Антитела, направленные против бета-амилоидного пептида, и способы их применения

Предложено моноклональное антитело 9TL и антитела, имеющие происхождение из 9TL,направленные против бета-амилоидного пептида, и способы их применения для диагностики и лечения болезни Альцгеймера и заболеваний, ассоциированных с A-пептидом. Также описаны способы применения антител, направленных против бета-амилоидного пептида с нарушенной эффекторной функцией, для лечения болезни Альцгеймера и заболеваний, ассоциированных с Aпептидом. Розенталь Арнон, Понс Хауме, Хо Вей-Хсиен, Гримм Ян Маркус (US) Поликарпов А.В., Борисова Е.Н. (RU) 016357 Перекрестная ссылка на родственные заявки В заявке на данный патент испрашивается приоритет предварительных заявок на патент США 60/592494, поданной 30 июля 2004 г.; 60/653197, поданной 14 февраля 2005 г.; и 60/676093, поданной 29 апреля 2005 г., все из которых включены в данное описание путем ссылки. Область изобретения Изобретение относится к антителам к бета-амилоидному пептиду. Изобретение также относится к применению таких антител в лечении и/или профилактике заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Заявление, касающееся государственной поддержки исследования или разработки Не производилось. Предшествующий уровень техники Болезнь Альцгеймера (БА) представляет собой дегенеративное расстройство головного мозга, клинически характеризующееся прогрессирующими нарушениями памяти, спутанностью, постепенным ухудшением физического состояния и, в конечном итоге, приводящее к смерти. Приблизительно 15 млн людей во всем мире поражены болезнью Альцгеймера, и предполагают, что их количество резко возрастет по мере увеличения продолжительности жизни. Гистологически заболевание характеризуется нейритными бляшками, прежде всего обнаруживаемыми в ассоциативной зоне коры, лимбической системе и подкорковых узлах. Основным компонентом этих бляшек является бета-амилоидный пептид (А), представляющий собой продукт расщепления белка-предшественника бета-амилоидного пептида (АРР или АРР). АРР представляет собой трансмембранный гликопротеин I типа, содержащий крупный эктопический N-концевой домен, трансмембранный домен и небольшой цитоплазматический С-концевой хвост. Альтернативный сплайсинг транскрипта одного гена АРР на хромосоме 21 приводит в результате к нескольким изоформам, отличающимся по количеству аминокислот. По-видимому, A играет центральную роль в нейропатологии болезни Альцгеймера. Наследственные формы заболевания связаны с мутациями в АРР и генах пресенилина (Tanzi et al., 1996, Neurobiol.Dis. 3:159-168; Hardy, 1996, Ann. Med. 28:255-258). Мутации в этих генах, связанные с заболеванием,приводят в результате к увеличению продукции формы A, состоящей из 42 аминокислот, представляющей собой преобладающую форму, обнаруживаемую в амилоидных бляшках. Кроме того, иммунизация трансгенных мышей, у которых происходит сверхэкспрессия связанной с заболеванием мутантной формы АРР, человеческим A уменьшает образование бляшек и ассоциированных патологий (Schenk et al.,1999, Nature 400:173-177; WO 99/27944), и периферическое введение антител, направленных против A,также уменьшает образование бляшек в головном мозге (Bard et al., 2000, Nature Medicine 6(8):916-919;WO 2004/032868; WO 00/72880). Сообщали, что Fc-опосредованный фагоцитоз клетками микроглии и/или макрофагами важен для процесса очищения от бляшек in vivo. Bard et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 100, 2023-2028 (2003). Однако также сообщали о том, что механизмы, не опосредованные Fc, вовлечены в очищение от -амилоида invivo при иммунотерапии. Bacskai et al., J. Neurosci. 22:7873-7878 (2002); Das et al., J. Neurosci. 23:85328538 (2003). Таким образом, терапия антителами представляет собой перспективный подход к лечению и профилактике болезни Альцгеймера. Однако проводимые на людях клинические исследования с использованием вакцины, включающей A1-42, были приостановлены из-за менингоэнцефалита у ряда пациентов.Orgogozo et al., Neruology 61:7-8 (2003); Ferrer et al., Brain Pathol. 14:1 1-20 (2004). Сообщали о том, что пассивная иммунизация N-концевым специфическим анти-А антителом приводит в результате к значительному уменьшению в основном диффузного амилоида, но вызывает увеличение частоты микрокровоизлияний в мозг у трансгенных мышей, проявляющих возрастное развитие амилоидных бляшек и нейродегенерацию, а также церебральную амилоидную ангиопатию (ЦАА), подобную наблюдаемой в головном мозге людей, страдающих БА. Pfeifer et al., Science 298:1379 (2002). Предположили, что обострение микрокровоизлияний, ассоциированных с церебральной амилоидной ангиопатией (ЦАА) у АРРтрансгенных мышей при пассивной иммунизации антителом, направленным против бета-амилоида, зависит от распознавания антителом отложений бета-амилоидного пептида. Racke et al., J. Neurosci. 25:629636 (2005). Пассивная иммунизация антителами к пептидному компоненту амилоидного отложения, где антитела лишены Fc-областей, предложена для уменьшения риска воспаления (WO 03/086310). Остается потребность в антителах и других иммунотерапевтических агентах, направленных против A, обладающих улучшенным профилем эффективности и безопасности, и подходящих для применения пациентамлюдям. В данном изобретении ссылаются на различные публикации (включая патенты и заявки на патенты). Описания этих публикаций включены полностью путем ссылки.-1 016357 Краткое изложение сущности изобретения Раздел I. В настоящем изобретении предложены способы лечения заболевания, характеризующегося аномальным отложением белка в головном мозге субъекта. Способы включают введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с белком или белковым отложением, или полинуклеотид, кодирующий антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В изобретении также предложены способы лечения или профилактики заболеваний, ассоциированных с амилоидным отложением A (например, отложением в ткани головного мозга и сосудистой сети головного мозга) у субъекта, таких как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, мультиинфарктная деменция, умеренное нарушение познавательной способности и церебральная амилоидная ангиопатия. Способ включает введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В изобретении также предложены способы задержки развития симптома, ассоциированного с заболеваниями, ассоциированными с амилоидным отложением A у субъекта, такими как болезнь Альцгеймера, включающие введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В изобретении также предложены способы подавления образования амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающие введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело,где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга) субъекта. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В некоторых воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. В изобретении также предложены способы уменьшения амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающие введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга) субъекта. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В некоторых воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. В изобретении также предложены способы удаления или очистки от амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающие введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело,где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга) субъекта. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В некоторых воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. В изобретении также предложены способы ингибирования аккумуляции A-пептида в ткани, включающие приведение ткани в контакт с антителом, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В изобретении также предложены способы снижения концентрации A-пептида (такого как растворимая, олигомерная и отложенная форма) у субъекта, включающие введение субъекту эффективного количества антитела, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотида, кодирующего антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В некоторых воплощениях ингибируют и/или уменьшают аккумуляцию A-пептида в головном мозге. В некоторых воплощениях ингибируют и/или уменьшают токсические эффекты A-пептида. Таким образом, способ по изобретению может быть использован для лечения любого заболевания, при котором происходит или предполагается аккумуляция A-пептида,такого как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, болезнь Паркинсона и мультиинфарктная деменция. В изобретении также предложены способы улучшения познавательной способности или обращения симптомов ухудшения познавательной способности, ассоциированной с заболеваниями, ассоциированными с амилоидным отложением A у субъекта, такими как болезнь Альцгеймера, включающие введе-2 016357 ние субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело, где это антитело имеет нарушенную эффекторную функцию. В изобретении также предложены способы лечения или профилактики заболеваний, ассоциированных с амилоидным отложением A, включающие введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом или агрегированной формой бета-амилоидного пептида, где антитело включает Fc-область с вариацией относительно встречающейся в природе Fc-области, где данная вариация приводит в результате к нарушению эффекторной функции. В некоторых воплощениях введение антитела вызывает меньшее микрокровоизлияние в мозг по сравнению с введением антитела без такой вариации. Полипептиды, которые специфически связываются с A-пептидом или агрегированной формой Aпептида и включают константную область тяжелой цепи, имеющей нарушенную эффекторную функцию,также могут быть использованы в любом из описанных здесь способов. В некоторых воплощениях полипептид включает последовательность (например, один или более чем один гипервариабельный участок(CDR, имеющую происхождение из антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В некоторых воплощениях полипептид включает последовательность (например, один или более чем одинCDR), имеющую происхождение из антитела 6G. Антитело и полипептид, используемые в способах по изобретению, специфически связываются сA-пептидом или агрегированной формой A-пептида, но имеют нарушенную эффекторную функцию. В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой F(ab')2-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой Fab-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой одноцепочечное антитело scFv. В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает константную область тяжелой цепи,имеющую нарушенную эффекторную функцию, где константная область тяжелой цепи включает Fcобласть. В некоторых воплощениях N-гликозилирование Fc-области удалено. В некоторых воплощенияхFc-область содержит мутацию в пределах последовательности распознавания N-гликозилирования, посредством чего Fc-область антитела или полипептида не является N-гликозилированной. В некоторых воплощениях Fc-область является ПЭГилированной (ПЭГ-полиэтиленгликоль). В некоторых воплощениях константная область тяжелой цепи антитела или полипептида представляет собой константную область тяжелой цепи человеческого IgG2a, содержащую следующие мутации: А 330 Р 331 на S330S331 (нумерация аминокислот со ссылкой на последовательность IgG2a дикого типа). В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает константную область IgG4, содержащую следующие мутации:E233F234L235 на P233V234A235. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 1-16 A-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с N-концом A-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 16-28 A-пептида. В некоторых воплощениях антитело специфически связывается с эпитопом со стороны С-конца A-пептида, таким как эпитоп, начинающийся с аминокислоты 25 или дальше. Антитело может специфически связываться со свободной аминокислотой С-конца A-пептида, имеющего усеченный С-конец, например A 1-37, 1-38, 1-39, 1-40, 1-41, 1-42, 1-43. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-40 A1-40-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-42 A1-42-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-43 A1-43-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с A-пептидом, не связываясь с полноразмерным амилоидным белком-предшественником (АРР). В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с агрегированной формой A, не связываясь с растворимой формой. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с растворимой формой A, не связываясь с агрегированной формой. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с агрегированной формой и растворимыми формами A. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с С-концевым пептидом 33-40 A1-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в A1-40, который включает аминокислоты 35-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в A1-40, который включает аминокислоты 36-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в A1-40, который включает аминокислоту 39 и/или 40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с A1-40, но не связывается специфически с A1-42 и/или A1-43. В некоторых воплощениях антитело включает вариабельную область антитела 9TL или антитела, имеющего происхождение из описанного здесь 9TL. В некоторых воплощениях антитело или полипептид полностью ингибирует связыва-3 016357 ние антитела 9TL и/или антитела или полипептида, имеющего происхождение из 9TL, с A1-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид связывается с A1-40 с более высокой аффинностью по сравнению с аффинностью связывания с A1-42 и A1-43. В некоторых воплощениях антитело связывается с эпитопом в A1-40, который включает аминокислоты 25-34 и 40. В некоторых воплощениях антитело включает вариабельную область антитела 6G или антитела, имеющего происхождение из описанного здесь 6G. В некоторых воплощениях антитело или полипептид полностью ингибирует связывание антитела 6G и/или антитела или полипептида, имеющего происхождение из 6G, с A. Введение антитела или полипептида, которое специфически связывается с A-пептидом и имеет нарушенную эффекторную функцию, может быть осуществлено с использованием любого из способов,известных в данной области техники, включающих внутривенное, подкожное введение, введение путем ингаляции, внутриартериальное, внутримышечное, внутрисердечное, внутрижелудочковое, парентеральное, интратекальное и внутрибрюшинное введение. Введение может быть системным, например внутривенным, или локализованным. Вышеизложенное также в общем применимо к полипептидам и полинуклеотидам по изобретению. В изобретении также предложена фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество любого из антител или полипептидов, которые специфически связываются с A-пептидом или агрегированной формой A-пептида и имеют нарушенную эффекторную функцию, или полинуклеотидов, кодирующих такие антитела или полипептиды, и фармацевтически приемлемый эксципиент. В изобретении также предложены наборы и композиции, включающие любую одну или более чем одну из композиций, включающих эффективное количество любого из антител или полипептидов, которые специфически связываются с A-пептидом или агрегированной формой A-пептида и имеют нарушенную эффекторную функцию, или полинуклеотидов, кодирующих такие антитела или полипептиды. Эти наборы, как правило, находящиеся в подходящей упаковке и снабженные соответствующими инструкциями, полезны для любого из описанных здесь способов. В изобретении также предложен способ получения терапевтического гуманизированного антитела для лечения заболевания, ассоциированного с амилоидными отложениями A-пептида в головном мозге человека, включающий отбор первичного гуманизированного антитела, которое специфически связывается с A-пептидом; и изменение Fc-области этого антитела с получением терапевтического гуманизированного антитела, имеющего нарушенную эффекторную функцию относительно данного первичного гуманизированного антитела. Раздел II. Раскрытое в данном описании изобретение относится к антителам, которые связываются с Сконцом A1-40 пептида (SEQ ID NO: 15, представленная в табл. 4). Соответственно в одном из аспектов изобретение представляет собой антитело 9TL (равноценно называемое "9TL"), которое продуцируется экспрессирующими векторами, имеющими номера в соответствии с Американской коллекцией типовых культур АТСС РТА-6124 и РТА-6125. Аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи 9TL представлены на фиг. 1. Фрагменты антитела 9TL, представляющие собой гипервариабельные участки (CDR) (включая CDR Чотиа и Кабата), также представлены на фиг. 1. Понятно, что ссылка на любой из фрагментов или целую область 9TL охватывает последовательности, продуцируемые экспрессирующими векторами, имеющими АТССРТА-6124 и РТА-6125, и/или последовательности, изображенные на фиг. 1. В еще одном аспекте изобретения также предложены варианты антитела 9TL с аминокислотными последовательностями, изображенными в табл. 3. В еще одном аспекте изобретение представляет собой антитело, включающее фрагмент или область антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В одном из воплощений фрагмент представляет собой легкую цепь антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент представляет собой тяжелую цепь антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент содержит одну или более чем одну вариабельную область легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент содержит одну или более чем одну вариабельную область легкой цепи и/или тяжелой цепи, представленной на фиг. 1. В еще одном воплощении фрагмент содержит один или более чем один CDR легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL. В еще одном аспекте изобретения предложены полипептиды (которые могут представлять собой антитело или могут не представлять собой антитело), включающие любой один или более чем один из следующих: а) один или более чем один CDR антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; б) CDR H3 тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; в) CDR L3 легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; г) три CDR легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; д) три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов,представленных в табл. 3; е) три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В изобретении также предложены полипептиды (которые могут представлять собой антитело или могут не представлять собой антитело), включающие любой один или более чем один из следующих: а) один или более чем один (один, два, три, четыре, пять или шесть) CDR,-4 016357 имеющих происхождение из антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; б) CDR, имеющий происхождение из CDR НЗ тяжелой цепи антитела 9TL; и/или в) CDR, имеющий происхождение изCDR L3 легкой цепи антитела 9TL. В некоторых воплощениях CDR представляет собой CDR, представленный на фиг. 1. В некоторых воплощениях один или более чем один CDR, имеющий происхождение из антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 86%, по меньшей мере приблизительно на 87%, по меньшей мере приблизительно на 88%, по меньшей мере приблизительно на 89%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 91%, по меньшей мере приблизительно на 92%, по меньшей мере приблизительно на 93%, по меньшей мере приблизительно на 94%, по меньшей мере приблизительно на 95%, по меньшей мере приблизительно на 96%, по меньшей мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или по меньшей мере приблизительно на 99% идентичен по меньшей мере одному, по меньшей мере двум, по меньшей мере трем, по меньшей мере четырем, по меньшей мере пяти или по меньшей мере шести CDR 9TL или его вариантов. В некоторых воплощениях CDR представляет собой CDR Кабата. В других воплощениях CDR представляет собой CDR Чотиа. В других воплощениях CDR представляет собой комбинацию CDR Кабата и Чотиа (также называемую "комбинированный CDR" или "расширенный CDR"). Другими словами,для любого из данных воплощений, содержащих более чем один CDR, CDR может представлять собой любой из CDR Кабата, Чотиа и/или комбинированный. В некоторых воплощениях полипептид (такой как антитело) включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, где L1 представляет собой L, V или I; где Y2 представляет собой Y или W; где S3 представляет собой S, Т или G; где L4 представляет собой L, R, А, V, S, T, Q или Е; где V6 представляет собой V, I, Т, Р, С, Q, S, N или F и где Y7 представляет собой Y, H, F, W, S, I, V или А. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность представляет собой CDR3 в вариабельной области тяжелой цепи. Для удобства здесь "представляет собой" в этом контексте или ссылке на аминокислоту относится к выборам аминокислот(ы) для заданного положения со ссылкой на положение в SEQ ID. Например, "L1 представляет собой L, V или I" относится к аминокислоте L в положении 1 в SEQ ID NO: 5, которая может быть замещена V или I. В некоторых воплощениях полипептид (такой как антитело) включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, где Y8 представляет собой Y, А или Н и где A11 представляет собой А или S и где K12 представляет собой K или А. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность представляет собой CDR1 в вариабельной области легкой цепи. В некоторых воплощениях полипептид (такой как антитело) включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, где L1 представляет собой L, M, N, С, F, V, K, S, Q, G, S; гдеL; где Y6 представляет собой Y, P, A, W, Q, M, S или Е; где V8 представляет собой V, L, K, Н, Т, А, Е или М и где L9 представляет собой L, I, T, S или V. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность представляет собой CDR3 в вариабельной области легкой цепи. В некоторых воплощениях полипептид (такой как антитело) включает вариабельную область тяжелой цепи, включающую (а) область CDR1, представленную в SEQ ID NO: 3; (б) область CDR2, представленную в SEQ ID NO: 4; и (в) область CDR3, представленную в SEQ ID NO: 5, где L1 представляет собойL, V или I, где Y2 представляет собой Y или W; где S3 представляет собой S, Т или G; где L4 представляет собой L, R, А, V, S, T, Q или Е; где V6 представляет собой V, I, T, Р, С, Q, S, N или F и где Y7 представляет собой Y, H, F, W, S, I, V или А. В некоторых воплощениях полипептид (такой как антитело) включает вариабельную область легкой цепи, включающую (а) область CDR1, представленную в SEQ ID NO: 6, где Y8 представляет собойV. В некоторых воплощениях антитело по изобретению представляет собой человеческое антитело. В других воплощениях антитело по изобретению представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых воплощениях антитело является моноклональным. В некоторых воплощениях антитело (или полипептид) выделяют. В некоторых воплощениях антитело (или полипептид) является, по существу, чистым. Константная область тяжелой цепи антител может представлять собой любой из типов константной области антител, таких как IgG, IgM, IgD, IgA и IgE; и любых изотипов, таких как IgG1, IgG2, IgG3 иIgG4. В некоторых воплощениях антитело включает модифицированную константную область, такую как константная область, которая является иммунологически инертной (которая включает частично иммунологически инертную область, и взаимозаменяемо используется с термином "имеет нарушенную эффек-5 016357 торную функцию"), например не запускает комплемент-опосредованный лизис, не стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC) или не активирует микроглию. В некоторых воплощениях константная область модифицирована, как описано в Eur. J. Immunol. (1999),29:2613-2624; заявке РСТPCT/GB99/01441; и/или заявке на патент Великобритании 9809951.8. В других воплощениях антитело включает константную область тяжелой цепи IgG2a человека, содержащую следующие мутации: А 330 Р 331 на S330S331 (нумерация аминокислот со ссылкой на последовательность IgG2a дикого типа); Eur. J. Immunol. (1999), 29:2613-2624. В некоторых воплощениях антитело включает константную область IgG4, содержащую следующие мутации: E233F234L235 наP233V234A235. В других воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования. В некоторых воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования путем мутации остатка, к которому присоединен олигосахарид (такого как Asn297), и/или фланкирующих остатков,которые составляют часть последовательности распознавания N-гликозилирования в константной области. В некоторых воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования. Константная область может быть агликозилирована для N-гликозилирования ферментативно или путем экспрессии в клетке-хозяине, не способной к гликозилированию. В еще одном аспекте изобретения предложен полинуклеотид (который может быть выделен), включающий полинуклеотид, кодирующий фрагмент или область антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В одном из воплощений фрагмент представляет собой легкую цепь антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент представляет собой тяжелую цепь антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент содержит одну или более чем одну вариабельную область легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL. В еще одном воплощении фрагмент содержит один или более чем один (т.е. один,два, три, четыре, пять, шесть) гипервариабельный участок (CDR) легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL. В еще одном аспекте изобретение представляет собой полинуклеотид (который может быть выделен), включающий полинуклеотид, кодирующий антитело 9TL или его варианты, представленные в табл. 3. В некоторых воплощениях полинуклеотид включает любой или оба полинуклеотида, представленные в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. В еще одном аспекте изобретения предложены полинуклеотиды, кодирующие любое из описанных здесь антител (включая фрагменты антител) или полипептидов. В еще одном аспекте изобретения предложены векторы (включая экспрессирующие и клонирующие векторы) и клетки-хозяева, включающие любые из раскрытых здесь полинуклеотидов. В некоторых воплощениях вектор представляет собой pDb.9TL.hFc2a, имеющий АТССРТА-6124. В других воплощениях вектор представляет собой pEb.9TL.hK, имеющий АТССРТА-6125. В еще одном аспекте изобретение представляет собой клетку-хозяина, включающую полинуклеотид, кодирующий любое из описанных здесь антител. В еще одном аспекте изобретение представляет собой комплекс A1-40, связанного с антителом 9TL или его вариантами, представленными в табл. 3. В еще одном аспекте изобретение представляет собой комплекс A1-40, связанного с любым из описанных здесь антител или полипептидов. В еще одном аспекте изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, включающую эффективное количество любого из описанных здесь полипептидов (включая антитела, такие как антитело, включающее один или более чем один CDR антитела 9TL) или полинуклеотидов и фармацевтически приемлемый эксципиент. В еще одном аспекте изобретение представляет собой способ получения антитела 9TL, включающий культивирование клетки-хозяина или ее потомства в условиях, которые дают возможность для продукции антитела 9TL, где клетка-хозяин включает экспрессирующий вектор, кодирующий антитело 9TL; и в некоторых воплощениях очистку антитела 9TL. В некоторых воплощениях экспрессирующий вектор включает одну или обе полинуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 9 и SEQID NO: 10. В еще одном аспекте изобретения предложены способы получения любого из описанных здесь антител или полипептидов путем экспрессии одного или более чем одного полинуклеотида, кодирующего антитело (которые могут быть экспрессированы раздельно в виде одной легкой или тяжелой цепи, или легкая и тяжелая цепь обе экспрессируются из одного вектора) или полипептид в подходящей клетке, как правило, с последующим извлечением и/или выделением интересующего антитела или полипептида. В изобретении также предложен способ профилактики, лечения, ингибирования или задержки развития болезни Альцгеймера и других заболеваний, ассоциированных с измененной экспрессией A или АРР или аккумуляцией A-пептида, таких как синдром Дауна, болезнь Паркинсона, мультиинфарктная деменция, умеренное нарушение познавательной способности, церебральная амилоидная ангиопатия и синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Способ включает введение субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению.-6 016357 В изобретении также предложен способ задержки развития симптома, ассоциированного с болезнью Альцгеймера или другими заболеваниями, связанными с аккумуляцией A-пептида у субъекта,включающий введение данному субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению. В изобретении также предложен способ подавления образования амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающий введение данному субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга). В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В других воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. В изобретении также предложен способ уменьшения амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающий введение данному субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга) субъекта. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В других воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. В изобретении также предложен способ удаления или очистки от амилоидных бляшек и/или амилоидной аккумуляции у субъекта, включающий введение данному субъекту эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в головном мозге (ткани головного мозга) субъекта. В некоторых воплощениях амилоидные бляшки находятся в сосудистой сети головного мозга. В других воплощениях амилоидная аккумуляция происходит в системе кровообращения. Дополнительно в изобретении предложен способ ингибирования аккумуляции A-пептида в ткани,включающий приведение ткани в контакт с антителом или полипептидом по изобретению. В изобретении также предложен способ уменьшения концентрации A-пептида (такого как растворимая, олигомерная и отложенная форма) в головном мозге индивидуума, включающий введение данному индивидууму эффективного количества антитела или полипептида по изобретению. В некоторых воплощениях ингибируют и/или уменьшают аккумуляцию A-пептида в головном мозге. В некоторых воплощениях ингибируют и/или подавляют токсические эффекты A-пептида. Таким образом, способ по изобретению может быть использован для лечения любого заболевания, при котором происходит аккумуляция A-пептида или предполагают аккумуляцию A-пептида, такого как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, болезнь Паркинсона, мультиинфарктная деменция, умеренное нарушение познавательной способности и церебральная амилоидная ангиопатия. В изобретении также предложены способы улучшения познавательной способности или обращения симптомов ухудшения познавательной способности, ассоциированной с заболеваниями, ассоциированными с амилоидным отложением A в головном мозге индивидуума, такими как болезнь Альцгеймера,включающие введение данному индивидууму эффективной дозы фармацевтической композиции, включающей антитело, полипептид или полинуклеотид по изобретению. Любые описанные здесь антитела, полипептиды или полинуклеотиды могут быть использованы в способах по изобретению. В некоторых воплощениях антитело представляет собой антитело 9TL. Антитела и полипептиды по изобретению дополнительно могут быть использованы в обнаружении,диагностике и контроле болезни Альцгеймера и других заболеваний, ассоциированных с изменением экспрессии A или АРР, таких как синдром Дауна и СПИД. Способ включает приведение в контакт образца пациента, который, как предполагают, обладает измененной экспрессией A или АРР, с антителом по изобретению, и определение того, отличается ли уровень A или АРР от уровня для контрольного образца или образца сравнения. В некоторых воплощениях уровень A в сыворотке крови измеряют до и после введения анти-A антитела и оценивают любое увеличение уровня A в сыворотке крови. Введение любого антитела или полипептида по изобретению может быть осуществлено любыми способами, известными в данной области техники, включая внутривенное, подкожное введение, введение путем ингаляции, внутриартериальное, внутримышечное, внутрисердечное, внутрижелудочковое,парентеральное, интратекальное и внутрибрюшинное введение. Введение может быть системным, например внутривенным, или локализованным. Вышеизложенное также в общем применимо к полипептидам и полинуклеотидам по изобретению. В еще одном аспекте изобретения предложены наборы и композиции, включающие одну или более чем одну из описанных здесь композиций. Эти наборы, как правило, находящиеся в подходящей упаковке и снабженные соответствующими инструкциями, полезны для любого из описанных здесь способов.-7 016357 Краткое описание некоторых графических материалов На фиг. 1 представлена аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи(SEQ ID NO: 1) и вариабельной области легкой цепи (SEQ ID NO: 2) антитела 9TL. CDR Кабата выделены жирным шрифтом, a CDR Чотиа подчеркнуты. Аминокислотные остатки вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи последовательно пронумерованы. На фиг. 2 представлено картирование эпитопа, распознаваемого антителом 9TL путем конкуренции между пептидами. A1-40 пептид иммобилизовали на чипе SA. Моноклональное антитело 2289 и Fabфрагмент 9TL (50 нМ каждого), которые предварительно инкубировали в течение 1 ч с 10 мкМ различных пептидов (аминокислоты 28-40, 1-40, 1-28, 28-42, 22-35, 1-16, 1-43, 33-40, 1-38 или 17-40 A) или без пептидов, затем пропускали через чип. Измеряли связывание Fab-фрагмента антитела с иммобилизованным A1-40 пептидом. Фиг. 3 представляет собой график, демонстрирующий картирование эпитопа, распознаваемого антителом 2 Н 6 путем конкуренции между пептидами. A1-40-пептид иммобилизовали на чипе SA. Моноклональные антитела 2289, 2286 или 2 Н 6 (100 нМ каждого), которые предварительно инкубировали в течение 1 ч с 16 мкМ различных пептидов (аминокислоты 1-16, 1-28, 1-38, 1-40, 1-42, 1-43, 17-40, 17-42,22-35, 25-35 или 33-40 A) или без пептидов, пропускали через чип. Измеряли связывание антитела с иммобилизованным A1-40 пептидом. Фиг. 4 представляет собой график, демонстрирующий связывание антитела 2 Н 6, 2286 и 2289 с различными С-концевыми вариантами A-пептида. GST (глутатион-S-трансфераза)-Ар варианты (М 35 А,V36A, G37A, G38A, V39A или V40A) или GST-A-пептид 1-39, 1-41, 1-40, 1-42 иммобилизовали на планшете для иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA). Моноклональное антитело 2286, 2 Н 6 или 2289 (0,3 нМ каждого моноклонального антитела mAb) инкубировали с каждым из иммобилизованных пептидов, и их связывание обнаруживали путем дополнительной инкубации с биотинилированным IgG к мышиным антителам (H+L) и затем комплексом стрептавидин-пероксидаза хрена (ПХ). Фиг. 5 представляет собой график, демонстрирующий обращение симптомов нарушения пространственного обучения у АРР-трансгенных мышей после введения антитела 2 Н 6 и дегликозилированного 2 Н 6 в течение 16 недель. Мышей тестировали в течение 2 дней в водном лабиринте с радиальными коридорами. На оси Y представлено среднее количество ошибок, совершенных в течение 2-дневного периода испытания. Блоки под номерами 1-5 демонстрируют тесты в 1 день; и блоки под номерами 6-10 демонстрируют тесты на 2 день. указывает на р меньше 0,05 для мышей, обработанных 2 Н 6 (А-2 Н 6) и дегликозилированным 2 Н 6 (A-De-2H6), по сравнению с мышами, обработанными антителом к AMN(A-AMN). указывает на р меньше 0,01 для мышей, обработанных 2 Н 6 (А-2 Н 6) и дегликозилированным 2 Н 6 (A-De-2H6), по сравнению с мышами, обработанными антителом к AMN (A-AMN). Фиг. 6 А и 6 Б представляют собой графики, демонстрирующие уменьшение концентрации бетаамилоидного пептида, окрашенного Конго красным, в паренхиме гиппокампа (фиг. 6 Б) и лобной доле коры головного мозга (фиг. 6 А) после обработки антителом 2 Н 6, антителом к AMN (названным AMN) и дегликозилированным 2 Н 6 (названным D-2H6) в течение 16 недель. Оси Y на фиг. 6 А и 6 Б демонстрируют середину процентной области, положительной в отношении окрашивания Конго красным. Оси X на фиг. 6 А и 6 Б демонстрируют тип вводимого антитела. Фиг. 7 А и 7 Б представляют собой графики, демонстрирующие увеличение концентрации бетаамилоидного пептида, окрашенного Конго красным, в сосудах гиппокампа (фиг. 7 Б) и лобной доле коры головного мозга (фиг. 7 А) после обработки антителом 2 Н 6, антителом к AMN (названным AMN) и дегликозилированным 2 Н 6 (названным D-2H6) в течение 16 недель. Оси Y на фиг. 7 А и 7 Б демонстрируют середину процентной области, положительной в отношении окрашивания Конго красным. Оси X на фиг. 7 А и 7 Б демонстрируют тип вводимого антитела. Фиг. 8 представляет собой график, демонстрирующий количество картин, положительных при окрашивании прусским голубым, через 16 недель после обработки антителом 2 Н 6, антителом к AMN (названным AMN) и дегликозилированным 2 Н 6 (названным D-2H6). Ось Y представляет положительные картины на срез. Ось X представляет тип вводимого антитела. Фиг. 9 представляет собой график, демонстрирующий уровень A-пептида в сыворотке крови после введения антитела к AMN (названного AMN), антитела 2 Н 6 (названного 2 Н 6), дегликозилированного 2 Н 6 (названного 2H6-D) мышам АРР Tg2576 и после введения антитела к AMN и антитела 2 Н 6 мышам дикого типа (ДТ). На фиг. 10 представлено иммуноокрашивание CD45 в гиппокампе мыши после внутричерепного введения антитела 2 Н 6 (А) или дегликозилированного антитела 2 Н 6 (В). Нижняя панель демонстрирует отношение средней области, занятой положительным окрашиванием CD45 в инъецированной стороне к неинъецированной стороне в лобной доле коры головного мозга и гиппокампе после внутричерепного введения контрольного антитела, антитела 2 Н 6 или дегликозилированного антитела 2 Н 6. указывает на р меньше 0,01 по сравнению с контрольным антителом. На фиг. 11 представлено иммуноокрашивание Fc рецептора в гиппокампе мыши после внутричерепного введения антитела 2 Н 6 (А) или дегликозилированного антитела 2 Н 6 (В). Нижняя панель демон-8 016357 стрирует отношение средней области, занятой положительным окрашиванием Fc рецептора в инъецированной стороне к неинъецированной стороне в лобной доле коры головного мозга и гиппокампе после внутричерепного введения контрольного антитела, антитела 2 Н 6 или дегликозилированного антитела 2 Н 6. указывает на р меньше 0,01 по сравнению с контрольным антителом. На фиг. 12 представлено иммуноокрашивание пептида A в гиппокампе мыши после внутричерепного введения антитела 2 Н 6 (А) или дегликозилированного антитела 2 Н 6 (В). Нижняя панель демонстрирует отношение средней области, занятой положительным окрашиванием A в инъецированной стороне к неинъецированной стороне в лобной доле коры головного мозга и гиппокампе после внутричерепного введения контрольного антитела, антитела 2 Н 6 или дегликозилированного антитела 2 Н 6. указывает на р меньше 0,01 по сравнению с контрольным антителом. указывает на р меньше 0,05 по сравнению с контрольным антителом. На фиг. 13 представлен тиофлавин-S в гиппокампе мыши после внутричерепного введения антитела 2 Н 6 (А) или дегликозилированного антитела 2 Н 6 (В). Нижняя панель демонстрирует отношение средней области, занятой положительным окрашиванием тиофлавина-S в инъецированной стороне к неинъецированной стороне в лобной доле коры головного мозга и гиппокампе после внутричерепного введения контрольного антитела, антитела 2 Н 6 или дегликозилированного антитела 2 Н 6. указывает на р меньше 0,05 по сравнению с контрольным антителом. На фиг. 14 представлено картирование эпитопа, распознаваемого антителами 2294 и 6G, путемELISA. Различные A-пептиды иммобилизовали на планшетах для ELISA. Антитела инкубировали в течение 1 часа с различными иммобилизованными пептидами. Связывание антитела 6G с иммобилизованными A-пептидами измеряли с использованием вторичного конъюгированного с пероксидазой хрена (ПХ) козьего антитела к каппа-цепи человеческого антитела. Связывание антитела 2294 с иммобилизованными A-пептидами измеряли с использованием козьего антитела к мышиному антителу, связывающегося с тяжелой и легкой цепью и представляющего собой вторичное антитело, конъюгированное с ПХ. "ОС" означает, что связывание не обнаружено. Числа в колонках под "2294" и "6G" демонстрируют поглощение при 450 нм. Подробное описание изобретения В раскрытом здесь изобретении предложены антитела и полипептиды, которые связываются с Сконцом A1-40. Эти антитела и полипептиды происходят из 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В изобретении также предложены способы получения и применения этих антител. В некоторых воплощениях изобретения предложено антитело 9TL и способы получения и применения этого антитела. В изобретении также предложены полипептиды 9TL (включая антитела), которые связываются с A1-40, и полинуклеотиды, кодирующие антитело и/или полипептид 9TL. В раскрытом здесь изобретении также предложены способы профилактики и/или лечения Aассоциированных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, болезнь Паркинсона,мультиинфарктная деменция, умеренное нарушение познавательной способности, церебральная амилоидная ангиопатия, сосудистое расстройство, вызванное отложением A-пептида в кровеносных сосудах(такое как инсульт и наследственное внутримозговое кровоизлияние голландского типа (HCHWA-D, у индивидуума путем введения терапевтически эффективного количества антитела 9TL или антитела или полипептида, имеющего происхождение из 9TL. В изобретении также предложены способы лечения или профилактики заболеваний, ассоциированных с -амилоидным отложением у индивидуума, таких как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна, мультиинфарктная деменция, умеренное нарушение познавательной способности и церебральная амилоидная ангиопатия у индивидуума путем введения данному индивидууму эффективного количества фармацевтической композиции, включающей антитело или полипептид, которое специфически связывается с амилоидным пептидом или агрегированной формой A-пептида, или полинуклеотид, кодирующий антитело или полипептид, где данное антитело или полипептид имеет нарушенную эффекторную функцию. Общие методики. При практическом применении настоящего изобретения, если не указано иначе, используют общепринятые методы молекулярной биологии (включая рекомбинантные методы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, имеющиеся в данной области техники. Такие методы полностью описаны в литературе, такой как Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et"Антитело" представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., через по меньшей мере один сайт распознавания антигена, расположенный в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемый здесь термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональное антитела, а также их фрагменты (такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv), одну цепь (ScFv), их мутанты, слитые белки,включающие фрагмент антитела, и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, включающую сайт распознавания антигена. Антитело включает антитело любого класса,такого как IgG, IgA или IgM (или их подкласс), и антитело не обязательно должно принадлежать к какому-либо конкретному классу. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелых цепей антитела, иммуноглобулины можно отнести к различным классам. Существуют пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них дополнительно могут быть разделены на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, названы альфа, дельта, ипсилон, гамма и мю соответственно. Хорошо известны структуры и трехмерные конфигурации субъединиц различных классов иммуноглобулинов. Используемый здесь термин "моноклональное антитело" относится к антителу, полученному из популяции, по существу, гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, включающие популяцию,идентичны, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут быть представлены в минорных количествах. Моноклональные антитела высокоспецифичны, направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в противоположность препаратам поликлонального антитела, которые, как правило, включают различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты антигена. Определение "моноклональное" указывает на природу антитела, получаемого, по существу, из гомогенной популяции антител, и не должен рассматриваться как требующий, чтобы антитела были получены каким-либо конкретным способом. Например, моноклональное антитела, используемые в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены гибридомным методом, впервые описанным Kohler and Milstein,1975, Nature, 256:495, или могут быть получены методами рекомбинантной ДНК, такими как описанные в патенте США 4816567. Моноклональное антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, создаваемых с использованием способов, описанных, например, в McCafferty et al., 1990, Nature,348:552-554. Используемые здесь "гуманизированные" антитела относятся к формам антител, не являющихся человеческими (например, мышиных), представляющих собой специфические химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие субпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность,имеющую происхождение из иммуноглобулина, не являющегося человеческим. Большей частью гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (реципиентное антитело), в которых остатки гипервариабельного участка (CDR) реципиента замещают остатками CDR видов, не являющихся человеческими (донорное антитело), таких как мышь, крыса или кролик, обладающие желаемой специфичностью, аффинностью и емкостью. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv(FR) человеческого иммуноглобулина замещают соответствующими остатками, не являющимися человеческими. Кроме того, гуманизированное антитело может включать остатки, которые не обнаруживают ни в реципиентном антителе, ни в последовательностях донорного CDR или каркасной области, а включены для дополнительного совершенствования и оптимизации функции антитела. Как правило, гуманизированное антитело включает, по существу, все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все области CDR соответствуют областям иммуноглобулина, не являющегося человеческим, и все или по существу все области FR представляют собой области консенсусной последовательности человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело оптимально также включает, по меньшей мере, фрагмент константной области или домен (Fc) иммуноглобулина, как правило человеческого иммуноглобулина. Антитела могут иметь Fc-области, модифицированные как описано в WO 99/58572. Другие формы гуманизированных антител имеют один или более чем один CDR (один, два, три, четыре, пять, шесть), которые изменены относительно исходного антитела, которые также названы как один или более чем один CDR, "имеющий происхождение из" одного или более чем одного CDR исходного антитела. Используемое здесь "человеческое антитело" означает антитело, имеющее аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности антитела, продуцируемого человеком и/или полученного с использованием любого из способов получения человеческих антител, известных в данной области техники или раскрытых здесь. Это определение человеческого антитела вклю- 10016357 чает антитела, включающие по меньшей мере один полипептид тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина или по меньшей мере один полипептид легкой цепи человеческого иммуноглобулина. Один из таких примеров представляет собой антитело, включающее полипептиды легкой цепи мышиного антитела и полипептиды тяжелой цепи человеческого антитела. Человеческие антитела могут быть получены с использованием различных способов, известных в данной области техники. В одном из воплощений человеческое антитело выбрано из фаговой библиотеки, экспрессирующей человеческие антитела (Vaughanand Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). Человеческие антитела также могут быть получены путем введения локуса человеческого иммуноглобулина трансгенным животным, например мышам, в которых гены эндогенных иммуноглобулинов частично или полностью инактивированы. Этот подход описан в патентах США 5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425 и 5661016. Альтернативно, человеческое антитело может быть получено путем иммортализации человеческих В-лимфоцитов, которые продуцируют антитело, направленное против антигена-мишени (такие Влимфоциты могут быть выделены из индивидуума или могут быть иммунизированы in vitro). См., например, Cole et al., Monoclonal antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al.,1991, J. Immunol., 147(1):86-95; и патент США 5750373. Используемые здесь термины "9TL" и "антитело 9TL" используют взаимозаменяемо для ссылки на антитело, продуцируемое экспрессирующими векторами, имеющими номера АТСС РТА-6124 и АТСС РТА-6125. Аминокислотная последовательность вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи представлена на фиг. 1. Фрагменты CDR антитела 9TL (включая CDR Чотиа и Кабата) схематически показаны на фиг. 1. Полинуклеотиды, кодирующие вариабельные области тяжелой и легкой цепи, представлены в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. Характеристика 9TL описана в примерах. Термины "полипептид", "олигопептид", "пептид" и "белок" используют здесь взаимозаменяемо для ссылки на полимеры аминокислот любой длины. Полимер может быть линейным или разветвленным,может включать модифицированные аминокислоты, и может быть прерван фрагментами, не являющимися аминокислотами. Эти термины также охватывают аминокислотный полимер, модифицированный естественным путем или путем вмешательства; например, образование дисульфидной связи, гликозилирование, липидизация, ацетилирование, фосфорилирование или любая другая манипуляция или модификация, такая как конъюгирование с метящим компонентом. Также в определение включены, например,полипептиды, содержащие один или более чем один аналог аминокислоты (включающий, например, неприродные аминокислоты и так далее), а также другие модификации, известные в данной области техники. Следует понимать, что поскольку полипептиды по изобретению основаны на антителе, данные полипептиды могут существовать в виде единичных цепей или ассоциированных цепей. Используемые здесь взаимозаменяемо "полинуклеотид" или "нуклеиновая кислота" относятся к полимерам нуклеотидов любой длины и включают ДНК и РНК. Нуклеотиды могут представлять собой дезоксирибонуклеотиды, рибонуклеотиды, модифицированные нуклеотиды или основания и/или их аналоги или любой субстрат, который может быть включен в полимер посредством ДНК- или РНКполимеразы. Полинуклеотид может включать модифицированные нуклеотиды, такие как метилированные нуклеотиды и их аналоги. Если присутствует модификация нуклеотидной структуры, она может быть произведена перед или после сборки полимера. Последовательность нуклеотидов может быть прервана ненуклеотидными компонентами. Полинуклеотид может быть дополнительно модифицирован после полимеризации таким образом, как конъюгирование с метящим компонентом. Другие типы модификаций включают, например, "кэпы", замещение одного или более чем одного из встречающихся в природе нуклеотидов аналогом, межнуклеотидные модификации, такие как, например, модификации незаряженными связями (например, метилфосфонаты, фосфотриэфиры, фосфоамидаты, карбаматы и так далее) и заряженными связями (например, фосфоротиоаты, фосфородитиоаты и так далее), содержащие боковые цепи, такие как, например, белки (например, нуклеазы, токсины, антитела, сигнальные пептиды, поли-L-лизин и так далее), со вставками (например, акридин, псорален и так далее), содержащие хелатообразователи (например, металлы, радиоактивные металлы, бор, окислительные металлы и так далее), содержащие алкилаторы, с модифицированными связями (например, альфа-аномерные нуклеиновые кислоты и ак далее), а также немодифицированные формы полинуклеотида(ов). Кроме того, любая из гидроксильных групп, обычно присутствующих в сахарах, может быть замещена, например, фосфонатными группами, фосфатными группами, защищена стандартными защитными группами или активирована с получением дополнительных связей с дополнительными нуклеотидами или может быть конъюгирована с твердыми носителями. 5'- и 3'-концевая группа ОН может быть фосфорилирована или замещена аминами или органическими кэпирующими группировками из 1-20 атомов углерода. Другие гидроксилы также могут быть преобразованы до стандартных защитных групп. Полинуклеотиды также могут содержать аналогичные формы рибозных или дезоксирибозных сахаров, которые в общем известны в данной области техники, включая, например, 2'-О-метил-, 2'-О-аллил, 2'-фтор- или 2'-азидорибозу, карбоциклические аналоги сахаров, -аномерные сахара, эпимерные сахара, такие как арабиноза, ксилозы или ликсозы, пиранозные сахара, фуранозные сахара, седогептулозы, ациклические аналоги и неосновные нуклеозидные аналоги, такие как метилрибозид. Одна или более чем одна фосфодиэфирная связь может быть- 11016357 замещена альтернативными связывающими группами. Эти альтернативные связывающие группы включают воплощения, в которых фосфат замещен Р(О)S("тиоат"), P(S)S ("дитиоат"), "(O)NR2 ("амидат"),P(O)R, P(O)OR', CO или СН 2 ("формацеталь"), в которых каждый R или R' независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный алкил (1-20 С), возможно содержащий эфирную (-О-) связь,арил, алкенил, циклоалкил, циклоалкенил или аралдил, но не ограничены ими. Не все связи в пролинуклеотиде должны быть идентичными. Предшествующее описание применимо ко всем упомянутым здесь полинуклеотидам, включающим РНК и ДНК."Вариабельная область" антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела или вариабельной области тяжелой цепи антитела, одной или в комбинации. Вариабельные области каждой из тяжелой и легкой цепей состоят из четырех каркасных областей (FR), связанных тремя гипервариабельными участками (CDR), также известными как области, определяющие комплементарность. CDR в каждой цепи удерживаются вместе в тесной близости посредством FR, и вместе с CDR другой цепи вносят вклад в формирование антигенсвязывающего сайта антител. Существуют по меньшей мере два способа определения CDR: (1) подход, основанный на вариабельности последовательности между видами (т.е.Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD; и (2) подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антигенантитело (Al-lazikani et al. (1997), J. Molec. Biol. 273:927-948. Используемый здесь CDR может относиться к CDR, определенным при помощи любого из подходов или путем комбинации обоих подходов."Константная область" антитела относится к константной области легкой цепи антитела или константной области тяжелой цепи антитела, одной или в комбинации. Эпитоп, который "предпочтительно связывается" или "специфически связывается" (используют здесь взаимозаменяемо) с антителом или полипептидом, представляет собой термин, хорошо понятный в данной области техники, и способы определения такого специфического или предпочтительного связывания хорошо известны в данной области техники. Считают, что молекула демонстрирует "специфическое связывание" или "предпочтительное связывание", если она вступает в реакцию или ассоциируется чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом по сравнению с альтернативными клетками или веществами. Антитело "специфически связывается" или "предпочтительно связывается" с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью,авидностью, легче и/или с большей продолжительностью по сравнению с его связыванием с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопомA1-40, представляет собой антитело, которое связывается с этим эпитопом с большей аффинностью,авидностью, легче и/или с большей продолжительностью по сравнению с его связыванием с другими эпитопами A1-40 или эпитопами, отличающимися от эпитопов A1-40. При прочтении этого описания также должно быть понятно, что, например, антитело (или группировка или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может специфически или неспецифически или предпочтительно связываться со второй мишенью. Само по себе "специфическое связывание" или "предпочтительное связывание" не обязательно требует (хотя может включать) исключительное связывание. Как правило, но не обязательно, ссылка на связывание означает предпочтительное связывание. Используемый здесь "по существу, чистый" относится к веществу, которое по меньшей мере на 50% является чистым (т.е. не содержит примесей), более предпочтительно по меньшей мере на 90% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 98% является чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 99% является чистым."Клетка-хозяин" включает индивидуальную клетку или культуру клеток, которая может представлять собой или представляет собой реципиент для вектора(ов) для включения полинуклеотидных вставок. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и это потомство не обязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или по комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке вследствие природной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом(ами) по изобретению. Термин "Fc-область" используют для определения С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина. "Fc-область" может представлять собой Fc-область нативной последовательности или Fc-область варианта. Хотя связи Fc-области тяжелой цепи иммуноглобулина могут варьировать, Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG обычно определяют как продолжающуюся от аминокислотного остатка в положении Cys226 или от Pro230 до его карбоксильного конца. Нумерация остатков в Fc-области представляет собой нумерацию как в европейском индексе (EU) в соответствии с Kabat. Kabat et al., Sequences ofProteins of Imunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.,1991. Fc-область имммуноглобулина, как правило, включает два константных домена: СН 2 и CH3. Используемый здесь "Fc-рецептор" и "FcR" описывает рецептор, который связывается с Fcобластью антитела. Предпочтительный FcR представляет собой нативную последовательность человеческого FcR. Кроме того, предпочтительный FcR представляет собой рецептор, который связывается с антителом IgG (гамма-рецептор) и включает рецепторы подклассов FcRI, FcRII и FcRIII, включающие- 12016357 аллельные варианты и формы, возникающие в результате альтернативного сплайсинга этих рецепторов. Рецепторы FcRII включают FcRIIA ("активирующий рецептор") и FcRIIB ("ингибирующий рецептор"), имеющие сходные аминокислотные последовательности, которые отличаются в основном по их цитоплазматическим доменам. Обзор FcR приведен в Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:45792; Capel et al., 1994, Immunomethods, 4:25-34; и de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med., 126:330-41. "FcR" также включает неонатальный рецептор FcRn, который ответственен за перенос материнских IgG эмбриону (Guyer et al., 1976, J. Immunol., 117:587; и Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249)."Комплементзависимая цитотоксичность" и "CDC" относятся к лизису мишени в присутствии комплемента. Путь активации комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с молекулой (например, антителом), находящейся в комплексе с когнатным антигеном. Для оценки активации комплемента может быть осуществлен анализ CDC, например как описано"Функциональная Fc-область" обладает по меньшей мере одной эффекторной функцией Fc-области нативной последовательности. Примеры "эффекторных функций" включают связывание C1q; комплементзависимую цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; отрицательную негативную регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, рецептора В-клеток; BCR) и т.д. Для таких эффекторных функций, как правило, требуется, чтобы Fc-область была комбинирована со связывающим доменом (например, вариабельным доменом антитела) и может быть оценена с использованием различных анализов,известных в данной области техники для оценки таких эффекторных функций антитела."Fc-область нативной последовательности" включает аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности Fc-области, обнаруживаемой в природе. "Вариант Fcобласти" включает аминокислотную последовательность, которая отличается от нативной последовательности Fc-области модификацией по меньшей мере одной аминокислоты, в то же время сохраняет по меньшей мере одну эффекторную функцию Fc-области нативной последовательности. Предпочтительно вариант Fc-области имеет замену по меньшей мере одной аминокислоты по сравнению с Fc-областью нативной последовательности или с Fc-областью родительского полипептида, например приблизительно от одной до десяти замен аминокислот, и предпочтительно приблизительно от одной до пяти замен аминокислот в Fc-области нативной последовательности или в Fc-области родительского полипептида. Вариант Fc-области здесь предпочтительно обладает по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью последовательности с Fc-областью нативной последовательности и/или с Fc-областью родительского полипептида, и наиболее предпочтительно по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью последовательности, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью последовательности с Fc-областью нативной последовательности и/или с Fc-областью родительского полипептида. Используемая здесь "антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность" и "ADCC" относится к клеточноопосредованной реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют Fc-рецепторы (FcR) (например, клетки натуральные киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), распознают связанное антитело на клетке-мишени и затем вызывают лизис этой клеткимишени. Активность ADCC интересующей молекулы может быть оценена с использованием анализаADCC in vitro, такого как описанный в патенте США 5500362 или 5821337. Полезные эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и клеткиNK. Альтернативно или дополнительно активность ADCC интересующей молекулы может быть оцененаin vivo, например в животной модели, такой как раскрытая в Clynes et al., 1998, PNAS (USA), 95:652-656. Используемый здесь термин "эффективная доза" или "эффективное количество" лекарства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для того, чтобы привести к благоприятным и желательным результатам. Для профилактического применения благоприятные или желаемые результаты включают результаты, такие как устраняющие или уменьшающие риск,уменьшающие тяжесть или задерживающие начало заболевания, включая биохимические, гистологические и/или поведенческие симптомы заболевания, его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, проявляющиеся при развитии заболевания. Для терапевтического применения благоприятные или желаемые результаты включают клинические результаты, такие как ингибирование, подавление или уменьшение образования амилоидных бляшек, уменьшение, удаление, очистку от амилоидных бляшек,улучшение познавательной способности, обращение симптомов или замедление ухудшения познавательной способности, секвестрация или увеличение концентрации растворимого A-пептида, циркулирующего в биологических жидкостях, уменьшение одного или более чем одного симптома, возникающего в результате заболевания (биохимического, гистологического и/или поведенческого), включая его осложнения и промежуточные патологические фенотипы, проявляющиеся при развитии заболевания, увеличение качества жизни субъектов, страдающих данным заболеванием, снижение дозы других лекарственных средств, требуемых для лечения заболевания, усиление эффекта другого лекарственного средст- 13016357 ва, замедление прогрессирования заболевания и/или продление жизни пациентов. Эффективная доза может быть введена в одном или более чем одном введении. Для целей изобретения эффективная доза лекарства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для осуществления непосредственного или опосредованного профилактического или терапевтического лечения. Как следует из клинического контекста, эффективная доза лекарства, соединения или фармацевтической композиции может быть достигнута или не достигнута в сочетании с другим лекарством, соединением или композицией. Таким образом, "эффективная доза" может быть рассмотрена в контексте введения одного или более чем одного терапевтического агента, и один агент может быть рассмотрен как вводимый в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более чем одним другим агентом может быть достигнут желаемый результат. Используемое здесь "лечение" или "процесс лечения" представляет собой подход, обеспечивающий получение благоприятных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Для целей изобретения благоприятные или желаемые клинические результаты включают один или более чем один из следующих: ингибирование, подавление или уменьшение образования амилоидных бляшек, уменьшение, удаление или очистка от амилоидных бляшек, улучшение познавательной способности, обращение симптомов или замедление ухудшения познавательной способности, секвестрация растворимого Aпептида, циркулирующего в биологических жидкостях, уменьшение концентрации A-пептида (включающего растворимый, олигомерный и отложенный) в ткани (такой как головной мозг), ингибирование,замедление и/или уменьшение аккумуляции A-пептида в головном мозге, ингибирование, замедление и/или уменьшение токсических эффектов А-пептида в ткани (такой как головной мозг), уменьшение симптомов, являющихся результатом заболевания, увеличение качества жизни субъектов, страдающих данным заболеванием, снижение дозы других лекарственных средств, требуемых для лечения заболевания, замедление прогрессирования заболевания и/или продление жизни пациентов, но не ограничены ими. Используемый здесь термин "замедление" развития болезни Альцгеймера означает задержку, воспрепятствование, сдерживание, торможение, стабилизацию и/или отсрочку развития заболевания. Это замедление может иметь варьирующую длительность по времени, зависит от истории заболевания и/или индивидуума, которого лечат. Как очевидно специалистам в данной области техники, достаточное или значительное замедление, может, в сущности, охватывать профилактику, так что у индивидуума не развивается данное заболевание. Способ, который "замедляет" развитие болезни Альцгеймера, представляет собой способ, который снижает вероятность развития болезни в данный период времени и/или снижает степень заболевания в данный период времени, по сравнению с тем, когда этот способ не используют. Такие сравнения, как правило, основаны на клинических исследованиях с использованием статистически значимого количества субъектов."Развитие" болезни Альцгеймера означает начало и/или прогрессирование болезни Альцгеймера у индивидуума. Развитие болезни Альцгеймера может быть обнаружено с использованием стандартных клинических способов, как здесь описано. Однако развитие также относится к прогрессированию заболевания, которое исходно может быть не обнаружимо. Для целей изобретения прогрессирование относится к биологическому развитию болезненного состояния, в данном случае, как определено путем стандартного неврологического обследования, опроса пациента, или может быть определено более специализированным тестированием. Множество этих диагностических тестов включают нейровизуализацию,обнаружение изменений уровней специфических белков в сыворотке крови или спинно-мозговой жидкости (например, амилоидные пептиды и Тау-белки), компьютерную томографию (КТ) и магнитнорезонансную томографию (МРТ), но не ограничены ими. "Развитие" включает возникновение, рецидив и начало. Используемый здесь термин "начало" или "возникновение" болезни Альцгеймера включает начало и/или рецидив. Используемое здесь введение "в сочетании" включает одновременное введение и/или введение в различные моменты времени. Введение в сочетании также охватывает введение в виде совместного препарата или введение в виде раздельных композиций. Предполагают, что используемое здесь введение в сочетании охватывает любой случай, при котором индивидууму вводят анти-A антитело и другой агент,что можно осуществлять одновременно и/или раздельно. Как обсуждается здесь далее, понятно, что дозы анти-A антитела и другого агента могут быть введены с различной частотой или интервалами. Например, анти-A антитело может быть введено еженедельно, тогда как другой агент может быть введен с меньшей частотой. Следует понимать, что анти-A антитело и другой агент могут быть введены с использованием одного и того же пути введения или различных путей введения."Биологический образец" охватывает множество типов образцов, полученных у индивидуума, и может быть использован в диагностике или контролирующем анализе. Данное определение охватывает кровь и другие жидкие образцы биологического происхождения, образцы твердой ткани, такие как образец после биопсии, или полученные из них культуры тканей или клетки и их потомство. Данное определение также включает образцы, которыми манипулируют любым образом после их получения, таким как обработка реагентами, солюбилизация или обогащение некоторыми компонентами, такими как белки- 14016357 или полинуклеотиды, или погружение в полутвердую или твердую матрицу с целью приготовления срезов. Термин "биологический образец" охватывает клинический образец и также включает клетки в культуре, клеточные супернатанты, клеточные лизаты, сыворотку крови, плазму крови, биологическую жидкость и образцы ткани."Индивидуум" (альтернативно называемый "субъект") представляет собой млекопитающее, более предпочтительно человека. Млекопитающие также включают сельскохозяйственных животных (таких как крупный рогатый скот), спортивных животных, питомцев (таких как кошки, собаки, лошади), приматов, мышей и крыс, но не ограничены ими. Используемый здесь "вектор" означает конструкцию, которая способна доставлять и предпочтительно экспрессировать один или более чем один интересующий ген или последовательность в клеткехозяине. Примеры векторов включают вирусные векторы, голые ДНК или РНК экспрессирующие векторы, плазмиду, космиду или фаговые векторы, ДНК или РНК экспрессирующие векторы, ассоциированные с катионными конденсирующими агентами, ДНК или РНК экспрессирующие векторы, инкапсулированные в липосомах, и некоторые эукариотические клетки, такие как клетки-продуценты, но не ограничены ими. Используемая здесь "последовательность, контролирующая экспрессию" означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Последовательность, контролирующая экспрессию, может представлять собой промотор, такой как конститутивный или индуцибельный промотор, или энхансер. Последовательность, контролирующая экспрессию, функционально связана с транскрибируемой последовательностью нуклеиновой кислоты. Используемый здесь "фармацевтически приемлемый носитель" включает любое вещество, которое при объединении с активным ингредиентом, дает этому ингредиенту возможность сохранять биологическую активность и не является реактивным в отношении иммунной системы субъекта. Примеры включают любой из стандартных фармацевтических носителей, таких как забуференный фосфатом физиологический раствор, вода, эмульсии, такие как эмульсия масло/вода, и различные типы увлажнителей, но не ограничиваются ими. Предпочтительные разбавители для введения в аэрозоле или парентерального введения представляют собой забуференный фосфатом физиологический раствор или нормальный(0,9%) физиологический раствор. Композиции, включающие такие носители, изготавливают хорошо известными общепринятыми способами (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.Ed. Mack Publishing, 2000). Предполагают, что используемый здесь термин "kon" относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном. Предполагают, что используемый здесь термин "koff" относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген. Предполагают, что используемый здесь термин "KD" относится к равновесной константе диссоциации взаимодействия антитело-антиген. Композиции и способы изготовления композиций. Антитело 9TL и антитела и полипептиды, имеющие происхождение из 9TL. Изобретение охватывает композиции, включающие фармацевтические композиции, включающие антитело 9TL и его варианты, представленные в табл. 3, или полипептид, имеющий происхождение из антитела 9TL и его вариантов, представленных в табл. 3; и полинуклеотиды, включающие последовательности, кодирующие антитело 9TL, и его варианты или полипептид. Используемые здесь композиции включают одно или более чем одно антитело или полипептид (который может представлять или не представлять собой антитело), которое связывается с С-концом A1-40, и/или один или более чем один полинуклеотид, включающий последовательности, кодирующие одно или более чем одно антитело или полипептид, которое связывается с С-концом A1-40. Эти композиции дополнительно могут включать подходящие эксципиенты, такие как фармацевтически приемлемые эксципиенты, включая буферы, которые хорошо известны в данной области техники. Антитела и полипептиды по изобретению характеризуются любой (одной или более чем одной) из следующих характеристик: (а) связываются с С-концевым пептидом 28-40 A1-40, но не связывается существенно с A1-42 или A1-43; (б) связываются с С-концевым пептидом 33-40 A1-40; (в) подавляют образование амилоидных бляшек у субъекта; (г) уменьшают количество амилоидных бляшек у субъекта;(д) лечат, предотвращают, уменьшают интенсивность одного или более чем одного симптома болезни Альцгеймера; (е) улучшают функцию познавательной способности. Антитела и полипептиды по изобретению также могут демонстрировать желаемый профиль безопасности в противоположность другим анти-A антителам, о которых сообщалось. Например, композиции по изобретению могут не приводить к значительным или неприемлемым уровням любого одного или более чем одного из: кровоизлияния в сосудистой сети головного мозга (внутримозговое кровоизлияние); менингоэнцефалита (включая изменения по магнитно-резонансному сканированию); увеличения количества лейкоцитов в спинно-мозговой жидкости; воспаления в центральной нервной системе.- 15016357 Соответственно в изобретении предложено любое из следующих, или композиции (включая фармацевтические композиции), включающие любое из следующих: (а) антитело 9TL или его варианты, представленные в табл. 3; (б) фрагмент или область антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (в) легкая цепь антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (г) тяжелая цепь антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (д) одна или более чем одна вариабельная область(и) легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (е) один или более чем один CDR (один, два, три, четыре, пять или шесть CDR) антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (ж) CDR H3 тяжелой цепи антитела 9TL; (з) CDR L3 легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (и) три CDR легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (к) три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (л) три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов,представленных в табл. 3; и (м) антитело, включающее любое из (б)-(л). В изобретении также предложены полипептиды, включающие одно или более чем одно из приведенных выше. Фрагменты CDR антитела 9TL (включая CDR Чотиа и Кабата) схематически изображены на фиг. 1. Определение областей CDR находится в пределах знаний специалиста в данной области техники. Следует понимать, что в некоторых воплощениях CDR может представлять собой комбинацию CDR Кабата и Чотиа (также называемую "комбинированные CDR" или "расширенные CDR"). В некоторых воплощениях CDR представляют собой CDR Кабата. В других воплощениях CDR представляют собой CDR Чотиа. Иначе говоря, в воплощениях с более чем одним CDR CDR могут представлять собой любой CDR Кабата, Чотиа, комбинацию CDR или их комбинации. В некоторых воплощениях изобретения предложен полипептид (который может представлять собой или не представлять собой антитело), включающий по меньшей мере один CDR, по меньшей мере два,по меньшей мере три или по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять или все шесть CDR, которые,по существу, идентичны по меньшей мере одному CDR, по меньшей мере двум, по меньшей мере трем,по меньшей мере четырем, по меньшей мере пяти или всем шести CDR 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. Другие воплощения включают антитела, которые имеют по меньшей мере два, три,четыре, пять или шесть CDR, которые, по существу, идентичны по меньшей мере двум, трем, четырем,пяти или шести CDR 9TL или имеющим происхождение из 9TL. В некоторых воплощениях по меньшей мере один, два, три, четыре, пять или шесть CDR по меньшей мере приблизительно на 85, 86, 87, 88, 89,90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны по меньшей мере одному, двум, трем, четырем, пяти или шестиCDR 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. Следует понимать, что для задач изобретения,как правило, сохраняют специфичность связывания и/или общую активность, хотя степень активности может варьировать по сравнению с 9TL или его вариантами, представленными в табл. 3 (может быть больше или меньше). В изобретении также предложен полипептид (который может представлять собой или не представлять собой антитело), включающий аминокислотную последовательность 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3, который имеет любое из следующих: по меньшей мере 5 соседних аминокислот, по меньшей мере 8 соседних аминокислот, по меньшей мере приблизительно 10 соседних аминокислот, по меньшей мере приблизительно 15 соседних аминокислот, по меньшей мере приблизительно 20 соседних аминокислот, по меньшей мере приблизительно 25 соседних аминокислот, по меньшей мере приблизительно 30 соседних аминокислот последовательности 9TL или ее вариантов, представленных в табл. 3,где по меньшей мере 3 из аминокислот находятся в вариабельной области 9TL (фиг. 1) или его вариантов, представленных в табл. 3. В одном из воплощений вариабельная область представляет собой вариабельную область легкой цепи 9TL. В еще одном воплощении вариабельная область представляет собой вариабельную область тяжелой цепи 9TL. Репрезентативный полипептид имеет соседние аминокислоты(длины описаны выше) вариабельной области как тяжелой, так и легкой цепи 9TL. В еще одном воплощении 5 (или более) соседних аминокислот находятся в гипервариабельном участке (CDR) 9TL, представленного на фиг. 1. В некоторых воплощениях соседние аминокислоты находятся в вариабельной области 9TL. Аффинности связывания антител и полипептидов по изобретению могут варьировать и не обязательно имеют (но могут иметь) конкретное значение или диапазон в соответствии с описанными ниже примерами воплощений. Аффинность связывания антител и полипептидов по изобретению к A1-40 может составлять приблизительно от 0,10 до приблизительно 0,80 нМ, от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,75 нМ и от приблизительно 0,18 до приблизительно 0,72 нМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ,приблизительно 15 пМ, приблизительно 20 пМ, приблизительно 40 пМ или более чем приблизительно 40 пМ. В одном из воплощений аффинность связывания составляет приблизительно от 2 до 22 пМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно 100 пМ, приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ, приблизительно 50 пМ,- 16016357 приблизительно 40 пМ, приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 10 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 150 нМ, менее чем приблизительно 200 нМ, менее чем приблизительно 250 нМ, менее чем приблизительно 500 нМ или менее чем приблизительно 1000 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 5 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 1 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 0,1 или приблизительно 0,07 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 0,1 нМ или менее чем приблизительно 0,07 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно от 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно 100 пМ, приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ, приблизительно 50 пМ,приблизительно 40 пМ, приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ до любого из приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ, приблизительно 15 пМ, приблизительно 20 пМ или приблизительно 40 пМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет любое из приблизительно 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно 100 пМ,приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ, приблизительно 50 пМ, приблизительно 40 пМ, приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ, приблизительно 15 пМ, приблизительно 20 пМ, приблизительно 40 пМ или более чем приблизительно 40 пМ. В изобретении также предложены способы получения любого из этих антител или полипептидов. Антитела по изобретению могут быть получены способами, известными в данной области техники. Полипептиды могут быть получены путем протеолитического или иного расщепления антител, рекомбинантными методами (т.е. единичные или слитые полипептиды), как описано выше, или путем химического синтеза. Полипептиды антител, в особенности более короткие полипептиды, приблизительно до 50 аминокислот, для удобства могут быть получены путем химического синтеза. Способы химического синтеза известны в данной области техники и коммерчески доступны. Например, антитело может быть получено с использованием автоматического полипептидного синтезатора с использованием твердофазного способа. Также см. патенты США 5807715, 4816567 и6331415. В еще одной альтернативе антитела могут быть получены рекомбинантным образом с использованием способов, хорошо известных в данной области техники. В одном из воплощений полинуклеотид включает последовательность, кодирующую вариабельные области тяжелой цепи и/или легкой цепи антитела 9TL, представленную в SEQ ID NO: 9 и 10. В еще одном воплощении полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 и 10, клонируют в одном или более чем одном векторе для экспрессии или размножения. Последовательность, кодирующая интересующее антитело, может поддерживаться в векторе в клетке-хозяине, и эту клетку-хозяина затем можно размножать и замораживать для будущего применения. Векторы (включая экспрессирующие векторы) и клетки-хозяева дополнительно описаны здесь. Изобретение также охватывает одноцепочечные фрагменты вариабельной области ("scFv") антител по изобретению, таких как 9TL. Одноцепочечные фрагменты вариабельной области получают путем связывания вариабельных областей легкой и/или тяжелой цепи с использованием короткого связывающего пептида, Bird et al. (1988), Science 242:423-426. Пример связывающего пептида представляет собой(GGGGS)3 (SEQ ID NO: 40), который образует мостиковую связь длиной приблизительно 3,5 нм между карбоксильным концом вариабельной области и амино концом другой вариабельной области. Разработаны и используются линкеры с другими последовательностями, Bird et al. (1988). В свою очередь, линкеры могут быть модифицированы для дополнительных функций, таких как присоединение лекарств или присоединение к твердым носителям. Одноцепочечные варианты могут быть получены либо рекомбинантно, либо синтетически. Для синтетического получения scFv может быть использован автоматический синтезатор. Для рекомбинантного получения scFv подходящая плазмида, содержащая полинуклеотид, кодирующий scFv, может быть введена в подходящую клетку-хозяин, либо эукариотическую, такую как клетки дрожжей, растений, насекомых или млекопитающих, либо прокариотическую, такую как Е.coli. Полинуклеотиды, кодирующие интересующую scFv, могут быть получены при помощи стандартных манипуляций, таких как лигирование полинуклеотидов. Получающаяся в результате scFv может быть выделена с использованием стандартных способов очистки, известных в данной области техники. Также охватываются другие формы одноцепочечных антител, такие как димеры. Димеры представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который является слишком коротким для- 17016357 обеспечения возможности объединения двух доменов на одной и той же цепи, тем самым вынуждая домены объединяться с комплементарными доменами другой цепи и образуя два антигенсвязывающих сайта (см., например, Holliger, P., et al. (1993), Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al.(1994), Structure 2:1121-1123). Например, биспецифические антитела, моноклональные антитела, обладающие специфичностями связывания, по меньшей мере, в отношении двух различных антигенов, могут быть получены с использованием раскрытых здесь антител. Способы получения биспецифических антител известны в данной области техники (см., например, Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology, 121:210). Традиционно, рекомбинантное получение биспецифических антител основано на коэкспрессии пар тяжелая цепь-легкая цепь двух иммуноглобулинов, где две тяжелые цепи имеют разную специфичность (Millstein and Cuello,1983, Nature 305, 537-539). В соответствии с одним из подходов получения биспецифических антител вариабельные домены антитела, имеющие желаемые специфичности связывания (антигенсвязывающие центры антитела), подвергают слиянию с последовательностями константного домена иммуноглобулина. Слияние предпочтительно осуществляют с константным доменом тяжелой цепи иммуноглобулина, включающим по меньшей мере часть шарнирного участка, СН 2 и СН 3. Предпочтительно, чтобы константная область первой тяжелой цепи (СН 1), содержащая сайт, необходимый для связывания с легкой цепью, присутствовала в по меньшей мере одном из слияний. ДНК, кодирующие слияния тяжелых цепей иммуноглобулинов и,если желательно, легких цепей иммуноглобулинов, встраивают в отдельные экспрессирующие векторы и котрансфицируют в подходящий организм-хозяин. Это обеспечивает значительную гибкость в выборе взаимных соотношений трех полипептидных фрагментов в воплощениях, когда неравные соотношения трех полипептидных цепей, используемых в конструкции, обеспечивают оптимальные выходы. Тем не менее можно встраивать кодирующие последовательности двух или всех трех полипептидных цепей в один экспрессирующий вектор, когда экспрессия по меньшей мере двух полипептидных цепей в равных соотношениях приводит в результате к высоким выходам, или когда эти соотношения не имеют конкретной значимости. В одном из подходов биспецифические антитела состоят из тяжелой цепи гибридного иммуноглобулина с первой специфичностью связывания с одной стороны, и пары тяжелая цепь-легкая цепь гибридного иммуноглобулина (обеспечивающей вторую специфичность связывания) с другой стороны. Эта асимметричная структура с легкой цепью иммуноглобулина только в одной половине биспецифичной молекулы облегчает отделение желаемого биспецифичного соединения от нежелательных комбинаций иммуноглобулиновой цепи. Этот подход описан в заявке РСТWO 94/04690, опубликованной 3 марта 1994 г. Гетероконъюгатные антитела, включающие два ковалентно связанных антитела, также находятся в объеме изобретения. Такие антитела используют для нацеливания клеток иммунной системы на нежелательные клетки (патент США 4676980), и для лечения инфекции вируса иммунодефицита (ВИЧ) (публикация РСТWO 91/00360 и WO 92/200373; ЕР 03089). Гетероконъюгатные антитела могут быть получены с использованием любых удобных способов перекрестного сшивания. Подходящие сшивающие агенты и способы перекрестного сшивания хорошо известны в данной области техники и описаны в патенте США 4676980. Химерные или гибридные антитела также могут быть получены in vitro с использованием известных химических способов синтеза белка, включая те, в которые вовлечены сшивающие агенты. Например, иммунотоксины могут быть сконструированы с использованием реакции дисульфидного обмена или путем образования тиоэфирной связи. Примеры подходящих реагентов для этой цели включают иминотиолят и метил-4-меркаптобутиримидат. Гуманизированное антитело, включающее один или более чем один CDR антитела 9TL или один или более чем один CDR, имеющий происхождение из антитела 9TL, может быть получено с использованием любых способов, известных в данной области техники. Например, четыре общие стадии могут быть использованы для гуманизации моноклонального антитела. Они представляют собой: (1) определение нуклеотида и предсказанной аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей исходного антитела; (2) конструирование гуманизированного антитела, т.е. решение того,каркасную область какого антитела используют в процессе гуманизации; (3) реальные методы/способы гуманизации и (4) трансфекцию и экспрессию гуманизированного антитела. См., например, патенты США 4816567; 5807715; 5866692; 6331415; 5530101; 5693761; 5693762; 5585089; 6180370; 5225539; 6548640. В рекомбинантных гуманизированных антителах Fc-фрагмент может быть модифицирован для того, чтобы избежать взаимодействия с Fcy-рецептором и комплементом иммунной системы. Этот тип модификации разработан Dr. Mike Clark из Department of Pathology at Cambridge University, и способы получения таких антител описаны в WO 99/58572, опубликованной 18 ноября 1999 г. Например, константная область может быть сконструирована таким образом, чтобы в большей степени иметь сходство с константными областями человеческого антитела для того, чтобы избежать иммунного ответа, если это антитело применяют в клинических исследованиях и лечении людей. См., на- 18016357 пример, патенты США 5997867 и 5866692. Изобретение охватывает модификации антитела 9TL, включающие функционально эквивалентные антитела, которые не влияют значительно на их свойства, и варианты, которые обладают повышенной или пониженной активностью и/или аффинностью. Например, аминокислотная последовательность антитела 9TL может быть мутирована с получением антитела, обладающего желаемой аффинностью связывания в отношении A1-40 пептида. Модификация полипептидов представляет собой стандартную практику в данной области техники, и нет необходимости подробно описывать ее здесь. Пример модификации полипептидов приведен в примерах. Примеры модифицированных полипептидов включают полипептиды, имеющие консервативные замены аминокислотных остатков, одну или более чем одну делецию или добавление аминокислот, которые не приводят к существенным неблагоприятным изменениям функциональной активности, или применение химических аналогов. Вставки в аминокислотную последовательность включают слияния с амино и/или карбоксильным концом, варьирующие по длине от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков,а также вставки одного или множества аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры вставок по концу включают антитело с N-концевым метионильным остатком или антитело, слитое с эпитопным концом. Другие варианты вставки в молекулу антитела включают слияние с N- или С-концом антитела фермента или полипептида, которое увеличивает период полувыведения антитела из сыворотки крови. Варианты по замене включают удаление по меньшей мере одного аминокислотного остатка из молекулы антитела и встраивание вместо него различных остатков. Сайты, представляющие наибольший интерес для заместительного мутагенеза, включают гипервариабельные области, но также вовлечены изменения FR. Консервативные замены представлены в табл. 1 под заголовком "консервативные замены". Если такие замены приводят в результате к изменению биологической активности, то могут быть осуществлены более значительные изменения, обозначенные в табл. 1 как "примеры замещений", или в соответствии с дополнительно описанным ниже со ссылкой на классы аминокислот, и продукты могут быть отобраны. Таблица 1 Замены аминокислот- 19016357 Значительные модификации биологических свойств антитела осуществляют путем выбора замен,которые значительно отличаются по их эффекту в отношении поддержания (а) структуры полипептидного каркаса в области замены, например в виде складчатой или спиральной конформации, (б) заряда или гидрофобности молекулы в сайте мишени или (в) объема боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки разделяют на группы, основываясь на общих свойствах боковой цепи:(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro; и(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe, His. Неконсервативные замены осуществляют путем замены представителя одного из этих классов на представители другого класса. Любой цистеиновый остаток, не вовлеченный в поддержание правильной конформации антитела,также может быть заменен, как правило, на серин, с улучшением стабильности молекулы к окислению и предотвращением аномального перекрестного связывания. Наоборот, цистеиновая(ые) связь(и) может(гут) быть введена(ы) в антитело для улучшения его стабильности, в частности когда антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fv-фрагмент. Модификации аминокислот могут варьировать от замены или модификации одной или более чем одной аминокислоты до полного реконструирования области, такой как вариабельная область. Изменения в вариабельной области могут изменять аффинность связывания и/или специфичность. В некоторых воплощениях в домене CDR осуществляют замены не более чем 1-5 консервативных аминокислот. В других воплощениях в домене CDR осуществляют замены не более чем 1-3 консервативных аминокислот. В других воплощениях домен CDR представляет собой CDR H3 и/или CDR L3. Модификации также включают гликозилированные и негликозилированные полипептиды, а также полипептиды, обладающие другими посттрансляционными модификациями, такими как, например, гликозилирование различными сахарами, ацетилирование и фосфорилирование. Антитела гликозилированы в консервативных положениях в их константных областях (Jefferis and Lund, 1997, Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32). Олигосахаридные боковые цепи иммуноглобулинов влияют на функцию белка (Boyd et al., 1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard,1990, Biochem. 29:4175-4180) и внутримолекулярное взаимодействие между фрагментами гликопротеина, что может оказать влияние на конформацию и презентируемую трехмерную поверхность гликопротеина (Hefferis and Lund, выше; Wyss and Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416). Олигосахариды также могут служить для нацеливания данного гликопротеина на некоторые молекулы, основываясь на специфических распознающих структурах. Также сообщали о том, что гликозилирование антитела оказывает влияние на антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC). В частности, сообщали о том, что клетки яичника китайского хомячка (СНО) с регулируемой тетрациклином экспрессией (1,4)N-ацетилглюкозаминилтрансферазы III (GnTIII), катализируемым гликозилтрансферазой образованием разрезанного пополам GIcNAc, обладают улучшенной активностью ADCC (Umana et al., 1999, MatureBiotech. 17:176-180). Гликозилирование антител, как правило, является либо N-связанным, либо О-связанным. Nгликозилирование относится к присоединению углеводной группировки к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин, аспарагин-Х-треонин и аспарагин-Хцистеин, где X представляет собой любую аминокислоту, за исключением пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного присоединения углеводной группировки к боковой цепи аспарагина. Таким образом, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-гликозилирование относится к присоединению одного из сахаров N-ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы к гидроксиаминокислоте,наиболее обычно серину или треонину, хотя также может быть использован 5-гидроксипролин или 5 гидроксилизин. Добавление сайтов гликозилирования в антитело для удобства осуществляют путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, что она содержит одну или более чем одну из вышеописанных трипептидных последовательностей (для сайтов N-гликозилирования). Изменение также может быть осуществлено путем добавления одного или более чем одного остатка серина или треонина к последовательности исходного антитела, или замены на него (для сайтов О-гликозилирования). Тип гликозилирования антител также может быть изменен без изменения нуклеотидной последовательности. Гликозилирование в значительной степени зависит от клетки-хозяина, используемой для экспрессии антитела. Поскольку тип клетки, используемой для экспрессии рекомбинантных гликопротеинов, например антител, в качестве потенциальных терапевтических агентов, редко является нативным,можно ожидать изменения типа гликозилирования антител (см., например, Hse et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:9062-9070). В дополнение к выбору клеток-хозяев, факторы, влияющие на гликозилирование при рекомбинант- 20016357 ной продукции антител, включают способ выращивания, приготовление сред, плотность культуры, насыщение кислородом, рН, схемы очистки и т.п. Для изменения типа гликозилирования, достигаемого в конкретном организме-хозяине, предложены различные способы, включающие введение или сверхэкспрессию некоторых ферментов, вовлеченных в продукцию олигосахарида (патенты США 5047335; 5510261 и 5278299). Гликозилирование или некоторые типы гликозилирования могут быть ферментативно удалены из гликопротеина, например с использованием эндогликозидазы Н (Endo H), Nгликозидазы F, как описано в примере 3, эндогликозидазы F1, эндогликозидазы F2, эндогликозидазы F3. Дополнительно, рекомбинантная клетка-хозяин может быть сконструирована путем генетической инженерии таким образом, чтобы быть дефектной по процессингу некоторых типов полисахаридов. Эти и похожие способы хорошо известны в данной области техники. Другие способы модификации включают применение методик сочетания, известных в данной области техники, включая ферментативные средства, окислительное замещение и хелатообразование, но не ограничиваясь ими. Модификации могут быть использованы, например, для присоединения меток для иммуноанализа. Модифицированные полипептиды 9TL получают с использованием способов, признанных в данной области техники, и могут быть отобраны с использованием стандартных анализов, известных в данной области техники, некоторые из которых описаны ниже и в примерах. В некоторых воплощениях изобретения антитело включает модифицированную константную область, такую как константная область, которая иммунологически инертна или частично инертна, например, не запускает комплементопосредованный лизис, не стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC) или не активирует микроглию; или обладает пониженными активностями (по сравнению с немодифицированным антителом) в любом одном или более чем одном из следующего: запуск комплементопосредованного лизиса, стимуляция антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (ADCC) или активация микроглии. Различные модификации константной области могут быть использованы для достижения оптимального уровня и/или комбинации эффекторных функций. См., например, Morgan et al., Immunology 86:319-324 (1995); Lund et al., J. Immunology 157:4963-9 157:4963-4969 (1996); Idusogie et al., J. Immunology 164:4178-4184 (2000); Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); и Jefferis et al., Immunological Reviews 163:59-76 (1998). В некоторых воплощениях константная область модифицирована, как описано в Eur. J. Immunol. (1999), 29:2613-2624; заявке на патент РСТPCT/GB99/01441 и/или заявке на патент Великобритании 9809951.8. В других воплощениях антитело включает константную область тяжелой цепи человеческого IgG2a, содержащую следующие мутации: А 330 Р 331 на S330S331 (нумерация аминокислот со ссылкой на последовательностьIgG2a дикого типа). Eur. J. Immunol. (1999), 29:2613-2624. В других воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования. В некоторых воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования путем мутации гликозилированного аминокислотного остатка или фланкирующих остатков, представляющих собой часть последовательности распознавания Nгликозилирования в константной области. Например, сайт для N-гликозилирования N297 может быть мутирован до A, Q, K или Н. См. Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); Jefferis et al., Immunological Reviews 163:59-76 (1998). В некоторых воплощениях константная область агликозилирована для N-гликозилирования. Константная область может быть агликозилирована для N-гликозилирования ферментативным путем (таким как удаление углевода при помощи фермента PNG-азы) или путем экспрессии в клетке-хозяине, дефектной по гликозилированию. Другие модификации антитела включают антитела, которые модифицированы, как описано в публикации РСТWO 99/58572, опубликованной 18 ноября 1999 г. Эти антитела включают в дополнение к связующему домену, направленному против молекулы-мишени, эффекторный домен, имеющий аминокислотную последовательность, по существу, гомологичную всему константному домену тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина или его части. Эти антитела способны связываться с молекулоймишенью без запуска существенного комплементзависимого лизиса или клеточноопосредованного разрушения мишени. В некоторых воплощениях эффекторный домен способен специфически связываться сFcRn и/или FcRIIb. Они, как правило, основаны на химерных доменах, имеющих происхождение из двух или более чем двух доменов CH2 тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. Антитела, модифицированные таким образом, особенно подходят для применения в длительной терапии антителами для того, чтобы избежать воспаления и других отрицательных реакций, присущих обычной терапии антителами. Изобретение включает аффинно зрелые воплощения. Например, аффинно зрелые антитела могут быть получены способами, известными в данной области техники (Marks et al., 1992, Bio/Technology,10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol, 154(7):3310-9; Hawkinset al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896 и WO 2004/058184). Следующие способы могут быть использованы для коррекции аффинности антитела и характеризации CDR. Один из путей характеризации CDR антитела и/или изменения (такого как улучшение) аффинности связывания полипептида, такого как антитело, назван "библиотечный сканирующий мутагенез". Как правило, библиотечный сканирующий мутагенез действует следующим образом. Одно или более- 21016357 чем одно положение аминокислоты в CDR заменяют двумя или более чем двумя (например, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20) аминокислотами с использованием признанных в данной области техники способов. Это создает небольшие библиотеки клонов (в некоторых воплощениях по одной для каждого положения аминокислоты, которую анализируют), каждый из которых состоит из комплекса двух или более чем двух членов (если в каждом положении заменены две или более чем две аминокислоты). Как правило, библиотека также включает клон, включающий нативную (не подвергнутую замене) аминокислоту. Небольшое количество клонов, например приблизительно 20-80 клонов (в зависимости от сложности библиотеки), из каждой библиотеки отбирают в отношении аффинности связывания с полипептидом-мишенью (или другой мишенью связывания) и идентифицируют кандидаты,обладающие увеличенным, одинаковым, уменьшенным связыванием или отсутствием связывания. Способы определения аффинности связывания хорошо известны в данной области техники. Аффинность связывания может быть определена с использованием поверхностно-плазмонного резонансного анализаBIAcore, который обнаруживает не менее чем 2-кратные различия в аффинности связывания. BIAcore особенно полезен, когда исходное антитело уже связывается с относительно высокой аффинностью, например с KD, составляющей приблизительно 10 нМ или ниже. Отбор с использованием поверхностноплазмонного резонанса BIAcore описан здесь в примерах. Аффинность связывания может быть определена с использованием биосенсора Kinexa, сцинтилляционных анализов близкого расстояния, ELISA, иммуноанализа ORIGEN (IGEN), флуоресцентного гашения, флуоресцентного переноса и/или дрожжевого дисплея. Аффинность связывания также может быть выбрана с использованием подходящего биоанализа. В некоторых воплощениях осуществляют замену в каждом положении аминокислоты в CDR (в некоторых воплощениях по одной) всеми 20 природными аминокислотами с использованием признанных в данной области техники способов мутагенеза (некоторые из которых описаны здесь). Это создает небольшие библиотеки клонов (в некоторых воплощениях по одной для каждого положения аминокислоты, которую анализируют), каждую с комплексом из 20 членов (если все 20 аминокислот заменены в каждом положении). В некоторых воплощениях библиотека, в которой производят отбор, включает замены в двух или более чем двух положениях, которые могут быть в одном и том же CDR или в двух или более чем двухCDR. Таким образом, библиотека может включать замены в двух или более чем двух положениях в одном CDR. Библиотека может включать замену в двух или более чем двух положениях в двух или более чем двух CDR. Библиотека может включать замену в 3, 4, 5 или более положениях, причем указанные положения обнаружены в двух, трех, четырех, пяти или шести CDR. Замена может быть осуществлена с использованием кодонов с низкой избыточностью. См., например, табл. 2 в Balint et al. (1993), Gene 137(1): 109-18).CDR может представлять собой CDRH3 и/или CDRL3. CDR может представлять собой один или более чем один из CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 и/или CDRH3. CDR может представлять собой CDR Кабата, CDR Чотиа или расширенный CDR. Кандидаты, обладающие улучшенным связыванием, могут быть секвенированы, таким образом давая возможность для идентификации мутанта по замене в CDR, приводящем в результате к улучшенной аффинности (также названного "улучшенной" заменой). Кандидаты, которые связываются, также могут быть секвенированы, таким образом давая возможность для идентификации замены в CDR, которая сохраняет связывание. Могут быть проведены множественные раунды отбора. Например, кандидаты (каждый из которых включает замену аминокислоты в одном или более чем одном положении в одной или более чем однойCDR), обладающие улучшенным связыванием, также полезны для разработки второй библиотеки, содержащей, по меньшей мере, исходную и замененную аминокислоту в каждом улучшенном положенииCDR (т.е. положение аминокислоты в CDR, по которому мутант, подвергнутый замене, демонстрирует улучшенное связывание). Получение и отбор или выбор этой библиотеки дополнительно обсуждается ниже. Библиотечный сканирующий мутагенез также предоставляет средство для характеристики CDR,поскольку частота клонов, обладающих улучшенным связыванием, одинаковым связыванием, уменьшенным связыванием или отсутствием связывания, также обеспечивают информацию, касающуюся важности положения каждой аминокислоты для стабильности комплекса антитело-антиген. Например, если положение CDR сохраняет связывание при замене на все 20 аминокислот, то положение идентифицируют как положение, которое вряд ли необходимо для связывания антигена. Наоборот, если положениеCDR сохраняет связывание только при небольшом проценте замен, это положение идентифицируют как положение, которое является важным для функции CDR. Таким образом, способы библиотечного сканирующего мутагенеза дают информацию, касающуюся положений в CDR, которые могут быть заменены на множество различных аминокислот (включая все 20 аминокислот), и положений в CDR, которые не могут быть заменены или которые могут быть заменены только некоторыми аминокислотами. Кандидаты, обладающие улучшенной аффинностью, могут быть комбинированы во второй библиотеке, которая включает улучшенную аминокислоту, исходную аминокислоту в этом положении, и до- 22016357 полнительно могут включать дополнительные замены в этом положении в зависимости от сложности библиотеки, которая желательна или допустима с использованием желаемого способа отбора или выбора. В дополнение, если желательно, положение соседней аминокислоты можно рандомизировать до по меньшей мере двух или более чем двух аминокислот. Рандомизация соседних аминокислот может обеспечивать дополнительную конформационную гибкость в мутантном CDR, которая, в свою очередь, может обеспечивать или облегчать введение большего количества улучшенных мутаций. Библиотека также может включать замену в положениях, которые не демонстрировали улучшенную аффинность в первом раунде отбора. Во второй библиотеке отбирают или выбирают члены, обладающие улучшенной и/или измененной аффинностью связывания, с использованием любого из способов, известных в данной области техники,включая отбор с использованием поверхностно-плазмонного резонансного анализа BIAcore, и отбор с использованием любого из известных в данной области техники способов, включая фаговый дисплей,дрожжевой дисплей и рибосомальный дисплей. Изобретение также охватывает слитые белки, включающие один или более чем один фрагмент или область антитела (такого как 9TL) или полипептида по изобретению. В одном из воплощений предложен слитый полипептид, который включает по меньшей мере 10 соседних аминокислот вариабельной области легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 2 (фиг. 1) и/или по меньшей мере 10 аминокислот вариабельной области тяжелой цепи, представленной в SEQ ID NO: 1 (фиг. 1). В других воплощениях предложен слитый полипептид, который включает по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 15, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 25 или по меньшей мере приблизительно 30 соседних аминокислот вариабельной области легкой цепи, представленной в SEQ ID NO: 2 (фиг. 1) и/или по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 15, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 25 или по меньшей мере приблизительно 30 соседних аминокислот вариабельной области тяжелой цепи, представленной вSEQ ID NO: 1 (фиг. 1). В еще одном воплощении слитый полипептид включает вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи 9TL, как представлено в SEQ ID NO: 2 и SEQ IDNO: 1 на фиг. 1. В еще одном воплощении слитый полипептид включает один или более чем один CDR 9TL. В других воплощениях слитый полипептид включает CDR НЗ и/или CDR L3 антитела 9TL. Для целей изобретения слитый белок 9TL содержит одно или более чем одно антитело 9TL и другую аминокислотную последовательность, к которой в нативной молекуле оно не присоединено, например, гетерологичную последовательность или гомологичную последовательность другой области. Примеры гетерологичных последовательностей включают "хвост", такой как хвост FLAG или хвост 6His, но не ограничены ими. Хвосты хорошо известны в данной области техники. Слитый полипептид 9TL может быть получен с использованием способов, известных в данной области техники, например синтетических или рекомбинантных. Как правило, слитые белки 9TL по изобретению получают с помощью экспрессирующего полинуклеотида, кодирующего их, с использованием описанных здесь рекомбинантных способов, хотя они также могут быть получены с использованием других средств, известных в данной области техники, включая, например, химический синтез. В изобретении также предложены композиции, включающие антитела или полипептиды 9TL,конъюгированные (например, связанные) с агентом, облегчающим связывание с твердым носителем (таким как биотин или авидин). Для простоты, как правило, ссылаются на 9TL или антитела, понимая, что эти способы применимы к любому из описанных здесь воплощений связывания A1-40. Конъюгация, как правило, относится к связыванию этих компонентов, как описано здесь. Связывание (которое, как правило, фиксирует эти компоненты в тесной ассоциации, по меньшей мере, для введения) может быть достигнуто различными путями. Например, возможно прямое взаимодействие между агентом и антителом,когда каждый несет заместитель, способный вступать во взаимодействие с другим. Например, нуклеофильная группа, такая как амино или сульфгидрильная группа, на одном может быть способна к взаимодействию с карбонилсодержащей группой, такой как ангидрид или кислый галогенид, или с алкильной группой, содержащей хорошую уходящую группу (например, галогенид), на другом. Антитело или полипептид по изобретению может быть связан с метящим агентом (альтернативно называемым "метка"), таким как флуоресцентная молекула, радиоактивная молекула или любые другие метки, известные в данной области техники. В данной области техники известны метки, которые, как правило, обеспечивают (либо прямо, либо опосредованно) сигнал. В изобретении также предложены композиции (включающие фармацевтические композиции) и наборы, включающие антитело 9TL и как следует из данного описания, любые или все из описанных здесь антител и/или полипептидов. Антитела и полипептиды к A-пептиду, обладающие нарушенной эффекторной функцией. В способах по изобретению применяют антитела или полипептиды (включая фармацевтические композиции, включающие антитела или полипептиды), которые специфически связываются с бетаамилоидным пептидом, и обладающие нарушенной эффекторной функцией. Антитела и полипептиды дополнительно характеризуются любым (одним или более чем одним) из следующих признаков: (а) по- 23016357 давляют образование амилоидных бляшек у субъекта; (б) уменьшают содержание амилоидных бляшек у субъекта; (в) лечат, предотвращают, уменьшают интенсивность одного или более чем одного симптома болезни Альцгеймера; (г) улучшают функцию познавательной способности. Описанные здесь антитела и полипептиды могут демонстрировать желаемый профиль безопасности, например, композиции по изобретению не вызывают значительных или неприемлемых уровней или обладают пониженным уровнем любого одного или более чем одного из следующих: кровоизлияние в сосудистой сети головного мозга(внутримозговое кровоизлияние); менингоэнцефалит (включая изменение по результатам магнитнорезонансного сканирования); увеличение количества лейкоцитов в спинно-мозговой жидкости; воспаление в центральной нервной системе. Как показано в примере 4, анти-A антитело, у которого удалено Nгликозилирование в Fc-области, эффективно для удаления амилоидных бляшек в головном мозге и улучшения функции познавательной способности со значительно меньшим микрокровоизлиянием по сравнению с интактным антителом в животной модели болезни Альцгеймера. Используемое здесь антитело или полипептид, обладающее "нарушенной эффекторной функцией"(используемый взаимозаменяемо с "иммунологически инертным" или "частично иммунологически инертным"), относится к антителам или полипептидам, которые не обладают какой-либо эффекторной функцией или обладают пониженной активностью или активностями эффекторной функции (по сравнению с антителом или полипептидом, имеющим немодифицированную или встречающуюся в природе константную область), например, не обладает активностью или обладает пониженной активностью в любом одном или более чем одном из следующих: а) запускает комплементопосредованный лизис; б) стимулирует антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC); и в) активирует микроглию. Активность эффекторной функции может быть снижена приблизительно на любое из 10, 20, 30,40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 99 и 100%. В некоторых воплощениях антитело связывается с бета-амилоидным пептидом без запуска значительного комплементзависимого лизиса или клеточноопосредованного разрушения мишени. Например, сайт связывания Fc-рецептора на константной области может быть модифицирован или мутирован для удаления или снижения аффинности связывания в отношении некоторыхFc-рецепторов, таких как FcRI, FcRII и/или FcRIII. Для простоты ссылаются на антитела, понимая что воплощения также применены к полипептидам. Европейскую систему нумерации (Kabat et al., Sequencesof Proteins of Immunological Interest; 5th ed. Public Health Service, National Institutes of Healthy, Bethesda,Md., 1991) используют для указания того, какой аминокислотный остаток(и) константной области(например, антитела IgG) изменен или мутирован. Нумерация может быть использована для конкретного типа антитела (например, IgG1) или видов (например, людей) с пониманием того, что подобные изменения могут быть сделаны для типов антител и видов. В некоторых воплощениях антитело, которое специфически связывается с A-пептидом, включает константную область тяжелой цепи, обладающую нарушенной эффекторной функцией. Константная область тяжелой цепи может иметь встречающуюся в природе последовательность или ее вариант. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность встречающейся в природе константной области тяжелой цепи мутирована, например путем замены аминокислот, вставки и/или делеции, посредством чего эффекторная функция константной области нарушается. В некоторых воплощениях Nгликозилирование Fc-области константной области тяжелой цепи также может быть изменено, например,может быть удалено полностью или частично, посредством чего эффекторная функция константной области нарушается. В некоторых воплощениях эффекторная функция нарушается путем удаления N-гликозилированияFc-области (например, в домене СН 2 IgG) анти-A пептида. В некоторых воплощениях Nгликозилирование Fc-области удалено путем мутации гликозилированного аминокислотного остатка или фланкирующих остатков, представляющих собой часть последовательности распознавания гликозилирования в константной области. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин (N-X-S), аспарагинХ-треонин (N-X-T) и аспарагин-Х-цистеин (N-X-C), где X представляет собой любую аминокислоту за исключением пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного присоединения углеводной группировки к боковой цепи аспарагина для N-гликозилирования. Мутация любой аминокислоты в трипептидных последовательностях в константной области приводит к получению агликозилированного IgG. Например, сайт N-гликозилирования N297 человеческого IgG1 и IgG3 может быть мутирован до A, D, Q, K или Н. См. Tao et al., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); и Jefferiset al., Immunological Reviews 163:59-76 (1998). Сообщали, что человеческий IgG1 и IgG3 с заменой Asn297 на GIn, His или Lys не связывается с человеческим FcR1 и не активирует комплемент, где C1qсвязывающая способность полностью утрачена для IgG1 и значительно снижена для IgG3. В некоторых воплощениях аминокислота N в трипептидных последовательностях мутирована до любой из аминокислот А, С, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, Р, Q, R, S, Т, V, W, Y. В некоторых воплощениях аминокислота N в трипептидных последовательностях мутирована до консервативной замены. В некоторых воплощениях аминокислота X в трипептидных последовательностях мутирована до пролина. В некоторых воплощениях аминокислота S в трипептидных последовательностях мутирована до A, D, E, F, G, Н, I, K, L, M, N, P,Q, R, V, W, Y. В некоторых воплощениях аминокислота Т в трипептидных последовательностях мутиро- 24016357 вана до A, D, E, F, G, Н, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, Y. В некоторых воплощениях аминокислота С в трипептидных последовательностях мутирована до A, D, E, F, G, Н, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, Y. В некоторых воплощениях аминокислота за трипептидом мутирована до Р. В некоторых воплощениях Nгликозилирование в константной области удалено ферментативно (например, N-гликозидаза F, как описано в примере 3, эндогликозидаза F1, эндогликозидаза F2, эндогликозидаза F3 и эндогликозидаза Н). Удаление N-гликозилирования также может быть достигнуто путем получения антитела в клеточной линии, имеющей дефект по N-гликозилированию, Wright et al. J. Immunol. 160(7):3393-402 (1998). В некоторых воплощениях аминокислотный остаток, взаимодействующий с олигосахаридом, присоединенным к сайту N-гликозилирования константной области, мутирован для снижения аффинности связывания к FcR1. Например F241, V264, D265 человеческого IgG3 могут быть мутированы. См. Lundet al., J. Immunology, 157:4963-4969 (1996). В некоторых воплощениях эффекторная функция нарушена путем модификации областей, таких как 233-236, 297 и/или 327-331 человеческого IgG, как описано в РСТWO 99/58572 и Armour et al.,Molecular Immunology 40:585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000). Антитела,описанные в РСТWO 99/58572 и Armour et al., в дополнение к связывающему домену, направленному на молекулу-мишень, включают эффекторный домен, имеющий аминокислотную последовательность,по существу, гомологичную всей константной области тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина или ее части. Эти антитела способны связываться с молекулой-мишенью без существенного запуска комплементзависимого лизиса или клеточноопосредованного разрушения мишени. В некоторых воплощениях эффекторный домен обладает пониженной аффинностью в отношении FcRI, FcRIIa и FcRIII. В некоторых воплощениях эффекторный домен способен специфически связываться с FcRn и/илиFcRIIb. Они, как правило, основаны на химерных доменах, имеющих происхождение из двух или более чем двух доменов CH2 тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. Антитела, модифицированные таким образом, особенно подходят для применения в длительной терапии антителами для того, чтобы избежать воспаления и других отрицательных реакций, присущих обычной терапии антителами. В некоторых воплощениях константная область тяжелой цепи антитела представляет собой область тяжелой цепи человеческого IgG1 с одной из следующих мутаций: 1) А 327 А 330 Р 331 на G327S330S331; 2) E233L234L235G236 на P233V234A235 с делецией G236; 3) E233L234L235 на P233V234A235; 4) E233L234L235G236A327A330P331 на P233V234A235G327S330S331 с делецией G236; 5) E233L234L235A327A330P331 на P233V234A235G327S330S331; и 6) N297 на А 297 или любую другую аминокислоту, за исключением N. В некоторых воплощениях константная область тяжелой цепи антитела представляет собой тяжелую цепь человеческого IgG2 со следующими мутациями: А 330 Р 331 наS330S331. В некоторых воплощениях константная область тяжелой цепи антитела представляет собой область тяжелой цепи человеческого IgG4 с любой из следующих мутаций: E233F234L235G236 наP233V234A235 с делецией G236; E233F234L235 на P233V234A235; и S228L235 на Р 228 Е 235. Константная область антител также может быть модифицирована для нарушения активации комплемента. Например, активация комплемента антител IgG после связывания С 1-компонента комплемента может быть уменьшена путем мутации аминокислотных остатков в константной области в С 1 связывающем мотиве (например, C1q-связывающем мотиве). Сообщали о том, что мутация Ala для каждого из D270, K322, Р 329, Р 331 человеческого IgG1 значительно снижала способность антитела связываться с Clq и активировать комплемент. Для мышиного IgG2b, C1q-связывающий мотив составляет остатки Е 318, K320 и K322. Idusogie et al., J. Immunology 164:4178-4184 (2000); Duncan et al., Nature 322: 738-740 (1988). Полагают, что C1q-связывающий мотив Е 318, K320 и K322, идентифицированный для мышиногоIgG2b, является общим для других изотипов антител. Duncan et al., Nature 322: 738-740 (1988). C1qсвязывающая активность для IgG2b может быть отменена путем замены любого одного из трех указанных остатков остатком, имеющим неприемлемую функциональную группу на своей боковой цепи. Нет необходимости в замене ионных остатков только Ala для отмены связывания C1q. Также можно использовать другие алкилзамещенные неионные остатки, такие как Gly, Ile, Leu или Val или такие ароматические неполярные остатки, как Phe, Tyr, Trp и Pro вместо любого из трех остатков для отмены связыванияClq. Дополнительно, также можно использовать такие полярные неионные остатки, как Ser, Thr, Cys иMet, вместо остатков 320 и 322, но не 318, для того чтобы отменить C1q-связывающую активность. В изобретении также предложены антитела, обладающие нарушенной эффекторной функцией, где это антитело имеет модифицированный шарнирный участок. Аффинность связывания человеческого IgG в отношении его Fc-рецепторов может быть модулирована путем модификации шарнирного участка.al., Human Immunology 59:720-727 (1998). Конкретные аминокислотные остатки могут быть мутированы или удалены. Модифицированный шарнирный участок может содержать полный шарнирный участок,имеющий происхождение из антитела, класс или подкласс которого отличается от класса или подкласса антитела, из которого получен домен СН 1. Например, константный домен (СН 1) антитела класса IgG может быть присоединен к шарнирному участку антитела класса IgG4. Альтернативно, новый шарнир- 25016357 ный участок может содержать часть природного шарнирного участка или повторяющейся единицы, в которой каждая единица в повторе имеет происхождение из природного шарнирного участка. В некоторых воплощениях природный шарнирный участок изменен путем превращения одного или более чем одного цистеинового остатка в нейтральный остаток, такой как аланин, или путем превращения подходящим образом размещенных остатков в цистеиновые остатки. Патент США 5677425. Такие изменения осуществляют с использованием признанных в данной области техники способов белковой химии и,предпочтительно, способов генной инженерии и в соответствии с тем, как описано здесь. Полипептиды, которые специфически связываются с A-пептидом и слиты с константной областью тяжелой цепи, обладающей нарушенной эффекторной функцией, также могут быть использованы в описанных здесь способах. В некоторых воплощениях полипептид включает последовательность, имеющую происхождение из антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3. В некоторых воплощениях полипептид имеет происхождение из однодоменного антитела, которое связывается с А-пептидом. Однодоменные антитела могут быть получены с использованием способов, известных в данной области техники. Omidfar et al., Tumour Biol. 25:296-305 (2004); Herring et al., Trends in Biotechnology 21:484-489(2003). В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой F(ab')2-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой Fab-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид не представляет собой одноцепочечное антитело scFv. В некоторых воплощениях антитело или полипептид представляет собой ПЭГилированный F(ab')2-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид представляет собой ПЭГилированный Fab-фрагмент. В некоторых воплощениях антитело или полипептид представляет собой ПЭГилированное одноцепочечное антитело scFv. Также могут быть использованы другие способы получения антител, обладающих нарушенной эффекторной функцией, известные в данной области техники. Антитела и полипептиды с модифицированными константными областями могут быть протестированы в одном или более чем одном анализе для оценки уровня снижения эффекторной функции в биологической активности по сравнению с исходным антителом. Например, способность антитела или полипептида с измененной Fc-областью связываться с комплементом или Fc-рецепторами (например, Fcрецепторами на микроглии) или измененным шарнирным участком можно оценить с использованием раскрытых здесь анализов, а также любого анализа, признанного в данной области техники. РСТWO 99/58572; Armour et al., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000); Song et al., Infection and Immunity 70:5177-5184 (2002). В некоторых воплощениях антитело, которое специфически связывается с бета-амилоидным пептидом, представляет собой поликлональное антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой человеческое антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой химерное антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых воплощениях, антитело представляет собой приматизированное антитело. См., например, Yocum et al., J. Rheumatol. 25:1257-62 (1998); Bugelski et al., HumanExperimental Toxicoloy 19:230-243 (2000). В некоторых воплощениях антитело деиммунизировано путем мутации таким образом, что антитело не активирует иммунную систему человека. См., например, Nanus, et al., J. Urology 170:S84-S89 (2003). Используемый здесь А-пептид включает любые фрагменты продуктов ферментативного расщепления амилоидного белка-предшественника. Например, A-пептид включает любые фрагменты A1-40,A1-42 или A1-43; и пептиды, которые урезаны по различному количеству аминокислот на N-конце или Сконце A1-40, A1-42 или A1-43. Используемая здесь нумерация аминокислот основана на нумерации A1-43(SEQ ID NO: 17). В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 1-16 A-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 16-28 A-пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-40 A1-40 пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-42 A1-42 пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 28-43 A1-43 пептида. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с A-пептидом без связывания с полноразмерным амилоидным белкомпредшественником (АРР). В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с агрегированной формой A без связывания с растворимой формой. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с растворимой формой A без связывания с агрегированной формой. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с агрегированной формой и растворимой формой A. Антитела, которые связываются с различными агрегированными формами A, известны в данной области техники, например антитела, которые связываются со способными к диффузии лигандами, происходящими из бета-амилоида (ADDL); антитела, которые- 26016357 связываются с амилоидными фибриллами и/или отложением. WO 03/104437; публикация заявки США 2003/0147887; публикация заявки США 2004/0219146. В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает один, два или три CDR легкой цепи иммуноглобулина 3D6 (SEQ ID NO: 2 в публикациях заявок США 2003/0165496 или 2004/0087777) и/или один, два или три CDR тяжелой цепи иммуноглобулина 3D6 (SEQ ID NO: 4 в публикациях заявок США 2003/0165496 или 2004/0087777). В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает вариабельную область тяжелой цепи в соответствии с представленным в SEQ ID NO: 8 в публикации заявки США 2003/0165496 и вариабельную область легкой цепи в соответствии с представленным вSEQ ID NO: 5 в публикации заявки США 2003/0165496. В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает вариабельную область тяжелой цепи в соответствии с представленным в SEQ ID NO: 12 в публикации заявки США 2003/0165496 и вариабельную область легкой цепи в соответствии с представленным в SEQ ID NO: 11 в публикации заявки США 2003/0165496. В некоторых воплощениях антитело или полипептид включает один, два или три CDR легкой цепи иммуноглобулина 10D5 (SEQID NO: 14 в публикациях заявок США 2003/0165496 или 2004/0087777) и/или один, два или три CDR тяжелой цепи иммуноглобулина 10D5 (SEQ ID NO: 16 в публикациях заявок США 2003/0165496 или 2004/0087777). В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом в пределах остатков 33-40 A1-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом на A1-40, который включает аминокислоты 35-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом на A1-40, который включает аминокислоты 36-40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с эпитопом на A1-40,который включает аминокислоту 39 и/или 40. В некоторых воплощениях антитело или полипептид специфически связывается с A1-40, но не связывается специфически с A1-42 и/или A1-43. В некоторых воплощениях антитело или полипептид представляет собой антитело 9TL или антитело или полипептид,имеющий происхождение из описанного здесь 9TL. В некоторых воплощениях антитело или полипептид полностью ингибирует связывание антитела 9TL и/или антитела или полипептида, имеющего происхождение из 9TL, с A1-40. В некоторых воплощениях антитело не представляет собой антитело 2286, описанное в РСТWO 2004/032868. Аффинности связывания антител и полипептидов по изобретению могут варьировать и не обязательно имеют (но могут иметь) конкретное значение или диапазон, как описано ниже в примерах воплощений. Аффинность связывания антител и полипептидов по изобретению к A1-40 могут составлять приблизительно от 0,10 до приблизительно 0,80 нМ, от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,75 нМ и от приблизительно 0,18 до приблизительно 0,72 нМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ, приблизительно 15 пМ,приблизительно 20 пМ, приблизительно 40 пМ или более чем приблизительно 40 пМ. В одном из воплощений аффинность связывания составляет приблизительно от 2 до 22 пМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно 100 пМ, приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ, приблизительно 50 пМ, приблизительно 40 пМ,приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 10 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 150 нМ, менее чем приблизительно 200 нМ, менее чем приблизительно 250 нМ, менее чем приблизительно 500 нМ или менее чем приблизительно 1000 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 5 нМ. В других воплощениях аффинность связывания оставляет менее чем приблизительно 1 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 0,1 нМ или приблизительно 0,07 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет менее чем приблизительно 0,1 нМ или менее чем приблизительно 0,07 нМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно от 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно 100 пМ, приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ, приблизительно 50 пМ, приблизительно 40 пМ, приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ до любого из приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ, приблизительно 15 пМ, приблизительно 20 пМ или приблизительно 40 пМ. В некоторых воплощениях аффинность связывания составляет любое значение из приблизительно 10 нМ, приблизительно 5 нМ, приблизительно 1 нМ, приблизительно 900 пМ, приблизительно 800 пМ, приблизительно 700 пМ, приблизительно 600 пМ, приблизительно 500 пМ, приблизительно 400 пМ, приблизительно 300 пМ, приблизительно 200 пМ, приблизительно 150 пМ, приблизительно- 27016357 100 пМ, приблизительно 90 пМ, приблизительно 80 пМ, приблизительно 70 пМ, приблизительно 60 пМ,приблизительно 50 пМ, приблизительно 40 пМ, приблизительно 30 пМ, приблизительно 10 пМ. В других воплощениях аффинность связывания составляет приблизительно 2 пМ, приблизительно 5 пМ, приблизительно 10 пМ, приблизительно 15 пМ, приблизительно 20 пМ, приблизительно 40 пМ или более чем приблизительно 40 пМ. Способы получения антител и полипептидов известны в данной области техники и описаны здесь. Конкурентные анализы могут быть использованы для определения того, могут ли два антитела связываться с одним эпитопом путем распознавания идентичных или стерически перекрывающихся эпитопов, или определения того, ингибирует ли конкурентно одно антитело связывание другого антитела с антигеном. Эти анализы известны в данной области техники. Как правило, антиген иммобилизуют на многолуночном планшете и измеряют способность немеченных антител блокировать связывание с меченными антителами. Обычные метки для таких конкурентных анализов представляют собой радиоактивные метки или ферментативные метки. Антитела и полипептиды, которые специфически связываются с А, могут быть отобраны в отношении эффективности удаления амилоидного отложения и других благоприятных эффектов, таких как улучшение познавательной способности. Например, антитела или полипептиды могут быть введены животному, имеющему патологию Альцгеймера. В данной области техники известны различные животные модели болезни Альцгеймера. После введения уровень компактных и диффузных амилоидных бляшек,поведенческий анализ познавательной способности и активация микроглии и микрокровоизлияния могут быть тестированы с использованием способов, известных в данной области техники и подробно описанных в примере 2. РСТWO 2004/032868; Wilcock et al., J. Neurosci. 23:3745-3751 (200); Wilcock et al., J.Neuroinflammation, 1:24 (2004). Полинуклеотиды, векторы и клетки-хозяева. В изобретении также предложены выделенные полинуклеотиды, кодирующие антитела и полипептиды по изобретению (включая антитело, включающее полипептидные последовательности вариабельной области легкой цепи и тяжелой цепи, представленные на фиг. 1), и векторы и клетки-хозяева, включающие полинуклеотид. Соответственно, в изобретении предложены полинуклеотиды (или композиции, включая фармацевтические композиции), включающие полинуклеотиды, кодирующие любое из следующих: (а) антитело 9TL или его варианты, представленные в табл. 3; (б) фрагмент или область антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (в) легкую цепь антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (г) тяжелую цепь антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (д) одну или более чем одну вариабельную область(и) легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (е) один или более чем один CDR (один, два, три, четыре, пять или шесть CDR) антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (ж) CDR H3 тяжелой цепи антитела 9TL; (з)CDR L3 легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (и) три CDR легкой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (к) три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; (л) три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи антитела 9TL или его вариантов, представленных в табл. 3; и (м) антитело, включающее любое из (б)-(л). В некоторых воплощениях полинуклеотид включает любой или оба из полинуклеотидов, представленных вSEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. В еще одном аспекте изобретения предложены полинуклеотиды, кодирующие любые из описанных здесь антител (включая фрагменты антитела) и полипептидов, таких как антитела и полипептиды, обладающие нарушенной эффекторной функцией. Полинуклеотиды могут быть получены с использованием способов, известных в данной области техники. В еще одном аспекте изобретения предложены композиции (такие как фармацевтические композиции), включающие любой из полинуклеотидов по изобретению. В некоторых воплощениях композиция включает экспрессирующий вектор, включающий полинуклеотид, кодирующий антитело 9TL в соответствии с описанным здесь. В другом воплощении композиция включает экспрессирующий вектор, включающий полинуклеотид, кодирующий любое из описанных здесь антител или полипептидов. В других воплощениях композиция включает любой или оба из полинуклеотидов, представленных в SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10. Экспрессирующие векторы и введение полинуклеотидных композиций дополнительно описано здесь. В еще одном аспекте изобретения предложен способ получения любого из описанных здесь полинуклеотидов. Полинуклеотиды, комплементарные любой из таких последовательностей, также охватываются настоящим изобретением. Полинуклеотиды могут быть одноцепочечными (кодирующими или антисмысловыми) или двухцепочечными и могут представлять собой молекулы ДНК (геномную, кДНК или синтетическую) или РНК. Молекулы РНК включают молекулы человеческой РНК, которые содержат интроны и соответствуют молекуле ДНК один к одному, и молекулы мРНК, которые не содержат интронов. Дополнительные кодирующие или не кодирующие последовательности не обязательно присутствуют, но могут присутствовать в полинуклеотиде по настоящему изобретению, и полинуклеотид не обязательно,- 28016357 но может быть связан с другими молекулами и/или материалами подложки. Полинуклеотиды могут включать нативную последовательность (т.е. эндогенную последовательность, кодирующую антитело или его фрагмент) или могут включать вариант такой последовательности. Варианты полинуклеотида содержат одну или более чем одну замену, добавку, делецию и/или вставку,так что иммунореактивность кодируемого полипептида не уменьшается по сравнению с нативной иммунореактивной молекулой. Эффект на иммунореактивность кодируемого полипептида, как правило, может быть оценен, как описано здесь. Варианты предпочтительно демонстрируют по меньшей мере приблизительно 70% идентичность, предпочтительней по меньшей мере приблизительно 80% идентичность и наиболее предпочтительно по меньшей мере приблизительно 90% идентичность с полинуклеотидной последовательностью, кодирующей нативное антитело или его фрагмент. Считают, что две полинуклеотидные или полипептидные последовательности "идентичны", если последовательность нуклеотидов или аминокислот в двух последовательностях одинакова при их совмещении для максимального соответствия, как описано ниже. Сравнения двух последовательностей,как правило, осуществляют в окне сравнения для идентификации и сравнения локальных областей сходства последовательности. Используемое здесь "окно сравнения" относится к сегменту, составляющему по меньшей мере приблизительно 20 соседних положений, обычно от 30 до приблизительно 75, от 40 до приблизительно 50, в котором последовательность можно сравнивать с референсной последовательностью, имеющей то же самое количество соседних положений после оптимального совмещения двух последовательностей. Оптимальное совмещение последовательностей для сравнения может быть осуществлено с использованием программы Megalign в пакете Lasergene биоинформационного программного обеспечения(DNASTAR, Inc., Madison, WI) с использованием параметров по умолчанию. Эта программа включает несколько схем совмещения, описанных в следующих ссылках: Dayhoff, M.O. (1978). A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Proteinand Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, C.A.; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J.,1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730. Предпочтительно "процент идентичности последовательности" определяют путем сравнения двух оптимально совмещенных последовательностей в окне сравнения, состоящего по меньшей мере из 20 положений, где фрагмент полинуклеотидной или полипептидной последовательности в окне сравнения может включать добавки или делеции (т.е. пробелы), составляющие 20% или менее, обычно от 5 до 15% или от 10 до 12% по сравнению с референсной последовательностью (которая не содержит добавления или делеции) для оптимального совмещения двух последовательностей. Процент рассчитывают путем определения количества положений, в которых в обоих последовательностях обнаруживают идентичные основания нуклеиновой кислоты или аминокислотные остатки с получением количества положений, по которым обнаружено соответствие, деления этого количества положений, по которым обнаружено соответствие, на общее количество положений в референсной последовательности (т.е. размер окна) и умножения результатов на 100 с получением процента идентичности последовательности. Варианты могут также быть, или альтернативно, по существу, гомологичными нативному гену или его фрагменту или комплементу. Такие полинуклеотидные варианты способны гибридизоваться в умеренно строгих условиях с обнаруживаемой в природе последовательностью ДНК, кодирующей нативное антитело (или комплементарную последовательность). Подходящие "умеренно строгие условия" включают предварительное промывание в растворе 5SSC (цитрат натрия с хлоридом натрия), 0,5% додецилсульфата натрия (SDS), 1,0 мМ этилендиаминтетраксусную кислоту (ЭДТА) (рН 8,0); гибридизацию при 50-65 С, 5SSC, в течение ночи; с последующим промыванием дважды при 65 С в течение 20 мин каждым из 2, 0,5 и 0,2SSC, содержащим 0,1% SDS. Используемые здесь "сильно строгие условия" или "условия высокой строгости" представляют собой условия, при которых: (1) используют низкую ионную силу и высокую температуру для промывания, например, 0,015 М хлорид натрия/0,0015 М цитрат натрия/0,1% додецилсульфат натрия при 50 С;(2) при гибридизации используют денатурирующий агент, такой как формамид, например 50% (об./об.) формамид с 0,1% бычьим сывороточным альбумином/0,1% Ficoll/0,1% поливинилпирролидоном/50 мМ буфера фосфата натрия при рН 6,5 с 750 мМ хлорида натрия, 75 мМ цитрата натрия при 42 С; или(3) используют 50% формамид, 5SSC (0,75 М NaCl, 0,075 М цитрат натрия), 50 мМ фосфат натрия (рН 6,8), 0,1% пирофосфат натрия, 5 х раствор Денхарта, обработанная ультразвуком ДНК спермы лосося(50 мкг/мл), 0,1% SDS и 10% сульфат декстрана при 42 С, с промывками при 42 С в 0,2SSC (хлорид натрия/цитрат натрия) и 50% формамиде при 55 С, с последующей промывкой в условиях высокой стро- 29