Слитые белки rage и способы применения

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ Дата публикации и выдачи патента Раскрыты слитые белки RACE, содержащие последовательности полипептида RAGE, связанные со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. В слитом белке RAGE можно использовать домен полипептида RAGE, содержащий участок связывания лиганда RAGE, и междоменный линкер, непосредственно связанный с доменом Сн 2 иммуноглобулина. Такие слитые белки могут обеспечивать специфичное, высокоаффинное связывание с лигандами RAGE. Также раскрыто применение слитых белков RACE в качестве терапевтических средства для опосредованных RAGE патологий. 015657 Настоящая заявка претендует на приоритет согласно 35 U.S.С. 119(е) на основании предварительной заявки на выдачу патента США с порядковым 60/771619, поданной 9 февраля 2006 г. Описание предварительной заявки США 60/771619 на выдачу патента включено в настоящую заявку в виде ссылки в полном объеме. Область техники, к которой относится изобретение Изобретение относится к регуляции рецептора конечного продукта глубокого гликозилирования(RAGE). Более конкретно, в настоящем изобретении описаны слитые белки, содержащие полипептидRAGE, способы получения таких слитых белков и применение таких белков для лечения основанных наRAGE расстройств. Уровень техники Инкубация белков или липидов с альдозными сахарами приводит к неферментативному гликозилированию и окислению аминогрупп белков с образованием продуктов Амадори. С течением времени аддукты подвергаются дополнительным перегруппировкам, дегидратации и поперечному сшиванию с другими белками с образованием комплексов, называемых конечными продуктами глубокого гликозилирования (AGE). Факторы, которые стимулируют образование AGE, включают замедленный метаболизм белка (например, как в случае амилоидоза), накопление макромолекул, имеющих высокое содержание лизина, и высокие уровни глюкозы в крови (например, как в случае диабета) (Hori et al., J. Biol. Chem. 270: 25752-761, (1995. AGE вовлечены в различные расстройства, включая осложнения, связанные с диабетом и обычным старением. Наблюдается специфическое и насыщаемое связывание AGE рецепторами клеточной поверхности на моноцитах, макрофагах, эндотелиальных клетках капилляров, гладкомышечных клетках, мезенгиальных клетках и нейронах. Рецептор конечных продуктов глубокого гликозилирования (RAGE) является представителем супергенного семейства молекул иммуноглобулинов. Внеклеточный (N-концевой) доменRAGE включает три области иммуноглобулинового типа: один домен V-типа (вариабельный), за которым следуют два домена С-типа (конститутивный) (Neeper et al., J. Biol. Chem., 267: 14998-15004 (1992);Schmidt et al., Circ. (Suppl.) 96-194 (1997. Один проходящий через мембрану домен и короткий, высокозаряженный цитозольный хвост следуют за внеклеточным доменом. N-концевой внеклеточный домен может быть выделен в результате протеолиза RAGE или молекулярно-биологическими способами, чтобы создать растворимый RAGE (sRAGE), состоящий из V- и С-доменов.RAGE экспрессируется на многих типах клеток, включая лейкоциты, нейроны, микроглиальные клетки и эндотелий сосудов (например, Hori et al., J. Biol. Chem., 270: 25752-761 (1995. Повышенные уровни RAGE также встречаются в стареющих тканях (Schleicher et al., J. Clin. Invest, 99 (3): 457-468(1997 и сетчатке, сосудах и почках при диабете (Schmidt et al., Nature Med. , 1: 1002-1004 (1995. Другие соединения, помимо AGE, могут связываться и модулировать RAGE. RAGE связывается с множеством функционально и структурно отличающихся лигандов, включая амилоид бета (А) , сывороточный амилоид A (SAA), конечные продукты глубокого гликозилирования (AGE), S100 (провоспалительный представитель семейства калгранулина), карбоксиметиллизин (CML), амфотерин и CD11b/CD18Rocken et al., Am. J. Pathol., 162: 1213-1220 (2003. Показано, что связывание лигандов, таких как AGE, S100/калгранулин, -амилоид, CML (Nкарбоксиметиллизин) и амфотерин, с RAGE модифицирует экспрессию множества генов. Их взаимодействия затем могут инициировать механизмы сигнальной трансдукции, включая активацию р 38, p21ras,МАР-киназ, фосфорилирование Erk1-2 и активацию транскрипционного медиатора передачи сигнала воспаления, NF-kB (Yeh et al., Diabetes, 50: 1495-1504 (2001. Например, во многих типах клеток взаимодействие между RAGE и его лигандами может создавать окислительный стресс, который приводит к активации чувствительного к свободным радикалам фактора транскрипции NF-kB и активации регулируемых NF-kB генов, таких как цитокины IL-1 и TNF-. Кроме того, экспрессия RAGE подвергается повышающей регуляции посредством NF-kB, и повышенная экспрессия наблюдается в местах воспаления или окислительного стресса (Tanaka et al., J. Biol. Chem., 275: 25781-25790 (2000. Таким образом,возрастающая и часто опасная спираль может подпитываться петлей положительной обратной связи,инициированной связыванием лиганда. Активация RAGE в разных тканях и органах может приводить к ряду патофизиологических последствий. RAGE вовлечен в различные состояния, включая: острое и хроническое воспаление (Hofmann etal., Cell 97: 889-901 (1999, развитие поздних осложнений диабета, таких как повышенная проницаемость сосудов (Wautier et al., J. Clin. Invest., 97: 238-243 (1995, нефропатия (Teillet et al., J. Am. Soc.Nephrol., 11: 1488-1497 (2000, артериосклероз (Vlassara et al., The Finnish Medical Society DUODECIM,Ann. Med., 28: 419-426 (1996 и ретинопатия (Hammes et al., Diabetologia, 42: 603-607 (1999. RAGE также вовлечен в болезнь Альцгеймера (Yan et al., Nature, 382: 685-691 (1996, и инвазию метастазы опухолей (Taguchi et al., Nature, 405: 354-357 (2000. Несмотря на широкую экспрессию RAGE и его выраженную плейотропную роль во множестве раз-1 015657 ных моделей заболеваний, RAGE, по-видимому, не является необходимым для нормального развития. Например, нокаутированные по RAGE мыши не имеют явного аномального фенотипа, что свидетельствует о том, что хотя RAGE может играть роль в патологии заболеваний при хронической стимуляции,ингибирование RAGE, по-видимому, не вносит вклада в какой-либо нежелательный острый фенотип(Liliensiek et al., J. Clin. Invest., 113: 1641-50 (2004. Антагонистическое действие на связывание физиологических лигандов с RAGE может приводить к понижающей регуляции патофизиологических изменений, вызванных избыточными концентрациямиAGE и других лигандов RAGE. При уменьшении связывания эндогенных лигандов с RAGE могут быть уменьшены симптомы, связанные с опосредованными RAGE расстройствами. Растворимый RAGE(sRAGE) способен быть эффективным антагонистом связывания RAGE-лигандов с RAGE. ОднакоsRAGE может иметь время полужизни при введении in vivo, которое может быть слишком коротким для его терапевтической применимости в случае одного или нескольких расстройств. Таким образом, существует необходимость в разработке соединений, которые являлись бы антагонистами связывания AGE и других физиологических лигандов с рецептором RAGE, при этом соединения должны иметь подходящий фармакологический профиль. Сущность изобретения Варианты осуществления настоящего изобретения включают слитые белки RAGE и способы применения таких белков. Настоящее изобретение может быть осуществлено различными способами. Варианты осуществления настоящего изобретения могут быть связаны со слитым белком RAGE, содержащим полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. В одном варианте слитый белок RAGE содержит участок связывания лиганда RAGE. Слитый белок RAGE может дополнительно содержать полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или часть домена Сн 2. Настоящее изобретение также относится к способу получения слитого белка RAGE. В одном варианте способ включает в себя связывание полипептида RAGE со вторым полипептидом, отличным отRAGE. В одном варианте полипептид RAGE содержит участок связывания лиганда RAGE. Способ может заключаться в связывании полипептида RAGE непосредственно с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или часть домена Сн 2. В других вариантах настоящее изобретение может относиться к способам и композициям для лечения RAGE-опосредованного расстройства у пациента. Способ может включать в себя введение пациенту слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению. Композиция может содержать слитый белокRAGE согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемом носителе. Существуют различные преимущества, которые могут быть связаны с конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения. В одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут быть метаболически стабильными при введении пациенту. Также слитые белкиRAGE согласно настоящему изобретению могут проявлять высокоаффинное связывание по отношению к лигандам RAGE. В некоторых вариантах слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению связываются с лигандами RAGE с аффинностью в диапазоне от высоких наномолярных до низких наномолярных значений. Благодаря связыванию с высокой аффинностью с физиологическими лигандами RAGE слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для ингибирования связывания эндогенных лигандов с RAGE, тем самым обеспечивая средства для улучшения состояния в случаеRAGE-опосредованных заболеваний. Также слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут быть представлены в форме белка или нуклеиновой кислоты. В одном иллюстративном варианте слитый белок RAGE может быть введен системно и может сохраняться в сосудистой системе для потенциального лечения сосудистых заболеваний, отчасти опосредованных RAGE. В другом иллюстративном варианте слитый белок RAGE может быть введен место для лечения заболеваний, при которых лиганды RAGE вносят вклад в патологию заболевания. Альтернативно, конструкция нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок RAGE,может быть доставлена к месту с применением подходящего носителя, такого как вирус или "голая" ДНК, где временная локальная экспрессия может местно ингибировать взаимодействие между лигандами RAGE и рецепторами. Таким образом, введение может быть временным (например, как в случае, когда вводят слитый белок RAGE) или более постоянным по природе (например, как в случае, когда слитый белок RAGE вводят в виде рекомбинантной ДНК). Существует несколько дополнительных отличительных признаков изобретения, которые будут описаны далее. Необходимо понимать, что изобретение не ограничено в своем применении подробностями,указанными в следующей формуле изобретения, описании и на фигурах. Возможны другие варианты осуществления изобретения, и изобретение может быть осуществлено на практике или выполнено различными способами. Краткое описание фигур Различные признаки, аспекты и преимущества настоящего изобретения станут понятнее при обращении к следующим фигурам. На фиг. 1 показаны различные последовательности RAGE и последовательности иммуноглобулина-2 015657 согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения: панель A, SEQ ID NO: 1,аминокислотная последовательность RAGE человека; и SEQ ID NO: 2, аминокислотная последовательность RAGE человека без сигнальной последовательности аминокислот 1-22; Панель В, SEQ ID NO: 3,аминокислотная последовательность RAGE человека без сигнальной последовательности аминокислот 123; Панель С, SEQ TD NO: 4, аминокислотная последовательность sRAGE человека; SEQ ID NO: 5, аминокислотная последовательность sRAGE человека без сигнальной последовательности аминокислот 1-22,и SEQ ID NO: 6, аминокислотная последовательность sRAGE человека без сигнальной последовательности аминокислот 1-23; Панель D, SEQ ID NO: 7, аминокислотная последовательность, содержащая Vдомен RAGE человека; SEQ ID NO: 8, альтернативная аминокислотная последовательность, содержащаяV-домен RAGE человека; SEQ ID NO: 9, N-концевой фрагмент V-домена RAGE человека; SEQ ID NO: 10, альтернативный N-концевой фрагмент V-домена RAGE человека; SEQ ID NO: 11, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 124-221 RAGE человека; SEQ ID NO: 12, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 227-317 RAGE человека; SEQ ID NO: 13, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 23-123 RAGE человека; Панель Е, SEQ ID NO: 14, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-123 RAGE человека; SEQ ID NO: 15, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 23-136 RAGE человека; SEQ ID NO: 16, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-136 RAGE человека; SEQ ID NO: 17, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 23-22 6 RAGE человека; SEQ ID NO: 18, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-226 RAGE человека; Панель F,SEQ ID NO: 19, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 23-251 RAGE человека;SEQ ID NO: 20, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-251 RAGE человека;SEQ ID NO: 21, междоменный линкер RAGE; SEQ ID NO: 22, второй междоменный линкер RAGE; SEQID NO: 23, третий междоменный линкер RAGE; SEQ ID NO: 24, четвертый междоменный линкер RAGE; Панель G, SEQ ID NO: 25, ДНК, кодирующая аминокислоты RAGE человека 1-118; SEQ ID NO: 26, ДНК,кодирующая аминокислоты RAGE человека 1-123; и SEQ ID NO: 27, ДНК, кодирующая аминокислотыRAGE человека 1-136; Панель Н, SEQ ID NO: 28, ДНК, кодирующая аминокислоты RAGE человека 1230; и SEQ ID NO: 29, ДНК, кодирующая аминокислоты RAGE человека 1-251; Панель I, SEQ ID NO: 38,частичная аминокислотная последовательность доменов Сн 2 и Сн 3 IgG человека; SEQ ID NO:39, ДНК,кодирующая часть доменов Сн 2 и Сн 3 человека IgG человека; SEQ ID NO: 40, аминокислотная последовательность доменов Сн 2 и Сн 3 IgG человека; Панель J, SEQ ID NO: 41, ДНК, кодирующая домены Сн 2 и Сн 3 человека IgG человека; SEQ ID NO: 42, аминокислотная последовательность домена Сн 2 IgG человека; SEQ ID NO: 43, аминокислотная последовательность домена Сн 3 IgG человека; и SEQ ID NO: 44, пятый междоменный линкер RAGE. На фиг. 2 показана последовательность ДНК (SEQ ID NO: 30) кодирующей области первого слитого белка RAGE (TTP-4000) согласно варианту осуществления настоящего изобретения. Кодирующая последовательность 1-753, выделенная жирным шрифтом, кодирует N-концевую последовательность белкаRAGE, тогда как последовательность 754-1386 кодирует последовательность белка IgG (1) человека. На фиг. 3 показана последовательность ДНК (SEQ ID NO: 31) кодирующей области второго слитого белка RAGE (TTP-3000) согласно варианту осуществления настоящего изобретения. Кодирующая область 1-408, выделенная жирным шрифтом, кодирует N-концевую последовательность белка RAGE, тогда как последовательность 409-1041 кодирует последовательность белка IgG (1) человека. На фиг. 4 показаны аминокислотные последовательности, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и SEQ IDNO: 34, каждая из которых кодирует состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения. Последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. На фиг. 5 показаны аминокислотные последовательности, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 и SEQ IDNO: 37, каждая из которых кодирует состоящий из трех доменов слитый белок RAGE согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения. Последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. На фиг. 6, панель А, показано сравнение белковых доменов в RAGE человека и в белке Fc Ig гамма 1 человека, и точки расщепления, используемые для получения ТТР-3000 (в положении 136) и ТТР-4000(в положении 251) согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения; и на панели В показана структура доменов ТТР-3000 и ТТР-4000 согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения. На фиг. 7 показаны результаты анализа связывания in vitro для sRAGE и первого слитого белкаRAGE ТТР-4000 (ТТ 4) и второго слитого белка RAGE ТТР-3000 (ТТ 3) с лигандами RAGE амилоидомбета (А-бета), S100b (S100) и амфотерином (Ampho) согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 8 показаны результаты анализа связывания in vitro для первого слитого белка RAGE ТТР 4000 (ТТ 4) ("белок") с амилоидом-бета по сравнению с негативным контролем, включающим только реагенты для иммунодетекции ("только комплекс"), и антагонизм такого связывания антагонистом RAGE("лиганд RAGE") согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 9 показаны результаты анализа связывания in vitro для второго слитого белка RAGE ТТР 3000 (ТТ 3) ("белок") с амилоидом-бета по сравнению с негативным контролем, включающим в себя только реагенты для иммунодетекции ("только комплекс"), и антагонизм такого связывания антагонистом RAGE ("лиганд RAGE") согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 10 показаны результаты основанного на клетках анализа, в котором измеряют ингибирование индуцированной S100b-RAGE продукции TNF- слитыми белками RAGE ТТР-3000 (ТТ 3) и ТТР 4000 (ТТ 4) и sRAGE согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 11 показан фармакокинетический профиль слитого белка RAGE TTP-4000 согласно варианту осуществления настоящего изобретения, на котором каждая кривая представляет отдельное животное в одних и тех же условиях эксперимента. На фиг. 12 показаны относительные уровни высвобождения TNF- из клеток ТНР-1 вследствие стимуляции слитым белком RAGE ТТР-4000 и стимуляции IgG человека, в качестве меры воспалительного ответа согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 13 показано применение слитого белка RAGE ТТР-4000 для уменьшения рестеноза у животных с диабетом согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения, при этом на панели А показано, что слитый белок RAGE ТТР-4000 уменьшал отношение интима/средняя оболочка стенки кровеносного сосудов по сравнению с негативным контролем (IgG), и на панели В показано, что слитый белок RAGE ТТР-4000 уменьшал пролиферацию гладкомышечных клеток сосудов зависимым от дозы образом. На фиг. 14 показано применение слитого белка RAGE ТТР-4000 для уменьшения образования амилоида и нарушения когнитивной функции у животных с болезнью Альцгеймера (AD) согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения, при этом на панели А показано, что слитый белок RAGE ТТР-4000 уменьшал амилоидную нагрузку в головном мозге, и на панели В показано, что слитый белок RAGE ТТР-4000 улучшал когнитивную функцию. На фиг. 15 показаны кривые насыщения связывания ТТР-4000 с различными известными иммобилизованными лигандами RAGE согласно варианту осуществления настоящего изобретения. На фиг. 16 показаны различные последовательности RAGE и последовательности иммуноглобулина согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения: Панель A, SEQ ID NO: 45, аминокислотная последовательность sRAGE человека без сигнальной последовательности аминокислот 1-23, при этом остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты, SEQ ID NO: 46, альтернативная аминокислотная последовательность, содержащая V-доменsRAGE человека, где остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты, SEQ ID NO: 47, альтернативный N-концевой фрагмент V-домена RAGE человека, где остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты, SEQ ID NO: 48, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-123 RAGE человека, где остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты; Панель В, SEQ ID NO: 49,аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-136 RAGE человека, где остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты, SEQ ID NO: 50, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-226 RAGE человека, где остаток глутамина на N-конце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты, SEQ ID NO: 51, аминокислотная последовательность, состоящая из аминокислот 24-251 RAGE человека, где остаток глутамина на Nконце был циклизован с образованием пироглутаминовой кислоты; Панель С, SEQ ID NO: 52, альтернативная последовательность ДНК, кодирующая часть доменов Сн 2 и Сн 3 человека IgG человека в SEQ IDNO: 38, SEQ ID NO: 53, альтернативная последовательность ДНК, кодирующей домены Сн 2 и Сн 3 человека IgG человека в SEQ ID NO: 40. На фиг. 17 показана альтернативная последовательность ДНК (SEQ ID NO: 54) кодирующей области первого слитого белка RAGE (ТТР-4000) согласно варианту осуществления настоящего изобретения. Кодирующая последовательность 1-753, выделенная жирным шрифтом, кодирует N-концевую последовательность белка RAGE, и последовательность 754-1386, кодирует последовательность белка IgG (1) человека. На фиг. 18 показана альтернативная последовательность ДНК (SEQ ID NO: 55) кодирующей области второго слитого белка RAGE (ТТР-3000) согласно варианту осуществления настоящего изобретения. Кодирующая последовательность 1-408, выделенная жирным шрифтом, кодирует N-концевую последовательность белка RAGE, и последовательность 409-1041 кодирует последовательность белка IgG (1) человека. На фиг. 19 показана аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 56, которая кодирует состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения. Последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. На фиг. 20 показана аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 57, которая кодирует состоящий из трех доменов слитый белок RAGE согласно альтернативному варианту осуществления настояще-4 015657 го изобретения. Последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. На фиг. 21 показано применение слитого белка RAGE TTP-4000 для уменьшения отторжения аллогенных трансплантатов островковых клеток поджелудочной железы согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения, при этом открытыми (незаштрихованными) кружками обозначены необработанные контрольные животные; кружками с косой штриховкой обозначены животные,обработанные ТТР-4000 в первой дозе; кружками с волнистой штриховкой обозначены животные, обработанные ТТР-4000 во второй дозе; кружками с ромбами внутри обозначены животные, обработанные контрольным PBS; и полностью закрашенными кружками обозначены животные, обработанные контрольным IgG. На фиг. 22 показано применение слитых белков RAGE ТТР-4000 для уменьшения отторжения сингенных трансплантатов островковых клеток поджелудочной железы согласно альтернативным вариантам осуществления настоящего изобретения, где открытыми (незаштрихованными) кружками обозначены необработанные контрольные животные; и заштрихованными кружками обозначены животные, обработанные ТТР-4000. Подробное описание В целях настоящего описания, если не оговорено особо, все числа, выражающие количества ингредиентов, условия реакции и т.д., используемые в описании, необходимо понимать как скорректированные во всех случаях термином "примерно". Соответственно, если не указано иное, числовые параметры,указанные в следующем описании, являются приближениями, которые могут варьировать в зависимости от требуемых свойств, которые пытаются получить благодаря настоящему изобретению. Как минимум, и не как попытка ограничить применимость принципа эквивалентов к объему формулы изобретения, каждый числовой параметр следует рассматривать по меньшей мере учитывая ряд указанных значащих цифр и применяя обычные способы округления. Несмотря на то что численные диапазоны и параметры, указывающие общий объем изобретения,являются приблизительными, численные значения, указанные в конкретных примерах, указаны точно,насколько это возможно. Однако любое численное значение, по существу, содержит некоторые ошибки,обязательно возникающие в результате стандартного отклонения, найденного в соответствующих измерениях при тестировании. Кроме того, необходимо понимать, что все диапазоны, указанные в данном описании, охватывают любой и все входящие в них поддиапазоны. Например, следует считать, что указанный диапазон "от 1 до 10" включает любой и все поддиапазоны между (и включая) минимальным значением 1 и максимальным значением 10; то есть все поддиапазоны, начиная с минимального значения 1, или более, например от 1 до 6,1, и заканчивая максимальным значением 10, или менее, например от 5,5 до 10. Кроме того, любую ссылку, в которой указано "включено в данное описание" следует понимать,как "включено в полном объеме". Кроме того, следует отметить, что в используемом в данном описании смысле формы единственного числа включают множественные объекты, если определенно и недвусмысленно не ограничены одним объектом. Термин "или" используют взаимозаменяемо с термином "и/или", если контекст явно не указывает иное. Также термины "часть" и "фрагмент" используют взаимозаменяемо, чтобы указать части полипептида, нуклеиновой кислоты или другой молекулярной конструкции."Полипептид" и "белок" используют в данном описании взаимозаменяемо, чтобы описать белковые молекулы, которые могут включать либо неполные, либо полноразмерные белки. Как известно в данной области, "белки", "пептиды", "полипептиды" и "олигопептиды" представляют собой цепи аминокислот (обычно L-аминокислот), в которых альфа-углеродные атомы связаны посредством пептидных связей, образованных в реакции конденсации между карбоксильной группой у альфа-углеродного атома одной аминокислоты и аминогруппой у альфа-углеродного атома другой аминокислоты. Обычно аминокислоты, составляющие белок, нумеруют по порядку, начиная с аминоконцевого остатка и продолжая в направлении к карбоксильному концевому остатку белка. В используемом в данном описании смысле термин "выше" относится к остатку, который являетсяN-концевым по отношению ко второму остатку, когда молекула представляет собой белок, или с 5'стороны по отношению ко второму остатку, когда молекула представляет собой нуклеиновую кислоту. Также в используемом в данном описании смысле термин "ниже" относится к остатку, который является С-концевым по отношению ко второму остатку, когда молекула представляет собой белок, или с 3'стороны по отношению ко второму остатку, когда молекула представляет собой нуклеиновую кислоту. Если не оговорено особо, все технические и научные термины, используемые в данном описании,имеют такое же значение, которые обычно подразумеваются специалистом в данной области. Практикам особенно рекомендуется обратиться к Current Protocols in Molecular Biology (см., например, Ausubel, F.M.et al., Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed., Chapter 2, John Wiley and Sons, N. Y.) в отношении определений и терминов в данной области. Сокращения аминокислотных остатков представляют собой стандартный 3-буквенный и/или 1-буквенный код, используемый в данной области по отношению к одной из 20 распространенных L-аминокислот."Нуклеиновая кислота" представляет собой полинуклеотид, такой как дезоксирибонуклеиновая ки-5 015657 слота (ДНК) или рибонуклеиновая кислота (РНК). Термин используют для обозначения однонитевых нуклеиновых кислот, двунитевых нуклеиновых кислот, и РНК и ДНК, состоящих из нуклеотидных и нуклеозидных аналогов. Термин "вектор" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая может быть использована для транспорта второй молекулы нуклеиновой кислоты в клетку. В одном варианте вектор обеспечивает возможность репликации последовательностей ДНК, встроенных в вектор. Вектор может содержать промотор для усиления экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты, по меньшей мере в некоторых клетках-хозяевах. Векторы могут реплицироваться автономно (внехромосомные) или могут быть интегрированы в хромосому клетки-хозяина. В одном варианте вектор может представлять собой экспрессирующий вектор, способный продуцировать белок, полученный по меньшей мере с части последовательности нуклеиновой кислоты, встроенной в вектор. Как известно в данной области, условия для гибридизации последовательностей нуклеиновых кислот друг с другом могут быть описаны в виде диапазона от условий низкой жесткости до условий высокой жесткости. В общем, условия гибридизации высокой жесткости относятся к промывке гибридов в буфере с низкой концентрацией соли при высоких температурах. Гибридизация может быть осуществлена со связанной на фильтре ДНК с использованием растворов для гибридизации, стандартных в данной области, таких как 0,5 М NaHPO4, 7% додецилсульфат натрия (SDS), при 65 С, и промывка в 0,25 МNaHPO4, 3,5% SDS с последующей промывкой 0,1SSC/0,1% SDS при температуре в диапазоне от комнатной температуры до 68 С в зависимости от длины зонда (Ausubel et al.). Например, промывка при высокой жесткости включает в себя промывку в 6SSC/0,05% пирофосфате натрия при 37 С в случае олигонуклеотидного зонда длиной 14 оснований, или при 48 С в случае олигонуклеотидного зонда длиной 17 оснований, или при 55 С в течение олигонуклеотидного зонда длиной 20 оснований, или при 60 С в случае олигонуклеотидного зонда длиной 25 оснований, или при 65 С в случае нуклеотидного зонда длиной примерно 250 нуклеотидов. Зонды нуклеиновой кислоты можно метить радионуклеотидами посредством концевого мечения, например, с использованием [-32 Р]АТР, или включением радиоактивно меченых нуклеотидов, таких как [-32 Р]dCTP, посредством мечения случайными праймерами. Альтернативно, зонды могут быть мечены включением биотинилированных или меченых флуоресцеином нуклеотидов, и зонд выявляют с использованием стрептавидина или антител против флуоресцеина. В используемом в данном описании смысле "малые органические молекулы" представляют собой молекулы с молекулярной массой менее 2000 Да, которые содержат по меньшей мере один атом углерода. Термин "слитый белок" относится к белку или полипептиду, который имеет аминокислотную последовательность, полученную из двух или более белков. Слитый белок также может включать связывающие области аминокислот между состоящими из аминокислот частями, полученными из отдельных белков. В используемом в данном описании смысле "полипептид, отличный от RAGE" представляет собой любой полипептид, который не получен из RAGE или его фрагмента. Такие полипептиды, отличные от полипептида RAGE, включают пептиды иммуноглобулина, димеризующие полипептиды, стабилизирующие полипептиды, амфифильные пептиды или полипептиды, содержащие аминокислотные последовательности, которые обеспечивают "метки" для целенаправленного воздействия и очистки белка. В используемом в данном описании смысле "иммуноглобулиновые пептиды" могут содержать тяжелую цепь иммуноглобулина или ее часть. В одном варианте часть тяжелой цепи может представлять собой Fc-фрагмент или его часть. В используемом в данном описании смысле Fc-фрагмент содержит полипептид шарнира тяжелой цепи и домены Сн 2 и Сн 3 тяжелой цепи иммуноглобулина, либо в мономерной, либо в димерной форме. Или в качестве иммуноглобулинового полипептида можно использовать Сн 1 и Fc-фрагмент. Тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого одного из известных изотипов тяжелой цепи: IgG , IgM , IgD , IgEили IgA . Кроме того, тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого одного из известных подтипов тяжелой цепи: IgG1 (1), IgG2(2), IgG3 (3), IgG4 (4), IgA1 (1), IgA2 (2), или мутаций таких изотипов или подтипов, которые изменяют биологическую активность. Примером биологической активности, которая может быть изменена,является уменьшение способности изотипа связываться с некоторыми рецепторами Fc, например, посредством модификации шарнирной области. Термины "идентичность" или "процент идентичности" относятся к идентичности последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями или между двумя последовательностями нуклеиновой кислоты. Идентичность в процентах может быть определена при выравнивании двух последовательностей и относится к количеству идентичных остатков (т.е. аминокислот или нуклеотидов) в положениях, общих в сравниваемых последовательностях. Выравнивание и сравнение последовательностей можно проводить с использованием стандартных в данной области алгоритмов (например, Smithand Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 85: 2444) или с использованием компьютеризованных версий таких алгоритмов (Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Sci-6 015657ence Drive, Madison, WI), общедоступных в виде BLAST и FASTA. Также можно использовать ENTREZ,доступную из the National Institutes of Health, Bethesda MD, для сравнения последовательностей. В одном варианте идентичность в процентах двух последовательностей можно определить, используя GCG с оценкой пробела 1, так, чтобы каждый аминокислотный пробел оценивался так, как будто имеет место одно несовпадение аминокислот в двух последовательностях. В используемом в данном описании смысле термин "консервативные остатки" относится к аминокислотам, которые являются одинаковыми во множестве белков, имеющих одну и ту же структуру и/или функцию. Область консервативных остатков может быть важной для структуры или функции белка. Таким образом, последовательные консервативные остатки, которые выявляют в трехмерном белке, могут быть важны для структуры или функции белка. Чтобы найти консервативные остатки или консервативные области 3-D-структуры можно осуществить сравнение последовательностей для одинаковых или сходных белков из разных видов или особей одного вида. В используемом в данном описании смысле термин "гомолог" означает полипептид, имеющий определенную степень гомологии с аминокислотной последовательностью дикого типа. Сравнения в отношении гомологии могут быть проведены визуально или более обычно с помощью легко доступны программ для сравнения последовательностей. Такие коммерчески доступные компьютерные программы могут вычислять гомологию в процентах между двумя или более последовательностями (например,Wilbur, W. J. and Lipman, D. J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 726-730). Например, гомологичными последовательностями можно считать последовательности, которые включают в себя аминокислотные последовательности, которые в альтернативных вариантах по меньшей мере на 70% идентичны, на 75% идентичны, на 80% идентичны, на 85% идентичны, на 90% идентичны, на 95% идентичны, на 97% идентичны или на 98% идентичны или на 99% идентичны друг другу. В используемом в данном описании смысле термин "по меньшей мере на 90% идентичны" включает последовательности, которые имеют идентичность в диапазоне от 90 до 99,99% с указанными последовательностями, и включает все диапазоны между таким значениями. Таким образом, термин "по меньшей мере на 90% идентичны" включает последовательности, которые на 91, 91,5, 92, 92,5, 93, 93,5,94, 94,5, 95, 95,5, 96, 96,5, 97, 97,5, 98, 98,5, 99, 99,5% идентичны указанной последовательности. Подобным образом термин "по меньшей мере на 70% идентичны" включает последовательности, которые имеют идентичность в диапазоне от 70 до 99,99% со всеми диапазонами между указанными значениями. Определение идентичности в процентах осуществляют, используя алгоритмы, описанные в данной публикации. В используемом в данном описании смысле "домен" полипептида или белка содержит область в полипептиде или белке, которая составляет независимую единицу. Домены можно определить с точки зрения структуры, последовательности и/или биологической активности. В одном варианте полипептидный домен может содержать область белка, которая подвергается укладке таким образом, который, по существу, не зависит от остальной части белка. Домены могут быть идентифицированы с использованием баз данных о доменах, таких как без ограничения PFAM, PRODOM, PROSITE, BLOCKS, PRINTS, SBASE,ISREC PROFILES, SAMRT и PROCLASS. В используемом в данном описании смысле "иммуноглобулиновый домен" означает последовательность аминокислот, которая структурно гомологична или идентична домену иммуноглобулина. Длина последовательности аминокислот иммуноглобулинового домена может быть любой. В одном варианте иммуноглобулиновый домен может иметь длину менее 250 аминокислот. В иллюстративном варианте иммуноглобулиновый домен может иметь длину примерно 80-150 аминокислот. Например, вариабельная область и области Сн 1, Сн 2 и Сн 3 IgG являются доменами иммуноглобулина. В другом примере вариабельная область, области Сн 1, Сн 2, Сн 3 и Сн 4 IgM являются доменами иммуноглобулина. В используемом в данном описании смысле "иммуноглобулиновый домен RAGE" означает последовательность аминокислот из белка RAGE, которая структурно гомологична или идентична домену иммуноглобулина. Например, иммуноглобулиновый домен RAGE может содержать V-домен RAGE, Igподобный домен RAGE С 2-типа 1 ("С 1-домен") или Ig-подобный домен RAGE С 2-типа 2 ("С 2-домен"). В используемом в данном описании смысле "междоменный линкер" содержит полипептид, который связывает вместе два домена. Шарнирная область Fc является примером междоменного линкера в IgG. В используемом в данном описании смысле "непосредственно связанный" означает ковалентную связь между двумя разными группами (например, последовательностями нуклеиновой кислоты, полипептидами, полипептидными доменами), которые не имеют каких-либо промежуточных атомов между двумя группами, которые связаны. В используемом в данном описании смысле "домен связывания лиганда" относится к домену белка,отвечающему за связывание лиганда. Термин "домен связывания лиганда" включает гомолог домена связывания лиганда или его часть. В этом отношении могут быть осуществлены преднамеренные замены аминокислот в участке связывания лиганда на основе сходства полярности, заряда, растворимости, гидрофобности или гидрофильности остатков, при условии сохранения специфичности связывания домена связывания лиганда. В используемом в данном описании смысле "участок связывания лиганда" включает в себя остатки-7 015657 в белке, которые непосредственно взаимодействуют с лигандом, или остатки, вовлеченные в размещение лиганда в тесной близости с остатками, которые непосредственно взаимодействуют с лигандом. Взаимодействие остатков в участке связывания лиганда можно определить на основании пространственной близости остатков к лиганду в модели или структуре. Термин "участок связывания лиганда" включает гомолог участка связывания лиганда или его часть. В этом отношении могут быть осуществлены преднамеренные замены аминокислот в участке связывания лиганда на основе сходства полярности, заряда, растворимости, гидрофобности или гидрофильности остатков, при условии сохранения специфичности связывания участка связывания лиганда. Участок связывания лиганда может существовать в одном или нескольких доменах связывания лиганда в белке или полипептиде. В используемом в данном описании смысле термин "взаимодействует" относится к условию близости между лигандом или соединением или его частями или фрагментами и частью второй представляющей интерес молекулы. Взаимодействие может быть нековалентным, например, в результате образования водородных связей, ван-дер-ваальсовских взаимодействий или электростатических или гидрофобных взаимодействий, или оно может быть ковалентным. В используемом в данном описании смысле "лиганд" относится к молекуле или соединению, или элементу, который взаимодействует с участком связывания лиганда, включая субстраты или их аналоги или части. Как описано в данной публикации, термин "лиганд" может относиться к соединениям, которые связываются с представляющим интерес белком. Лиганд может быть агонистом, антагонистом или модулятором. Или лиганд может не оказывать биологического влияния. Или лиганд может блокировать связывание других лигандов, тем самым ингибируя биологический эффект. Лиганды могут включать в себя, без ограничения ими, низкомолекулярные ингибиторы. К таким малым молекулам могут относиться пептиды, пептидомиметики, органические соединения и тому подобное. Лиганды также могут включать полипептиды и/или белки. В используемом в данном описании смысле "соединение-модулятор" относится к молекуле, которая преобразует или изменяет биологическую активность представляющей интерес молекулы. Соединениемодулятор может увеличивать или уменьшать активность или изменять физические или химические характеристики или функциональные или иммунологические свойства представляющей интерес молекулы. В случае RAGE соединение-модулятор может увеличивать или уменьшать активность или изменять характеристики или функциональные или иммунологические свойства RAGE или его части. Соединениемодулятор может включать природные и/или химически синтезированные или искусственные пептиды,модифицированные пептиды (например, фосфопептиды), антитела, углеводы, моносахариды, олигосахариды, полисахариды, гликолипиды, гетероциклические соединения, нуклеозиды или нуклеотиды или их части и малые органические или неорганические молекулы. Соединение-модулятор может представлять собой эндогенное физиологическое соединение, или оно может быть природным или синтетическим соединением. Или соединение-модулятор может представлять собой малую органическую молекулу. Термин "соединение-модулятор" также включает химически модифицированный лиганд или соединение и включает изомеры и рацемические формы."Агонист" означает соединение, которое связывается с рецептором с образованием комплекса, который вызывает фармакологический ответ специфичный для вовлеченного в процесс рецептора."Антагонист" означает соединение, которое связывается с агонистом или рецептором с образованием комплекса, который не вызывает значимого фармакологического ответа и может ингибировать биологический ответ, индуцированный агонистом. Следовательно, агонисты RAGE могут связываться с RAGE и стимулировать опосредованныеRAGE клеточные процессы, а антагонисты RAGE могут ингибировать опосредованные RAGE процессы,не давая агонисту RAGE их стимулировать. Например, в одном варианте клеточным процессом, стимулируемым агонистами RAGE является активация транскрипции гена TNF-. Термин "миметики пептидов" относится к структурам, которые служат в качестве заменителей пептидов во взаимодействиях между молекулами (Morgan et al., 1989, Ann. Reports Med. Chem., 24: 243-252). К миметикам пептидов могут относиться синтетические структуры, которые могут содержать или могут не содержать аминокислот и/или пептидных связей, которые сохраняют структурные функциональные признаки пептида или агониста или антагониста. Миметики пептидов также включают пептоиды, олигопептоиды (Simon et al., 1972, Proc. Natl. Acad, Sci., USA, 89: 93 67); и пептидные библиотеки, содержащие пептиды требуемой длины, представляющие все возможные последовательности аминокислот, соответствующие пептиду или агонисту или антагонисту согласно изобретению. Термин "лечение" или "лечить" относится к ослаблению симптома заболевания или расстройства и может включать исцеление от заболевания, по существу, предотвращение появления расстройства или улучшение состояния субъекта. Термин "лечение" в используемом в данном описании смысле относится к полному спектру лечения данного расстройства, от которого страдает пациент, включая ослабление одного симптома или большинства симптомов, возникающих в результате данного расстройства, лечение конкретного расстройства или профилактику появления расстройства. В используемом в данном описании смысле термин "ЕС 50" определяют как концентрацию средства, которая приводит к достижению 50% измеряемого биологического эффекта. Например, ЕС 50 для те-8 015657 рапевтического средства, оказывающего измеряемый биологический эффект, может представлять собой значение, при котором средство дает 50% биологический эффект. В используемом в данном описании смысле термин "IC50" определяют как концентрацию средства,которая приводит к 50% ингибированию измеряемого эффекта. Например, IC50 антагониста связыванияRAGE может представлять собой значение, при котором антагонист уменьшает связывание лиганда с участком связывания лиганда в RAGE на 50%. В используемом в данном описании смысле "эффективное количество" означает количество средства, которое эффективно для достижения требуемого эффекта у субъекта. Термин "терапевтически эффективное количество" означает такое количество лекарственного средства или фармацевтического средства, которое будет вызывать терапевтический ответ животного или человека, которого стремятся добиться. Реальная доза, которая содержит эффективное количество, может зависеть от пути введения, массы и состояния здоровья субъекта, расстройства, подвергаемого лечению, и тому подобного. Термин "фармацевтически приемлемый носитель" в используемом в данном описании смысле может относиться к соединениям и композициям, которые подходят для применения на человеке или животном, как, например, для терапевтических композиций, вводимых для лечения опосредованного RAGE расстройства или заболевания. Термин "фармацевтическая композиция" используют в данном описании для обозначения композиции, которую можно вводить хозяину-млекопитающему, например, перорально, парентерально, местно,с помощью спрея для ингаляции, интраназально или ректально, в виде стандартных лекарственных препаратов, содержащих обычные нетоксичные носители, разбавители, адъюванты, наполнители и тому подобное. Термин "парентеральный" в используемом в данном описании смысле включает способы подкожных инъекций, внутривенных, внутримышечных, интрацистернальных инъекций или инфузий. В используемом в данном описании смысле "отторжение" относится к иммунному или воспалительному ответу на ткань, который приводит к деструкции клеток, тканей или органов или который приводит к повреждению клеток тканей или органов. Отторгнутые клетки, ткани или орган могут происходить из организма того же субъекта, у которого установлен ответ в виде отторжения, или могут быть трансплантированы от другого субъекта субъекту, у которого установлен ответ в виде отторжения. В используемом в данном описании смысле термин "клетка" относится к структурным и функциональным единицам живой системы млекопитающего, каждая из которых представляет собой независимую биологическую систему. Как известно в данной области, клетки содержат ядро, цитоплазму, внутриклеточные органеллы и клеточную стенку, которая ограждает клетку и позволяет клетке быть независимой от других клеток. В используемом в данном описании смысле термин "ткань" относится к совокупности клеток, которые имеют сходную структуру и функцию или которые работают вместе, осуществляя конкретную функцию. Ткань может содержать совокупность сходных клеток и межклеточные вещества, окружающие клетки. Ткани включают без ограничения мышечную ткань, нервную ткань и кости. В используемом в данном описании смысле "орган" относится к полностью дифференцированной структурной и функциональной единице в организме животного, которая специализирована на выполнении определенной специфичной функции. Орган может содержать группу тканей, которые выполняют конкретную функцию или группу функций. Органы включают, без ограничения, сердце, легкие, головной мозг, глаз, желудок, селезенку, поджелудочную железу, почки, печень, кишечник, кожу, матку, мочевой пузырь и кость. Слитые белки RAGE Варианты осуществления настоящего изобретения включают слитые белки RAGE, способы получения таких слитых белков и способы применения таких слитых белков. Настоящее изобретение может быть осуществлено разными способами. Например, варианты осуществления настоящего изобретения относятся к слитым белкам RAGE,содержащим полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. В одном варианте слитый белок RAGE может содержать участок связывания лиганда RAGE. В одном варианте участок связывания лиганда составляет большую часть N-концевого домена слитого белкаRAGE. Участок связывания лиганда RAGE может содержать V-домен RAGE или его часть. В одном варианте участок связывания лиганда RAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 23-53 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 24-52 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 31-52 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 31-116 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 19-52 последовательности SEQ ID NO: 1.-9 015657 В одном варианте полипептид RAGE может быть связан с полипептидом, содержащим домен иммуноглобулина или часть (например, его фрагмент) домена иммуноглобулина. В одном варианте полипептид, содержащий домен иммуноглобулина, содержит по меньшей мере часть по меньшей мере одного из доменов Сн 2 или Сн 3 IgG человека. Белок или полипептид RAGE может содержать полноразмерный белок RAGE человека (например,SEQ ID NO: 1), или фрагмент RAGE человека. В используемом в данном описании смысле фрагмент полипептида RAGE в длину составляет по меньшей мере 5 аминокислот, может быть длиной более 30 аминокислот, но меньше, чем полная аминокислотная последовательность. В альтернативных вариантах белков, способов и композиций согласно настоящему изобретению полипептид RAGE может содержать последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98 или 99% идентичная RAGE человека или его фрагменту. Например, в одном варианте полипептид RAGE может содержать RAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например,Neeper et al., (1992. Или RAGE человека может содержать полноразмерный RAGE с удаленной сигнальной последовательностью (например, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3) (фиг. 1 А и 1 В) или часть такой аминокислотной последовательности. Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также могут содержать sRAGE (например,SEQ ID NO: 4), полипептид по меньшей мере на 90% идентичный sRAGE, или фрагмент sRAGE. В используемом в данном описании смысле sRAGE означает белок RAGE, который не содержит трансмембранной области или цитоплазматического хвоста (Park et al., Nature Med., 4: 1025-1031 (1998. Например, полипептид RAGE может содержать sRAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например, Neeper et al., (1992. Или полипептид RAGE может содержать sRAGE человек с удаленной сигнальной последовательностью (см., например, SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6 на фиг. 1 С или SEQ ID NO: 45 на фиг. 16 А) или часть такой аминокислотной последовательности. В других вариантах белок RAGE может содержать V-домен RAGE (см., например, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8 на фиг. 1D (Neeper et al., (1992); Schmidt et al. (1997) или SEQ ID NO: 46 на фиг. 16 А). Или можно использовать последовательность по меньшей мере на 90% идентичную V-домену RAGE или его фрагменту. Или белок RAGE может содержать фрагмент V-домена RAGE (например, SEQ ID NO: 9 или SEQ IDNO: 10 на фиг. ID или SEQ ID NO: 47 на фиг. 16 А). В одном варианте белок RAGE может содержать участок связывания лиганда. В одном варианте участок связывания лиганда может содержать последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В еще одном варианте фрагмент RAGE является синтетическим пептидом. Таким образом, полипептид RAGE, используемый в слитых белках RAGE согласно настоящему изобретению, может содержать фрагмент полноразмерного RAGE. Как известно в данной области,RAGE содержит три подобных иммуноглобулину полипептидных домена, V-домен и домены С 1 и С 2,связанные друг с другом междоменным линкером. Полноразмерный RAGE также содержит трансмембранный полипептид и цитоплазматический хвост ниже (С-концевой) домена С 2 и связанные с доменом С 2. В одном варианте полипептид RAGE не содержит никаких остатков сигнальной последовательности. Сигнальная последовательность RAGE может содержать либо остатки 1-22, либо остатки 1-23 полноразмерного RAGE. Кроме того, как известно в данной области, в тех вариантах, в которых на N-конце слитого белка находится глутамин (например, сигнальная последовательность содержит остатки 1-23),N-концевой глутамин (Q24) может подвергаться циклизации сообразованием пироглутаминовой кислоты(рЕ). Примеры конструкций таких молекул показаны в виде последовательностей SEQ ID NO: 45, 46, 47,48, 49, 50 и 51, а также слитые белки RAGE показаны в виде последовательностей 56 и 57. Как известно в данной области, в область Сн 3 слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению может быть отщеплена С-концевая аминокислота посредством посттрансляционной модификации при экспрессии в некоторых рекомбинантных системах. (См., например, Li, et al., BioProcessing J., 2005; 4, 23-30). В одном варианте отщепляемой С-концевой аминокислотой является лизин (K). Таким образом, в различных вариантах полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-116RAGE человека (SEQ ID NO: 7) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-116 RAGE человека (SEQ ID NO: 8) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-116 RAGE человека, где Q24 циклизуется с образованием рЕ(SEQ ID NO: 46) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующуюV-домену RAGE. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 124-221 RAGE человека (SEQID NO: 11) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующие домену С 1 RAGE. В другом варианте полипептид RAGE может содержать аминокислоты 227-317 RAGE человека (SEQ ID NO: 12) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующие домену С 2 RAGE. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-123 RAGE человека (SEQID NO: 13) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-123RAGE человека (SEQ ID NO: 14) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену RAGE и расположенному ниже междоменному линкеру. Или полипептидRAGE может содержать аминокислоты 24-123 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ,(SEQ ID NO: 48) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%. Или полипептидRAGE может содержать аминокислоты 23-226 RAGE человека (SEQ ID NO: 17) или последовательность,идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-226 RAGE человека (SEQ ID NO: 18) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену, домену С 1 и междоменному линкеру, связывающему указанные два домена. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 24-226 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 50),или последовательность, идентичную им на 90%. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-339 RAGE человека (SEQ ID NO: 5) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или 24-339 RAGE человека (SEQ ID NO: 6) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую sRAGE (т.е. кодирующую домены V, С 1 и С 2 и междоменные линкеры) . Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 24-339 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ, (SEQ ID NO: 45) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%. Или можно использовать фрагменты каждой из указанных последовательностей. Слитый белок RAGE может включать в себя несколько типов пептидов, которые не получены изRAGE или его фрагмента. Второй полипептид слитого белка RAGE может содержать полипептид, полученный из иммуноглобулина. В одном варианте полипептид иммуноглобулина может содержать тяжелую цепь иммуноглобулина или ее часть (т.е. фрагмент). Например, фрагмент тяжелой цепи может содержать полипептид, полученный из Fc-фрагмента иммуноглобулина, при этом Fc-фрагмент содержит шарнирный полипептид тяжелой цепи и домены Сн 2 и Сн 3 тяжелой цепи иммуноглобулина в качестве мономера. Тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого известного изотипа тяжелой цепи: IgG (у), IgM, IgD , IgEили IgA . Кроме того, тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого известного подтипа тяжелой цепи: IgG1 (1)/ IgG2 (2), IgG3 (3), IgG4 (4), IgA1(1), IgA2 (2) или мутаций таких изотипов или подтипов, которые изменяют биологическую активность. Второй полипептид может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или части любого или обоих указанных доменов. В качестве иллюстративных вариантов полипептид, содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или их части, может содержать последовательность SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40. Пептид иммуноглобулина может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ IDNO: 39 или SEQ ID NO: 41. Последовательность иммуноглобулина в SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40 также может кодироваться последовательностями SEQ ID NO: 52 или SEQ ID NO: 53, в которых молчащие изменения оснований для кодонов, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин (GGT наGGG) на С-конце последовательности, удаляют криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона.Fc-часть цепи иммуноглобулина может быть провоспалительной in vivo. Таким образом, в одном варианте слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению содержит междоменный линкер, полученный из RAGE, а не из междоменного шарнирного полипептида, полученного из иммуноглобулина. Таким образом, в одном варианте слитый белок RAGE может содержать полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или фрагмент или часть домена Сн 2 иммуноглобулина. В одном варианте домен Сн 2 или его фрагмент содержит последовательность SEQ ID NO: 42. В одном варианте фрагмент последовательности SEQ ID NO: 42 содержит последовательность SEQ ID NO: 42 с удаленными первыми десятью аминокислотами. В одном варианте полипептид RAGE может содержать участок связывания лиганда. Участок связывания лиганда RAGE может содержать V-домен RAGE или его часть. В одном варианте участок связывания лиганда RAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90% или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. Полипептид RAGE, используемый в слитых белках RAGE согласно настоящему изобретению, может содержать иммуноглобулиновый домен RAGE. Дополнительно или альтернативно, фрагмент RAGE может содержать междоменный линкер. Или полипептид RAGE может содержать иммуноглобулиновый домен RAGE, связанный с расположенным выше (т.е. ближе к N-концу) или расположенным ниже (т.е. ближе к С-концу) междоменным линкером. В еще одном варианте полипептид RAGE может содержать два (или более) иммуноглобулиновых домена RAGE, связанных друг с другом междоменным линкером. Полипептид RAGE может дополнительно содержать множество иммуноглобулиновых доменов RAGE,связанных друг с другом одним или несколькими междоменными линкерами и имеющих концевой междоменный линкер, связанный с N-концевым иммуноглобулиновым доменом RAGE и/или С-концевым иммуноглобулиновым доменом. Дополнительные комбинации иммуноглобулиновых доменов RAGE и междоменных линкеров входят в объем настоящего изобретения.- 11015657 В одном варианте полипептид RAGE содержит междоменный линкер RAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, так что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового домена RAGE связана с N-концевой аминокислотой междоменного линкера, а С-концевая аминокислота междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его фрагмент. Полипептид, содержащий домен Сн 2 иммуноглобулина, может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или часть любого одного или обоих доменов. В качестве иллюстративного варианта полипептид, содержащий домены Сн 2 и Сн 3 или их часть IgG1 человека, может содержать последовательность SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40. Как описано выше, слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению может содержать один или несколько доменов из RAGE. Также полипептид RAGE, содержащий междоменный линкер, связанный с доменом полипептида RAGE, может содержать фрагмент полноразмерного белка RAGE. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-136 RAGE человека (SEQ ID NO: 15) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека(SEQ ID NO: 16) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 49), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену RAGE и расположенному ниже междоменному линкеру. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-251 RAGE человека (SEQ ID NO: 19) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека (SEQ ID NO: 20) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ IDNO: 51), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену,домену С 1, междоменному линкеру, связывающему указанные два домена, и второму междоменному линкеру, расположенному ниже С 1. Например, в одном варианте слитый белок RAGE может содержать два иммуноглобулиновых домена, полученных из белка RAGE, и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Слитый белок RAGE может содержать первый иммуноглобулиновый домен RAGE и первый междоменный линкер RAGE, связанные со вторым иммуноглобулиновым доменом RAGE и вторым междоменным линкером RAGE, так, что N-концевая аминокислота первого междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой первого иммуноглобулинового домена RAGE, N-концевая аминокислота второго иммуноглобулинового домена RAGE связана с С-концевой аминокислотой первого междоменного линкера, N-концевая аминокислота второго междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой второго иммуноглобулинового домена RAGE, и С-концевая аминокислота второго междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой иммуноглобулинового домена Сн 2. В одном варианте состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE может содержать последовательность SEQ ID NO: 32. В альтернативных вариантах состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 или SEQ ID NO: 56. Альтернативно, состоящий из трех доменов слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулиновый домен, полученный из RAGE и два иммуноглобулиновых домена, полученных из Fcполипептида человека. Например, слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулин доменRAGE, связанный посредством междоменного линкера RAGE с N-концевой аминокислотой иммуноглобулинового домена Сн 2 или частью иммуноглобулинового домена Сн 2. В одном варианте состоящий из трех доменов слитый белок RAGE может содержать последовательность SEQ ID NO: 35. В альтернативных вариантах состоящий из трех доменов слитый белок RAGE может содержать последовательностьSEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 57. Фрагмент междоменного линкера RAGE может содержать пептидную последовательность, которая в природе располагается ниже и, следовательно, связана с иммуноглобулиновым доменом RAGE. Например, в случае V-домена RAGE междоменный линкер может содержать аминокислотные последовательности, которые в природе располагаются ниже V-домена. В одном варианте линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 21, соответствующую аминокислотам 117-123 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имеющий дополнительные части природной последовательностиRAGE. Например, можно использовать междоменный линкер, содержащий несколько аминокислот (например, 1-3, 1-5 или 1-10, или 1-15 аминокислот) выше и ниже последовательности SEQ ID NO: 21. Таким образом, в одном варианте междоменный линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 23,включающую в себя аминокислоты 117-136 полноразмерного RAGE. Или можно использовать фрагменты последовательности SEQ ID NO: 21, в которых делетированы, например, 1, 2 или 3 аминокислоты с любого конца линкера. В альтернативных вариантах линкер может содержать пептид, который по меньшей мере на 70% идентичен, на 75% идентичен, на 80% идентичен, на 85% идентичен, на 90% идентичен, на 95% идентичен, на 97% идентичен, на 98% идентичен или на 99% идентичен последовательностиSEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 23. В случае домена C1 RAGE линкер может содержать пептидную последовательность, которая в природе находится ниже домена С 1. В одном варианте линкер может содержать SEQ ID NO: 22, соответствующую аминокислотам 222-251 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имею- 12015657 щий дополнительные части природной последовательности RAGE. Например, можно использовать линкер, содержащий несколько (1-3, 1-5 или 1-10 или 1-15 аминокислот) аминокислот выше и ниже последовательности SEQ ID NO: 22. Или можно использовать фрагменты последовательности SEQ ID NO: 22,в которых делетированы, например, 1-3, 1-5 или 1-10, или 1-15 аминокислот с любого конца линкера. Например, в одном варианте междоменный линкер RAGE может содержать последовательность SEQ IDNO: 24, соответствующую аминокислотам 222-226, или междоменный линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 44, соответствующую аминокислотам 318-342 RAGE. Кроме того, специалисту будет понятно, что отдельные замены, делеции или добавления, которые изменяют, добавляют или делетируют одну аминокислоту или небольшой процент аминокислот (обычно примерно менее 5%, более обычно примерно менее 1%) в кодируемой последовательности, представляют собой консервативно модифицированные варианты, в которых изменения приводят к замене аминокислоты химически сходной аминокислотой. Таблицы консервативных замен, в которых представлены функционально сходные аминокислоты, хорошо известны в данной области. Далее приведены примеры групп, каждая из которых содержит аминокислоты, которые являются друг для друга консервативными заменами: 1) аланин (А), серин (S), треонин (Т); 2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е); 3) аспарагин (N), глутамин (Q); 4) аргинин (R), лизин (К); 5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); и 6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W). Консервативной заменой является замена, при которой заменяющая аминокислота (встречающаяся в природе или модифицированная) является структурно родственной аминокислоте, которую она заменяет, т.к. имеет примерно такой же размер и электронные свойства как и аминокислота, которая заменяется. Таким образом, заменяющая аминокислота может иметь такую же или сходную функциональную группу в боковой цепи, как и исходная аминокислота. Термин "консервативная замена" также относится к использованию заменяющей аминокислоты, которая идентична заменяемой аминокислоте за исключением того, что функциональная группа в боковой цепи защищена подходящей защитной группой. Как известно в данной области, аминокислоты могут стать химически модифицированными по сравнению с их природной структурой посредством механизмов либо ферментативных, либо неферментативных реакций. Например, в одном варианте N-концевая глутаминовая кислота или глутамин могут подвергаться циклизации с потерей воды с образованием пироглутаминовой кислоты (pyroE или рЕ)(1976. Кроме того, слитый белок RAGE с последовательностью SEQ ID NO: 56 потенциально можно получить через последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую глутаминовую кислоту в положении остатка 24, а не глутамин в положении остатка 24 (на основе нумерации полноразмерного RAGE). Способы получения слитых белков RAGE Настоящее изобретение также относится к способу получения слитого белка RAGE. Таким образом,в одном варианте настоящее изобретение относится к способу получения слитого белка RAGE, включающему в себя стадию ковалентного связывания полипептида RAGE, связанного со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE, в котором полипептид RAGE содержит участок связывания лиганда RAGE. Например, связанный полипептид RAGE и второй полипептид, отличный от RAGE, могут кодироваться рекомбинантной конструкцией ДНК. Способ может дополнительно включать в себя стадию введения конструкции ДНК в экспрессирующий вектор. Также способ может включать в себя стадию встраивания зкспрессирующего вектора в клетку-хозяина. Например, варианты согласно настоящему изобретению относятся к слитым белкам RAGE, содержащий полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от RAGE. В одном варианте слитый белок RAGE может содержать участок связывания лиганда RAGE. В одном варианте участок связывания лиганда содержит большую часть N-концевого домена слитого белка RAGE. Участок связывания лиганда RAGE может содержать V-домен RAGE или его часть. В одном варианте участок связывания лиганда RAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В одном варианте полипептид RAGE может быть связан с полипептидом, содержащим иммуноглобулиновый домен или часть (например, его фрагмент) иммуноглобулинового домена. В одном варианте полипептид, содержащий иммуноглобулиновый домен, содержит по меньшей мере часть по меньшей мере одного из доменов Сн 2 или Сн 3 IgG человека. Слитый белок RAGE может быть сконструирован с использованием методики рекомбинантной ДНК. Например, в одном варианте настоящее изобретение относится к изолированной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей, комплементарной или имеющей существенную идентичность с полинуклеотидной последовательностью, которая кодирует полипептид RAGE, связанный со вторым- 13015657 полипептидом, отличным от RAGE. В одном варианте полипептид RAGE может содержать участок связывания лиганда RAGE. Белок или полипептид RAGE может содержать полноразмерный RAGE человека (например, SEQID NO: 1), или фрагмент RAGE человека. В одном варианте полипептид RAGE не содержит никаких остатков сигнальной последовательности. Сигнальная последовательность RAGE может содержать либо остатки 1-22, либо остатки 1-23 полноразмерного RAGE (SEQ ID NO: 1). В альтернативных вариантах полипептид RAGE может содержать последовательность, которая по меньшей мере на 70, 75, 80, 85, 90,95, 97, 98 или 99% идентична RAGE человека, или ее фрагмент. Например, в одном варианте полипептидRAGE может содержать RAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например, Neeper et al., (1992. Или RAGE человека может содержать полноразмерныйRAGE с удаленной сигнальной последовательностью (например, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3) (фиг. 1 А и 1 В) или часть такой аминокислотной последовательности. Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также могут содержать sRAGE (например, SEQ ID NO: 4), полипептид по меньшей мере на 90% идентичный sRAGE, или фрагмент sRAGE. Например, полипептид RAGE может содержатьsRAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например, Neeper et al., (1992. Или RAGE человека может содержать sRAGE с удаленной сигнальной последовательностью (см., например, SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6 на фиг. 1 С или SEQ ID NO: 45 на фиг. 16 А) или часть такой аминокислотной последовательности. В других вариантах белок RAGE может содержать V-домен (см., например, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8 на фиг. ID или SEQ ID NO: 46 на фиг. 16 А). Или можно использовать последовательность по меньшей мере на 90% идентичную V-домену, или его фрагмент. Или белок RAGE может содержать фрагмент RAGE, содержащий часть V-домена (см.,например, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 на фиг. ID или SEQ ID NO: 47 на фиг. 16 А). В одном варианте участок связывания лиганда может содержать последовательность SEQ ID NO: 9, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В еще одном варианте фрагмент RAGE представляет собой синтетический пептид. В одном варианте последовательность нуклеиновой кислоты содержит последовательность SEQ IDNO: 25, кодирующую аминокислоты 1-118 RAGE человека или его фрагмент. Например, можно использовать последовательность, содержащую нуклеотиды 1-348 SEQ ID NO: 25 для кодирования аминокислот 1-116 RAGE человека. Или нуклеиновая кислота может содержать последовательность SEQ ID NO: 26, кодирующую аминокислоты 1-123 RAGE человека. Или нуклеиновая кислота может содержать последовательность SEQ ID NO: 27, кодирующую аминокислоты 1-136 RAGE человека. Или нуклеиновая кислота может содержать SEQ ID NO: 28, кодирующую аминокислоты 1-230 RAGE человека. Или нуклеиновая кислота может содержать последовательность SEQ ID NO: 29, кодирующую аминокислоты 1251 RAGE человека, или можно использовать фрагменты таких последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующие фрагменты полипептида RAGE. Слитый белок RAGE может включать в себя несколько типов пептидов, которые получены не изRAGE или его фрагмента. Второй полипептид слитого белка RAGE может содержать полипептид, полученный из иммуноглобулина. Тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого из известных изотипов тяжелых цепей: IgG , IgM, IgD , IgEили IgA . Кроме того, тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого из известных подтипов тяжелых цепей: IgG1 (1), IgG2 (2), IgG3(3), IgG4 (4), IgA1 (1), IgA2 (2), или мутаций указанных изотипов или подтипов, которые изменяют биологическую активность. Второй полипептид может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или часть любого одного или обоих указанных доменов. В качестве иллюстративных вариантов полипептид,содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или их часть, может содержать последовательность SEQ IDNO: 38 или SEQ ID NO: 40. Пептид иммуноглобулина может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 39 или SEQ ID NO: 41. В альтернативных вариантах последовательность иммуноглобулина в SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40 также может кодироваться последовательностямиFc-часть цепи иммуноглобулина может быть провоспалительной in vivo. Таким образом, слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению содержит междоменный линкер, полученный из RAGE,а не из междоменного шарнирного полипептида, полученного из иммуноглобулина. Например, в одном варианте слитый белок RAGE может кодироваться рекомбинантной конструкцией ДНК. Также способ может включать в себя стадию встраивания конструкции ДНК в экспрессирующий вектор. Также способ может включать в себя трансфекцию экспрессирующего вектора в клетку-хозяина. Таким образом, в одном варианте настоящее изобретение относится к способу получения слитого белка RAGE, включающему в себя стадию ковалентного связывания полипептид RAGE с полипептидом,содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или часть домена Сн 2 иммуноглобулина. В одном варианте слитый белок RAGE может содержать участок связывания лиганда RAGE. Участок связывания лигандаRAGE может содержать V-домен RAGE или его часть. В одном варианте участок связывания лигандаRAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 9, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47, или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. Например, в одном варианте настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина, или его фрагмент. В одном варианте домен Сн 2 или его фрагмент содержит последовательность SEQ ID NO: 42. В одном варианте фрагмент последовательности SEQ ID NO: 42 содержит последовательность SEQ ID NO: 42, в которой удалены первые десять аминокислот. Второй полипептид может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека. В качестве иллюстративного варианта полипептид, содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека, может содержать последовательность SEQ ID NO: 38 илиSEQ ID NO: 40. Пептид иммуноглобулина может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 39 или SEQ ID NO: 41. Последовательность иммуноглобулина в SEQ ID NO: 38 илиSEQ ID NO: 40 также может кодироваться последовательностями SEQ ID NO: 52 или SEQ ID NO: 53, в которых молчащие изменения оснований для кодонов, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин (GGT на GGG) на С-конце последовательности удаляют криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона. В одном варианте полипептид RAGE может содержать междоменный линкер RAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, так, что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового доменаRAGE связана с N-концевой аминокислотой междоменного линкера, а С-концевая аминокислота междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его фрагмент. Полипептид, содержащий домен Сн 2 иммуноглобулина или его часть, может содержать полипептид, включающий в себя домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или часть обоих или любого из указанных доменов. В качестве иллюстративного варианта полипептид,содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или их часть, может содержать последовательности SEQID NO: 38 или SEQ ID NO: 40. Слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению может содержать один или несколько доменов из RAGE. Также полипептид RAGE, содержащий междоменный линкер, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, может содержать фрагмент полноразмерного белка RAGE. Например, в одном варианте слитый белок RAGE может содержать два иммуноглобулиновых домена, полученных из белка RAGE и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Слитый белокRAGE может содержать первый иммуноглобулиновый домен RAGE и первый междоменный линкер,связанные со вторым иммуноглобулиновым доменом RAGE и вторым междоменным линкером RAGE,так, что N-концевая аминокислота первого междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой первого иммуноглобулинового домена RAGE, N-концевая аминокислота второго иммуноглобулинового домена RAGE связана с С-концевой аминокислотой первого междоменного линкера, N-концевая аминокислота второго междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой второго иммуноглобулинового домена RAGE, и С-концевая аминокислота второго междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его фрагмент. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-251 RAGE человека(SEQ ID NO: 19) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека (SEQ ID NO: 20) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 51),или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену, домену С 1, междоменному линкеру, связывающему указанные два домена, и второму междоменному линкеру ниже С 1. В одном варианте, конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ IDNO: 30 или ее фрагмент, может кодировать слитый белок RAGE, стоящий из четырех доменов. В другом варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 54, может кодировать слитый белок RAGE, состоящий из четырех доменов, в который вводят молчащие изменения оснований в кодонах, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин (GGT на GGG) на С-конце последовательности, чтобы удалить криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона. Альтернативно, состоящий из трех доменов слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулиновый домен, полученный из RAGE, и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Например, слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулиновый домен RAGE, связанный посредством междоменного линкера RAGE с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего иммуноглобулиновый домен Сн 2 или его фрагмент. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-136 RAGE человека (SEQ ID NO: 15) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека (SEQ ID NO: 16) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 49), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену RAGE и расположенному ниже междоменному линкеру. В одном варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO:- 15015657 31 или ее фрагмент, может кодировать состоящий из трех доменов слитый белок RAGE. В другом варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 55, может кодировать состоящий из трех доменов слитый белок RAGE, в котором молчащие изменения оснований в кодонах, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин (GGT на GGG) на С-конце последовательности удаляют криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона. Фрагмент междоменного линкера RAGE может содержать пептидную последовательность, которая в природе расположена ниже и, следовательно, связана с иммуноглобулиновым доменом RAGE. Например, в случае V-домена RAGE междоменный линкер может содержать аминокислотные последовательности, которые в природе располагаются ниже V-домена. В одном варианте линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 21, соответствующую аминокислотам 117-123 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имеющий дополнительные части природной последовательностиRAGE. Например, можно использовать междоменный линкер, содержащий несколько аминокислот (например, 1-3, 1-5 или 1-10, или 1-15 аминокислот) выше и ниже последовательности SEQ ID NO: 21. Таким образом, в одном варианте междоменный линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 23,включающую в себя аминокислоты 117-136 полноразмерного RAGE. Или можно использовать фрагменты последовательности SEQ ID NO: 21, в которых делетированы, например, 1, 2 или 3 аминокислоты с любого конца линкера. В альтернативных вариантах линкер может содержать последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична или на 80% идентична, или на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 23. В случае домена C1 RAGE линкер может содержать пептидную последовательность, которая в природе находится ниже домена С 1. В одном варианте линкер может содержать SEQ ID NO: 22, соответствующую аминокислотам 222-251 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имеющий дополнительные части природной последовательности RAGE. Например, можно использовать линкер, содержащий несколько (1-3, 1-5 или 1-10 или 1-15 аминокислот) аминокислот выше и ниже последовательности SEQ ID NO: 22. Или можно использовать фрагменты последовательности SEQ ID NO: 22,в которых делетированы, например, 1-3, 1-5 или 1-10, или 1-15 аминокислот с любого конца линкера. Например, в одном варианте междоменный линкер RAGE может содержать последовательность SEQ IDNO: 24, соответствующую аминокислотам 222-226. Или междоменный линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 44, соответствующую аминокислотам 318-342 RAGE. Способ может дополнительно включать в себя стадию встраивания конструкции ДНК в экспрессирующий вектор. Таким образом, в одном варианте настоящее изобретение относится к экспрессирующему вектору, который кодирует слитый белок RAGE, содержащий полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или часть домена Сн 2 иммуноглобулина. В одном варианте полипептид RAGE содержит конструкции, такие как конструкции, описанные в данной публикации, имеющие междоменный линкер RAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, так, что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового домена RAGE связана с Nконцевой аминокислотой междоменного линкера, а С-концевая аминокислота междоменного линкераRAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его часть. Например, экспрессирующий вектор, используемый для трансфекции клеток, может содержать последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 30 или ее фрагмент, SEQ IDNO: 54 или ее фрагмент, SEQ ID NO: 31 или ее фрагмент или SEQ ID NO: 55 или ее фрагмент. Способ может дополнительно включать в себя стадию трансфекции клетки экспрессирующим вектором согласно настоящему изобретению. Таким образом, в одном варианте настоящее изобретение относится к клетке, трансфицированной экспрессирующим вектором, который экспрессирует слитый белокRAGE согласно настоящему изобретению, так, что клетка экспрессирует слитый белок RAGE, содержащий полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или часть домена Сн 2 иммуноглобулина. В одном варианте полипептид RAGE содержит конструкции, такие как конструкции, описанные в данной публикации, имеющие междоменный линкерRAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, так, что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового домена RAGE связана с N-концевой аминокислотой междоменного линкера, а С-концевая аминокислота междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его часть. Например, экспрессирующий вектор может содержать последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 30 или ее фрагмент, SEQ IDNO: 54 или ее фрагмент, SEQ ID NO: 31 или ее фрагмент или SEQ ID NO: 55 или ее фрагмент. Например, могут быть сконструированы плазмиды для экспрессии слитых белков RAGE-IgG посредством слияния имеющих разную длину 5'-последовательности кДНК RAGE с 3'-последовательность кДНК IgG1 (1) человека. Последовательности кассеты экспрессии могут быть встроены в такой экспрессирующий вектор, как pcDNA3.1 (Invitrogen, CA) с использованием стандартных способов рекомбинации. Также способ может включать в себя трансфекцию экспрессирующего вектора в клетку-хозяина. Слитые белки RAGE могут быть экспрессированы в системах экспрессии млекопитающих, включая системы, в которых экспрессирующие конструкции вводят в клетки млекопитающих с использованием ви- 16015657 руса, такого как ретровирус или аденовирус. Линии клеток млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают многие линии иммортализованных клеток, доступных из Американской коллекции типов культур (АТСС). Такие линии наряду с прочим включают клетки яичника китайского хомячка (СНО) , клетки NSO, SP2, клетки HeLa, клетки почек сирийского хомячка (ВНК), клетки почки обезьяны (COS), клетки гепатоклеточной карциномы человека (например, Hep G2), клетки А 549 и ряд других линий клеток. Линии клеток могут быть выбраны на основании определения того, какие линии клеток имеют высокие уровни экспрессии слитого белка RAGE. Другие линии клеток, которые могут быть использованы, включают линии клеток насекомых, таких как клетки Sf9. Растительные клетки-хозяева включают, например, клетки Nicotiana, Arabidopsis, ряски, кукурузы, пшеницы, картофеля и т.д. Бактериальные клетки-хозяева включают клетки Е. coli и Streptomyces species. Дрожжевые клетки-хозяева включают Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae иPichia pastoris. Когда рекомбинантные экспрессирующие векторы, кодирующие гены слитого белкаRAGE, вводят в клетки-хозяева млекопитающих, слитые белки RAGE продуцируются при культивировании клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для обеспечения экспрессии слитого белка RAGE в клетках-хозяевах или секреции слитого белка RAGE в культуральную среду, в которой выращивают клетки-хозяева. Слитые белки RAGE могут быть извлечены из культуральной среды с использованием стандартных способов очистки белка. Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие слитые белки RAGE, и экспрессирующие векторы,содержащие такие молекулы нуклеиновых кислот, могут быть использованы для трансфекции подходящей клетки млекопитающего, растения, бактерии или дрожжей. Трансформацию можно осуществлять любым известным способом введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области и включают опосредованную декстраном трансфекцию, преципитацию фосфатом кальция, опосредованную полибреном трансфекцию, слияние протопластов, электропорацию, инкапсулирование полинуклеотида(ов) в липосомы и прямую микроинъекцию ДНК в ядра. Кроме того, молекулы нуклеиновой кислоты могут быть введены в клетки млекопитающих с помощью вирусных векторов. Способы трансфекции растительных клеток хорошо известны в данной области, включая, например, опосредованную Agrobacterium трансформацию, биолистическую трансформацию, прямую инъекцию, электропорацию и вирусную трансформацию. Способы трансформации бактериальных и дрожжевых клеток также хорошо известны в данной области. Экспрессирующий вектор также может быть доставлен в систему экспрессии с использованием биолистических способов доставки ДНК, при этом плазмиду осаждают на микроскопических частицах,предпочтительно золота, и частицы перемещают в клетку-мишень или систему экспрессии. Способы биолистики ДНК хорошо известны в данной области, и устройства, например, "генная пушка", коммерчески доступны для доставки микрочастиц в клетку (например, Helios Gene Gun, Bio-Rad Labs., Hercules,CA) и в кожу (PMED Device, PowderMed Ltd., Oxford, UK). Экспрессия Слитых белков RAGE в линиях клеток-продуцентов может быть усилена с использованием ряда известных способов. Например, система экспрессии гена глутаминсинтетазы (система GS) и система кодируемой цитоплазмой резистентности к неомицину являются распространенными способами усиления экспрессии при определенных условиях. Слитые белки RAGE, экспрессированные разными линиями клеток, могут иметь разный характер гликозилирования. Однако все слитые белки RAGE, кодируемые молекулами нуклеиновой кислоты,предлагаемыми в настоящем изобретении, или содержащие аминокислотные последовательности, предлагаемые в изобретении, являются частью настоящего изобретения, независимо от гликозилирования слитого белка RAGE. В одном варианте рекомбинантный экспрессирующий вектор может быть трансфицирован в клетки яичника китайского хомячка (СНО), и экспрессия может быть оптимизирована. В альтернативных вариантах клетки могут продуцировать от 0,1 до 20 г/л или от 0,5 до 10 г/л, или примерно 1-2 г/л. Как известно в данной области, такие конструкции нуклеиновых кислот могут быть модифицированы мутацией, например, ПЦР-амплификацией матрицы нуклеиновой кислоты с праймерами, содержащими представляющую интерес мутацию. Таким образом могут быть сконструированы полипептиды,имеющие разную аффинность по отношению к лигандам RAGE. В одном варианте мутантные последовательности могут быть на 90% или более идентичны исходной ДНК. Как таковые варианты могут включать нуклеотидные последовательности, которые гибридизуются в жестких условиях (т.е. условиях,эквивалентных температуре примерно на 20-27 С ниже температуры плавления (ТМ) дуплекса ДНК в 1 молярной соли). Кодирующая последовательность может быть экспрессирована в результате трансфекции экспрессирующего вектора в подходящего хозяина. Например, рекомбинантные векторы могут быть стабильно трансфицированы в клетки яичника китайского хомячка (СНО), и клетки, экспрессирующие слитый белок RAGE, могут быть отобраны и клонированы. В одном варианте клетки, экспрессирующие рекомбинантную конструкцию, отбирают в отношении кодируемой плазмидой резистентности к неомицину при внесении антибиотика G418. Отдельные клоны могут быть отобраны, и клоны, экспрессирующие высокие уровни рекомбинантного белка, которые выявляют при Вестерн-блот-анализе надосадка клеток, мо- 17015657 гут быть размножены, а генный продукт очищен аффинной хроматографией с использованием колонок,содержащих белок А. Выбранные варианты рекомбинантных нуклеиновых кислот, которые кодируют слитые белкиRAGE согласно настоящему изобретению, показан на фиг. 2-5 и фиг. 17-20. Например, как описано выше, слитый белок RAGE, продуцируемый рекомбинантной конструкцией ДНК, может содержать полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. Слитый белокRAGE может содержать два домена, полученных из белка RAGE, и два домена, полученных из иммуноглобулина. Пример конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок RAGE, TTP-4000(ТТ 4), имеющий такой тип структуры, показан на фиг. 2 (SEQ ID NO: 30) и фиг. 17 (SEQ ID NO: 54). Как показано на фиг. 2 и фиг. 17, кодирующая последовательность 1-753 (выделена жирным шрифтом) кодирует N-концевую последовательность белка RAGE, тогда как последовательность 754-1386 кодирует последовательность белка IgG. В случае получения из последовательности SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 54 или последовательности, идентичной им по меньшей мере на 90%, слитый белок RAGE может содержать состоящую из четырех доменов аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, или полипептид с удаленной сигнальной последовательностью (см., например, SEQ ID NO: 33 или SEQ ID NO: 34 на фиг. 4 или SEQID NO: 56 на фиг. 19.) На фиг. 4 и фиг. 19 аминокислотная последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. Последовательность иммуноглобулина представляет собой иммуноглобулиновые домены Сн 2 и Сн 3 IgG. Как показано на фиг. 6 В, первые 251 аминокислот полноразмерного слитого белка RAGE ТТР-4000 включают в себя в качестве последовательности полипептида RAGE сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-22/23, иммуноглобулиновый V-домен (включая участок связывания лиганда), содержащий аминокислоты 23/24-116, междоменный линкер, содержащий аминокислоты 117-123, второй иммуноглобулиновый домен (С 1), содержащий аминокислоты 124-221, и расположенный ниже междоменный линкер, содержащий аминокислоты 222-251. В одном варианте слитый белок RAGE необязательно может содержать второй иммуноглобулиновый домен RAGE. Например, слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулиновый домен,полученный из RAGE, и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Пример конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей такой тип слитого белка RAGE, показан на фиг. 3 (SEQ ID NO: 31) и на фиг. 18 (SEQ ID NO: 55). Как показано на фиг. 3 и фиг. 18, кодирующая последовательность от нуклеотида 1 до 408 (выделена жирным шрифтом) кодирует N-концевую последовательность белка RAGE, тогда как последовательность 409-1041 кодирует последовательность белка IgG1(1). В случае получения из последовательности SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 55 или последовательности, идентичной им по меньшей мере на 90%, слитый белок RAGE может содержать состоящую из трех доменов аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, или полипептид с удаленной сигнальной последовательностью (см., например, SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 37 на фиг. 5 или SEQ IDNO: 57 на фиг. 20). На фиг. 5 и фиг. 20, аминокислотная последовательность RAGE выделена жирным шрифтом. Как показано на фиг. 6 В, первые 136 аминокислот полноразмерного слитого белка RAGE TTP3000 содержат в качестве полипептида RAGE сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-22/23, иммуноглобулиновый V-домен (включая участок связывания лиганда), содержащий аминокислоты 23/24-116, и междоменный линкер, содержащий аминокислоты 117-136. Последовательность 137-346 включает иммуноглобулиновые домены Сн 2 и Сн 3 IgG. Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут иметь повышенную стабильность invivo по сравнению с полипептидами RAGE, не содержащими второго полипептида. Слитый белок RAGE может быть дополнительно модифицирован, чтобы повысить стабильность, эффективность, активность и биодоступность. Таким образом, слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут быть модифицированы в результате посттрансляционного процессинга или посредством химической модификации. Например, слитый белок RAGE может быть получен в результате синтеза так, чтобы он содержалL-, D- или неприродные аминокислоты, альфа-дизамещенные аминокислоты или N-алкиламинокислоты. Кроме того, белки могут быть модифицированы ацетилированием, ацилированием, АДФ- рибозилированием, амидированием, связыванием липидов, таких как фосфатидилинозитол, образованием дисульфидных связей и тому подобным. Кроме того, может быть добавлен полиэтиленгликоль, чтобы повысить биологическую стабильность слитого белка RAGE. Связывание антагонистов RAGE со слитыми белками RAGE Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут иметь ряд применений. Например,слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению можно использовать в анализе связывания для идентификации лигандов RAGE, таких как агонисты, антагонисты или модуляторы RAGE. Например, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предлагается способ выявления модуляторов RAGE, включающий в себя: (а) получение слитого белка RAGE, содержащего полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от RAGE, при этом полипептид RAGE содержит участок связывания лиганда; (b) смешивание представляющего интерес соединения и лиганда,имеющего известную аффинность связывания по отношению к RAGE, со слитым белком RAGE; и (с)- 18015657 измерение связывания известного лиганда RAGE со слитым белком RAGE в присутствии представляющего интерес соединения. В одном варианте участок связывания лиганда включает в себя большую частьN-концевого домена слитого белка RAGE. Слитые белки RAGE также могут быть предложены в виде наборов для выявления модуляторовRAGE. Например, в одном варианте набор согласно настоящему изобретению может содержать (а) соединение, имеющее известную аффинность связывания с RAGE, в качестве позитивного контроля; (b) слитый белок RAGE, содержащий полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным отRAGE, при этом полипептид RAGE содержит участок связывания лиганда RAGE; и (с) инструкции по применению. В одном варианте участок связывания лиганда включает в себя большую часть Nконцевого домена слитого белка RAGE. Например, слитый белок RAGE можно использовать в анализе связывания, чтобы идентифицировать возможные RAGE лиганды. В одном иллюстративном варианте такого анализа связывания, известным лигандом RAGE покрывают твердую подложку (например, планшеты Maxisorb) в концентрации примерно 5 мкг на лунку, при этом каждая лунка содержит общий объем примерно 100 мкл. Планшеты можно инкубировать при 4 С в течение ночи, чтобы обеспечить возможность для абсорбции лиганда. Альтернативно, можно использовать более короткие периоды инкубации при более высокой температуре(например, при комнатной температуре). После определенного периода времени, позволяющего лиганду связаться с подложкой из анализируемых лунок можно аспирировать жидкость и добавить блокирующий буфер (например, 1% БСА в 50 мМ имидазольном буфере, рН 7,2), чтобы блокировать неспецифичное связывание. Например, блокирующий буфер может быть добавлен в планшеты на 1 ч при комнатной температуре. Затем из планшетов можно удалить жидкость и/или промыть буфером для промывки. В одном варианте в качестве буфера для промывки можно использовать буфер, содержащий 20 мМ имидазол, 150 мМ NaCl, 0,05% твин-20, 5 мМ CaCl2 и 5 мМ MgCl2, рН 7,2. Затем в анализируемые лунки можно добавить слитый белок RAGE в возрастающих разведениях. Затем обеспечивают возможность для инкубации слитого белка RAGE с иммобилизованным лигандом в анализируемой лунке, так чтобы связывание могло достичь равновесия. В одном варианте обеспечивают возможность для инкубации слитого белка RAGE с иммобилизованным лигандом примерно в течение одного часа при 37 С. В альтернативных вариантах можно использовать более длительные периоды инкубации при более низкой температуре. После инкубации слитого белка RAGE и иммобилизованного лиганда планшет можно промыть,чтобы удалить несвязанный слитый белок RAGE. Слитый белок RAGE, связанный с иммобилизованным лигандом, может быть выявлен разными способами. В одном варианте для выявления используютELISA. Таким образом, в одном варианте к слитому белку RAGE, иммобилизованному в анализируемой лунке может быть добавлен комплекс для иммунологического анализа, содержащий мышиное моноклональное антитело против IgGl, биотинилированное антитело козы против IgG мыши и связанную с авидином щелочную фосфатазу. Обеспечивают возможность связывания комплекса для иммунологического анализа с иммобилизованным слитым белком RAGE, так чтобы связывание между слитым белком RAGE и комплексом для иммунологического анализа достигло равновесия. Например, позволяют комплексу связываться со слитым белком RAGE в течение одного часа при комнатной температуре. В указанной точке не связавшийся комплекс можно удалить промывкой анализируемой лунки буфером для промывки. Связанный комплекс может быть выявлен при добавлении субстрата щелочной фосфатазы, паранитрофенилфосфата (PNPP) и измерении превращения PNPP в паранитрофенол (PNP) в виде увеличения оптической плотности при 405 нм. В одном варианте лиганд RAGE лиганд связывается со слитым белком RAGE с наномолярной (нМ) или микромолярной (мкМ) аффинностью. Эксперимент, иллюстрирующий связывание лигандов RAGE со слитыми белками RAGE согласно настоящему изобретению, показан на фиг. 7. Готовили растворы ТТР-3000 (ТТ 3) и ТТР-4000 (ТТ 4), имеющие начальные концентрации 1,082 мг/мл и 370 мкг/мл соответственно. Как показано на фиг. 1, при разных разведениях слитые белки RAGE ТТР-3000 и ТТР-4000 способны связываться с иммобилизованными лигандами RAGE амилоидом-бета (Abeta) (амилоид бета (140) из Biosource), S100b (S100) и амфотерином (Ampho), что приводит к увеличению оптической плотности. В отсутствие лиганда (т.е. при покрывании только БСА) не наблюдалось увеличение оптической плотности. Анализ связывания согласно настоящему изобретению можно использовать для количественного анализа связывания лиганда с RAGE. В альтернативных вариантах лиганды RAGE могут связываться со слитым белком RAGE согласно настоящему изобретению с аффинностями связывания в диапазоне от 0,1 до 1000 наномолей (нМ) или от 1 до 500 нМ или от 10 до 80 нМ. Слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению также можно использовать для идентификации соединений, обладающих способностью связываться с RAGE. Как показано на фиг. 8 и 9, соответственно, лиганд RAGE можно анализировать в отношении его способности конкурировать с иммобилизованным амилоидом бета за связывание со слитыми белками RAGE ТТР-4000 (ТТ 4) или ТТР-3000(ТТ 3). Таким образом, можно видеть, что лиганд RAGE в конечной анализируемой концентрации (FAC) 10 мкМ может отстранять амилоид-бета от связывания со слитым белком RAGE в концентрациях, составляющих 1:3, 1:10, 1:30 и 1:100 от начальной концентрации раствора ТТР-4000 (фиг. 8) или ТТР-3000(фиг. 9). Модулирование клеточных эффекторов Варианты слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению можно использовать для модулирования биологического ответа, опосредованного RAGE. Например, могут быть сконструированы слитые белки RAGE для модулирования RAGE-индуцированных увеличений экспрессии генов. Таким образом, в одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно использовать для модулирования функции биологических ферментов. Например, взаимодействие между RAGE и его лигандами может приводить к окислительному стрессу и активацию NF-kB и регулируемых NF-kB генов,таких как гены цитокинов IL-1, TNF- и тому подобных. Кроме того, показано, что некоторые другие регуляторные пути, такие как пути, в которые вовлечены p21ras, МАР-киназы, ERK1 и ERK2, активируются при связывании AGE и других лигандов с RAGE. Применение слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению для модулирования экспрессии клеточного эффектора TNF- показано на фиг. 10. миелоидные клетки ТНР-1 можно культивировать в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FBS и индуцировать секрецию TNF- посредством стимуляцииRAGE лигандом S100b. Когда такая стимуляции происходит в присутствии слитого белка RAGE индукция TNP- под воздействием связывания S100b с RAGE может быть ингибирована. Таким образом, как показано на фиг. 10, добавление 10 мкг слитого белка RAGE ТТР-3000 (ТТ 3) или ТТР-4000 (ТТ 4) снижает вызванную S100b индукцию TNF- примерно на 50-75%. Слитый белок RAGE ТТР-4000 может быть эффективным в блокировании вызванной S100b индукции TNF- по меньшей мере также как sRAGE(фиг. 10). Специфичность ингибирования для последовательностей RAGE ТТР-4000 и ТТР-3000 показана в эксперименте, в котором отдельно добавляли IgG к стимулированным S100b клеткам. Добавление IgG и S100b в анализ показывает такие же уровни TNF-, как в случае добавления S100b отдельно. Физиологические свойства слитых белков RAGE Хотя sRAGE может быть терапевтически полезным для модулирования опосредованных RAGE заболеваний, sRAGE человека может иметь ограничения как отдельное терапевтическое средство из-за относительно короткого времени полужизни sRAGE в плазме. Например, хотя sRAGE грызунов имеет время полужизни у здоровых и диабетических крыс примерно 20 ч, sRAGE человека имеет время полужизни менее 2 ч при оценке сохранения иммунореактивности sRAGE (Renard et al., J. Pharmacol. Exp.Ther., 290: 1458-1466 (1999. Чтобы создать терапевтическое средство RAGE, которое имеет характеристики связывания, сходные с sRAGE, но более стабильный фармакокинетический профиль, можно использовать слитый белокRAGE, содержащий участок связывания лиганда RAGE, связанный с одним или несколькими доменами иммуноглобулина человека. Как известно в данной области, иммуноглобулиновые домены могут включать Fc-часть тяжелой цепи иммуноглобулина.Fc-часть иммуноглобулина может придавать несколько свойств слитому белку RAGE. Например,слитый белок Fc может увеличивать время полужизни таких слитых белков в сыворотке, часто от часов до нескольких дней. Повышение фармакокинетической стабильности обычно является результатом взаимодействия линкера между областями Сн 2 и Сн 3 Fc-фрагмента с рецептором FcRn (Wines et al., J.Immunol., 164: 5313-5318 (2000. Хотя слитые белки, содержащие полипептид Fc иммуноглобулина, могут обеспечивать преимущество повышенной стабильности, слитые белки иммуноглобулина могут вызывать воспалительный ответ при введении хозяину. Воспалительный ответ может быть в значительной степени из-за Fc-части иммуноглобулина в слитом белке. Провоспалительный ответ может быть желательным признаком. Если мишень экспрессируется на клетках патологического типа, которые необходимо удалить (например, злокачественная клетка или популяция лимфоцитов, вызывающих аутоиммунное заболевание). Провоспалительный ответ может быть нейтральным признаком, если мишенью является растворимый белок, так как большинство растворимых белков не активируют иммуноглобулины. Однако провоспалительный ответ может быть отрицательным признаком, если мишень экспрессируется на типах клеток, разрушение которых может привести к неблагоприятным побочным эффектам. Также провоспалительный ответ может быть негативным признаком, если воспалительный каскад формируется в месте связывания слитого белка с тканевой мишенью, так как многие медиаторы воспаления могут быть вредны для окружающей ткани и/или могут вызывать системные эффекты. Основной провоспалительный участок на Fc-фрагментах иммуноглобулина находится в шарнирной области между Сн 1 и Сн 2. Указанная шарнирная область взаимодействует с FcR1-3 на различных лейкоцитах и приводит эти клетки в действие для атаки мишени. (Wines et al., J. Immunol., 164: 5313-5318(2000. В качестве средств терапии RAGE-опосредованных заболеваний слитые белки RAGE не требуют формирования воспалительного ответа. Таким образом, варианты слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению могут включать слитый белок RAGE, содержащий полипептид RAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом(ами), в которых шарнирная область Fc из иммуноглобулина удалена и заменена полипептидом RAGE. Таким образом, взаимодействие между слитым белком RAGE и рецепто- 20015657 рами Fc на воспалительных клетках может быть минимизировано. Однако может быть важным сохранение правильной сборки и других взаимодействий в трехмерной структуре между разными иммуноглобулиновыми доменами слитого белка RAGE. Соответственно в вариантах слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению можно заменять биологически инертным, но структурно сходным междоменным линкером RAGE, который разделяет домены V и С 1 в RAGE, или линкером, который разделяет домены С 1 и С 2 RAGE, нормальную шарнирную область тяжелой цепи иммуноглобулина. Таким образом,полипептид RAGE слитого белка RAGE может содержать последовательность междоменного линкера,которая в природе находится ниже иммуноглобулинового домена RAGE, с образованием фрагмента иммуноглобулиновый домен RAGE/линкер. Таким образом, можно сохранить трехмерные взаимодействия между иммуноглобулиновыми доменами, вносимыми либо RAGE, либо иммуноглобулином. В одном варианте слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению может иметь значительно повышенную фармакологическую стабильность по сравнению с sRAGE. Например, на фиг. 11 показано, что после того, как слитый белок RAGE TTP-4000 насыщается лигандами, он может иметь время полужизни, составляющее более 300 ч. Это отличается от времени полужизни sRAGE в плазме человека только на несколько часов. Таким образом, в одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно использовать для антагонистического воздействия на связывание физиологических лигандов с RAGE в качестве средств лечения опосредованных RAGE заболеваний, не вызывая неприемлемой величины воспаления. Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению могут давать значительное снижение формирования провоспалительного ответа по сравнению с IgG. Например, как показано на фиг. 12, слитый белок RAGE TTP-4000 не стимулирует высвобождение TNF- из клеток в условиях, когда выявляется вызванная IgG человека стимуляция высвобождения TNF-. Лечение заболевания слитыми белками RAGE Настоящее изобретение также относится к способам лечения опосредованного RAGE расстройства у человека. В одном варианте способ может включать в себя введение пациенту слитого белка RAGE,содержащего полипептид RAGE, который содержит участок связывания лиганда RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. В одном варианте слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению может быть введен разными путями. Введение слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению можно осуществлять внутрибрюшинной (в/б) инъекцией. Альтернативно, слитый белок RAGE можно вводить перорально,интраназально или в виде аэрозоля. В другом варианте введение является внутривенным (в/в). Слитый белок RAGE также можно инъецировать подкожно. В другом варианте введение слитого белка RAGE является внутриартериальным. В другом варианте введение является подъязычным. Также введение можно осуществлять в капсуле для длительного высвобождения. В еще одном варианте введение может быть через прямую кишку, в виде суппозитория или тому подобного. Например, подкожное введение можно применять для лечения хронических заболеваний, когда желательно самостоятельное введение. Множество моделей на животных применяют для обоснования применения соединений, которые модулируют RAGE, в качестве терапевтических средств. Примеры таких моделей приведены ниже:a) Ингибируемое sRAGE образование неоинтимы в модели рестеноза у крыс после повреждения артерий у диабетических и здоровых крыс при ингибировании активации эндотелиальных, гладкомышечных клеток и макрофагов посредством RAGE (Zhou et al., Circulation 107: 2238-2243 (2003;b) Ингибирование взаимодействий RAGE/лиганд с использованием либо sRAGE, либо анти-RAGEантитела, уменьшенное образование амилоидных бляшек в мышиной модели системного амилоидоза(Yan et al., Nat. Med., 6: 643-651 (2000. Уменьшению количества амилоидных бляшек сопутствовало уменьшение уровня воспалительных цитокинов, интерлейкина-6 (IL-6) и колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF), а также сниженная активация NF-kB у обработанных животных;c) У трансгенных по RAGE мышей (сверхэкспрессирующие RAGE и экспрессирующие доминантную негативную форму RAGE) наблюдали образование бляшек и нарушение когнитивных функций в мышиной модели AD (Arancio et al., EMBOJ., 23: 4096-4105 (2004;d) Лечение диабетических крыс с применением sRAGE уменьшало проницаемость сосудов (Bonnardel-Phu et al., Diabetes, 48: 2052-2058 (1999;e) Лечение с применением sRAGE уменьшало атеросклеротические повреждения у диабетических мышей с нуль-мутацией по аполипопротеину Е и предотвращало функциональные и морфологические показатели диабетической нефропатии у мышей db/db (Hudson et al., Arch. Biochem. Biophys., 419: 80-88f) sRAGE ослаблял тяжесть воспаления в мышиной модели индуцированного коллагеном артрита(Hofmann et al., Genes Immunol., 3: 123-135 (2002, мышиной модели экспериментального аллергического энцефаломиелита (Yan et al, Nat. Med. 9: 28-293 (2003 и мышиной модели воспалительного заболевания кишечника (Hofmann et al., Cell, 97: 889-901 (1999. Таким образом, в одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно- 21015657 применять для лечения симптома диабета и/или осложнений в результате диабета, опосредованногоRAGE. В альтернативных вариантах симптом диабета или поздние осложнения диабета могут включать диабетическую нефропатию, диабетическую ретинопатию, диабетические язвы стопы, сердечно-сосудистые осложнения диабета или диабетическую нейропатию. Исходно идентифицированный в качестве рецептора для молекул, экспрессия которых связана с патологией диабета, RAGE сам по себе имеет существенной значения для патофизиологии диабетических осложнений. Показано, что ингибирование in vivo взаимодействия с RAGE с его лигандом(ами) оказывает терапевтическое влияние во многих моделях диабетических осложнений и воспаления (Hudson et al.,Arch. Biochem. Biophys., 419: 80-88 (2003. Например, двухмесячное лечение анти-RAGE-антителами нормализовало функцию почек и уменьшало аномальную гистопатологию почек у диабетических мышей(Flyvbjerg et al., Diabetes 53: 166-172 (2004. Кроме того, лечение растворимой формой RAGE (sRAGE),которая связывается с лигандами RAGE и ингибирует взаимодействия RAGE/лиганд, уменьшало атеросклеротические повреждения у диабетических мышей с нуль-мутацией по аполипопротеину Е и уменьшало функциональную и морфологическую патологию при диабетической нефропатии у мышей db/db(Bucciarelli et al., Circulation 106: 2827-2835 (2002. Также показано, что неферментативное гликоокисление макромолекул, в конце концов приводящее к образованию конечных продуктов глубокого гликозилирования (AGE), усиливается в местах воспаления при почечной недостаточности, при наличии гипергликемии и других состояний, связанных с системным или местным окислительным стрессом (Dyer et al., J. Clin. Invest, 91: 2463-2469 (1993); Reddy etal., Biochem., 34: 10872-10878 (1995); Dyer et al., J. Biol. Chem., 266: 11654-11660 (1991); Degenhardt et al.,Cell Mol. Biol., 44: 1139-1145 (1998. Накопление AGE в сосудистой сети может происходить в виде очагов, как в случае амилоида в суставах, состоящего из AGE-2-микроглобулина, встречающегося у пациентов с амилоидозом, связанным с диализом (Miyata et al., J. Clin. Invest., 92: 1243-1252 (1993); Miyata etal., J. Clin. Invest., 98: 1088-1094 (1996, или повсеместно, как, например, в сосудистой сети и тканях пациентов с диабетом (Schmidt et al., Nature Med., 1: 1002-1004 (1995. Прогрессирующее накопление AGE с течением времени у пациентов с диабетом свидетельствует, что эндогенный механизм клиренса не способен эффективно функционировать в местах отложения AGE. Такие накапливаемые AGE обладают способностью изменять свойства клеток разными механизмами. Хотя RAGE зкспрессируется на низких уровнях в нормальных тканях и сосудистой сети, показано, что в среде, где накапливаются лиганды рецептора, имеет место повышающая регуляция RAGE (Li et al., J. Biol. Chem., 272: 16498-16506 (1997); Liet al., J. Biol. Chem., 273: 30870-30878 (1998); Tanaka et al., J. Biol. Chem., 275: 25781-25790 (2000. Экспрессия RAGE возрастает в эндотелии, гладкомышечных клетках и инфильтрующих мононуклеарных фагоцитах в сосудистой сети при диабете. Также, исследования на культуре клеток показали, что взаимодействие AGE-RAGE вызывает изменения клеточных свойств, важных для гомеостаза в сосудистой сети. Применение слитых белков RAGE для лечения связанной с диабетом патологии показано на фиг. 13. Слитый белок RAGE TTP-4000 оценивали в модели рестеноза у крыс при диабете, при этом измеряли пролиферацию гладкомышечных клеток и увеличение интимы после повреждения сосудов. Как показано на фиг. 13, обработка ТТР-4000 может значимо уменьшить соотношение интима/средняя оболочка стенки кровеносных сосудов (I/M) (фиг. 13 А; табл. 1) при связанном с диабетом рестенозе зависимым от дозы образом. Также обработка ТТР-4000 может значимо уменьшать связанную с рестенозом пролиферацию гладкомышечных клеток сосудов зависимым от дозы образом. Таблица 1. Эффект ТТР-4000 в модели рестеноза у крыс Р 0,05; как в случае высокой, так и в случае низкой дозы использовали ударную дозу 3 мг/животное. В других вариантах слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также могут быть использованы для лечения или отмены амилоидоза и болезни Альцгеймера. RAGE является рецептором для амилоида бета (А), а также других амилоидогенных белков, включая SAA и амилин (Yan et al., Nature, 382:685-691 (1996); Yan et al, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 94: 5296-5301 (1997); Yan et al, Nat. Med., 6: 643-651 (2000); Sousa et al., Lab Invest., 80: 1101-1110 (2000. Также лиганды RAGE, включая белкиAGE, S100b и A, обнаружены в ткани, окружающей старческие бляшки у мужчин (Luth et al., Cereb.Cortex 15: 211-220 (2005); Petzold et al., Neurosci. Lett., 336: 167-170 (2003); Sasaki et al., Brain Res., 12: 256-262 (2001); Yan et al., Restor. Neurol Neruosci., 12: 167-173 (1998. Показано, что RAGE связывает вещество -слоя фибрилл, независимо от состава субъединиц (пептид амилоида-, амилин, сывороточный амилоид А, полученный из приона пептид) (Yan et al., Nature, 382: 685-691 (1996); Yan et al., Nat.Med., 6: 643-651 (2000. Кроме того, показано, что отложение амилоида приводит к усиленной экспрессии RAGE. Например, в головном мозге пациентов с болезнью Альцгеймера (AD) экспрессия RAGE возрастает в нейронах и глии (Yan, et al., Nature 382: 685-691 (1996. Одновременно с экспрессией RAGEлигандов RAGE подвергается повышающей регуляции в астроцитах и микроглиальных клетках в гиппокампе пациентов с AD, но не подвергается повышающей регуляции у людей, которые не имеют AD (Lueet al., Exp. Neurol., 171: 29-45 (2001. Полученные данные свидетельствуют, что клетки, экспрессирующие RAGE, активируются посредством взаимодействий RAGE/лиганд RAGE вблизи старческой бляшки. Также in vitro опосредованная А активация микроглиальных клеток может быть блокирована антителами, направленными против связывающего лиганд домена RAGE (Yan et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA,94: 5296-5301 (1997. Также показано, что RAGE может служить в качестве фокальной точки для сборки фибрилл (Deane et al, Nat. Med. 9:907-913 (2003. Также ингибирование in vivo взаимодействий RAGE/лиганд с использованием либо sRAGE, либо анти-RAGE-антитела может уменьшать образование амилоидных бляшек в мышиной модели системного амилоидоза (Yan et al., Nat. Med., 6: 643-651 (2000. У дважды трансгенных мышей, которые сверхэкспрессируют RAGE человека и белок-предшественник амилоида человека (АРР), с мутациями Swedish иLondon (мутант hАРР), в нейронах развиваются нарушения, связанные с обучением, и нейропатологические аномалии раньше, чем у их трансгенных аналогов с одной мутацией nAPP. Напротив, у дважды трансгенных мышей со сниженой способностью передачи сигнала А вследствие нейронов, экспрессирующих доминантную негативную форму RAGE на таком же мутантном фоне hAPP, наблюдается отсроченное появление нейропатологических аномалий и нарушений обучения по сравнению с их трансгенными аналогами с одной мутацией АРР (Arancio et al., EMBO J., 23: 4096-4105 (2004. Кроме того, показано, что ингибирование взаимодействия RAGE-амилоид снижает экспрессию клеточного RAGE и маркеров клеточного стресса (а также активацию NF-kB) и уменьшает отложение амилоида (Yan et al., Nat. Med., 6: 643-651 (2000, что свидетельствует о роли взаимодействия RAGEамилоид в нарушении свойств клеток в окружении, обогащенном амилоидом (даже на ранних стадиях), а также в накоплении амилоида. Таким образом, слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также можно применять для лечения, позволяющего снизить амилоидоз и уменьшить образование амилоидных бляшек и нарушение когнитивной функции, связанные с болезнью Альцгеймера (AD). Как описано выше, показано,что sRAGE уменьшает как образование амилоидных бляшек ТВ в головном мозге, так и последующее увеличение уровня маркеров воспаления в животной модели AD. На фиг. 14 А и 14 В показано, что мыши,которые имеют AD и которых лечат в течение 3 месяцев либо ТТР-4000, либо мышиным sRAGE, имеют меньше бляшек амилоида-бета (А) и меньшее нарушение когнитивной функции, чем животные, которые получали наполнитель или IgG человека в качестве негативного контроля (IgG1). Подобно sRAGE,ТТР-4000 также может снижать уровень воспалительных цитокинов IL-1 и TNF- (данные не показаны),связанных с AD. Также слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения атеросклероза и других сердечно-сосудистых расстройств. Таким образом, показано, что ишемическая болезнь сердца особенно часто встречается у пациентов с диабетом (Robertson, et al., Lab. Invest., 18: 538551 (1968); Kannel et al., J. Am. Med. Assoc, 241: 2035-2038 (1979); Kannel et al., Diab. Care, 2: 120-126(1979. Кроме того, исследования показали, что атеросклероз у пациентов с диабетом ускорен и более обширен, чем у пациентов, не страдающих диабетом (см., например, Waller et al., Am. J. Med., 69:498-506(1980); Crall et al., Am. J. Med. 64:221-230 (1978); Hamby et al. Chest, 2:251-257 (1976); и Pyorala et al,Diab. Metab. Rev., 3:463-524 (1978. Хотя причин ускоренного атеросклероза в условиях диабета много,показано, что уменьшение AGE может снижать образование бляшек. Например, слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также можно применять для лечения инсульта. Когда ТТР-4000 сравнивали с sRAGE в соответствующей животной модели инсульта,обнаружено, что ТТР-4000 дает значительно большее снижение объема инфаркта. В такой модели среднюю мозговую артерию мыши перевязывают и затем подвергают реперфузии, чтобы вызвать инфаркт. Чтобы оценить эффективность слитых белков RAGE при лечении или профилактике инсульта мышей обрабатывали sRAGE или ТТР-4000 или контрольным иммуноглобулином непосредственно перед реперфузией. Как можно видеть в таблице 2, ТТР-4000 был более эффективным, чем sRAGE в ограничении площади инфаркта у таких животных, что свидетельствует о том, что ТТР-4000 вследствие более длительного времени полужизни в плазме способен обеспечивать лучшую защиту, чем sRAGE.- 23015657 Таблица 2. Уменьшение инфаркта при инсульте значимо, р 0,001;по сравнению с физиологическим раствором. В другом варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения злокачественной опухоли. В одном варианте злокачественная опухоль, которую лечат с использованием слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению, содержит злокачественные клетки,которые экспрессируют RAGE. Например, злокачественные опухоли, которые можно лечить слитым белком RAGE согласно настоящему изобретению, включают некоторые злокачественные опухоли легких, некоторые глиомы, некоторые папилломы и тому подобное. Амфотерин является негистоновым связывающим хромосомную ДНК белком группы с высокой подвижностью I (Rauvala et al., J. Biol. Chem.,262: 16625-16635 (1987); Parkikinen et al., J. Biol. Chem. 268: 19726-19738 (1993, который, как показано,взаимодействует с RAGE. Показано, что амфотерин стимулирует рост нейритов, а также служит в качестве поверхности для сборки протеазных комплексов в фибринолитической системе (также известно, что он вносит вклад в подвижность клеток). Кроме того, наблюдали локальный ингибирующие рост опухоли эффект блокирования RAGE в модели первичной опухоли (глиома С 6), модели метастазов легкого Льюис (Taguchi et al., Nature 405: 354-360 (2000 и спонтанно возникающих папилломах у мышей, экспрессирующих трансген v-Ha-ras (Leder et al., Proc. Natl. Acad. Sd., 87: 9178-9182 (1990. В еще одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения воспаления. В альтернативных вариантах слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения воспаления, связанного с воспалительным заболеванием кишечника, воспаления, связанного с ревматоидным артритом, воспаления, связанного с псориазом, воспаления,связанного с рассеянным склерозом, воспаления, связанного с гипоксией, воспаления, связанного с инсультом, воспаления, связанного с сердечным приступом, воспаления, связанного с геморрагическим шоком, воспаления, связанного с сепсисом, воспаления, связанного с трансплантацией органов, воспаления, связанного с нарушенным заживлением ран, или воспаления, связанного с отторжением собственных (например, аутоиммунное) или не собственных (например, трансплантированных) клеток, тканей или органов. Например, после тромболитического лечения воспалительные клетки, такие как гранулоциты, инфильтруют ишемическую ткань и продуцируют радикалы кислорода, которые могут разрушать больше клеток, чем погибает при гипоксии. Показано, что ингибирование рецептора на нейтрофилах, ответственного за способность нейтрофилов к инфильтрации ткани, антителами или другими белковыми антагонистами ослабляет ответ. Так как RAGE является лигандом для указанного рецептора нейтрофилов, то слитый белок RAGE, содержащий фрагмент RAGE, может действовать в качестве ловушки и предотвращать перемещение нейтрофилов к месту реперфузии и, следовательно, предотвращать дальнейшее разрушение ткани. Роль RAGE в предотвращении воспаления можно продемонстрировать благодаря исследованиям, показывающим, что sRAGE увеличивал неоинтиму в модели рестеноза у крыс после повреждения артерий как у диабетических, так и у здоровых крыс, по-видимому, в результате ингибирования пролиферации эндотелиальных, гладкомышечных клеток и активации макрофагов под действием RAGE(Zhou et al, Circulation, 107:2238-2243 (2003. Кроме того, sRAGE ингибировал модели воспаления,включая гиперчувствительность замедленного типа, экспериментальный аутоиммунный энцефалит и воспалительное заболевание кишечника (Hofman et al., Cell, 97: 889-901 (1999. В одном варианте слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения расстройств, основанных на аутоиммунных реакциях. Например, в одном варианте слитые белкиRAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения почечной недостаточности. Таким образом, слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения системного волчаночного нефрита или воспалительного волчаночного нефрита. Например, показано, чтоS100/калгранулины содержат семейство близко родственных связывающих кальций полипептидов, характеризуемых двумя областями со структурой EF-руки, связанными соединительным пептидом (SchaferChem., 272: 9496-9502 (1997); Lugering et al., Eur. J. Clin. Invest., 25: 659-664 (1995. Хотя в них отсутствуют сигнальные пептиды, давно известно, что S100/калгранулины получают доступ во внеклеточное пространство, особенно в местах хронических иммунных/воспалительных ответов, например при кистозном фиброзе и ревматоидном артрите. RAGE является рецептором для многих представителей семей- 24015657 ства S100/калгранулинов, опосредуя их провоспалительное действие на такие клетки, как лимфоциты и мононуклеарные фагоциты. Также исследования в моделях реакции гиперчувствительности замедленного типа, колита у мышей нуль-мутантов по IL-10, индуцированного коллагеном артрита и экспериментального аутоиммунного энцефалита свидетельствуют, что взаимодействие RAGE-лиганд (вероятно сS100/калгранулинами) играет непосредственную роль в воспалительном каскаде. Диабет типа I является аутоиммунным расстройством, которое можно предотвратить или ослабить посредством лечения слитыми белками RAGE согласно настоящему изобретению. Например, показано,что sRAGE может обеспечивать возможность переноса спленоцитов от не страдающих ожирением диабетических мышей (NOD) мышам NOD с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (мыши NODscid). У мышей NOD-scid диабет спонтанно не проявляется, а требуется присутствие иммуноцитов, способных разрушать островковые клетки, так, что после этого индуцируется диабет. Обнаружено, что у реципиентов NOD-scid, которых обрабатывали sRAGE, наблюдается уменьшение появления диабета,индуцированного спленоцитами, перенесенными от диабетической мыши (NOD), по сравнению с реципиентами NOD-scid, которых не обрабатывали sRAGE (публикация патента США 2002/0122799). Как утверждают авторы указанного изобретения, экспериментально полученные результаты с использованием sRAGE в такой модели имеют отношение к заболеванию человека, такому как клиническая ситуация,при которой может иметь место будущая иммунотерапия и трансплантация островков. Таким образом, в одном варианте слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для лечения воспаления, связанного с трансплантацией по меньшей мере одного органа, ткани или множества клеток из первого участка во второй. Первый и второц участки могут быть в разных организмах или в одном и том же организме. В альтернативных вариантах, трансплантированные клетки,ткань или орган содержат клетки поджелудочной железы, кожи, печени, почки, сердца, легкого, костного мозга, крови, костей, мышц, эндотелиальные клетки, клетки артерии, вены, хряща, щитовидной железы,нервной системы или стволовые клетки. Например, введение слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению можно применять для облегчения трансплантации от одного субъекта, не имеющего диабета, другому субъекту, имеющему диабет. В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения остеопороза благодаря введению пациенту терапевтически эффективного количества слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению. (Zhou et al., J. Exp. Med., 203: 1067-1080 (2006. В одном варианте способ лечения остеопороза дополнительно может включать в себя стадию повышения плотности костей у пациента или снижения скорости уменьшения плотности костей у пациента. Таким образом, в различных выбираемых вариантах настоящее изобретение может относиться к способу ингибирования взаимодействия AGE с RAGE у субъекта посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению. Субъектом, которого лечат с применением слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению, может быть животное. В одном варианте субъектом является человек. Субъект может страдать от связанного сAGE заболевания, такого как диабет, осложнений диабета, таких как нефропатия, невропатия, ретинопатия, язвы стопы, амилоидоз или почечная недостаточность и воспаления. Или субъектом может быть человек с болезнью Альцгеймера. В альтернативном варианте субъектом может быть человек со злокачественной опухолью. В еще одном варианте субъект может страдать от системной красной волчанки или воспалительного волчаночного нефрита. Другие заболевания могут быть опосредованы RAGE и,следовательно, их можно лечить, используя слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению. Таким образом, в дополнительных альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения,слитые белки RAGE можно применять для лечения болезни Крона, артрита, васкулита, нефропатий, ретинопатий и невропатий у человека или животного. В других вариантах воспаление, в которое вовлечены аутоиммунные реакции (например, отторжение собственных клеток) и неаутоиммунные реакции (например, отторжение чужеродных клеток), может быть опосредовано RAGE и, следовательно, его можно лечить с использованием слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению. Терапевтически эффективное количество может содержать количество, которое способно предотвращать взаимодействие RAGE с AGE или другими типами эндогенных лигандов RAGE у субъекта. Соответственно, количество будет варьировать в зависимости от того, какого субъекта подвергают лечению. Введение соединения может быть ежечасным, ежедневным, еженедельным, ежемесячным, ежегодным или в виде единичного события. В различных альтернативных вариантах эффективное количество слитого белка RAGE может быть в диапазоне примерно от 1 нг/кг массы тела до примерно 100 мг/кг массы тела, или примерно от 10 мкг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела, или примерно от 100 мкг/кг массы тела до примерно 20 мг/кг массы тела. Реальное эффективное количество может быть установлено в анализе зависимости доза/ответ с использованием способов, стандартных в данной области(Johnson et al., Diabetes. 42: 1179, (1993. Таким образом, как известно специалистам в данной области,эффективное количество может зависеть от биодоступности, биологической активности и биологического распада соединения.- 25015657 Композиции Настоящее изобретение может включать в себя композицию, содержащую слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению, смешанный с фармацевтически приемлемым носителем. Слитый белокRAGE может содержать полипептид RAGE, связанный со вторым полипептидом, отличным от полипептида RAGE. В одном варианте слитый белок RAGE может содержать участок связывания лиганда RAGE. В одном варианте участок связывания лиганда включает в себя большую часть N-концевого домена слитого белка RAGE. Участок связывания лиганда RAGE может содержать V-домен RAGE или его часть. В одном варианте участок связывания лиганда RAGE содержит последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 22-51 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 23-51 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 31-51 последовательности SEQ ID NO: 1. В другом варианте участок связывания лиганда может содержать аминокислоты 31-116 последовательности SEQ ID NO: 1. В одном варианте полипептид RAGE может быть связан с полипептидом, содержащим домен иммуноглобулина или часть (например, его фрагмент) домена иммуноглобулина. В одном варианте полипептид, содержащий домен иммуноглобулина, содержит по меньшей мере часть по меньшей мере одного из доменов Сн 2 или Сн 3 IgG человека. Белок или полипептид RAGE может содержать полноразмерный RAGE человека (например, SEQID NO: 1) или фрагмент RAGE человека. В одном варианте полипептид RAGE не содержит никаких остатков сигнальной последовательности. Сигнальная последовательность RAGE может включать в себя либо остатки 1-22, либо остатки 1-23 полноразмерного RAGE (SEQ ID NO: 1). В альтернативных вариантах полипептид RAGE может содержать последовательность, которая, по меньшей мере на 70, 75, 80, 85,90, 95, 97, 98 или 99% идентична RAGE человека или его фрагменты. Например, в одном варианте полипептид RAGE может содержать RAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например, Neeper et al., (1992. Или RAGE человека может содержать полноразмерный RAGE с удаленной сигнальной последовательностью (например, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3) (фиг. 1 А и 1B) или частью такой аминокислотной последовательности. Слитые белки RAGE согласно настоящему изобретению также могут содержать sRAGE (например,SEQ ID NO: 4), полипептид по меньшей мере на 90% идентичный sRAGE, или фрагмент sRAGE. Например, полипептид RAGE может содержать sRAGE человека или его фрагмент с глицином в качестве первого остатка вместо метионина (см., например, Neeper et al., (1992. Или RAGE человека может содержать sRAGE с удаленной сигнальной последовательностью (см., например, SEQ ID NO: 5 или SEQ IDNO: 6 на фиг. 1 С или SEQ ID NO: 45 на фиг. 16 А) или частью такой аминокислотной последовательности. В других вариантах белок RAGE может содержать V-домен (см., например, SEQ ID NO: 7 или SEQID NO: 8 на фиг. 1D или SEQ ID NO: 46 на фиг. 16 А). Или можно использовать последовательность по меньшей мере на 90% идентичную V-домену или его фрагменту. Или белок RAGE может содержать фрагмент RAGE, содержащий часть V-домена (см., например, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10 на фиг. 1D или SEQ ID NO: 47 на фиг. 16 А). В одном варианте участок связывания лиганда может содержать последовательность SEQ ID NO: 9 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%,или последовательность SEQ ID NO: 10 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, или последовательность SEQ ID NO: 47 или последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%. В еще одном варианте фрагмент RAGE представляет собой синтетический пептид. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-116 RAGE человека (SEQ ID NO: 7) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-116 RAGE человека (SEQ ID NO: 8) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-116 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 46), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену RAGE. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 124-221 RAGE человека (SEQ ID NO: 11) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую домену C1 RAGE. В другом варианте полипептид RAGE может содержать аминокислоты 227-317 RAGE человека (SEQ ID NO: 12) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую домену С 2 RAGE. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-123 RAGE человека (SEQ ID NO: 13) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-123 RAGE человека (SEQID NO: 14) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую Vдомену RAGE и расположенному ниже междоменному линкеру. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 24-123 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 48), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-226 RAGE человека (SEQ ID NO: 17) или последовательность, идентичную им, по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-226 RAGE человека (SEQ ID NO: 18) или последователь- 26015657 ность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую V-домену, домену С 1 и междоменному линкеру, связывающему указанные два домена. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 24-226 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 50), или последовательность, идентичную им на 90%. Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-339RAGE человека (SEQ ID NO: 5) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или 24-339 RAGE человека (SEQ ID NO: 6) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, соответствующую sRAGE (т.е. кодирующую домены V, С 1 и С 2 и междоменные линкеры). Или полипептид RAGE может содержать аминокислоты 24-339 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ (SEQ ID NO: 45), или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%. Или можно использовать фрагменты каждой из указанных последовательностей. Слитый белок RAGE может содержать несколько типов пептидов, которые не получены из RAGE или его фрагмента. Второй полипептид слитого белка RAGE может содержать полипептид, полученный из иммуноглобулина. Тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого из известных изотипов тяжелых цепей: IgG, IgM, IgD , IgEили IgA . Кроме того, тяжелая цепь (или ее часть) может быть получена из любого одного из известных подтипов тяжелой цепи: IgG1 (1), IgG2 (2),IgG3 (3), IgG4 (4), IgAl (1), IgA2 (2), или мутаций таких изотипов или подтипов, которые изменяют биологическую активность. Второй полипептид может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или часть любого одного или обоих указанных доменов. В качестве иллюстративных вариантов полипептид,содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или их часть, может содержать последовательность SEQ IDNO: 38 или SEQ ID NO: 40. Пептид иммуноглобулина может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 39 или SEQ ID NO: 41. Последовательность иммуноглобулина SEQ IDNO: 38 или SEQ ID NO: 40 может кодироваться последовательностями SEQ ID NO: 52 или SEQ ID NO: 53.Fc-часть цепи иммуноглобулина может быть провоспалительной in vivo. Соответственно, в одном варианте слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению содержит междоменный линкер, полученный из RAGE, а не из междоменного шарнирного полипептида, полученного из иммуноглобулина. Соответственно, в одном варианте слитый белок RAGE может дополнительно содержать полипептид RAGE, непосредственно связанный с полипептидом, содержащим домен Сн 2 иммуноглобулина или его фрагмент. В одном варианте домен Сн 2 или его фрагмент содержит последовательность SEQ ID NO: 42. В одном варианте фрагмент последовательности SEQ ID NO: 42 содержит последовательность SEQID NO: 42 с удаленными первыми десятью аминокислотами. В одном варианте полипептид RAGE содержит междоменный линкер RAGE, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, так, что С-концевая аминокислота иммуноглобулинового домена RAGE связана с N-концевой аминокислотой междоменного линкера, а С-концевая аминокислота междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен Сн 2 иммуноглобулина или его фрагмент. Полипептид, содержащий домен Сн 2 иммуноглобулина или его часть, может содержать домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или часть обоих или любого одного из указанных доменов. В качестве иллюстративного варианта полилептид, содержащий домены Сн 2 и Сн 3 IgG1 человека или их часть, может содержать последовательность SEQ ID NO: 38 или SEQ ID NO: 40. Слитый белок RAGE согласно настоящему изобретению может содержать один или несколько доменов из RAGE. Также полипептид RAGE, содержащий междоменный линкер, связанный с иммуноглобулиновым доменом RAGE, может содержать фрагмент полноразмерного белка RAGE. Например, в одном варианте слитый белок RAGE может содержать два иммуноглобулиновых домена, полученных из белка RAGE, и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Слитый белок RAGE может содержать первый иммуноглобулиновый домен RAGE и первый междоменный линкер,связанные со вторым иммуноглобулиновым доменом RAGE и вторым междоменным линкером RAGE,так, что N-концевая аминокислота первого междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой первого иммуноглобулинового домена RAGE, N-концевой аминокислота второго иммуноглобулинового домена RAGE связана с С-концевой аминокислотой первого междоменного линкера, N-концевая аминокислота второго междоменного линкера связана с С-концевой аминокислотой второго иммуноглобулинового домена RAGE, и С-концевая аминокислота второго междоменного линкера RAGE непосредственно связана с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего иммуноглобулиновый домен Сн 2 или его фрагмент. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-251 RAGE человека(SEQ ID NO: 19) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека (SEQ ID NO: 20) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-251 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ, или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90% (SEQ ID NO: 51), соответствующую V-домену, домену С 1, междоменному линкеру, связывающему указанные два домена, и второму междоменному линкеру, расположенному ниже С 1. В одном варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 30 или ее фрагмент, может кодировать состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE. В другом варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последователь- 27015657 ность SEQ ID NO: 54, может кодировать состоящий из четырех доменов слитый белок RAGE, в который введены молчащие изменения оснований в кодонах, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин(GGT на GGG) на С-конце последовательности, чтобы удалить криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона. Альтернативно, состоящий из трех доменов слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулиновый домен, полученный из RAGE, и два иммуноглобулиновых домена, полученных из полипептида Fc человека. Например, слитый белок RAGE может содержать один иммуноглобулин доменRAGE, связанный посредством междоменного линкера RAGE с N-концевой аминокислотой полипептида, содержащего домен иммуноглобулина Сн 2 или его фрагмент. Например, полипептид RAGE может содержать аминокислоты 23-136 RAGE человека (SEQ ID NO: 15) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека (SEQ ID NO: 16) или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90%, или аминокислоты 24-136 RAGE человека, где Q24 циклизован с образованием рЕ, или последовательность, идентичную им по меньшей мере на 90% (SEQID NO: 49), соответствующую V-домену RAGE, и расположенному ниже междоменному линкеру. В одном варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 31 или ее фрагмент, может кодировать состоящий из трех доменов слитый белок RAGE. В другом варианте конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 55, может кодировать состоящий из трех доменов слитый белок RAGE, в который введены молчащие изменения оснований в кодонах, которые кодируют пролин (CCG на ССС) и глицин (GGT на GGG) на С-конце последовательности, чтобы удалить криптический сайт сплайсинга РНК вблизи терминального кодона. Фрагмент междоменного линкера RAGE может содержать пептидную последовательность, которая в природе расположена ниже и, следовательно, связана с иммуноглобулиновым доменом RAGE. Например, в случае V-домена RAGE междоменный линкер может содержать аминокислотные последовательности, которые в природе расположены ниже V-домена. В одном варианте линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 21, соответствующую аминокислотам 117-123 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имеющий дополнительные части природной последовательностиRAGE. Например, можно использовать междоменный линкер, содержащий несколько аминокислот (например, 1-3, 1-5 или 1-10 или 1-15 аминокислот) выше или ниже последовательности SEQ ID NO: 21. Соответственно, в одном варианте междоменный линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 23,содержащую аминокислоты 117-136 полноразмерного RAGE. Или можно использовать фрагменты последовательности SEQ ID NO: 21 с делецией, например, 1, 2 или 3 аминокислот с любого конца линкера. В альтернативных вариантах линкер может содержать последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична или на 80% идентична, или на 90% идентична последовательности SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 23. В случае домена C1 RAGE линкер может содержать пептидную последовательность, которая в природе расположена ниже домена С 1. В одном варианте линкер может содержать последовательность SEQID NO: 22, соответствующую аминокислотам 222-251 полноразмерного RAGE. Или линкер может содержать пептид, имеющий дополнительные части природной последовательности RAGE. Например,можно использовать линкер, содержащий несколько (1-3, 1-5 или 1-10, или 1-15 аминокислот) аминокислот выше и ниже последовательности SEQ ID NO: 22. Или можно использовать фрагменты SEQ ID NO: 22 с делецией, например, 1-3, 1-5 или 1-10 или 1-15 аминокислот с любого конца линкера. Например, в одном варианте междоменный линкер RAGE может содержать последовательность SEQ DD NO: 24, соответствующую аминокислотам 222-226. Или междоменный линкер может содержать последовательность SEQ ID NO: 44, соответствующую аминокислотам 318-342 RAGE. Фармацевтически приемлемые носители могут включать любой из стандартных фармацевтически приемлемых носителей, известных в данной области. В одном варианте фармацевтический носитель может представлять собой жидкость, и слитый белок RAGE или конструкция нуклеиновой кислоты могут быть в форме раствора. В другом варианте фармацевтически приемлемый носитель может быть в форме порошка, лиофилизованного порошка или таблетки. Или фармацевтический носитель может представлять собой гель, суппозиторий или крем. В альтернативных вариантах носитель может содержать липосому, микрокапсулу, инкапсулированную в полимер клетку или вирус. Следовательно, термин "фармацевтически приемлемый носитель" охватывает, но не ограничивает указанным, любой из стандартных фармацевтически приемлемых носителей, таких как вода, спирты, раствор фосфатно-солевого буфера,сахара (например, сахарозу или маннит) , масла или эмульсии, такие как эмульсии типа масло/вода или эмульсии триглицеридов, различные типы увлажнителей, таблетки, таблетки, покрытые оболочками, и капсулы. Введение слитых белков RAGE согласно настоящему изобретению можно осуществлять различными путями. Таким образом, введение слитого белка RAGE согласно настоящему изобретению можно осуществлять с помощью внутрибрюшинной (в/б) инъекции. Альтернативно, слитый белок RAGE можно вводить перорально, интраназально или в виде аэрозоля. В другом варианте введение осуществляют внутривенно (в/в). Слитый белок RAGE также можно инъецировать подкожно. В другом варианте введение слитого белка RAGE является внутриартериальным. В другом варианте введение является подъя- 28015657 зычным. Также введение можно осуществлять в капсуле для длительного высвобождения. Например,подкожное введение может быть применимо для лечения хронических заболеваний, при которых желательно самостоятельно введение. Фармацевтические композиции могут иметь форму стерильного инъекционного раствора в нетоксичном парентерально приемлемом растворителе или наполнителе. К приемлемым наполнителям и растворителям, которые можно использовать, относятся вода, раствор Рингера, 3-бутандиол, изотонический раствор хлорида натрия или водные буферы, как например, физиологически приемлемый цитратный,ацетатный, глициновый, гистидиновый, фосфатный, трис- или сукцинатный буферы. Инъекционный раствор может содержать стабилизаторы, чтобы защитить от химического разрушения и образования агрегатов. Стабилизаторы могут включать антиоксиданты, такие как бутилированный гидроксианизол (ВНА) и бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), буферы (цитраты, глицин, гистидин) или поверхностноактивные вещества (полисорбат 80, полоксамеры). Раствор также может содержать противомикробные консерванты, такие как бензиловый спирт и парабены. Раствор также может содержать поверхностноактивные вещества для уменьшения агрегации, такие как полисорбат 80, полоксамер или другие поверхностно-активные вещества, известные в данной области. Раствор также может содержать другие добавки,такие как сахар (сахара) или раствор соли, для доведения осмотического давления композиции до давления, сходного с давлением крови человека. Фармацевтические композиции могут иметь форму стерильного лиофилизованного порошка для инъекции после перерастворения в разбавителе. Разбавителем может быть вода для инъекций, бактериостатическая вода для инъекций или стерильный физиологический раствор. Лиофилизованный порошок может быть получен путем лиофилизации раствора слитого белка с получением белка в сухой форме. Как известно в данной области лиофилизованный белок, как правило, имеет повышенную стабильность и более длительный срок хранения, чем жидкий раствор белка. Лиофилизованный порошок (спекшаяся масса) может содержать буфер для доведения рН, а также, например, физиологический приемлемый цитратный, ацетатный, глициновый, гистидиновый, фосфатный, трис или сукцинантный буфер. Лиофилизованный порошок также может содержать протекторы для лиофилизации для сохранения его физической и химической стабильности. Обычно используемыми для лиофилизации протекторами являются невосстанавливающие сахара и дисахариды, такие как сахароза, маннит или трегалоза. Лиофилизованный порошок сожжет содержать стабилизаторы для защиты от химического разрушения и образования агрегатов. Стабилизаторы могут включать без ограничения антиоксиданты (ВНА, ВНТ), буферы (цитраты,глицин, гистидин) или поверхностно-активные вещества (полисорбат 80, полоксамеры). Лиофилизованный порошок также может содержать противомикробные консерванты, такие как бензиловый спирт и парабены. Лиофилизованный порошок также может содержать поверхностно-активные вещества для уменьшения агрегации, такие как без ограничения, полисорбат 80 и полоксамер. Лиофилизованный порошок также может содержать добавки (например, сахара или раствор соли) для доведения осмотического давления до давления, сходного с давлением крови человека, при перерастворении порошка. Лиофилизованный порошок также может содержать наполнители, такие как сахара и дисахариды. Фармацевтические композиции для инъекции также могут иметь форму масляной суспензии. Такая суспензия может быть приготовлена известными способами с применением походящих диспергирующих средств, увлажнителей и суспендирующих агентов, описанных выше. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют стерильные нелетучие масла. В указанных целях можно использовать любое легкое нелетучее масло и синтетические моно- или диглицериды. Также масляные суспензии могут быть приготовлены путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Например, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, применимы для приготовления инъекционных препаратов. Масляные суспензии могут содержать загустители, например пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. В такие композиции могут быть добавлены консерванты, например антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут быть в форме эмульсий типа "масло в воде" или водных суспензий. Масляной фазой может быть растительное масло,например, оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, например жидкий парафин,или их смесь. Подходящими эмульгаторами могут быть встречающиеся в природе камеди, например аравийская камедь или трагакантовая камедь, встречающиеся в природе фосфатиды, например из соевых бобов, лецитин, и сложные эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, например, моноолеат сорбитана, и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, например полиэтиленсорбитан. Водные суспензии также могут содержать активные соединения в смеси с эксципиентами. Такие эксципиенты могут включать суспендирующие агенты, например, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовую камедь и аравийскую камедь; диспергирующие агенты и увлажнители, такие как встречающийся в природе фосфатид, такой как лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами,например, стеарат полиоксиэтилена, или продукты конденсации этиленоксида с алифатическими спир- 29