Антиген, связанный с вариантами рака легкого и лимфомами
Номер патента: 17995
Опубликовано: 30.04.2013
Авторы: Трачсел Эвелин, Нери Дарио, Вилла Алессандра, Рибак Яша-Николай
Формула / Реферат
1. Применение антитела, которое связывает изоформу фибронектина с дополнительным доменом A (ED-A), для получения лекарственного средства для лечения рака легкого, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или где домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
2. Применение антитела, которое связывает изоформу фибронектина с дополнительным доменом A (ED-A), для получения лекарственного средства для лечения лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
3. Применение по п.2, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.
4. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой.
5. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с молекулой, которая обладает биоцидной или цитотоксической активностью.
6. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с радиоизотопом.
7. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для доставки в опухоль легкого молекулы, конъюгированной с антителом, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
8. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для доставки в лимфому молекулы, конъюгированной с антителом, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
9. Применение по п.8, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.
10. Применение по любому из пп.7-9, где молекула представляет собой выявляемую метку.
11. Применение по любому из пп.7-9, где молекула обладает биоцидной или цитотоксической активностью.
12. Применение по любому из пп.7-9, где конъюгированная молекула представляет собой радиоизотоп.
13. Применение по любому из пп.1-12, где каркасная область домена VH получена из каркасной области зародышевой линии человека.
14. Применение по п.13, где домен VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 или 111.
15. Применение по любому из пп.1-14, где каркасная область домена VL получена из каркасной области зародышевой линии человека.
16. Применение по п.15, где домен VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 или 112.
17. Применение по любому из пп.1-16, где антитело представляет собой одноцепочечный Fv.
18. Применение по любому из пп.1-16, где антитело представляет собой диатело.
19. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для диагностики рака легкого, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
20. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для диагностики лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
21. Применение по п.20, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.
22. Способ выявления или диагностики рака легкого у человека или животного, включающий стадии:
(a) введения человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина; и
(b) выявления наличия или отсутствия антитела в легком организма человека или животного,
где локализация антитела связывания в легком человека или животного указывает на наличие рака легкого, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
23. Способ выявления или диагностики лимфомы у человека или животного, включающий стадии:
(a) введения человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина; и
(b) выявления наличия или отсутствия антитела в лимфатической системе организма человека или животного,
где локализация антитела в лимфатической системе человека или животного указывает на наличие лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
24. Способ по любому из пп.22, 23, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой.
25. Способ по любому из пп.22, 23, где антитело конъюгировано с радиоизотопом.
26. Способ лечения рака легкого у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
27. Способ лечения лимфомы у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
28. Способ по п.27, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.
29. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой.
30. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с молекулой, которая обладает биоцидной или цитотоксической активностью.
31. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с радиоизотопом.
32. Способ доставки молекулы к новообразованной сосудистой сети опухоли легкого у человека или животного, включающий введение человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело конъюгировано с молекулой, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
33. Способ доставки молекулы к новообразованной сосудистой сети лимфомы у человека или животного, включающий введение человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело конъюгировано с молекулой, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше.
34. Способ по п.33, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому.
35. Способ по любому из пп.32-34, где молекула представляет собой выявляемую метку.
36. Способ по любому из пп.32-34, где молекула обладает биоцидной или цитотоксической активностью.
37. Способ по любому из пп.32-34, где молекула представляет собой радиоизотоп.
38. Способ по любому из пп.22-37, где каркасная область домена VH получена из каркасной области зародышевой линии человека.
39. Способ по п.38, где домен VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 или 111.
40. Способ по любому из пп.22-39, где каркасная область домена VL получена из каркасной области зародышевой линии человека.
41. Способ по п.40, где домен VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 или 112.
42. Способ по любому из пп.22-41, где антитело представляет собой одноцепочечный Fv.
43. Способ по любому из пп.22-41, где антитело представляет собой диатело.
Текст
АНТИГЕН, СВЯЗАННЫЙ С ВАРИАНТАМИ РАКА ЛЕГКОГО И ЛИМФОМАМИ Изобретение относится к участнику связывания, который связывает изоформу фибронектина с дополнительным доменом A (ED-А), для выявления и лечения рака легкого и лимфомы. Настоящее изобретение относится к выявлению и лечению рака легкого. Настоящее изобретение также относится к выявлению и лечению лимфом. Изобретение включает использование участника связывания, который связывает изоформу ED-A фибронектина, особенно участника связывания, который связывает домен ED-A фибронектина. Ангиогенез характеризуется ростом новых кровеносных сосудов от существующих кровеносных сосудов и редко встречается у взрослых индивидуумов, но является характерной чертой многих заболеваний, включая рост солидных опухолей. Опухолям требуется ангиогенез для роста свыше нескольких миллиметров в диаметре, и опухоли могут индуцировать ангиогенез путем секреции различных ростовых факторов, например фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF). Новые кровеносные сосуды, образованные в результате ангиогенеза, обозначаются как неоваскуляризация опухоли, и сильная неоваскуляризация является характерной чертой агрессивной опухоли. Фибронектин (FN) представляет собой гликопротеин и широко экспрессируется в различных нормальных тканях и жидкостях организма. Он является компонентом внеклеточного матрикса (ЕСМ) и играет роль во многих биологических процессах, включая клеточную адгезию, миграцию клеток, гемостаз, тромбоз, заживление ран, дифференцировку тканей и опухолевую трансформацию. Различные изоформы FN продуцируются в результате альтернативного сплайсинга трех областей(ED-A, ED-B, IIICS) первичного транскрипта пре-мРНК FN, процесса, который модифицируется цитокинами и внеклеточным рН (Balza, 1988; Carnemolla, 1989; Borsi, 1990; Borsi, 1995). Фибронектин содержит два глобулярных дополнительных домена типа III, которые могут подвергаться альтернативному сплайсингу: ED-A и ED-B (Ffrench-Constant, 1995, Hynes, 1990, Kaspar et al., 2006). Домены ED-A фибронектина мыши и фибронектина человека идентичны на 96,7% (различия между двумя последовательностями из 90 аминокислот есть только в 3 аминокислотах, см. фиг. 2). Экспрессия ED-A фибронектина описана в опухолевых клетках и солидных опухолях на уровне мРНК при раке молочной железы (Jacobs et al., 2002, Matsumoto et al., 1999) и раке печени (Oyama et al.,1989, Tavian et al., 1994) и на уровне выделенного белка в фибросаркоме, рабдомиосаркоме и меланоме(Borsi et al., 1987). На иммуногистохимическом уровне присутствие ED-A выявлено во внеклеточном матриксе (ЕСМ) одонтогенных опухолей (Heikinheimo et al., 1991) и гепатоцеллюлярной карциномы (Koukoulis et al.,1995). Напротив, ED-A выявлен в строме злокачественных неоплазий молочной железы (Koukoulis et al.,1993) и в кровеносных сосудах и базальных мембранах хорошо дифференцированной почечно-клеточной карциномы (Lohi et al., 1995). Однако в малодифференцированной почечно-клеточной карциноме (Lohi etal., 1995) и в папиллярной карциноме щитовидной железы (Scarpino et al., 1999) ED-A выявлен в кровеносных сосудах, базальных мембранах и строме опухолей. Описано также присутствие ED-A в сосудистой сети глиом (Borsi et al., 1998). Таким образом, паттерн экспрессии ED-A, описанный для различных типов опухолей, существенно варьируется. В настоящем описании заявители показали, что ED-A избирательно экспрессируется во вновь образованных сосудах опухолей легкого, включая опухоли мелкоклеточного рака легкого и немелкоклеточного рака легкого. Так как опухолевые кровеносные сосуды легкодоступны для вводимых внутривенно терапевтических агентов (Neri and Bicknell, 2005, Rybak et al., 2006, Thorpe, 2004, Trachsel and Neri, 2006),связывающие молекулы, такие как молекулы антител, которые связывают A-FN и/или ED-A фибронектина, представляют собой новые агенты, которые могут быть использованы для получения лекарственного средства для лечения рака легкого, включая мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого. Кроме того, в настоящем описании заявители показали, что ED-A избирательно экспрессируется во вновь образованных сосудах лимфом. Так как опухолевые кровеносные сосуды легкодоступны для вводимых внутривенно терапевтических агентов (Neri and Bicknell, 2005, Rybak et al., 2006, Thorpe, 2004,Trachsel and Neri, 2006), связывающие молекулы, такие как молекулы антител, которые связывают A-FN и/или ED-A фибронектина, представляют собой новые агенты, которые могут быть использованы для получения лекарственного средства для лечения лимфом. Терапия неоваскуляризации опухолей (терапия, направленная на сосуды опухолей) является многообещающим подходом к лечению опухолей. Терапия, направленная на сосуды опухолей, проводится с целью нарушения васкуляризации в самой опухоли, снижения кровотока для лишения поступления кислорода и питательных веществ в опухоль, что вызывает гибель опухолевых клеток. В настоящем описании предлагаются антитела против ED-A, которые селективно узнают вновь образованные кровеносные сосуды опухолей легкого, включая мелкоклеточные опухоли легкого и немелкоклеточные опухоли легкого. В настоящем описании дополнительно предлагаются антитела против ED-A, которые селективно узнают вновь образованные кровеносные сосуды лимфом. В этом изобретении предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела,которая связывает дополнительный домен A (ED-A) изоформы фибронектина (A-FN), для получения лекарственного средства для лечения рака легкого. В изобретении предлагается также применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для лечения рака легкого. В этом изобретении предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела,которая связывает дополнительный домен A (ED-A) изоформы фибронектина (A-FN), для получения лекарственного средства для лечения лимфомы. В изобретении предлагается также применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для лечения лимфомы. В изобретении дополнительно предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, для доставки к вновь образованным сосудам опухоли легкого молекулы, конъюгированной с участником связывания. В изобретении также предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для доставки к вновь образованным сосудам опухоли легкого молекулы, конъюгированной с участником связывания. Участник связывания может быть использован для получения лекарственного средства для доставки такой молекулы. В изобретении дополнительно предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, для доставки к вновь образованным сосудам лимфомы молекулы, конъюгированной с участником связывания. В изобретении также предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для доставки к вновь образованным сосудам лимфомы молекулы, конъюгированной с участником связывания. Участник связывания может быть использован для получения лекарственного средства для доставки такой молекулы. В изобретении предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для использования в диагностике рака легкого. В изобретении предлагается также применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для использования в диагностике рака легкого. В изобретении предлагается применение участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для использования в диагностике лимфомы. В изобретении предлагается также применение участника связывания,например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для использования в диагностике лимфомы. В изобретении дополнительно предлагается способ определения или диагностики рака легкого у человека или животного, включающий стадии:(a) введения человеку или животному участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина; и(b) определения присутствия или отсутствия участника связывания в легком организма человека или животного, где локализация участника связывания в легком указывает на наличие рака легкого. В изобретении дополнительно предлагается способ определения или диагностики лимфомы у человека или животного, включающий стадии:(a) введения человеку или животному участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина; и(b) определения присутствия или отсутствия участника связывания в лимфатической системе организма человека или животного, где локализация участника связывания в лимфатической системе человека или животного указывает на наличие лимфомы. В настоящем изобретении предлагается способ лечения рака легкого у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего участника связывания, например молекулу антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина. В настоящем изобретении предлагается также способ лечения рака легкого у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства,включающего участника связывания, например молекулу антитела, которая связывает ED-A фибронектина. В настоящем изобретении предлагается способ лечения лимфомы у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего участника связывания, например молекулу антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина. В настоящем изобретении предлагается также способ лечения лимфомы у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего участника связывания, например молекулу антитела, которая связывает ED-A фибронектина. В изобретении предлагается способ доставки молекулы к вновь образованным сосудам опухоли легкого человека или животного, включающий введение человеку или животному участника связывания,например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, где участник связывания конъюгирован с молекулой. В изобретении предлагается также способ доставки молекулы к вновь образованным сосудам опухоли легкого человека или животного, включающий введение человеку или животному участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина,-2 017995 где участник связывания конъюгирован с молекулой. В изобретении предлагается способ доставки молекулы к вновь образованным сосудам лимфомы человека или животного, включающий введение человеку или животному участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает изоформу ED-A фибронектина, где участник связывания конъюгирован с молекулой. В изобретении предлагается также способ доставки молекулы к вновь образованным сосудам лимфомы человека или животного, включающий введение человеку или животному участника связывания, например молекулы антитела, которая связывает ED-A фибронектина, где участник связывания конъюгирован с молекулой. Участник связывания для применения по изобретению может представлять собой антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина, включающее одну или более областей, определяющих комплементарность (CDRs), антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9,или их вариантов. Предпочтительно участник связывания для применения по изобретению представляет собой антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина, включающее одну или более областей, определяющих комплементарность (CDRs), антитела В 2, С 5, D5, С 8, F8,В 7 или G9, или их вариантов. Наиболее предпочтительно участник связывания для применения по изобретению представляет собой антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина, включающее одну или более областей, определяющих комплементарность (CDRs), антитела F8 или его вариантов. Участник связывания для применения по изобретению может включать набор Н и/или L CDRs антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9 или набор Н и/или L CDRs антитела H1, B2, С 5, D5,Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9 с десятью или менее, например одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами в раскрытом наборе Н и/или L CDRs. Предпочтительно участник связывания для применения по изобретению включает набор Н и/или L CDRs антитела В 2, С 5, D5, С 8, F8, В 7 или G9 с десятью или менее, например одной, двумя, тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами в раскрытом наборе Н и/или L CDRs. Предпочтительно участник связывания для применения по изобретению включает набор Н и/или L CDRs антитела F8 с десятью или менее, например одной, двумя,тремя, четырьмя или пятью аминокислотными заменами в раскрытом наборе Н и/или L CDRs. Потенциально могут быть сделаны замены любого остатка в наборе CDRs и они могут быть вCDR1, CDR2 и/или CDR3. Например, участник связывания для применения по изобретению может включать одну или болееCDRs, как описано в настоящем документе, например CDR3, и необязательно также CER1 и CDR2 с образованием набора CDRs. Участник связывания для применения по изобретению может также включать молекулу антитела,например молекулу антитела человека. Участник связывания обычно включает домен VH или VL антитела. Домены VH участников связывания также предлагаются для применения по изобретению. В каждом из VH и VL доменов находятся области, определяющие комплементарность ("CDRs"), и области каркаса ("FRs"). Домен VH включает набор HCDRs, а домен VL включает набор LCDRs. Молекула антитела может включать домен VH антитела, включающий VH CDR1, CDR2 и CDR3 и каркас. Альтернативно или также она может включать домен VL антитела, включающий VL CDR1, CDR2 и CDR3 и каркас. В настоящем документе описаны домены VH и VL и CDRs антител H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1,В 7, E8 и G9. Все последовательности VH и VL, последовательности CDR, наборы CDRs, наборы HCDRs и наборы LCDRs, раскрытые в настоящем описании, представляют собой варианты осуществления участника связывания для применения по изобретению. Как описано в настоящем документе, "набор CDRs" включает CDR1, CDR2 и CDR3. Таким образом, набор HCDRs относится к HCDR1, HCDR2 и HCDR3, а набор LCDRs относится к LCDR1, LCDR2 и LCDR3. Если не указано иное, "набор CDRs" включаетHCDRs и LCDRs. Участник связывания для применения по изобретению может включать домен VH антитела, включающий области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и каркас,где HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113 и где необязательно HCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 4 и/или HCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 5. Предпочтительно HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 23, 33, 43, 53, 73, 83 или 103. Наиболее предпочтительно HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 83. Обычно домен VH составляет пару с доменом VL для обеспечения антигенсвязывающего сайта, хотя, как обсуждается далее ниже, для связывания антигена может быть использован или домен VH, илиVL, поодиночке. Таким образом, участник связывания для применения по изобретению может дополнительно включать домен VL антитела, включающий области, определяющие комплементарность LCDR1,LCDR2 и LCDR3 и каркас, где LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116 и где необязательно LCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 7 и/или LCDR3 представляет собойSEQ ID NO: 8. Предпочтительно LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 26, 36, 46, 56, 76, 86 или 106. Более предпочтительно LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 86. Участник связывания для применения по изобретению может представлять собой выделенную молекулу антитела против ED-A фибронектина, включающую домен VH и домен VL, где домен VH включает каркас и набор областей, определяющих комплементарность HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и где доменHCDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, HCDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5, LCDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116; LCDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 7 и LCDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8. Одна или более CDRs или набор CDRs антитела могут быть вставлены в каркас (например, в каркас антитела человека) для предоставления молекулы антитела для применения по изобретению. Области каркаса могут включать сегменты последовательностей гена зародышевой линии человека. Таким образом, каркас может быть подогнан к зародышевой линии за счет того, что один или более остатков в каркасе заменены для соответствия с остатками в эквивалентном положении в каркасе, наиболее сходном с каркасом зародышевой линии человека. Участник связывания для применения по изобретению может представлять собой выделенную молекулу антитела, обладающую доменом VH, включающим наборHCDRs в каркасе зародышевой линии человека, например DP47. Обычно участник связывания обладает также доменом VL, включающим набор HCDRs в каркасе зародышевой линии человека, например,включающим набор LCDRs, например, в каркасе зародышевой линии человека. Каркас зародышевой линии человека домена VL может представлять собой DPK22. Домен VH для применения по изобретению может иметь аминокислотную последовательность SEQID NO: 1, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 или 111. Предпочтительно домен VH для применения по изобретению имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, 31, 41, 51, 71, 81 или 101. Наиболее предпочтительно домен VH для применения по изобретению имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81. Домен VL для применения по изобретению может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 или 112. Предпочтительно домен VL для применения по изобретению имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, 32, 42, 52, 72,82 или 102. Наиболее предпочтительно домен VL для применения по изобретению имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82. Участник связывания для применения по изобретению может представлять собой одноцепочечныйFv (scFv), включающий домен VH и домен VL, соединенные через пептидный линкер. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую длину и последовательность линкера, например, по меньшей мере 5 или 10 аминокислот в длину, до приблизительно 15, 20 или 25 аминокислот в длину. Линкер может иметь последовательность GSSGG (SEQ ID NO: 28). scFv может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 или включать ее. Альтернативно, участник связывания для применения по изобретению может включать антигенсвязывающий сайт в молекуле, не являющейся антителом, обычно предлагаемый как одна или более CDRs,например набор CDRs в каркасном белке, не являющемся антителом. Участники связывания, включая молекулы антител и молекулы, не являющиеся антителами, описаны более подробно в настоящем описании в другом месте. Участник связывания для применения по изобретению может быть конъюгирован с молекулой, которая обладает биологической или цитотоксической активностью. Альтернативно, участник связывания для применения по изобретению может быть конъюгирован с радиоактивным изотопом. Как еще одна альтернатива, участник связывания для применения по изобретению может быть помечен определяемой меткой. Эти и другие аспекты изобретения описываются дополнительно более подробно ниже. Краткое описание чертежей На фиг. 1 показано иммуногистохимическое окрашивание срезов первичных опухолей легкого антителом D5 scFv против ED-А. В колонке 1 показана классификация рака легкого: А: мелкоклеточный рак легкого, В: немелкоклеточные типы рака легкого, С: сквамозноклеточная карцинома, D: аденокарцинома, Е: бронхоальвеолярная карцинома и F: крупноклеточная карцинома. В колонках 2 и 3 показано иммуногистохимическое определение ED-A на срезах тканей опухолей легкого различных подтипов. Срезы тканей, представленные в колонках 2 и 3 для каждого подтипа, получены от одного и того же образца опухоли. Иммуногистохимическое окрашивание (более темные линии) выявило интенсивный характер окрашивания сосудов в срезах первичных опухолей как в А: мелкоклеточный рак легкого, так и в В: немелкоклеточные типы рака легкого, (С: сквамозноклеточная карцинома, D: аденокарцинома, Е: бронхоальвеолярная карцинома и F: крупноклеточная карцинома). На фиг. 2 показано выравнивание между A: ED-A человека (верхняя последовательность) и В: ED-A мыши (нижняя последовательность). Звездочки указывают на положения аминокислот, где аминокислоты ED-A человека и ED-A мыши идентичны. На фиг. 3 А показана нуклеотидная последовательность тяжелой цепи (VH) антитела H1 против EDA (SEQ ID NO: 12). Нуклеотидная последовательность CDR1 тяжелой цепи антитела H1 против ED-A подчеркнута. Нуклеотидная последовательность CDR2 тяжелой цепи антитела H1 против ED-A представлена курсивом и подчеркнута. Нуклеотидная последовательность CDR3 тяжелой цепи антитела H1 против ED-A представлена жирным шрифтом и подчеркнута. В: представлена нуклеотидная последова-4 017995 тельность линкера антитела H1 против ED-A (SEQ ID NO: 14). С: показана нуклеотидная последовательность легкой цепи (VL) антитела H1 против ED-A (SEQ ID NO: 13). Нуклеотидная последовательностьCDR1 легкой цепи антитела H1 против ED-A подчеркнута. Нуклеотидная последовательность CDR2 легкой цепи антитела H1 против ED-A представлена курсивом и подчеркнута. Нуклеотидная последовательность CDR3 легкой цепи антитела H1 против ED-A представлена жирным шрифтом и подчеркнута. На фиг. 4 А показана аминокислотная последовательность тяжелой цепи (VH) антитела H1 противED-A (SEQ ID NO: 1). Аминокислотная последовательность CDR1 тяжелой цепи (SEQ ID NO: 3) антитела H1 против ED-A подчеркнута. Аминокислотная последовательность CDR2 тяжелой цепи (SEQ ID NO: 4) антитела H1 против ED-A представлена курсивом и подчеркнута. Аминокислотная последовательность CDR3 тяжелой цепи (SEQ ID NO: 5) антитела H1 против ED-A представлена жирным шрифтом и подчеркнута. В: представлена аминокислотная последовательность линкера антитела H1 против ED-A(SEQ ID NO: 11). С: показана аминокислотная последовательность легкой цепи (VL) антитела H1 противCDR3 легкой цепи (SEQ ID NO: 8) антитела H1 против ED-A представлена жирным шрифтом и подчеркнута. Терминология Фибронектин. Фибронектин представляет собой антиген, подвергаемый альтернативному сплайсингу, и известен ряд альтернативных изоформ фибронектина, как описано в настоящем описании в другом месте. Дополнительный домен A (EDA или ED-A) известен также как ED, дополнительный повтор А типа III (EIIIA) или EDI. Последовательность ED-A человека опубликована Kornblihtt et al. (1984), Nucleic Acids Res. 12,5853-5868, и Paolella et al. (1988), Nucleic Acids Res. 16, 3545-3557. Последовательность ED-A человека доступна также в базе данных SwissProt как аминокислоты 1631-1720 (фибронектин типа-III 12; дополнительный домен 2) аминокислотной последовательности, положенной на хранение под номером доступа Р 02751. Последовательность ED-A мыши доступна в базе данных SwissProt как аминокислоты 17211810 (фибронектин типа-III 13; дополнительный домен 2) аминокислотной последовательности, положенной на хранение под номером доступа Р 11276. Изоформа ED-A фибронектина (A-FN) содержит дополнительный домен A (ED-A). Последовательность A-FN человека может быть выведена из соответствующей последовательности предшественника фибронектина человека, которая доступна в базе данных SwissProt под номером доступа Р 02751. Последовательность A-FN мыши может быть выведена из соответствующей последовательности предшественника фибронектина мыши, которая доступна в базе данных SwissProt под номером доступа Р 11276. A-FN может представлять собой изоформу ED-A фибронектина человека. ED-A может представлять собой дополнительный домен А фибронектина человека.ED-A представляет собой последовательность из 90 аминокислот, которая вставлена в фибронектин(FN) в результате альтернативного сплайсинга и локализована между доменами 11 и 12 FN (Borsi et al.,1987, J. Cell Biol., 104, 595-600). ED-A преимущественно отсутствует в форме FN в плазме крови, но распространен в ходе эмбриогенеза, ремоделинга тканей, фиброза, при пересадке сердца и росте солидных опухолей. Альтернативный сплайсинг. Альтернативный сплайсинг относится к осуществлению различных паттернов сплайсинга первичного транскрипта РНК с ДНК с получением различных мРНК. После вырезания интронов селекцией можно определить, какие экзоны будут соединяться вместе с образованием мРНК. Альтернативный сплайсинг ведет к продукции различных изоформ, содержащих различные экзоны и/или различное количество экзонов. Например, одна изоформа может включать дополнительную аминокислотную последовательность, соответствующую одному или более экзонам, которые могут включать один или более доменов. Лимфома. Так описывается тип рака, который вовлекает клетки иммунной системы, называемые лимфоцитами, и характеризуется аномальной пролиферацией этих клеток. Существует много различных подтипов лимфом, и они могут быть сгруппированы в две основные категории: лимфомы Ходжкина и неходжкинские лимфомы. Лимфомы Ходжкина развиваются из особой аномальной линии дифференцировки Влимфоцитов, тогда как неходжкинские лимфомы могут происходить из аномальных либо В-, либо Т- илиNK клеток и отличаются уникальными генетическими маркерами. Лимфома Беркитта является примером В-клеточной неходжкинской лимфомы. Как обозначается в настоящем описании, лимфома может быть первичной лимфомой. Как обозначается в настоящем описании, лимфома может быть лимфомой Ходжкина или неходжкинской лимфомой. Предпочтительно, как обозначается в настоящем описании, лимфома представляет собой первичную лимфому Ходжкина или первичную неходжкинскую лимфому. Рак легкого. Так описывается малигнизированная трансформация и экспансия легочной ткани. Типы рака легкого могут быть сгруппированы в две главные категории: типы мелкоклеточного рака легкого (мелкоклеточная карцинома) и типы немелкоклеточного рака легкого. Подтипами немелкоклеточного рака легкого являются сквамозноклеточная карцинома, аденокарцинома (адено-карцинома) и крупноклеточная карцинома. Бронхоальвеолярная карцинома является подтипом аденокарциномы. Как обозначается в настоящем описании, рак легкого может быть первичным раком легкого. Опухоль легкого является опухолью в легком животного (например, человека), которая является результатом развития рака легкого. Как обозначается в настоящем описании, опухоль легкого может быть первичной опухолью легкого. Первичная опухоль. Так описывается опухоль в том месте, где опухоль появилась впервые (первичное место). Первичные опухоли иногда распространяются вне места их происхождения (первичного места) с образованием вторичных опухолей (метастазов) в других местах в организме животного, и это распространение обозначается как метастазирование. Участник связывания. Так описывается один участник пары молекул, которые связывают друг друга. Участники пары связывания могут иметь природное происхождение или полностью либо частично продуцироваться синтетически. Один участник пары молекул обладает на своей поверхности областью или полостью, которая связывает и, следовательно, комплементарна конкретной пространственной и полярной организации другого участника пары молекул. Примерами типов связывающих пар являются антиген-антитело, биотин-авидин, гормон-гормональный рецептор, рецептор-лиганд, фермент-субстрат. Настоящее изобретение касается типов реакций антиген-антитело. Участник связывания обычно включает молекулу, обладающую антигенсвязывающим сайтом. Например, участник связывания может представлять собой молекулу антитела или белок, не являющийся антителом, который включает антигенсвязывающий сайт. Антигенсвязывающий сайт может быть обеспечен посредством размещения областей, определяющих комплементарность (CDRs), в каркасных белках, не являющихся антителами, таких как фибронектин или цитохром В и т.д. (HaanMaggos, 2004; Koide, 1998; Nygren, 1997), или путем рандомизации или мутирования аминокислотных остатков петли в каркасном белке для придания специфичности связывания желаемой мишени. Каркасы для конструирования новых связывающих сайтов в белках подробно обсуждаются Nygren et al. (1997). Каркасные белки - миметики антител раскрыты в патентеWO/0034784, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме, в котором изобретатели описывают белки (миметики антител), которые включают домен типа III фибронектина, обладающий по меньшей мере одной рандомизированной петлей. Подходящий каркас, в который вставляют одну или более CDRs, например набор HCDRs, может быть обеспечен любым доменным членом надсемейства генов иммуноглобулинов. Каркас может быть белком человека или белком не от человека. Преимущество каркасного белка, не являющегося антителом, состоит в том, что он может обеспечить антигенсвязывающим сайтом молекулу каркаса, которая имеет меньший размер и/или более проста в получении, чем, по меньшей мере, некоторые молекулы антител. Малый размер участника связывания может придавать полезные физиологические свойства, такие как способность к вхождению в клетки, глубине проникновения в ткани или достижению мишеней без других структур, или связывание с белковыми полостями антигена-мишени. Использование антигенсвязывающих сайтов в каркасных белках, не являющихся антителами, обсуждается в статье Wess, 2004. Типичными являются белки, обладающие стабильным остовом и одной или более вариабельными петлями, в которых аминокислотная последовательность петли или петель прицельно или рандомизированно мутирована для создания антигенсвязывающего сайта, который связывает антиген-мишень. Такие белки включают IgG-связывающие домены белка А из S. aureus, трансферрин, тетранектин, фибронектин (например, домен типа III 10 фибронектина) и липокалины. Другие подходы включают синтетические "микротела" (Selecore GmbH), основанные на циклотидах - малых белках, обладающих внутримолекулярными дисульфидными связями. В дополнение к последовательностям антитела и/или антигенсвязывающего сайта участник связывания для применения по изобретению может включать другие аминокислоты, например, образующие пептид или полипептид, такой как домен укладки, или для придания молекуле другой функциональной характеристики в дополнение к способности связывать антиген. Участники связывания для применения по изобретению могут нести определяемую метку, или могут быть конъюгированы с токсином или с частью для направленной доставки, или с ферментом (например, через пептидильную связь или линкер). Например, участник связывания может включать каталитический сайт (например, в ферментативном домене), а также антигенсвязывающий сайт, где антигенсвязывающий сайт связывается с антигеном и таким образом направляет каталитический сайт на антиген. Каталитический сайт может ингибировать биологическую функцию антигена, например, путем расщепления. Хотя, как отмечалось, CDRs могут нести каркасы, не являющиеся антителами, структура для включения CDR или набора CDRs должна обычно представлять собой последовательность тяжелой или легкой цепи антитела или ее существенную часть, в которой CDR или набор CDRs локализован в положе-6 017995 нии, соответствующем CDR или набору CDRs вариабельных доменов природных VH и VL антитела,кодируемых реорганизованными генами иммуноглобулинов. Структура и локализация вариабельных доменов иммуноглобулинов может быть определена со ссылкой на Kabat, 1987, и его модернизированного варианта, доступного в настоящее время в Интернете (на сайте immuno.bme.nwu.edu или по поиску"Kabat" с использованием любой системы поиска). Под областью CDR или CDR подразумевается указание гипервариабельных областей тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, как определено Kabat et al. (1987) (Kabat, 1991a, и более поздние издания). Антитело обычно содержит 3 CDRs тяжелой цепи и 3 CDRs легкой цепи. Термин CDR или CDRs используется в настоящем описании для указания соответственно случаю одной или нескольких из этих областей или даже всех этих областей, которые содержат основную часть аминокислотных остатков, ответственных за связывание с аффинностью антитела к антигену или к эпитопу, который узнается. Среди шести коротких последовательностей CDR третья CDR тяжелой цепи (HCDR3) имеет более высокую величину вариабельности (более высокие различия, по существу, обусловлены механизмами организации генов, которые их вызывают). Она может быть настолько короткой как 2 аминокислоты,хотя известный наиболее длинный размер составляет 26. Функционально HCDR3 частично играет роль в детерминации специфичности антитела (Segal, 1974; Amit, 1986; Chothia, 1987; Chothia, 1989; Caton,1990; Sharon, 1990a; Sharon, 1990b; Kabat et al., 1991b). Молекула антитела. Так описывается иммуноглобулин, либо природный, либо частично или полностью полученный синтетическим путем. Термин также покрывает любой полипептид или белок, включающий антигенсвязывающий сайт антитела. В настоящем описании должно быть понятно, что изобретение не относится к антителам в их природной форме, что означает, что они не находятся в их природном окружении, но что их можно выделить или получить из природных источников путем очистки или, кроме того, получить путем генетической рекомбинации или химического синтеза, и что они могут затем содержать неприродные аминокислоты, как будет описано ниже. Фрагменты антител, которые включают антигенсвязывающий сайт антитела, включают, но не ограничиваются этим, молекулы антител, такие как Fab, Fab',Fab'-SH, scFv, Fv, dAb, Fd, и диатела. Можно применять моноклональные и другие антитела и использовать технологии рекомбинантных ДНК для получения других антител или гибридных молекул, которые связывают антиген-мишень. Такие способы могут включать вставку ДНК, кодирующей вариабельную область иммуноглобулина или CDRs антитела, к константным областям или к константным областям плюс области каркаса отличного иммуноглобулина, см., например, патенты ЕР-А-184187, GB 2188638A или ЕР-А-239400 и огромное количество более поздней литературы. Гибридома или другая клетка, продуцирующая антитело, может быть предметом генетической мутации или других изменений, которые могут или не могут изменить специфичность связывания продуцируемых антител. Так как антитела могут быть модифицированы рядом способов, термин "молекула антитела" должен быть истолкован как покрывающий любого участника связывания или вещества, обладающего антигенсвязывающим сайтом антитела с требуемыми специфичностью и/или связыванием антигена. Таким образом, этот термин покрывает фрагменты и производные антител, включая любой полипептид, включающий антигенсвязывающий сайт антитела, будет ли он природным или полностью или частично синтетическим. Включаются, следовательно, гибридные молекулы, включающие антигенсвязывающий сайт антитела, или эквивалент, соединенные с другим полипептидом (например, происходящим от другого вида или принадлежащим к другому классу или подклассу антител). Клонирование и экспрессия гибридных антител описываются в патентах ЕР-А-0120694 и ЕР-А-0125023 и в огромном количестве более поздней литературы. Дополнительные способы, доступные в области техники конструирования антител, делают возможным выделение антител человека и гуманизированных антител. Например, гибридомы человека могут быть получены, как описано KontermannDubel (2001). Фаговый дисплей, другой принятый способ создания участников связывания, подробно описан во многих публикациях, таких как патент WO 92/01047(обсуждаемый дополнительно ниже) и патенты США US 5969108, US 5565332, US 5733743, US 5858657,US 5871907, US 5872215, US 5885793, US 5962255, US 6140471, US 6172197, US 6225447, US 6291650,US 6492160, US 6521404 и KontermannDubel (2001). Трансгенные мыши, у которых гены мышиных антител инактивированы и функционально заменены на гены антител человека при сохранении интактными других компонентов иммунной системы мыши, могут быть использованы для выделения антител человека (Mendez, 1997). Синтетические молекулы антител могут быть созданы путем экспрессии генов, созданных посредством олигонуклеотидов, синтезированных и собранных в подходящих экспрессионных векторах, например, как описано Knappik et al. (2000) или Krebs et al. (2001). Показано, что фрагменты целого антитела могут осуществлять функцию связывания антигенов. Примерами связывающих фрагментов являются (i) Fab фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL иCH1; (ii) Fd фрагмент, состоящий из доменов VH и CH1; (iii) Fv фрагмент, состоящий из доменов VL и домена VH или VL; (v) выделенные области CDR; (vi) F(ab')2 фрагменты, двухвалентный фрагмент, состоящий из двух соединенных Fab фрагментов, (vii) одноцепочечные молекулы Fv (scFv), где домен VH и домен VL соединены пептидным линкером, который позволяет двум доменам связываться с образованием антигенсвязывающего сайта (Bird 1988; Huston, 1988); (viii) биспецифичные одноцепочечные димеры Fv (PCT/US 92/09965) и (ix) "диатела", мультивалентные или мультиспецифичные фрагменты, сконструированные путем слияния генов (WO 94/13804; Holliger, 1993 а). Молекулы Fv, scFv или диател могут быть стабилизированы путем включения дисульфидных мостиков, соединяющих домены VH и VL(Reiter, 1996). Могут быть также созданы минитела, включающие scFv, соединенный с доменом СН 3 (Hu,1996). Другими примерами связывающих фрагментов являются Fab', которые отличаются от Fab фрагментов добавлением нескольких остатков на карбоксильном конце домена СН 1 тяжелой цепи, включая один или более цистеинов, от шарнирной области антитела, и Fab'-SH, который представляет собой Fab' фрагмент, в котором остаток(тки) цистеина константных доменов несет свободную тиоловую группу. Фрагменты антител для применения по изобретению могут быть получены, начиная от любых описанных в настоящем документе молекул антител, например молекул антител, включающих домены VH и/или VL, или CDRs любых описанных в настоящем документе антител, с помощью методов, таких как гидролиз с помощью ферментов, таких как пепсин или папаин, и/или путем расщепления дисульфидных связей с помощью химического восстановления. Другим способом фрагменты антител настоящего изобретения могут быть получены с помощью методов генетической рекомбинации, также хорошо известных специалисту в данной области техники, или с помощью пептидного синтеза с помощью, например,автоматического пептидного синтезатора, такого как применяемые компанией Applied Biosystems, и т.д.,или с помощью синтеза и экспрессии нуклеиновой кислоты. Функциональные фрагменты антител по настоящему изобретению включают любой функциональный фрагмент, чей период полужизни повышен путем химической модификации, особенно пэгилирования, или путем включения в липосому.dAb (домен антитела) представляет собой малый мономерный антигенсвязывающий фрагмент антитела, а именно вариабельную область тяжелой или легкой цепи антитела (Holt, 2003). VH dAb существует в природе у камелидов (например, верблюдов, лам) и может быть получена путем иммунизации камелида антигеном-мишенью, выделения антигенспецифических В-клеток и прямого клонирования геновdAb из индивидуальных В-клеток. dAbs продуцируются также в клеточной культуре. Их малый размер,хорошая растворимость и температурная стабильность делает их особенно физиологически пригодными и подходящими для селекции и формирования сродства. Участник связывания по настоящему изобретению может представлять собой dAb, включающий домен VH или VL, по существу, как представлено в настоящем документе, или домен VH или VL, включающий набор CDRs домен VH или VL, по существу,как представлено в настоящем документе. Применяемое в настоящем описании выражение "по существу, как представлено" относится к характеристике(кам) соответствующих CDRs VH или VL домена участников связывания, описанных в настоящем документе, являются ли они идентичными или крайне сходными с конкретными областями,последовательность которых представлена в настоящем описании. Как описано в настоящем документе,выражение "крайне сходны" в отношении конкретной(ных) области(тей) одного или более вариабельных доменов рассматривается как то, что от 1 до приблизительно 5, например от 1 до 4, включая от 1 до 3 или от 1 до 2 или 3, или 4 аминокислотные замены могут быть сделаны в CDR и/или VH, или VL домене. Биспецифические или бифункциональные антитела образуют вторую генерацию моноклональных антител, в которых две различные вариабельные области объединены в одной и той же молекуле (Holliger, 1999). Их использование продемонстрировано как в области диагностики, так и в области терапии,благодаря их способности индуцировать новые эффекторные функции или направленно доставлять некоторые молекулы на поверхность опухолевых клеток. Когда предполагается использовать биспецифические антитела, это могут быть общепринятые биспецифические антитела, которые могут быть получены различными способами (Holliger, 1993b), например получены химически или химерным гибридом,или это могут быть любые из биспецифических фрагментов антител, указанных выше. Эти антитела могут быть получены с помощью химических методов (Glennie, 1987; Repp, 1995) или методов на уровне организма (Staerz, 1986; Suresh, 1986), но также с помощью способов генной инженерии, которые позволяют форсировать гетеродимеризацию и таким образом содействовать процессу очистки искомого антитела (Merchand, 1998). Примеры биспецифических антител включают антитела по технологии BiTE, в которых могут быть использованы связывающие домены двух антител с различной специфичностью и прямо соединены через короткие гибкие пептиды. Это объединяет два антитела на короткой единственной полипептидной цепи. Диатела и scFv могут быть сконструированы без области Fc с использованием только вариабельных доменов, потенциально снижая эффекты антиидиотипической реакции. Биспецифические антитела могут быть сконструированы как полный IgG, как биспецифическийFab'2, как Fab' ПЭГ, как диатела или также как биспецифический scFv. Кроме того, два биспецифических антитела могут быть соединены с использованием общепринятых методов, известных в данной области техники, с образованием четырехвалентных антител. Биспецифические диатела в противоположность биспецифическим полным антителам могут быть также особенно приемлемы, так как они могут быть легко сконструированы и экспрессированы в Е. coli. Диатела (и многие другие полипептиды, такие как фрагменты антител) с подходящей специфичностью сродства могут быть легко отобраны из библиотек с использованием фагового дисплея (WO 94/13804). Если одно плечо диатела намереваются сохранять постоянным, например, со специфичностью, направленной против антигена-мишени, то библиотека может быть создана, когда другое плечо варьируется и отбирается антитело с подходящей специфичностью. Биспецифические полные антитела могут быть получены альтернативными методами конструирования, как описано в статье Ridgeway, 1996. В данной области техники доступны различные методы получения антител против антигенамишени. Антитела могут быть моноклональными антителами, особенно происходящими от человека,мыши, гибридного или гуманизированного происхождения, которые могут быть получены в соответствии со стандартными методами, хорошо известными специалисту в данной области техники. В целом, для получения моноклональных антител или их функциональных фрагментов, особенно мышиного происхождения, можно сослаться на способы, которые описаны, в частности, в руководстве"Antibodies" (Harlow and Lane, 1988), или на метод получения гибридом, описанный Kohler and Milstein,1975. Моноклональные антитела могут быть получены, например, из клетки животного, иммунизированного против A-FN, или одного из его фрагментов, содержащих эпитоп, узнаваемый указанными моноклональными антителами, например фрагмент, включающий или состоящий из ED-A, или пептидный фрагмент ED-A. A-FN или один из его фрагментов может продуцироваться главным образом в соответствии с обычными рабочими методами, с помощью генетической рекомбинации, начиная с последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей в кДНК последовательность, кодирующую A-FN или его фрагмент, путем пептидного синтеза, начиная с последовательности аминокислот, включающей пептидную последовательность A-FN и/или его фрагмента. Моноклональные антитела могут, например, быть очищены на аффинной колонке, на которой предварительно иммобилизован A-FN или один из его фрагментов, содержащих эпитоп, узнаваемый указанными моноклональными антителами, например фрагмент, включающий или состоящий из ED-A, или пептидный фрагмент ED-A. Моноклональные антитела могут быть очищены хроматографией на протеине А и/или G с последующей ионообменной хроматографией или без нее с целью устранения в них остаточных белковых загрязнений, а также ДНК и LPS с последующей эксклюзионной хроматографией на геле сефарозы или без нее для устранения потенциальных агрегатов, обусловленных присутствием димеров или других мультимеров. Все эти методы могут использоваться одновременно или последовательно. Антигенсвязывающий сайт. Так описывается часть молекулы, которая связывается со всем или частью антигена-мишени и комплементарна им. В молекуле антитела это обозначается как антигенсвязывающий сайт антитела и включает часть антитела, которая связывается со всем или частью антигена-мишени и комплементарна им. Когда антиген большой, антитело может связываться только с конкретной частью антигена и эта часть называется эпитопом. Антигенсвязывающий сайт антитела может быть обеспечен одним или более вариабельными доменами антитела. Антигенсвязывающий сайт антитела может включать вариабельную область легкой цепи (VL) антитела и вариабельную область тяжелой цепи (VH) антитела. Выделенные. Это относится к состоянию, в котором участники связывания для применения по изобретению или нуклеиновая кислота, кодирующая такие участники связывания, должны обычно быть в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, участники связывания, домены VH и/или VL по настоящему изобретению могут быть предложены выделенными и/или очищенными, например, из их природного окружения, по существу в чистой или гомогенной форме, или в случае нуклеиновой кислоты в свободной или по существу свободной от нуклеиновой кислоты или генов, отличных по происхождению от последовательности, кодирующей полипептид с требуемой функцией. Выделенные участники и выделенная нуклеиновая кислота должны быть свободны или по существу свободны от материала, с которым они связаны в природе, такого как другие полипептиды или нуклеиновые кислоты, с которыми они находятся в их природном окружении, или в окружении, в котором их получают (например, в клеточной культуре), когда такое получение осуществляется с помощью метода рекомбинантных ДНК, применяемых in vitro или in vivo. Участники и нуклеиновая кислота могут быть составлены с разбавителями или адъювантами и все еще для практических целей быть выделенными, например участники должны быть обычно смешаны с желатином или другими носителями, если используются для покрытия лунок планшетов для микротитрования для использования в иммунотестах либо должны быть смешаны с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями при использовании для диагностики и терапии. Участники связывания могут быть гликозилированными либо природно, либо системами гетерологичных эукариотных клеток (например, клетками СНО или NSO (ЕСАСС 85110503, или они могут быть(например, если продуцируются экспрессией в прокариотной клетке) негликозилированными. В изобретении могут быть также использованы гетерогенные препараты, включающие молекулы антител. Например, такие препараты могут представлять собой смеси антител с полноразмерными тяже-9 017995 лыми цепями и тяжелыми цепями с отсутствием С-концевого лизина с различными степенями гликозилирования и/или с дериватизированными аминокислотами, такими как при циклизации N-концевой глютаминовой кислоты с образованием остатка пироглютаминовой кислоты. Один или более участников связывания для антигена, например A-FN или ED-A фибронектина, могут быть получены путем введения в контакт библиотеки участников связывания по изобретению и антигена или его фрагмента, например фрагмента, включающего или состоящего из ED-A, или пептидного фрагмента ED-A, и отбора одного или более участников связывания библиотеки, способных связывать антиген. Может быть проведен скрининг библиотеки антител с использованием повторяющегося скрининга колоний на фильтре (ICFS). При ICFS бактерии, содержащие ДНК, кодирующую белки с некоторыми специфичностями связывания, выращивают в жидкой среде и, как только достигается стадия экспоненциального роста, несколько миллиардов из них распределяют на подложке для роста, состоящей из подходящим образом предварительно обработанного мембранного фильтра, который инкубируется до тех пор, пока не появляются полностью конфлюэнтные колонии бактерий. Второй субстрат-ловушка состоит из другого мембранного фильтра, предварительно увлажненного и покрытого желаемым антигеном. Мембранный фильтр-ловушку затем помещают на чашку, содержащую подходящую культуральную среду, и покрывают фильтром для роста поверхностью, покрытой бактериальными колониями, направленными наверх. Полученный, таким образом, сэндвич инкубируют при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч. Таким способом можно получить экспрессию генов, кодирующих фрагменты scFv антител, с распространяющимся действием, так что улавливаются те фрагменты, которые специфически связываются с антигеном, который присутствует на мембране-ловушке. Мембраналовушка затем обрабатывается для определения связанных scFv фрагментов антител с обычным использованием для этой цели колориметрических способов. Положение окрашенных пятен на фильтре-ловушке позволяет вернуться к соответствующим бактериальным колониям, которые присутствуют на мембране для роста и продуцируют уловленные фрагменты антител. Такие колонии собирают и выращивают, и бактерии - несколько миллионов из них распределяют на новой культуральной мембране, повторяя процедуры, описанные выше. Аналогичные циклы затем осуществляют до тех пор, пока позитивные сигналы на мембране-ловушке будут соответствовать единичным позитивным колониям, каждая из которых представляет собой потенциальный источник фрагментов моноклональных антител, направленных против антигена, используемого для селекции.ICFAS описан, например, в патенте WO 0246455, включенном в настоящее описание в качестве ссылки. Библиотека может быть также представлена на частицах или молекулярных комплексах, например на реплицируемых генетических модулях, таких как частицы бактериофагов (например, Т 7) или других системах представления in vitro, причем каждая частица или молекулярный комплекс содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую представленный на них вариабельный домен VH антитела, и необязательно также представленный домен VL, если он присутствует. Фаговый дисплей описан в патенте WO 92/01047 и, например, в патентах США US 5969108, US 5565332, US 5733743, US 5858657, US 5871907,US 5872215, US 5885793, US 5962255, US 6140471, US 6172197, US 6225447, US 6291650, US 6492160 иUS 6521404, каждый из которых включен в настоящий документ в качестве ссылки в полном объеме. После селекции участников связывания, способных связывать антиген и быть представленными на бактериофаге или других частицах библиотеки либо молекулярных комплексах, нуклеиновую кислоту можно отделить от бактериофага или другой частицы либо молекулярного комплекса, представляющих указанный отобранный участник связывания. Такая нуклеиновая кислота может быть использована при последующей продукции участника связывания или вариабельного домена VH или VL антитела путем экспрессии нуклеиновой кислоты с последовательностью нуклеиновой кислоты, полученной от бактериофага или другой частицы либо молекулярного комплекса, предоставляющих указанного отобранного участника связывания. Вариабельный домен VH антитела с аминокислотной последовательностью вариабельного доменаVH антитела указанного отобранного участника связывания может быть предложен в выделенной форме,как может быть предложен участник связывания, включающий такой домен VH. Способность к связыванию A-FN или ED-A фибронектина или другого антигена-мишени либо изоформы может быть дополнительно протестирована, например, по способности конкурировать, например,с любым из антител против ED-A H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9 за связывание с A-FN или фрагментом A-FN, например, ED-A фибронектина. Участник связывания для применения по изобретению может связывать A-FN и/или ED-A фибронектина специфически. Участник связывания по настоящему изобретению может связывать A-FN и/илиED-A фибронектина с тем же самым сродством, что и антитело против ED-A H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8,F1, В 7, Е 8 или G9, например, в формате scFv, или с более высоким сродством. Участник связывания для применения по изобретению может связывать A-FN и/или ED-A фибронектина с KD 310-8 M или с более высоким сродством. Предпочтительно участник связывания для применения по изобретению связывает участник связывания для применения по изобретению связывает A-FN и/или ED-A фибронектина с KD 1,710-8 М или с более высоким сродством. Еще более предпочтительно участник связывания для применения по изобретению связывает А-FN и/или ED-A фибронектина с KD 1,410-8 М или с более высоким сродством. Наиболее предпочтительно участник связывания для применения по изобретению связываетA-FN и/или ED-A фибронектина с KD 310-9 М или с более высоким сродством. Участник связывания по настоящему изобретению может связываться с тем же самым эпитопом наG9. Участник связывания для применения по изобретению может не проявлять какого-либо существенного связывания с молекулами, отличными от A-FN и/или ED-A фибронектина. В частности, участник связывания может не связываться с другими изоформами фибронектина, например изоформой ED-B и/или изоформой IIICS фибронектина. Раскрытые в настоящем описании варианты молекул антител могут быть получены и использованы в настоящем изобретении. Способы, требуемые для осуществления замен в аминокислотных последовательностях CDRs, VH или VL доменах и участниках связывания, обычно доступны в данной области техники. Могут быть получены варианты последовательностей с заменами, которые могут или не могут быть предсказаны как имеющие минимальный или благоприятный эффект на активность, и они могут быть протестированы на способность связывать A-FN и/или ED-A фибронектина и/или на любое другое желаемое свойство. Варианты аминокислотных последовательностей вариабельных доменов любого из VH и VL доменов, чьи последовательности конкретно раскрыты в настоящем описании, могут быть применены по настоящему изобретению, как это обсуждается. Конкретные варианты могут включать одно или более изменений аминокислотной последовательности (добавление, делецию, замену и/или вставку аминокислотного остатка), может быть менее приблизительно 20 изменений, менее приблизительно 15 изменений,менее приблизительно 10 изменений или менее приблизительно 5 изменений, может быть 5, 4, 3, 2 или 1. Изменения могут быть осуществлены в одной или более областях каркаса и/или в одной или более CDRs. Изменения обычно не приводят к потере функции, так что участник связывания, включающий измененную таким образом аминокислотную последовательность, может сохранять способность связывать A-FN и/или ED-A фибронектина. Например, он может сохранять те же количественные характеристики связывания, что и участник связывания без сделанных изменений, например, при измерении в описанном в настоящем документе тесте. Участник связывания, включающий измененную таким образом аминокислотную последовательность, может иметь улучшенную способность связывать A-FN и/или ED-A фибронектина. Новые области VH или VL, несущие модифицированные последовательности CDRs для применения по изобретению, могут быть созданы с использованием неспецифического мутагенеза одного или более выбранных генов VH и/или VL с созданием мутаций в полном вариабельном домене. В некоторых вариантах осуществления делают одну или две аминокислотные замены в полном вариабельном домене или наборе CDRs. Другим методом, который может быть использован, является мутагенез, направленный на области CDRs генов VH или VL. Как отмечалось выше, аминокислотная последовательность CDR по существу, как представлено в настоящем описании, может быть осуществлена как CDR в вариабельном домене антитела человека или его существенной части. Последовательности HCDR3 по существу, как представлено в настоящем описании, представляют собой варианты осуществления настоящего изобретения и, например, каждая из них может быть осуществлена как HCDR3 в вариабельном домене тяжелой цепи человека или его существенной части. Вариабельные домены, применяемые в изобретении, могут быть получены или могут происходить от любой зародышевой линии или реорганизованного вариабельного домена человека либо могут представлять собой синтетический вариабельный домен на основе консенсусных или действительных последовательностей известных вариабельных доменов человека. Вариабельный домен может происходить от антитела, продуцируемого не человеком. Последовательность CDR для применения по изобретению (например, CDR3) может быть введена в репертуар вариабельных доменов с отсутствующей CDR (например, CDR3) с использованием метода рекомбинантных ДНК. Например, Marks et al. (1992) описывают методы продукции репертуаров вариабельных доменов антител, в которых консенсусные праймеры, направленные на 5'-конец или прилегающие к нему нуклеотиды области вариабельного домена, используют в соединении с консенсусными праймерами к третьей области каркаса генов VH человека для предоставления репертуара вариабельных доменов VH с отсутствующей CDR3. Marks et al. дополнительно описывают, как этот репертуар может быть соединен с CDR3 конкретного антитела. Используя аналогичные способы, происходящие от CDR3 последовательности настоящего изобретения, могут быть смешаны с репертуарами доменов VH или VL с отсутствующей CDR3, и смешанные полные домены VH или VL соединены с родственным доменом VL или VH с предоставлением участников связывания для применения по изобретению. Репертуар может быть затем представлен в подходящей системе хозяина, такой как система фагового дисплея патента WO 92/01047, который включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме или в любом из большого объема литературных источников, включая Kay, WinterMcCafferty (1996), так что могут быть выбраны подходящие участники связывания. Репертуар может состоять из любых из более 104 индивидуальных участников, например по меньшей мере 105, по меньшей мере 106, по меньшей мере 107, по меньшей мере 108, по меньшей мере 109 или по меньшей мере 1010 участников. Сходно одна или более или все три CDRs могут быть вставлены в репертуар доменов VH или VL,скрининг которых затем проводят на участниках связывания или участниках связывания для A-FN илиED-A фибронектина. Могут быть применены одна или более из HCDR1, HCDR2 и HCDR3 антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5,С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9 либо набор HCDRs и/или могут быть применены одна или более из X LCDR1,LCDR2 и LCDR3 антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9 либо набор LCDRs антитела H1,В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 или G9. Сходно могут быть применены другие VH и VL домены, наборы CDRs и наборы HCDRs и/или наборы LCDRs, раскрытые в настоящем описании.A-FN и/или ED-A фибронектина могут быть использованы для скрининга участников связывания,например молекул антител, для использования при получении лекарственного средства для лечения рака легкого. Скрининг может представлять собой скрининг репертуара, как раскрыто в настоящем документе в другом месте.A-FN и/или ED-A фибронектина могут быть также использованы для скрининга участников связывания, например молекул антител, для использования при получении лекарственного средства для лечения лимфомы. Скрининг может представлять собой скрининг репертуара, как раскрыто в настоящем документе в другом месте. Существенная часть вариабельного домена иммуноглобулина может включать по меньшей мере три области CDR совместно с их промежуточными областями каркаса. Часть может также включать по меньшей мере приблизительно 50% любой или обеих первой и четвертой областей каркаса, причем 50% являются С-концевыми 50% первой области каркаса и N-концевыми 50% четвертой области каркаса. Дополнительные остатки на N-концевом или С-концевом конце основной части вариабельного домена могут представлять собой остатки, обычно не связанные с природными областями вариабельных доменов. Например, конструкция участников связывания по настоящему изобретению, сделанная методами рекомбинантных ДНК, может приводить к введению N- или С-концевых остатков, кодируемых линкерами, введенными для облегчения клонирования или при других стадиях метода. Другие стадии метода включают введение линкеров для соединения вариабельных доменов, раскрытых в настоящем описании в другом месте, с дополнительными белковыми последовательностями, включая константные области антител, другие вариабельные домены (например, при продукции диател), или с выявляемыми/функциональными метками, как обсуждалось более подробно в настоящем описании в другом месте. Хотя участники связывания могут включать пару доменов VH и VL, в изобретении могут также использоваться одиночные связывающие домены на основе последовательностей либо VH, либо VL домена. Известно, что одиночные иммуноглобулиновые домены, особенно домены VH, способны связывать антигены-мишени специфичным образом, например, см. обсуждение dAbs выше. В случае любого из одиночных связывающих доменов эти домены могут быть использованы для скрининга комплементарных доменов, способных образовывать двухдоменного участника связывания,способного связывать A-FN и/или ED-A фибронектина. Этого можно достичь методами скрининга фагового дисплея с использованием так называемого иерархического двойного комбинаторного подхода, как раскрыто в патенте WO 92/01047, включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме, при котором используют индивидуальную колонию, содержащую клон либо Н, либо L цепи, для инфицирования полной библиотеки клонов, кодирующих другую цепь (L или Н), и полученного двухцепочечного участника связывания отбирают в соответствии с методами фагового дисплея, такими как описаны в этой ссылке. Этот метод также раскрыт в Marks, 1992. Участники связывания для использования в настоящем изобретении могут дополнительно включать константные области антитела или их части, например константные области антитела человека или их части. Например, домен VL может быть присоединен своим С-концом к константным доменам легкой цепи антитела, включающим цепи C или С, например С. Сходным образом, участник связывания на основе домена VH может быть присоединен своим С-концом ко всей или части (например, домену СН 1) тяжелой цепи иммуноглобулина, берущей начало от любого изотипа антитела, например IgG, IgA, IgE иIgM, и любого из подклассов изотипа, особенно IgG1 и IgG4. В вариантах осуществления настоящего изобретения пригоден также любой синтетический или иной вариант константной области, который обладает этими свойствами и стабилизирует вариабельные области. Участники связывания для использования в изобретении могут быть помечены выявляемой или функциональной меткой. Метка может представлять собой любую молекулу, которая создает или может быть индуцирована к созданию сигнала, включая, но не ограничиваясь этим, люминофоры, радиоактивные метки, ферменты, хемилюминесцентные агенты или фотосенсибилизаторы. Так, связывание может быть выявлено и/или измерено путем определения флуоресценции или люминесценции, радиоактивности, ферментативной активности или поглощения света. Выявляемые метки могут быть присоединены к антителам для использования в изобретении с помощью традиционных химических методов, известных в данной области техники. Существует множество методов, с помощью которых метка может создавать сигнал, обнаруживаемый внешними устройствами, например, путем визуальной оценки, по электромагнитному излучению,теплу и с помощью химических реагентов. Метка может быть также присоединена к другому участнику связывания, который связывает антитело для использования в изобретении, или к основе. Меченые участники связывания, например scFv, меченные выявляемой меткой, могут быть использованы для диагностики in vivo, ex vivo или in vitro и/или терапевтически. Например, меченные радиоактивностью участники связывания (например, участники связывания,конъюгированные с радиоизотопом) могут быть использованы для радиодиагностики и радиотерапии. Радиоизотопы, которые могут быть конъюгированы с участником связывания для использования в изобретении, включают такие изотопы, как 94mTc, 99mTc, 186Re, 188Re, 203Pb, 57Ga, 68Ga, 47Sc, 111In, 97Ru, 62Cu,64Cu, 86Y, 88Y, 90Y, 121Sn, 161Tb, 153Sm, 166Ho, 105Rh, 177Lu, 123I, 124I, 125I и 131I. Например, участник связывания для использования в изобретении, меченный выявляемой меткой,может быть использован для выявления, диагностики или мониторинга рака легкого у человека или животного. Альтернативно, участник связывания для использования в изобретении, меченный выявляемой меткой, может быть использован для выявления, диагностики или мониторинга лимфомы у человека или животного. Участник связывания по настоящему изобретению может быть использован для получения диагностического продукта для использования в диагностике рака легкого. Участник связывания по настоящему изобретению может быть использован для получения диагностического продукта для использования в диагностике лимфомы. В настоящем изобретении предлагается способ выявления или диагностики рака легкого у человека или животного, включающий стадии:(а) введения человеку или животному участника связывания по настоящему изобретению, например, меченного выявляемой меткой, который связывает изоформу ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина; и(b) определения наличия или отсутствия участника связывания в легком организма человека или животного,где нахождение участника связывания в легком человека или животного указывает на наличие рака легкого. В настоящем изобретении также предлагается способ выявления или диагностики лимфомы у человека или животного, включающий стадии:(a) введения человеку или животному участника связывания по настоящему изобретению, например, меченного выявляемой меткой, который связывает изоформу ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина; и(b) определения наличия или отсутствия участника связывания в лимфатической системе организма человека или животного,где нахождение участника связывания в лимфатической системе человека или животного указывает на наличие лимфомы. При мечении участника связывания выявляемой меткой наличие или отсутствие выявляемой метки может быть определено путем определения метки. В настоящем изобретении могут быть применены конъюгат или гибрид с участником связывания для использования по изобретению и молекула, которая проявляет биоцидное или цитотоксическое действие на клетки-мишени в повреждениях, и антитело, направленное против компонента внеклеточного матрикса, находящегося в таких повреждениях. Например, биоцидная или цитотоксическая молекула может представлять собой интерлейкин-2 (ИЛ-2), доксорубицин, интерлейкин-12 (ИЛ-12), интерферон(ИФН-), фактор некроза опухолей(ФНО) или тканевый фактор (предпочтительно укороченный). Такие конъюгаты могут быть использованы терапевтически, например, для лечения лимфомы, как указано выше в настоящем описании. Альтернативно, такие конъюгаты могут быть использованы терапевтически для лечения рака легкого, как указано выше в настоящем описании. Получение и использование гибридов или конъюгатов участников связывания с биоцидными или цитотоксичными молекулами описано, например, в патенте WO 01/62298, который включен в настоящее описание в качестве ссылки. В изобретении предлагается способ лечения рака легкого, причем способ включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего участника связывания для использования по изобретению. В изобретении также предлагается способ лечения лимфомы, причем способ включает введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего участника связывания для использования по изобретению. Участник связывания может представлять собой конъюгат (i) молекулы, которая оказывает биоцидное или цитотоксическое действие на клетки-мишени за счет клеточного взаимодействия, и (ii) участника связывания с изоформой ED-A фибронектина и/или ED-A фибронектина. В изобретении предлагается использование участника связывания для применения в изобретении для получения лекарственного средства для лечения рака легкого. В изобретении также предлагается использование участника связывания для применения в изобретении для получения лекарственного средства для лечения лимфомы. Участник связывания может быть конъюгирован или соединен с молекулой, которая оказывает биоцидное или цитотоксическое действие, как описано в настоящем описании. Участник связывания может представлять собой конъюгат (i) молекулы, которая оказывает биоцидное или цитотоксическое действие на клетки-мишени за счет клеточного взаимодействия, (ii) участника связывания с фибронектином человека по настоящему изобретению. В настоящем описании также описан конъюгат (i) молекулы, которая оказывает биоцидное или цитотоксическое действие на клетки-мишени за счет клеточного взаимодействия, (ii) участника связывания с фибронектином человека для использования по настоящему изобретению. Такой конъюгат предпочтительно включает гибридный белок, включающий биоцидную или цитотоксическую молекулу и указанный участник связывания или, когда участник связывания является двухцепочечным или многоцепочечным, гибридный белок, включающий биоцидную или цитотоксическую молекулу и компонент с полипептидной цепью указанного участника связывания. Предпочтительно участник связывания представляет собой одноцепочечный полипептид, например одноцепочечную молекулу антитела, такую как scFv. В изобретении может быть использован гибридный белок, включающий биоцидную или цитотоксическую молекулу и одноцепочечную молекулу Fv антитела. Биоцидная или цитотоксическая молекула, которая оказывает свое действие на клетки-мишени путем клеточного взаимодействия, может взаимодействовать непосредственно с клетками-мишенями, может взаимодействовать со связанным с мембраной рецептором на клетке-мишени или нарушать электрохимический потенциал клеточной мембраны. Молекулы,которые взаимодействуют со связанным с мембраной рецептором, включают хемокины, цитокины и гормоны. Соединения, которые нарушают электрохимический потенциал клеточной мембраны, включают гемолизин, ионофоры, лекарственные средства, действующие на ионные каналы. В иллюстративных предпочтительных вариантах осуществления такой молекулой является интерлейкин-2, тканевый фактор(предпочтительно укороченный) и доксорубицин. В других вариантах осуществления могут использоваться интерлейкин 12, интерферон-гамма, IP-10 и фактор некроза опухолей-альфа (TNF-). Как дополнительно обсуждается ниже, участник специфического связывания представляет собой предпочтительно антитело или включает сайт антитела для связывания антигена. Удобно, чтобы участник специфического связывания мог быть одноцепочечным полипептидом, таким как одноцепочечное антитело. Это обеспечивает легкое получение гибридного белка, включающего одноцепочечное антитело и биоцидную или цитотоксическую молекулу (например, интерлейкин-2 или тканевый фактор). Сайт антитела для связывания антигена может быть обеспечен путем ассоциации домена VH антитела и домена VL антитела в отдельных полипептидах, например в полном антителе или во фрагменте антитела, таком как Fab или диатело. Когда участник специфического связывания представляет собой двухцепочечную или многоцепочечную молекулу (например, Fab или антитело целиком соответственно), биоцидная или цитотоксическая молекула может быть присоединена в виде гибридного полипептида к одной или более полипептидным цепям участника специфического связывания. Участник связывания может быть конъюгирован с биоцидной или цитотоксической молекулой с помощью пептидной связи, например, внутри гибридного полипептида, включающего указанную молекулу и участника специфического связывания или компонент его полипептидной цепи; см. Taniguchi etet al. (1983) Nucl. Acids Res. 11: 4307-4323 по поводу информации о последовательности ИЛ-2, пригодной для получения гибридного полипептида, включающего ИЛ-2. Информация о последовательности укороченного тканевого фактора представлена Scarpati et al. (1987) Biochemistry 26: 5234-5238 и Ruf et al.(1991) J. Biol. Chem. 226: 15719-15725. Другие средства конъюгации включают химическую конъюгацию, в особенности поперечную сшивку, с помощью бифункционального реагента (например, при использовании DOUBLE-REAGENTS Cross-linking Reagents Selection Guide, Pierce). Когда желательно медленное высвобождение, например, когда биоцидная или цитотоксическая молекула представляет собой доксорубицин или другую молекулу, которая нарушает электрохимический потенциал клеточной мембраны, химическая конъюгация может быть осуществлена посредством образования Шиффова основания (имина) между первичной аминогруппой участника специфического связывания (полипептида, такого как антитело или фрагмент антитела) и частью окисленного сахара (даунозамина) биоцидной или цитотоксической молекулы, такой как доксорубицин. Также в настоящем описании описана выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая участника связывания для использования по настоящему изобретению. Нуклеиновая кислота может включать ДНК и/или РНК. Нуклеиновая кислота может кодировать CDR или набор CDRs или домен VH либо домен VL или сайт антитела, связывающий антиген, или молекулу антитела, например scFv или IgG, напримерIgG1, как определено выше. Нуклеотидные последовательности могут кодировать домены VH и/или VL,как раскрыто в настоящем описании. В настоящем описании дополнительно описаны конструкты в форме плазмид, векторов, транскрипционных или экспрессионных кассет, которые включают по меньшей мере один полинуклеотид, как описано выше. Описана также рекомбинантная клетка-хозяин, которая включает один или более конструктов, как описано выше. Описаны предлагаемая нуклеиновая кислота, кодирующая любые CDR или набор CDRs либо домен VH или домен VL либо сайт антитела, связывающий антиген, или молекулу антитела, например scFv или IgG1 или IgG4, а также способ получения кодируемого продукта, причем способ включает экспрессию с кодирующей нуклеиновой кислотой. Экспрессия может быть легко осуществлена культивированием при подходящих условиях рекомбинантных клеток-хозяев, содержащих нуклеиновую кислоту. После продукции путем экспрессии домен VH или VL или участник связывания может быть выделен и/или очищен с помощью любого подходящего метода и затем быть использован подходящим образом. Нуклеиновая кислота может включать ДНК или РНК и может быть полностью или частично синтетической. Ссылка на нуклеотидную последовательность, как изложено в настоящем описании, охватывает молекулу ДНК с определенной последовательностью и охватывает молекулу РНК с определенной последовательностью, в которой U заменяет Т, если в контексте не требуется иное. Описывается также метод получения вариабельного домена VH антитела, причем метод включает индукцию экспрессии с кодирующей нуклеиновой кислотой. Такой метод может включать культивирование клеток-хозяев в условиях для получения указанного вариабельного домена VH антитела. Метод получения может включать стадию выделения и/или очистки продукта. Метод получения может включать составление продукта в композицию, включающую по меньшей мере один дополнительный компонент, такой как фармацевтически приемлемый эксципиент. Системы для клонирования и экспрессии полипептида во множестве различных клеток-хозяев хорошо известны. Подходящие клетки-хозяева включают бактерии, клетки млекопитающих, клетки растений, нитевидные грибы, дрожжевые и бакуловирусные системы и трансгенные растения и животные. Экспрессия антител и фрагментов антител в прокариотных клетках прочно обосновалась в данной области техники; в качестве обзора см., например, Pluckthun, 1991. Обычным бактериальным хозяином является E.coli. Для специалистов в данной области техники также может быть полезна экспрессия в эукариотных клетках в культуре в качестве варианта получения участника связывания, например ChaddChamow(2001), AndersenKrummen (2002), LarrickThomas (2001). Линии клеток млекопитающих, доступные в данной области техники для экспрессии гетерологичного полипептида, включают клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки HeLa, клетки почки детеныша хомячка, клетки меланомы мыши NS0,клетки миеломы крысы YB2/0, клетки почки эмбриона человека, клетки сетчатки эмбриона человека и многие другие. Могут быть выбраны или сконструированы удобные векторы, содержащие подходящие регуляторные последовательности, включая промоторные последовательности, терминаторные последовательности, последовательности полиаденилирования, энхансерные последовательности, маркерные гены и другие последовательности в соответствии с условиями. Векторы могут быть плазмидами, например фагемидой, или вирусными, например фаговыми, в соответствии с условиями. Дополнительные подробности см., например, в SambrookRussell (2001). Многие известные методы и протоколы для работы с нуклеиновыми кислотами, например, для получения конструктов нуклеиновых кислот, мутагенеза, секвенирования, введения ДНК в клетки и экспрессии генов и анализа белков, подробно описаны в Ausubel,1999. Клетка-хозяин может содержать нуклеиновую кислоту, как описано в настоящем описании. Такая клетка-хозяин может находиться in vitro и может находиться в культуре. Такая клетка-хозяин может находиться in vivo. Нахождение клетки-хозяина in vivo может обеспечивать внутриклеточную экспрессию участника связывания для использования в настоящем изобретении в качестве "интрател", или внутриклеточных антител. Интратела могут быть использованы для генной терапии. Описывается также метод введения раскрытой в настоящем описании нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин. Для введения может быть использован любой доступный метод. В случае эукариотных клеток подходящие методы включают трансфекцию с помощью фосфата кальция, ДЭАЭ-декстрана, электропорации, опосредуемую липосомами трансфекцию и трансдукцию с помощью ретровируса или других вирусов, например коровьей оспы, или, в случае клеток насекомых, бакуловируса. Для введения нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, в особенности эукариотную клетку, может использоваться система на основе вируса или плазмиды. Плазмидная система может поддерживаться эписомально или может быть встроена в хромосому клетки-хозяина или в искусственную хромосому. Встраивание может быть либо случайной, либо направленной интеграцией одной или более копий в один или множество локусов. В случае бактериальных клеток подходящие методы могут включать трансформацию с помощью хлорида кальция, электропорацию и трансфекцию с помощью бактериофага. Включение может сопровождаться вызванной или разрешенной экспрессией с нуклеиновой кислотой, например, путем культивирования клеток-хозяев в условиях экспрессии гена. Очистка экспрессированного продукта может быть достигнута методами, известными специалисту в данной области техники. Нуклеиновая кислота может быть интегрирована в геном (например, хромосому) клетки-хозяина. Интеграции может способствовать включение последовательностей, которые способствуют рекомбинации с геномом, в соответствии со стандартными методами. Описывается также метод, который включает использование конструкта, как указано выше для экспрессионной системы, для экспрессии участника связывания или полипептида, как указано выше. Участники связывания для использования в настоящем изобретении конструируют для использования в методах диагностики или лечения человеческих или животных индивидуумов, например человека. Участников связывания для использования в изобретении можно использовать для диагностики или лечения лимфомы. Альтернативно, участников связывания для использования в изобретении можно использовать для диагностики или лечения рака легкого. Соответственно в изобретении предлагаются методы лечения, включающие введение участника связывания в виде предлагаемых фармацевтических композиций, включающих такой участник связывания, и использование такого участника связывания для получения лекарственного средства или фармацевтической композиции, включающей составление участника связывания с фармацевтически приемлемым эксципиентом. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны и должны быть адаптированы специалистом в данной области техники в соответствии с природой и способом введения выбранного (выбранных) активного (активных) соединения (соединений). Участники связывания для использования в настоящем изобретении обычно должны вводиться в форме фармацевтической композиции, которая может включать по меньшей мере один компонент, кроме участника связывания. Так, фармацевтические композиции по настоящему изобретению и для использования в соответствии с настоящим изобретением могут включать, помимо активного ингредиента,фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. Такие вещества должны быть нетоксичными и не должны влиять на эффективность активного ингредиента. Конкретная природа носителя или другого вещества должна зависеть от пути введения, который может быть пероральным, ингаляционным или инъекционным, например внутривенным. В настоящем изобретении также предусматриваются фармацевтические композиции для перорального введения, например, нанотел и т.д. Такие пероральные составы могут находиться в форме таблетки,капсулы, порошка, жидкости или в полужидкой форме. Таблетка может включать твердый носитель, такой как желатин или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции обычно включают жидкий носитель, такой как вода, нефтепродукт, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Могут быть также включены физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или другого сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Для внутривенной инъекции или инъекции в больное место активный ингредиент должен находиться в форме парентерально приемлемого водного раствора, который не является пирогенным и имеет подходящие рН, изотоничность и стабильность. Специалисты в соответствующей области техники способны легко приготовить подходящие растворы с использованием, например, изотоничных носителей,таких как хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор Рингера с лактатом для инъекций. В соответствии с условиями могут быть использованы консерванты, стабилизаторы, буферы,антиоксиданты и/или другие добавки. Специалистам в данной области техники известно много методов получения фармацевтических составов; см., например, Robinson, 1978. Композицию можно вводить отдельно или в сочетании с другими видами лечения, одновременно или последовательно, или в виде объединенного препарата с другим терапевтическим агентом или агентами, в зависимости от подлежащего лечению состояния. Участник связывания для использования в настоящем изобретении может использоваться в качестве части сочетанной терапии вместе с дополнительным лечебным компонентом. Сочетанное лечение можно использовать для достижения значительного синергичного действия, особенно при сочетании участника связывания для использования в настоящем изобретении с одним или более другими лекарственными средствами. Участника связывания для использования в настоящем изобретении можно вводить одновременно или последовательно, или в виде объединенного препарата с другим терапевтическим агентом или агентами для лечения одного или более состояний, перечисленных в настоящем описании. Например, участника связывания для использования в изобретении можно использовать в сочетании с существующим терапевтическим агентом для лечения лимфомы. Существующие терапевтические агенты для лечения неходжкинских лимфом включают ритукси- 16017995 маб и цитоксан, гидроксирубицин (адриамицин), онковин (винкристин) и преднизон в сочетании (режим химиотерапии CHOP). Существующие терапевтические агенты для лечения ходжкинских лимфом включают адриамицин,блеомицин, винбластин и дакарбазин в сочетании (режим химиотерапии ABVD). Альтернативно, участника связывания для использования в изобретении можно использовать в сочетании с существующим терапевтическим агентом для лечения рака легкого. Существующие терапевтические агенты для лечения немелкоклеточных вариантов рака легкого включают цисплатин или карбоплатин в сочетании с гемцитабином, паклитакселем, доцетакселем, этопозидом или винорельбином. Существующие терапевтические агенты для лечения мелкоклеточных вариантов рака легкого включают цисплатин или этопозид отдельно или в сочетании с карбоплатином,гемцитабином, паклитакселем, винорельбином, топотеканом или иринотеканом. Участника связывания для использования в изобретении и один или более из указанных выше дополнительных лекарственных компонентов можно использовать для получения лекарственного средства. Лекарственное средство может быть предназначено для раздельного или совместного введения индивидууму и соответственно может включать участника связывания и дополнительный компонент в виде объединенного препарата или в виде раздельных препаратов. Раздельные препараты можно использовать для облегчения раздельного и последовательного или одновременного введения, и это позволяет вводить компоненты разными путями, например пероральным и парентеральным введением. В соответствии с настоящим изобретением предлагаемые композиции можно вводить млекопитающим. Введение может производиться в "терапевтически эффективном количестве", которое является достаточным для проявления положительного действия на больного. Такое положительное действие может представлять собой, по меньшей мере, смягчение по меньшей мере одного симптома. Действительное вводимое количество и скорость, и расписание по времени введения должны зависеть от природы и тяжести того, что подлежит лечению, конкретного млекопитающего, подлежащего лечению, клинического состояния индивидуального больного, причины нарушения, места доставки композиции, типа участника связывания, метода введения, расписания введения и других факторов, известных практикующим врачам. Назначение лечения, например, принятие решений о дозах и т.д. находится в компетенции врачей общего профиля и других врачей и может зависеть от тяжести симптомов и/или прогрессии подлежащего лечению заболевания. Подходящие дозы антитела хорошо известны в данной области техники(Ledermann, 1991 и Bagshawe, 1991). Можно использовать конкретные дозы, указанные в этих публикациях или в Physician's Desk Reference (2003), в соответствии с типом вводимого лекарственного средства. Терапевтически эффективное количество или подходящую дозу участника связывания для использования в изобретении можно определить путем сравнения его активности in vitro и активности in vivo на животной модели. Известны методы экстраполяции эффективных доз у мышей и других тестируемых животных на человека. Конкретная доза должна зависеть от ряда факторов, включая то, предназначено ли антитело для диагностики, профилактики или лечения, размер и локализацию подлежащей лечению области, конкретную природу антитела (например, полное антитело, фрагмент или диатело) и природу любой выявляемой метки или другой молекулы, присоединенной к антителу. Обычная доза антитела должна находиться в диапазоне от 100 мкг до 1 г при системных введениях и от 1 мкг до 1 мг при местных нанесениях. Можно вводить вначале более высокую ударную дозу и затем одну или более меньшие дозы. Антитело может представлять собой полное антитело, например, изотипа IgG1 или IgG4. Оно представляет собой дозу для однократного лечения взрослого больного, которая может быть пропорционально подогнана для детей и младенцев, а также подогнана для других форматов антитела пропорционально молекулярной массе. Лечение может быть повторено с интервалами в сутки, дважды в неделю,неделю или месяц по усмотрению врача. Лечение может производиться каждые две-четыре недели при подкожном введении и каждые четыре-восемь недель при внутривенном введении. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения лечение является периодическим, и период между введениями составляет приблизительно две недели или более, например приблизительно три недели или более, приблизительно четыре недели или более или приблизительно раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения лечение может производиться до и/или после хирургической операции и может быть осуществлено введением или нанесением непосредственно в анатомический сайт хирургического лечения. Специалистам в данной области техники должны быть ясны дополнительные аспекты вариантов осуществления изобретения с учетом настоящего раскрытия, включая следующие экспериментальные иллюстративные примеры. Экспериментальная часть Материалы и методы. Антитела. Выделение фрагмента scFv (L19) антитела против ED-B было описано ранее (Pini et al., 1998). Исходное антитело против ED-A выделяли из библиотеки ЕТН-2 с помощью опубликованных процедур(Giovannoni, Nucleic. Acid Research, 2001, 29(5):E27). Созревание сродства исходного антитела противED-A, дающее высокоаффинные антитела против ED-A, описывается в следующем разделе. Формирование сродства исходного антитела против ED-A. Исходное антитело против ED-A (антитело, берущее начало от ЕТН-2) было использовано в качестве матрицы для конструирования библиотеки формирования сродства. Изменения в последовательностиVH CDR1 (зародышевая линия DP47) и VL CDR1 (зародышевая линия DPK22) библиотеки вводили с помощью ПЦР с использованием частично вырожденных праймеров 5'-CTGGAGCCTGGCGGACCCAGCTCATMNNMNNMNNGCTAAAGGTGAATCCAGA-3' (SEQ ID(SEQ ID NO: 18) для VL (все олигонуклеотиды были получены от Operon Biotechnologies, Cologne, Германия) в процессе, который создает случайные мутации в положениях 31, 32 и 33 VH CDR1 и в положениях 31, 31 а и 32 VL CDR1. Сочетания VHVL собирали в формате scFv с помощью сборки ПЦР с использованием праймеровLMB3long (5'-CAGGAAACAGCTATGACCATGATTAC-3') (SEQ ID NO: 19) и fdseqlong (5'GACGTTAGTAAATGAATTTTCTGTATGAGG-3') (SEQ ID NO: 20) с использованием в качестве матриц очищенных в геле сегментов VH и LH. Собранные фрагменты VH-VL дважды гидролизовали с помощьюNcoI/NotI и клонировали в гидролизованный NcoI/NotI фагемидный вектор pHENl (Hoogenboom et al.,1991). Полученный продукт лигирования электропорировали в электрокомпетентные клетки Е. coli TG-1 по (Viti et al., 2000) с получением библиотеки, содержащей 1,5107 индивидуальных клонов антител, которые подвергали скринингу на антитела, которые связывают ED-A с улучшенным сродством. Отбор антител против ED-A. Описанную выше библиотеку антител подвергали скринингу с помощью анализа BIAcore на антитела, которые связывают ED-A с большим сродством, чем исходное антитело против ED-A. Использованный в анализе BIAcore антиген (11 А 12) содержит домен ED-A фибронектина человека и имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 120): Нуклеотидная последовательность антигена (11 А 12) (SEQ ID NO: 121) является следующей: Нуклеотидную последовательность антигена амплифицировали с помощью ПЦР с использованием праймеров, содержащих сайты рестрикции BamHI и BglII на 5'- и 3'-концах соответственно. Полученный продукт ПЦР и вектор pQE12 (QIAGEN) гидролизовали рестрикционными эндонуклеазами BamHI иBglII и затем лигировали в реакционной смеси при соотношении вставки к вектору 3:1. Полученный вектор секвенировали для проверки правильности последовательности. Антиген получали следующим образом. Электрокомпетентную предварительную культуру TG1 в 10 мл 2TY, Amp, 1% глюкозы электропорировали в присутствии 1 мкл минипрепарата ДНК 11 А 12. Предварительную культуру затем разбавляли 1:100 (8 мл в 800 мл 2TY, Amp, 0,1% глюкозы) и выращивали до ОП 600 0,4-0,6, после чего индуцировалиIPTG в течение ночи. На следующий день клетки осаждали центрифугированием и супернатант фильтровали (Millipore 0,22 мкм). После центрифугирования и осветления культурального бульона 11 А 12 очищали с помощью колонки Hitrap на ВСЖХ. Колонку Ni/ регенерировали следующим образом: колонку промывали 5 об. колонки (CV) H2O с последующим нанесением 3 CV 0,5 М ЭДТА/0,2 М трис рН 8 для вымывания старого никеля из колонки. После этого колонку промывали 5 CV H2O. Колонку затем вновь загружали 2 CV 100 мМ NiSO4 с последующей промывкой колонки несколькими CV H2O. Колонку затем уравновешивали 5 CV буфера для лизиса (20 мМ имидазол/250 мМ NaCl/ЗФР рН 7,4). Клеточный лизат фильтровали (Millipore 0,45 мкм) и наносили на колонку (вручную). Колонку затем вновь помещали на ВСЖХ и буферу для лизиса давали протекать до достижения стабильного (постоянного) УФ- 18017995 сигнала, приблизительно 3 CV. Затем запускали программу элюции: градиент от 0 до 100% буфера для элюции (400 мМ имидазол/250 мМ NaCl/ЗФР рН 7,4) в 5 CV. Фракции, содержащие элюированный антиген, объединяли и диализовали в ЗФР в течение ночи. Экспрессия и очистка антител против ED-A. Антитела против ED-A экспрессировали и очищали следующим образом. Электрокомпетентную предварительную культуру TG1 в 10 мл 2TY, Amp, 1% глюкозы электропорировали в присутствии 1 мкл минипрепарата ДНК одного из антител против ED-A. Предварительную культуру затем разбавляли 1:100(8 мл в 800 мл 2TY, Amp, 0,1% глюкозы) и выращивали до ОП 600 0,4-0,6, после чего индуцировали IPTG в течение ночи. На следующий день клетки осаждали центрифугированием и супернатант фильтровали(Millipore 0,22 мкм). scFv очищали на колонке протеина А-сефарозы и для элюции с колонки scFvs использовали триэтиламин. Фракции, содержащие элюированные scFvs, диализовали в ЗФР в течение ночи при 4 С. Фракции scFv затем наносили на колонку супердекса 75 при скорости потока ЗФР 0,5 мл/мин и собирали фракции 0,25 мл. Для анализа BIAcore использовали мономерные фракции. Анализ BIAcore 1. Микроматрицу BIAcore промывали в течение ночи при скорости потока 5 мкл/мин буфером HBSEP BIACORE, 0,01 М Hepes рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,005% поверхностно-активного вещества Р 20 (этот же буфер используется для тестирования). Антиген (11 А 12) разбавляли до концентрации 50 мкг/мл в ацетатном буфере (рН 4,0) и СООН группы на микроматрице активировали введением 50 мкл смеси N-гидроксисукциниммида (NHS) и этил-N-(диметиламинопропил)карбодиимида (EDC). На микроматрицу наносили 40 мкл антигена 11 А 12 и оставшиеся свободные группы СООН блокировали 30 мкл этаноламина. После фильтрации на 0,22-мкм фильтре на микроматрицу наносили 20 мкл каждого индивидуального бактериального супернатанта и в реальном времени отслеживали взаимодействие с антигеном. Анализ BIAcore 2.kon, koff и KD исходного антитела против ED-A и антител против ED-A В 2, С 5, D5, С 8, F8, В 7 и G9 оценивали с помощью поверхностного плазмонного резонанса. Микроматрицу уравновешивали в течение ночи тем же буфером, который используется во время тестирования, при скорости потока буфера 5 мкл/мин. Всю процедуру покрытия проводили при этой скорости потока. Антиген 11 А 12 разбавляли 1:25 ацетатным буфером рН 4,00 (поставляемым BIACORE) до конечной концентрации 20 мкг/мл. Затем смешивали NHS и EDC и наносили 50 мкл для активации СООН групп на микроматрице СМ 5. После этого наносили 40 мкл антигена (продолжительность этой операции 40). Затем наносили 30 мкл этаноламина для блокирования реакционной способности возможных свободных СООН. Каждый образец тестировали при скорости потока 20 мкл/мин. Наносили 20 мкл неразбавленного мономерного белка (как он сходит при гельфильтрации). Давали пройти диссоциации в течение приблизительно 200. Затем наносили 10 мкл 10 мМ HCl для регенерации микроматрицы. Повторяли нанесение мономерного белка при разных разведениях, т.е. при разведении 1:2 (в ЗФР) с последующей регенерацией с помощью HCl. После этого производили третье нанесение белка при разведении 1:4 с последующей регенерацией вновь с помощью HCl. Величины kon, koff и KD для каждого антитела против ED-A оценивали с помощью программы BIAevaluation. Иммуногистохимия срезов лимфомы. Срезы лимфомы Рамоса фиксировали в холодном ацетоне (-20 С) в течение 10 мин и стекла оставляли сохнуть при комнатной температуре (RT) в течение 30 мин. Стекла затем погружали в TBS на период от 5 до 10 мин и обратную сторону стекол сушили с помощью бумаги, не прикасаясь к срезам. После этого производили блокирование срезов с помощью 1000 мкл 20% фетальной сыворотки телят (FCS) вTBS (50 мМ трис, 100 мМ NaCl с доведенным рН 7,4, 0,01% апротинин) в течение 30 мин. Блокирующий раствор сливали и срезы погружали в TBS на 5 мин. Затем к срезам добавляли 100 мкл первичного антитела scFv F8 (20 нг/мкл) с меткой myc вместе с 10 мкл биотинилированного антитела 9 Е 10 против myc(ОП 0,25, разбавленного 1:20), разбавленного в TBS/3% БСА. В качестве отрицательного контроля служил срез лимфомы Рамоса, который иммуногистохимически окрашивали таким же образом, но без первичного антитела, т.е. антитела scFv F8 против ED-A с меткой myc. Стекла инкубировали во влажной камере в течение 1 ч. Стекла промывали TBS с последующим добавлением стрептавидина-щелочной фосфатазы, разбавленной 1:150 в TBS/3% БСА, и инкубацией во влажной камере в течение 30 мин. Стекла затем промывали TBS дважды в течение 5 мин и обратную сторону стекол сушили бумагой. 500 мкл субстрата Fast Red (5 мг порошка FastRed добавляли к 5 мл раствора Fast Red [49 мл трис-НС 1, 0,1 М, рН 8,2; 1,0 мл N,N-диметилформамида; 10 мг нафтол AS-MX фосфата и 50 мкл раствора левамизода (1,0 мл 0,1 М трис-HCl рН 8,2, 240,8 мг порошка левамизола и фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм, после чего добавляли к каждому стеклу и стекла инкубировали во влажной камере в течение 15 мин. Стекла промывали дважды деионизированной водой путем прямого нанесения деионизированной воды на каждый срез с помощью пластиковой пастеровской пипетки и затем оставляли в воде. Стекла затем переносили в раствор гематоксилина Гиллиса на 50 мин с последующим быстрым переносом в воду и промывкой водой 6 раз. Наконец, стекла монтировали с помощью среды для монтирования Glycergel (DakoCytomation, Glostrup, Дания) и анализировали с помощью микроскопа Axiovert S100 TV (CarlZeiss, Feldbach, Швейцария) с использованием программы Axiovision (Carl Zeiss). Иммуногистохимическое окрашивание срезов рака легкого. Срезы мелкоклеточного рака легкого (мелкоклеточная карцинома) и нескольких немелкоклеточных вариантов рака легкого (плоскоклеточная карцинома, аденокарцинома, бронхоальвеолярная карцинома и крупноклеточная карцинома) иммуногистохимически окрашивали антителом scFv против ED-A с меткойmyc, как описано ранее (см., например, Brack et al., 2006). Вкратце, срезы инкубировали с антителом scFvD5 против ED-A (конечная концентрация 2-15 мкг/мл) и со вторичным антителом (моноклональным антителом 9 Е 10 против myc) одновременно. Связанные антитела выявляли с помощью кроличьего антитела против иммуноглобулина мыши (Dakocytomation, Glostrup, Дания) и затем мышиного комплекса щелочная фосфатаза - моноклональное антитело против щелочной фосфатазы (Dakocytomation). В качестве субстрата фосфатазы использовали Fast Red (Sigma) и срезы подкрашивали гематоксилином (Sigma). Наконец, срезы монтировали с помощью Glycergel (Dakocytomation, Glostrup, Дания) и анализировали с помощью микроскопа Axiovert S100 TV (Carl Zeiss, Feldbach, Швейцария) с использованием программыAxiovision (Carl Zeiss). Результаты. Отбор антител против ED-A. Анализ BIAcore 1. Анализ BIAcore дал график для каждого антитела против ED-А, который анализировали для определения сродства антитела к антигену следующим образом. Ось х каждого графика соответствует времени, а ось у соответствует единицам резонанса (величина, которая указывает на сродство связывания тестируемого антитела к антигену, покрывающему микроматрицу BIAcore). Каждый график дает 3 пика и 1 минимум, которые соответствуют изменениям буфера и поэтому не имеют отношения к интерпретации результатов. Восходящая часть каждого графика представляет собой фазу ассоциации. Чем круче кривая в этой части графика, тем быстрее происходит ассоциация антитела с антигеном. Нисходящая часть каждого графика представляет собой фазу диссоциации антитела от антигена. Чем более пологой является кривая в этой части графика, тем медленнее происходит диссоциация антитела от антигена. Все антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 против ED-A показали более пологую кривую диссоциации по сравнению с исходным антителом против ED-A, от которого они берут свое начало,что указывает на то, что они связывают ED-A и, следовательно, также A-FN с большим сродством, чем исходное антитело. Из всех тестированных антител против ED-A графики для антител Е 5, F1, F8 и H1 показывали наиболее пологие кривые диссоциации. Кривые ассоциации антител H1, С 5, D5, Е 5, С 8, F8 иF1 были более пологими по сравнению с исходным антителом против ED-A, в то время как кривая ассоциации, наблюдавшаяся для антител В 2, В 7, Е 8 и G9, была такой же крутой, как и кривая ассоциации,наблюдавшейся для исходного антитела против ED-A. Однако, поскольку для анализа BIAcore антителH1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 использовали бактериальные супернатанты индуцированныхIPTG клеток Е. coli TG-1, концентрация тестируемых образцов антител была неизвестна, но наиболее вероятно, ниже концентрации исходного антитела против ED-A в образце, использованном для сравнения. Следовательно, кривая ассоциации для антител H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 может быть искусственно заниженной из-за низкой концентрации антитела в образцах, использованных для анализа BIAcore. Однако, поскольку концентрация не оказывает значительного влияния на диссоциацию антитела от его антигена-мишени в анализе BIAcore, пологие кривые диссоциации, наблюдаемые для антител H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9, показывают, что эти антитела связывают ED-A со сродством, по меньшей мере, равным, а возможно, и более высоким по сравнению со сродством исходного антитела против ED-A. Анализ BIAcore 2. Величины kon, koff и KD для каждого антитела против ED-A оценивали с помощью программы BIAevaluation. Величины kon, koff и KD исходного антитела против ED-A и антител против ED-A В 2, C5, D5,C8, F8, В 7 и G9 для антигена 11 А 12 представлены в табл. 2. Все антитела против ED-A В 2, C5, D5, C8,F8, В 7 и G9 имеют лучшие величины KD к антигену 11 А 12 по сравнению с исходным антителом противED-A, от которого они берут начало, что указывает на то, что они связывают ED-A и, следовательно,также и A-FN с большим сродством, чем исходное антитело против ED-A. Иммуногистохимия срезов лимфомы. Иммуногистохимическое окрашивание срезов первичной человеческой лимфомы Рамоса (неходжкинская В-клеточная лимфома [лимфома Буркитта]) антителом scFv F8 против ED-A показало сильное и специфичное окрашивание новообразованной сосудистой сети. Напротив, в отрицательном контроле, в котором первичную лимфому Рамоса окрашивали при идентичных условиях, за исключением отсутствия антитела scFv F8 против ED-A, окрашивание первичной лимфомы Рамоса не дало окраски, включая окрашивание новообразованной сосудистой сети. Это показывает, что антитела scFv против ED-A по настоящему изобретению являются специфически направленными на новообразованную сосудистую сеть лимфом. Поэтому ED-A может служить в качестве общей мишени для участника связывания (например,антитела) на основе стратегии направленной доставки в лимфому. Иммуногистохимия срезов рака легкого. В целом, трудно найти "все опухолевые антитела" в пределах определенного класса рака, например герсептин окрашивает лишь 20% вариантов рака молочной железы. На фиг. 1 показано, что антитело F8 против ED-A специфически локализуется в новообразованной сосудистой сети и мелкоклеточного рака легкого, и немелкоклеточного рака легкого. Немелкоклеточные раки легкого составляют 75-85% всех вариантов рака легкого, в то время как мелкоклеточные раки легкого составляют 15-25%. На фиг. 1 дополнительно продемонстрировано, что антитело против ED-A специфически локализуется во всех тестированных подтипах немелкоклеточного рака легкого, а именно плоскоклеточной карциноме, аденокарциноме, бронхоальвеолярной карциноме и крупноклеточной карциноме. Таким образом, результаты, показанные на фиг. 1, неожиданно демонстрируют, что антитело против ED-A, F8 окрашивает все тестированные гистологические типы рака легкого. Следовательно, ED-A может служить в качестве общей мишени для участника связывания (например, антитела) на основе стратегии направленной доставки в рак легкого. Секвенирование. Все антитела H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 против ED-A являются антителами scFv, и их секвенировали с помощью традиционных методов. Нуклеотидная последовательность антитела H1 против ED-A показана на фиг. 3. Аминокислотная последовательность антитела H1 против ED-A показана на фиг. 4. Предпочтительные нуклеотидные последовательности, кодирующие VH и/или VL антител В 2, С 5,D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 против ED-A, идентичны нуклеотидным последовательностям, кодирующим VH и/или VL антитела H1 против ED-A, за исключением того, что нуклеотидные последовательности, кодирующие H1 CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей, заменены нуклеотидными последовательностями, кодирующими CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей, перечисленными в табл. 1, для соответствующего антитела. Предпочтительные нуклеотидные последовательности, кодирующие VH и/или VL диатела scFv F8 против ED-A, идентичны нуклеотидным последовательностям, кодирующим VH и/или VL антитела H1 против ED-A, за исключением того, что нуклеотидные последовательности, кодирующие H1 CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей, заменены нуклеотидными последовательностями, кодирующими CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей, перечисленными в табл. 1 для антитела F8 против ED-A. Предпочтительная нуклеотидная последовательность, кодирующая линкер, соединяющий VH и VL диатела scFv F8 против ED-A, представляет собой gggtccagtggcggt (SEQ ID NO: 29). Антитела В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7, Е 8 и G9 против ED-A имеют аминокислотные последовательности, идентичные аминокислотным последовательностям антитела HI против ED-A, за исключением того, что аминокислотные последовательности H1 CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей заменены аминокислотными последовательностями легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей CDR1s, перечисленными в табл. 1, для соответствующего антитела. Аминокислотная последовательность диатела scFv F8 против ED-A идентична аминокислотным последовательностям антитела H1 против ED-A, за исключением того, что аминокислотные последовательности H1 CDR1s легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей заменены аминокислотными последовательностями легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей CDR1s, перечисленными в табл. 1 для антитела F8 против ED-A, а аминокислотная последовательность линкера в H1 заменена линкерной аминокислотной последовательностью GSSGG (SEQ ID NO: 28). Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 21) антитела В 2 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 23. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 41) антитела С 5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 43. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 51) антитела D5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 53. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 61) антитела Е 5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 63. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 71) антитела С 8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 73. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 81) антитела F8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 83. Домен VH диатела F8 против ED-A имеет такую же аминокислотную последовательность, что и домен VH антитела F8 против ED-A (т.е. SEQ ID NO: 81). Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 91) антитела F1 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,- 21017995 что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 93. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 101) антитела В 7 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 103. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 111) антитела Е 8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 113. Аминокислотная последовательность домена VH (SEQ ID NO: 31) антитела G9 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VH антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VH CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 33. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 22) антитела В 2 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 26. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 42) антитела С 5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 46. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 52) антитела D5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 56. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 62) антитела Е 5 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 66. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 72) антитела С 8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 76. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 82) антитела F8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 86. Домен VL диатела F8 против ED-A имеет такую же аминокислотную последовательность, что и домен VL антитела F8 против ED-A (т.е. SEQ ID NO: 82). Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 92) антитела F1 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 96. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 102) антитела В 7 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 106. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 112) антитела Е 8 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 116. Аминокислотная последовательность домена VL (SEQ ID NO: 32) антитела G9 против ED-A идентична аминокислотной последовательности домена VL антитела H1 против ED-A, за исключением того,что VL CDR1 H1 заменена SEQ ID NO: 36. Необязательно аминокислота в положении 5 домена VH антител H1, В 2, С 5, D5, Е 5, С 8, F8, F1, В 7,Е 8, G9 против ED-A и диатела scFv F8 может представлять собой остаток лейцина (L), а не остаток валина (V), как показано на фиг. 4 А. Кроме того, альтернативно аминокислота в положении 18 домена VL антител H1, В 2, C5, D5, Е 5, C8, F8, F1, В 7, Е 8, G9 против ED-A и диатела scFv F8 может представлять собой остаток аргинина (R), а не остаток лизина (K), как показано на фиг. 4C. Ссылки. Все ссылки, цитированные в любом месте настоящего описания, включая ссылки, цитированные в любом месте выше, включены, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме и для всех целей. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение антитела, которое связывает изоформу фибронектина с дополнительным доменом A(ED-A), для получения лекарственного средства для лечения рака легкого, где антитело включает доменVH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3,23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или где домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36,46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 иLCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1,LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 2. Применение антитела, которое связывает изоформу фибронектина с дополнительным доменом A(ED-A), для получения лекарственного средства для лечения лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность,HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33,43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 иHCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает областиHCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению сHCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36,46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 иLCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1,LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 3. Применение по п.2, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. 4. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой. 5. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с молекулой, которая обладает биоцидной или цитотоксической активностью. 6. Применение по любому из пп.1-3, где антитело конъюгировано с радиоизотопом. 7. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для доставки в опухоль легкого молекулы, конъюгированной с антителом, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению сLCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 8. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения лекарственного средства для доставки в лимфому молекулы, конъюгированной с антителом, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательностьSEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению сLCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 9. Применение по п.8, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. 10. Применение по любому из пп.7-9, где молекула представляет собой выявляемую метку. 11. Применение по любому из пп.7-9, где молекула обладает биоцидной или цитотоксической активностью. 12. Применение по любому из пп.7-9, где конъюгированная молекула представляет собой радиоизотоп. 13. Применение по любому из пп.1-12, где каркасная область домена VH получена из каркасной области зародышевой линии человека. 14. Применение по п.13, где домен VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1,21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 или 111. 15. Применение по любому из пп.1-14, где каркасная область домена VL получена из каркасной области зародышевой линии человека. 16. Применение по п.15, где домен VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2,22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 или 112. 17. Применение по любому из пп.1-16, где антитело представляет собой одноцепочечный Fv. 18. Применение по любому из пп.1-16, где антитело представляет собой диатело. 19. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагно- 25017995 стического продукта для диагностики рака легкого, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 иHCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83,93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 иHCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 иHCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86,96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3,указанными выше. 20. Применение антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, для получения диагностического продукта для диагностики лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 иHCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83,93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 иHCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 иHCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86,96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3,указанными выше. 21. Применение по п.20, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. 22. Способ выявления или диагностики рака легкого у человека или животного, включающий стадии:(a) введения человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина; и(b) выявления наличия или отсутствия антитела в легком организма человека или животного,где локализация антитела связывания в легком человека или животного указывает на наличие рака легкого, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 23. Способ выявления или диагностики лимфомы у человека или животного, включающий стадии:(a) введения человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина; и(b) выявления наличия или отсутствия антитела в лимфатической системе организма человека или животного,где локализация антитела в лимфатической системе человека или животного указывает на наличие лимфомы, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 24. Способ по любому из пп.22, 23, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой. 25. Способ по любому из пп.22, 23, где антитело конъюгировано с радиоизотопом. 26. Способ лечения рака легкого у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего антитело, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113,HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116,LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 27. Способ лечения лимфомы у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственного средства, включающего антитело, которое связывает изоформуED-A фибронектина, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 28. Способ по п.27, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. 29. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с выявляемой меткой. 30. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с молекулой, которая обладает биоцидной или цитотоксической активностью. 31. Способ по любому из пп.26-28, где антитело конъюгировано с радиоизотопом. 32. Способ доставки молекулы к новообразованной сосудистой сети опухоли легкого у человека или животного, включающий введение человеку или животному антитела, которое связывает изоформуED-A фибронектина, где антитело конъюгировано с молекулой, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность,HCDR1, HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33,43, 53, 63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 иHCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает областиHCDR1, HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению сHCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36,46, 56, 66, 76, 86, 96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 иLCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает областиLCDR1, LCDR2 и LCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1,LCDR2 и LCDR3, указанными выше. 33. Способ доставки молекулы к новообразованной сосудистой сети лимфомы у человека или животного, включающий введение человеку или животному антитела, которое связывает изоформу ED-A фибронектина, где антитело конъюгировано с молекулой, где антитело включает домен VH и домен VL и где домен VH включает каркасную область и области, определяющие комплементарность, HCDR1,HCDR2 и HCDR3, где HCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, 23, 33, 43, 53,63, 73, 83, 93, 103 или 113, HCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и HCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; или домен VH включает области HCDR1,HCDR2 и HCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, указанными выше, и где домен VL включает каркасную область и области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, где LCDR1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86,96, 106 или 116, LCDR2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; или где домен VL включает области LCDR1, LCDR2 иLCDR3, содержащие десять или менее аминокислотных замен по сравнению с LCDR1, LCDR2 и LCDR3,указанными выше. 34. Способ по п.33, где лимфома представляет собой лимфому Ходжкина или неходжкинскую лимфому. 35. Способ по любому из пп.32-34, где молекула представляет собой выявляемую метку. 36. Способ по любому из пп.32-34, где молекула обладает биоцидной или цитотоксической активностью. 37. Способ по любому из пп.32-34, где молекула представляет собой радиоизотоп. 38. Способ по любому из пп.22-37, где каркасная область домена VH получена из каркасной области зародышевой линии человека. 39. Способ по п.38, где домен VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, 21, 31,41, 51, 61, 71, 81, 91, 101 или 111. 40. Способ по любому из пп.22-39, где каркасная область домена VL получена из каркасной области зародышевой линии человека. 41. Способ по п.40, где домен VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 22, 32,42, 52, 62, 72, 82, 92, 102 или 112. 42. Способ по любому из пп.22-41, где антитело представляет собой одноцепочечный Fv. 43. Способ по любому из пп.22-41, где антитело представляет собой диатело.
МПК / Метки
МПК: A61P 35/00, C07K 16/18, A61K 39/395
Метки: рака, вариантами, антиген, лимфомами, легкого, связанный
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/30-17995-antigen-svyazannyjj-s-variantami-raka-legkogo-i-limfomami.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Антиген, связанный с вариантами рака легкого и лимфомами</a>
Соединения и способы для лечения и диагностики рака легкого
Номер патента: 5140
Опубликовано: 30.12.2004
Авторы: Фэн Ликвун, Ванг Тонгтонг
МПК: A61P 35/00, A61K 39/395, C07K 14/47...
Метки: легкого, рака, соединения, диагностики, лечения, способы
Формула / Реферат:
1. Изолированный полинуклеотид, включающий последовательность, выбранную из группы, которая состоит из (a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:347; (b) комплементов последовательности, представленной в SEQ ID NO:347; (c) полинуклеотида, включающего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:347 или ее часть; и (d) дегенеративных вариантов последовательности, представленной в SEQ ID NO:347. 2. Изолированный полипептид, включающий...
Способ и устройство для управления, по меньшей мере, одним параметром вентиляции аппарата искусственного дыхания для вентиляции легкого пациента в соответствии с положением легкого
Номер патента: 10994
Опубликовано: 30.12.2008
Авторы: Джонсон Ройс У., Бём Стефан
МПК: A61B 5/08, A61H 31/02
Метки: одним, соответствии, управления, аппарата, меньшей, устройство, искусственного, вентиляции, легкого, дыхания, пациента, положением, мере, способ, параметром
Формула / Реферат:
1. Способ записи, предназначенный для записи состояния искусственно вентилируемого легкого пациента в соответствии с положением легкого, когда пациент лежит в медицинской кровати, а положение искусственно вентилируемого легкого можно изменять посредством механизма изменения положения, включающий следующие этапы: a) перемещение искусственно вентилируемого легкого посредством механизма изменения положения в заданное положение, b) определение...
Высоковольтный электростатический классификатор-сепаратор и связанный с ним способ
Номер патента: 6394
Опубликовано: 29.12.2005
Авторы: Ян Эрик С., Грей Томас Дж., Макгенри Кевин Р.
МПК: B03C 7/00
Метки: высоковольтный, ним, классификатор-сепаратор, связанный, способ, электростатический
Формула / Реферат:
1. Высоковольтный электростатический классификатор-сепаратор для классификации и сепарации порошкообразных материалов по размеру и проводимости, содержащий классифицирующую секцию коронного разряда, включающую удлиненный проход, по существу, с плоскими боковыми стенками, ограничивающими первый конец для приема порошкообразного материала и второй конец для направления порошкообразного материала в виде двух фракций согласно размерам частиц, и...
Замещённые 5-фенилпиримидины в терапии рака, фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения рака у животных
Номер патента: 14098
Опубликовано: 30.08.2010
Авторы: Швеглер Анья, Наве Барбара, Шивек Франк, Райнхаймер Йоахим, Мюллер Бернд, Гроте Томас, Блеттнер Карстен, Ябс Торстен
МПК: C07D 239/42, A61K 31/506, A61K 31/505...
Метки: замещённые, основе, лечения, терапии, способ, 5-фенилпиримидины, фармацевтическая, композиция, рака, животных
Формула / Реферат:
1. Применение замещенных 5-фенилпиримидинов формулы I и их фармацевтически приемлемых солей в терапии ракагде X означает группу формулы NR1R2, в которойR1 означает C1-C6-алкил, C2-C6-алкенил, C1-C8-галоалкил или C3-C8-циклоалкил, которые могут быть замещены C1-C6-алкилом,R2 означает водород, C1-C6-алкил или C2-C6-алкенил,R1 и R2вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидиниловое, 3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-иловое,...
Мономодальный связанный диеновый эластомер, содержащий силанольную группу в середине цепи, способ его получения и содержащая его каучуковая композиция
Номер патента: 17106
Опубликовано: 28.09.2012
Авторы: Шабош Филипп, Фавро Жан-Мишель, Марешаль Жан-Марк
МПК: B60C 1/00, C08C 19/25, C08L 19/00...
Метки: получения, каучуковая, группу, содержащий, мономодальный, эластомер, содержащая, связанный, способ, композиция, середине, диеновый, силанольную, цепи
Формула / Реферат:
1. Связанный диеновый эластомер, содержащий силанольную функциональную группу, отличающийся тем, что он содержит силанольную группу в середине цепи и имеет общую долю T содержащих Si функциональных групп, представляющую собой соотношение Ns/Np, где Ns означает число моль соединенного со связанным полимером кремния, определенное методом ядерного магнитного резонанса ЯМР 1H и выраженное в ммоль/кг, Np означает число ммоль полимера перед...
Предыдущий патент: Композиции антител
Следующий патент: Система аэрации жидкости
Случайный патент: Способ выявления злокачественной клетки у индивида