Вакцинные композиции, содержащие сапониновый адъювант

Согласно настоящему изобретению предложена доза для человека иммуногенной композиции,содержащей антиген или антигенный препарат в комбинации с адъювантом, содержащим иммунологически активную сапониновую фракцию, выделенную из коры Quillaja saponariamolina и представленную в форме липосомы, и липополисахарид, где указанная сапониновая фракция и указанный липополисахарид присутствуют в указанной дозе для человека на уровне ниже 30 мкг. Согласно настоящему изобретению также предложена адъювантная композиция в объеме, подходящем для дозы для человека, содержащая 1-30 мкг липополисахарида и 1-30 мкг иммунологически активной сапониновой фракции, представленной в форме липосомы. Область техники Изобретение относится к улучшенным вакцинным композициям, способам их изготовления и их применению в медицине. В частности, данное изобретение относится к адъювантным вакцинным композициям, где адъювант представляет собой липосомную композицию, содержащую сапонин и липополисахарид. Кроме того, настоящее изобретение относится к противогриппозным вакцинным композициям и режимам вакцинации с целью иммунизации против заболевания гриппом. Предшествующий уровень техники Потребность в новых композициях или вакцинах с повышенной иммуногенностью существует всегда. В качестве одной из стратегий использовали адъюванты с целью изучения и усиления иммунного ответа, вызванного любым данным антигеном. Липополисахариды (LPS) представляют собой основную поверхностную молекулу и располагаются исключительно во внешнем слое наружной мембраны грамотрицательных бактерий. LPS препятствуют деструкции бактерий под действием сывороточных комплементов и фагоцитарных клеток и вовлечены в адгезию при колонизации. LPS представляют собой группу родственных по структуре сложных молекул приблизительно размером 10000 дальтон (Да) и состоят из трех ковалентно связанных областей:(2) коровая олигосахаридная центральная область;(3) липид А - лежащая глубоко внутри область, которая служит в качестве гидрофобного якоря, она содержит глюкозаминовые дисахаридные единицы, несущие жирные кислоты с длинной цепью. Было показано, что биологические активности LPS, такие как летальная токсичность, пирогенность и адъювантность, связаны с группировкой липида А. И наоборот, иммуногенность ассоциируется с Оспецифическим полисахаридным компонентом (О-антиген). Давно известно, что как LPS, так и липид А обладают сильными адъювантными эффектами, но высокая токсичность этих молекул мешает их применению в вакцинных композициях. Поэтому было сделано значительное усилие по снижению токсичности LPS или липида А с одновременным сохранением их адъювантности. Мутант R595 Salmonella minnesota был выделен в 1966 г. из культуры родительского гладкого штамма (Luderitz et al. 1966 Ann. N. Y. Acad. Sci. 133: 349-374). Отобранные колонии повергали скринингу на чувствительность к лизису набором фагов и для следующего исследования отбирали только те колонии, которые демонстрировали узкий диапазон чувствительности (чувствительны только к одному или двум фагам). Эта работа привела к выделению сильно шероховатого мутантного штамма, который оказался дефектен в отношении биосинтеза LPS и был назван S. minnesota R595. По сравнению с другими LPS LPS, продуцируемые мутантом S. minnesota R595, имеют относительно простую структуру:(1) они не содержат О-специфическую область - свойство, отвечающее за изменение от гладкого фенотипа дикого типа к мутантному шероховатому фенотипу и приводящее к потере вирулентности;(2) коровая область является очень короткой - это свойство увеличивает чувствительность штамма к ряду химических реагентов;(3) группировка липида А значительно ацилирована, до 7 жирных кислот включительно. 4'-Монофосфорил-липид A (MPL), который может быть получен кислотным гидролизом LPS, эстрагированного из сильно шероховатого мутантного штамма грамотрицательных бактерий, сохраняет адъювантные свойства LPS, демонстрируя токсичность, сниженную более чем в 1000 раз (что измерено с использованием летальной дозы на куриных эмбрионах) (Johnson et al. 1987 Rev. Infect. Dis. 9 Suppl.:S512-S516). Обычно LPS кипятят с обратным холодильником в растворах минеральной кислоты средней силы (например, 0,1 М HCl) в течение периода времени приблизительно 30 мин. Этот способ приводит к дефосфорилированию по положению 1, декарбоксилированию по положению 6' и получению MPL. 3-О-Деацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL), который может быть получен мягким щелочным гидролизом MPL, обладает еще более сниженной токсичностью вновь с сохранением адъювантности, см. US 4912094 (Ribi Immunochemicals). Щелочной гидролиз обычно проводят в органическом растворителе, таком как смесь хлороформ/метанол, путем насыщения водным раствором слабого основания, такого как 0,5 М карбонат натрия, при рН 10,5. Дополнительная информация по получению 3D-MPL доступна, например, в US 4912094 иWO 02/078637 (Corixa Corporation). Сапонины Quillaja представляют собой смесь тритерпеновых гликозидов, экстрагированных из коры дерева Quillaja saponaha. Неочищенные сапонины интенсивно применяют в качестве адъювантов в ветеринарии. Quil-A представляет собой частично очищенный водный экстракт содержащего сапонинQuillaja материала. QS21 представляет собой очищенную с использованием HPLC нетоксичную фракциюQuil А, и способ его получения описан (как для QA21) в патенте США 5057540. В качестве примера были разработаны противогриппозные вакцины и вакцины против вируса папилломы человека (HPV) с адъювантами. Вирус гриппа является одним из наиболее распространенных в мире вирусов, поражающих как людей, так и домашний скот. Грипп приводит к экономическому бремени, заболеваемости и даже смертности, которые являются значительными.-1 018860 Вирус гриппа представляет собой заключенный в оболочку РНК-содержащий вирус с размером частицы приблизительно 125 нм в диаметре. По существу, он состоит из внутреннего нуклеокапсида или сердцевины из рибонуклеиновой кислоты (РНК), ассоциированной с нуклеопротеином, окруженного вирусной оболочкой с бислойной липидной структурой и внешними гликопротеинами. Внутренний слой вирусной оболочки состоит преимущественно из матриксных белков, а внешний слой - главным образом из липидного материала хозяина. Вирус гриппа содержит два поверхностных антигена - гликопротеины нейраминидазу (NA) и гемагглютинин (НА), которые находятся в виде шипов длиной 10-12 нм на поверхности частиц. Эти поверхностные белки, в частности гемагглютинин, определяют антигенную специфичность подтипов вируса гриппа. Эти поверхностные антигены постепенно, иногда быстро, подвергаются некоторым изменениям,приводящим к антигенному разнообразию вируса гриппа. Эти антигенные изменения, называемые"дрейф" и "шифт", являются непредсказуемыми и могут оказывать сильное воздействие с иммунологической точки зрения, поскольку они в конечном счете приводят к появлению новых штаммов вируса гриппа, что позволяет вирусу "ускользать" от иммунной системы и вызывать хорошо известные, почти ежегодные эпидемии. Штаммы вируса гриппа, которые каждый сезон подлежат включению в противогриппозную вакцину, определяются Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в содружестве с национальными службами здравоохранения и производителями вакцин. НА представляет собой наиболее важный антиген в определении серологической специфичности разных штаммов вируса гриппа. Этот белок 75-80 кДа содержит многочисленные антигенные детерминанты, некоторые из которых находятся в участках, последовательности которых различаются у разных штаммов (штамм-специфические детерминанты), а другие - в участках, являющихся общими для многих молекул НА (общие детерминанты). Вирусы гриппа являются причиной эпидемий почти каждую зиму с уровнями заболеваемости для вируса типа А или В до 40% в течение шестинедельного периода. Гриппозная инфекция вызывает различные болезненные состояния: от бессимптомной инфекции через слабую инфекцию верхних дыхательных путей до тяжелой вирусной пневмонии. Обычные эпидемии гриппа вызывают увеличение случаев пневмонии и заболевания нижних дыхательных путей, о чем свидетельствует увеличение частоты госпитализации или смертности. Тяжесть заболевания определяется главным образом возрастом реципиента, его иммунным статусом и местом инфекции. Пожилые люди 65 лет и старше особенно уязвимы, с ними связывают 80-90% всех случаев ассоциированной с гриппом смерти в развитых странах. Индивидуумы с хроническими заболеваниями также скорее всего будут испытывать такие осложнения. Маленькие дети также могут страдать тяжелым заболеванием. Поэтому эти группы особенно нуждаются в защите. Кроме этих групп "риска" службы здравоохранения также рекомендуют вакцинировать здоровых взрослых людей, которые находятся в контакте с пожилыми людьми. Вакцинация играет критическую роль в регулировании ежегодных эпидемий гриппа. Доступные в настоящее время противогриппозные вакцины представляют собой либо инактивированную, либо живую аттенуированную противогриппозную вакцину (flu-вакцину). В состав инактивированных flu-вакцин входят три возможные формы антигенного препарата: инактивированный цельный вирус, субвирионы,когда очищенные вирусные частицы разрушены детергентами или другими реагентами для солюбилизации липидной оболочки (так называемая "сплит"-вакцина), или очищенные НА и NA (субъединичная вакцина). Эти инактивированные вакцины вводят внутримышечно (в/м) или интраназально (и/н). Противогриппозные вакцины всех видов обычно представляют собой трехвалентные вакцины. Как правило, они содержат антигены двух штаммов вируса гриппа А и одного штамма вируса гриппа В. Стандартная 0,5-мл инъекционная доза в большинстве случаев содержит 15 мкг антигенного компонента гемагглютинина из каждого штамма, как измерено простой радиальной иммунодиффузией (SRD) (J.M.(1977) 237-247; J.M. Wood et al., International collaborative study of single radial diffusion and immunoelectrophoresis techniques for the assay of haemagglutinin antigen of influenza virus. J. Biol. Stand. 9 (1981) 317330). Доступные в настоящее время противогриппозные вакцины считаются безопасными для всех возрастных групп (De Donato et al. 1999, Vaccine, 17, 3094-3101). Однако имеется мало указаний на то, что существующие противогриппозные вакцины "работают" у маленьких детей в возрасте до двух лет. Кроме того, приведенные в работах коэффициенты эффективности вакцин в предупреждении типичного подтвержденного гриппозного заболевания составляют 23-72% для пожилых людей, что значительно ниже коэффициентов эффективности 60-90%, приведенных для более молодых взрослых людей (Govaert,1994, J. Am. Med. Assoc, 21, 166-1665; Gross, 1995, Ann. Intern. Med. 123, 523-527). Показано, что эффективность противогриппозной вакцины коррелирует с сывороточными титрами антител, ингибирующих гемагглютинацию (HI), к данному вирусному штамму, и в нескольких исследованиях обнаружено, что-2 018860 более пожилые люди демонстрируют более низкие HI-титры после иммунизации вирусом гриппа, чем более молодые взрослые (Murasko, 2002, Experimental gerontology, 37, 427-439). Следовательно, все еще существует потребность в новых вакцинах с повышенной иммуногенностью. Композиция вакцинного антигена с высокоэффективными адъювантами представляет собой возможный подход к усилению иммунных ответов на субвирионные антигены. Субъединичная противогриппозная вакцина с адъювантом MF59 в форме эмульсии типа масло-вводе имеется в продаже и продемонстрировала свою способность индуцировать более высокий титр антител, чем титр, полученный с использованием безадъювантной субъединичной вакцины (De Donato etal. 1999, Vaccine, 17, 3094-3101). Однако в более поздней публикации та же самая вакцина не продемонстрировала улучшенный профиль по сравнению с безадъювантной сплит-вакциной (Puig-Barbera et al.,2004, Vaccine, 23, 283-289). В порядке пояснения, во время межпандемических периодов циркулируют вирусы гриппа, которые родственны вирусам предшествующей эпидемии. Эти вирусы распространяются среди людей с разными уровнями иммунитета к инфекциям, полученного в предшествующий период жизни. Такая циркуляция в течение периода обычно 2-3 лет стимулирует отбор новых штаммов, которые изменились в достаточной степени для того, чтобы вновь вызвать эпидемию у населения в целом; этот процесс обозначается термином "антигенный дрейф". "Дрейфующие варианты" могут оказывать разные воздействия в разных сообществах, регионах, странах или континентах в течение какого-либо одного года, однако через несколько лет их суммарное воздействие часто будет аналогичным. Другими словами, пандемия гриппа имеет место тогда, когда появляется новый вирус гриппа, против которого у человеческой популяции нет иммунитета. Обычные эпидемии гриппа вызывают увеличение случаев пневмонии и заболевания нижних дыхательных путей, о чем свидетельствует увеличение коэффициентов госпитализации или смертности. Пожилые люди или люди с хроническими заболеваниями почти наверняка будут подвержены таким осложнениям, а маленькие дети также могут страдать тяжелым заболеванием. С непредсказуемыми интервалами возникают новые вирусы гриппа с подтипом ключевого поверхностного антигена, представляющего собой гемагглютинин, полностью отличающимся от подтипа в штаммах, циркулирующих в предыдущем сезоне. И здесь, полученные антигены могут отличаться на 2050% от соответствующего белка штаммов, которые ранее циркулировали среди людей. Это может приводить к ускользанию вируса от "иммунитета населения" и установлению пандемий. Это явление названо "антигенным шифтом". Полагают, что, по меньшей мере, в прошлом пандемии происходили тогда,когда вирус гриппа из разных видов, как, например, птичий вирус гриппа или вирус гриппа свиньи, пересекал видовой барьер. Если такие вирусы обладают способностью распространяться от субъекта к субъекту, то они могут распространиться по всему миру в пределах от нескольких месяцев до года, что приводит к пандемии. Например, в 1957 г. (пандемия азиатского гриппа (Asia Flu вирусы подтипа H2N2 вытеснили вирусы H1N1, которые циркулировали в человеческой популяции, по меньшей мере, с 1918 г.,когда впервые был выделен данный вирус. Н 2 НА и N2 NA подвергались антигенному дрейфу в промежутке между 1957 и 1968 гг. до тех пор, пока НА не был вытеснен в 1968 г. (пандемия гонгконгского гриппа (Hong-Kong Flu в результате появления подтипа вируса гриппа H3N2, после чего N2 NA продолжал дрейфовать вместе с Н 3 НА (Nakajima et al., 1991, Epidemiol. Infect. 106, 383-395). Свойствами штамма вируса гриппа, которые делают его способным вызывать вспышку пандемии,являются следующие: он содержит новый гемагглютинин по сравнению с гемагглютинином штаммов,циркулирующих в настоящий момент, что может сопровождаться или не сопровождаться изменением в подтипе нейраминидазы; он обладает способностью передаваться горизонтально в человеческой популяции; и он является патогенным для людей. Новый гемагглютинин может представлять собой гемагглютинин, который не проявлялся в человеческой популяции в течение продолжительного периода времени,возможно, в течение нескольких десятилетий, как, например, Н 2. Или же он может представлять собой гемагглютинин, не циркулировавший в человеческой популяции раньше, например, Н 5, Н 9, Н 7 или Н 6,которые обнаружены у птиц. В любом случае большинство, или по меньшей мере большая часть популяции, или даже вся популяция раньше не сталкивалась с данным антигеном и является иммунологически "наивной" по отношению к нему. Папилломавирусы представляют собой небольшие ДНК-содержащие онкогенные вирусы, обладающие высокой видовой специфичностью. К настоящему времени описано более 100 индивидуальных генотипов папилломавирусов человека (HPV). Как правило, HPV специфичны либо к поверхности кожи(например, HPV-1 и -2), либо к поверхностям слизистых оболочек (например, HPV-6 и -11), и обычно вызывают образование доброкачественных опухолей (бородавок), которые существуют в течение нескольких месяцев или лет. Такие доброкачественные опухоли могут причинять беспокойство индивидуумам, однако, за некоторыми исключениями, они не представляют угрозы для жизни. Некоторые HPV также ассоциированы с видами рака. Очень сильной положительной связью междуHPV и раком человека является связь, существующая между HPV-16 и HPV-18 и цервикальной карциномой. Цервикальный рак представляет собой самое распространенное злокачественное новообразование в развивающихся странах, и каждый год в мире регистрируется приблизительно 500000 новых случаев. В настоящее время технически возможно активно бороться с первичными инфекциями HPV-16 и даже с-3 018860 установленными видами HPV-16-содержащего рака, используя вакцины. Для обзора перспектив профилактической и терапевтической вакцинации против HPV-16 см. Cason J., Clin. Immunother., 1994, 1(4),293-306, и Hagenesee M.E., Infections in Medicine, 1997, 14(7), 555-556, 559-564. Несмотря на наличие небольших вариаций, все описанные геномы HPV имеют по меньшей мере восемь ранних генов, от Е 1 до Е 8, и два поздних гена L1 и L2. В дополнение к этому, расположенный"выше по течению" регуляторный участок содержит регуляторные последовательности, которые, повидимому, контролируют большинство транскрипционных событий генома HPV. Вакцины на основе L1 HPV раскрыты в WO 94/00152, WO 94/20137, WO 93/02184 и WO 94/05792. Такая вакцина может содержать антиген L1 в виде мономера, капсомера или вирусоподобной частицы(VLP). Способы получения VLP хорошо известны в данной области техники и включают подходы "разборки-сборки" VLP для достижения повышенной гомогенности, например, как описано в WO 9913056 иUS 6245568. Такие частицы дополнительно могут содержать белки L2. Вакцины на основе L2 описаны,например, в WO 93/00436. Другие подходы к созданию вакцин против HPV основаны на использовании ранних белков, таких как Е 7, или слитых белков, таких как L2-E7. Все еще имеется потребность в улучшенных вакцинах, особенно в случае гриппа и при конкретных пандемиях вируса гриппа и для пожилого населения или в случае HPV-вакцин. Адъюванты, содержащие комбинации липополисахарида и сапонинов Quillaja, были описаны ранее,например в ЕР 0671948. В этом патенте продемонстрирован сильный синергизм, когда липополисахарид(3D-MPL) был скомбинирован с сапонином Quillaja (QS21). В настоящее время обнаружено, что хорошие адъювантные свойства могут быть достигнуты при использовании комбинаций липополисахарида и сапонина Quillaja в качестве иммуностимуляторов в адъювантной композиции, даже если эти иммуностимуляторы присутствуют в низком количестве в дозе для человека. Краткое изложение сущности изобретения В первом аспекте настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая антиген или его антигенный препарат в комбинации с адъювантной композицией, содержащей иммунологически активную сапониновую фракцию, полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарид. Во втором аспекте настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая вирус гриппа или его антигенный препарат в комбинации с сапониновым адъювантом, представленным в форме липосомы. В конкретном воплощении этого аспекта иммуногенная композиция дополнительно содержит производное липида А, такое как 3D-MPL. Подходящим образом сапониновый адъювант в форме липосомы согласно изобретению содержит активную фракцию сапонина, полученного из коры Quillaja saponaria molina, такую как QS21, и стерин,такой как холестерин, в соотношении сапонин:стерин от 1:1 до 1:100 мас./мас. В частности, указанная иммуногенная композиция содержит антиген с CD4 Т-клеточным эпитопом. Альтернативно, указанная иммуногенная композиция содержит антиген с В-клеточным эпитопом. Изобретение также относится к применению вируса гриппа или его антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фракцию, полученную из коры Quillajasaponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида, в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызванных вирусом гриппа. Изобретение также относится к применению антигена или антигенов вируса папилломы человека или их антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фракцию, полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида, в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызванных вирусом папилломы человека. Изобретение также относится к применению цитомегаловирусного антигена или антигенов либо их антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фракцию,полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида,в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения цитомегаловирусной инфекции и/или заболевания. Изобретение также относится к применению антигена или антигенов Streptococcus pneumoniae либо их антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фракцию, полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида, в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызванных Streptococcus pneumoniae. Изобретение также относится к применению антигена или антигенов Plasmodium falciparum либо их антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фракцию,полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида,в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызванных Plasmodium falciparum. Изобретение также относится к применению антигена или антигенов вируса ветряной оспы либо его антигенного препарата и адъюванта, содержащего иммунологически активную сапониновую фрак-4 018860 цию, полученную из коры Quillaja saponaria molina, представленную в форме липосомы, и липополисахарида, в изготовлении иммуногенной композиции для предупреждения инфекции и/или заболевания, вызванных вирусом ветряной оспы. В другом аспекте предложено применение (а) антигена или его антигенного препарата и (б) адъюванта, как он определен выше, в изготовлении иммуногенной композиции для индуцирования у человека по меньшей мере одного, или по меньшей мере двух, или всех показателей из следующего: (1) усиленного CD4 Т-клеточного иммунного ответа против указанного антигена или его антигенного препарата, (2) усиленного гуморального иммунного ответа против указанного антигена или его антигенного препарата,(3) усиленного ответа В-клеток памяти против указанного антигена или его антигенного препарата. В частности, указанным антигеном является антиген или антигенный препарат вируса гриппа, HPV,цитомегаловируса (CMV), вируса ветряной оспы (VZV), Streptococcus pneumoniae или малярии, а указанным человеком является индивидум или популяция с ослабленным иммунитетом, такие как взрослый человек "из группы с высоким риском", пожилой человек или ребенок в возрасте менее двух лет. В конкретном воплощении предложено применение антигена или его антигенного препарата и адъюванта, который определен в данном описании, в изготовлении иммуногенной композиции для вакцинации человека, в частности пожилого человека, против патогена, из которого происходит антиген в данной иммуногенной композиции. Конкретно, указанным антигеном является антиген или антигены либо антигенный препарат вируса гриппа, вируса папилломы человека, цитомегаловируса, вируса ветряной оспы,Streptococcus pneumoniae, Plasmodium parasite. Кроме того, предложен способ вакцинации, включающий доставку антигена или антигенной композиции, в частности антигена или антигенного препарата вируса гриппа или HPV, цитомегаловируса, вируса ветряной оспы, Streptococcus pneumoniae, Plasmodium parasite, и адъюванта, который определен выше, индивидууму или популяции, нуждающимся в этом. В конкретном воплощении иммуногенная композиция способна индуцировать усиленный CD4 Тклеточный иммунный ответ против указанного антигена или его антигенного препарата и, в частности,также способна индуцировать либо гуморальный иммунный ответ, либо усиленный ответ В-клеток памяти или оба ответа по сравнению с ответом, полученным с безадъювантным(ой) антигеном или антигенной композицией. Конкретно, указанный CD4 Т-клеточный иммунный ответ включает индукцию перекрестно-реактивного CD4 Т-хелперного ответа. Конкретно, указанный гуморальный иммунный ответ включает индукцию перекрестно-реактивного гуморального иммунного ответа. В другом воплощении предложены способ или применение, как определено выше, для защиты против инфекции или заболевания, вызываемых патогеном, представляющим собой вариант патогена, из которого происходит антиген в иммуногенной композиции. В другом воплощении предложены способ или применение, как определено выше, для защиты против инфекций или заболевания, вызываемых патогеном, содержащим антиген, являющийся вариантом того антигена в иммуногенной композиции. В конкретном воплощении предложено применение антигена, в частности, вируса гриппа или HPV, или его антигенного препарата, в изготовлении иммуногенной композиции для ревакцинации людей, ранее вакцинированных иммуногенной композицией, содержащей антиген, в частности, вирус гриппа или HPV,или его антигенный препарат, в комбинации с адъювантом, который приведен в данном описании. В конкретном воплощении композиция, используемая для ревакцинации, может дополнительно содержать адъювант. В другом конкретном воплощении иммуногенная композиция для ревакцинации содержит антиген, который имеет общие CD4 Т-клеточные эпитопы с антигеном или антигенной композицией,используемыми для предшествующей вакцинации. Конкретно, иммуногенная композиция для ревакцинации содержит вирус гриппа или его антигенный препарат, который имеет общие CD4 Т-клеточные эпитопы с вирусом гриппа или антигенным препаратом этого вируса, используемыми для первой вакцинации. В одном из аспектов проводят ревакцинацию субъектов, которые были вакцинированы против вируса гриппа предыдущего сезона. Обычно ревакцинацию осуществляют по меньшей мере через 6 месяцев после первой вакцинации, предпочтительно через 8-14 месяцев, более предпочтительно приблизительно через 10-12 месяцев. В другом аспекте проводят ревакцинацию субъектов, которые были вакцинированы композицией, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат, где по меньшей мере один штамм ассоциирован со вспышкой пандемии или может быть связан с пандемией. В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение вируса гриппа или его антигенного препарата из первого штамма вируса гриппа в изготовлении иммуногенной композиции, которая определена в данном описании, для защиты против инфекции вирусом гриппа, вызванной вариантным штаммом вируса гриппа. Изобретение также относится к способу вакцинации, включающему доставку вируса гриппа или его антигенного препарата и адъюванта, как определено в данном описании. В другом аспекте предложен способ вакцинации отдельного человека или человеческой популяции с ослабленным иммунитетом, таких как взрослые люди из "группы с высоким риском" или пожилые люди, включающий введение противогриппозной иммуногенной композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат в комбинации с адъювантом, как определено в данном описании.-5 018860 В еще одном воплощении изобретения предложен способ ревакцинации людей, ранее вакцинированных противогриппозной иммуногенной композицией, содержащей антиген вируса гриппа или его антигенный препарат по меньшей мере из одного из штаммов вируса гриппа в комбинации с адъювантом, как определено в данном описании, включающий введение указанному человеку иммуногенной композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат, как с адъювантом, так и без адъюванта. Изобретение также относится к способу изготовления иммуногенной композиции, включающему комбинирование сапонинового адъюванта в форме липосомы с вирусом гриппа или его антигенным препаратом и возможно с 3D-MPL. Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения описаны далее в следующем подробном описании его предпочтительных воплощений. Описание графических материалов Фиг. 1 - схематическое представление получения препарата MPL. Фиг. 2 - гуморальный ответ против различных штаммов вируса гриппа после иммунизации хорьков исследуемыми композициями: тест на ингибирование гемагглютинации (СМТ (средние геометрические титры)ДИ 95) до и после гетерологичного примирования (H1N1 A/Stockholm/24/90), после иммунизации (H1N1 A/New Caledonia/20/99, H3N2 A/Panama/2007/99 и B/Shangdong/7/97) и после гетерологичного контрольного заражения (H3N2 A/Wyoming/3/2003). Фиг. 3 - исследование на хорьках: титрование вирусов в назальных смывах после контрольного заражения (42-е сутки). Фиг. 4 - исследование на мышах: гуморальный ответ против трех вакцинных штаммов вируса гриппа после иммунизации мышей исследуемыми композициями: тест на ингибирование гемагглютинации(GMTДИ 95) через 21 сутки после иммунизации (H1N1 A/New Caledonia/20/99, H3N2A/Wyoming/3/2003 и B/Jiangsu/10/2003). Фиг. 5 - исследование на мышах: клеточно-опосредованный иммунный ответ: Flu-специфичные ответы CD4+ Т-клеток на 7-е сутки после иммунизации. Фиг. 6 - исследование на мышах: CMI для CD4 ответа согласно тесту "все по два" на пул антигенов на 0-е и 21-е сутки. Фиг. 7 - GMT на 0-е и 21-е сутки для HI-антител. Фиг. 8 - частота встречаемости местных и общих симптомов у людей (общих и с оценкой 3), наблюдаемая в течение 7-дневного периода контрольного наблюдения после иммунизации адъювантными противогриппозными композициями; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 9 - гуморальные ответы на L1 HPV 16 и 18 у мышей после иммунизации адъювантными HPVкомпозициями; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 10 - клеточно-опосредованный иммунный ответ у мышей: окрашивание внутриклеточных цитокинов - CD4+ Т-клетки VLP16 и 18 после иммунизации адъювантными HPV-композициями; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 11 - продуцирование специфических В-клеток памяти после иммунизации адъювантнымиHPV-композициями; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 12 - доклинические результаты сравнения адъювантных вакцин на основе S. pneumoniae на мышах; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 13 - анти-gB ELISA-титры после иммунизации морских свинок адъювантной вакциной на основе gB; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 14 - титры анти-CMV-нейтрализующих антител после иммунизации морских свинок адъювантной вакциной на основе gB; сравнение адъювантов, имеющих две разные концентрации иммуностимуляторов. Фиг. 15 - анти-gB ELISA-титры после иммунизации мышей адъювантной вакциной на основе gB. Фиг. 16 - титры анти-CMV-нейтрализующих антител после иммунизации мышей адъювантной вакциной на основе gB. Фиг. 17 - исследование на мышах: клеточно-опосредованный иммунитет - CMV-специфическиеCD4+ и CD8+ клетки после повторной стимуляции пулом gB пептидов (через 7 суток после второй иммунизации). Фиг. 18 - исследование на мышах: клеточно-опосредованный иммунитет - CMV-специфическиеCD4+ клетки после повторной стимуляции двумя разными дозировками пула gB пептидов (через 21 сутки после второй иммунизации). Фиг. 19 - исследование на мышах: клеточно-опосредованный иммунитет - CMV-специфическиеCD8+ клетки после повторной стимуляции двумя разными дозировками пула gB пептидов (через 21 сутки после второй иммунизации). Фиг. 20 - средние геометрические титры (GMT) антител к циркумспорозоитному белку (CSP) после иммунизации мышей адъювантной вакциной на основе RTS,S; сравнение адъювантов, имеющих иммуностимуляторы в двух разных концентрациях.-6 018860 Фиг. 21 - средние геометрические титры (СМТ)антител против поверхностного антигена вируса гепатита В (HBs) после иммунизации мышей адъювантной вакциной на основе RTS,S; сравнение адъювантов с иммуностимуляторами в двух разных концентрациях. Фиг. 22 - экспрессия ex vivo IL-2 (интерлейкин-2) и/или IFM(интерферон)-гамма CSPспецифическими CD4 и CD8 Т-клетками после иммунизации адъювантной иммуногенной композицией на основе RTS,S; сравнение адъювантов с иммуностимуляторами в двух разных концентрациях. Фиг. 23 - экспрессия ex vivo IL-2 и/или IFN-гамма HBs-специфическими CD4 и CD8 Т-клетками после иммунизации адъювантной иммуногенной композицией на основе RTS,S; сравнение адъювантов с иммуностимуляторами в двух разных концентрациях. Фиг. 24 - гуморальные ответы у мышей после иммунизации адъювантной трехвалентной противогриппозной сплит-вакциной (A/New Caledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu); иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Фиг. 25 - клеточно-опосредованный иммунный ответ у мышей после иммунизации адъювантной трехвалентной противогриппозной вакциной (A/New Caledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu); иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Фиг. 26 - доклинические результаты сравнения на мышах вакцин на основе gE VZV с адъювантомAS01B или AS01 Е. Фиг. 27 - титры вирусов в назальных смывах у хорьков после примирования и контрольного заражения антигенами вируса гриппа - иммунизация либо простой, либо адъювантной композициями A/NewCaledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu, содержащими иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Фиг. 28 - мониторинг температуры тела у хорьков после примирования и контрольного заражения антигенами вируса гриппа. Иммунизация либо простой, либо адъювантной композициями A/New Caledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu, содержащими иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Фиг. 29 - анти-HI-титры для штаммов А в трехвалентной вакцинной композиции после иммунизации и контрольного заражения антигенными препаратами вируса гриппа. Иммунизация либо простой,либо адъювантной композициями A/New Caledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu, содержащими иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Фиг. 30 - анти-HI-титры для B/Jiangsu и дрейфующего штамма, используемого для контрольного заражения, после иммунизации и контрольного заражения антигенными препаратами вируса гриппа. Иммунизация либо простой, либо адъювантной композициями A/New Caledonia, A/Wyoming, B/Jiangsu,содержащими иммуностимуляторы в двух разных концентрациях. Подробное описание Авторы настоящего изобретения открыли, что адъювантная композиция, содержащая сапонин,представленный в форме липосомы, и липополисахарид, в которой каждый иммуностимулятор представлен на уровне, равном или ниже 30 мкг на дозу для человека, может усилить иммунные ответы на антигенный препарат, в то же самое время имея более низкую реактогенность, чем некоторые композиции предшествующего уровня техники, в которых иммуностимуляторы были представлены в более высоких уровнях на дозу для человека. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что противогриппозная композиция, содержащая вирус гриппа или его антигенный препарат вместе с адъювантом, содержащим сапонин, представленный в форме липосомы, и возможно дополнительно с производным липида А, таким как 3D-MPL,способна усиливать CD4 Т-клеточный иммунный ответ против указанного антигена или антигенной композиции по сравнению с таковым, полученным с использованием безадъювантного вируса или его антигенного препарата. Композиции с сапонином в качестве адъюванта, представленным в форме липосомы, предпочтительно используют для индукции CD4 Т-клеточных ответов против вируса гриппа, способных определять эпитопы вируса гриппа, представленные молекулами класса II МНС (главный комплекс гистосовместимости). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что в качестве мишени эффективно воздействовать на клеточно-опосредованную иммунную систему для того, чтобы усилить иммунный ответ против гомологичных и дрейфующих штаммов вируса гриппа (после вакцинации и инфекции). Конкретным воплощением настоящего изобретения является то, что композиции для применения в настоящем изобретении могут быть способны обеспечить у людей улучшенную серопротекцию против гриппа после ревакцинации, как оценено по числу субъектов-людей, удовлетворяющих коррелятам защиты для гриппа. Кроме того, другим конкретным воплощением является то, что композиция для применения в настоящем изобретении также будет способна индуцировать более высокий ответ В-клеток памяти после первой вакцинации субъекта-человека, и более высокий гуморальный ответ после ревакцинации по сравнению с безадъювантной композицией. Адъювантные противогриппозные композиции согласно изобретению имеют несколько преимуществ: 1) повышенную иммуногенность: они позволят восстановить слабый иммунный ответ у пожилых людей (в возрасте старше 50 лет, обычно в возрасте старше 65 лет) до уровней, наблюдаемых у молодых людей (антительные и/или Т-клеточные ответы);-7 018860 2) улучшенный профиль перекрестного иммунитета: увеличенный перекрестный иммунитет против вариантных (дрейфующих) штаммов вируса гриппа; 3) они также позволят уменьшить дозировку антигена для получения аналогичного ответа, тем самым гарантируя увеличенный потенциал в чрезвычайных обстоятельствах (пандемии, например). В другом аспекте изобретения авторы изобретения открыли, что адъювантная композиция, которая определена в данном описании, демонстрирует результаты по иммуногенности как в отношении продуцирования антител, так и в отношении частоты встречаемости после вакцинации специфичных к вирусу гриппа CD4, которые эквивалентны или иногда превышают результаты, полученные с применением безадъювантной вакцины. Этот эффект особенно ценен для пожилого населения и может быть достигнут при применении адъюванта, который определен в данном описании, содержащего пониженную дозу иммуностимуляторов. В дополнение к этому, показано, что симптомы реактогенности показали тенденцию к увеличению в группе получавших вакцину, дополненную адъювантом с самой высокой концентрацией иммуностимуляторов, по сравнению с группой получавших адъювантную вакцину, в которой иммуностимуляторы представлены в более низкой концентрации. Эти полученные данные могут быть применены к другим формам тех же антигенов и к другим антигенам. Сапониновый адъювант Адъювантная композиция по изобретению содержит сапониновый адъювант, представленный в форме липосомы. Особенно подходящим сапонином для применения в настоящем изобретении является Quil А и его производные. Quil А представляет собой препарат сапонина, выделенный из южно-американского дереваQuillaja saponaria molina, и впервые был описан Dalsgaard и др. в 1974 г. ("Saponin adjuvants", Archiv. furdie gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p. 243-254) как обладающий адъювантной активностью. Очищенные фрагменты Quil А были выделены с помощью HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография), что сохраняет адъювантную активность без токсичности, связанной с Quil А(ЕР 0362278), например QS7 и QS21 (также известные как QA7 и QA21). QS-21 является природным сапонином из коры Quillaja saponaria molina, который индуцирует CD8+ цитотоксические Т-клетки (CTL),Th1-клетки и преобладающий IgG2a антительный ответ, и является предпочтительным сапонином в контексте настоящего изобретения. В подходящем воплощении настоящего изобретения сапониновый адъювант в иммуногенной композиции представляет собой производное quil A saponaria molina, предпочтительно иммунологически активную фракцию Quil A, такую как QS-17 или QS-21, наиболее подходит QS-21. В одном из воплощений композиции по изобретению содержат иммунологически активную сапониновую фракцию, по существу, в чистой форме. Предпочтительно композиции по изобретению содержат QS21, по существу, в чистой форме, иначе говоря, чистота QS21 составляет по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 98%. В конкретном воплощении QS21 предложен в своей менее реактогенной композиции, где он блокирован экзогенным стерином, таким как, например, холестерин. Существует несколько конкретных форм менее реактогенных композиций, где QS21 блокирован экзогенным холестерином. В конкретном воплощении сапонин/стерин находится в форме липосомной структуры (WO 96/33739, пример 1). В этом воплощении липосомы соответственно содержат нейтральный липид, например фосфатидилхолин, который соответственно не является кристаллическим при комнатной температуре, например фосфатидилхолин яичного желтка, диолеоилфосфатидилхолин (DOPC) или дилаурил-фосфатидилхолин. Липосомы также могут содержать заряженный липид, который увеличивает стабильность структуры липосомаQS21 для липосом, составленных из насыщенных липидов. В этих случаях количество заряженного липида составляет соответственно 1-20% мас./мас., предпочтительно 5-10%. Соотношение стерина и фосфолипида составляет 1-50% (моль/моль), наиболее подходит 20-25%. Подходящие стерины включают -ситостерин, стигмастерин, эргостерин, эргокальциферол и холестерин. В одном конкретном воплощении адъювантная композиция в качестве стерина содержит холестерин. Такие стерины хорошо известны в данной области, например, холестерин описан в Merck Index,11-e издание, с. 341, как стерин природного происхождения, обнаруженный в животном жире. Адъювантные композиции по изобретению, содержащие QS21 и стерин, в частности холестерин,демонстрируют пониженную реактогенность при сравнении с композициями, в которых стерин отсутствует, при сохранении адъювантного эффекта. Исследования реактогенности могут быть проведены согласно способам, описанным в WO 96/33739. Используемый согласно изобретению стерин означает экзогенный стерин, т.е. стерин, который не является эндогенным для организма, из которого готовят антигенный препарат, а его добавляют к антигенному препарату или позже в момент изготовления композиции. Обычно стерин может быть добавлен в процессе последующего изготовления композиции антигенного препарата с сапониновым адъювантом, путем использования, например, сапонина в форме, блокированной стерином. Соответственно, экзогенный стерин приводят в ассоциацию с сапониновым адъювантом, как описано в WO 96/33739. Когда активной сапониновой фракцией является QS21, соотношение QS21:стерин обычно будет со-8 018860 ставлять порядка 1:100-1:1 (мас./мас.), соответственно 1:10-1:1 (мас./мас.) и предпочтительно 1:5-1:1(мас./мас.). Соответственно имеется избыток стерина, при этом соотношение ОБ 21:стерин составляет по меньшей мере 1:2 (мас./мас.). В одном из воплощений соотношение QS21:стерин равно 1:5 (мас./мас.). Удобно, когда стерином является холестерин. Другие полезные сапонины выделены из растений Aesculus hippocastanum или Gyophilla struthium. Другие сапонины, описанные в литературе, включают эсцин (escin), который был описан в Merck index(12-e изд.: входной номер 3737) в виде смеси сапонинов, представленных в семенах дерева конского каштана обыкновенного, латинское название: Aesculus hippocastanum. Описано его выделение с использованием хроматографии и очистки (Fiedler, Arzneimittel-Forsch. 4, 213 (1953 и с использованием ионообменных смол (Erbring и др., US 3238190). Фракции эсцина были очищены и показана их биологическая активность (Yoshikawa M., et al. (Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 1996, Aug; 44(8): 1454-1464. Сапоалбин(sapoalbin) из Gypsophilla struthium (R. Vochten et al., 1968, J. Pharm. Belg., 42, 213-226) также был описан,например, в связи с образованием ISCOM (иммуностимулирующий комплекс). Ключевым аспектом настоящего изобретения является то, что иммунологически активный сапонин,предпочтительно представляющий собой QS21, может быть использован в более низких количествах,чем полагали ранее для оказания полезного действия, целесообразно ниже 30 мкг, например от 1 до 30 мкг, на дозу иммуногенной композиции для человека. Следовательно, согласно изобретению предложена доза иммуногенной композиции для человека,содержащей иммунологически активный сапонин, предпочтительно QS21, на уровне 30 мкг или меньше,например, от 1 до 30 мкг. В одном из воплощений иммуногенная композиция представлена в объеме, подходящем для дозы для человека, при этом доза иммуногенной композиции для человека содержит QS21 на уровне приблизительно 25 мкг, например 20-30 мкг, соответственно 21-29 мкг, или 22-28 мкг, или 23-27 мкг, или 24-26 мкг, или 25 мкг. В другом воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержитQS21 на уровне приблизительно 10 мкг, например 5-15 мкг, соответственно 6-14 мкг, например 7-13 мкг,или 8-12 мкг, или 9-11 мкг, или 10 мкг. В другом воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит QS21 на уровне приблизительно 5 мкг, например 1-9 мкг, или 2-8 мкг или соответственно, 3-7 мкг, или 4-6 мкг, или 5 мкг. Подходящее количество QS21 составляет, например, любое количество из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 мкг (мас./об.) на дозу иммуногенной композиции для человека. Под термином "доза для человека" (или "человеческая доза") понимают дозу, которая представлена в объеме, подходящем для применения человеку. Обычно он составляет от 0,3 до 1,5 мл. В одном из воплощений доза для человека равна 0,5 мл. В другом воплощении доза для человека составляет выше 0,5 мл, например 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 или 1 мл. В другом воплощении доза для человека составляет от 1 мл до 1,5 мл. Изобретение характеризуется тем, что каждая доза для человека содержит 30 мкг или меньше,например 1-30 мкг, QS21. Согласно изобретению также предложена адъювантная композиция, содержащая 30 мкг или меньше, например 1-30 мкг, QS21. Обычно такая адъювантная композиция будет представлена в объеме, подходящем для дозы для человека. Когда для комбинирования с жидкой формой антигенной композиции адъювант находится в жидкой форме, композиция адъювантов будет содержаться в объеме, подходящем для дозы для человека, составляющем приблизительно половину от предполагаемого конечного объема дозы для человека, например, объем 360 мкл для предполагаемой дозы для человека 0,7 мл или объем 250 мкл для предполагаемой дозы для человека 0,5 мл. Композиция адъювантов разбавляется при комбинировании с антигенной композицией с получением конечной дозы вакцины для человека. Конечный объем такой дозы несомненно будет варьировать в зависимости от первоначального объема композиции адъювантов и объема антигенной композиции, добавленной к композиции адъювантов. В альтернативном воплощении жидкий адъювант используется для повторного растворения лиофилизованной антигенной композиции. В этом воплощении объем композиции адъювантов, подходящий для дозы для человека, приблизительно равен конечному объему дозы для человека. Жидкую композицию адъювантов добавляют во флакон, содержащий лиофилизованную антигенную композицию. Конечная доза для человека может варьировать от 0,5 до 1,5 мл. В конкретном воплощении доза для человека равна 0,5 мл, в этом воплощении вакцинная композиция по изобретению будет содержать QS21 на уровне, равном или ниже 30 мкг, например 1-30 мкг, в дозе для человека 0,5 мл, кроме того в этом воплощении композиция адъювантов по изобретению будет содержать QS21 на уровне, равном или ниже 30 мкг, например 1-30 мкг, на 250 мкл композиции адъювантов или на 500 мкл композиции адъювантов в зависимости от того, предназначена ли композиция адъювантов для комбинирования с жидкой или лиофилизованной антигенной композицией соответственно. Конкретно, при комбинировании с антигеном вируса гриппа, QS21 может быть использован, например, в количестве 1-100 мкг (мас./об.) на дозу композиции, предпочтительно в количестве 10-50 мкг(мас./об.) на дозу композиции. Подходящее количество QS21 равно, например, любому количеству из 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34,-9 018860 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50 мкг (мас./об.) на дозу композиции. Более предпочтительно количество QS21 варьирует от 25 до 75 мкг (мас./об.) на дозу композиции. Обычно доза композиции будет изменяться в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 1 мл. Типичная вакцинная доза составляет 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 или 1 мл. В предпочтительном воплощении конечная концентрация 50 мкг QS21 содержится в 1 мл вакцинной композиции или 25 мкг на 0,5 мл вакцинной дозы. В других предпочтительных воплощениях конечная концентрация 35,7 мкг или 71,4 мкг QS21 содержится в 1 мл вакцинной композиции. Конкретно, объем вакцинной дозы 0,5 мл содержит 25 мкг или 50 мкг QS21 на дозу. Доза QS21 соответственно способна усиливать иммунный ответ на антиген у человека. В частности,подходящим количеством QS21 является такое, которое улучшает иммунологический потенциал композиции по сравнению с безадъювантной композицией или по сравнению с композицией, дополненной другим количеством адъюванта QS21, оставаясь при этом приемлемым с точки зрения профиля реактогенности. Адъювант 3D-MPL Кроме того, композиция содержит дополнительный адъювант, представляющий собой липополисахарид, подходящим образом нетоксичное производное липида А, в частности монофосфориллипид А или более конкретно, 3-деацилированный монофосфориллипид A (3D-MPL). 3D-MPL продается под наименованием MPL фирмой GlaxoSmithKline Biologicals N.A. и во всем документе обозначается как MPL или 3D-MPL. См., например, патенты США 4436727, 4877611, 4866034 и 4912094. 3D-MPL стимулирует главным образом CD4+ Т-клеточные ответы с фенотипом IFN- (Th1). 3D-MPL может быть получен согласно способам, раскрытым в GB 2220211 А. С химической точки зрения это смесь 3-деацилированного монофосфориллипида А с 3, 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Предпочтительно в композициях по настоящему изобретению используют небольшие частицы 3D-MPL. Небольшие частицы 3D-MPL имеют такой размер частиц, что их можно подвергать стерилизации фильтрованием через фильтр 0,22 мкм. Такие способы получения описаны в WO 94/21292. Ключевым аспектом настоящего изобретения является то, что липополисахарид, предпочтительно представляющий собой 3D-MPL, может быть использован в более низких количествах, чем полагали ранее для оказания полезного действия, соответственно, на уровне 30 мкг или меньше, например 1-30 мкг, на дозу иммуногенной композиции для человека. Соответственно, согласно изобретению предложена доза иммуногенной композиции для человека,содержащая липополисахарид, предпочтительно 3D-MPL, на уровне 30 мкг или меньше, например 1-30 мкг. В одном из воплощений доза иммуногенной композиции для человека содержит 3D-MPL на уровне приблизительно 25 мкг, например 20-30 мкг, соответственно 21-29 мкг, или 22-28 мкг, или 23-27 мкг, или 24-26 мкг, или 25 мкг. В другом воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит 3D-MPL на уровне приблизительно 10 мкг, например 5-15 мкг, соответственно 6-14 мкг, например, 7-13 мкг, или 8-12 мкг,или 9-11 мкг, или 10 мкг. В другом воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит 3D-MPL на уровне приблизительно 5 мкг, например 1-9 мкг, или 2-8 мкг или, соответственно, 3-7 мкг, или 4-6 мкг, или 5 мкг. Подходящее количество 3D-MPL равно, например, любому количеству из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 мкг (мас./об.) на дозу иммуногенной композиции для человека. В одном из воплощений объем дозы для человека равен 0,5 мл. В другом воплощении иммуногенная композиция представлена в объеме, подходящем для дозы для человека, который превышает 0,5 мл,например 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1 мл. В другом воплощении доза для человека составляет от 1 до 1,5 мл. Изобретение характеризуется тем, что каждая доза для человека содержит 30 мкг или меньше, например 1-30 мкг, 3D-MPL. Согласно изобретению также предложена композиция адъювантов, содержащая 30 мкг или меньше,например 1-30 мкг, 3D-MPL. Обычно такая композиция адъювантов будет содержаться в объеме, подходящем для дозы для человека. Когда для комбинирования с жидкой формой антигенной композиции адъювант находится в жидкой форме, композиция адъювантов будет содержаться в объеме, подходящем для дозы для человека, составляющем приблизительно половину от предполагаемого конечного объема дозы для человека, например, объем 360 мкл для предполагаемой дозы для человека 0,7 мл, или объем 250 мкл для предполагаемой дозы для человека 0,5 мл. Композиция адъювантов разбавляется при комбинировании с антигенной композицией с получением конечнойдозы иммуногенной композиции для человека. Конечный объем такой дозы несомненно будет варьировать в зависимости от первоначального объема композиции адъювантов и объема антигенной композиции, добавленной к композиции адъювантов. В альтернативном воплощении жидкая композиция адъювантов используется для растворения лиофилизованной антигенной композиции. В этом воплощении объем композиции адъювантов, подходящий для дозы для человека, приблизительно равен конечному объему дозы для человека. Жидкую компози- 10018860 цию адъювантов добавляют во флакон, содержащий лиофилизованную антигенную композицию. Конечная доза для человека может варьировать от 0,5 до 1,5 мл. В конкретном воплощении доза для человека составляет 0,5 мл, в этом воплощении вакцинная композиция по изобретению будет содержать уровень 3D-MPL, равный или ниже 30 мкг, например 1-30 мкг, на 0,5 мл дозы для человека, кроме того, в этом воплощении композиция адъювантов по изобретению будет содержать уровень 3D-MPL, равный или ниже 30 мкг, например 1-30 мкг, на 250 мкл композиции адъювантов, или на 500 мкл композиции адъювантов, в зависимости от того, предназначена ли композиция адъювантов для комбинирования с жидкой или лиофилизованной антигенной композицией соответственно. Когда иммуногенная композиция содержит вирус гриппа или его антигенный препарат, композиция адъювантов, содержащая сапонин в форме липосомы, возможно дополнительно содержит производное липида А, в частности, монофосфориллипид А или, более конкретно, 3D-MPL. В этом воплощении 3DMPL может быть использован, например, в количестве 1-100 мкг (мас./об.) на дозу композиции, предпочтительно в количестве 10-50 мкг (мас./об.) на дозу композиции. Подходящее количество 3D-MPL равно, например, любому количеству из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50 мкг (мас./об.) на дозу композиции. Более предпочтительно количество 3D-MPL варьирует от 25 до 75 мкг (мас./об.) на дозу композиции. Обычно доза композиции будет изменяться в диапазоне от приблизительно 0,5 мл до приблизительно 1 мл. Типичная вакцинная доза составляет 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 или 1 мл. В одном из воплощений конечная концентрация 50 мкг 3D-MPL содержится в 1 мл вакцинной композиции, или 25 мкг в 0,5 мл вакцинной дозы. В другом воплощении конечная концентрация 35,7 мкг или 71,4 мкг 3D-MPL содержится в 1 мл вакцинной композиции. Конкретно, объем вакцинной дозы 0,5 мл содержит 25 мкг или 50 мкг 3D-MPL на дозу. Доза 3D-MPL приемлемым образом способна усиливать иммунный ответ на антиген у человека. В частности, подходящим количеством 3D-MPL является такое, которое улучшает иммунологический потенциал композиции по сравнению с безадъювантной композицией или по сравнению с композицией,дополненной другим количеством адъюванта MPL, оставаясь при этом приемлемым с точки зрения профиля реактогенности. Подходящими композициями по изобретению являются такие, где липосомы первоначально получают без MPL (как описано в WO 96/33739) и затем добавляют MPL, приемлемо в виде небольших частиц с размером менее 100 нм или в виде частиц, которые допускают их стерилизацию фильтрованием через мембрану 0,22 мкм. Поэтому MPL не содержится внутри мембраны везикул (известен как "наружный MPL" ("MPL out". Композиции, в которых MPL содержится внутри мембраны везикул (известный как "внутренний MPL" ("MPL in", также образуют аспект изобретения. Антиген может содержаться внутри мембраны везикул или содержаться снаружи мембраны везикул. Соответственно, растворимые антигены находятся снаружи, а гидрофобные или липидизированные антигены содержатся либо внутри,либо снаружи мембраны. В одном из воплощений композиция адъювантов по изобретению содержит как липополисахарид,так и иммунологически активный сапонин. В конкретном воплощении изобретения липополисахаридом является 3D-MPL, а иммунологически активным сапонином является QS21. В другом воплощении изобретения композиция адъювантов состоит по существу из липополисахарида и иммунологически активного сапонина в липосомной композиции. Соответственно, в одной форме этого воплощения композиция адъювантов состоит по существу из 3D-MPL и QS21, возможно со стерином, которым предпочтительно является холестерин. В другом воплощении изобретения композиция адъювантов содержит в липосомной композиции липополисахарид и иммунологически активный сапонин в комбинации с одним или более чем одним другим иммуностимулятором или адъювантом. Соответственно, в одной форме этого воплощения липополисахаридом является 3D-MPL, а иммунологически активным сапонином является QS21. В конкретном воплощении QS21 и 3D-MPL находятся в одной и той же конечной концентрации на дозу иммуногенной композиции для человека. В одном аспекте этого воплощения доза иммуногенной композиции для человека содержит конечный уровень 25 мкг 3D-MPL и 25 мкг QS21. В другом воплощении доза иммуногенной композиции для человека содержит конечный уровень по 10 мкг каждого изMPL и QS21. В другом конкретном воплощении предложена композиция адъювантов, имеющая объем 250 мкл и содержащая уровень 25 мкг 3D-MPL и 25 мкг QS21 или по 10 мкг каждого из MPL и QS21. Антигены, которые могут быть использованы с композициями адъювантов по настоящему изобретению, включают вирусные, паразитические, бактериальные или опухолеассоциированные антигены,например, вирус гриппа или его антигенный препарат для применения согласно настоящему изобретению, который может представлять собой расщепленный вирус гриппа или антигенный препарат этого расщепленного вируса. В альтернативном воплощении препарат вируса гриппа может содержать другой тип антигена инактивированного вируса гриппа, такого как инактивированный цельный вирус, или очищенные НА и NA (субъединичная вакцина), или виросому вируса гриппа. В еще одном воплощении вирус гриппа может представлять собой препарат живого аттенуированного вируса гриппа. Расщепленный вирус гриппа или антигенный препарат этого расщепленного вируса для примене- 11018860 ния согласно настоящему изобретению представляет собой приемлемым образом инактивированный вирусный препарат, в котором вирусные частицы разрушены детергентами или другими реагентами для солюбилизации липидной оболочки. Расщепленный вирус или антигенные препараты такого расщепленного вируса соответственно приготавливают путем фрагментации цельного вируса гриппа, либо инфекционного, либо инактивированного, с использованием солюбилизирующих концентраций органических растворителей или детергентов и последующего удаления всего или основного количества солюбилизирующего агента и некоторого количества или большей части вирусного липидного материала. Под антигенным препаратом такого расщепленного вируса понимают препарат расщепленного вируса, который возможно подвергался некоторой очистке по сравнению с расщепленным вирусом, при этом сохранив большинство антигенных свойств компонентов расщепленного вируса. Например, при получении на куриных эмбрионах расщепленный вирус может быть очищен от загрязняющих яичных белков, или при получении в клеточной культуре расщепленный вирус может быть очищен от примесей клеток хозяина. Антигенный препарат расщепленного вируса может содержать антигенные компоненты более чем одного вирусного штамма. Вакцины, содержащие расщепленный вирус (так называемые "противогриппозные сплит-вакцины") или антигенные препараты расщепленного вируса, обычно содержат остаточные матриксные белки и нуклеопротеины, и иногда липиды, а также мембранные оболочечные белки. Такие противовирусные сплит-вакцины обычно будут содержать большинство или все вирусные структурные белки, хотя нет необходимости в тех же пропорциях, в которых они присутствуют в цельном вирусе. Альтернативно, вирус гриппа может быть в форме цельновирионной вакцины. Это может служить доказательством преимущества над вакциной на основе расщепленного вируса в пандемической ситуации, поскольку снимает сомнения относительно возможности успешного получения расщепленной противовирусной вакцины для нового штамма вируса гриппа. Что касается некоторых штаммов, то традиционные детергенты, используемые для получения расщепленного вируса, могут повреждать вирус и делать его непригодным для применения. И хотя всегда имеется возможность использования разных детергентов и/или разработки другого способа получения сплит-вакцин, для этого необходимо время, которого может быть не достаточно в пандемической ситуации. В дополнение к большей уверенности при использовани подхода с применением цельного вируса также имеется более значительная способность к продуцированию такой вакцины по сравнению с расщепленным вирусом, поскольку значительные количества антигена теряются в процессе дополнительных стадий очистки, необходимых для изготовления подходящей сплит-вакцины. В другом воплощении препарат вируса гриппа находится в форме очищенной субъединичной противогриппозной вакцины. Субъединичные противогриппозные вакцины обычно содержат два основных оболочечных белка НА и NA и могут иметь дополнительное преимущество над цельновирионными вакцинами, поскольку они обычно менее реактогенны, в частности, для молодых вакцинируемых субъектов. Субъединичные вакцины могут быть получены либо рекомбинантно, либо очищены из разрушенных вирусных частиц. В другом воплощении препарат вируса гриппа находится в форме виросомы. Виросомы представляют собой сферические однослойные везикулы, которые содержат функциональные вирусные оболочечные гликопротеины НА и NA в аутентичной конформации, интеркалированные в фосфолипидную бислойную мембрану виросом. Указанный вирус гриппа или его антигенный препарат может быть получен из куриных эмбрионов или тканевых культур. Например, антиген вируса гриппа или его антигенные препараты по изобретению могут быть получены традиционным способом с использованием яиц с развивающимся эмбрионом посредством выращивания вируса гриппа в яйцах и очистки собранной аллантоисной жидкости. Яйца могут быть собраны в больших количествах в короткий срок. Альтернативно, они могут быть получены с помощью любого из новых способов производства с использованием клеток или клеточной культуры для выращивания вируса или экспрессии рекомбинантных поверхностных антигенов вируса гриппа. Подходящие клеточные субстраты для выращивания вируса включают в себя, например, клетки почки собаки, такие как MDCK или клетки из клона MDCK, MDCK-подобные клетки, клетки почки обезьяны, такие как AGMK-клетки(клетки почки африканской зеленой мартышки), включая клетки Vero, подходящие линии клеток свиньи или любой другой тип клеток млекопитающих, подходящих для продуцирования вируса гриппа с целью изготовления вакцин. Подходящие клеточные субстраты также включают в себя человеческие клетки,например, клетки MRC-5. Подходящие клеточные субстраты не ограничены клеточными линиями; например, также включены первичные клетки, такие как эмбриональные фибробласты кур и линии клеток птиц. Антиген вируса гриппа или его антигенный препарат может быть получен любым из множества коммерчески используемых способов, например с помощью способа с расщеплением вируса гриппа(сплит-flu-способа), описанного в патентахDD 300833 и DD 211444, включенных в данное описание посредством ссылки. Традиционно сплит-flu получали, используя обработку растворителем/детергентом,таким как три-н-бутил-фосфат или диэтиловый эфир в комбинации с Tween (известную как "Твин- 12018860 эфирное" расщепление), и этот способ все еще используют в некоторых производственных установках. Другие используемые в настоящее время расщепляющие агенты включают в себя детергенты, или протеолитические ферменты, или соли желчных кислот, например дезоксихолат натрия, как описано в патентеDD 155875, включенном в данное описание посредством ссылки. Детергенты, которые могут быть использованы в качестве расщепляющих агентов, включают в себя катионные детергенты, например цетилтриметиламмония бромид (СТАВ), другие ионные детергенты, например лаурилсульфат, тауродезоксихолат, или неионные детергенты, которые описаны выше, включая Тритон Х-100 (например, в способе, описанном в Una et al., 2000, Biologicals, 28, 95-103) и Тритон N-101 или комбинации любых двух или более детергентов. Способ приготовления сплит-вакцины может включать множество разных стадий фильтрации и/или других стадий разделения, таких как стадии ультрацентрифугирования, ультрафильтрации, зонального центрифугирования и хроматографии (например, ионообменной), в разнообразных комбинациях и возможно стадию инактивации, например, с помощью нагревания, формальдегида или рпропиолактона или УФ, которая может быть проведена до или после расщепления. Способ расщепления может быть осуществлен в виде периодического, непрерывного или полунепрерывного способа. Предпочтительный способ расщепления и способ очистки иммуногенной сплит-композиции описан вWO 02/097072. Предпочтительные сплит-flu-вакцинные антигенные препараты по изобретению содержат остаточное количество Твина 80 и/или Тритона Х-100, остающееся после процесса производства, хотя их можно добавить или довести их концентрацию после приготовления расщепленного антигена. Предпочтительно, когда присутствуют и Твин 80, и Тритон Х-100. Предпочтительные диапазоны конечных концентраций этих неионных поверхностно-активных веществ в вакцинной дозе составляют: Твин 80: 0,01-1%, более предпочтительно приблизительно 0,1% (об./об.); Тритон Х-100: 0,001-0,1 (% мас./об.), более предпочтительно 0,005-0,02% (мас./об.). В конкретном воплощении конечная концентрация Твина 80 варьирует от 0,025 до 0,09% (мас./об.). В другом конкретном воплощении антиген предложен в виде 2-кратной концентрированной смеси, в которой концентрация Твина 80 варьирует от 0,025 до 0,2% (мас./об.) и которую необходимо в два раза разбавлять после приготовления конечной композиции с адъювантом (или с буфером в контрольной композиции). В другом конкретном воплощении конечная концентрация Тритона Х-100 варьирует от 0,004 до 0,017% (мас./об.). В другом конкретном воплощении антиген предложен в виде в 2 раза более концентрированной смеси, концентрация Тритона Х-100 в которой варьирует от 0,005 до 0,034% (мас./об.) и которую необходимо разбавить в два раза для приготовления конечной композиции с адъювантом (или с буфером в контрольной композиции). Предпочтительно препарат вируса гриппа приготавливают в присутствии низкого уровня тиомерсала или предпочтительно в отсутствие тиомерсала. Предпочтительно полученный препарат вируса гриппа стабилен в отсутствие ртутьорганических консервантов, в частности, препарат не содержит никакого остаточного тиомерсала. Препарат вируса гриппа, в частности, содержит антиген гемагглютинин, стабилизированный в отсутствие тиомерсала или при низких уровнях тиомерсала (обычно 5 мкг/мл или меньше). Конкретно, стабилизацию штамма вируса гриппа В осуществляют, используя производное альфатокоферола, такое как альфа-токоферола сукцинат (также известный как витамина Е сукцинат, т.е. VES). Такие препараты и способы их приготовления раскрыты в WO 02/097072. Предпочтительная композиция содержит три инактивированных расщепленных вирионных антигена, приготовленных из рекомендованных ВОЗ штаммов вируса гриппа соответствующего сезона. Предпочтительно вирус гриппа или его антигенный препарат и адъювант по изобретению содержатся в одном и том же контейнере. Это называют как "прием одного флакона". Предпочтительно, такой флакон представляет собой предварительно заполненный шприц. В альтернативном воплощении вирус гриппа или его антигенный препарат и адъювант по изобретению содержатся в отдельных контейнерах или флаконах и быстро смешиваются до или во время введения субъекту. Это называют как "прием двух флаконов". Например, когда вакцина представляет собой 2-компонентную вакцину с общим объемом дозы 0,7 мл, концентрированные антигены (например, концентрированные трехвалентные инактивированные расщепленные вирионные антигены) находятся в одном флаконе (335 мкл) (контейнер для антигенов), а предварительно заполненный шприц содержит адъювант (360 мкл) (контейнер для адъювантов). В момент инъекции содержимое флакона, содержащего концентрированные трехвалентные инактивированные расщепленные вирионные антигены, извлекают из данного флакона с помощью шприца, содержащего адъювант, с последующим легким перемешиванием содержимого шприца. Перед инъекцией использованную иглу заменяют на иглу для внутримышечной инъекции и объем доводят до 530 мкл. В этом примере одна доза восстановленной адъювантной противогриппозной вакцины-кандидата соответствует 530 мкл. В одном аспекте изобретения, касающемся поливалентной композиции, по меньшей мере один штамм вируса гриппа в указанной поливалентной иммуногенной композиции, которая определена в данном описании, ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической- 13018860 вспышкой. Такой штамм также может быть назван ниже в тексте как "пандемические штаммы". В частности, когда вакцина является поливалентной вакциной, такой как двухвалентная, или трехвалентная,или четырехвалентная вакцина, по меньшей мере один штамм ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической вспышкой. Подходящие штаммы представляют собойH5N1, H9N2, H7N7 и H2N2, но не ограничиваются этим. Указанный вирус гриппа или его антигенный препарат удобным образом является поливалентным,например, двухвалентным, или трехвалентным, или четырехвалентным. Предпочтительно, вирус гриппа или его антигенный препарат является трехвалентным или четырехвалентным, имея антиген от трех разных штаммов вируса гриппа, при этом по меньшей мере один штамм ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической вспышкой. Свойствами штамма вируса гриппа, которые делают его способным вызывать пандемическую вспышку, являются следующие: он содержит новый гемагглютинин по сравнению с гемагглютинином штаммов, циркулирующих в настоящий момент; он обладает способностью передаваться горизонтально в человеческой популяции; и он является патогенным для людей. Новый гемагглютинин может представлять собой гемагглютинин, который не проявлялся в человеческой популяции в течение продолжительного периода времени, возможно, в течение нескольких десятилетий, такой как Н 2. Или же он может представлять собой гемагглютинин, не циркулировавший в человеческой популяции раньше, например,Н 5, Н 9, Н 7 или Н 6, которые обнаружены у птиц. В любом случае большинство, или по меньшей мере большая часть популяции, или даже вся популяция раньше не сталкивалась с данным антигеном и является иммунологически "наивной" по отношению к нему. Обычно некоторые группы имеют повышенный риск заражения гриппом в пандемической ситуации. Особенно восприимчивы пожилые люди, хронически больные люди и маленькие дети, однако многие молодые и явно здоровые люди также находятся в группе риска. Что касается вируса гриппа Н 2, то часть популяции, рожденная после 1968 г., имеет повышенный риск. Для этих групп важно получить эффективную защиту как можно более быстро и простым способом. Другой группой людей, которые находятся в группе повышенного риска, являются путешественники. Сейчас люди путешествуют больше, чем когда-либо раньше, а регионы, где появляется большинство новых вирусов, Китай и Юго-Восточная Азия, стали популярными местами для путешествий в последние годы. Такое изменение в характере путешествий дает возможность новым вирусам передаваться по всему земному шару за несколько недель, а не месяцев или лет. Таким образом, для этих групп людей существует особая необходимость в вакцинации с целью защиты против гриппа в пандемической ситуации или возможной пандемической ситуации. Подходящие штаммы представляют собой: H5N1, H9N2, H7N7 и H2N2, но не ограничиваются этим. Возможно композиция может содержать более трех валентностей, например три непандемических штамма плюс пандемический штамм. Альтернативно композиция может содержать три пандемических штамма. Предпочтительно композиция содержит три пандемических штамма. Кроме того, примерами антигенов для иммуногенной композиции по изобретению являются стрептококковые антигены, например антигены стрептококка группы А или стрептококка группы В, но наиболее предпочтительно Streptococcus pneumoniae. Наиболее предпочтительно используют по меньшей мере один белковый и/или по меньшей мере один сахаридный антиген. По меньшей мере один белковый антиген Streptococcus pneumoniae наиболее предпочтительно выбран из группы, состоящей из пневмолизина, PspA или его вариантов с делецией трансмембранных областей, PspC или его вариантов с делецией трансмембранных областей, PsaA или его вариантов с делецией трансмембранных областей, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, CbpA или его вариантов с делецией трансмембранных областей, PhtA,PhtD, PhtB, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Sp125, Sp101, Sp128, Sp130 и Sp133 или их иммунологически функционального эквивалента (например, слитых доменов вышеупомянутых белков, таких как, например, слитые белки PhtDE, описанные в WO 01/98334 и WO 03/54007). Некоторые композиции описаны в WO 00/56359, WO 02/22167 и WO 02/22168 (включены в данное описание посредством ссылки). Антиген может содержать капсульные сахаридные антигены (предпочтительно конъюгированные с белком-носителем), где сахариды (наиболее предпочтительно полисахариды) получены по меньшей мере из четырех серотипов пневмококков. В одном воплощении эти четыре серотипа включают 6 В, 14, 19F и 23F. В другом воплощении по меньшей мере 7 серотипов включены в композицию, например, серотипы,полученные из серотипов 4, 6 В, 9V, 14, 18 С, 19F и 23F. В другом воплощении по меньшей мере 10 серотипов включены в композицию, например композиция в одном из воплощений включает в себя капсульные сахариды, полученные из серотипов 1, 4, 5, 6 В, 7F, 9V, 14, 18 С, 19F и 23F (предпочтительно конъюгированные с белком-носителем). В другом воплощении иммуногенная композиция содержит капсульные сахариды, полученные из серотипов 1, 3, 4, 5, 6 В, 7F, 9V, 14, 18 С, 19F и 23F. В предпочтительном воплощении изобретения включены по меньшей мере 13 сахаридных антигенов (предпочтительно конъюгированные с белком-носителем), хотя согласно изобретению также рассматриваются дополнительные сахаридные антигены, например, 23-валентные (такие как серотипы 1, 2, 3, 4, 5, 6 В, 7F, 8, 9N, 9V, 10 А,11 А, 12F, 14, 15 В, 17F, 18 С, 19 А, 19F, 20, 22F, 23F и 33F).- 14018860 Несмотря на то что вышеупомянутые сахариды предпочтительно представлены в своей полноразмерной, нативной полисахаридной форме, следует понимать, что также могут быть использованы меньшие по размеру полисахариды, которые все еще являются иммуногенными (см., например, ЕР 497524 и 497525), при необходимости связанные с белком-носителем. Для предупреждения/облегчения пневмонии у пожилого (старше 55 лет) населения и воспаления среднего уха у младенцев (до 18 месяцев включительно) и детей (обычно от 18 месяцев до 5 лет) предпочтительное воплощение изобретения заключается в комбинировании поливалентного сахарида Streptococcus pneumoniae, как он описан в данном изобретении, с белком Streptococcus pneumoniae, предпочтительно выбранным из группы перечисленных выше белков. Комбинацию пневмококковых белков также можно предпочтительно использовать, как описано ниже. Пневмококковые белки. Антигены Streptococcus pneumoniae предпочтительно выбраны из группы, состоящей из белка семейства полигистидиновых триад (Pht), белка Lyt-семейства, холин-связывающего белка, белков, имеющих мотив LPXTG (где X представляет собой любую аминокислоту), белков, имеющих мотив сигнальной последовательности II типа LXXC (где X представляет собой любую аминокислоту), и белков,имеющих мотив сигнальной последовательности I типа. Предпочтительными примерами среди этих категорий (или мотивов) являются следующие белки (либо их укороченный или иммунологически функциональный эквивалент).Pht (полигистидиновые триады) семейство содержит белки PhtA, PhtB, PhtD и PhtE. Это семейство характеризуется липидизированной последовательностью, двумя доменами, разделенными пролинобогащенным участком, и несколькими гистидиновыми триадами, возможно вовлеченными в связывание металла или нуклеозида либо ферментативную активность, (3-5)-участками с двойной спиралью, консервативным N-концом и гетерогенным С-концом. Оно присутствует во всех тестируемых штаммах пневмококков. Гомологичные белки также были обнаружены у других стрептококков и Neisseria. Предпочтительные члены данного семейства включают PhtA, PhtB и PhtD. Более предпочтительно, PhtA или PhtD. Однако понятно, что термины Pht А, В, D и Е относятся к белкам, имеющим последовательности, раскрытые в приведенных ниже ссылках, а также к их существующим в природе (и искусственным) вариантам, имеющим гомологию последовательностей, которая по меньшей мере на 90% идентична белкам из ссылок; предпочтительно она идентична по меньшей мере на 95% и наиболее предпочтительно идентична на 97%. Что касается белков Pht, то PhtA раскрыт в WO 98/18930, где он также обозначен как Sp36. Как указано выше, он является белком семейства полигистидиновых триад и имеет сигнальный мотив II типаPhtD раскрыт в WO 00/37105, где он также обозначен как Sp036D. Как указано выше, он также является белком семейства полигистидиновых триад и имеет сигнальный мотив II типа LXXC. PhtB раскрыт в WO 00/37105, где он также обозначен как Sp036B. Другим членом PhtB-семейства является С 3 деградирующий полипептид, который раскрыт в WO 00/17370. Это также белок семейства полигистидиновых триад и он имеет сигнальный мотив II типа LXXC. Предпочтительным иммунологически функциональным эквивалентом является белок Sp42, раскрытый в WO 98/18930. Укороченный PhtB (приблизительно 79 кДа) раскрыт в WO 99/15675, который также считается членом PhtX-семейства.Lyt-семейство представляет собой мембраносвязанные белки, ассоциированные с лизисом клеток.N-концевой домен содержит холин-связывающий домен(домены), однако Lyt-семейство не имеет всех признаков, обнаруженных у семейства холин-связывающих белков (Cbp), указанного ниже, и таким образом для настоящего изобретения Lyt-семейство считается отличающимся от Cbp-семейства. В противоположность Cbp-семейству, С-концевой домен содержит каталитический домен белков Lyt-семейства. Это семейство включает в себя LytA, В и С. Что касается Lyt-семейства, то LytA раскрыт в Ronda et al.,Eur. J. Biochem., 164: 621-624 (1987). LytB раскрыт в WO 98/18930, где он также обозначен как Sp46.LytC также раскрыт в WO 98/18930, где он также обозначен как Sp91. Предпочтительным членом этого семейства является LytC. Другим предпочтительным воплощением являются усеченные структуры Lyt-семейства (в частности LytA), где "Lyt" определен выше, а "усеченные структуры" относятся к белкам, у которых отсутствует 50% холин-связывающего участка или более. Предпочтительно у таких белков отсутствует весь холин-связывающий участок.Sp125 является примером пневмококкового поверхностного белка с "якорным" мотивом к клеточной стенке LPXTG (где X представляет собой любую аминокислоту). Обнаружено, что любой белок из этого класса пневмококковых поверхностных белков с таким мотивом полезен в контексте данного изобретения и, следовательно, считается дополнительным белком по изобретению. Сам Sp125 раскрыт вWO 98/18930 и также известен как ZmpB -цинк-содержащая металлопротеиназа.Sp101 раскрыт в WO 98/06734 (где он имеет ссылочныйу 85993). Он характеризуется сигнальной последовательностью I типа.Sp133 раскрыт в WO 98/06734 (где он имеет ссылочныйу 85992). Он также характеризуется сигнальной последовательностью I типа.Sp128 и Sp130 раскрыты в WO 00/76540. Белки, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно выбраны из группы PhtD, PhtA иPhtE, или комбинации 2 или всех 3 этих белков (т.е. PhtA+D, A+E, D+E или A+D+E). Другие пневмококковые белковые антигены, которые могут быть включены, представляют собой один или более из группы, состоящей из пневмолизина (также обозначенного как Ply; предпочтительно подвергнутого детоксикации путем химической обработки или мутации) [WO 96/05859, WO 90/06951,WO 99/03884], PsaA и его вариантов с делецией трансмембранных областей (BerryPaton, Infect. Immun., 1996, Dec, 64(12): 5255-62), PspA и его вариантов с делецией трансмембранных областей(WO 97/09994, WO 99/53940), члена семейства холин-связывающих белков (Cbp) [например, CbpA и его вариантов с делецией трансмембранных областей (WO 97/41151; WO 99/51266)], глицеральдегид-3 фосфат-дегидрогеназы (Infect. Immun. 1996, 64: 3544), HSP70 (белок теплового шока) (WO 96/40928),РсрА (Sanchez-Beato et al., FEMS Microbiol. Lett., 1998, 164: 207-14), М-подобного белка (SB заявка на патентЕР 0837130) и адгезина 18627 (SB заявка на патентЕР 0834568). Настоящее изобретение также охватывает иммунологически функциональные эквиваленты или усеченные структуры таких белков (как определено выше). Что касается семейства холин-связывающих белков, то члены этого семейства первоначально были идентифицированы как пневмококковые белки, которые можно было очистить холин-аффинной хроматографией. Все холин-связывающие белки связаны нековалентными связями с фосфорилхолиновыми группировками тейхоевой кислоты клеточной стенки и мембраносвязанной липотейхоевой кислоты. В своей структуре они имеют несколько участков, общих для всего семейства, хотя точная природа белков(аминокислотная последовательность, длина и т.д.) может варьировать. В общем случае холинсвязывающие белки содержат N-концевой участок (N), консервативные повторяющиеся участки (R1 и/или R2), пролин-обогащенный участок (Р) и консервативный холин-связывающий участок (С), составленный из множественных повторов, который составляет приблизительно половину белка. Используемый в данной заявке термин "семейство холин-связывающих белков (Cbp)" относится к белкам, выбранным из группы, состоящей из холин-связывающих белков, которые идентифицированы в WO 97/41151,PbcA, SpsA, PspC, CbpA, CbpD и CbpG. CbpA раскрыт в WO 97/41151. CbpD и CbpG раскрыты в WO 00/29434. PspC раскрыт в WO 97/09994. PbcA раскрыт в WO 98/21337. Предпочтительно, холинсвязывающие белки выбраны из группы, состоящей из CbpA, PbcA, SpsA и PspC. Когда Cbp является дополнительно используемым белком, он может представлять собой усеченныйCbp, где "Cbp" определен выше, а "усеченный" относится к белкам, у которых отсутствует 50% холинсвязывающего участка (С) или более. Предпочтительно, у таких белков отсутствует весь холинсвязывающий участок. Более предпочтительно, когда у таких усеченных белков отсутствуют (1) холинсвязывающий участок, а также (2) часть N-концевой половины данного белка, при этом остается по меньшей мере один повторяющийся участок (R1 или R2). Еще более предпочтительно, когда усеченная структура имеет 2 повторяющихся участка (R1 и R2). Примерами таких предпочтительных воплощений являются NR1R2, R1R2, NR1R2P и R1R2P, как проиллюстрировано в WO 99/51266 илиWO99/51188, однако другие холин-связывающие белки, у которых отсутствует аналогичный холинсвязывающий участок, также считаются входящими в объем данного изобретения. Кроме того, в композициях по изобретению могут быть использованы химерные белки (или слитые структуры) - усеченный Cbp-усеченный Lyt. Предпочтительно они содержат NR1R2 (или R1R2, илиNR1R2P, или R1R2P) Cbp и С-концевую часть (Cterm, т.е. в которой отсутствуют холин-связывающие домены) Lyt (например, LytCCterm или Sp91Cterm). Более предпочтительно, Cbp выбран из группы, состоящей из CbpA, PbcA, SpsA и PspC. Еще более предпочтительно, когда он представляет собой CbpA. Предпочтительно, когда Lyt представляет собой LytC (также обозначенный как Sp91). Также может быть использован усеченный PspA или PsaA, у которого отсутствует холинсвязывающий домен (С) и который экспрессируется в виде белка, слитого с Lyt. Предпочтительно, когдаLyt представляет собой LytC. В пневмококковой композиции можно комбинировать разные пневмококковые белки по изобретению. Предпочтительно, когда белки комбинации по изобретению выбраны из 2 или более (3 или 4) разных категорий, таких как белки, имеющие мотив сигнальной последовательности II типа LXXC (где X представляет собой любую аминокислоту, например, полигистидин-триадного (Pht) семейства), холинсвязывающие белки (Cbp), белки, имеющие мотив сигнальной последовательности I типа (например,Sp101), белки, имеющие мотив LPXTG (где X представляет собой любую аминокислоту, например,Sp128, Sp130), токсины (например, Ply) и т.д. Предпочтительными примерами среди этих категорий (или мотивов) являются белки, упомянутые выше, или их иммунологически функциональные эквиваленты. Токсин + Pht, токсин + Cbp, Pht + Cbp и токсин + Pht + Cbp являются предпочтительными комбинациями категорий.- 16018860 Предпочтительные полезные комбинации включают PhtD + NR1R2, химерные или слитые белкиPhtD + NR1R2-Sp91Cterm, PhtD + Ply, PhtD + Sp128, PhtD + PsaA, PhtD + PspA, PhtA + NR1R2, химерные или слитые белки PhtA + NR1R2-Sp91Cterm, PhtA + Ply, PhtA + Sp128, PhtA + PsaA, PhtA + PspA,NR1R2 + LytC, NR1R2 + PspA, NR1R2 + PsaA, NR1R2 + Sp128, R1R2 + LytC, R1R2 + PspA,R1R2 + PsaA, R1R2 + Sp128, R1R2 + PhtD, R1R2 + PhtA, но не ограничиваются этим. Предпочтительно, когда NR1R2 (или R1R2) происходит из CbpA или PspC. Более предпочтительно, когда он происходит из CbpA. Особенно предпочтительная комбинация пневмококковых белков содержит Ply (либо его усеченный или иммунологически функциональный эквивалент) + PhtD (либо его усеченный или иммунологически функциональный эквивалент), возможно с NR1R2 (или R1R2, или NR1R2P, или R1R2P). Предпочтительно, когда NR1R2 (или R1R2, или NR1R2P, или R1R2P) происходит из CbpA илиPspC. Более предпочтительно, когда он происходит из CbpA. Антиген может представлять собой пневмококковый сахаридный конъюгат, содержащий полисахаридные антигены, происходящие из по меньшей мере четырех серотипов, предпочтительно по меньшей мере семи серотипов, более предпочтительно по меньшей мере десяти серотипов, и по меньшей мере одного, но предпочтительно 2, 3 или 4 белков Streptococcus pneumoniae, предпочтительно выбранных из группы белков, описанных выше. Предпочтительно, когда один из белков представляет собой PhtD (или его иммунологически функциональный эквивалент) и/или Ply (или его иммунологически функциональный эквивалент). Проблема, связанная с полисахаридным подходом к вакцинации, заключается в том, что полисахариды per se являются слабыми иммуногенами. Для преодоления этой проблемы сахариды можно конъюгировать с белковыми носителями, которые обеспечивают фоновый Т-клеточный хелперный ответ. Поэтому предпочтительно, чтобы используемые в данном изобретении сахариды были связаны с таким белковым носителем. Примеры таких носителей, которые в настоящее время обычно используют для получения сахаридных иммуногенов, включают дифтерийные и столбнячные анатоксины (DT, DTCRM197 и ТТ, соответственно), гемоцианин лимфы улитки (KLH), ОМРС (белок С наружной мембраны) из N. meningitidis и очищенное белковое производное туберкулина (PPD). Предпочтительным носителем для иммуногенных композиций (или вакцин) на основе пневмококковых сахаридов является белок D Haemophilus influenzae (EP 594610-В) или его фрагменты. Фрагменты,подходящие для применения, включают фрагменты, охватывающие Т-хелперные эпитопы. В частности,фрагмент белка D будет предпочтительно содержать N-концевую часть, составляющую 1/3 данного белка. Носитель белок D полезен в качестве носителя в композициях, где конъюгировано много пневмококковых сахаридных антигенов. Предпочтительно, один или более пневмококковых сахаридов в комбинации могут быть конъюгированы на белке D. Другим предпочтительным носителем для пневмококкового сахарида является сам пневмококковый белок (который определен выше в разделе "Пневмококковые белки по изобретению"). Сахарид может быть связан с белком-носителем любым известным способом (например, по Likhite,патент США 4372945, и по Armor и др., патент США 4474757). Конъюгирование предпочтительно осуществляют с использованием CDAP (тетрафторборат 1-циано-4-(диметиламино)пиридиния)(WO 95/08348). Предпочтительно, когда соотношение белок:сахарид (масса:масса) в конъюгатах составляет 0,3:11:1, более предпочтительно 0,6:1-0,8:1 и наиболее предпочтительно приблизительно 0,7:1. Особенно предпочтительные композиции по изобретению содержат один или более конъюгированных пневмококковых сахаридов и один или более пневмококковых белков по изобретению. Кроме того, пневмококковые сахариды и белки можно стабильно хранить в виде нерасфасованных компонентов, адсорбированных на фосфате алюминия в жидкой форме. В другом аспекте изобретения вакцинная композиция может содержать антиген цитомегаловируса человека (HCMV). HCMV является ДНК-содержащим вирусом человека, принадлежащим семейству герпесвирусов, и он представляет собой основную причину врожденных дефектов у новорожденных и также является причиной серьезных медицинских состояний у пациентов с ослабленным иммунитетом. Клиническое заболевание вызывает ряд симптомов, включая лихорадку, гепатит, пневмонит и инфекционный мононуклеоз. В одном из воплощений антиген HCMV представляет собой химерный слитый белок или его иммуногенное производное, содержащее участок гликопротеина HCMV, слитого с участком гликопротеинаHSV - обычно gD, в частности, gD типа 2 (gD2) HSV. Слияние обычно происходит между аминокислотой в N-концевой части участка белка gB HCMV и аминокислотой на С-концевой части белка gD HSV. В обоих белковых компонентах слитого белка, как в gB HCMV, так и в gD HSV, может отсутствовать мембрано-якорный домен. Участок белка gB HCMV может содержать нерасщепляемую форму gB HCMV. Соответственно этого достигают путем изменения одной или более аминокислот в сайте расщепления белка, например- 17018860 путем замены Arg458 и Arg459 на Glu и Thr, соответственно. Участок белка HSV может содержать сигнальную последовательность gD2 (аминокислоты 1-25) и возможно аминокислоты 26-52 gD2 и/или последовательность из gD2, представляющую собой PEDSALLEDPED или ее функциональные эквиваленты, которые могут быть короче или длиннее. К слитому белку могут быть добавлены другие последовательности из gD HSV, например, на С-конце белка gB HCMV. В одном из воплощений слитый белок содержит аминокислоты 1-52 белка gD2 HSV, слитого с остатками 28-685 белка gB HCMV. Слитый таким образом белок обозначен как gB685 HCMV. В другом воплощении аминокислотная последовательность PEDSALLEDPED, происходящая из внутренней последовательности gD2, может быть включена в С-концевую часть белка gB685 HCMV с получением белка, обозначенного gB685 HCMV. Эти специфические слитые белки описаны более подробно вWO 95/31555. Другим иммуногеном, подходящим для применения в качестве вакцины на основе HCMV, является рр 65, матриксный белок HCMV, который описан в WO 94/00150 (City of Hope). В другом воплощении настоящего изобретения иммуногенные композиции содержат антиген или антигенный препарат, полученный из вируса папилломы человека (HPV), который считается ответственным за генитальные бородавки (HPV 6 или HPV 11 и другие) и/или вирусов HPV, ответственных за цервикальный рак (HPV16, HPV18 и другие). В одном из воплощений формы профилактических или терапевтических композиций против генитальных бородавок содержат частицы или капсомеры L1 и слитые белки, содержащие один или более антигенов, выбранных из белков Е 1, Е 2, Е 5, Е 6, Е 7, L1 и L2 HPV. В одном из воплощений формы слитого белка представляют собой L2E7, как раскрыто вWO 96/26277, и белок D(1/3)-E7, раскрытый в GB 9717953.5 (РСТ/ЕР 98/05285). Предпочтительные профилактические или терапевтические композиции против цервикальных инфекции или рака, вызванных HPV, могут содержать антигены HPV 16 или 18. Например, мономеры антигена L1 или L2, либо антигены L1 или L2, представленные вместе в виде вирусоподобной частицы(VLP), либо сам белок L1, представленный один в VLP или капсомерной структуре. Такие антигены, вирусоподобные частицы и капсомер известны per se. См., например, WO 94/00152, WO 94/20137,WO 94/05792 и WO 93/02184. Дополнительные ранние белки, такие как, например, Е 7, Е 2 или предпочтительно Е 5, могут быть включены сами по себе или в виде слитых белков; особенно предпочтительные воплощения включаютVLP-содержащие слитые белки L1E7 (WO 96/11272). В одном из воплощений антигены HPV 16 содержат ранние белки Е 6 или Е 7 в слитой форме с носителем белком D с образованием слияний белок D-(E6 или Е 7) HPV 16 или их комбинации; или комбинаций Е 6 или Е 7 с L2 (WO 96/26277). Альтернативно, ранние белки Е 6 и Е 7 HPV 16 или 18 могут быть представлены в одной молекуле,предпочтительно в виде слияния: белок D-Е 6/Е 7. Такая композиция возможно может содержать либо один, либо оба белка Е 6 и Е 7 HPV 18, предпочтительно в форме слитого белка: белок D-E6 или белок DE7, или слитого белка: белок D-E6/E7. Композиция по настоящему изобретению дополнительно может содержать антигены из других штаммов HPV, предпочтительно из HPV 31 или 33. Онкогенные штаммы HPV включают HPV 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68. Таким образом, композиция по настоящему изобретению может содержать антигены из одного или более таких штаммов HPV в дополнение к HPV16 и/или HPV18.VLP или капсомеры L1 HPV, полезные в изобретении, могут содержать полноразмерный L1 или иммуногенный фрагмент L1 или состоять из них. Если VLP или капсомер содержит иммуногенный фрагмент L1 или состоит из него, то подходящие иммуногенные фрагменты L1 HPV включают усеченные структуры L1, мутанты L1, полученные в результате делеций, замен или вставок. Такие иммуногенные фрагменты, соответственно, способны усиливать иммунный ответ, который способен распознавать белок L1, например вирусоподобную частицу, из того штамма HPV, из которого белок L1 получен. Подходящие иммуногенные фрагменты L1 включают усеченные белки L1. В одном аспекте усечение удаляет сигнал ядерной локализации. В другом аспекте усечение представляет собой С-концевое усечение. В следующем аспекте С-концевое усечение удаляет немногим более 50 аминокислот, например немногим более 40 аминокислот. Если L1 происходит из HPV 16, то в другом аспекте С-концевое усечение удаляет 34 аминокислоты из L1 HPV 16. Если L1 происходит из HPV 18, то в другом аспекте Сконцевое усечение удаляет 35 аминокислот из L1 HPV 18. Подходящие усеченные последовательности L1 HPV 16 и 18 приведены в WO 06/114312. Кроме того, последовательность HPV 16 может представлять собой последовательность, раскрытую в WO 9405792 или US 6649167, например, соответственным образом усеченную. Подходящие усеченные структуры усечены по положению, эквивалентному обсужденному выше, как оценено путем сравнения последовательностей. Альтернативная последовательность HPV 18 раскрыта в WO 9629413, которая может быть соответственным образом усечена. Подходящие усеченные структуры усечены по положению, эквивалентному- 18018860 описанному выше, как оценено путем сравнения последовательностей. Другие последовательности HPV 16 и HPV 18 хорошо известны в данной области техники и могут подходить для применения в настоящем изобретении. Если белок L1 происходит из другого штамма HPV, могут быть использованы С-концевые усечения, соответствующие таковым, приготовленным для HPV 16 и HPV 18, на основании выравниваний последовательностей ДНК или белков. Подходящие усечения белков L1 HPV 31 и 45 приведены в WO 06/114312. Кроме того, могут быть приготовлены подходящие усеченные структуры из, например, HPV 31, 33,35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68, в одном аспекте, путем удаления С-концевых участков белка L1, эквивалентных описанным выше, как оценено путем выравнивания последовательностей. Белок L1 или его иммуногенный фрагмент по изобретению возможно может быть в форме слитого белка, как, например, слитая конструкция белка L1 с L2 или ранним белком. Белок L1 HPV существует, соответственно, в форме капсомера или вирусоподобной частицы (VLP). В одном аспекте в настоящем изобретении могут быть использованы VLP HPV. VLP HPV и способы приготовления VLP хорошо известны в данной области техники. VLP обычно конструируют из вирусных структурных белков L1 и возможно L2, см., например WO 9420137, US 5985610, WO 9611272, US 6599508B1, US 6361778B1, ЕР 595935. Любая подходящая VLP HPV, которая обеспечивает перекрестный иммунитет, такая как VLP на основе L1 или L1 + L2, может быть использована в настоящем изобретении. Предпочтительно VLP представляет собой только L1-VLP. Композиция по изобретению может содержать комбинацию L1-VLP HPV 16 и L1-VLP HPV 18, или комбинацию L1-VLP HPV из HPV 16, 18, 31 и 45, или более многочисленные комбинации, и включает в себя L1-VLP HPV 16 и 18 или HPV 16, 18, 31 и 45, или более многочисленные комбинации, где L1 является возможно усеченным, как описано в данном изобретении. В конкретном воплощении изобретения с антигенами HPV 16 и/или 18 используют один или более дополнительных антигенов из типов HPV, вызывающих рак, которые выбраны из следующих типовHPV: HPV 31, 45, 33, 58 и 52. Как описано в данном изобретении, антиген в каждом случае может представлять собой L1, например, в форме L1-VLP или капсомеров. Таким образом, антигены HPV для использования в композициях, способах и применениях, описанных в данном изобретении, могут содержать L1-VLP или капсомеры из HPV 16, 18, 31, 45, 33, 58 и 52 или состоять из них. L1-VLP могут представлять собой только L1-VLP или быть в комбинации с другим антигеном, как, например, L2 в VLP на основе L1 + L2. Белок L1 может быть соответственно усеченным, как описано в данном изобретении. Образование VLP можно оценить с использованием стандартных методик, таких как, например,электронная микроскопия и динамическое лазерное светорассеяние.VLP может содержать полноразмерный белок L1. В одном аспекте белок L1, используемый для образования VLP, представляет собой усеченный белок L1, как описано выше.VLP могут быть приготовлены в любом подходящем клеточном субстрате, таком как дрожжевые клетки или клетки насекомых, например в бакуловирусной экспрессирующей системе, и методики приготовления VLP хорошо известны в данной области техники, как, например, WO 9913056, US 6416945 В 1, US 6261765 B1 и US 6245568 и приведенные там ссылки, полное содержание которых тем самым включено посредством ссылки.VLP могут быть приготовлены с использованием методик "разборки и сборки", что может обеспечить получение более стабильных и/или гомогенных VLP на основе папилломавируса. Например, вParticles in Vitro", J. Virology 72(1): 33-41, описывается разборка и сборка VLP на основе рекомбинантных L1 HPV 11, очищенных из клеток насекомых с целью получения гомогенного препарата VLP. В WO 9913056 и US 6245568 также описываются процессы разборки/сборки для приготовления VLP на основе HPV. В одном аспекте VLP на основе HPV получают, как описано в WO 9913056 или US 6245568. Композиции по настоящему изобретению могут содержать антигены или антигенные препараты,полученные из паразитов, вызывающих малярию, таких как Plasmodium falciparum или Plasmodium vivax. Например, возможные антигены, происходящие из Plasmodium falciparum, включают циркумспорозоитный белок (CS белок), RTS,S, MSP1, MSP3, LSA1, LSA3, АМА 1 и TRAP. RTS представляет собой гибридный белок, содержащий по существу всю С-концевую часть циркумспорозоитного (CS) белка из P.falciparum, присоединенную посредством четырех аминокислот preS2-части поверхностного антигена вируса гепатита В к поверхностному (S)-антигену вируса гепатита В (HBV). Его полная структура раскрыта в международной заявке на патентРСТ/ЕР 92/02591, опубликованной подWO 93/10152, утверждающей приоритет заявки на патент Великобритании 9124390.7. При экспрессии в дрожжах RTS продуцируется в виде липопротеиновой частицы, а при совместной экспрессии с S-антигеном из HBV продуцируется комбинированная частица, известная как RTS,S. Антигены TRAP описаны в международной заявке на патентPCT/GB89/00895, опубликованной подWO 90/01496. Предпочтительным воплощением настоящего изобретения является вакцина против малярии, где антигенная композиция- 19018860 содержит комбинацию антигенов RTS,S и TRAP. Другие плазмодийные антигены, являющиеся вероятными кандидатами в компоненты поливалентной вакцины против малярии, представляют собой MSP1,АМА 1, MSP3, ЕВА, GLURP, RAP1, RAP2, секвестрин (sequestrin), PfEMP1, Pf332, LSA1, LSA3, STARP,SALSA, PfEXP1, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 из Р. faciparum и их аналоги в видахPlasmodium. Одно воплощение настоящего изобретения представляет собой композицию, содержащую белок RTS,S или CS или его фрагмент, такой как часть CS в RTS,S, в комбинации с одним или более дополнительными малярийными антигенами, которые могут быть выбраны, например, из группы, состоящей из MPS1, MSP3, АМА 1, LSA1 или LSA3. Возможные антигены из P. vivax включают циркумспорозоитный белок (CS белок) и белок, связывающий антиген Даффи (Duffy), и его фрагменты, как, например, PvRII (см., например, WO 02/12292). Другие возможные антигены, которые могут быть использованы в иммуногенных композициях по настоящему изобретению, включают стрептококковые антигены, как, например, из стрептококка группы А или стрептококка группы В. Другие антигены соответственно происходят из ВИЧ-1 (такие как антигенF4 или его фрагменты либо gag или его фрагменты, например, р 24, tat, nef, gp120 или gp160 или фрагменты любого из них), герпесвирусов человека, такие как gD или его производные или немедленный ранний белок, например ICP27 из HSV1 или HSV2, цитомегаловируса в особенности человека) (такие как gB или его производные, ротавируса (включая живые аттенуированные вирусы), вируса ЭпштейнаБарра (такие как др 350 или его производные), вируса ветряной оспы (такие как gpl, II и IE63), или из вируса гепатита, такого как вирус гепатита В (например, поверхностный антиген вируса гепатита В или его производное), вирус гепатита А, вирус гепатита С и вирус гепатита Е, или из других вирусных патогенов,таких как парамиксовирусы: респираторно-синцитиальный вирус (RSV) (такие белки, как F, N, М и G или их производные), вирус парагриппа, вирус кори, вирус паротита, вирусы папилломы человека (например, HPV6, 11, 16, 18), флавивирусы (например, вирус желтой лихорадки, вирус денге, вирус клещевого энцефалита, вирус японского энцефалита) или вирус гриппа (цельный живой или инактивированный вирус, расщепленный вирус гриппа, выращенный на куриных эмбрионах или клетках MDCK, или цельные flu-виросомы (как описано в R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920), или их очищенные или рекомбинантные белки, такие как белки НА, NP, NA или М либо их комбинации); или происходят из бактериальных патогенов, таких как Neisseria spp., включая N. gonorrhea и N. meningitidis (например, капсульные сахариды и их конъюгаты, трансферрин-связывающие белки, лактоферрин-связывающие белки,PilC, адгезины); S. pyogenes (например, М белки или их фрагменты, протеаза С 5 А, липотейхоевые кислоты), S. agalactiae, S. mutans; H. ducreyi; Moraxella spp., включая M. catarrhalis, также известный как Branhamella catarrhalis (например, высоко- и низкомолекулярные адгезины и инвазины); Bordetella spp., включая В. pertussis (например, пертактин, коклюшный токсин или его производные, филаментозный гемагглютинин, аденилатциклаза, фимбрии), В. parapertussis и В. bronchiseptica; Mycobacterium spp., включая М. tuberculosis (например, ESAT6, антиген 85 А, -В или -С), М. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, М. smegmatis; Legionella spp., включая L. pneumophila; Eschehchia spp., включая энтеротоксичный штамм Е. coli (например, факторы колонизации, термолабильный токсин или его производные, термостабильный токсин или его производные), энтерогеморрагический штамм Е. coli, энтеропатогенный штамм Е. coli (например, шигаподобный токсин или его производные); Vibrio spp., включая V. cholera(например, холерный экзотоксин или его производные); Shigella spp., включая S. sonnei, S. dysenteriae, S.spp., включая P. aeruginosa; Staphylococcus spp., включая S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp.,включая E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., включая С. tetani (например, столбнячный токсин и его производное), С. botulinum (например, ботулинический токсин и его производное), С. difficile (например,клостридические токсины А или В и их производные); Bacillus spp., включая В. anthracis (например, ботулинический токсин и его производные); Corynebacterium spp., включая С. diphtheriae (например, дифтерийный токсин и его производные); Borrelia spp., включая В. burgdorferi (например, OspA, OspC, DbpA,DbpB), В. garinii (например, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelii (например, OspA, OspC, DbpA, DbpB),B. andersonii (например, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp., включая E. equi, и агент гранулоцитарного эрлихиоза человека; Rickettsia spp., включая R. rickettsii; Chlamydia spp., включая С.pneumoniae (например, МОМР, гепарин-связывающие белки), С. psittaci; Leptospira spp., включая L. interrogans; Treponema spp., включая Т. pallidum (например, редкие белки наружной мембраны), Т. denticola,T. hyodysenteriae; или происходят из паразитов, таких как Plasmodium spp., включая P. falciparum;lamblia; Leshmania spp., включая L. major, Pneumocystis spp., включая Р. carinii; Trichomonas spp., включая Т. vaginalis; Schisostoma spp., включая S. mansoni; или происходят из дрожжей, таких как Candida spp.,включая С. albicans; Cryptococcus spp., включая С. neoformans.- 20018860 Другие предпочтительные специфические антигены М. tuberculosis представляют собой, например,Tb Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb38-1, Erd 14, DPV, MTI, MSL, mTTC2 и hTCC1 (WO 99/51748), Mtb72F и М 72. Белки М. tuberculosis также включают слитые белки и их варианты, где по меньшей мере два, предпочтительно три полипептида М. tuberculosis слиты в белок большего размера. Предпочтительные слияния включают Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-rnTCC2, Erd14DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCC2, TbH9-DPV-MTI (WO 99/51748). Конкретная последовательность Ra12-Tbh9-Ra35, которая может быть упомянута, определена как SEQ ID NO: 6 в WO 2006/117240,вместе с вариантами, в которых Ser 704 этой последовательности мутирован до аминокислоты, отличающейся от серина, например до Ala, и их производными, включающими N-концевую His-метку соответствующей длины (например, SEQ ID NO: 2 или 4 в WO 2006/117240). Типичные антигены Chlamydia sp., например С. trachomatis, выбраны из СТ 858, СТ 089, СТ 875,МОМР, СТ 622, PmpD (предполагаемый мембранный белок D), PmpG и их фрагментов, SWIB и иммуногенных фрагментов любого из них (таких как PmpDpd и PmpGpd) и их комбинаций. Предпочтительные комбинации антигенов включают в себя СТ 858, СТ 089 и СТ 875. Конкретные последовательности и комбинации, которые могут быть использованы, описаны в WO 2006/104890. Предпочтительные бактериальные композиции содержат антигены, происходящие из Haemophilusspp., включая Н. influenzae типа В (например, PRP (полирибозил-рибитол-фосфатный капсульный полисахарид) и его конъюгаты), нетипируемый штамм Н. influenzae, например, ОМР 26 (белок наружной мембраны 26), высокомолекулярные адгезины, Р 5, Р 6, белок D и липопротеин D, и фимбрин и фимбриновые пептиды (патент США 5843464) или их многокопийные варианты или слитые белки. Производные поверхностного антигена вируса гепатита В хорошо известны в данной области и включают, среди прочего, такие S-антигены как PreS1, PreS2, описанные в заявках на европейский патент ЕР-А-414374; ЕР-А-0304578 и ЕР 198-474. В одном предпочтительном аспекте вакцинная композиция по изобретению содержит антиген ВИЧ-1, представляющий собой gp120, особенно когда он экспрессирован в клетках СНО (клетки яичника китайского хомячка). В другом воплощении композиция по изобретению содержит gD2t, который определен выше. Данные композиции также могут содержать противоопухолевый антиген и быть полезными для иммунотерапевтического лечения видов рака. Например, антиген может представлять собой антигены отторжения опухоли для таких видов рака, как рак предстательной железы, молочной железы, колоректальный рак, рак легкого, рак поджелудочной железы, рак почки или меланома. Типичные антигены включают MAGE 1, 3 и MAGE 4 или другие антигены MAGE (меланомные антигены), как, например,раскрытые в WO 99/40188, PRAME (preferential antigen of melanoma; предпочтительный антиген меланомы), BAGE (В-меланомный антиген), Lage (L-меланомный антиген) (также известный как NY Eos 1),SAGE (sarcoma antigen; антиген саркомы) и HAGE (helicase antigen; геликазный антиген) (WO 99/53061) или GAGE (G-меланомный антиген) (Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology, 8, pp. 628-636; Van den Eynde et al., International Journal of ClinicalLaboratory Research (представлен на рассмотрение, 1997); Correale et al. (1997), Journal of National Cancer Institute, 89, p. 293). В действительности, эти антигены экспрессируются в широком диапазоне типов опухолей, таких как меланома, карцинома легкого, саркома и карцинома мочевого пузыря. Антигены MAGE для применения в настоящем изобретении могут быть экспрессированы в виде слитого белка с энхансером экспрессии или иммунологическим партнером слияния. В частности, белокMAGE может быть слит с белком D Haemophilus infuenzae В или его липидизированным производным. В частности, партнер слияния может содержать первую 1/3 белка D. Такие конструкции раскрыты вWO 99/40188. Другие опухолеспецифические антигены включают KSA (human adenocarcinoma-associated antigen; антиген, ассоциированный с аденокарциномой человека) (GA733) опухолеспецифические ганглиозиды,такие как GM2 и GM3 или их конъюгаты с белками-носителями, но не ограничиваются этим; или указанный антиген может представлять собой сам пептидный гормон, такой как полноразмерный гонадотропин-рилизинг-гормон (GnRH, WO 95/20600), короткий пептид, состоящий из 10 аминокислотных остатков, полезный в лечении многих видов рака или в иммунологической кастрации. В предпочтительном воплощении используют простатические антигены, такие как простатический специфический антиген (PSA), PAP (простатическая кислая фосфатаза), PSCA (prostase steam cell antigen; антиген простатных стволовых клеток) (PNAS, 95(4), 1735-1740, 1998), PSMA (prostate specific membraneantigen; мембранный антиген предстательной железы) или антиген, известный как простаза. Простаза представляет собой специфическую для предстательной железы сериновую протеазу(трипсиноподобную), состоящую из 254 аминокислот, с консервативной для сериновых протеаз каталитической триадой H-D-S и аминоконцевой препропептидной последовательностью, указывающей на возможную секреторную функцию (P. Nelson, Lu Gan, С. Ferguson, P. Moss, R. Gelinas, L. HoodK.restricted expression, в Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1999) 96, 3114-3119). Описан предполагаемый сайт гликозилирования. Предсказанная структура очень близка по структуре к другим известным сериновым протеазам, показывая, что зрелый полипептид сворачивается в единичный домен. Зрелый белок состоит- 21018860 из 224 аминокислот с одним эпитопом А 2, который, как показано, подвергается природному процессингу. Нуклеотидная последовательность простазы и выведенные полипептидная последовательность и гомологи описаны Ferguson и др. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 3114-3119) и в международных заявках на патентWO 98/12302 (и также в соответствующем выданном патенте США 5955306),WO 98/20117 (и также в соответствующих выданных патентах США 5840871 и США 5786148) (простата-специфический калликреин) и WO 00/04149 (Р 703 Р). Согласно настоящему изобретению предложены композиции, содержащие простазные белковые слитые структуры на основе белка простазы и его фрагментов и гомологов ("производные"). Такие производные подходят для применения их в терапевтических вакцинных композициях, подходящих для лечения опухолей предстательной железы. Обычно фрагмент будет содержать по меньшей мере 20, предпочтительно 50, более предпочтительно 100 смежных аминокислот, как раскрыто в приведенных выше в качестве ссылки патенте и заявках на патент. Другой предпочтительный антиген предстательной железы известен как P501S, последовательностьID NO 113 из WO 98/37814. Его иммуногенные фрагменты и части, содержащие по меньшей мере 20,предпочтительно 50, более предпочтительно 100 смежных аминокислот, раскрыты в приведенной выше в качестве ссылки заявке на патент. См., например, PS108 (WO 98/50567). Другие антигены предстательной железы известны из WO 98/37418 и WO 004149. Еще один представляет собой STEAP (six transmembrane epithelial antigen of prostate; шестой трансмембранный антиген простаты) (PNAS, 96, 14523-14528, 7-12, 1999). Другие опухолеспецифические антигены, полезные в контексте настоящего изобретения, включают: Plu-1 (J. Biol. Chem., 274 (22), 15633-15645, 1999), HASH-1 (human achaete-scute homolog-1), HasH-2,Cripto (Salomon et al., Bioassays, 199, 21, 61-70, патент США 5654140), криптин (criptin) (патент США 5981215). Кроме того, антигены, особенно подходящие для терапии рака, также включают тирозиназу и сурвивин (survivin). Пептиды на основе муцина, такие как Muc1, см., например, в US 5744144, US 5827666,WO 8805054, US 4963484. Конкретно рассматриваются происходящие из Muc 1 пептиды, содержащие по меньшей мере одну повторяющуюся единицу пептида Muc 1, предпочтительно по меньшей мере два таких повтора, которая распознается антителом SM3 (US 6054438). Другие пептиды, происходящие из муцина, включают пептид из Muc 5. Антиген по изобретению может представлять собой антиген рака молочной железы, такой как her 2/Neu, маммаглобин (патент США 5668267), или антиген, раскрытый в WO 0052165, WO 99/33869,WO 99/19479, WO 98/45328. Антигены Her 2 neu раскрыты, среди прочего, в патенте США 5801005. Предпочтительно, Her 2 neu содержит целый внеклеточный домен (содержащий приблизительно с 1 по 645 аминокислоту) или его фрагменты и по меньшей мере иммуногенную часть или целый внутриклеточный домен, содержащий приблизительно 580 С-концевых аминокислот. В частности, внутриклеточная часть должна содержать домен фосфорилирования или его фрагменты. Такие конструкции раскрыты в WO 00/44899. Особенно предпочтительная конструкция известна как ECD PD, другая известна какECD PD, см. WO 00/44899. Her 2 neu, который использован в данном описании, может происходить из крысы, мыши или человека. Данные композиции могут содержать антигены, ассоциированные с опухолеподдерживающими механизмами (например, ангиогенезом, опухолевой инвазией), например tie 2, VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста). Можно предвидеть, что в композициях по настоящему изобретению могут быть использованы антигены, происходящие из Borrelia sp Например, антигены могут включать нуклеиновую кислоту, антиген, происходящий из патогена, или антигенные препараты, рекомбинантно полученные белок или пептиды и химерные слитые белки. В частности, антиген представляет собой OspA. OspA может представлять собой полностью зрелый белок в липидизированной форме как в клетке-хозяине (Е. coli), обозначенный как Lipo-OspA, или его нелипидизированное производное. Такие нелипидизированные производные включают нелипидизированный слитый белок NS1-OspA, который имеет первые 81 N-концевую аминокислоту неструктурного белка (NS1) вируса гриппа и полный белок OspA, а другой MDP(мурамилдипептид)-OspA, представляющий собой нелипидизированную форму OspA, несущую 3 дополнительных N-концевых аминокислоты. Композиции по настоящему изобретению могут быть использованы для профилактики или терапии аллергии. Такие вакцины будут содержать аллерген-специфические (например, Der p1) и аллергеннеспецифические антигены (например, пептиды, происходящие из IgE человека, включая stanworth декапептид (ЕР 0477231 В 1), но не ограничиваясь этим). Композиции по настоящему изобретению также могут быть использованы для профилактики или терапии хронических расстройств, отличных от аллергии, рака или инфекционных заболеваний. Такими хроническими расстройствами являются такие заболевания, как атеросклероз и болезнь Альцгеймера. Композиции по настоящему изобретению, в частности, подходят для иммунотерапевтического лечения таких заболеваний, таких как хронические состояния и виды рака, а также для терапии хрониче- 22018860 ских инфекций. Соответственно, композиции по настоящему изобретению особенно подходят для иммунотерапии инфекционных заболеваний, таких как туберкулез (ТВ), вирусные инфекции СПИД и гепатит В (НерВ). Кроме того, что касается СПИДа, предложен способ лечения индивидуума, чувствительного к СПИДу или страдающего от него. Этот способ включает введение вакцины по настоящему изобретению индивидууму, тем самым уменьшая снижение CD4+ Т-клеток, вызываемое последующей ВИЧинфекцией, или замедляя либо останавливая снижение количества CD4+ Т-клеток у индивидуума, уже инфицированного ВИЧ. Другие антигены включают в себя бактериальные (предпочтительно капсульные) сахариды, отличные от (или в дополнение к) таких пневмококковых антигенов, описанных выше. Полисахаридные антигены удобно хранить в жидкой нерасфасованной форме, адсорбированной на фосфате алюминия, следовательно, напрямую создавать вакцинные композиции по изобретению путем смешивания указанной жидкой нерасфасованной формы с адъювантом по изобретению экстемпорально. Предпочтительно, чтобы другие бактериальные сахариды были выбраны из группы, состоящей из капсульного сахарида N.W-135 (MenW), капсульного сахарида группы I стрептококков группы В, капсульного сахарида группы II стрептококков группы В, капсульного сахарида группы III стрептококков группы В, капсульного сахарида группы IV стрептококков группы В, капсульного сахарида группы V стрептококков группы В, капсульного сахарида 5 типа Staphylococcus aureus, капсульного сахарида 8 типа Staphylococcus aureus, Vi сахарида из Salmonella typhi, N. meningitidis LPS, M. catarrhalis LPS и H. influenzae LPS. Под LPS понимают либо нативный липополисахарид (или липоолигосахарид), либо липополисахарид, в котором липидная часть А была подвергнута детоксикации любым из множества известных способов (см., например, WO 97/18837 или WO 98/33923), либо любую молекулу, содержащую О-полисахарид, происходящий из указанного LPS. Под N. meningitidis LPS понимают один или более из 12 известных иммунотипов(L1, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, L10, L11 или L12). Особенно предпочтительными комбинациями являются композиции, содержащие: 1) конъюгированный Hib, конъюгированный MenA и конъюгированный MenC; 2) конъюгированный Hib, конъюгированный MenY и конъюгированный MenC; 3) конъюгированный Hib и конъюгированный MenC; и 4) конъюгированный MenA, конъюгированный MenC, конъюгированный MenY и конъюгированныйMenW-135. Количество PS в каждом из приведенных выше конъюгатов может составлять 5 или 10 мкг каждого на 0,5 мл дозы для человека. Предпочтительно, Hib, MenA, MenC, MenW-135 и MenY представляют собой ТТ-конъюгаты. Проблема, связанная с полисахаридным подходом к вакцинации, заключается в том, что полисахариды per se являются слабыми иммуногенами. Для преодоления этой проблемы сахариды по изобретению можно конъюгировать с белковыми носителями, которые обеспечивают фоновый Т-клеточный хелперный ответ. Поэтому предпочтительно, чтобы используемые в данном изобретении сахариды были связаны с таким белковым носителем. Примеры таких носителей, которые в настоящее время обычно используют для получения сахаридных иммуногенов, включают дифтерийные и столбнячные анатоксины (DT, CRM197 из DT и ТТ соответственно), гемоцианин лимфы улитки (KLH), белок D из Haemophilusinfluenzae (ЕР 59461 О-В), ОМРС из N. meningitidis и очищенное белковое производное туберкулина очищенный от белка туберкулин (PPD). Сахарид может быть связан с белком-носителем любым известным способом (например, по Likhite,патент США 4372945, и по Armor и др., патент США 4474757). Конъюгирование предпочтительно осуществляют с использованием CDAP (WO 95/08348). Предпочтительно, когда соотношение белок:сахарид (масса:масса) в конъюгатах составляет 0,3:11:1, более предпочтительно 0,6:1-0,8:1 и наиболее предпочтительно приблизительно 0,7:1. В настоящее изобретение включены комбинации антигенов, которые обеспечивают защиту против пневмококка и другого патогена. Многие педиатрические вакцины в настоящее время дают в виде комбинированной вакцины с тем, чтобы уменьшить количество инъекций, которые должен получить ребенок. Таким образом, что касается педиатрических вакцин, то другие антигены из других патогенов могут быть приготовлены вместе с пневмококковыми вакцинами по изобретению. Например, вакцины по изобретению могут быть приготовлены вместе (или введены по отдельности, но в одно и то же время) с хорошо известной "трехвалентной" комбинированной вакциной, содержащей дифтерийный анатоксин(DT), столбнячный анатоксин (ТТ) и коклюшные компоненты [обычно подвергнутый детоксикации коклюшный анатоксин (РТ) и филаментозный гемагглютинин (FHA) возможно с пертактином (PRN) и/или агглютинином 1+2], например, с имеющейся в продаже вакциной INFANRIX-DTPa (SmithKlineBeecham Biologicals), которая содержит антигены DT, ТТ, РТ, FHA и PRN, или с цельным клеточным коклюшным компонентом, например, который поставляется на рынок фирмой SmithKlineBeechamBiologicals S.A. под названием Tritanrix. Комбинированная вакцина также может содержать другой антиген, такой как поверхностный антиген гепатита В (HBsAg), антигены вируса полиомиелита (напри- 23018860 мер, трехвалентный инактивированный вирус полиомиелита - IPV), белки наружной мембраны Moraxellacatarrhalis, белки нетипируемого штамма Haemophilus influenzae, белки В наружной мембраны N. meningitidis. Примерами предпочтительных белковых антигенов Moraxella catarrhalis, которые могут быть включены в комбинированную вакцину (особенно для предупреждения воспаления среднего уха), являются: ОМР 106 [WO 97/41731 (Antex) и WO 96/34960 (PMC)]; OMP21; LbpA и/или LbpB [WO 98/55606 (PMC)];OmplA1 (PCT/EP99/06781); Hly3 (PCT/EP99/03257); и OmpE. Примеры антигенов нетипируемых штаммов Haemophilus influenzae, которые могут быть включены в комбинированную вакцину (особенно для предупреждения воспаления среднего уха), включают в себя: белок фимбрин [(US 5766608 - Ohio StateResearch Foundation)] и слитые конструкции, содержащие его пептиды [например, LB1(f)-пептидные слитые конструкции; US 5843464 (OSU) или WO 99/64067]; ОМР 26 [WO 97/01638 (Cortecs)]; P6 [ЕР 281673 (Государственный университет Нью-Йорка)]; TbpA и/или TbpB; Hia; Hsf; Hin47; Hif; Hmw1;Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15 (WO 94/12641); белок D (EP 594610); P2 и Р 5 (WO 94/26304). Другие рассматриваемые комбинации представляют собой пневмококковый сахарид и белок по изобретению в комбинации с вирусными антигенами, например, из вируса гриппа (аттенуированного,расщепленного или субъединичного [например, поверхностные гликопротеины нейраминидаза (NA) и гемагглютинин (НА). См., например, Chaloupka I. et al., Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1996, 15: 121-127], из RSV (например, антигены F и G или слияния F/G, см., например, Schmidt А.С. et al., J. Virol.,May 2001, p. 4594-4603), из PIV3 (вирус парагриппа 3) (например, белки HN и F, см. Schmidt et al., выше),вируса ветряной оспы (например, аттенуированного; гликопротеины I-V и т.д.) и из любого (или всех) компонента(ов) MMR (вакцина против кори, эпидемического паротита, краснухи). Предпочтительная комбинированная педиатрическая вакцина, рассматриваемая в настоящем изобретении для повсеместного лечения или предупреждения воспаления среднего уха, содержит один или более сахаридных антигенов Streptococcus pneumoniae (предпочтительно конъюгированных с белком D),один или более пневмококковых белков (предпочтительно таких, которые описаны выше) и один или более экспонированных на поверхности антигенов Moraxella catarrhalis и/или нетипируемого штаммаHaemophilus influenzae. Белок D может быть предпочтительно использован в качестве белкового носителя для пневмококковых сахаридов (которые упомянуты выше), и поскольку он сам является иммуногеном, способным продуцировать опосредованную В-клетками защиту против нетипируемого штамма Н.influenzae (ntHi). Антигены Moraxella catarrhalis или нетипируемого штамма Haemophilus influenzae могут быть включены в вакцину в субъединичной форме или могут быть добавлены в виде антигенов, представленных на поверхности везикул (пузырьков) наружной мембраны, приготовленных из бактерий. Иммуногенные свойства иммуногенной композиции, используемой для вакцинации по настоящему изобретению В настоящем изобретении имуногенная композиция предпочтительно способна индуцировать усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ против по меньшей мере одного из составляющих антигенов или антигенной композиции по сравнению с CD4 Т-клеточным иммунным ответом, полученным при использовании соответствующей композиции, которая является безадъювантной, т.е. не содержит какого-либо экзогенного адъюванта (обозначенной в данном описании также как "простая композиция"). В конкретном воплощении, когда иммуногенная композиция представляет собой композицию на основе вируса гриппа и когда препарат противогриппозной вакцины происходит из нескольких штаммов вируса гриппа, один из которых является пандемическим штаммом, указанный усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ направлен против пандемического штамма вируса гриппа. Под "усиленным CD4 Т-клеточным иммунным ответом" подразумевают, что более высокий CD4 ответ получают у млекопитающего после введения адъювантной иммуногенной композиции по сравнению с иммунным ответом, полученным после введения такой же композиции без адъюванта. Например,более высокий CD4 Т-клеточный ответ получают у пациента-человека после введения иммуногенной композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат вместе с адъювантом по изобретению, по сравнению с ответом, индуцированным после введения иммуногенной композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат, который является безадъювантным. Такая композиция будет преимущественно использоваться для индуцирования CD4 Т-клеточного ответа против вируса гриппа,способного определять эпитопы вируса гриппа, представленные молекулами класса II MHC. В частности, но не исключительно, указанный "усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ" получают у иммунологически "непримированного" пациента, т.е. пациента, который является серонегативным в отношении указанного вируса гриппа или антигена. Эта серонегативность может быть следствием того, что указанный пациент никогда не сталкивался с таким вирусом или антигеном (так называемый"наивный" пациент) или, альтернативно, не давал реакции на указанный антиген после встречи с ним. В конкретном аспекте указанный CD4 Т-клеточный иммунный ответ получают у субъекта с ослабленным- 24018860 иммунитетом, такого как пожилой человек, обычно в возрасте 65 лет или старше, или взрослый человек моложе 65 лет с высоким риском медицинского состояния (взрослый человек "из группы с высоким риском"), или ребенок в возрасте менее двух лет. Усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ можно оценить путем измерения количества клеток,продуцирующих любой из следующих цитокинов: клеток, продуцирующих по меньшей мере два разных цитокина (CD40L, IL-2, IFN, TNF (фактор некроза опухоли; клеток, продуцирующих, по меньшей мере, CD40L и другой цитокин (IL-2, TNF, IFN); клеток, продуцирующих, по меньшей мере, IL-2 и другой цитокин (CD40L, TNF, IFN); клеток, продуцирующих, по меньшей мере, IFN и другой цитокин (IL-2, TNF, CD40L); клеток, продуцирующих, по меньшей мере, TNF и другой цитокин (IL-2, CD40L, IFN). Усиленным CD4 Т-клеточным иммунным ответом считается такой ответ, когда количество клеток,продуцирующих любой из вышеупомянутых цитокинов, будет более высоким после введения адъювантной композиции по сравнению с введением безадъювантной композиции. Обычно будут выполнены по меньшей мере одно, предпочтительно два из пяти условий, упомянутых в данном описании выше. В конкретном воплощении клетки, продуцирующие все четыре цитокина, будут представлены в большем количестве в адъювантной группе по сравнению с безадъювантной группой. Усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ, обусловленный адъювантной противогриппозной композицией по настоящему изобретению, в идеальном случае может быть получен после однократного введения. Подход с использованием однократной дозы будет чрезвычайно подходящим, например, в ситуации быстро развивающейся эпидемии. В некоторых случаях, особенно для пожилого населения или в случае маленьких детей (в возрасте младше 9 лет), которых первый раз вакцинируют против гриппа или в случае пандемии, полезным может быть введение двух доз одинаковой композиции в течение сезона. Вторую дозу указанной одинаковой композиции (рассматриваемой еще как "композиция для первой вакцинации") можно вводить во время действия первичного иммунного ответа и через адекватный промежуток времени. Обычно вторую дозу такой композиции дают через несколько недель или приблизительно 1 месяц, например 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель или 6 недель после первой дозы, чтобы помочь примировать иммунную систему "неотвечающих" или "слабо отвечающих" индивидуумов. В другом воплощении введение указанной иммуногенной композиции индуцирует усиленный ответ В-клеток памяти у пациентов, которым введена адъювантная иммуногенная композиция, по сравнению с ответом В-клеток памяти, индуцированным у индивидуумов, иммунизированных безадъювантной композицией. Подразумевается, что усиленный ответ В-клеток памяти означает увеличенную частоту встречаемости В-лимфоцитов периферической крови, способных к дифференцировке в антителосекретирующие плазматические клетки после встречи с антигеном, как измерено посредством стимуляции дифференцировки in vitro. В другом воплощении введение указанной иммуногенной композиции индуцирует усиленный гуморальный ответ у пациентов, которым введена адъювантная иммуногенная композиция, по сравнению с гуморальным ответом, индуцированным у индивидуумов, иммунизированных безадъювантной композицией. Указанный гуморальный иммунный ответ может быть измерен согласно любой из методик, приведенных подробно в примере I, и особенно в разделах I.1 (1.1.1), I.2 (1.2.1) и I.3 (I.3.5.2). Если иммуногенная композиция представляет собой композицию по основе вируса гриппа, конкретный указанный гуморальный ответ получают против гомологичных и гетерологичных штаммов. В частности, указанный гетерологичный гуморальный иммунный ответ означает гуморальный ответ между штаммами вируса гриппа и обозначается как "перекрестно-реактивный" гуморальный иммунный ответ. Указанный "перекрестно-реактивный" гуморальный иммунный ответ включает индукцию ответа против штамма вируса гриппа, представляющего собой вариант (дрейфующий штамм) штамма вируса гриппа, используемого для вакцинации. Пример такого ответа проиллюстрирован в примере III.3.1 и на фиг. 2. В конкретном воплощении введение указанной адъювантной иммуногенной композиции индуцирует по меньшей мере два из следующих ответов: (1) усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ, (2) усиленный ответ В-клеток памяти, (3) усиленный гуморальный ответ, против по меньшей мере одного из компонентов многокомпонентного антигена(ов) или антигенной композиции по сравнению с тем и другим иммунным ответом, полученным при использовании соответствующейкомпозиции, которая является безадъювантной, т.е. не содержит какого-либо экзогенного адъюванта (обозначенной в данном описании также как "простая композиция"). В еще одном конкретном воплощении вакцинация композицией для первой вакцинации, адъювантной, не оказывает измеримого воздействия на CD8-ответ. Конкретным воплощением изобретения является то, что композиция, содержащая вирус гриппа или его антигенный препарат, изготовленный с сапониновым адъювантом, представленным в форме липосомы, в частности сапонин QS21 в блокированной холестерином форме, эффективна в стимулировании Тклеточных ответов у человеческой популяции с ослабленным иммунитетом. В одном из воплощений указанный адъювант дополнительно содержит 3D-MPL. В частности, введение однократной дозы имму- 25018860 ногенной композиции для первой вакцинации, как описано в данном изобретении, способно обеспечить улучшенную серопротекцию, как оценено посредством коррелятов защиты для противогриппозных вакцин после ревакцинации пожилого населения против гриппа по сравнению с вакцинацией безадъювантной противогриппозной вакциной. Заявленная адъювантная композиция также способна индуцировать усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ против вируса гриппа по сравнению с ответом, полученным при использовании безадъювантной композиции. Это наблюдение может быть связано с повышенной реактивностью после вакцинации или инфекции по отношению к антигенной стимуляции вирусом гриппа. Кроме того, это также может быть связано с перекрестной реактивностью, т.е. более высокой способностью отвечать на вариантные штаммы вируса гриппа. Такой усиленный ответ может быть особенно полезен для человеческой популяции с ослабленным иммунитетом, такой как пожилое население(в возрасте 65 лет и старше) и, в частности, пожилое население из группы с высоким риском. Это может приводить к снижению коэффициента общей заболеваемости и смертности и предупреждению неотложной госпитализации в случае пневмонии и других гриппозоподобных заболеваний. Это также может быть полезно для детской популяции (в возрасте менее 5 лет, предпочтительно менее 2 лет). Кроме того,это позволяет индуцировать CD4 Т-клеточный ответ, который является более стабильным во времени,например, все еще присутствует через 1 год после первой вакцинации, по сравнению с ответом, индуцированным безадъювантной композицией. В конкретном аспекте CD4 Т-клеточный иммунный ответ, такой как усиленный CD4 Т-клеточный иммунный ответ, полученный у непримированного субъекта, включает индукцию перекрестнореактивного CD4 Т-хелперного ответа. В частности, увеличивается количество перекрестно-реактивныхCD4 Т-клеток. Под "перекрестно-реактивным" CD4-ответом понимают распознавание CD4 Т-клетками общих эпитопов среди штаммов вируса гриппа. Обычно доступные противогриппозные вакцины эффективны только против инфицирующих штаммов вируса гриппа, имеющих гемагглютинины с похожими антигенными характеристиками. Если инфицирующий (циркулирующий) вирус гриппа был подвергнут минорным изменениям (таким как точечная мутация или накопление точечных мутаций, приводящее к аминокислотным изменениям, например, в поверхностных гликопротеинах, в частности гемагглютинине (антигенный дрейфующий вариант вирусного штамма, то вакцина все еще может обеспечивать некоторую защиту, хотя она может обеспечивать только ограниченную защиту, поскольку вновь созданные варианты могут ускользать от иммунитета, индуцированного предшествующей инфекцией вируса гриппа или вакцинацией. Антигенный дрейф ответственен за ежегодные эпидемии, которые происходят в течение периодов времени между пандемиями (WileySkehel, 1987, Ann. Rev. Biochem. 56, 365-394). Индукция перекрестно-реактивных CD4 Т-клеток дает дополнительное преимущество для композиции по изобретению в том, что она может также обеспечивать перекрестную защиту, другими словами, защиту против гетерологичных инфекций, т.е. инфекций, вызываемых циркулирующим штаммом вируса гриппа, который является вариантом (например, дрейфующим) штамма вируса гриппа, содержащегося в иммуногенной композиции. Это может иметь преимущество, когда циркулирующий штамм трудно культивировать на куриных эмбрионах или продуцировать в клеточной культуре, что делает использование дрейфующего штамма рабочей альтернативой. Это также может иметь преимущество в случаях, когда субъект получал первую и вторую вакцинацию с интервалом в несколько месяцев или год и когда штамм вируса гриппа в иммуногенной композиции, используемой для второй иммунизации, представляет собой дрейфующий вариантный штамм штамма, используемого в композиции, используемой для первой вакцинации. Следовательно, адъювантная противогриппозная иммуногенная композиция, которая определена в данном описании, имеет большую способность индуцировать серопротекцию и перекрестно-реактивныеCD4 Т-клетки у вакцинируемых пожилых субъектов. Это свойство может быть связано с повышенной способностью отвечать на вариантный штамм штамма, присутствующего в иммуногенной композиции. Это может служить доказательством важного преимущества в пандемической ситуации. Например, поливалентная противогриппозная иммуногенная композиция, содержащая какой-либо из штаммов Н 5, Н 2,Н 9, Н 7 или Н 6 или несколько штаммов из них, может обеспечивать повышенную способность отвечать на пандемический вариант, т.е. дрейфующий штамм указанного пандемического штамма(ов), либо после следующей далее вакцинации указанным дрейфующим штаммом, либо после инфекции указанным дрейфующим штаммом. Детекция перекрестно-реактивных CD4 Т-клеток после вакцинации противогриппозной вакцинойCD4 Т-клетки, которые способны распознавать как гомологичные, так и дрейфующие штаммы вируса гриппа, названы в настоящем документе "перекрестно-реактивными". Адъювантные противогриппозные композиции, описанные в данном изобретении, способны демонстрировать гетеросубтипическую перекрестную реактивность, поскольку наблюдается перекрестная реактивность против дрейфующих штаммов вируса гриппа. Как указано выше, способность пандемической вакцинной композиции быть эффективной против дрейфующих пандемических штаммов может служить доказательством важности этого свойства в случае пандемий. Согласно вышеприведенным наблюдениям у человека идентифицированы CD4 Т-клеточные эпитопы, общие для разных штаммов вируса гриппа (Gelder С. et al. 1998, Int. Immunol. 10(2): 211-22; GelderC.M. et al. 1996, J. Virol., 70(7): 4787-90; Gelder C.M. et al. 1995, J. Virol., 1995, 69(12): 7497-506). В конкретном воплощении адъювантная композиция может приносить дополнительную пользу,обеспечивая лучшую защиту против циркулирующих штаммов, подвергнутых более значительному изменению (такому как генетическая рекомбинация, например, между двумя разными видами) в гемагглютинине (антигенный шифт), против которых доступные в настоящее время вакцины не эффективны. Ревакцинация и композиция, использованная для ревакцинации(бустерная композиция) В одном из воплощений изобретения предложено применение вируса гриппа или его антигенного препарата в изготовлении иммуногенной композиции для ревакцинации людей, ранее вакцинированных иммуногенной композицией, заявленной в данном описании. В одном аспекте настоящего изобретения предложено применение вируса гриппа или его антигенного препарата из первого пандемического штамма вируса гриппа в изготовлении адъювантной иммуногенной композиции, как определено в данном описании, для защиты против инфекции вирусом гриппа,вызванной штаммом вируса гриппа, являющимся вариантом указанного первого штамма вируса гриппа. В другом аспекте изобретения предложено применение вируса гриппа или его антигенного препарата в изготовлении противогриппозной иммуногенной композиции для ревакцинации людей, ранее вакцинированных адъювантной противогриппозной композицией, заявленной в данном описании, или адъювантной противогриппозной композицией, содержащей вариантный штамм вируса гриппа, при этом адъювант является таким, как он определен в данном описании. В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ вакцинации человеческой популяции или отдельного человека против одного штамма вируса гриппа с последующей ревакцинацией указанного человека или популяции против вариантного штамма вируса гриппа, включающий введение указанному человеку (1) первой композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат из первого штамма вируса гриппа и адъювант, как определено в данном описании, и (2) второй иммуногенной композиции, содержащей вариантный штамм вируса гриппа указанного первого штамма вируса гриппа. В конкретном воплощении указанный первый штамм ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической вспышкой. В другом конкретном воплощении указанный вариантный штамм ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической вспышкой. В частности, ревакцинацию осуществляют с использованием противогриппозной композиции, содержащей по меньшей мере один штамм, который является циркулирующим пандемическим штаммом. Как примирующая композиция, так и бустерная композиция могут быть поливалентными, т.е. могут содержать по меньшей мере два штамма вируса гриппа. Если композиция(и) является (являются) поливалентной(ыми), то по меньшей мере один штамм ассоциирован с вспышкой пандемии или может быть связан со вспышкой пандемии. Обычно ревакцинацию осуществляют по меньшей мере через 6 месяцев после первой(ых) вакцинации(й), предпочтительно через 8-14 месяцев, более предпочтительно приблизительно через 10-12 месяцев. Иммуногенная композиция для ревакцинации (бустерная композиция) может содержать любой тип антигенного препарата, либо инактивированный, либо живой аттенуированный. Она может содержать один и тот же тип антигенного препарата, например расщепленный вирус гриппа или его антигенный препарат, или представлять собой цельновирионную вакцину или вакцину на основе очищенных НА иNA (субъединичную), что и иммуногенная композиция, используемая для первой вакцинации. Альтернативно, бустерная композиция может содержать другой тип антигена вируса гриппа, отличающийся от используемого для первой вакцинации. Предпочтительно используют расщепленный вирус. Бустерная композиция может быть адъювантной или безадъювантной. Безадъювантная бустерная композиция может представлять собой Fluarix/-Rix/lnflusplit, которую вводят внутримышечно. Данная композиция содержит три инактивированных расщепленных вирионных антигена, приготовленных из рекомендованных ВОЗ штаммов вируса гриппа соответствующего сезона. Бустерная композиция может быть адъювантной или безадъювантной. В конкретном воплощении бустерная композиция содержит сапониновый адъювант, который определен в данном описании. В конкретном воплощении иммуногенная композиция для ревакцинации (также называемая в данном описании ниже "бустерная композиция") содержит вирус гриппа или его антигенный препарат, который имеет общие CD4 Т-клеточные эпитопы с вирусом гриппа или его антигенным препаратом, используемым для первой вакцинации. Считается, что "общий CD4 Т-клеточный эпитоп" означает пептиды/последовательности/эпитопы из разных антигенов, которые могут распознаваться одной и той жеCD4-клеткой (см. примеры описанных эпитопов в: Gelder С. et al., 1998, Int. Immunol. 10(2): 211-22;Gelder C.M. et al., 1996, J. Virol. 70(7): 4787-90; Gelder C.M. et al., 1995, J. Virol. 69(12): 7497-506). В одном из воплощений изобретения бустерная композиция представляет собой одновалентную противогриппозную композицию, содержащую штамм вируса гриппа, который ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть ассоциирован с пандемической вспышкой. В частности, указанный штамм в бустерной композиции представляет собой циркулирующий пандемический штамм. Подходящими штаммами являются: H5N1, H9N2, H7N7 и H2N2, но не ограничиваются этим. Указанный штамм может быть тем же, или одним из, что и присутствующие в композиции, используемой для первой вак- 27018860 цинации. В альтернативном воплощении указанный штамм может представлять собой вариантный штамм,т.е. дрейфующий штамм, штамма, присутствующего в композиции, используемой для первой вакцинации. В другом конкретном воплощении бустерная композиция представляет собой поливалентную противогриппозную вакцину. В частности, если бустерная композиция является поливалентной вакциной,такой как двухвалентная, трехвалентная или четырехвалентная вакцина, то по меньшей мере один штамм ассоциирован с пандемической вспышкой или может быть связан с пандемической вспышкой. В конкретном воплощении два или более штамма в бустерной композиции являются пандемическими штаммами. В другом конкретном воплощении по меньшей мере один пандемический штамм в бустерной композиции представляет собой штамм того же типа или является одним из них, что и присутствующие в композиции, используемой для первой вакцинации. В альтернативном воплощении по меньшей мере один штамм может представлять собой вариантный штамм, т.е. дрейфующий штамм, по меньшей мере одного пандемического штамма, присутствующего в композиции, используемой для первой вакцинации. В частности, по меньшей мере один штамм в бустерной композиции является циркулирующим пандемическим штаммом. Бустерная композиция может быть или не быть адъювантной. Обычно бустерную композицию, если ее используют, применяют на следующий сезон гриппа, например приблизительно через один год после первой иммуногенной композиции. Бустерную композицию также можно использовать каждый последующий год (третья, четвертая, пятая вакцинация и т.д.). Бустерная композиция может быть такой же, как и композиция, используемая для первой вакцинации. Удобно, когда бустерная композиция содержит вирус гриппа или его антигенный препарат, который является вариантным штаммом вируса гриппа, используемого для первой вакцинации. В частности, штаммы вируса гриппа или их антигенный препарат выбирают в соответствии с эталонным веществом, распределяемым Всемирной организацией здравоохранения, так что они адаптированы к штамму вируса гриппа, который циркулирует в год ревакцинации. Антиген вируса гриппа или антигенная композиция, используемые при ревакцинации, предпочтительно содержат адъювант, соответственно, как описано выше. Адъювантом может быть сапонин, представленный в форме липосомы, как описано в данном изобретении выше, который является предпочтительным, возможно содержащим дополнительный адъювант, такой как 3D-MPL. В одном аспекте ревакцинация индуцирует любое одно, предпочтительно два или все, из следующего: (1) усиленный CD4-ответ против вируса гриппа или его антигенного препарата, или (2) усиленный ответ В-клеток памяти, или (3) усиленный гуморальный ответ по сравнению с эквивалентным ответом,индуцированным после первой вакцинации с применением безадъювантного вируса гриппа или его антигенного препарата. Предпочтительно, когда иммунологический ответ(ы), индуцированный после ревакцинации с применением адъювантного вируса гриппа или его антигенного препарата, как определено в данном описании, оказывается (оказываются) выше соответствующего ответа, индуцированного после ревакцинации безадъювантной композицией. Предпочтительно, когда иммунологические ответы, индуцированные после ревакцинации с применением безадъювантного, предпочтительно расщепленного,вируса гриппа, выше у популяции, первый раз вакцинированной адъювантной композицией вируса гриппа, предпочтительно расщепленного, по сравнению с соответствующим ответом у популяции, первый раз вакцинированной безадъювантной композицией расщепленного вируса гриппа, предпочтительно расщепленного. В конкретном воплощении ревакцинация субъектов бустерной композицией, содержащей вирус гриппа и сапониновый адъювант в форме липосомы, как определено в данном описании выше, показывает более высокие титры антител по сравнению с соответствующими значениями в группе людей, первый раз вакцинированных безадъювантной композицией и ревакцинируемых безадъювантной композицией. Эффект адъюванта на усиление антительного ответа на ревакцинацию особенно важен для пожилого населения, у которого, как известно, имеется низкий ответ на вакцинацию или инфекцию вирусом гриппа. Связанная с адъювантной композицией польза также была отмечена в отношении усиления CD4 Тклеточного ответа после ревакцинации. Конкретно, адъювантная композиция по изобретению способна индуцировать лучшую перекрестную реактивность против дрейфующего штамма (штамм вируса гриппа из следующего сезона гриппа) по сравнению с защитой, обеспечиваемой контрольной вакциной. Указанная перекрестная реактивность демонстрирует более продолжительную персистенцию по сравнению с полученной с применением безадъювантной композиции. Эффект адъюванта в повышении перекрестной реактивности против дрейфующего штамма важен в пандемической ситуации. В другом воплощении изобретение относится к режиму вакцинации, согласно которому первую вакцинацию осуществляют противогриппозной композицией, предпочтительно композицией расщепленного вируса гриппа, содержащей по меньшей мере один штамм вируса гриппа, который потенциально мог бы вызвать вспышку пандемии, а ревакцинацию осуществляют циркулирующим штаммом, или пандемическим штаммом, или классическим штаммом.CD4-эпитоп в НА Этот антигенный дрейф главным образом свойственен эпитопным участкам вирусных поверхностных белков гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно, что любое различие в CD4- и Вклеточных эпитопах среди разных штаммов вируса гриппа, используемое вирусом для ускользания от адаптивного ответа иммунной системы хозяина, будет играть важную роль в вакцинации против гриппа,и это действительно имеет место. У человека идентифицированы CD4 Т-клеточные эпитопы, общие для разных штаммов вируса гриппа (см., например: Gelder С. et al., 1998, Int. Immunol. 10(2): 211-22; Gelder C.M. et al., 1996, J. Virol. 70(7): 4787-90; и Gelder C.M. et al., 1995, J. Virol., 69(12): 7497-506). В конкретном воплощении ревакцинацию осуществляют путем использования бустерной композиции, содержащей вирус гриппа или его антигенный препарат, который имеет общие CD4 Т-клеточные эпитопы с антигеном вируса гриппа или его антигенным препаратом, используемым для первой вакцинации. Таким образом, данное изобретение относится к применению иммуногенной композиции, содержащей пандемический вирус гриппа или его антигенный препарат и сапонин в форме липосомы, в частности QS21 в форме, подвергнутой детоксикации холестерином, возможно с 3D-MPL, в изготовлении компонента мультидозовой вакцины для первой вакцинации, причем мультидозовая вакцина дополнительно содержит в виде повторной иммунизирующей дозы вирус гриппа или его антигенный препарат,который имеет общие CD4 Т-клеточные эпитопы с антигеном пандемического вируса гриппа или антигенным препаратом этого вируса, присутствующим в дозе, введенной при первой вакцинации. Способы вакцинации Иммуногенные композиции по изобретению можно вводить любым подходящим способом доставки, таким как интрадермальный, через слизистые, например интраназальный, пероральный, внутримышечный или подкожный. Другие способы доставки хорошо известны в данной области. Для адъювантной иммуногенной композиции предпочтительным является внутримышечный способ доставки. Интрадермальная доставка представляет собой другой подходящий способ. Для интрадермальной доставки может быть использовано любое подходящее устройство, например устройства с короткой иглой, такие как устройства, описанные в US 4886499, US 5190521, US 5328483, US 5527288, US 4270537,US 5015235, US 5141496, US 5417662. Интрадермальные вакцины также можно вводить посредством устройств, ограничивающих эффективную длину проникновения иглы внутрь кожи, таких как устройства, описанные в WO 99/34850 и ЕР 1092444, которые включены в данное описание посредством ссылки,и их функциональных эквивалентов. Кроме того, подходят устройства с безыгольным впрыскиванием, с помощью которых доставляют жидкие вакцины в дерму посредством безыгольного инжектора для жидкостей или посредством иглы, которой прокалывают роговичный слой и создают струю, достигающую дерму. Устройства с безыгольным впрыскиванием описаны, например, в US 5480381, US 5599302,US 5334144, US 5993412, US 5649912, US 5569189, US 5704911, US 5383851, US 5893397, US 5466220,US 5339163, US 5312335, US 5503627, US 5064413, US 5520639, US 4596556, US 4790824, US 4941880,US 4940460, WO 97/37705 и WO 97/13537. Кроме того, подходят баллистические устройства для доставки порошков/частиц, в которых используется сжатый газ для ускорения прохождения вакцины в порошковой форме через внешние слои кожи в дерму. Кроме того, в классическом способе интрадермального введения манту могут быть использованы традиционные шприцы. Другим подходящим способом введения является подкожный способ. Любое подходящее устройство может быть использовано для подкожной доставки, например классическая игла. Предпочтительно используют действие безыгольного инжектора, как, например, опубликовано в WO 01/05453,WO 01/05452, WO 01/05451, WO 01/32243, WO 01/41840, WO 01/41839, WO 01/47585, WO 01/56637,WO 01/58512, WO 01/64269, WO 01/78810, WO 01/91835, WO 01/97884, WO 02/09796, WO 02/34317. Более предпочтительно, когда указанное устройство предварительно заполнено жидкой вакцинной композицией. Альтернативно, вакцину вводят интраназально. Обычно вакцину вводят местно в носоглоточную область, предпочтительно без осуществления распыления в легкие. Желательно использовать устройство для интраназальной доставки, которое доставляет вакцинную композицию в носоглоточную область, без или по существу без ее проникновения в легкие. Предпочтительными устройствами для интраназального введения вакцин по изобретению являются распылительные устройства. Подходящие имеющиеся в продаже назальные распылительные устройства включают Accuspray (Becton Dickinson). Небулайзеры продуцируют очень мелкий аэрозоль, который может легко вдыхаться в легкие, и, следовательно, он не достигнет эффективно слизистых оболочек носа. Следовательно, небулайзеры не являются предпочтительными. Предпочтительными распылительными устройствами для интраназального применения являются устройства, эффективность которых не зависит от давления, прилагаемого пользователем. Эти устройства известны как устройства с пороговым давлением. Жидкость высвобождается из сопла только тогда,когда приложено пороговое давление. Эти устройства позволяют легче достичь получения аэрозоля с регулярным размером капелек. Устройства с пороговым давлением, подходящие для применения в на- 29