. Каждый из этих доменов является фрагментом, который может быть включен в иммуногенную композицию по изобретению.SdrG. Этот белок описан в WO 00/12689. SdrG обнаружен у коагулазоотрицательных стафилококков и представляет собой белок, ассоциированный с клеточной стенкой, содержащий последовательностьSdrG содержит сигнальный пептид (аминокислоты 1-51), область, содержащую сайты связывания фибриногена и сайты связывания коллагена (аминокислоты 51-825), два домена CnaB (аминокислоты 627-698 и 738-809), область SD повторов (аминокислоты 825-1000) и заякоривающий домен (аминокислоты 1009-1056). В одном из воплощений фрагменты SdrG включают полипептиды, в которых удалены сигнальный пептид и/или SD повторы и заякоривающий домен. Они включают полипептиды, содержащие или состоящие из аминокислот 50-825, аминокислот 50-633, аминокислот 50-597 (SEQ ID NO 2 в WOWO 03/76470), аминокислот 1-549, аминокислот 219-549, аминокислот 225-549, аминокислот 219-528,аминокислот 225-528 в SEQ ID NO: 70 или 20 или 21. Возможно, в иммуногенную композицию по изобретению включен полипептид SdrG, имеющий последовательность, по меньшей мере на 80, 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99 или 100% гомологичную последовательности SEQ ID NO: 70, 20 или 21. Композиции по изобретению, возможно, содержат фрагмент описанных выше полипептидов SdrG. В одном из воплощений во фрагментах сигнальный пептид, и/или домен SD повторов, и/или заякоривающий домен удалены, например последовательности, соответствующие аминокислотам 1-713, 1549, 225-549, 225-529, 24-717, 1-707, 1-690, 1-680, 1-670, 1-660, 1-650, 1-640, 1-630, 1-620, 1-610, 1-600,34-707, 44-697, 36-689 из SEQ ID 70, или последовательности, имеющие 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99 или 100%-ную идентичность с SEQ ID 70, или 20, или 21. В одном из воплощений фрагменты, в которых сигнальный пептид удален, имеют метиониновый остаток на N-конце фрагмента для обеспечения правильной трансляции. В одном из воплощений фрагмент имеет следующую последовательность:(Clarke and Foster, Infect. Immun. 2002, 70; 6680 , Williams et al., Infect. Immun. 2002, 20; 6805) и которые связываются с фибронектином. Поскольку фибронектин представляет собой важный компонент внеклеточного матрикса, EbhA и EbhB обладают важной функцией в сцеплении стафилококков с внеклеточным матриксом хозяина. Белки Ebh крупные, имеющие молекулярную массу 1,1 МДа. С точки зрения легкости продуцирования и образования предпочтительно использовать фрагмент белка Ebh, а не полную последовательность. Центральная область белка содержит неполные повторы, которые содержат сайты связывания фибронектина. Фрагменты, содержащие один или более повторяющихся доменов, описанных ниже,представляют собой некоторые фрагменты, подходящие для включения в иммуногенную композицию по изобретению. Белки Ebh содержат неполные повторяющиеся единицы длиной 127 аминокислот, характеризующиеся тем, что они содержат консенсусную последовательность или или где "." обозначает любую аминокислоту, ".10" обозначает любые 10 аминокислот и I/V показывает альтернативные выборы аминокислоты. Ссылаясь на последовательность, раскрытую в Kuroda et al. (2001) Lancet 357; 1225-1240 и табл. 2,последовательности повторов в белках Ebh легко устанавливаются. В одном из воплощений фрагменты, которые включены в иммуногенную композицию по изобретению, включают белки, содержащие 1-10 или более 10 повторяющихся единиц из 127 аминокислот. Такие фрагменты могут состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более повторов области повторов из 127 аминокислот или могут состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более повторов с дополнительными аминокислотными остатками, присутствующими на любом или обоих концах фрагмента. Возможно, фрагмент представляет собой полипептид Н 2 из приблизительно трех повторов, охватывающих 44 кДа (аминокислоты 3202-3595), как описано в Clarke et al., Infection and Immunity 70, 6680-6687, 2002. Такие фрагменты возможно способны связываться с фибронектином и/или активировать антитела, которые реагируют против полноразмерного белка Ebh. Белки Ebh способны связываться с фибронектином. В одном из воплощений фрагменты этих полипептидных последовательностей сохраняют способность связываться с фибронектином. Связывание с фибронектином можно оценить твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA), как описаноClarke et al. (Infection and Immunity 70; 6680-6687 2002). В одном из воплощений фрагмент представляет собой фрагмент, содержащий В-клеточный или Тхелперный эпитоп, например фрагменты/пептиды, указанные в табл. 3 и 4. Полноразмерная последовательность Ebh раскрыта в Kuroda et al. (2001) Lancet 357; 1225-1240. В приведенной ниже таблице представлены аминокислотные остатки, по которым повторы из 127 аминокислот начинаются и заканчиваются в полноразмерной последовательности. Таблица 2 Последовательности повторов в полноразмерной последовательности Ebh Полноразмерная последовательность раскрыта в Kuroda et al. (2001) Lancet 357; 1225-1240. Один из этих повторов, кодируемый аминокислотами 3204-3331 полноразмерной последовательности, выбран для проведения прогнозирования эпитопов. Таблица 3 Прогнозирование В-клеточного эпитопа для повтора из 127 аминокислот В колонках "Начало" и "Конец" указана позиция прогнозируемых Вклеточных эпитопов в повторе из 127 аминокислот. В колонках "Старт" и "Стоп" указана позиция прогнозируемых Вклеточных эпитопов в полноразмерной последовательности Ebh. Полноразмерная последовательность раскрыта в базе данных TrEMBL, ссылка на последовательность Q8NWQ6. Один из этих повторов, кодируемый аминокислотами 3204-3331 полноразмерной последовательности, выбран для проведения прогнозирования эпитопов. Таблица 4 Прогнозирование Т-хелперного эпитопа в Ebh В колонке "Позиция повтора" указана позиция прогнозируемых Тклеточных эпитопов в повторе. В колонке "Позиция последовательности" указана позиция прогнозируемых Т-клеточных эпитопов в полноразмерной последовательности Ebh. Фрагменты белков по изобретению могут быть использованы для продуцирования соответствующего полноразмерного полипептида пептидным синтезом, поэтому эти фрагменты могут быть использованы в качестве промежуточных фрагментов для продуцирования полноразмерных белков по изобретению. В одном из воплощений использованы варианты, в которых несколько, 5-10, 1-5, 1-3, 1-2 или 1 аминокислот(а) замещены(а), удалены(а) или добавлены(а) в любой комбинации. Эластинсвязывающий белок (EbpS).EbpS представляет собой белок, содержащий 486 аминокислот, имеющий молекулярную массу 83 кДа. Он ассоциируется с цитоплазматической мембраной S. aureus и имеет три гидрофобные области,которые удерживают белок в мембране (Downer et al. 2002, J. Biol. Chem. 277; 243; Park et al. 1996, J. Biol.Chem. 271; 15803). Две области между аминокислотами 1-205 и 343-486 представлены на внешней поверхности цитоплазматической мембраны. Лигандсвязывающий домен EbpS расположен между остатками 14-34 на Nконце (Park et al. 1999, J. Biol. Chem. 274; 2845). В одном из воплощений фрагмент, который включают в иммуногенную композицию по изобретению, представляет собой представленный на поверхности фрагмент, содержащий эластинсвязывающую область (аминокислоты 1-205). Возможно, фрагменты не содержат полностью представленную петлю, но должны содержать эластинсвязывающую область (аминокислоты 14-34). Альтернативный фрагмент, который может быть использован, состоит из аминокислот, образующих вторую представленную на поверхности петлю (аминокислоты 343-486). Также возможны альтернативные фрагменты, содержащие на вплоть до 1, 2, 5, 10, 20, 50 меньше аминокислот по одному или обоим концам. Рецепторы ламинина. Рецептор ламинина S. aureus играет важную роль в патогенности. Характерным признаком инфицирования является инвазия через кровоток, которая дает возможность образования обширного метастатического абсцесса. Для инвазии через кровоток требуется способность проникать из сосудов в ткани через сосудистую базальную мембрану. Это достигается за счет связывания с ламинином через рецептор ламинина (Lopes et al. Science 1985, 229; 275). Рецепторы ламинина представлены на поверхности и присутствуют во многих штаммах стафилококков, включая S. aureus и S. epidermidis.Sbi является вторым связывающимся с IgG белком в дополнение к белку А, и он экспрессируется в большинстве штаммов S. aureus (Zhang et al. 1998, Microbiology 144; 985).N-Конец последовательности Sbi имеет типичную сигнальную последовательность с сайтом расщепления после аминокислоты 29. Поэтому фрагмент Sbi, который может быть использован в иммуногенной композиции по изобретению, начинается с аминокислотного остатка 30, 31, 32 или 33 и продолжается до С-конца Sbi, например в SEQ ID NO: 26. Связывающийся с IgG домен в Sbi идентифицирован как область в направлении N-конца белка от аминокислоты 41-92. Этот домен гомологичен связывающимся с IgG доменам белка А. Минимальный связывающийся с IgG домен в Sbi содержит следующую последовательность: гдеобозначает аминокислоты, которые сходны между связывающими с IgG доменами. В одном из воплощений фрагмент Sbi, который включают в иммуногенную композицию по изобретению, содержит связывающийся с IgG домен. Этот фрагмент содержит консенсусную последовательность для связывающегося с IgG домена, обозначенную звездочкой , как показано в вышеуказанной последовательности. Возможно, этот фрагмент содержит или состоит из полной последовательности,указанной выше. Возможно, этот фрагмент содержит или состоит из аминокислот 30-92, 33-92, 30-94, 3394, 30-146, 33-146, 30-150, 33-150, 30-160, 33-160, 33-170, 33-180, 33-190, 33-200, 33-205 или 33-210 в Sbi,например в SEQ ID NO:26. Фрагмент может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 аминокислотных замен из указанных последовательностей. Фрагмент может содержать множественные повторы (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) связывающегося сFib представляет собой фибриногенсвязывающий белок 19 кДа, который секретируется S. aureus во внеклеточную среду. Он продуцируется всеми протестированными изолятами S. aureus (Wastfelt andS. aureus образует скопления в присутствии фибриногена и связывается с поверхностями, покрытыми фибриногеном. Эта способность способствует колонизации стафилококками катетеров и эндотелиальных клеток.Fib содержит сигнальную последовательность на N-конце белка с предполагаемым сайтом расщепления примерно по аминокислоте 30. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению содержит или состоит из последовательности зрелого белка (приблизительно от аминокислоты 30 до С-конца белка).Fbe представляет собой фибриногенсвязывающий белок, который обнаружен во множестве изоля- 11020459 тов S. epidermidis и имеет выведенную молекулярную массу 119 кДа (Nilsson et al. 1998. Infect. Immun. 66; 2666). Его последовательность родственна последовательности фактора слипания из S. aureus (ClfA). Антитела против Fbe могут блокировать связывание S. epidermidis с планшетами, покрытыми фибриногеном, и с катетерами (Pei and Flock 2001, J. Infect. Dis. 184; 52).Fbe имеет предполагаемую сигнальную последовательность с сайтом расщепления между аминокислотами 51 и 52. Поэтому потенциальный фрагмент Fbe содержит зрелую форму Fbe, простирающуюся от аминокислоты 52 до С-конца (аминокислота 1,092). Домен Fbe от аминокислоты 52 до аминокислоты 825 ответственен за связывание с фибриногеном. В одном из воплощений фрагмент Fbe состоит из или содержит аминокислоты 52-825. Область между аминокислотами 373 и 516 в Fbe демонстрирует наибольшую консервативность между Fbe и ClfA. В одном из воплощений этот фрагмент содержит аминокислоты 373-516 Fbe. Аминокислоты 825-1041 Fbe содержат много раз повторяющуюся область, состоящую из тандемно повторяющихся остатков аспарагиновой кислоты и серина.IsaA представляет собой белок 29 кДа, также известный как PisA, и, как было показано, является иммунодоминантным стафилококковым белком во время сепсиса у госпитализированных пациентов (Lorenz et al. 2000, FEMS Immunol. Med. Microb. 29; 145). Считается, что первые 29 аминокислот последовательности IsaA представляют собой сигнальную последовательность. В одном из воплощений фрагмент IsaA, который включают в иммуногенную композицию по изобретению, содержит остатки 30 аминокислот дальше к концу кодируемой последовательности. Фибронектинсвязывающий белок. Фибронектинсвязывающий белок А содержит несколько доменов, которые вовлечены в связывание с фибронектином (WO 94/18327). Они названы D1, D2, D3 и D4. В одном из воплощений фрагменты фибронектинсвязывающего белка А или В содержат или состоят из D1, D2, D3, D4, D1-D2, D2-D3, D3D4, D1-D3, D2-D4 или D1-D4. Фибронектинсвязывающий белок содержит сигнальную последовательность из 36 аминокислот,например VKNNLRYGIRKHKLGAASVFLGTMIWGMGQDKEAA. Возможно, в иммуногенную композицию по изобретению включают зрелый белок, не имеющий эту сигнальную последовательность. Белки-транспортеры. Клеточная стенка грамположительных бактерий действует как барьер, препятствующий свободной диффузии метаболитов в бактерию. Семейство белков организовывает прохождение необходимых питательных веществ в бактерию, поэтому они необходимы для жизнеспособности бактерии. Термин "белоктранспортер" охватывает белки, вовлеченные в начальную стадию связывания с метаболитами, такими как железо, а также вовлеченные в фактическое транспортирование метаболита в бактерию. Молекулярное железо представляет собой кофактор, необходимый для роста бактерий. Секретируются сидерофоры, которые связывают свободное железо и затем захватываются бактериальными поверхностными рецепторами, которые доставляют железо для транспорта через цитоплазматическую мембрану. Захват железа является критическим для приживаемости человеческих инфекций, чтобы формирование иммунного ответа против этого класса белков приводило к утрате жизнеспособности стафилококков. Примеры белков-транспортеров включают иммунодоминантный ABC транспортер (Burnie et al. 2000 Infect. Imun. 68; 3200), IsdA (Mazmanian et al. 2002 PNAS 99; 2293), IsdB (Mazmanian et al. 2002PNAS 99; 2293), IsdC (WO 06/59247), транспортер Mg2+, SitC (Wiltshire и Foster 2001 Infect. Immun. 69; 5198) и Ni ABC транспортер. Иммунодоминантный ABC транспортер. Иммунодоминантный ABC транспортер представляет собой достаточно консервативный белок, который может обладать способностью формировать иммунный ответ, перекрестно-защитный против различных штаммов стафилококка (Mei et al. 1997, Mol. Microbiol. 26; 399). Антитела против этого белка обнаружены у пациентов с сепсисом (Burnie et al. 2000, Infect. Immun. 68; 3200). Возможные фрагменты иммунодоминантного ABC транспортера включают пептиды DRHFLN,GNYD, RRYPF, KTTLLK, GVTTSLS, VDWLR, RGFL, KIKVYVGNYDFWYQS, TVIWSHDRHFLYNNV и/или TETFLRGFLGRMLFS, поскольку эти последовательности содержат эпитопы, которые распознаются иммунной системой человека.IsdA-IsdB. Гены Isd (железо-регулируемая поверхностная детерминанта) S. aureus кодируют белки, ответственные за связывание с гемоглобином и прохождение железа гема в цитоплазму, где оно действует в качестве необходимого питательного вещества. IsdA и IsdB локализуются в клеточной стенке стафилококков. IsdA, по-видимому, представлен на поверхности бактерии, поскольку он чувствителен к расщеплению протеиназой K. IsdB частично расщепляется, что свидетельствует о том, что он частично представлен на поверхности бактерии (Mazmanian et al. 2003 Science 299; 906).IsdA и IsdB, оба, представляют собой белки 29 кДа, которые связывают гем. Их экспрессия регулируется доступностью железа через репрессор Fur. Их экспрессия высокая во время инфекции у хозяина, у которого концентрация железа низкая. Они также известны как FrpA и FrpB (Morrissey et al. 2002, Infect. Immun. 70; 2399). FrpA и FrpB представляют собой основные поверхностные белки с высоким зарядом. Было показано, что они вносят основной вклад в адгезию на пластике. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению содержит фрагмент IsdA и/илиIsdB, который описан в WO 01/98499 или WO 03/11899. Токсины и регуляторы вирулентности. Члены этого семейства белков включают токсин, такой как -токсин, гемолизин, энтеротоксин В иTSST-1, а также белки, которые регулируют продукцию токсинов, такие как RAP.-Токсин является важной детерминантой вирулентности, продуцируемой большинством штаммовS. aureus. Он представляет собой порообразующий токсин, обладающий гемолитической активностью. Было показано, что антитела против -токсина нейтрализуют вредные и летальные эффекты -токсина в животных моделях (Adlam et al. 1977 Infect. Immun. 17; 250). Человеческие тромбоциты, эндотелиальные клетки и мононуклеарные клетки чувствительны к эффектам -токсина. Высокая токсичность -токсина требует, чтобы он был обезврежен перед использованием в качестве иммуногена. Этого можно достичь химической обработкой, например обработкой формальдегидом,глутаральдегидом или другими поперечно сшивающими реагентами либо химическим конъюгированием его с бактериальными полисахаридами, как описано ниже. Еще один путь детоксикации заключается в осуществлении точечных мутаций, которые удаляют токсичность с сохранением антигенности токсина. Введение точечной мутации по аминокислоте 35 токсина, где гистидиновый остаток заменяется лейциновым остатком, приводит в результате к детоксикации с сохранением иммуногенности (Menzies and Kernodle 1996; Infect. Immun. 64; 1839). Гистидин 35,по-видимому, является критическим для должной олигомеризации, требуемой для порообразования, и мутация этого остатка приводит к утрате токсичности. При введении в иммуногенные композиции по изобретению -токсин, возможно, подвергают детоксикации посредством мутации His 35, например заменой гистидина His 35 лейцином Leu или аргинином Arg. В альтернативном воплощении -токсин подвергают детоксификации посредством конъюгирования с другими компонентами иммуногенной композиции, например капсулярными полисахаридами или PNAG, возможно с полисахаридом S. aureus типа 5, и/или полисахаридом S. aureus типа 8, и/илиRAP сам по себе не является токсином, но является регулятором экспрессии факторов вирулентности. RAP продуцируется и секретируется стафилококками. Он активирует регуляторную систему других стафилококков и активирует экспрессию и последующее высвобождение факторов вирулентности, таких как гемолизин, энтеротоксин В и TSST-1. Другие иммунодоминантные белки. Белок, ассоциированный с аккумуляцией (Аар). Аар представляет собой белок 140 кДа, который необходим для аккумуляции штаммов S. epidermidis на поверхностях (Hussain et al. Infect. Immun. 1997, 65; 519). Штаммы, экспрессирующие этот белок, продуцируют значительно большее количество биопленки, и представляется, что Аар вовлечен в образование биопленки. Антитела против Аар способны ингибировать образование биопленки и ингибировать аккумуляцию S. epidermidis. Секреторный антиген стафилококков SsaA.SsaA представляет собой сильно иммуногенный белок массой 30 кДа, обнаруженный как у S.aureus, так и S. epidermidis (Lang et al., 2000 FEMS Immunol. Med. Microbiol. 29; 213). Его экспрессия во время эндокардита свидетельствует о вирулентной роли, специфичной к патогенезу инфекционного заболевания.SsaA содержит N-концевую лидерную последовательность и сайт расщепления сигнальной пептидазой. За лидерным пептидом следует гидрофобная область, состоящая из приблизительно 100 аминокислот от остатка 30 до остатка 130. Возможный фрагмент SsaA, который вводят в иммуногенную композицию по изобретению, состоит из зрелого белка (аминокислоты от 27 до С-конца или аминокислоты от 30 до С-конца). Дополнительные возможные фрагменты содержат гидрофильную область SsaA от аминокислоты 30 до аминокислоты 130. Комбинации. Стафилококковые инфекции проходят несколько различных стадий. Например, жизненный цикл стафилококков включает комменсальную колонизацию, инициацию инфицирования организацией доступа в прилегающие ткани или кровоток, анаэробное размножение в крови, взаимодействие между де- 13020459 терминантами вирулентности S. aureus и защитными механизмами хозяина и индуцирование осложнений, включающих эндокардит, метастатический абсцесс и септический синдром. В разные стадии инфекционного цикла вовлечены разные молекулы на поверхности бактерии. Нацеливание иммунного ответа против комбинации конкретных антигенов, вовлеченных в разные процессы стафилококковой инфекции, отражается на разнообразных аспектах функционирования стафилококков, и это может приводить к хорошей эффективности вакцины. В частности, комбинации некоторых антигенов из разных классов, некоторые из которых вовлечены в адгезию к клеткам-хозяевам, некоторые из которых вовлечены в захват железа или другие функции транспортера, некоторые из которых являются токсинами или регуляторами вирулентности, и иммунодоминантных антигенов могут вызывать иммунный ответ, который защищает от многих стадий инфицирования. Некоторые комбинации антигенов особенно эффективны при индуцировании иммунного ответа. Это может быть измерено либо в анализах на животных моделях, которые описаны в примерах, и/или с использованием опсонофагоцитарного анализа, который описан в примерах. Без какой бы то ни было связи с теорией считается, что такие эффективные комбинации антигенов возможны ввиду множества характеристик иммунного ответа на комбинацию антигенов. Сами антигены обычно представлены на поверхности клеток стафилококков, они консервативны, но также имеют тенденцию не быть представленными в достаточном количестве на поверхности клетки для оптимального бактерицидного ответа,чтобы происходило использование антител, активированных против единственного антигена. Комбинирование антигенов по изобретению может привести в результате к формированию преимущественной комбинации антител, которые взаимодействуют с клеткой стафилококка за пределами критического порога. При этом критическом уровне достаточное количество антител достаточного качества связываются с поверхностью бактерии, обеспечивая либо эффективный киллинг комплементом, либо нейтрализацию бактерии. Это может быть измерено либо в модели сенсибилизации животного, либо в анализе опсонизации, как изложено в примерах. Предпочтительные иммуногенные композиции по изобретению содержат множество белков, выбранных по меньшей мере из двух разных категорий белка, имеющих разные функции в организме стафилококков. Примерами таких категорий белков являются белки, связывающиеся с внеклеточными компонентами, белки-транспортеры, такие как белки захвата Fe, токсины или регуляторы вирулентности и другие иммунодоминантные белки. В предпочтительном воплощении иммуногенная композиция по изобретению дополнительно содержит множество белков, не менее 2, 3, 4, 5 или 6, выбранных из 2, 3 или 4 разных групп, выбранных из: группа (а) - белки, связывающиеся с внеклеточными компонентами; группа (б) - белки-транспортеры; группа (в) - токсины или регуляторы вирулентности; группа (г) - структурные белки. В предпочтительном воплощении иммуногенная композиция по изобретению дополнительно содержит множество белков, не менее 2, 3, 4, 5 или 6, выбранных из 2, 3 или 4 следующих групп: группа (а) - по меньшей мере один стафилококковый белок, связывающийся с внеклеточными компонентами, или его фрагмент, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, SasB, SasC, SasD, SasK, FnbA, FnbB, Cna,ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig и MAP; группа (б) - по меньшей мере один стафилококковый белок-транспортер или его фрагмент, выбранный из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, транспортераMg2+, HarA, Site и Ni ABC транспортера; группа (в) - по меньшей мере один стафилококковый регулятор вирулентности, токсин или его фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -токсина (HIa), мутанта -токсина H35R, RNA III активирующего белка (RAP); группа (г) - по меньшей мере один стафилококковый структурный белок или его иммуногенный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из MRPII и аутолизина. В предпочтительном воплощении иммуногенная композиция по изобретению содержит множество белков, не менее 2, 3, 4, 5 или 6, выбранных из 2 или 3 из следующих групп: группа (а) - по меньшей мере один стафилококковый белок, связывающийся с внеклеточными компонентами, или его иммуногенный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липаза GehD, SasA, SasB, SasC, SasD, SasK, FnbA,FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка,фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig и MAP; группа (б) - по меньшей мере один стафилококковый белок-транспортер или его иммуногенный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB,IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC и Ni ABC транспортера; группа (в) - по меньшей мере один стафилококковый регулятор вирулентности, токсин или его иммуногенный фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -токсина (HIa), мутанта -токсина H35R,RNA III активирующего белка (RAP). В предпочтительном воплощении иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один белок, выбранный из группы (а), и дополнительный белок, выбранный из группы (б) и/или группы (в). В еще одном воплощении иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один антиген, выбранный из группы (б), и дополнительный белок, выбранный из группы (в) и/или группы (а). В еще одном воплощении иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один антиген, выбранный из группы (в), и дополнительный белок, выбранный из группы (а) и/или группы (б). Возможная комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит рецептор ламинина и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера,-токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SitC и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит EbhA и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит EbhB и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит EbpS и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdA, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит EFB(FIB) и 1,2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SBI и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит аутолизин и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантногоABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина,мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит ClfA и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SdrC и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SdrD и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SdrE и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SdrG и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R и RAP. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SdrH и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SasF и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит липазу GehD и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантногоABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина,мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SasF и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит FnbA и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит FnbB и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит Cna и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит ClfB и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит FbpA и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит Npase и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит IsaA/PisA и 1,2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, НагА, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SsaA и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит ЕРВ и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SSP-1 и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит SSP-2 и 1, 2,3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит НРВ и 1, 2,3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит витронектинсвязывающий белок и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит фибриногенсвязывающий белок и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит коагулазу и 1,2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит Fig и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белков в иммуногенной композиции по изобретению содержит MAP и 1, 2, 3,4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, -токсина, мутанта-токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит иммунодоминантный ABC транспортер и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина, SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI, аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, липазы GehD, SasA, FnbA,FnbB, Cna, ClfA, ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, -токсина, мутанта -токсина H35L илиH35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит IsdA и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,аутолизина, ClfA, SdrC, SdrC, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfA, ClfB,FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, -токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap иSsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит IsdB и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,аутолизина, ClfA, SdrC, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfA, ClfB, FbpA, Npase,IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, -токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит SitC и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfA, ClfB,FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, -токсина, мутанта -токсина H35L или H35R, RAP, Aap иSsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит -токсин и 1,2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,- 17020459 аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA,Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA,транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, Аар и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит -токсинаH35L или H35R вариант и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина, SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI, аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA,FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA, транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, Аар и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит RAP и 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных антигенов, выбранных из группы, состоящей из рецептора ламинина,SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI,аутолизина, ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, SasF, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA,Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig, MAP, иммунодоминантного ABC транспортера, IsdA, IsdB, IsdC, HarA,транспортера Mg2+, SitC, Ni ABC транспортера, Аар и SsaA. Еще одна комбинация белка в иммуногенной композиции по изобретению содержит IsdA и IsdB;SdrC и SdrE; SdrC и SasF; SdrD и SdrE; SdrD и SasF; SdrE и SasF. В приведенных выше и ниже комбинациях перечисленные белки, возможно, могут присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в виде фрагмента или слитого белка, как описано выше. Комбинации трех белков. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению также содержит три белковых компонента в комбинации -токсина, белка, связывающегося с внеклеточными компонентами (например, адгезина), и белка-транспортера (например, белка, связывающего железо). В такой комбинации -токсин может быть химически детоксифицированным или генетически детоксифицированным путем введения точечной(ых) мутации(ий), например точечной мутации His35Leu.-Токсин присутствует в виде свободного белка или, альтернативно, конъюгирован с полисахаридным или PNAG компонентом иммуногенной композиции. Примеры комбинаций включают иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и белок, связывающийся с внеклеточными компонентами, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина, SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI, аутолизина, ClfA, SdrC,SdrG, SdrH, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB, SSP-1, SSP-2,HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig и MAP; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdB и белок, связывающийся с внеклеточными компонентами, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина, SitC/MntC/связывающего белка слюны, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), SBI, аутолизина, ClfA, SdrC,SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, липазы GehD, SasA, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, IsaA/PisA, SsaA, EPB,SSP-1, SSP-2, HBP, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig иMAP; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и адгезин, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), ClfA, SdrC,SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, аутолизина, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, SSP-1, SSP-2, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig и MAP; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdB и адгезин, выбранный из группы, состоящей из рецептора ламинина, EbhA, EbhB, эластинсвязывающего белка (EbpS), EFB (FIB), аутолизина,ClfA, SdrC, SdrD, SdrE, SdrG, SdrH, FnbA, FnbB, Cna, ClfB, FbpA, Npase, SSP-1, SSP-2, витронектинсвязывающего белка, фибриногенсвязывающего белка, коагулазы, Fig и MAP; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и рецептор ламинина; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и EbhA; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и EbhB; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и EbpS; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и EFB (FIB); иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и SdrG; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и ClfA; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и ClfB; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и FnbA; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и коагулазу; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и Fig; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и SdrH; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и SdrC; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и SdrD; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и SdrE; иммуногенную композицию, содержащую -токсин, IsdA и MAP; иммуногенную композицию, содержащую IsaA и Sbi; иммуногенную композицию, содержащую IsaA и IsdB; иммуногенную композицию, содержащую IsaA и IsdA; иммуногенную композицию, содержащую IsaA и SdrC; иммуногенную композицию, содержащую IsaA и Ebh или его фрагмент, как описано выше; иммуногенную композицию, содержащую Sbi и SdrC; иммуногенную композицию, содержащую Sbi и Ebh или его фрагмент, как описано выше; иммуногенную композицию по изобретению, содержащую IsaA, Sbi или SdrC. Выбор антигенов, экспрессируемых в различных клональных линиях дифференцировки. Анализ распространения факторов вирулентности в отношении структуры популяции Staphylococcus aureus продемонстрировал вариабельное присутствие генов вирулентности в природных популяцияхS. aureus. Показано, что среди клинических изолятов Staphylococcus aureus по меньшей мере пять клональных линий значительно преобладают (Booth et al., 2001 Infect Immun. 69(1):345-52). Показано, что гемолизин (hla), фибронектинсвязывающий белок A (fnbA) и фактор слипания A (cIfA) присутствуют в большинстве изолятов независимо от идентичности линий, что свидетельствует о важной роли этих белков в жизнеспособности S. aureus (Booth et al., 2001 Infect Immun. 69(1):345-52). Кроме того, согласноPeacock et al. 2002 распределения fnbA clfA, коагулазы, spa, map, pvl (лейкоцидин Пантона-Валентайна),hlg (гамма-токсин), -токсина и ica, по всей вероятности, не связано с основной клональной структурой,что свидетельствует о значительном горизонтальном переносе этих генов. Напротив, другие гены вирулентности, такие как фибронектинсвязывающий белок В (fnbB), бетагемолизин (hlb), коллагенсвязывающий белок (cna), TSST-1 (tsf) и ген резистентности к метициллину(тесА) строго ассоциируются со специфическими линиями (Booth et al., 2001 Infect Immun. 69(1):345-52). Аналогично, Peacock et al. (Infect Immun. 2002, 70(9):4987-96) продемонстрировали, что распределения энтеротоксинов, tst, эксфолатинов (eta и etb), бета- и дельта-токсинов, генов sdr(sdrD, sdrE и bbp), cna,ebpS и efb в популяции в значительной степени связано с MLST-производными клональными комплексами. Данные по MLST не дают доказательства, что штаммы, ответственные за нозокомиальное заболевание, представляют собой субпопуляцию, отличающуюся от штаммов, вызывающих внебольничное заболевание, или штаммов, выделенных из бессимптомных носителей (Feil et al., J. Bacteriol. 2003,185(11):3307-16). В одном из воплощений иммуногенные композиции по изобретению эффективны против стафилококков различных клональных линий. В одном из воплощений иммуногенная композиция содержит 1, 2, 3, 4 или по меньшей мере 1 белок, который экспрессируется в большинстве изолятов стафилококков. Примеры таких белков включают-гемолизин (hla), фибронектинсвязывающий белок A (fnbA) и фактор слипания A (cIfA), коагулазу, spa,map, pvl (лейкоцидин Пантона-Валентайна), hlg (гамма-токсин), ica, иммунодоминантный ABC транспортер, RAP, аутолизин (Rupp et al. 2001, J. Infect. Dis. 183; 1038), рецепторы ламинина, SitC, IsaA/PisA,SPOIIIE, SsaA, EbpS, SasF (Roche et al. 2003, Microbiology 149; 643), EFB (FIB), SBI, ClfB, IsdA, IsdB,FnbB, Npase, EBP, костный сиалосвязывающий белок II, IsaB/PisB (Lorenz et al. FEMS Immuno. Med. Microb. 2000, 29; 145), SasH (Roche et al. 2003, Microbiology 149; 643), MRPI, SasD (Roche et al. 2003, Microbiology 149; 643), SasH (Roche et al. 2003, Microbiology 149; 643), ауреолизиновый предшественник(AUR)/Sepp1 и новый аутолизин. В альтернативном воплощении два или более белков, которые экспрессируются в различных наборах клональных штаммов, включены в иммуногенную композицию по изобретению. Возможно, комбинация антигенов будет обеспечивать формирование иммунного ответа, эффективного против множественных клональных штаммов или против всех клональных штаммов. Например, комбинации включают в себя FnbB и бета-гемолизин, FnbB и Cna, FnbB и TSST-1, FnbB и mecA, FnbB и SdrD, FnbB и SdrF, FnbB и EbpS, FnbB и Efb, бета-гемолизин и Cna, бета-гемолизин и TSST-1, бета-гемолизин и mecA, бетагемолизин и SdrD, бета-гемолизин и SdrF, бета-гемолизин и EbpS, бета-гемолизин и Efb, Cna и TSST-1,Cna и mecA, Cna и SdrD, Cna и SdrF, Cna и EbpS, Cna и Efb, TSST-1 и mecA, TSST-1 и SdrD, TSST-1 и Вышеописанные комбинации можно комбинировать с дополнительными компонентами, описанными выше. Защита против S. aureus и S. epidermidis. В одном из воплощений по изобретению иммуногенная композиция обеспечивает эффективный иммунный ответ против более чем одного штамма стафилококков, например против штаммов из S. aureus и S. epidermidis. Например, защитный иммунный ответ формируется против серотипов S. aureus типа 5 и типа 8. Одно из применений иммуногенной композиции по изобретению заключается в предупреждении нозокомиальных инфекций, например, у пациентов, перенесших плановую операцию, путем инокуляции перед госпитальным лечением. На этой стадии сложно точно спрогнозировать с какими штаммами стафилококка столкнется пациент. Поэтому предпочтительно инокулировать вакциной, способной формировать эффективный иммунный ответ против различных штаммов стафилококков. Эффективный иммунный ответ определяется как иммунный ответ, который обеспечивает существенную защиту в модели сенсибилизации мыши или опсонофагоцитарном анализе, как описано в примерах. Существенная защита в модели сенсибилизации мыши, например, как в примере 5, определяется как увеличение средней летальной дозы (LD50) по сравнению с мышами, инокулированными носителем, по меньшей мере на 10, 20, 50, 100 или 200%. Существенная защита в модели сенсибилизации крысы, например, как в примере 8, определяется как уменьшение среднего наблюдаемого LogCFU/нос по меньшей мере на 10, 20, 50, 70 или 90%. Присутствие опсонизирующих антител, как известно, коррелирует с защитой, поэтому на существенную защиту указывает уменьшение количества бактерий по меньшей мере на 10, 20, 50, 70 или 90% в опсонофагоцитарном анализе, например, как в примере 7. Некоторые белки, включающие иммунодоминантный ABC транспортер, RNA III активирующий белок, рецепторы ламинина, SitC, IsaA/PisA, SsaA, EbhA/EbhB, EbpS и Аар достаточно консервативны уS. aureus и S. epidermidis, и в примере 8 показано, что IsaA, ClfA, IsdB, SdrG, HarA, FnbpA и Sbi могут вызывать перекрестно-реактивный иммунный ответ (например, перекрестно-реактивный между по меньшей мере одним штаммом S. aureus и по меньшей мере одним штаммом S. epidermidis). PIA также достаточно консервативен между S. aureus и S. epidermidis. Таким образом, в одном воплощении иммуногенная композиция по изобретению содержит PNAG и полисахариды типа 5 и типа 8 и один, два, три или четыре из белков, указанных выше. Вакцины. В одном из воплощений иммуногенная композиция по изобретению смешана с фармацевтически приемлемым эксципиентом и, возможно, с адъювантом с образованием вакцины. Вакцины по настоящему изобретению могут быть адъювантными, особенно когда они предназначены для применения у пожилого населения, а также для применения у детского населения. Подходящие адъюванты включают соль алюминия, такую как гель гидроксида алюминия, или фосфат алюминия, или алюминиевые квасцы, но также могут представлять собой соли других металлов, таких как кальций, магний, железо или цинк, или могут представлять собой нерастворимую суспензию ацилированного тирозина, или ацилированных сахаров, катионно или анионно дериватизированных сахаридов или полифосфазены. Предпочтительно, чтобы выбранный адъювант представлял собой избирательный индуктор ответа ТН 1-типа. Такие высокие уровни цитокинов Th1-типа благоприятствуют индукции опосредованных клетками иммунных ответов на введенный антиген, тогда как высокие уровни цитокинов Th2-типа благоприятствуют индукции гуморальных иммунных ответов на антиген. Различие иммунных ответов Th1- и Th2-типа не является абсолютным. В реальности у индивида будет поддерживаться иммунный ответ, который описан как преимущественно Th1 или преимущественно Th2. Тем не менее, часто удобно рассматривать семейства цитокинов исходя из описанного для мышиных CD4 +ve Т-клеточных клонов Мосманом и Коффманом (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989)Review of Immunology, 7, p. 145-173). Традиционно, ответы Th1-типа ассоциированы с продукцией Тлимфоцитами цитокинов интерферона гамма (INF-) и интерлейкина IL-2. Другие цитокины, часто напрямую ассоциирующиеся с индукцией иммунных ответов Th1-типа, не продуцируются Т-клетками, такими как IL-12. Напротив, ответы Th2-типа связаны с секрецией IL-4, IL-5, IL-6, IL-10. Подходящие адъювантные системы, которые стимулируют преимущественно ответ Th1, включают моноосфориллипид А или его производные (или детоксифицированный липид А, в общем см., например, WO 2005107798), в частности 3-де-О-ацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL) (информацию о его получении см. в GB 2220211 А); и комбинацию монофосфориллипида А, предпочтительно 3-де-Оацилированного монофосфориллипида А, вместе с либо солью алюминия (например, фосфатом алюминия или гидроксидом алюминия), либо эмульсией масло-в-воде. В таких комбинациях антиген и 3D-MPL содержатся в одинаковых дисперсных структурах с учетом более эффективной доставки антигенных иммуностимулирующих сигналов. Исследования показали, что 3D-MPL способен дополнительно усиливать иммуногенность антигена, адсорбированного на квасцах [Thoelen et al. Vaccine (1998) 16:708-14; ЕР 689454-B1]. Усиленная система включает в себя комбинацию монофосфориллипида А и производного сапонина, в частности комбинацию QS21 и 3D-MPL, как описано в WO 94/00153, или менее реактогенную композицию, где QS21 гасится холестерином, как описано в WO 96/33739. Особенно сильнодействующий адъювантный препарат, включающий QS21, 3D-MPL и токоферол в эмульсии масло-в-воде, описан в WO 95/17210. В одном из воплощений иммуногенная композиция дополнительно содержит сапонин, который может представлять собой QS21. Препарат также может содержать эмульсию масло-в-воде и токоферол (WO 95/17210). Неметилированные CpG, содержащие олигонуклеотиды (WO 96/02555) и другие иммуномодулирующие олигонуклеотиды (WO 0226757 и WO 03507822), также являются предпочтительными индукторами ТН 1-ответа и подходят для применения в настоящем изобретении. Конкретными адъювантами являются адъюванты, выбранные из группы солей металлов, эмульсий масло-в-воде, агонистов Toll-подобных рецепторов (в частности, агонист Toll-подобного рецептора 2,агонист Toll-подобного рецептора 3, агонист Toll-подобного рецептора 4, агонист Toll-подобного рецептора 7, агонист Toll-подобного рецептора 8 и агонист Toll-подобного рецептора 9), сапонинов или их комбинаций. Адъювант, который может быть использован в композиции вакцины по изобретению, представляет собой препарат в виде пузырьков или везикул внешней мембраны из грамотрицательных бактериальных штаммов, о которых сообщается в WO 02/09746, в частности везикул N. meningitidis. Адъювантные свойства везикул могут быть улучшены за счет удерживания LOS (липополисахарида) на ее поверхности (например, посредством экстракции низкими концентрациями детергента [например, 0-0,1% дезоксихолатом]). LOS может быть детоксифицирован посредством msbB(-) или htrB(-) мутаций, рассмотренных вWO 02/09746. Свойства адъюванта также могут быть улучшены за счет удержания PorB (и, возможно,удаления PorA) из везикул менингококков. Свойства адъювантов также могут быть улучшены усечением внешней коровой сахаридной структуры LOS на везикулах менингококков, например, посредствомIgtB(-) мутации, рассмотренной в WO 2004/014417. Альтернативно, вышеупомянутый LOS (например,выделенный из штамма msbB(-) и/или IgtB(- может быть очищен и использован в качестве адъюванта в композициях по изобретению. Дополнительные адъюванты, которые могут быть использованы с композициями по изобретению,могут быть выбраны из следующей группы: сапонин, липид А или его производное, иммуностимулирующий олигонуклеотид, алкилглюкозаминидфосфат, эмульсия масло-в-воде или их комбинации. Дополнительный предпочтительный адъювант представляет собой соль металла в комбинации с другим адъювантом. Предпочтительно адъювант представляет собой агонист Toll-подобного рецептора, в частности агонист Toll-подобного рецептора 2, 3, 4, 7, 8 или 9, или сапонин, в частности Qs21. Кроме того,предпочтительно адъювантная система включает два или более адъювантов из приведенного выше перечня. В частности, комбинации предпочтительно содержат сапониновый (в частности, Qs21) адъювант и/или агонист Toll-подобного рецептора 9, например иммуностимулирующий олигонуклеотид, содержащий CpG. Другие предпочтительные комбинации содержат сапонин (в частности, QS21) и агонист Tollподобного рецептора 4, такой как монофосфориллипид А или его 3-деацилированное производное, 3DMPL, или сапонин (в частности, QS21) и лиганд Toll-подобного рецептора 4, такой как алкилглюкозаминида фосфат. Особенно предпочтительными адъювантами являются комбинации 3D-MPL и QS21 (ЕР 0671948 В 1), эмульсии масло-в-воде, содержащие 3D-MPL и QS21 (WO 95/17210, WO 98/56414), или 3D-MPL,приготовленный в виде препарата с другими носителями (ЕР 0689454 В 1). Другие предпочтительные адъювантные системы содержат комбинацию 3D-MPL, QS21 и CpG олигонуклеотид, как описано в US 6558670, US 6544518. В одном из воплощений адъювант представляет собой лиганд Toll-подобного рецептора (TLR) 4,предпочтительно агонист, такой как производное липида А, в частности монофосфориллипид А или более конкретно 3 деацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL). 3D-MPL поставляется GlaxoSmithKline Biologicals North America и прежде всего промотирует CD4+ Т-клеточные ответы с фенотипом IFN- (Th1). Он может быть продуцирован способами, раскрытыми вGB 2220211 А. Химически он представляет собой смесь 3-деацилированного монофосфориллипида А с 3, 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Предпочтительно в композициях по настоящему изобретению используют 3D-MPL с небольшим размером частиц. 3D-MPL имеет небольшой размер частиц, так что он может быть подвергнут стерильной фильтрации через фильтр 0,22 мкм. Такие препараты описаны в международной патентной заявке WO 94/21292. Синтетические производные липида А известны и являются агонистами TLR 4, включая, но не ограничиваясь ими: ОМ 174 (2-дезокси-6-о-[2-дезокси-2-[(R)-3 додеканоилокситетрадеканоиламино]-4-о-фосфоноD-глюкопиранозил]-2-[(R)-3-гидрокси-тетрадеканоиламино]D-глюкопиранозилдигидрофосфат) (WO 95/14026), ОМ 294 DP (3S,9R)-3-[(R)додеканоилокситетрадеканоиламино]-4-оксо-5-аза-9(R)-[(R)-3-гидрокситетрадеканоиламино]декан-1,10 диол, 1,10-бис-(дигидрофосфат) (WO 99 /64301 и WO 00/0462) ОМ 197 МР-Ас DP (3S,9R)-3-[(R)додеканоилокситетрадеканоиламино]-4-оксо-5-аза-9-[(R)-3-гидрокситетрадеканоиламино]декан-1,10 диол, 1-дигидрофосфат 10-(6-аминогексаноат) (WO 01/46127). Другими лигандами TLR4, которые могут быть использованы, являются алкилглюкозаминидфосфаты (AGP), например, описанные в WO 9850399 или US 6303347 (способы получения AGP также раскрыты), или фармацевтически приемлемые соли AGP, раскрытые в US 6764840. Некоторые AGP являются агонистами TLR4, а некоторые являются антагонистами TLR4. Считается, что оба полезны в качестве адъювантов. Другой предпочтительный иммуностимулятор для применения в настоящем изобретении представляет собой Quil А и его производные. Quil A представляет собой сапониновый препарат, выделенный из южноамериканского дерева Quilaja Saponaria Molina и впервые описанный как обладающий адъювантной активностью Dalsgaard et al. в 1974 г. ("Saponin adjuvants", Archiv. fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p. 243-254). Очищенные фрагменты Quil А были выделены высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), которая сохраняет адъювантную активность без токсичности,ассоциированной с Quil А (ЕР 0362278), например QS7 и QS21 (также известные как QA7 и QA21).QS-21 представляет собой природный сапонин, выделенный из коры Quillaja saponaria Molina, который индуцирует CD8+ цитотоксические Т-клетки (CTL), клетки ТМ и преобладающий ответ в виде антителlgG2a, и является предпочтительным сапонином в контексте настоящего изобретения. Были описаны конкретные препараты QS21, которые являются особенно предпочтительными, и эти препараты дополнительно содержат стерин (WO 96/33739). Сапонины, образующие часть настоящего изобретения, могут быть выделены в форме мицелл, смешанных мицелл (предпочтительно, но не исключительно с солями желчных кислот) или могут быть в форме матриц ISCOM (ЕР 0109942 В 1), липосом или родственных коллоидных структур, таких как спиралевидные или кольцевидные мультимерные комплексы или липидные/слоистые структуры и ламеллы, если они приготовлены с холестерином и липидом, или в форме эмульсии масло-в-воде (например, как в WO 95/17210). Сапонины предпочтительно могут быть ассоциированными с металлической солью, такой как гидроксид алюминия или фосфат алюминия (WO 98/15287). Предпочтительно сапонин представлен в форме липосомы, ISCOM или эмульсии масло-в-воде. Усиленная система включает в себя комбинацию монофосфориллипида А (или детоксифицитрованного липида А) и производного сапонина, в частности комбинацию QS21 и 3D-MPL, как раскрыто вWO 94/00153, или менее реактогенную композицию, где QS21 погашен холестерином, как раскрыто вWO 96/33739. Особенно сильный адъювантный препарат, включающий в себя токоферол с QS21 и/или 3D-MPL, или без них в эмульсии масло-в-воде, описан в WO 95/17210. В одном из воплощений иммуногенная композиция дополнительно содержит сапонин, который может представлять собой QS21. Также могут быть использованы иммуностимулирующие олигонуклеотиды или любой другой агонист Toll-подобного рецептора (TLR) 9. Предпочтительные олигонуклеотиды для использования в адъювантах или вакцинах по настоящему изобретению представляют собой олигонуклеотиды, содержащиеCpG, предпочтительно содержащие два или более динуклеотидных мотивов CpG, разделенные по меньшей мере тремя, более предпочтительно по меньшей мере шестью или более нуклеотидами. Мотив CpG представляет собой нуклеотид цитозин, за которым следует нуклеотид гуанин. CpG олигонуклеотиды по настоящему изобретению типично представляют собой дезоксинуклеотиды. В предпочтительном воплощении промежуточный нуклеотид в олигонуклеотиде представляет собой фосфородитиоат или более предпочтительно фосфоротиоатную связь, хотя фосфодиэфир и другие межнуклеотидные связи входят в объем изобретения. Также в объем изобретения входят олигонуклеотиды со смешанными межнуклеотидными связями. Способы получения фосфоротиоатных олигонуклеотидов или фосфородитиоата описаны в US 5666153, US 5278302 и WO 95/26204. Примеры предпочтительных олигонуклеотидов имеют указанные ниже последовательности. Эти последовательности предпочтительно содержат фосфоротиоатные модифицированные межнуклеотидные связи.OLIGO 1 (SEQ ID NO:1): ТСС ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826),OLIGO 2 (SEQ ID NO:2): ТСТ ССС AGC GTG CGC CAT (CpG 1758),OLIGO 3 (SEQ ID NO:3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG,OLIGO 4 (SEQ ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006),OLIGO 5 (SEQ ID NO:5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668),OLIGO 6 (SEQ ID NO:6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G (CpG 5456). Альтернативные CpG олигонуклеотиды могут содержать вышеприведенные предпочтительные последовательности, имеющие несущественные делеции или вставки.CpG олигонуклеотиды, используемые в настоящем изобретении, могут быть синтезированы любым способом, известным в данной области техники (см., например, ЕР 468520). Такие олигонуклеотиды удобно синтезировать с использованием автоматического синтезатора. Адъювант может представлять собой эмульсию масло-в-воде или может содержать эмульсию масло-в-воде в комбинации с другими адъювантами. Масляная фаза эмульсионной системы предпочтительно содержит метаболизируемое масло. Значение термина метаболизируемое масло общеизвестно в данной области техники. "Метаболизируемое" может быть определено как "способное к трансформации путем метаболизма" (Dorland's Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 25th edition (1974. Масло может представлять собой любое растительное масло, рыбий жир, животное или синтетическое масло, не токсичное для реципиента и способное к трансформации в результате метаболизма. Обычными источниками растительных масел являются орехи, семена и зерна. Синтетические масла также являются частью изобретения и могут включать имеющиеся в продаже масла, такие как NEOBEE и другие. Сквален (2,6,10,15,19,23-гексаметил-2,6,10,14,18,22-тетракозагексаен) представляет собой ненасыщенное масло, которое обнаружено в больших количествах в масле печени акулы и в меньших количествах в оливковом масле, масле проростков пшеницы, масле рисовых отрубей и в дрожжах, и представляет собой особенно предпочтительное масло для применения по изобретению. Сквален представляет собой метаболизируемое масло ввиду того, что оно представляет собой промежуточное соединение в биосинтезе холестерина (Merck index, 10th Edition, entry no. 8619). Токолы (например, витамин Е) также часто используются в адъювантах на основе масляной эмульсии (ЕР 0382271 В 1; US 5667784; WO 95/17210). Токолы, используемые в масляных эмульсиях (предпочтительно эмульсии масло-в-воде) по изобретению, могут быть приготовлены, как описано в ЕР 0382271 В 1, то есть токолы могут представлять собой возможно содержащие эмульгатор дисперсии токоловых капель, имеющих диаметр предпочтительно меньше 1 мкм. Альтернативно, токолы могут быть использованы в комбинации с другим маслом с образованием масляной фазы масляной эмульсии. Здесь описаны примеры масляных эмульсий, которые могут быть использованы в комбинации с токолом, такие как вышеописанные метаболизируемые масла. Адъюванты-эмульсии масло-в-воде сами по себе описаны как полезные в качестве адъювантных композиций (ЕР 0399843 В), также комбинации эмульсий масло-в-воде и других активных агентов описаны в качестве адъювантов для вакцин (WO 95/17210; WO 98/56414; WO 99/12565; WO 99/11241). Описаны другие адъюванты-масляные эмульсии, такие как эмульсии вода-в-масле (US 5422109; ЕР 0480982 В 2) и эмульсии вода-в-масле-в-воде (US 5424067; ЕР 0480981 В). Для образования адъювантов и композиций по настоящему изобретению из всех форм предпочтительными являются масляные эмульсионные системы (в частности, при введении токолов). Наиболее предпочтительно масляная эмульсия (например, эмульсии масло-в-воде) дополнительно содержит эмульгатор, такой как TWEEN 80 и/или стерин, такой как холестерин. Предпочтительная масляная эмульсия (предпочтительно эмульсия масло-в-воде) содержит метаболизируемое нетоксичное масло, такое как сквалан, сквален или токоферол, такой как -токоферол (и предпочтительно и сквален, и токоферол) и возможно эмульгатор (или поверхностно-активное вещество), такой как Tween 80. Также может быть включен стерин (предпочтительно холестерин). Способ получения эмульсий масло-в-воде хорошо известен специалистам в данной области техники. В общем, способ включает смешивание токолсодержащей масляной фазы с поверхностно-активным веществом, таким как раствор PBS/TWEEN80(PBS - забуференный фосфатами физиологический раствор), с последующей гомогенизацией с использованием гомогенизатора. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что способ, включающий пропускание смеси дважды через иглу шприца, может быть подходящим для гомогенизации небольших объемов жидкости. Аналогично, способ эмульгирования в микрофлюидизаторе (M110S Microfluidics machine, максимально 50 пропусканий, в течение 2 мин при максимальном давлении на входе 6 бар (6105 Па) (давление на выходе приблизительно 850 бар (850105 Па может быть адаптирован специалистом в данной области техники для получения меньших или больших объемов эмульсии. Адаптирования можно достичь проведением рутинных экспериментов, включающих измерение получающейся эмульсии до тех пор, пока не будет получен препарат с каплями масла требуемого диаметра. В эмульсии масло-в-воде масло и эмульгатор должны находиться в водном носителе. Водный носитель может представлять собой, например, забуференный фосфатами физиологический раствор. Размер масляных капель, обнаруживаемых в стабильной эмульсии масло-в-воде, предпочтительно составляет менее 1 мкм, может быть в пределах, по существу, 30-600 нм, предпочтительно, по существу,приблизительно 30-500 нм в диаметре и наиболее предпочтительно, по существу, 150-500 нм в диаметре,и, в частности, приблизительно 150 нм в диаметре, измеренном при помощи фотонно-корреляционной спектрометрии. В этой связи 80% количества масляных капель должны находиться в предпочтительных диапазонах, более предпочтительно более 90% и наиболее предпочтительно более 95% количества масляных капель находятся в пределах определенного размера. Количества компонентов, присутствующих в масляных эмульсиях по настоящему изобретению, обычно находятся в диапазоне 0,5-20% или от 2 до 10% масла (от общего объема дозы), такого как сквален; и, если присутствует, от 2 до 10% -токоферола; и от 0,3 до 3% поверхностно-активного вещества, такого как полиоксиэтилен-сорбитан-моноолеат. Предпочтительно соотношение масло (предпочтительно сквален): токол (предпочтительно -токоферол) равно или меньше 1, так как это обеспечивает получение более стабильной эмульсии. Эмульгатор, такой как Tween 80 или Span 85, также может присутствовать на уровне приблизительно 1%. В некоторых случаях предпочтительным может быть, чтобы вакцины по настоящему изобретению дополнительно содержали стабилизатор. Примеры предпочтительных эмульсионных систем описаны в WO 95/17210, WO 99/11241 и WO 99/12565, в которых раскрыты адъюванты-эмульсии на основе сквалена, -токоферола и TWEEN 80,- 23020459 возможно в составе с иммуностимуляторами QS21 и/или 3D-MPL. Поэтому, в частности, в предпочтительном воплощении настоящего изобретения адъювант по изобретению дополнительно может содержать дополнительные иммуностимуляторы, такие как LPS или его производные, и/или сапонины. Примеры дополнительных иммуностимуляторов описаны здесь и в "Vaccine Design - The Subunit and Adjuvant Approach" 1995, Pharmaceutical Biotechnology, Volume 6, Eds. Powell, M.F., and Newman, M.J., PlenumPress, New York and London, ISBN 0-306-44867-X. В предпочтительном аспекте адъювант и иммуногенные композиции по изобретению содержат сапонин (предпочтительно QS21) и/или производное LPS (предпочтительно 3D-MPL) в вышеописанной масляной эмульсии, возможно со стерином (предпочтительно холестерином). Дополнительно, масляная эмульсия (предпочтительно эмульсия масло-в-воде) может содержать Span 85 и/или лецитин, и/или трикаприлин. Адъюванты, содержащие эмульсию масло-в-воде, стерин и сапонин, описаны в WO 99/12565. В типичных случаях для введения людям сапонин (предпочтительно QS21) и/или производное LPS(предпочтительно 3D-MPL) присутствуют в дозе иммуногенной композиции для введения людям в количестве в пределах 1-200 мкг, например 10-100 мкг, предпочтительно 10-50 мкг на дозу. Типично, масляная эмульсия (предпочтительно эмульсия масло-в-воде) содержит от 2 до 10% метаболизируемого масла. Предпочтительно она содержит от 2 до 10% сквалена, от 2 до 10% -токоферола и от 0,3 до 3%(предпочтительно 0,4-2%) эмульгатора (предпочтительно Tween 80 [полиоксиэтиленсорбитана моноолеат]). Если присутствуют и сквален, и -токоферол, предпочтительно соотношение сквален:-токоферол равно или меньше 1, так как это обеспечивает получение более стабильной эмульсии. Span 85 (сорбитана триолеат) также может присутствовать на уровне от 0,5 до 1% в эмульсиях, используемых в данном изобретении. В некоторых случаях может быть предпочтительным, чтобы иммуногенные композиции и вакцины по настоящему изобретению дополнительно содержали стабилизатор, например другие эмульгаторы/поверхностно-активные вещества, включающие каприловую кислоту (Merck index 10th Edition,entry no. 1739), из которых особенно предпочтителен трикаприлин. Если в состав включены сквален и сапонин (предпочтительно QS21), то также полезно включать в состав стерин (предпочтительно холестерин), поскольку это позволяет снизить общий уровень масла в эмульсии. Это приводит к уменьшению производственной себестоимости, улучшению общего комфорта вакцинации, а также качественному и количественному улучшению результирующих иммунных ответов,например к улучшению продукции IFN-. Соответственно адъювантная система по настоящему изобретению типично имеет соотношение метаболизируемое масло:сапонин (мас./мас.) в пределах от 200:1 до 300:1, настоящее изобретение также может быть использовано в форме с "низким содержанием масла",предпочтительное соотношение в которой составляет от 1:1 до 200:1, предпочтительно от 20:1 до 100:1 и наиболее предпочтительно, по существу, 48:1, и эта вакцина сохраняет благоприятные адъювантные свойства всех компонентов при значительно уменьшенном профиле реактогенности. Соответственно в особенно предпочтительных воплощениях соотношение сквален:QS21 (мас./мас.) находится в пределах от 1:1 до 250:1, предпочтительно в пределах от 20:1 до 200:1, предпочтительно от 20:1 до 100:1 и наиболее предпочтительно, по существу, 48:1. Предпочтительно в состав также входит стерин (наиболее предпочтительно холестерин) при описанном здесь соотношении сапонин:стерин. Эмульсионные системы по настоящему изобретению предпочтительно имеют масляные капли небольшого размера в субмикронном диапазоне. Наиболее предпочтительно размеры масляных капель находятся в диапазоне от 120 до 750 нм и наиболее предпочтительно 120-600 нм в диаметре. Особенно сильный адъювантный препарат (для конечной комбинации с AlPO4 в иммуногенных композициях по изобретению) включает в себя сапонин (предпочтительно QS21), производное LPS(предпочтительно 3D-MPL) и масляную эмульсию (предпочтительно сквален и -токоферол в эмульсии масло-в-воде), как описано в WO 95/17210 или в WO 99/12565 (в конкретном адъювантном препарате 11 в примере 2, табл. 1). Примеры агониста TLR 2 включают пептидогликан или липопротеин. Имидазохинолины, такие как имиквимод и резиквимод, представляют собой известные агонисты TLR7. Одноцепочечная РНК также является известным агонистом TLR (TLR8 у людей и TLR7 у мышей), тогда как двухцепочечная РНК и поли IC (полиинозиновая-полицитидиловая кислота - коммерческий синтетический миметик вирусной РНК) являются примерами агонистов TLR 3. 3D-MPL является примером агониста TLR4, a CPG является примером агониста TLR9. Иммуногенная композиция может содержать антиген и иммуностимулятор, адсорбированные на соль металла. Основанные на алюминии препараты вакцины, где антиген и иммуностимулятор 3-де-Оацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL) адсорбированы на одной и той же частице, описаны в ЕР 0576478 В 1, ЕР 0689454 В 1 и ЕР 0633784 В 1. В этих случаях антиген сначала адсорбируют на соль алюминия, затем осуществляют адсорбцию иммуностимулятора 3D-MPL на тех же самых частицах соли алюминия. В таких способах сначала осуществляют суспендирование 3D-MPL путем обработки ультразвуком в водяной бане до тех пор, пока частицы не достигнут размера от 80 до 500 нм. Антиген обычно адсорбируют на соль алюминия в течение 1 ч при комнатной температуре при встряхивании. Затем к адсорбированному антигену добавляют суспензию 3D-MPL и препарат инкубируют при комнатной тем- 24020459 пературе в течение 1 ч, а затем хранят при 4 С до использования. В другом способе иммуностимулятор и антиген находятся на отдельных металлических частицах,как описано в ЕР 1126876. Усовершенствованный способ включает адсорбцию иммуностимулятора на частицу соли металла, затем адсорбцию антигена на другую частицу соли металла, затем смешивание дискретных металлических частиц с образованием вакцины. Адъювантом для использования в настоящем изобретении может быть адъювантная композиция, содержащая иммуностимулятор, адсорбированный на частице соли металла, отличающаяся тем, что частица соли металла, по существу, не несет на себе другой антиген. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложены вакцины, которые отличаются тем, что иммуностимулятор адсорбирован на частицах соли металла, которые, по существу, не несут на себе другой антиген, и тем, что частицы соли металла, на которых адсорбирован антиген, по существу, не несут на себе другой иммуностимулятор. Соответственно согласно настоящему изобретению предложена адъювантная композиция, содержащая иммуностимулятор, который адсорбирован на частице соли металла, отличающаяся тем, что эта композиция, по существу, не содержит другой антиген. Кроме того, эта адъювантная композиция может представлять собой промежуточный препарат, который, если используется такой адъювант, требуется для изготовления вакцины. Соответственно предложен способ изготовления вакцины, включающий смешивание адъювантной композиции, в которой один или более иммуностимуляторов адсорбирован(ы) на частице металла с антигеном. Предпочтительно антиген предварительно был адсорбирован на соли металла. Указанная металлическая соль может быть идентичной или аналогичной металлической соли,на которой адсорбирован иммуностимулятор. Предпочтительно соль представляет собой соль алюминия,например фосфат алюминия, или гидроксид алюминия. Согласно настоящему изобретению дополнительно предложена вакцинная композиция, содержащая иммуностимулятор, адсорбированный на первой частице металлической соли, и антиген, адсорбированный на металлической соли, отличающаяся тем, что первая и вторая частицы металлической соли представляют собой отдельные частицы. Описанные здесь производные или мутации LPS или LOS или производные липида А сконструированы так, что они менее токсичны (например, 3D-MPL), чем нативные липополисахариды, и представляют собой взаимозаменяемые эквиваленты в отношении любых применений этих группировок, описанных здесь. В одном из воплощений адъювант, используемый для композиций по изобретению, содержит липосомный носитель (изготовленный известными методами из фосфолипидов (таких как диолеоилфосфатидилхолин [DOPC]) и, возможно, стерина [такого как холестерин]). Такие липосомные носители могут нести на себе производные липида А [такие как 3D-MPL, смотри выше] и/или сапонины (такие как QS21,см. выше). В одном из воплощений адъювант содержит (на дозу 0,5 мл) 0,1-10, 0,2-7, 0,3-5, 0,4-2 или 0,51 мг (например, 0,4-0,6, 0,9-1,1, 0,5 или 1 мг) фосфолипида (например, DOPC), 0,025-2,5, 0,05-1,5, 0,0750,75, 0,1-0,3 или 0,125-0,25 мг (например, 0,2-0,3, 0,1-0,15, 0,25 или 0,125 мг) стерина (например, холестерина), 5-60,10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг) производного липида А (например, 3D-MPL) и 5-60, 10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг) сапонина (например, QS21). В одном из воплощений адъювант, используемый для композиций по изобретению, содержит эмульсию масло-в-воде, приготовленную из метаболизируемого масла (такого как сквален), эмульгатора(такого как Tween 80) и, возможно, токола (такого как -токоферол). В одном из воплощений адъювант содержит (на 0,5 мл дозу) 0,5-15, 1-13, 2-11, 4-8 или 5-6 мг (например, 2-3, 5-6 или 10-11 мг) метаболизируемого масла (такого как сквален), 0,1-10, 0,3-8, 0,6-6, 0,9-5, 1-4 или 2-3 мг (например, 0,9-1,1, 2-3 или 45 мг) эмульгатора (такого как Tween 80) и, возможно, 0,5-20, 1-15, 2-12, 4-10, 5-7 мг (например, 11-13, 5-6 или 2-3 мг) токола (такого как -токоферол). Этот адъювант дополнительно может содержать 5-60, 10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50,10, 20, 30, 40 или 50 мкг) производного липида А (например, 3D-MPL). Этот адъювант возможно может содержать 0,025-2,5, 0,05-1,5, 0,075-0,75, 0,1-0,3 или 0,125-0,25 мг(например, 0,2-0,3, 0,1-0,15, 0,25 или 0,125 мг) стерина (например, холестерина), 5-60, 10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг) производного липида А (например, 3D-MPL) и 5-60,10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг) сапонина (например, QS21). В одном из воплощений адъювант, используемый для композиций по изобретению, содержит фосфат алюминия и производное липида А (такое как 3D-MPL). Этот адъювант может содержать (на 0,5 мл дозы) 100-750, 200-500 или 300-400 мкг Al в виде фосфата алюминия и 5-60, 10-50 или 20-30 мкг (например, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 или 50 мкг) производного липида А (например, 3D-MPL). Вакцинные препараты по настоящему изобретению могут быть использованы для защиты или лечения млекопитающего, чувствительного к инфекции, путем введения указанной вакцины системным путем или через слизистые оболочки. Эти способы введения могут включать инъекцию внутримышечным, внутрибрюшинным, интрадермальным или подкожным путем; или путем введения через слизистые оболочки рта/пищеварительного тракта, респираторного, мочеполового тракта. Интраназальное введение вакцин для лечения пневмонии или среднего отита является предпочтительным (так как носоглоточное носительство пневмококков может быть предотвращено более эффективно и, в результате, инфекция может быть ослаблена на своей самой ранней стадии). Хотя вакцина по изобретению может быть введена в виде разовой дозы, ее компоненты также можно вводить совместно одновременно или в разные моменты времени (например, пневмококковые сахаридные конъюгаты могут быть введены раздельно, одновременно или через 1-2 недели после введения любого бактериального белкового компонента вакцины для оптимальной координации иммунных ответов относительно друг друга). Для совместного введения возможный Th1 адъювант может присутствовать в любом из или всех разных введениях, например он может присутствовать в комбинации с бактериальным белковым компонентом вакцины. В дополнение к одному пути введения можно использовать два разных пути введения. Например, полисахариды можно вводить внутримышечно (ВМ) (или интрадермально (ИД, а бактериальные белки можно вводить интраназально (ИН) (или ИД). Кроме того, вакцины по изобретению можно вводить ВМ для примирующих доз и ИН для бустер-доз. Количество конъюгированного антигена в каждой дозе вакцины выбирают как количество, которое вызывает иммунопротективный ответ без существенных неблагоприятных побочных эффектов в обычных вакцинах. Такое количество варьирует в зависимости от того, какой специфический иммуноген используется и как он презентирован. Как правило, ожидается, что каждая доза будет содержать 0,1-100 мкг полисахарида, обычно 0,1-50, 0,1-10, 1-10 или 1-5 мкг для полисахаридных конъюгатов. Содержание белковых антигенов в вакцине в типичных случаях будет находиться в пределах 1-100,5-50 или 5-25 мкг. После первоначальной вакцинации субъекты могут получать одну или несколько бустер-иммунизаций, адекватно разделенных по времени. Приготовление вакцин, в общем, описано в Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (edsFullerton в патенте US 4235877. Вакцины по настоящему изобретению можно хранить в виде растворов или лиофилизированными. Возможно, раствор лиофилизируют в присутствии сахара, такого как сахароза, трегалоза или лактоза. Предпочтительно они лиофилизированы и непосредственно перед применением их разводят. В результате лиофилизации можно иметь более стабильную композицию (вакцину). Способы. Изобретение также охватывает способ изготовления иммуногенных композиций и вакцин по изобретению. В одном из воплощений способ по изобретению представляет собой способ изготовления вакцины,включающий стадии смешивания антигенов с получением иммуногенной композиции по изобретению и добавления фармацевтически приемлемого эксципиента. Способы лечения. Изобретение также охватывает способ лечения стафилококковой инфекции, в частности внутрибольничных нозокомиальных инфекций. Данная иммуногенная композиция или вакцина по изобретению особенно полезна для применения в случаях плановой операции. Такие пациенты заранее знают дату операции и могут быть инокулированы заранее. Поскольку не известно, подвергнется ли пациент инфицированию S. aureus или S.epidermidis, предпочтительно инокулировать вакциной по изобретению, которая защищает против обеих инфекций, как описано выше. Типично, взрослых пациентов в возрасте свыше 16 лет, ожидающих плановое хирургическое вмешательство, лечат иммуногенными композициями и вакцинами по изобретению. Альтернативно, детей в возрасте 3-16 лет, ожидающих плановое хирургическое вмешательство,лечат иммуногенными композициями и вакцинами по изобретению. Вакциной по изобретению можно инокулировать также патронажных медицинских работников. Препараты вакцины по настоящему изобретению могут быть использованы для защиты или лечения млекопитающего, чувствительного к инфекции, путем введения указанной вакцины системным путем или через слизистую оболочку. Эти введения могут включать инъекцию внутримышечным, интраперитонеальным, интрадермальным или подкожным путем или путем введения через слизистую оболочку в ротовую полость/пищеварительный, респираторный, мочеполовой тракты. Количество антигена в каждой дозе вакцины выбирают как количество, которое вызывает иммунопротективный ответ без существенных неблагоприятных побочных эффектов в типичных вакцинах. Такое количество варьирует в зависимости от того, какой специфический иммуноген используется и как он презентирован. Содержание белка в вакцине типично находится в диапазоне 1-100, 5-50 мкг, типично в диапазоне 10-25 мкг. Оптимальное количество для конкретной вакцины может быть установлено стандартными исследованиями, включающими отслеживанием иммунных ответов у субъектов. После первоначальной вакцинации субъекты могут получать одну или несколько бустер-иммунизаций, адекватно разделенных по времени. Хотя вакцины по настоящему изобретению могут быть введены любым путем, введение желательных вакцин в кожу (ИД) составляет одно из воплощений настоящего изобретения. Человеческая кожа содержит внешнюю "роговую" кутикулу, называемую роговым слоем, которая покрывает эпидермис. Под этим эпидермисом расположен слой, называемый дермой, которая, в свою очередь, покрывает подкожную ткань. Исследователи продемонстрировали, что инъекция вакцины в кожу и, в частности, в дерму стимулирует иммунный ответ, с которым также может быть ассоциировано множество дополнительных преимуществ. Интрадермальная вакцинация описанными здесь вакцинами составляет возможный признак настоящего изобретения. Общепринятая методика интрадермальной инъекции, "процедура Манту", включает стадии очистки кожи и затем оттягивания одной рукой и стадию, на которой срезом узкой иглы (26-31 гейджей), направленным вверх, иглу вводят под углом 10-15. После введения среза иглы тело иглы опускают и далее продвигают, в то же время прикладывая слабое давление для подъема ее под кожей. Жидкость затем очень медленно впрыскивают, образуя таким образом пузырек или бугорок на поверхности кожи, и затем иглу медленно вытягивают. Относительно недавно были описаны устройства, которые специально разработаны для введения жидких агентов в кожу или через кожу, например устройства, описанные в WO 99/34850 и ЕР 1092444, а также устройства для струйной инъекции, описанные, например, в WO 01/13977, US 5480381, US 5599302, US 5334144, US 5993412, US 5649912, US 5569189, US 5704911, US 5383851, US 5893397, US 5466220, US 5339163, US 5312335, US 5503627, US 5064413, US 5520639, US 4596556, US 4790824, US 4941880, US 4940460, WO 97/37705 и WO 97/13537. Альтернативные способы интрадермального введения вакцинных препаратов могут включать традиционные шприцы и иглы или устройства, разработанные для баллистической доставки твердых вакцин (WO 99/27961), или трансдермальные пластыри (WO 97/48440; WO 98/28037); или наносимые на поверхность кожи (трансдермальная или чрескожная доставка WO 98/20734; WO 98/28037). Когда вакцины по настоящему изобретению предназначены для введения в кожу или, более конкретно, в дерму, вакцина находится в малом объеме жидкости, в частности в объеме от приблизительно 0,05 до 0,2 мл. Содержание антигенов в вакцинах для кожного или интрадермального введения по настоящему изобретению может быть сходным с обычными дозами в вакцинах для внутримышечного введения (см. выше). Тем не менее, особенность вакцин для кожного или интрадермального введения заключается в том, что препараты могут содержать "низкую дозу". Соответственно белковые антигены в вакцинах с"низкой дозой" предпочтительно присутствуют в количестве от 0,1 до 10 мкг, предпочтительно от 0,1 до 5 мкг на дозу; и полисахаридные (предпочтительно конъюгированные) антигены могут присутствовать в диапазоне 0,01-1 мкг и, возможно, от 0,01 до 0,5 мкг полисахарида на дозу. Использованный здесь термин "интрадермальная доставка" означает доставку вакцины в область дермы в коже. Тем не менее, вакцина необязательно должна находиться исключительно в дерме. Дерма представляет собой слой в коже, расположенный на расстоянии от приблизительно 1,0 до приблизительно 2,0 мм от поверхности человеческой кожи, но существует некоторая степень варьирования между индивидами и в различных частях организма. В общем, можно ожидать, что дермы можно достичь на глубине 1,5 мм под поверхностью кожи. Дерма располагается между роговым слоем и эпидермисом на поверхности и подкожным слоем ниже. В зависимости от способа доставки вакцина, в конечном счете, может быть локализована исключительно или в основном в дерме, или она, в конечном счете, может быть распределена между эпидермисом и дермой. Одно из воплощений изобретения представляет собой способ предупреждения или лечения стафилококковой инфекции или заболевания, включающий стадию введения иммуногенной композиции или вакцины по изобретению нуждающемуся в этом пациенту. Еще одно воплощение изобретения представляет собой применение иммуногенной композиции по изобретению в изготовлении вакцины для лечения или предупреждения стафилококковой инфекции или заболевания, возможно стафилококковой инфекции после хирургического вмешательства. Термин "стафилококковая инфекция" охватывает инфекцию, вызванную S. aureus и/или S. epidermidis и другими стафилококковыми штаммами, способными вызывать инфекцию у млекопитающих,возможно людей. В данном описании в каждом случае термины "содержащий", "содержат" и "содержит" и соответственно термины "состоящий из", "состоят из" и "состоит из" возможно взаимозаменяемы. Все источники информации и патентные заявки, процитированные в данном описании, включены в данное описание посредством ссылки. Для лучшего понимания данного изобретения приведены следующие примеры. Эти примеры приведены только в целях иллюстрации и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения. Примеры Пример 1. Конструкция плазмиды для экспрессии рекомбинантных белков. А. Клонирование. Подходящие сайты рестрикции, сконструированные в олигонуклеотидах, специфические для стафилококкового гена, давали возможность для направленного клонирования продукта полимеразной цепной реакции (ПЦР) в экспрессирующуюся плазмиду E.coli pET24d или pQE-30 таким образом, чтобы белок мог экспрессироваться в виде слитого белка, содержащего последовательность для аффинной хроматографии (His)6 по N- или С-концу. Использованными праймерами были Продукты ПЦР сначала вводили в клонирующий вектор pGEM-T (Novagen) с использованием бактериальных клеток Тор 10 в соответствии с указаниями производителя. Эту промежуточную конструкцию получали для дополнительного облегчения клонирования в векторе экспрессии. Трансформанты,содержащие вставку ДНК, отбирали путем рестрикционного ферментативного анализа. После расщепления аликвоту реакционной смеси приблизительно 20 мкл анализировали методом электрофореза в агарозном геле (0,8% агароза в буфере Tris-ацетат-ЭДТА (ТАЕ. Фрагменты ДНК визуализировали ультрафиолетовым (УФ) излучением после электрофореза в геле и окрашивания этидийбромидом. Стандарт молекулярной массы ДНК (лестница 1 Кб, Life Technologies) подвергали электрофоретическому анализу параллельно с тестируемыми образцами и использовали для оценки размера фрагментов ДНК. Плазмиду,очищенную из выбранных трансформантов для каждого клонирования, затем последовательно расщепляли до завершения соответствующими рестриктазами в соответствии с рекомендациями производителя(Life Technologies). Расщепленный фрагмент ДНК затем очищали с использованием силикагелевых колонок для центрифугирования, после чего лигировали с плазмидой pET24d или pQE-30. КлонированиеEbh (фрагмент Н 2), АаА, IsdA, IsdB, HarA, Atl-амидазы, Atl-глюкозамина, MRPII, IsaA осуществляли с использованием плазмиды pET24d и клонирование ClfA, SdrC, SdrE, FnbpA, SdrG/Fbe, -токсина и Sbi осуществляли с использованием плазмиды pQE-30. Б. Продуцирование вектора экспрессии. Для получения экспрессионной плазмиды pET24d или pQE-30 для лигирования ее аналогично расщепляли до завершения с использованием соответствующих рестриктаз. Приблизительно 5-кратный молярный избыток расщепленных фрагментов по отношению к полученному вектору использовали для программирования реакции лигирования. Общеизвестными в данной области способами стандартную,приблизительно 20 мкл, реакцию лигирования (приблизительно 16 С, приблизительно 16 ч) осуществля- 28020459 ли с использованием Т 4 ДНК лигазы (приблизительно 2,0 единиц/реакцию, Life Technologies). Аликвоту лигируемой смеси (приблизительно 5 мкл) использовали для трансформации M15(pREP4) илиBT21DE3 электрокомпентентных клеток в соответствии со способами, хорошо известными в данной области. После приблизительно 2-3-часового периода роста при 37 С в приблизительно 1,0 мл среды Луриа-Бертани (LB) трансформированные клетки высевали на планшеты с LB агаром, содержащие ампициллин (100 мкг/мл) и/или канамицин (30 мкг/мл). Антибиотики включали в отбор. Планшеты инкубировали в течение ночи при 37 С в течение приблизительно 16 ч. Индивидуальные ApR/KanR колонии точечно отбирали стерильными острыми тонкими палочками и использовали для инокуляции свежеприготовленных LB ApR/KanR планшетов, а также приблизительно 1,0 мл LB Ар/Kan культуры в бульоне. И инокулированный планшет, и культуру в бульоне инкубировали в течение ночи при 37 С в стандартном инкубаторе (планшеты) или водяной бане со встряхиванием. Основанный на целых клетках ПЦР-анализ использовали для подтверждения, что трансформанты содержат вставку ДНК. Для этого приблизительно 1,0 мл ночной культуры LB Ар/Kan в бульоне переносили в полипропиленовую пробирку емкостью 1,5 мл и клетки собирали центрифугированием в микроцентрифуге Beckman (приблизительно 3 мин, комнатная температура, приблизительно 12000g). Клеточный осадок суспендировали в приблизительно 200 мкл стерильной воды и аликвоту приблизительно 10 мкл использовали для программирования конечного объема приблизительно 50 мкл реакционной смеси для ПЦР, содержащего праймеры для прямой и обратной амплификации. Начальную стадию денатурации при 95 С увеличивали до 3 мин для обеспечения температурного разрушения бактериальных клеток и высвобождения плазмидной ДНК. ТермоциклерABI Model 9700 и 32-цикловый трехшаговый температурный профиль амплификации, т.е. 95 С, 45 с; 5558 С, 45 с, 72 С, 1 мин использовали для амплификации фрагмента BASB203 из образцов лизированных трансформантов. После температурной амплификации аликвоту реакционной среды приблизительно 20 мкл анализировали электрофорезом в агарозном геле (0,8% агароза в буфере Tris-ацетат-ЭДТА (ТАЕ. Фрагменты ДНК визуализировали УФ-облучением после гель-электрофореза и окрашивания этидийбромидом. Стандарт молекулярной массы ДНК (лестница 1 Кб, Life Technologies) подвергали электрофоретическому анализу параллельно с тестируемыми образцами и использовали для оценки размера продуктов ПЦР. Трансформанты, которые продуцировали продукт ПЦР ожидаемого размера, идентифицировали как штаммы, содержащие белковую экспрессионную конструкцию. Штаммы, содержащие экспрессионную плазмиду, затем анализировали в отношении индуцируемой экспрессии рекомбинантного белка. В. Анализ экспрессии ПЦР-положительных трансформантов. Аликвоту ночной затравочной культуры (приблизительно 1,0 мл) инокулировали в колбу Эрленмейера емкостью 125 мл, содержащую приблизительно 25 мл бульона LB Ар/Kan и выращивали при 37 С при встряхивании (приблизительно 250 об/мин) до тех пор, пока мутность культуры не достигалаO.D.600 приблизительно 0,5, т.е. средняя фаза логарифмического роста (обычно приблизительно 1,5-2,0 ч). В этот момент времени приблизительно половину культуры (приблизительно 12,5 мл) переносили во вторую колбу емкостью 125 мл и экспрессию рекомбинантного белка индуцировали добавлением IPTG(изопропилтиогалактозид) (1,0 М исходный раствор, приготовленный в стерильной воде, Sigma) до конечной концентрации 1,0 мМ. Инкубацию IPTG-индуцированных и неиндуцированных культур продолжали в течение еще приблизительно 4 ч при 37 С при встряхивании. Образцы (приблизительно 1,0 мл) индуцированных и неиндуцированных культур отбирали после периода индукции и клетки собирали центрифугированием в микроцентрифуге при комнатной температуре в течение приблизительно 3 мин. Индивидуальные клеточные осадки суспендировали в приблизительно 50 мкл стерильной воды, затем смешивали с равным объемом 2 Х буфера для образца для электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) по Лэмли, содержащего 2-меркаптоэтанол, и помещали в баню с кипящей водой приблизительно на 3 мин для денатурации белка. Равные объемы (приблизительно 15 мкл) неочищенных IPTG-индуцированных и неиндуцированных клеточных лизатов наносили на 12% Tris/глициновый полиакриламидный гель (минигели толщиной 1 мм, Novex) в двух повторах. Образцы индуцированных и неиндуцированных лизатов подвергали электрофорезу вместе с предварительно окрашенными маркерами молекулярной массы (SeeBlue, Novex) в обычных условиях с использованием стандартного SDS/Tris/глицинового буфера для анализа (BioRad). После электрофореза один гель окрашивали кумасси бриллиантовым голубым R250 (BioRad) и затем обесцвечивали для визуализации нового(ых) IPTC-индуцибельного(ых) белка(ов). Второй гель подвергали электроблоттингу на поливинилиденфторидную (PVDF) мембрану (размер пор 0,45 мкм, Novex) в течение приблизительно 2 ч при 4 С с использованием аппарата для блоттинга BioRad Mini-Protean II и метанольного (20%) буфера для переноса Тоубина (Towbin). Блокирование мембраны и инкубации антитела осуществляли способами,хорошо известными в данной области. Моноклональное антитело против RGS (His)3, затем второе кроличье антитело против антител мыши, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) (QiaGen), использовали для подтверждения экспрессии и идентичности рекомбинантного белка. Визуализацию картины реактивных антител против His осуществляли с использованием АВТ нерастворимого субстрата или с использованием Hyperfilm с системой хемилюминисценции Amersham ECL.