Вакцина для профилактики эхинококкоза животных

006309 Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и ииммунологии, а именно к получению вакцины для профилактики эхинококкоза животных. Цепью изобретения является получение противоэхинококкозной вакцины. В настоящее время известен способ извлечения антигена из эхинококкового циста для получения эхиноаллергена. Прототипом заявленного изобретения является способ получения эхиноаллергена для диагностики эхинококкоза человека, согласно которому из эхинококковых цистов вида Е . huminis выделяют герментативную оболочку, сколепсы эхинококковой жидкости, которые подвергаются механическому измельчению на размельчителей тканей и их фильтруют. Полученный фильтрат осаждают путем добавления 4-кратного объема 96-ного спирта-ректификата, полученный осадок растворяют в воде,промывают эфиром для удаления бластных веществ. Затем белок, полностью очищенный от бластных веществ, осаждают 4-кратным объемом спирта-ректификата. Осадок после высушивания при температуре 37-39 С размельчают в электромельнице или фарфоровой ступке. Готовый аллерген расфасовывают в ампулах по 0,01 г, запаивают и автоклавируют при 0,5 атм в течение 20 мин при температуре 110 С. Аллерген используют в виде 0,1%-го раствора в физиологическом растворе или дистиллированной воде,патент РТ.332 [1]. Наиболее близким прототипом заявляемого изобретения является способ получения эхиноаллергена из сколексов, собранных их эхинококковых цист. Согласно этому способу сколексы собирают из эхинококковых цист, полученных от больных эхинококкозом животных. После промывания 96-ным спиртом-ректификатом, высушивания на воздухе сколексы подвергают ферментативному расщеплению 0,1%-ным раствором пепсина медицинского при рН-5,0 в течение 42 ч при температуре 30-39 С. Затем гидролизат центрифугируют при 2 тыс. оборотов в течение 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый тампон, непереваренный осадок выбрасывают. Из профильтрованного гидролизата аллерген осаждают путем добавления 4 объемов 96-ногo этилового спирта. Затем рН доводят до 7-7,7 добавлением 20%-ного раствора двууглекислой соды с целью лучшего осаждения аллергена. Выпавший осадок (аллерген) собирают центрифугированием при 4 тыс. оборотов в течение 5 мин. Надосадочный спирт сливают, осадок(аллерген) промывают дистиллированной водой и снова переосаждают 96-ным спиртом-ректификатом при температуре 4 С. Аллерген после второго осаждения отделяют центрифугированием при 6 тыс. оборотов в течение 5 мин. Полученный аллерген сушат при температуре 37-38 С в течение 16-10 ч, растирают в электромельнице или ступке в мелкодисперсный порошок. Готовый аллерген расфасовывают в ампулах по 0,1-0,2 г, запаивают, автоклавируют при 0,5 атм в течение 20 мин при температуре 110 С [2]. Применение предлагаемой вакцины позволяет 1) профилактировать заражение эхинококкозом животных; 2) предотвратить экономический ущерб, наносимый эхинококкозом животных; 3) предупредить заражение людей эхинококкозом. Пример. Подготавливаются 2 л 0,1%-ного пепсина (медицинского) на теплой (+36) дистиллированной воде. Порошок из сколексов (32 г) с небольшим количеством раствора тщательно растирается в ступке,затем вся масса смешивается с остальным количеством пепсина и сливается в двухлитровую колбу Эрленмейера. В колбу добавляется 20 мл толуола (толуол имеет рН-5, за счет которого снижается кислотность), смесь тщательно взбалтывается и путем добавления концентрированной химически чистой соляной кислоты устанавливается рН-3. Полученная смесь на 42 ч помещается в термостат (тепмпература +38-39), взбалтывается через каждые 6 ч, а рН среды проверяется через 1, 5, 18 и 24 ч, при этом показатель рН должен быть не выше 4,5. Период гидролиза рН изменяется в щелочную сторону, поэтому его необходимо восстанавливать подкислением. Через 42 ч с поверхности гидролизной жидкости снимается ватным тампоном толуоловая плнка, жидкость при этом взбалтывать нельзя. Гидролизат центрифугируется при 2 тыс. оборотов 3 мин. Центрифугат фильтруется через ватно-марлевый тампон (непереваренный остаток выбрасывается). Из полученного гидролизата осаждается аллерген путм добавления 4 объмов 96-ного этилового спирта (при комнатной температуре). Затем рН доводится до 7-7,2 путем добавления 20% раствора двууглекислой соды (в начале 1 мл, затем по каплям) с целью получения лучшего осаждения аллергена. Выпавший осадок (аллерген) собирается центирифугированием при 4 тыс. оборотов в течение 5 мин. Надосадочный спирт сливается, а осадок (аллерген) вначале с небольшим количеством дистиллированной воды(50 мл) тщательно растирается в сметанообразную массу, а затем переливается в цилиндр, добавляется 750 мл дистилированной воды и оставляется на 5 мин (выпавший осадок удаляется). В дальнейшем взвесь аллергена в дистилированной воде смешивается с 4 объмами спирта, и проводится осаждение в цилиндрах, которые помещаются в холодильник при 4 С на 18-20 ч. Аллерген после второго осаждения собирается центрифугированием при 6 тыс. оборотах в течение 5 мин. Плотный осадок, рассыпчатый осадок размещается в открытые чашки Петри и ставится в термостат при температуре +38-29 С. Через 16-18 ч высушенная масса растирается в электромельнице или в ступке в дисперсный порошок, который служит как исходный материал для изготовления вакцины. Для изготовления вакцины 0,1 г сухого порошка исходного материала растворяется на 100 мл в физиологическом растворе, добавляется 0,6% раствора формалина и 15% к объему вакцины гель гидроокиси алюминия.-1 006309 Загружают все компоненты в реактор и перемешивают, затем расфасовывают по 100 см 3. Готовую вакцину проверяют на стерильность, безвредность и активность. Источники информации: 1. Муминов А.М. Инструкция по изготовлению эхиноаллергена для диагностики эхинококкоза овец, коз и крупного рогатого скота. - Душанбе, 1999 г. 2. Патент РТ 332 Махмадов Ф.И., Муминов А.М. Способ получения эхиноаллергена для диагностики эхинококкоза. - Душанбе, 2002 г. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина для профилактики эхинококкоза животных, включающая эффективное количество ферментативно расщепленных сколексов, жидкости и герментативной оболочки эхинококка с последующим гидролизом, отличающаяся тем, что в ее состав кроме сколексов входят иммуноадъювант геля (гидроокись алюминия) и формалин.