Способ получения лекарственного комплекса
Формула / Реферат
1. Способ получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахарида, имеющее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту, или спейсера, содержащего пептидно связанные 2-8 аминокислоты, характеризующийся тем, что соль органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, взаимодействует со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, в безводной системе.
2. Способ получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахарида, имеющее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту, или спейсера, содержащего пептидно связанные 2-8 аминокислот, отличающийся тем, что способ включает стадии:
(1) преобразования соли щелочного металла полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, в его соль органического амина и
(2) взаимодействия соли органического амина со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, в безводной системе.
3. Способ по п.1 или 2, где полисахаридное производное, имеющее карбоксильные группы, представляет собой карбокси(C1-4)алкилдекстрановый полиспирт.
4. Способ по п.3, где декстрановый полиспирт, который входит в состав карбокси(C1-4)алкилдекстранового полиспирта, является декстрановым полиспиртом, полученным путем обработки декстрана в условиях, которые дают возможность проводить полиалкоголизацию, по существу, полностью.
5. Способ по п.3 или 4, где карбокси(C1-4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом.
6. Способ по любому из пп.1-5, где лекарственное соединение является антинеопластическим средством или противовоспалительным средством.
7. Способ по любому из пп.1-5, где лекарственное соединение является лекарственным соединением, которое может образовывать лактоновый цикл.
8. Способ по любому из пп.1-7, где для взаимодействия соли органического амина со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, используют спейсер, присоединенный к лекарственному соединению, имеющему образованный лактоновый цикл.
9. Способ по п.8, где лекарственное соединение, которое может образовывать лактоновый цикл, описанное в п.7, представляет собой (1S,9S)-1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Н-бензо[de]пирано[3',4':6,7]-индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9Н,15Н)-дион.
10. Применение соли органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, при получении лекарственного комплекса, в котором полисахаридное производное, содержащее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту или пептидно связанные 2-8 аминокислоты.
Текст
1 Область техники Настоящее изобретение относится к способу получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахарида и лекарственное соединение, такое, как антинеопластические средства, связаны друг с другом. Предпосылки изобретения Антинеопластические средства, используемые при лечении твердых раковых опухолей,таких как рак легкого или карциномы пищеварительных органов, и раковых заболеваний крови, таких как лейкемия, системно вводятся такими способами введения, как внутривенное или пероральное, и затем распределяются к специфическим опухолевым сайтами, и ингибируют или подавляют пролиферацию, раковых клеток для осуществления их терапевтического действия. Однако, системно вводимые антинеопластические средства быстро поглощаются из крови печенью и ретикулоэндотелиальными органами или быстро экскретируются в мочу и,соответственно, их концентрации в крови иногда могут быть снижены, что не обеспечивает их достаточного уровня в опухолях при распределении. Кроме того, обычные антинеопластические средства сами по себе имеют плохую распределительную избирательность по отношению к опухолевым сайтам (опухолевую селективность), и поэтому, антинеопластические средства однородно распределяются по различным тканям и клеткам всего организма и действуют как цитотоксины против нормальных клеток и тканей, что приводит к проблемам появления неблагоприятных эффектов, например, к тошноте, лихорадке или алопеции, с предельно высокой скоростью. Таким образом, было желательно разработать приемы эффективной и селективной доставки антинеопластических средств к опухолям. В качестве одного из таких приемов был предложен способ, по которому полисахаридное производное, обладающее карбоксильными группами, используют в качестве доставляющего лекарственный препарат носителя, и антинеопластическое средство связано с полисахаридным производным для замедления исчезновения антинеопластического средства из крови и увеличения селективности по отношению к опухолевым тканям. Например, в международной публикации WО 94/19376 описан комплекс лекарственного препарата, в котором пептидная цепь (число аминокислотных остатков: от 1 до 8) связан с карбоксильной группой полисахарида, содержащий карбоксильные группы, и, кроме того, доксорубицин, даунорубицин, митомицин С, блеомицин и тому подобное присоединены через пептидную цепь. Кроме того, в публикации патента Японии (KOKOKU)(Hei) 784481/1995 описан лекарственный комплекс, в котором вышеуказанное антинеопластическое средство вводят в карбоксиметилированное производное манноглюкана с помощью основа 001897 2 ния Шиффа или кислотно-амидной связи. Эти лекарственные комплексы характеризуются тем,что они обладают более высокой противоопухолевой активностью по сравнению с самим антиопухолевым агентом, а также пониженными токсичностью и побочными эффектами. Известен ряд публикаций, касающихся методик, относящихся к лекарственным комплексам, образованных с применением полиспиртовых производных полисахаридов в качестве доставляющих лекарственные препараты носителей, например, "Researches on polysaccharidepeptide-doxorubicin complexes - Correlations between stabilities of polysaccharide carriers in bloodSociety of Japan, 51, 1995). Эти лекарственные комплексы обычно получают путем образования натриевой соли производного полисахарида, обладающего карбоксильными группами, например, карбоксиметилпуллулана или карбоксиметилманноглюкана, и последующего затем связывания карбоксильной группы полисахаридного производного с аминогруппой противоопухолевого агента (или Nконцевой аминогруппой пептидной цепи, связанной с антиопухолевым агентом) посредством кислотно-амидной связи. Натриевая соль производных полисахаридов полностью нерастворима в органических растворителях, и, следовательно, при проведении вышеуказанного взаимодействия принимается способ, который включает получение натриевой соли производного полисахарида в виде раствора в воде или в водном органическом растворителе, содержащем воду, и затем растворение конденсирующего средства и противоопухолевого средства (или противоопухолевого средства, имеющего пептидную цепь) в виде гидрохлорида или тому подобного в этом растворе. Однако в этой реакции дегидратирующую конденсацию проводят в растворителе, содержащем воду, и, следовательно, невозможно получать целевой продукт с высоким выходом. Противоопухолевые средства, используемые в качестве реакционных веществ, обычно являются дорогими, и желательно разработать способ эффективного получения вышеуказанных лекарственных комплексов с учетом производст 3 венных затрат. Кроме того, соединения, описанные в непрошедшей экспертизу японской патентной публикации (KOKAI)(Hei) 687746/1994, используемые в качестве противоопухолевых средств, имеют в молекуле кольцо лактона, и существует такая проблема, что, когда каждое из этих соединений, связанное с пептидной цепью, вступает в вышеуказанное взаимодействие, то в присутствии основания и воды кольцо лактона открывается, и образовавшаяся карбоксильная группа может взаимодействовать с N-концевой аминогруппой пептидной цепи, связанной с противоопухолевым агентом,что значительно уменьшает выход целевого продукта и затрудняет получение однородного целевого комплекса лекарственного препарата. Следовательно, было желательно разработать реакционный способ, который поможет избежать образования соединений с открытым кольцом лактона. Сущность изобретения Целью настоящего изобретения является разработка способа эффективного получения комплексов лекарственных препаратов, которые способны сайт-селективно доставлять активный ингредиент, такой как противоопухолевые средства или противовоспалительные средства, к опухолевым сайтам или тому подобное. Более конкретно, целью настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего получить лекарственные комплексы в широком масштабе и с низкой стоимостью путем эффективного взаимодействия полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, с лекарственным соединением, таким как противоопухолевые средства, или со спейсером, содержащим олигопептид или тому подобное,который присоединен к лекарственному соединению. Для достижения вышеуказанной цели авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования, и в результате обнаружили, что, когда полисахаридное производное,имеющее карбоксильные группы, взаимодействует со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, с использованием соли органического амина и полисахаридного производного вместо обычно используемой натриевой соли, то эта соль полисахаридного производного может быть растворена с получением высокой концентрации в органическом растворителе, по существу свободном от воды, и, таким образом, взаимодействие полисахаридных производных со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, может быть осуществлено с предельно высоким выходом и уменьшенным образованием побочных продуктов или тому подобное. Эти результаты лежат в основе настоящего изобретения. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахари 001897 4 да, имеющее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связываются друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту или спейсера, содержащего пептидно-связанные 2-8 аминокислоты, заключающемуся в том, что соль органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, взаимодействует с лекарственным соединением, связанным со спейсером,в безводной системе; и к способу получения вышеуказанного лекарственного комплекса,который включает стадии: (1) преобразование соли щелочного металла полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, в его соль органического амина и (2) взаимодействие этой соли органического амина с лекарственным соединением, связанным со спейсером,в безводной системе. В соответствии с предпочтительными осуществлениями настоящего изобретения предложен вышеуказанный способ, где полисахаридное производное, имеющее карбоксильные группы, представляет собой карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт; вышеуказанный способ, где декстрановый полиспирт, который образует карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт, является декстрановым полиспиртом, полученным путем обработки декстрана в условиях, которые позволяют по существу завершить образование полиспирта; вышеуказанный способ, где карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт представляет собой карбоксиметилдекстрановый полиспирт; вышеуказанный способ, где карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт представляет собой карбоксиметилдекстрановый полиспирт с молекулярной массой в интервале от 5 000 до 500 000, предпочтительно в интервале от 50 000 до 450 000 и более предпочтительно в интервале от 200 000 до 400 000, и степень карбоксиметилирования на составляющий сахаридный остаток составляет от 0,01 до 2,0, предпочтительно в интервале от 0,1 до 1,0 и более предпочтительно в интервале от 0,3 до 0,5; и вышеуказанный способ, где лекарственное соединение представляет собой антинеопластическое средство или противовоспалительное средство. В соответствии с другими предпочтительными осуществлениями настоящего изобретения предложен вышеуказанный способ, где лекарственное соединение является соединением,которое может образовывать кольцо лактона; вышеуказанный способ, где спейсер, связанный с лекарственным соединением, в котором образовано кольцо лактона, используют для взаимодействия соли органического амина со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению; и вышеуказанный способ, где лекарственное соединение, которое может образовывать кольцо лактона, представляет собой[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9 Н,15 Н)-дион. Краткое объяснение чертежей Фиг. 1 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 8, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 2 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 8, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 3 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 9, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 4 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 9, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 5 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 10, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 6 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 15, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 7 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 15, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 8 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 28, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 9 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 28, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 10 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 29, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 11 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 29, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 12 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 34, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 13 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 34, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 14 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 39, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 15 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 39, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 16 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 41, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 17 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса 6 по примеру 41, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 18 демонстрирует диаграмму ГПХ лекарственного комплекса по примеру 44, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 19 демонстрирует спектр ультрафиолетового поглощения лекарственного комплекса по примеру 44, полученного по способу настоящего изобретения. Фиг. 20 демонстрирует фармакокинетику лекарственного комплекса по примеру 15, полученного по способу настоящего изобретения. Каждая точка в этом рисунке представляет собой среднее значение из трех экспериментов. Наилучший способ осуществления изобретения Лекарственный комплекс, полученный по способу в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется тем, что полисахаридное производное, имеющее карбоксильные группы,и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом через спейсер, содержащий аминокислоту или спейсер, содержащий пептидносвязанные 2-8 аминокислоты. Остаток лекарственного соединения, содержащийся в лекарственном комплексе, является остатком лекарственного соединения, используемого в качестве лекарственного средства для терапевтического и/или профилактического лечения заболеваний млекопитающих, включая человека, например, антинеопластического средства, противовоспалительного средства,антибактериального средства или тому подобное, и остаток представляет собой часть структуры лекарственного соединения. Однако лекарственное соединение, из которого получают остаток, не ограничивается соединениями, упомянутыми выше. Кроме того, в качестве лекарственного соединения могут быть использованы любые соединения при условии, что оно имеет одну или несколько реакционных функциональных групп, способных участвовать в образовании связи с полисахаридным производным или спейсером (например, аминогруппа, карбоксильная группа, гидроксильная группа, тиольная группа, эфирная группа и тому подобное). Термин "лекарственное соединение" в настоящем описании также включает пролекарственные соединения, которые содержат в виде составной части основную структуру самого лекарственного соединения, обладающего фармакологической активностью, и способны воспроизводить это соединение in vivo. Более конкретно, термин "остаток лекарственного соединения" обозначает часть структуры лекарственного соединения, присутствующую в соединении после образования связи, и предполагает, что связь между спейсером и остатком лекарственного соединения образована в результате взаимодействия реакционной функциональной группы лекарственного соединения и реакционной функциональной группы спейсе 7 ра (например, дегидратирующая конденсация и др.). Например, если лекарственное соединение представляет собой D-NH2, D-COOH, D-COOR,D-OH, D-SH, D-CONH2 или D-NH-COOR (R является низшей алкильной группой или тому подобное), то остаток лекарственного соединения представляет собой D-NH- (D-NH-CO-Q и т.д.), D-CO-(D-CO-NH-Q, D-CO-О-Q, D-CO-S-Q и т.д.), D-CO-(D-CO-NH-Q, D-CO-О-Q, D-CO-SQ и т.д.), D-О-(D-O-CO-Q, D-О-Q и т.д.), D-S(D-S-CO-Q, D-S-Q и т.д.), D-CONH-(D-CO-NHCO-Q и т.д.) и D-NH-CO-(D-NH-CO-O-Q, D-NHCO-NH-Q и т.д.), соответственно (в скобках представлена связь между спейсером и остатком лекарственного соединения, где Q представляет собой оставшуюся часть структуры спейсера и полисахаридного производного без реакционной функциональной группы и карбоксильной группы, соответственно). Однако вид связи между спейсером и остатком лекарственного соединения не ограничивается указанными выше. Остаток лекарственного соединения может быть связан с N-концевой аминогруппой или Сконцевой карбоксильной группой спейсера, или реакционной функциональной группой, присутствующей в аминокислоте, которая входит в состав спейсера. В качестве остатка лекарственного соединения могут быть предпочтительно использованы, например, остатки антинеопластических средств, таких как доксорубицин, даунорубицин, митомицин С, блеомицин, циклоцитидин,винкристин, винбластин, метотрексат, платиновые антинеопластические средства (цисплатин или его производные), таксол или его производные, камптотецин или его производные (антинеопластические агенты, описанные в непрошедшей экспертизу японской патентной публикации (KOKAI)(Hei) 6-87746/1994, предпочтительно (1S,9S)-1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1 Н,12 Н-бензо[de] пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин 10,13-(9 Н,15 Н)-дион, описанный в п.2, или тому подобное). Кроме того, также предпочтительны остатки стероидных противоспалительных средств, таких как сукцинат гидрокортизона и сукцинат преднизолона, и нестероидные антивоспалительные средства, такие как мефенамовая кислота, флюфенамовая кислота, диклофенак, ибупрофен и тиноридин. В качестве спейсера могут использоваться соединения, содержащие одну аминокислоту или пептид из 2-8 аминокислот. Конкретнее,если остаток лекарственного соединения и производного полисахарида связаны друг с другом посредством спейсера, то спейсер имеет форму остатка одной аминокислоты, что означает остаток, полученный в результате удаления одного атома водорода и одной гидроксильной группы из аминогруппы и карбоксильной группы аминокислоты, соответственно, или остаток олигопептида, включающего от 2 до 8 аминокислот, 001897 8 связанных пептидной связью, что означает остаток, полученный в результате удаления одного атома водорода и одной гидроксильной группы из N-концевой аминогруппы и С-концевой карбоксильной группы олигопептида, соответственно. Предпочтительными спейсерами являются остатки олигопептидов, включающими от 2 до 6 аминокислот. Вид аминокислот, входящих в состав спейсера, особенно не лимитируется,например, могут использоваться L- или Dаминокислоты, предпочтительно L-аминокислоты, а также могут использоваться как аланин, -аминокапроновая кислота, -аминомасляная кислота или тому подобно, так и аминокислоты. Предпочтительно, когда такие аминокислоты, отличающиеся от -аминокислот, локализованы в спейсере близко к полисахаридному производному. Например, если используется олигопептидный спейсер, направление связи особенно не лимитируется, и, обычно, N-конец спейсера может быть связан с карбоксильной группой карбокси (C1-4) алкилдекстранового полиспирта с помощью кислотно-амидной связи, а С-конец спейсера может быть связан с аминогруппой лекарственного соединения. Альтернативно,например, если остаток лизина включен в качестве составной единицы пептидного спейсера,-аминогруппа и -аминогруппа могут образовать соответственно кислотно-амидные связи с карбоксильными группами других аминокислот,таким образом, что образуются N-концы на обоих концах пептидного спейсера, что делает возможным образование связи с карбоксильной группой лекарственного соединения. Более того, могут использоваться спейсеры, которые в результате включения в качестве составляющих единиц одного или нескольких остатков диаминовых соединений или дикарбоновых кислот(остатков таких диаминовых соединений, как этилендиамин, или таких дикарбоновых кислот,как янтарная кислота), имеют N-концы или Сконцы по обоим концам спейсера. Если используется спейсер, включающий олигопептид, аминокислотная последовательность особенно не лимитируется. Предпочтительно использующиеся спейсеры включают,например, спейсер, являющийся остатком дипептида, представленный как -X-Z-, где Х представляет собой остаток гидрофобной аминокислоты и Z представляет собой остаток гидрофильной аминокислоты; и X-Z-обозначает остаток, который состоит из дипептида, образованного в результате образования пептидной связи между гидрофобной аминокислотой (X) и гидрофильной аминокислотой (Z) на N-концевой стороне и С-концевой стороне, соответственно,и у которых один атом водорода и одна гидроксильная группа удалены из аминогруппы на N 9 конце и карбоксильной группы на С-конце, соответственно, и спейсер, содержащий остаток дипептида в качестве части пептидной последовательности. В качестве гидрофобной аминокислоты могут быть использованы, например,фенилаланин, тирозин, лейцин или тому подобное, и в качестве гидрофильной аминокислоты могут быть использованы, например, глицин,аланин или тому подобное. Спейсер может иметь повторяющуюся последовательность дипептидных остатков (например, X-Z-X-Z-, -X-ZX-Z-X-Z- и т. д.). При использовании спейсера, содержащего такую дипептидную структуру, спейсер может быть гидролизован в опухолевых сайтах или в сайтах воспалений, считается, что в этих местах пептидаза присутствует в значительных количествах, чтобы высвобождать лекарственное соединение в высоких концентрациях, и, соответственно, структура, образуемая в результате связывания спейсера, содержащего вышеуказанный дипептид, и лекарственного соединения друг с другом, является предпочтительной частью структуры лекарственного комплекса в соответствии со способом по настоящему изобретению. В том случае, когда остаток антинеопластического средства, проявляющий концентрационно-зависимую антинеопластическую активность (антинеопластические средства,проявляющие большую антинеопластическую активность при более высоких концентрациях: средства,проявляющие концентрационнозависимую антинеопластическую активность,например, доксорубицин и т.д.), используют в качестве остатка лекарственного соединения, то спейсер, содержащий вышеуказанный дипептидный остаток, представленный последовательностью -X-Z-, или спейсер, содержащий вышеуказанный дипептидный остаток в качестве частичной пептидной последовательности,могут быть использованы наиболее предпочтительно. Кроме того, если в качестве остатка лекарственного соединения используют тип антинеопластического средства, обладающего зависящей от времени активностью, который требует сохраненного рабочего времени при превышении некоторой концентрации, то иногда может быть получена увеличенная антинеопластическая активность посредством использования вышеуказанного спейсера. Примеры включают антинеопластические средства, описанные в не прошедшей экспертизу японской патентной публикации (КОКAI)(Hei) 6-87746/1994,предпочтительно антинеопластическое средство, описанное в п.2. Вообще, спейсер не следует ограничивать вышеуказанными случаями; соответствующий спейсер необходимо выбирать с точки зрения характера действия антинеопластического средства, его характеристик по фармакокинетике, или проявлению токсичности,высвобождаемости in vivo антинеопластическо 001897 10 го средства и тому подобное. Для карцином с быстрой пролиферацией обычно предпочитают выбирать вышеуказанный спейсер, способный к высвобождению лекарственного соединения в высокой концентрации в течение короткого времени. Конкретные примеры спейсера представлены в таблице, приведенной ниже; однако,спейсер, используемый в способе получения лекарственных комплексов настоящему изобретению, не ограничивается приведенными ниже примерами; ясно, что специалист, имеющий среднюю квалификацию в данной области, может выбрать соответствующий спейсер для достижения оптимальной скорости высвобождения лекарственного соединения. В таблице левые концы пептидных последовательностей являются N-концами, и остатки лекарственных соединений связаны с С-концами. D-Phe представляет остаток D-фенилаланина, а другие аминокислоты представляют собой L-аминокислоты. Степени скоростей высвобождения определяли по степени проявления эффекта лекарственных комплексов, связанных с доксорубицином, на опухоленесущих крысах линии Walker 256, или по свободной концентрации доксорубицина в местах нахождения опухолей у опухоленесущих крыс линии Walker 256. Среди этих спейсеров, спейсер, который способен высвобождать лекарственное соединение в высокой концентрации за короткое время, например (Nконец)-Gly-Gly-Phe-Gly-, предпочтительно используют для доксорубицина. Таблица 1(a) Спейсеры, имеющие высокую скорость высвобождения:-Leu-Gly-Tyr- Gly-Phe-Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Phe-Gly-Gly-Gly-Phe-Phe-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe-Gly(b) Спейсеры, имеющие относительно высокую скорость высвобождения:-Gly-Gly-Phe-Phe-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(c) Спейсеры, имеющие относительно низкую скорость высвобождения:-Phe-Phe-Ala-Gly-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Phe(d) Спейсеры, имеющие низкую скорость высвобождения:-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-GlyВ качестве полисахаридного производного,имеющего карбоксильные группы, которое составляет фрагмент лекарственного комплекса,может быть использован, например, любой полисахарид, и химически или биологически модифицированные его производные, при условии, что их молекулы содержат карбоксильные группы. Например, могут быть использованы полисахариды, такие как гиалуроновая кислота,пектовая кислота, альгиновая кислота, хондроитин и гепарин; и такие полисахариды, как пуллулан, декстран, маннан, хитин, инулин, леван,ксилан, арабан, манноглюкан и хитозан, в которых все гидроксильные группы или их часть могут быть модифицированы функциональными группами, имеющими карбоксильную группу. Предпочтительно могут применяться полисахариды, имеющие, например, карбокси (C1-4) алкилированные гидроксильные группы, или имеющие гидроксильные группы, этерифицированные одной из карбоксильных групп полиосновной кислоты. Кроме того, могут также применяться полисахариды, полученные полиалкоголизацией вышеуказанных полисахаридов, с последующим введением функциональных групп, имеющих карбоксильную группу. Среди этих производных полисахаридов предпочтительным является карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт. Хотя степень полиалкоголизации карбокси (C1-4) алкилдекстранового полиспирта специально не лимитируется, предпочтительно, когда декстрановый полиспирт, входящий в состав карбокси (C1-4) алкилдекстранового полиспирта, является декстрановым полиспиртом, полученным в результате обработки декстрана в условиях, делающих возможной по существу полную полиалкоголизацию. Вид декстрана, используемого для получения карбокси(C1-4) алкилдекстранового полиспирта, специально не ограничивают, и декстран может содержать любое количество -D1,6-связей. Например, можно использовать, декстраны, содржащие -D-1,6-связь в количестве 85% или более, 90% или более, 95% или более. Молекулярный вес декстрана специально не лимитируют и можно использовать, например,декстраны с молекулярным весом примерно от 10 000 до 2 000 000, предпочтительно примерно от 50 000 до 800 000. В качестве C1-4 алкильной группы, входящей в состав карбокси (C1-4) алкильной группы карбокси (С 1-4) алкилдекстранового полиспирта, может использоваться линейная или разветвленная C1-4 алкильная группа, в частности метильная группа, этильная группа, н-пропильная группа, изопропильная группа, н-бутильная группа, втор-бутильная группа и тому подобные, причем предпочтительно может использоваться метильная группа. 12 Способ по настоящему изобретению заключается в том, что для получения вышеуказанного лекарственного комплекса соль органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, взаимодействует с лекарственным соединением per se,или соль органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, взаимодействует со спейсером, связанным с лекарственным соединением, в органическом растворителе по существу свободном от воды, то есть в безводной системе. В качестве предпочтительного осуществления способа по настоящему изобретению далее подробно объяснен способ с использованием карбокси (C1-4) алкилдекстранового полиспирта в качестве полисахаридного производного. Однако объем притязаний по настоящему изобретению не ограничен этим осуществлением. Когда в качестве исходного вещества используют декстран, декстран может быть последовательно обработан большим избытком периодата натрия и боргидрида натрия с получением декстранового полиспирта, подвергнутого по существу полной полиалкоголизации. Однако способ полиалкоголизации декстрана не ограничен вышеуказанным способом, и любой способ, доступный специалистам в данной области может быть использован. Например, карбокси C1-4 алкилирование может проводиться путем взаимодействия галогенированной (C1-4) алкилкарбоновой кислоты, такой как хлоруксусная, бромуксусная, -хлорпропионовая, метилхлорпропионовая, -хлорпропионовая,-метилхлорпропионовая, -хлормасляная,-хлормасляная или -хлормасляная, предпочтительно, хлоруксусной кислоты, с гидроксильными группами декстранового полиспирта для достижения частичного или полного карбоксиC1-4 алкилирования гидроксильных групп. Например, декстрановый полиспирт растворяют в инертном растворителе, который не участвует в реакциях (например, в воде, N,Nдиметилформамиде или диметилсульфоксиде), к раствору добавляют галогенированную (C1-4) алкилкарбоновую кислоту или ее соль в присутствии основания (например, гидроксида натрия или гидроксида калия), затем смесь оставляют реагировать в течение интервала времени от нескольких минут до нескольких дней при температуре от температуры охлаждения льдом до примерно 100 С. Степень введения C1-4 алкильной группы можно легко контролировать, например, путем выбора подходящей температуры реакции карбокси C1-4 алкилирования или количества галогенированной (C1-4) алкилкарбоновой кислоты или оснований-реагентов; эти средства хорошо известны специалистам в данной области. Степень карбокси (C1-4) алкилирования гидроксильных групп декстранового полиспирта специально не ограничивают, напри 13 мер, эта степень может находиться в пределах от 0,01 до 2,0, предпочтительно от 0,1 до 1,0, и более предпочтительно от 0,3 до 0,5, в расчете на остаток сахаридного фрагмента. Молекулярная масса карбокси (C1-4) алкилдекстранового полиспирта составляет примерно от 5 000 до 500 000, предпочтительно от 50 000 до 450 000,и более предпочтительно от 200 000 до 400 000,по данным гель-фильтрации. Карбокси (C1-4) алкилдекстрановый полиспирт, полученный как описано выше, представляет собой водный раствор соли щелочного металла, такого как натриевая или калиевая соль. Способ по настоящему изобретению заключается в том, что для образования связи между лекарственным соединением или спейсером, связанным с лекарственным соединением,и карбоксильными группами производного полисахарида используют соль органического амина и полисахаридного производного вместо вышеуказанного производного полисахарида в виде соли щелочного металла. Соль органического амина и производных полисахарида может растворяться в высокой концентрации в органическом растворителе, по существу свободном от воды, что делает возможным проведение реакции в безводной системе, соответственно, эффективность реакции может быть значительно увеличена. В качестве соли органического амина могут использоваться, например, соли алифатических аминов, таких как триэтиламин, триметиламин или триэтаноламин; соли алициклических и ароматических аминов, таких как Nметилпирролидин,N-метилпиперидин,Nметилморфолин или диметиламинопиридин; или четвертичные аммониевые соли, такие как тетраметиламмонийхлорид или тетраэтиламмонийхлорид. Преобразование натриевой соли производного полисахарида в соль органического амина может проводиться с помощью ионнообменной смолы или тому подобное. Например,натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта растворяют в воде, наносят на колонку, заполненную смолой BioRad. AG50W-X2(200-400 меш, Н+-тип), элюируют водой, и затем к полученному элюату добавляют органический амин, такой как триэтиламин, и лиофилизуют. Альтернативно, можно также проводить преобразование в одну стадию, то есть, растворяя натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта в воде и пропуская раствор через смолу триэтиламмониевого типа. Связь между спейсером, связанным с лекарственным соединением, и карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта, обычно может быть образована взаимодействием N-концевой аминогруппой спейсера с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта путем образования кислотно-амидной связи. Однако связь между спейсером и карбоксильной группой карбокси 001897 14 метилдекстранового полиспирта не ограничивается вышеуказанной связью, а могут использоваться другие химические связи, а также связи с использованием одного или нескольких спейсеров. Например, может быть образован ангидрид кислоты между С-концевой карбоксильной группой спейсера и карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта, или путем использования в качестве спейсера диаминового соединения, такого как этилендиамин,каждая из карбоксильных групп может быть связана посредством образования кислотноамидной связи с каждой из аминогрупп диаминового соединения. Если N-концевая аминогруппа спейсера связана с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта посредством образования кислотно-амидной связи, то могут использоваться агенты дегидратационной конденсации, обычно применяемые для синтеза пептидных цепей, например, N,N'-дициклоалкилкарбодиимиды, такие как N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), карбодиимидные производные, такие как 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимид (EDAPC), производные бензотриазола, такие как 1-гидроксибензотриазол (НОВТ), 1-этоксикарбонил-2 этокси-1,2-дигидроксихинолин (EEDQ) и тому подобное. Кроме того, реакцию можно проводить методом с участием активированных сложных эфиров или галогенангидридов кислот. Реакцию можно проводить в любом органическом растворителе, при условии, что они являются по существу свободными от воды и могут растворять реагенты (соль органического амина и карбоксиметилдекстранового полиспирта и лекарственное соединение или спейсер, связанный с лекарственным соединением). Например, предпочтительно могут использоваться N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид, ацетамид, N-метилпирролидон, сульфолан и тому подобное. Хотя количество остатка лекарственного соединения, которое вводится в карбоксиметилдекстрановый полиспирт в результате реакции с лекарственным соединением или спейсером, связанным с лекарственным соединением, специально не ограничивают, это количество следует подходящим образом выбрать, исходя из физико-химических свойств остатка лекарственного соединения, фармакокинетики, эффективности и токсичности лекарственного комплекса, обычно выбирают диапазон примерно от 0,1 до 30 мас.%, и предпочтительно примерно от 1 до 15 мас.%. Доля остатка лекарственного соединения, вводимового в карбоксиметилдекстрановый полиспирт, может быть легко определена, например, абсорбционно-спектрометрическим анализом. В качестве предпочтительного осуществления способа по настоящему изобретению на следующей схеме показан способ введения олигопептида, связанного с лекарственным соеди 15 нением, являющимся антинеопластическим средством, описанным в п.2 не прошедшей экспертизу японской патентной публикации (KOKAI)(Hei) 6-87746/1994, в карбоксиметилдекстрановый полиспирт (см. схему, приведенную ниже). Однако способы по настоящему изобретению не ограничиваются показанными на схеме. На нижеприведенной схеме введенное количество остатка лекарственного соединения составляет, например, приблизительно от 1 до 15% по массе, предпочтительно приблизительно от 4 до 8% по массе. Кроме того, из структурных звеньев полиспиртов на схеме, приведенной ниже, показано только одно структурное звено, которое вводят с одной или двумя карбоксиметильными группами. Однако следует учесть, что фрагмент полисахаридного производного лекарственного комплекса не образуется повторением вышеуказанной структурной единицы. Лекарственный комплекс по настоящему изобретению. Известно, что приведенное выше на схеме равновесие между формами лекарственного соединения сдвинуто в сторону соединения с замкнутым лактоновым циклом (соединение с замкнутым циклом) в кислой водной среде (например, приблизительно при рН 3), тогда как это равновесие сдвинуто в сторону соединения с открытым лактоновым циклом (соединение с открытым циклом) в щелочной водной среде(например, приблизительно при рН 10), и лекарственный комплекс, вводимый с остатком, соответствующим соединению с закрытым циклом или с открытым циклом, имеют сходную анти 001897 16 неопластическую активность. Однако, если в реакционной системе, в которой происходит взаимодействие между карбоксиметилдекстрановым полиспиртом и спейсером, связанным с вышеуказанным лекарственным соединением(напр., олигопептидным спейсером), присутствует реагент с открытым лактоновым циклом, то реакция конденсации будет протекать между карбоксильной группой, получившейся из лактонового цикла и аминогруппой спейсера, что приводит к значительному понижению выхода реакции и, более того, иногда не может быть получен однородный целевой лекарственный комплекс. Такую побочную реакцию можно избежать, используя в качестве реагента соединение с замкнутым циклом в безводной системе,в которой состояние равновесия не достигается. Поэтому способ по настоящему изобретению является особенно полезным для получения лекарственного комплекса, содержащего вышеуказанное лекарственное соединение. Вышеуказанный лекарственный комплекс,полученный в соответствии со способом по настоящему изобретению, характеризуется тем,что он может специфически проявлять требуемую фармакологическую активность в конкретном месте, таком как сайт опухоли или воспаления, в зависимости от вида остатка лекарственного соединения (например, остатка такого лекарственного соединения, как антинеопластическое средство или противовоспалительное средство) и может уменьшать токсичность, свойственную лекарственному соединению, per se. Например, карбоксиметилдекстрановый полиспирт, являясь фрагментом производного полисахарида, обладает вполне высоким удерживанием в крови, и аккумулируется в высокой степени в сайтах нахождения опухолей или воспалений, как носитель для доставки лекарства, что придает лекарственному комплексу неопластическую и воспалительную селективность по месту действия. Кроме того, считают, что протеаза (пептидаза) экспрессирует в сайты опухолей или воспалений, и, соответственно, лекарственный комплекс, содержащий спейсер, включающий олигопептид, легко гидролизуется по спейсерному остатку, что позволяет высвобождающемуся лекарственному соединения проявлять свое действие. Лекарственное средство, содержащее лекарственный комплекс, полученный в соответствии со способом по настоящему изобретению,обычно может быть помещено в герметично закрываемые пузырьки или тому подобное в виде лиофилизованного продукта или в другом виде, и берется для клинического использования в виде препаратов для парентерального введения, например, инъекций или капельных инфузий, которые растворяют непосредственно перед использованием. Однако форма фармацевтических препаратов лекарственного средства не ограничивается вышеуказанными формами. 17 Для получения этих фармацевтических препаратов могут быть использованы фармацевтические композиции, полученные с использованием фармацевтических добавок, доступных в данной области, например, солюбилизаторов, рНмодификаторов, стабилизаторов и тому подобное. Хотя дозу лекарственного средства специально не ограничивают, ее обычно устанавливают, исходя из дозы лекарственного соединения, которое составляет остаток лекарственного соединения, количества остатка лекарственного соединения, вводимого в лекарственный комплекс, состояния пациента, вида заболевания и тому подобное. Например, если парентерально вводят лекарственный комплекс, который содержит приблизительно 6% по массе остатка антинеопластического средства, описанного в п.2 не прошедшей экспертизу японской патентной публикации (KOKAI)(Hei) 6-87746/1994,то обычно при введении один раз в сутки доза составляет примерно от 1 до 500 мг, предпочтительно примерно от 10 до 100 мг на м 2 площади поверхности тела, причем введение, предпочтительно, может повторяться каждые 3-4 недели. Примеры Настоящее изобретение поясняется в деталях примерами, однако, объем притязаний по настоящему изобретению не ограничен следующими примерами. В примерах обозначение"A-NH-" представляет остаток лекарственного соединения, в котором лекарственное соединение имеет лактоновый цикл, как у лекарственного соединения, описанного в п. 2 не прошедшей экспертизу японской патентной публикации (KOKAI)(Hei) 6-87746/1994 (иногда обозначаемое в примерах как "DX-8951"), а лекарственное соединение, имеющее замкнутый лактоновых цикл, представлено как A-NH2. Пример включает группу, представленную как A-NH- на вышеприведенной схеме, по которой образуется лактоновый цикл. Кроме того, A'-NH- обозначает, что лактоновый цикл остатка лекарственного соединения, представленного как A-NH-, находится либо в форме закрытого цикла, либо в форме открытого цикла, или, альтернативно, в виде их смеси. В примерах, если не оговорено иначе, степень карбоксиметилирования в карбоксиметилдекстрановом полиспирте (степень замещения карбоксиметильной группой на структурный сахаридный остаток) определяли по превращению натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта в форму свободной кислоты,растворяя полученную кислоту в водном растворе 0,1 н. гидроксида натрия, и затем титруя с использованием 0,1 н. хлорводородной кислоты. Водный раствор натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта наносили на колонку со смолой Bio-Rad AG50W-х 2 (Н+форма) и элюат лиофилизировали и использовали как образец. Образец растворяли в предписанном избыточном количестве водного раство 001897 18 ра 0,1 н. гидроксида натрия и титровали 0,1 н. хлорводородной кислотой с использованием фенолфталеина в качестве индикатора. Степень карбоксиметилирования рассчитывали, используя следующее уравнение: степень карбоксиметилирования = 13,4 (a-b)/[s-5,8(а-b)], где "s" является массой нанесенного образца (мг), "а" является предписанным избыточным количеством водного раствора 0,1 н. гидроксида натрия(мл). Количество введенного лекарства (мас. проценты) определяли абсорбционно-спектроскопическим анализом, используя характеристические поглощения лекарственного соединения (приблизительно 362 нм). Гельфильтрацию проводили при следующих условиях: колонка:N,N-диметилформамиде (20 мл), охлаждают до 4C и затем добавляют N,N'-дициклогексилкарбодиимид (280 мг). К этому раствору добавляют раствор метансульфоната лекарственного соединения, описанного в п.2 не прошедшей экспертизу японской патентной публикации(30 мл), и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 16 ч при перемешивании в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 10:1, содержащий 0,5% уксусной кислоты), получая указанное в заголовке соединение (1,0 г). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8.40 (д, 1 Н, J=8,3 Гц), 8,10-8,17 (м, 2 Н), 7,91-8,01 (м, 1 Н), 7,78 (д,1 Н, J=10,75 Гц), 7,32 (s, 1H), 6,94-6,96 (м, 1H),6,50 (s, 1H), 5,57 (t, 1H, J=4,5 Гц), 5,43 (s, 2 Н),5,23 (s, 2H), 3,77 (dd, 2H, J=5,85 Гц, J=8,80 Гц),3,70 (д, 2H, J=4,40 Гц), 3,65 (д, 2H, J=5,35 Гц),3,56 (д, 2H, J=5,85), 3,15-3,25 (м, 2H), 2,40 (s,3 Н), 2,05-2,25 (м, 1H), 1,86 (м, 2 Н), 1,35 (s, 9H),0,88 (t, 3 Н, J= 7,35). Масс-спектр (FAB); m/e 854 19 4 С; и затем добавляют N,N'-дициклогексилкарбодиимид (280 мг). К этому раствору добавляют раствор метансулфоната DX-8951 (600 мг) и триэтиламин (0,16 мл), растворенный в N,Nдиметилформамиде (30 мл), и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 16 ч при перемешивании в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 10:1, содержащий 0,5% уксусной кислоты), получая указанное в заголовке соединение (700 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,57 (д, 1H, J=7,8 Гц), 8,19 (d , 1H), 8,05-8,07 (м, 2 Н), 7,79 (д, 1H,J=11,2 Гц), 7,32 (s, 1H), 7,10 (д, 2 Н, J=7,8 Гц),6,93-7,03 (м, 4 Н), 6,51 (s, 1H), 5,52-5,55 (м,1 Н),5,44 (s, 2H), 5,18 (д, 1H, J=18,5 Гц), 4,84 (д, 1H,J= 18,5 Гц), 4,57-4,59 (м, 1H), 3,57-3,71 (м, 6 Н),3,15-3,25 (м, 2H), 3,00-3,02 (м, 1H), 2,80-2,90 (м,1H), 2,40 (s, 3 Н), 2,05-2,25 (м, 1H), 1,86 (м, 2H),1,35 (s, 9H), 0,88 (t, 3H, J=7,35 Гц). Масс-спектрBoc-Gly-Gly-Gly-Gly (120 мг) и Nгидроксисукцинимид (39 мг) растворяют в N,Nдиметилформамиде (20 мл), охлаждают до 4C и затем добавляют N,N'-дициклогексилкарбодиимид (70 мг). К этому раствору добавляют раствор метансулфоната DX-8951 (150 мг) и триэтиламин (0,039 мл), растворенный в N,Nдиметилформамиде (10 мл), и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 16 ч при перемешивании в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 10:1), получая указанное в заголовке соединение (100 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,40 (д, 1H, J=8,3 Гц), 8,10-8,17 (м, 2H), 7,91-8,01 (м, 1H), 7,78 (д,1H, J=10,75 Гц), 7,32 (s, 1H), 6,94-6,96 (м, 1H),6,50 (s, 1H), 5,57 (t, 1H, J=4,5 Гц), 5,43 (s, 2H),5,23 (s, 2H), 3,77 (dd, 2H, J=5,85 Гц, J=8,80 Гц),3,70 (д, 2H, J=4,40 Гц), 3,65 (д, 2H, J=5,35 Гц),3,56 (д, 2H, J=5,85 Гц), 3,15-3,25 (м, 2H), 2,40 (s,3 Н), 2,05-2,25 (м, 1H), 1,86 (м, 2H), 1,35 (s, 9H),0,88 (t, 3H, J=7,35 Гц). Масс-спектр (FAB); m/e 764 (М+1). Пример 4. Синтез трифторацетата 3',N(Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951). 20 сусной кислоте (3 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), и затем остаток промывают эфиром, получая указанное в заголовке соединение (80 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,59-8,61 (м, 1H),8,50 (д, 1H, J=8,3 Гц), 8,21-8,27 (м, 2H), 7,918,01 (br, 3H), 7,81 (д, 1H, J=11,2 Гц), 7,32 (s, 1H),6,50-6,52 (br, 1H), 5,57-5,59 (м, 1H), 5,43 (s, 2H),5,23 (s, 2H), 3,80-3,82 (м, 3 Н), 3,70-3,75 (м, 3 Н),3,15-3,25 (м, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,05-2,25 (м, 1H),1,86-1,88 (м, 2H), 0,88 (t, 3H, J=7,35 Гц). Пример 5. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметил-декстранового спирта. Декстран Т 2000 (10 г, Pharmacia, средняя молекулярная масса: 2 000 000) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 1 000 мл) и добавляют водный раствор (1000 мл) периодата натрия (33,0 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (7,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Добавляют боргидрид натрия (14 г) и растворяют, затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты и перемешивают при 4 С в течение одного часа, затем доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор подвергают ультрафильтрации для удаления низкомолекулярной фракции, используя мембрану Biomax-30 (Millipore). Фракцию полимера лиофилизуют, получая декстрановый спирт. После обработки этого декстранового спирта при рН 3,0 в течение одного часа низкомолекулярную фракцию удаляют с помощью мембраны Biomax-50 и затем фракцию полимера удаляют на мембране Biomax-100, продукт лиофилизуют, получая очищенный декстрановый спирт (2,0 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 220 К (гель-фильтрация,декстрановый стандарт). Этот очищенный декстрановый спирт (1,8 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (10,5 г) в воде (45 мл) и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (15 г) и растворяют при охлаждении льдом, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 20 ч. После этого реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты, низкомолекулярную фракцию удаляют путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-10. Фракцию полимера лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (1,8 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 330 К (гель-фильтрация, декст 21 рановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,8. Вышеуказанную натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (300 мг) растворяют в воде, наносят на колонку Bio-Rad AG50W-x 2 (200-400 меш, Н+форма) (1,5 х 8,6 см) и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (0,5 мл) и лиофилизуют, получая триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (380 мг). Порции натриевой соли карбоксиметилдекстранового спирта (каждая по 300 мг) обрабатывают на колонке, как описано выше, получая триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (380 мг, 400 мг). Пример 6. Синтез натриевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (0,15 г), полученную в примере 5 выше, добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (1,05 г) в воде (4,5 мл), и затем растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (1,5 г),растворяют при охлаждении льдом, и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты,добавляют по каплям в 90 мл метанола и добавляют 3 М водный хлорид натрия (0,15 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают метанолом, затем растворяют в воде (5 мл) и добавляют 3 М водный хлорид натрия (0,15 мл). Этот водный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,45 мкм), фильтрат добавляют по каплям к 35 мл этанола и выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования(3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде и диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 0008 000). Внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (0,18 г). Степень карбоксиметилирования этого вещества на сахаридный остаток составляет 1,2 (алкалиметрия). Пример 7. Синтез натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта. Очищенный декстрановый спирт (0,2 г),полученный в примере 5, добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (0,84 г) в воде (6 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (1,2 г), растворяют при охлаждении льдом и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты, добавляют по каплям к 120 мл метанола, и затем добавляют 3 М водный хлорид на 001897 22 трия (0,2 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 минут). Осадок промывают метанолом, затем растворяют в воде (5 мл) и добавляют 3 М водный хлорид натрия (0,2 мл). Этот водный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,45 мкм),фильтрат добавляют по каплям к 35 мл этанола,и выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде и диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 000-8 000). Внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (0,20 г). Степень карбоксиметилирования этого вещества на сахаридный остаток составляет 0,4 (алкалиметрия). Пример 8. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A' (ANH2=DX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 5(380 мг, степень карбоксиметилирования 0,8) растворяют в N,N-диметилформамиде (30 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (49 мг) в N,N-диметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,017 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2 дигидроксихинолин (380 мг), затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Эту реакционную смесь доводят до рН 10 1 М с помощью водного гидроксида натрия и смесь порциями по 5 мл добавляют по каплям к 25 мл этанола. К этой смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл),и выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадки растворяют в воде и диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 0008 000), и внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и лиофилизуют. Полученный неочищенный продукт растворяют в воде (30 мл), доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия и обрабатывают при 37 С в течение одного часа. Этот обработанный раствор диализуют, как описано выше, и затем внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (289 мг). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW4000XL, Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 М 23 Содержание остатка лекарственного соединения в соединении составляет 5,3% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 МDX-8951). Указанное в заголовке соединение (300 мг) синтезируют в соответствии со способом, подобным способу примера 8, путем введения соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-GlyPhe-Gly)-NH-A, которая была получена в результате удаления Вос-группы из 3'-N-(Boc-GlyGly-Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (50 мг) по способу, подобному способу примера 4, в триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (380 мг), полученную в примере 5. Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW-4000XL, Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения соединения (0,1 М Tris буферный раствор,рН 9,0, 0,19 мг/мл) демонстрируются на фиг. 3 и фиг. 4, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,3% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 10. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Gly-Gly-NH-A'(ANH2=DX-8951). Указанное в заголовке соединение (190 мг) синтезируют в соответствии со способом, подобным способу примера 8, путем введения соли трифторуксусной кислоты 3'-N-(Gly-Gly-GlyGly)-NH-A, которая была получена в результате удаления Вос-группы из 3'-N-(Boc-Gly-Gly-GlyGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (41 мг) по способу, подобному способу примера 4, в триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (380 мг), полученную в примере 5. Спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 0,34 мг/мл) демонстрируется на фиг. 5. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,3% (маc./маc.),что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 11. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Мышей с опухолью Meth A (7 мышей в группе) получали путем подкожной трансплантации 1 х 106 клеток мышиной фибросаркомыMeth А в правую паховую область самцов мышей BALB/c (возрастом 7 недель). На 7 день лекарственный комплекс примера 9, растворенный в дистиллированной воде для инъекции,вводили в хвостовую вену мышам с опухольюMeth A 4 раза каждые 4 дня. На 21 день после трансплантации опухолевые массы вырезали и 24 взвешивали для расчета скорости ингибирования опухолевого роста по следующему уравнению: скорость ингибирования роста опухоли(%)=[1-(средний вес опухоли в группе, подвергающейся введению тестируемого образца/ средний вес опухоли в контрольной группе)] х 100. В результате было обнаружено, что лекарственный комплекс по настоящему изобретению, полученный в примере 9, проявляет значительно более высокую противоопухолевую активность по сравнению с лекарственным соединением per se, без спейсера и полисахаридного производного, в то же время демонстрируя отсутствие токсичности (потеря веса). Было обнаружено, что полисахаридное производное (пример 5) per se, и лекарственное соединение, вводимое отдельно со спейсером (соль трифторуксусной кислоты H2N-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A (ANH2=DX-8951), полученная в результате удаления Вос-групы из соединения примера 1, в соответствии со способом примера 4) не являются эффективными. Таблица 2 Доза Скорость ингиИсследуемое соединение(мг/кг) бирования, % Лекарственное соединение per se 7,5 х 4 76 1,875 х 4 46 0,9375 х 4 36 94 Соединение по примеру 9 1,41)x4 59 0,71)x4 0,351)х 4 41 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Пример 12. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Мышей с опухолью Meth A (6 мышей в группе) получали по способу, подобному способу по примеру 11, и противоопухолевую активность сравнивали с полученной в результате одноразового введения лекарственных комплексов по примерам 8 и 9 на 7 день. В результате степень противоопухолевой активности была следующей: (Полисахаридное производное)Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A'(Полисахаридное производное)-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A'лекарственное соединение per se. Обнаружено, что соединение, содержащее остаток лекарственного соединения, непосредственно связанный с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового спирта примера 5 без какого-либо спейсера (количество вводимого остатка лекарственного соединения: 6,2% по весу) не является эффективным. Таблица 3 Доза Скорость ингиИсследуемое соединение(мг/кг) бирования, % Лекарственное соединение 60 77 20 59 Соединение по примеру 8 101) 85 76 51) Соединение по примеру 9 51) 98 2,51) 87 1) Рассчитывают по лекарственному соединению 25 Пример 13. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстран Т 500 (10 г, Pharmacia, молекулярная масса: 500 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 1000 мл) и добавляют водный раствор (1000 мл) периодата натрия (33 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (7,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия. Добавляют боргидрид натрия (14 г) и растворяют,затем смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты, перемешивают при 4 С в течение одного часа и затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия, получая раствор 1. Отдельно проводят ряд процедур, описанных выше, с использованием Декстрана Т 500 (10 г, Pharmacia,молекулярная масса 500 К), получая раствор 2. Более того, повторяют ряд процедур, описанных выше, с использованием Декстрана Т 250 (10 г каждая, Pharmacia, молекулярная масса 250 К),получая раствор 3 и раствор 4. Эти растворы 1-4 объединяют и подвергают ультрафильтрации,используя мембрану Biomax-50, для удаления низкомолекулярной фракции. Фракцию полимера лиофилизуют, получая декстрановый спирт (25 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 163 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (11 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия(46,2 г) в воде, (330 мл) и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (66 г) при охлаждении льдом, растворяют и смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи. Эту реакционную смесь доводят до рН 9 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-30. Удержанный раствор, не прошедший через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (13 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 228 К (гельфильтрация, пуллулановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,4. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (600 мг) растворяют в воде, наносят на колонку Bio-Rad AG 50W-X2 (200-400 меш, Н+форма) (диаметр: 44 мм, длина: 210 мм) и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (0,93 мл) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (690 мг). Пример 14. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A 26 и оставляют на один час. Растворитель упаривают, а остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), и затем промывают эфиром,получая указанное в заголовке соединение (80 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,53 (д, 1 Н, J=8,3 Гц), 8,40-8,48 (м, 2 Н), 8,28 (д, 1 Н, J=8,3 Гц),7,95-8,07 (br, 3 Н), 7,81 (д, 1 Н, J=10,2 Гц), 7,307,37 (м, 2H), 7,15-7,30 (м, 5 Н), 6,50-6,55 (br, 1H),5,50-5,57 (м, 1H), 5,41 (д, 2 Н, J=7,82 Гц), 5,25 (s,2H), 4,55-4,62 (м, 1H), 3,55-3,92 (м, 6 Н), 3,153,25 (br, 2H), 2,98-3,03 (м, 1H), 2,73-2,82 (м, 1H),2,40 (s, 3 Н), 2,05-2,25 (м, 1H), 1,84-1,92 (м, 2H),0,88 (t, 3H, J=7,35 Гц). Пример 15. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A'(ANH2=DX-8951). Натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 13 (400 мг) преобразуют в триэтиламмониевую соль (470 мг) и растворяют в N,N-диметилформамиде (30 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951),полученной в примере 14, (62 мг) в N,Nдиметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,02 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (470 мг), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи, при перемешивании и защите от света. Эту реакционную смесь порциями по 5 мл каждая добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К этой смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования. Осадок растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия, доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом, и затем диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 0008 000). Внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (600 мг). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW4000XL, Tosoh; растворитель: 0,1 М NaCl; скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 МTris буферный раствор, рН 9,0, 0,1 мг/мл) показан на фиг. 6 и 7, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,8% (мас./мас.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 16. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A 27 2, растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), затем остаток промывают эфиром, получая указанное в заголовке соединение(д, 1 Н, J=18,5 Гц), 4,80 (д, 1H, J=18,5 Гц), 4,574,59 (м, 1H), 3,57-3,71 (м, 6 Н), 3,15-3,25 (м, 2 Н),3,00-3,02 (м, 1H), 2,80-2,90 (м, 1 Н), 2,50 (s, 3 Н),2,05-2,25 (м, 1 Н), 1,86-2,00 (м, 2 Н), 0,88 (t, 3 Н,J=7,35 Гц). Пример 17. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта -Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A' (ANH2=DX-8951). Натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 13 (1,0 г),преобразуют в триэтиламмониевую соль (1,2 г) и растворяют в N,N-диметилформамиде (90 мл). К этому раствору добавляют последовательно раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-N(Glу-Gly-Gly-Phe)-NH-A (A-NH2=DX-8951), полученной в примере 16 (158 мг), в N,Nдиметилформамиде (15 мл), триэтиламин (0,05 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании и защите от света. Эту реакционную смесь порциями по 5 мл каждая,добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), затем выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования. Осадок растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия, доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом и диализуют очищенной водой,используя диализную мембрану (Spectrapore 1,отсекаемая молекулярная масса: 6 000-8 000). Внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (1,4 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,2% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном раствореH-Gly-Phe-Leu-OH (3,0 г) добавляют к 50% водному диоксану (48 мл), охлаждают льдом. К этому раствору добавляют 1 н. водный гидроксид натрия (9,45 мл) и раствор диоксана (24 мл), содержащий (Вос)2 О (2,27 г), смесь перемешивают в течение ночи. 1 н. хлорводородную кислоту (9,45 мл) добавляют к реакционной смеси и растворитель упаривают. Полученный остаток очищают методом колоночной хромато 001897 28 графии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 5:1), получая указанное в заголовке соединение (2,5 г). Пример 19. Синтез Boc-Gly-Phe-Leu-GlyOBzl Boc-Gly-Phe-Leu-OH, полученный в примере 18 (2,4 г), и N-гидроксисукцинимид (656 мг) растворяют в N,N-диметилформамиде (50 мл), охлаждают до 4 С, затем добавляют N,N'дициклогексилкарбодиимид (1,17 г) и перемешивают в течение 2 ч. К этому раствору добавляют N,N-диметилформамидный раствор (40 мл), в котором растворены тозилат H-Gly-OBzl(1,9 г) и триэтиламин (0,79 мл), смесь оставляют взаимодействовать при перемешивании при комнатной температуре в течение 16 ч. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 50:1), получая указанное в заголовке соединение (2,0 г). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,20-8,30 (м, 1 Н),8,12 (д, 1 Н, J=8,3 Гц), 7,83 (д, 1H, J=8,3 Гц),7,32-7,37 (м, 5 Н), 6,89-6,95 (м, 1 Н), 5,12 (s, 1H),4,52-4,59 (br, 1H), 4,34 (dd, 1H, J=7,3 Гц, J=15,1 Гц), 3,93 (dd, 1H, J=5,5 Гц, J=17,2 Гц), 3,84 (dd,1H, J=5,5 Гц, J=17,2 Гц), 3,54 (dd, 1H, J=5,9 Гц,J=16,7 Гц), 3,42 (dd, J=5,9 Гц, J=16,7 Гц), 3,00Boc-Gly-Phe-Leu-OBzl (1,7 г), полученный в примере 19, растворяют в смешанном растворе этилацетата (30 мл) и метанола (30 мл) и добавляют 5% Pd-C (1,5 г) для обеспечения каталитического восстановления. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении, получая указанное в заголовке соединение (1,15 г). Пример 21. Синтез 3'-N-(Boc-Gly-Phe-LeuGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951).(5 мл). После охлаждения до 4 С, N,N'дициклогексилкарбодиимид (104 мг) добавляют к этому раствору и растворяют. К этому раствору добавляют N,N-диметилформамидный раствор (5 мл), в котором растворены метансульфонат DX-8951 (224 мг) и триэтиламин (0,059 мл), смесь оставляют взаимодействовать при перемешивании при комнатной температуре в течение 16 ч в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 10:1, содержащий 0,5% уксусной кислоты), получая указанное в заголовке соединение (200 мг).(s, 9H), 0,88 (t, 3 Н, J=7,4), 0,86 (д, 3 Н, J=6,4 Гц),0,82 (д, 3 Н, J=6,4 Гц). Пример 22. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-N-(Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(ANH2=DX-8951) (97 мг), полученный в примере 21, растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), затем промывают эфиром,получая указанное в заголовке соединение (95 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,57 (д, 1H, J=8,3 Гц), 8,47 (д, 1H, J=8,3 Гц), 8,32 (д, 1H, J=7,8 Гц),8,17 (t, 1H, J=5,5 Гц), 7,81-7,91 (br, 3H), 7,79 (д,1H, J=10,7 Гц), 7,32 (s, 1H), 7,21-7,23 (м, 5 Н),7,12-7,17 (м, 1H), 6,45-6,55 (br, 1H), 5,57 (q, 1H,J=4,4 Гц), 5,43 (д, 1H, J=16,1 Гц), 5,34 (д, 1H,J=16,1 Гц), 5,23 (s, 2H), 4,67 (dt, 1H, J=4,0 Гц,J=9,0 Гц), 4,31 (dd, 1H, J=8,5 Гц, J=15,0 Гц), 4,04,4 (br, 1H), 3,74-3,76 (м, 2H), 3,56 (dd, 1H, J=6,0 Гц, J=16,0 Гц), 3,41 (dd, 1H, J=6,0 Гц, J=16,0 Гц),3,17-3,19 (br, 2H), 3,02 (dd, 1H, J=4,0 Гц, J=14,0 Гц), 2,70 (dd, 1H, J=10,0 Гц, J=14,0 Гц), 2,40 (s,3 Н), 2,05-2,15 (м, 1H), 1,85 (dt, 2H, J=7,0 Гц,J=14,0 Гц), 1,50-1,55 (м, 1H), 1,45 (t, 2H, J=6,0 Гц), 1,35 (s, 9 Н), 0,88 (t, 3H, J=7,4), 0,85 (д, 3 Н,J=6, 4 Гц), 0,80 (д, 3 Н, J=6,4 Гц). Пример 23. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Phe-Leu-Gly-NH-A'(ANH2=DX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 13 (690 мг), растворяют в N,N-диметилформамиде (50 мл). К этому раствору добавляют последовательно раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A (ANH2=DX-8951) (95 мг), полученной в примере 22, в N,N-диметилформамиде (10 мл), триэтиламин (0,03 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси 1,2-дигидроксихинолин (690 мг) , смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Каждую порцию объемом 5 мл этой реакционную смеси добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл каждая. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования. Осадок растворяют в 0,5 М 1 30 водном хлориде натрия, доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия, и диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 000-8 000). Внутренний диализный раствор фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм), и затем фильтрат лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (600 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,8% (мас./мас.),что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 24. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстран Т 500 (50 г, Pharmacia, молекулярная масса: 500 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 5000 мл) и добавляют водный раствор (5000 мл) периодата натрия (165,0 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света, к смеси добавляют этиленгликоль (35,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия. Добавляют боргидрид натрия (70 г) и растворяют, затем смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью с помощью уксусной кислоты, перемешивают при 4 С в течение одного часа и затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия. Полученный раствор подвергают ультрафильтрации, используя мембрану Biomax-50, для удаления низкомолекулярной фракции. Фракцию полимера лиофилизуют, получая декстрановый спирт(27,1 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 140 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (5 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (21 г) в воде (150 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (30 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и затем обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-50. Удержанный раствор, не прошедший через мембрану,лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (5,6 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 263 К(гель-фильтрация, пуллулановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,4. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,0 г) растворяют в воде, наносят на колонку Bio-Rad AG 50W-X2 (200-400 меш,Н+-форма) (диаметр: 44 мм, длина: 210 мм) и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (4 мл) и лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (2,2 г). 31 Пример 25. Синтез триметиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (1,0 г), полученную в примере 24,растворяют в воде, наносят на Bio-Rad AG 50WX2 (200-400 меш, Me3N, Н+-форма) колонку и элюируют водой. Этот элюат лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (950 мг). Пример 26. Синтез гидрохлорида 3'-N(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A (А-NH2=DX-8951). По способу, подобному способу примера 14, соль трифторуксусной кислоты и 3'-N-(GlyGly-Phe-Gly)-NH-A, полученную из 3'-N-(BocGly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(400 мг), растворяют в воде/МеОН (1:4), наносят на Bio-Rad AG 1-Х 8 (200-400 меш, Сlформа) колонку (1,5 см 8,6 см) и элюируют вышеуказанным растворителем. Этот элюат концентрируют и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (310 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,53 (д, 1 Н, J=8,5 Гц), 8,46-8,48 (м, 1H), 8,37-8,39 (м, 1 Н), 7,95 (д,1H, J=8,0 Гц), 7,80 (s, 3H), 7,78 (д, 1 Н, J=11,1 Гц), 7,34 (s, 1H), 7,14-7,24 (м, 5 Н), 6,50 (s, 1H),5,56-5,60 (м, 1H), 5,35-5,40 (м, 2 Н), 5,24 (s, 2H),4,51-4,56 (м, 1H), 3,86 (dd, J=4,8, 13,5 Гц, 1H),3,68-3,79 (м, 3H), 3,54 (s, 2H), 3,15-3,22 (м, 2H),3,01 (dd, J=5,6, 13,5 Гц, 1H), 2,78 (dd, J=9,6, 3,5 Гц, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,12-2,23 (м, 2H), 1,81-1,89(АNН 2=DХ-8951). Триметиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 25N,Nдиметилформамиде (6 мл). К этому раствору добавляют последовательно раствор гидрохлорида 3'-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-А (A-NH2=DX8951) (24 мг), полученного в примере 26, в N,Nдиметилформамиде (10 мл), триэтиламин (5 мкл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (0,1 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Каждую порцию объемом 5 мл этой реакционную смеси добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл каждая. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия(2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), и выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-30. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в 32 заголовке соединение (90 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 11% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 28. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A' (А-NН 2=DХ-8951). Триметиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 25 (0,1 г), растворяют в N,N-диметилформамиде (6 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор гидрохлорида 3'-N-(Gly-GlyPhe-Gly)-NH-A (А-NH2=DX-8951) (36 мг), полученного в примере 26, в N, N-диметилформамиде (10 мл), триэтиламин (8 мкл) и 1 этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (0,1 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Каждую из порций по 5 мл этой реакционную смеси добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл каждая. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 12 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-30. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (80 мг). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK GelPW-4000XL, Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl,скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения(0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 36 мкг/мл) показан на фиг. 8 и 9 соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 15% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 29. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A'(ANH2=DX-8951). Декстран Т 250 (20 г, EXTRASYNTHESE,средняя молекулярная масса: 250 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 2000 мл) и добавляют водный раствор (2000 мл) периодата натрия (66,0 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Добавляют боргидрид натрия (28 г) и растворяют, затем смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь, 33 охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты, перемешивают при 4 С в течение одного часа и затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Низкомолекулярную фракцию удаляют из полученного водного раствора путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-30, получая Удержанный раствор 1, который не прошел через мембрану. Отдельно Декстран Т 250 (50 г, EXTRASYNTHESE, средний молекулярная масса: 250 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5,5000 мл) и к нему добавляют водный раствор(5000 мл) периодата натрия (165 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль(35,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Добавляют боргидрид натрия (70 г) и растворяют его, затем смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты и перемешивают при 4 С в течение одного часа, затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Низкомолекулярную фракцию удаляют из полученного водного раствора путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-30, получая Удержанный раствор 2, который не прошел через мембрану. Удержанные растворы 1 и 2 объединяют, подвергают ультрафильтрации, используя мембрану Biomax-30 для удаления низкомолекулярной фракции из фракции, которая не прошла через мембрану Biomax-50, и лиофилизуют, получая декстрановый спирт (25,7 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 47 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (5 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (35 г) в воде (150 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (50 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраныBiomax-50. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (7,2 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 127 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт) и степень карбоксиметилирования составляет 0,8. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,2 г) растворяют в воде, наносят на Bio-Rad AG 50W-X2(200-400 меш, Н+-форма) колонку (диаметр: 44 мм, длина: 210 мм) и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (4 мл) и затем 34 лиофилизуют, получая триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,69 г). Эту триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,67 г) растворяют вN,N-диметилформамиде (200 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор, полученный в результате растворения соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)NH-A, которая была получена в результате удаления Воc группы по способу, подобному способу примера 16 из 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)NH-A (A-NH2=DX-8951) (350 мг), полученного по способу, подобному способу примера 2, и триэтиламинаN,Nдиметилформамиде (10 мл), и раствор, полученный в результате растворения 1 этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолина (2,67 г) в N,N-диметилформамиде (10 мл). Смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. К этой реакционной смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия(100 мл), и порции смеси, по 8 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола, объемом 30 мл каждая. К каждой смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл), выпавший осадок собирают путем центрифугирования (3500 об/мин, 8 минут). Осадок промывают ацетоном, затем растворяют в воде и добавляют 3 М водный хлорид натрия(10 мл), затем доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия, после чего обрабатывают при 37 С в течение 1 ч. Обработанный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием мембраны Biomax-10. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (2,30 г). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK GelPW-4000XL, Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl,скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения(0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 0,20 мг/мл) демонстрируются на фиг. 10 и 11, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,8%(маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 30. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. К раствору (2000 мл) Декстрана Т 10 (20 г,Pharmacia, средняя молекулярная масса: 10 К) в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5) добавляют водный раствор (2000 мл) периодата натрия (66,0 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Добавляют боргидрид 35 натрия (28 г) и растворяют, смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты и перемешивают при 4 С в течение одного часа,затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор подвергают ультрафильтрации, используя мембрану Biomax-5(Millipore) для удаления низкомолекулярной фракции. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, пропускают через мембрану Biomax-30. Полученный фильтрат лиофилизуют, получая декстрановый спирт (8,0 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 13 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (3,7 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (25,9 г) в воде(111 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (37 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 20 ч. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованиемBiomax-5 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (6,2 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 37 К(гельфильтрация, пуллулановый стандарт), степень карбоксиметилирования составляет 0,9. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (6,0 г) растворяют в воде, наносят наBio-Rad AG50W-X 2 (200-400 меш, Н+-форма) колонку, и затем элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (9,3 мл) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (7,2 г). Пример 31. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстрановый спирт (3,9 г), полученный в примере 30, добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (16,3 г) в воде (117 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (23,4 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-5 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (5,0 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 28 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,5. Эту натриевую соль кар 001897 36 боксиметилдекстранового спирта (4,8 г) преобразуют в триэтиламмониевую соль по способу,подобному способу примера 30, получая указанное в заголовке соединение (5,6 г). Пример 32. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдкстранового спирта. Водный раствор (2000 мл) периодата натрия (66,0 г) добавляют к раствору (2000 мл) Декстрана 4 (20 г, Funakoshi, средний молекулярная масса: 4 К-6 К) в 0,1 М ацетатном буфере(рН 5,5). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Добавляют боргидрид натрия (28 г) и растворяют его, смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты и перемешивают при 4 С в течение одного часа, затем доводят до рН 7,5 8 М водным гидроксидом натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор подвергают ультрафильтрации, используя Biomax-3 мембрану (Millipore) для удаления низкомолекулярной фракции. Полученный фильтрат лиофилизуют, получая декстрановый спирт (6,0 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 9 К(гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (2,7 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (18,9 г) в воде(81 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (27 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 20 часов. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованиемBiomax-5 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (4,2 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 20 К(гельфильтрация, пуллулановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,9. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (4,0 г) преобразуют в триэтиламмониевую соль по способу, подобному способу примера 30, получая указанное в заголовке соединение (4,8 г). Пример 33. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстрановый спирт (2,7 г), полученный в примере 32 добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (11,3 г) в воде (81 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (16,2 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем 37 смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-5 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,7 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 16 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт) и степень карбоксиметилирования составляет 0,5. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,7 г) преобразуют в триэтиламмониевую соль по способу,подобному способу примера 30, получая указанное в заголовке соединение (3,1 г). Пример 34. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A' (АNН 2=DХ-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 30 (1,5 г), растворяют в N,N-диметилформамиде(90 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,07 мл) и соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-PheGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (210 мг) в N,Nдиметилформамиде (40 мл) и 1-этоксикарбонил 2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,5 г). Смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К каждой добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), затем выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 минут). Осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-3 мембраны. Удержанный раствор,который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (1,3 г). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW-4000XL,Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 65 мкг/мл) демонстрируются на фиг. 12 и 13, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в соединении составляет 6,4% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 35. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A' (A-NH2=DX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере(90 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,056 мл) и соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-PheGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (168 мг) в N, Nдиметилформамиде (30 мл) и 1-этоксикарбонил 2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К каждой добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Эти осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-3 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (1,0 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,8% (мас./мас.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном раствореDX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 32 (1,2 г), растворяют в N,N-диметилформамиде(90 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,056 мл) и соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-PheGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (168 мг) в N, Nдиметилформамиде (30 мл) и 1-этоксикарбонил 2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К каждой добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Эти осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-3 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (1,0 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединение составляет 5,9% (мас./мас.), что определяли по поглоще 39 нию при 362 нм в 0,1 М Tris буферном раствореDX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 33 (1,5 г), растворяют в N,N-диметилформамиде(90 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,07 мл), соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-PheGly)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (210 мг) в N,Nдиметилформамиде (40 мл) и 1-этоксикарбонил 2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,5 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К каждой добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-3 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют,получая указанное в заголовке соединение (1,3 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,6%(мас./мас.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 38. Синтез Boc-Gly-Gly-Phe-GlyNH-A (A-NH2=DW-8286).N,N-диметилформамидный раствор (6 мл), в котором растворены гидрохлорид соединения,представленного следующей формулой(0,01 мл), смесь оставляют взаимодействовать при перемешивании и защите от света при комнатной температуре в течение 16 ч. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 10:1, со 001897DW-8286). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (175 мг), полученную в примере 24, растворяют в N,N-диметилформамиде (20 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A (ANH2=DW-8286) (29 мг), полученной из 3'-N(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A (27 мг), полученного в примере 38 в результате удаления Восгруппы, по способу, подобному способу примера 4, и триэтиламина (9 мкл) в N,Nдиметилформамиде (5 мл) и 1-этоксикарбонил 2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (175 мг), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 минут). Осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-30 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (135 мг). Результат анализа ГПX этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW-4000XL,Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 99 мкг/мл) демонстрируются на фиг. 14 и 15 соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 6,1% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 nm в 0,1 МN,N'-дициклогексил 41 карбодиимид (79 мг). К этому раствору добавляют N,N-диметилформамидный раствор (30 мл), в котором растворены тозилат соединения,представленного следующей формулой:DW-8089] (170 мг) и триэтиламин (0,054 мл),смесь оставляют взаимодействовать при перемешивании при комнатной температуре в течение ночи в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагелеDW-8089). Триэтиламмониевую соль карбоксмметилдекстранового спирта (1,6 г), полученную в примере 24, растворяют в N,N-диметилформамиде (60 мл). К этому раствору добавляют раствор, полученный в результате растворения соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-GlyPhe-Gly)-NH-A (A-NH2-DW-8089), полученного из 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A (200 мг),полученного в примере 40 в результате удаления Вос-группы по способу, подобному способу примера 4, и триэтиламина (0,07 мл) в N,Nдиметилформамиде (20 мл), и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,6 г),смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси,по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К каждой добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир(25 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (2500 об/мин, 8 мин). Осадки промывают этанолом, затем растворяют в воде, добавляют 3 М водный хлорид натрия (20 42 мл) и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия, этот раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованиемBiomax-10 мембраны. Удержанный раствор,который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (1,20 г). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel РW-4000XL,Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединение (0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 0,26 мг/мл) демонстрируются на фиг. 16 и 17, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 5,0% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 nm в 0,1 МTris буферном растворе (рН 9,0). Пример 42. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстран Т 150 (20 г, Pharmacia, средняя молекулярная масса: 150 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 2000 мл) и добавляют водный раствор (2000 мл) периодата натрия(66,0 г). После перемешивания при 4 С в течении 10 дней при защите от света к смеси добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом, добавляют боргидрид натрия (28 г) и растворяют, затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты и перемешивают при 4 С в течении 1 ч,рН смеси доводят до 7,5 8 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор концентрируют до 500 мл путем ультрафильтрации с использованием Biomax-5 мембраны (Millipore), получая раствор 1. Отдельно проводят серии процедур,описанные выше, используя Декстран Т 110 (20 г), получая раствор 2. Раствор 1 и раствор 2 объединяют, объединенный раствор доводят до рН 3,0 и инкубируют при 40 С в течение 4 ч, затем доводят до рН 7, получая раствор, содержащий декстрановый спирт с пониженной молекулярной массой. Этот раствор пропускают черезBiomax-30 мембрану и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-5 мембраны, затем лиофилизуют, получая декстрановый спирт (4,6 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 17 К (гель-фильтрация,пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (2,5 г) добавляют к водному раствору,полученному в результате растворения гидроксида натрия (17,5 г) в воде (75 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (25 г) при охлаждении льдом и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при ком 43 натной температуре в течение 20 часов. Эту реакционную смесь доводят до рН 9 с помощью уксусной кислоты и затем обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-5 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (4,0 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 45 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт) и степень карбоксиметилирования составляет 0,9. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (3,7 г) растворяют в воде, наносят на Bio-Rad AG50W-x 2(200-400 меш, Н+-форма) колонку и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламинD-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 42 (4,4 г), растворяют в N,N-диметилформамиде(300 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,19 мл) и соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-GlyGly-Phe)-NH-A (A-NH2=DX-8951) (580 мг) в(45 мл) и 1 этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (4,4 г), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании и защите от света. Эту реакционную смесь доводят до рН 10 1 М с помощью водного гидроксида натрия, затем порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 25 мл. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Эти осадки растворяют в воде и диализуют очищенной водой, используя диализную мембрану (Spectrapore 1, отсекаемая молекулярная масса: 6 000-8 000), внутренний диализный раствор фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (3,4 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,6% (маc./маc.),что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 44. Синтез -метилкарбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Gly-Gly-Phe-NHA' (А-NН 2=DХ-8951). Декстрановый спирт (2 г), полученный в примере 42, добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (14 г) в воде (60 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют при охлаждении льдом -бромпропионовую кислоту (19 мл) и растворяют, затем смесь оставляют взаимодействовать при ком 001897 44 натной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-50 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая натриевую соль-метилкарбоксиметилдекстранового спирта (2,95 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 45 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Степень -метилкарбоксиметилирования на сахаридный остаток получают как и для карбоксиметилдекстранового спирта, как указано ниже. Водный раствор натриевой соли -метилкарбоксиметилдекстранового спирта наносят на Bio-Rad AG 50W-X2(Н+-форма) колонку, элюат лиофилизуют и используют как образец. Этот образец растворяют в предписанном избыточном количестве 0,1 н. водного раствора гидроксида натрия и растирают с 0,1 н. хлорводородной кислотой, используя фенолфталеин в качестве индикатора. Степень-метилкарбоксиметилирования определяют по уравнению: степень -метилкарбоксиметилирования = 13,4(a-b)/[s-7,2(a-b)], где s является количеством используемого образца (мг), а является предписанным избыточным количеством 0,1 н. водного раствора гидроксида натрия (мл),и b является количеством 0,1 н. хлорводородной кислоты, использованной для титрования (мл). Найденная в результате степень метилкарбоксиметилирования составляет 0,8. Эту натриевую соль -метилкарбоксиметилдекстранового спирта (2,2 г) растворяют в воде, наносят на Bio-Rad AG 50W-X2 (200-400 меш, Н+-форма) колонку (диаметр: 44 мм, длина: 210 мм) и затем элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (4 мл) и затем лиофилизуют, получая триэтиламмониевую соль -метилкарбоксиметилдекстранового спирта (2,69 г). Эту триэтиламмониевую соль метилкарбоксиметилдекстранового спирта (2,68 г) растворяют в N,N-диметилформамиде (60 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор, полученный в результате растворения соли трифторуксусной кислоты и 3'-N(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A (A-NH2=DX-8951), которую получают по способу, подобному способу примера 16, путем удаления Вос-группы из 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A (350 мг), синтезированного по способу, подобному способу примера 2, и триэтиламина (0,116 мл) в N,Nдиметилформамиде (10 мл), и раствор, полученный в результате растворения 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (2,68 г) в N,N-диметилформамиде (10 мл), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. К этой реакционной смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (40 мл), и порции этой реакционной смеси, по 6 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 30 мл. К каждой до 45 бавляют 3 М водный хлорид натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл), выпавший осадок собирают путем центрифугирования (3500 об/мин, 8 минут). Этот осадок промывают ацетоном, затем растворяют в воде, добавляют 3 М водный хлорид натрия (10 мл), доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия и обрабатывают при 37 С в течение 1 ч. Этот обработанный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-10 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр(0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (2,15 г). Результат анализа ГПХ этого соединения после растворения в 0,1 М водном хлориде натрия (колонка: TSK Gel PW-4000XL, Tosoh, растворитель: 0,1 М NaCl, скорость потока: 0,8 мл/мин) и спектр ультрафиолетового поглощения этого соединения (0,1 М Tris буферный раствор, рН 9,0, 0,21 мг/мл) показаны на фиг. 18 и 19, соответственно. Содержание остатка лекарственного соединения в полученном продукте составляет 5,9% (маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе(рН 9,0). Пример 45. Синтез соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951). Смесь соли п-толуолсульфоновой кислоты и Phe-Gly-Obzl (3,06 г), Boc-Gly-OH (1,10 г), Nгидроксисукцинимида (941 мг), N-метилморфолина (0,725 мл) и N,N-диметилформамида (40 мл) охлаждают до 4 С, и добавляют N,N'дициклогексилкарбодиимид (1,56 г). Смесь оставляют взаимодействовать в течение ночи при комнатной температуре при перемешивании,затем упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол = 98:2), получая Boc-GlyPhe-Gly-OBzl (1,93 г). 1(dd, 1H, J=5,6, 16,7 Гц), 3,43 (dd, 1H, J=5,6, 16,7 Гц), 3,01 (dd, 1H, J=4,8, 14,3 Гц), 2,77 (dd, 1H,J=5,6, 14,3 Гц), 1,37 (s, 9H). Полученный Boc-Gly-Phe-Gly-OBzl (1,78 г) растворяют в этилацетате (60 мл) и подвергают каталитическому восстановлению в течение 24 ч в присутствии 5%-Pd-C (1,8 г). Катализатор удаляют посредством фильтрации и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, получая Boc-Gly-Phe-Gly-OH (1,41 г). 1Boc-Gly-Phe-Gly-OH (500 мг), полученный выше, и N-гидроксисукцинимид (161 мг) растворяют в N,N-диметилформамиде (10 мл). К этому раствору добавляют N,N-диметилформамидный раствор (50 мл), в котором растворяют метансулфонат DX-8951 (530 мг) и триэтиламин(0,146 мл). Смесь охлаждают до 4 С, добавляютN,N'-дициклогексилкарбодиимид (268 мг) и оставляют взаимодействовать в течение ночи при перемешивании при комнатной температуре в защищенных от света условиях Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол=96:4), получая 3'-N(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951) (100 мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом(30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), затем промывают эфиром, получая указанное в заголовке соединение (80 мг). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,52-8,62 (м, 1 Н),7,94 (s, 3 Н), 7,79 (t, 1H, J=11,1 Гц), 7,34 (s, 1H),7,15-7,27 (м, 5H), 6,52 (s, 1H), 5,57-5,61 (м, 1H),5,36-5,46 (м, 2 Н), 5,24 (s, 2H), 4,66-4,70 (м, 1H),3,69-3,81 (м, 2H), 3,61-3,68 (м, 1H), 3,40-3,47 (м,1H), 3,15-3,23 (м, 1H), 3,01 (dd, 1H, J=4,0, 13,5 Гц), 2,77 (dd, 1H, J=9,5, 13,5 Гц), 2,12-2,23 (м,2H), 1,81-1,91 (м, 2H), 0,89 (t, 3 Н, J=7,2 Гц). Масс-спектр (FAB); m/е 697 (М+1). Пример 46. Синтез соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX8951).N,N-диметилформамидный раствор (50 мл), в котором растворены метансулфонат DX-8951(1058 мг) и триэтиламин (0,293 мл). Смесь охлаждают до 4 С, затем добавляют N,N'дициклогексилкарбодиимид (494 мг) и оставляют взаимодействовать при перемешивании при комнатной температуре в течение ночи в защи 47 щенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении и остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол=98:2), получая 3'-N-(BocPhe-Gly)-NH-A (А-NH2=DX-8951) (1,20 г). 1 Н ЯМР (DMSO-d6) : 8,29 (д, 1H, J=8,0 Гц), 8,21 (t, 1H, J=4,8 Гц), 7,76 (д, 1H, J=10,3 Гц),7,32 (s, 1H), 7,13-7,25 (м, 5H), 6,92 (д, 1H, J=7,2 Гц), 6,49 (s, 1H), 5,56-5,61 (м, 1H), 5,44 (д, 1H,J=15,9 Гц), 5,38 (д, 1H, J=15,9 Гц), 5,25 (s, 2H),4,08-4,12 (м, 1 Н), 3,78 (д, 1 Н, J=4,8 Гц), 3,163,25 (м, 2H), 2,99 (dd, 1H, J=4,0, 13,5 Гц), 2,72(М+1). 3'-N-(Boc-Phe-Gly)-NH-A (170 мг), полученный выше, растворяют в трифторуксусной кислоте (4 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (10 мл) и дважды с этанолом (10 мл), затем промывают эфиром, получая указанное в заголовке соединение (100 мг). 1(FAB); m/e 640 (М+1). Пример 47. Синтез соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-Gly-NH-A (A-NH2=DX-8951). Метансульфонат DX-8951 (530 мг) и триэтиламин (0,28 мл) растворяют в N,N-диметилформамиде (10 мл), охлаждают до 4 С и добавляют N-гидроксисукцинимидный эфир Boc-Gly(327 мг). Смесь оставляют взаимодействовать при перемешивании при комнатной температуре в течение ночи в защищенных от света условиях. Эту реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и затем остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: раствор дихлорметан:метанол=98:2), получая 3'-N-(Boc-Gly)-NHA (А-NH2=DX-8951) (500 мг). 1(2 мл) и оставляют на один час. Растворитель упаривают и остаток дважды подвергают азеотропной перегонке с метанолом (10 мл) и дважды с этанолом (10 мл), затем промывают эфиром, получая указанное в заголовке соединениеH ЯМР (DMSO-d6) : 8,88 (д, 1H, J=8,8 Гц), 8,08 (s, 3 Н), 7,81 (д, 1H, J=11,2 Гц), 7,34 (s,1H), 6,52 (s, 1H), 5,63-5,67 (м, 1H), 5,45 (д, 1H,J=16,7 Гц), 5,40 (д, 1H, J=16,7 Гц), 5,36 (д, 1H,J=19,1 Гц), 5,25 (д, 1H, J=19,1 Гц), 3,56 (s, 2H),3,11-3,19 (м, 2H), 2,43 (s, 3 Н), 2,23-2,28 (м, 1H),2,11-2,19 (м, 1H), 1,81-1,91 (м, 2H), 0,88 (t, 3 Н,J=8,0 Гц). Масс-спектр (FAB); m/e 493 (М+1). Пример 48. Синтез триметиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового спирта. Декстран Т 500 (50 г, Pharmacia, молекулярная масса: 500 К) растворяют в 0,1 М ацетатном буфере (рН 5,5, 5000 мл) и добавляют водный раствор (5000 мл) периодата натрия (165,0 г). После перемешивания при 4 С в течение 10 дней при защите от света, к смеси добавляют этиленгликоль (35,0 мл) и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7 8 М с помощью водного гидроксида натрия. Добавляют боргидрид натрия (70 г) и растворяют,смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь, охлажденную льдом, доводят до рН 5,5 с помощью уксусной кислоты, перемешивают при 4 С в течение одного часа и затем доводят до рН 7,5 8 М с помощью водного тидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-50 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, лиофилизуют, получая декстрановый спирт (20,2 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 159 К (гель-фильтрация, пуллулановый стандарт). Этот декстрановый спирт (7,5 г) добавляют к водному раствору, полученному в результате растворения гидроксида натрия (31,5 г) в воде(225 мл), и растворяют при комнатной температуре. К этому раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (45 г) при охлаждении льдом и растворяют, смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи. Эту реакционную смесь доводят до рН 8 с помощью уксусной кислоты и затем обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-50 мембраны. Удержанный раствор,который не прошел через мембрану, лиофилизируют, получая натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (8,5 г). Молекулярная масса этого вещества составляет 274 К (гельфильтрация, пуллулановый стандарт), и степень карбоксиметилирования составляет 0,4. Эту натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,0 г) растворяют в воде, наносят на 49 колонку (диаметр: 44 мм, длина: 210 мм) и элюируют водой. К этому элюату добавляют триэтиламин (4 мл) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (2,2 г). Пример 49. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-Phe-Gly-NH-A' (A-NH2=DX8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 48 (200 мг), растворяют в N,N-диметилформамиде (7 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Gly-Phe-Gly)-NH-A (ANH2=DX-8951) , полученной в примере 45 (41 мг) в N,N-диметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,014 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2 дигидроксихинолин (100 мг), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования(3500 об/мин, 8 мин). Осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-50 мембраны. Удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через Millipore фильтр (0,22 мкм) и затем лиофилизуют, получая указанное в заголовке соединение (190 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,5%(маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 50. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Phe-Gly-NH-А' (A-NH2=DX-8951). Натриевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 24 (2,5 г) растворяют в воде, наносят на Bio-Rad AG 50WX2 (200-400 меш, Et3N Н+-форма) колонку и элюируют водой. Этот элюат лиофилизуют, получая триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (2,5 г). Эту триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта (200 мг) растворяют в N,N-диметилформамиде (12 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-(Phe-Gly)-NH-A (ANH2=DX-8951) (42 мг), полученного в примере 46, и триэтиламина (0,016 мл) в N,N-диметилформамиде (5 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси 1,2-дигидроксихинолин (200 мг), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании и защите от света. К этой реакционной смеси добавляют воды (300 мл) и подвергают ультрафильтрации, используя ультрафильтрационные мембраны 10 К (Filtron). Удержанный раствор, 001897 50 который не прошел через мембрану, доводят до рН 10 0,1N с помощью водного гидроксида натрия и пропускают через фильтрационные мембраны (0,16 мкм, Filtron). Фильтрат обессоливают путем ультра фильтрации с использованием Biomax-50 мембраны, затем фильтруют черезMillipore фильтр (0,22 мкм) и лиофилизуют,получая указанное в заголовке соединение (180 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 6,1%(маc./маc.), что определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе (рН 9,0). Пример 51. Синтез карбоксиметилдекстранового спирта-Gly-NH-A' (A-NH2=DX-8951). Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового спирта, полученную в примере 48 (370 мг), растворяют в N,N-диметилформамиде (10 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты и 3'-N-Gly-NH-A (A-NH2=DX-8951) (4257 мг), полученного в примере 47, в N,Nдиметилформамиде (3 мл), триэтиламина (0,027 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (185 мг), смесь оставляют взаимодействовать при комнатной температуре в течение ночи при перемешивании и защите от света. Порции этой реакционной смеси, по 5 мл каждая, добавляют по каплям к порциям этанола по 10 мл. К смеси добавляют 3 М водный хлорид натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл), выпавший осадок собирают с помощью центрифугирования (3500 об/мин, 8 мин). Осадки растворяют в 0,5 М водном хлориде натрия и доводят до рН 9 0,1 М с помощью водного гидроксида натрия при охлаждении льдом. Полученный водный раствор обессоливают путем ультрафильтрации с использованием Biomax-50 мембраны, остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 0,5%(мас./мас.), что удержанный раствор, который не прошел через мембрану, фильтруют через(290 мг). Содержание определяли по поглощению при 362 нм в 0,1 М Tris буферном растворе(рН 9,0). Пример 52. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Опухоленесущих Meth А мышей (6 мышей в группе) получали по способу, подобному способу примера 11, и противоопухолевую активность лекарственного комплекса примера 15 определяли путем одноразового введения, как в примере 12. Обнаружено, что лекарственный комплекс примера 15 проявляет значительно повышенную противоопухолевую активность и имеет более широкий интервал эффективной дозы по сравнению с самим лекарственным соединением примера 12.(мг/кг)1) ингибирования, % Соединение по примеру 15 10 100 5 99 2,5 95 1,25 83 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Исследуемое соединение Пример 53. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Несущих SC-6 опухоль nude (линия лысых мышей) мышей (5 мышей на группу) получают путем подкожной трансплантации кусочка SC-6 человеческого желудочного опухолевого блока в правую паховую область nude мышей(BALB/c-nu/nu, самцы). На 27 день после трансплантации мыши получали лекарственный комплекс примера 15, растворенный в дистиллированной воде для инъекции, в виде единичного внутривенного введения, и его противоопухолевую активность сравнивали с активностью лекарственного соединения per se. В результате обнаружено, что лекарственный комплекс примера 15 проявляет более высокую противоопухолевую активность по сравнению с лекарственным соединением per se, тогда как гибель животных по причине токсичности не наблюдалась. Доза Скорость Число умерших(мг/кг) ингибиро- мышей / испольвания, % зуемых мышей Лекарственное 60 98 2/5 соединение per se 15 61 0/5 Соединение по 81) 100 0/5 примеру 15 71 0/5 21) 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Исследуемое соединение Пример 54. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению.Nude мышей, несущих рак легких QG-90 человека (5 мышей на группу) получали в соответствии со способом, подобным способу примера 53. На 16 день после трансплантации мыши получали лекарственный комплекс примера 15, растворенный в дистиллированной воде для инъекции, в виде единичного внутривенного введения, и его противоопухолевую активность сравнивали с активностью лекарственного соединения per se. В результате обнаружено, что лекарственный комплекс примера 15 проявляет значительно повышенную противоопухолевую активность и имеет более широкий интервал эффективной дозы по сравнению с лекарственным соединением per se. Исследуемое соединение Лекарственное соединение per se Соединение по примеру 15 Скорость Число умерших Доза ингибиро- мышей / исполь(мг/кг) вания, % зуемых мышей 50 65 0/5 12,5 51 0/5 71) 98 0/5 1,751) 97 0/5 52 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Пример 55: Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению Опухоле-несущих Meth А мышей (6 мышей в группе) получали по способу, подобному способу примера 11, и противоопухолевую активность лекарственного комплекса примера 41 определяли путем единичного введения, как в примере 12, и его противоопухолевую активность сравнивали с активностью лекарственного соединения per se. В результате обнаружено, что лекарственный комплекс примера 41 проявляет значительно повышенную противоопухолевую активность и имеет более широкий интервал эффективной дозы по сравнению с самим лекарственным соединением per se. Доза Скоростьper se 50 56 25 34 Соединение по примеру 15 251) 99 12,51) 95 6,251) 81 61 3,1251) 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Исследуемое соединение Пример 56. Противоопухолевая активность лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Опухоленесущих Meth А мышей (6 мышей в группе) получали по способу, подобному способу примера 11, и противоопухолевую активность определяли в соответствии со способом,подобным способу примера 12, путем единичного введения лекарственных комплексов примеров 29, 43 и 44, соответственно. В результате обнаружено, что все лекарственные комплексы проявляют высокую противоопухолевую активность и имеют более широкий интервал эффективной дозы. Исследуемое соединение(мг/кг)1) ингибирования, % Соединение по примеру 29 30 99 20 99 10 89 5 79 Соединение по примеру 43 100 94 80 92 40 82 20 75 Соединение по примеру 44 100 96 80 94 40 97 20 75 1) Рассчитывают по лекарственному соединению Пример 57. Фармакокинетика лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Опухоленесущих Meth А мышей (6 мышей в группе) получали по способу, подобному способу примера 11, мыши получали лекарственный комплекс примера 15 в виде единичного введения, как в примере 12 (10 мг/кг: рассчита 53 но по лекарственному соединению), и определяли изменение концентрации лекарственного комплекса в различных тканях. В результате обнаружено, что лекарственный комплекс примера 15 обладает предельно длительным удерживанием уровня в крови, высоким уровнем распределения в опухолевых тканях, и высокой опухолевой селективностью по отношению к печени и тонкому кишечнику. Результаты показаны на фиг. 20. Промышленное применение Взаимодействие между полисахаридным производным, имеющим карбоксильные группы и лекарственным соединением, связанным со спейсером или тому подобное, может проводиться с высокими выходами, и если этому взаимодействию подвергается лекарственное соединение, имеющее лактоновый цикл, побочные реакции могут быть уменьшены, и следовательно, способ по настоящему изобретению является совершенно применимым в качестве способа получения лекарственного комплекса. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахарида,имеющее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту, или спейсера, содержащего пептидно связанные 2-8 аминокислоты, характеризующийся тем, что соль органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, взаимодействует со спейсером,присоединенным к лекарственному соединению, в безводной системе. 2. Способ получения лекарственного комплекса, в котором производное полисахарида,имеющее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту, или спейсера, содержащего пептидно связанные 2-8 аминокислот, отличающийся тем,что способ включает стадии:(1) преобразования соли щелочного металла полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, в его соль органического амина и(2) взаимодействия соли органического амина со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, в безводной системе. 3. Способ по п.1 или 2, где полисахаридное производное, имеющее карбоксильные группы,представляет собой карбокси(C1-4)алкилдекстрановый полиспирт. 4. Способ по п.3, где декстрановый полиспирт, который входит в состав карбокси(C1-4) алкилдекстранового полиспирта, является декстрановым полиспиртом, полученным путем обработки декстрана в условиях, которые дают возможность проводить полиалкоголизацию, по существу, полностью. 5. Способ по п.3 или 4, где карбокси(C1-4) алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом. 6. Способ по любому из пп.1-5, где лекарственное соединение является антинеопластическим средством или противовоспалительным средством. 7. Способ по любому из пп.1-5, где лекарственное соединение является лекарственным соединением, которое может образовывать лактоновый цикл. 8. Способ по любому из пп.1-7, где для взаимодействия соли органического амина со спейсером, присоединенным к лекарственному соединению, используют спейсер, присоединенный к лекарственному соединению, имеющему образованный лактоновый цикл. 9. Способ по п.8, где лекарственное соединение, которое может образовывать лактоновый цикл, описанное в п.7, представляет собой[3',4':6,7]индолизино[1,2-b]хинолин-10,13(9 Н,15 Н)дион. 10. Применение соли органического амина и полисахаридного производного, имеющего карбоксильные группы, при получении лекарственного комплекса, в котором полисахаридное производное, содержащее карбоксильные группы, и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом с помощью спейсера, содержащего аминокислоту или пептидно связанные 2-8 аминокислоты.
МПК / Метки
МПК: A61K 47/48, A61P 35/00
Метки: получения, способ, комплекса, лекарственного
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-1897-sposob-polucheniya-lekarstvennogo-kompleksa.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ получения лекарственного комплекса</a>
Предыдущий патент: Редиспергируемая в воде порошковая композиция пленкообразующих полимеров, способ ее получения и псевдолатекс на ее основе
Следующий патент: Быстроразлагаемая внутрибуккально таблетка
Случайный патент: Композиции полимера мирцена