Способ лечения закупорки стационарного катетера с использованием фибринолитических металлопротеиназ
Формула / Реферат
1. Способ лизиса кровяного сгустка внутри или вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка для применения у человека, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа количества фибринолитической металлопротеиназы, которое не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека.
2. Способ протеолитической деградации кровяного сгустка внутри или вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка для применения у человека, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количества достаточно для облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного человека.
3. Способ по п.1 или 2, предусматривающий от 0,1 до 80 мг/мл фибринолитической металлопротеиназы.
4. Способ по п.1 или 2, предусматривающий от 0,1 до 50 мг/мл фибринолитической металлопротеиназы.
5. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой катетер.
6. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой шунт.
7. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой трансплантат для доступа.
8. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой иглу.
9. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют для введения жидкой композиции в артерию или вену человека.
10. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют для отбора крови из артерии или вены человека.
11. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой гемодиализа.
12. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой переливания крови.
13. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с химиотерапией.
14. Способ по п.1 или 2, который применяется для лечения закупорки периферических артерий.
15. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с отбором крови.
16. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток расположен на внутренней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа.
17. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток расположен на внешней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа.
18. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток прикреплен к стационарному устройству сосудистого доступа.
19. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в артерии.
20. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в вене.
21. Способ по п.1 или 2, в котором указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство "с боковыми отверстиями".
22. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство доставки с "выходными отверстиями для ответа на давление" (PRO).
23. Способ по п.1 или 2, в котором раствор фибринолитической металлопротеиназы вводят с помощью болюса.
24. Способ по п.1 или 2, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя новый действующий тромболитик (NAT).
25. Способ по п.1 или 2, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя фибролазу.
26. Способ восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа для применения у человека, имеющего закупорку на основе фибрина, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количества достаточно для облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного человека, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека.
27. Способ восстановления функционирования стационарного устройства сосудистого доступа для применения у человека, имеющего закупорку на основе фибрина, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количества достаточно для облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного человека, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека.
28. Применение фибринолитической металлопротеиназы в количестве, не превышающем 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека, в фармацевтически приемлемом растворе, при производстве лекарственного средства для терапевтического лечения кровяного сгустка внутри или вокруг указанного стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка.
29. Применение фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превышающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, находящегося внутри, вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему сгустка, в фармацевтически приемлемом растворе, при производстве лекарственного средства для протеолитической деградации кровяного сгустка внутри или вокруг указанного стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка.
30. Применение по п.28 или 29, где фибринолитическая протеиназа находится в концентрации от 0,1 до 80 мг/мл.
31. Применение по п.28 или 29, где фибринолитическая протеиназа находится в концентрации от 0,1 до 50 мг/мл.
32. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой катетер.
33. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой шунт.
34. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой трансплантат для доступа.
35. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой иглу.
36. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют для введения жидкой композиции в артерию или вену человека.
37. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют для отбора крови из артерии или вены человека.
38. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой гемодиализа.
39. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой переливания крови.
40. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с химиотерапией.
41. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют при лечении закупорки периферических артерий.
42. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с отбором крови.
43. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток расположен на внутренней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа.
44. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток расположен на внешней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа.
45. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток прикреплен к стационарному устройству сосудистого доступа.
46. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в артерии.
47. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в вене.
48. Применение яю п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство "с боковыми отверстиями".
49. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство доставки с "выходными отверстиями для ответа на давление" (PRO).
50. Применение по п.28 или 29, где указанное лекарственное средство получают для болюсного введения.
51. Применение по п.28 или 29, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя новый действующий тромболитик (NAT).
52. Применение по п.28 или 29, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя фибролазу.
53. Применение фибринолитической метллопротеиназы в количестве, которое образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, и в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превышающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, у субъекта-человека, в фармацевтически приемлемом растворе, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела субъекта-человека, при производстве лекарственного средства для восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа, характеризующегося закупоркой на основе фибрина.
54. Применение фибринолитической металлопротеиназы в количестве, которое образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, и в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превышающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, у субъекта-человека, в фармацевтически приемлемом растворе, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела субъекта-человека, при производстве лекарственного средства для восстановления функционирования стационарного устройства сосудистого доступа, характеризующегося закупоркой на основе фибрина.
55. Способ по пп.1, 2, 26 и 27, где концентрация предусмотренной фибринолитической металлопротеиназы составляет от 5,0 до 40 мг/мл.
56. Применение по пп.28, 29, 53 и 54, где концентрация предусмотренной фибринолитической металлопротеиназы составляет от 5,0 до 40 мг/мл.
57. Доза фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где указанная доза колеблется от 0,5 до 4,0 мг.
58. Доза по п.57, где указанная доза выбрана из группы, состоящей из 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 и 4,0 мг.
59. Доза по п.57, где фибринолитическая металлопротеиназа представляет собой новый действующий тромболитик (NAT).
60. Доза по п.57, где фибринолитическая металлопротеиназа представляет собой фибролазу.
61. Способ восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа, предусматривающий введение указанного устройства в контакт с дозой по любому из пп.57-59.
62. Способ по п.61, где фибринолитическая металлопротеиназа ковалентно связывается с альфа-2-макроглобулином.
Текст
007654 Данная заявка представляет собой частичное продолжение заявки на выдачу патента США 09/466276, поданной 17 декабря 1999 г., которая включена сюда полностью в качестве ссылки. Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к терапевтическому введению фибринолитических металлопротеиназ, и, более конкретно, к способу введения таких средств in vivo путем локализованной доставки к сосудистым тромбам для осуществления лизиса сгустка. Данное изобретение также относится к растворению сгустков крови в стационарном катетере, шунте или другом устройстве сосудистого доступа с целью восстановления функции данного устройства сосудистого доступа. Уровень техники Случаи закупорки сосудов, вызванные сгустками крови, такими как тромбы и эмболы, представляют собой серьезные заболевания, которые без своевременного лечения могут грозить потерей конечности или жизни. Для лечения и удаления сгустков крови в сосудах разработаны устройства и способы. Для иллюстрации см. патент США 4447236 (Quinn), выданный 8 мая 1984 г.; патент США 4692139(Stiles), выданный 8 сентября 1987 г.; патент США 4755167 (Thistle et al.), выданный 5 июля 1988 г.; патент США 5167628 (Boyles), выданный 1 декабря 1992 г.; патент США 5222941 (Don Michael),выданный 29 июня 1993 г.; патент США 5250034 (Appling et al.), выданный 5 октября 1993 г; патент США 5370653 (Cragg), выданный 6 декабря 1994 г.; патент США 5380273 (Dubrul et al.), выданный 10 января 1995 г.; патент США 5498236 (Dubrul et al.), выданный 12 марта 1996 г.; патент США 5626564 (Zhan et al.), выданный 6 мая 1997 г.; патент США 5709676 (Alt), выданный 20 января 1998 г.; патент США 5865178 (Yock), выданный 2 февраля 1999 г., и WO 90/07352 (опубликованную 12 июля 1990 г.). Такие способы и устройства включают в себя инфузионные катетеры для доставки тромболитических и фибринолитических средств к кровяному сгустку и его растворения. Инфузионные катетеры обычно используют совместно с ферментативно активными средствами, которые способны вызывать деградацию фибрина в сгустке и, таким образом, эффективно растворять сгусток. Такие ферменты обычно обозначают как тромболитические или фибринолитические средства. Фибролаза представляет собой известную фибринолитическую цинковую металлопротеиназу, которая впервые была выделена из яда южной медноголовой змеи (Agkistrodon contortrix contortrix). См.al., Protein Science, Cambridge University Press (1992), pp. 590-600; заявка на выдачу европейского патента 0323722 (Valenzuela et al.), опубликованная 12 июля 1989 г.; и патент США 4610879 (Markland etal.), выданный 9 сентября 1986 г. Фибролаза, как было показано, является фибринолитиком, и было отмечено, что данная металлопротеиназа характеризуется протеолитической активностью в отношенииA-цепи фибриногена, со сниженным протеолитическим расщеплением B-цепи и отсутствием активности в отношении -цепи фибриногена; Ahmed et al., Haemostasis, Volume 20, pp. 147-154 (1990). Поскольку фибрин является главным компонентом кровяных сгустков, фибринолитические свойства фибролазы подчеркивают ее потенциал в качестве средства растворения тромба для тромболитического примененияin vivo; см. Markland et al., Circulation, Volume 9, Number 5, pp. 2448-2456 (1994) и Ahmed et al. выше. Новый действующий тромболитик (NAT) представляет сбой модифицированную форму фибролазы, которая отличается от фибролазы тем, что NAT содержит 201 аминокислоту с N-концевой последовательностью SFPQR, в то время как N-концевая последовательность нативной фибролазы начинается сEQRFPQR и составляет 203 аминокислоты в длину. N-концевую модификацию конструировали так, чтобы предотвратить химические реакции аминокислотных остатков, способных образовывать вариабельное количество циклизованного глутамина (пироглутаминовая кислота), что потенциально приводит к вариациям от серии к серии по качеству и единообразию продукта. Таким образом, NAT может рассматриваться как более стабильная молекула. Несмотря на данные структурные различия, NAT и фибролаза сходны в отношении их ферментативной (фибринолитической) активности. Данное сходство в биологической активности согласуется с данными, указывающими на то, что активный участок фибролазы затрагивает аминокислоты 139-159,как описано Manning in Toxicon, Volume 33, pp. 1189-1200 (1995), и его предсказанное расположение в трехмерном пространстве отдалено от N-конца. Активный участок фибролазы и молекул NAT содержит атом цинка, который образует комплекс с тремя остатками гистидина. В опубликованной литературе по происходящей из яда фибролазе продемонстрирована ее протеолитическая активность в отношении фибриногена в сайте Lys413-Leu414 и в отношении окисленной -цепи инсулина в сайте Ala14-Leu15; Retzios and Markland, Thrombosis Research, Volume 74, pp. 355-367 (1994);Pretzer et al., Pharmaceutical Research, Volume 8, pp. 1103-1112 (1991), and Pretzer et al., Pharmaceutical Research, Volume 9, pp. 870-877 (1992). Также было продемонстрировано, что NAT характеризуется протеолитической активностью в отношении данных субстратов в тех же сайтах расщепления. В отличие от фибринолитических металлопротеиназ, таких, как фибролаза и NAT, средства лизиса сгустка, такие как стрептокиназа, урокиназа и активатор плазминогена тканевого типа (tPA), представляют собой активаторы плазминогена, которые способствуют тромболизу путем активации эндогенной системы фибринолиза. Более конкретно, активаторы плазминогена катализируют преобразование плаз-1 007654 миногена в плазмин, сериновую протеазу. Плазмин способен расщеплять фибриноген и фибрин в аргинил-лизиловых связях, и именно путем активации плазмина активаторы плазминогена в конечном счете воздействуют на деградацию фибрина и лизис сгустка. Коммерчески доступными в настоящее время тромболитическими средствами являются такие активаторы плазминогена, как урокиназа, стрептокиназа или tPA. В отличие от такого класса тромболитических лекарственных средств, как активаторы плазминогена, фибринолитические металлопротеиназы, такие как фибролаза и NAT, не относятся к эндогенной системе фибринолиза (преобразование плазминогена в плазмин). Следовательно, данный класс средств лизиса сгустка может отличаться от активаторов плазминогена по их уникальному типу действия, и они определяются как прямые фибринолитические средства. Альфа-2-макроглобулин представляет собой преобладающий ингибитор протеиназ, присутствующий в сыворотке млекопитающих, и является одним из крупнейших белков сыворотки (имеет молекулярную массу 725 кДа). Специфичность 2-макроглобулина в отношении протеиназ широка и охватывает классы сериновых, цистеиновых протеиназ, протеиназ аспарагиновой кислоты и металлопротеиназ. Молекула 2-макроглобулина представляет собой тетрамер с идентичными субъединицами, которые связаны дисульфидными мостиками попарно с нековалентными связями между половинами молекулы. Так,в восстановительных условиях нативный 2-макроглобулин может диссоциировать на свои четыре мономерных субъединицы. Каждая субъединица 2-макроглобулина имеет область, очень чувствительную к протеолитическому расщеплению (область наживки). Протеолиз области наживки индуцирует конформационное изменение в 2-макроглобулине, что приводит к захвату протеиназы внутри молекулярной структуры 2 макроглобулина. Данный процесс описан в литературе как взаимодействие венерина мухоловка. Как только протеиназа захватывается, она получает стерическое затруднение и поэтому не может достигать своего молекулярного субстрата. Кроме того, между 2-макроглобулином и многими протеиназами, которые она захватывает, образуется ковалентная связь. Как отмечалось, захват протеиназы приводит к конформационному изменению в молекуле 2-макроглобулина. Предполагается, что после данного конформационного изменения тиоэфирная связь на внутренней части молекулы 2-макроглобулина становится реакционноспособной и может образовывать ковалентную связь с нуклеофильными остатками (такими, как лизин) захваченной протеиназы. Таким образом, в общей циркуляции 2-макроглобулин может эффективно нейтрализовывать разнообразные протеиназы. Более того, конформационное изменение в 2-макроглобулине, вызванное захватом протеиназы,приводит к образованию его формы, распознаваемой ретикулоэндотелиальной системой. Клиренс захваченных 2-макроглобулином протеиназ в общем описан со значениями времени полужизни в минутах и,как полагают, осуществляется посредством белка, родственного рецептору липопротеина низкой плотности (LDL), экспрессируемого на макрофагах, гепатоцитах и фибробластах. Для большей информации по 2-макроглобулину см. Methods in Enzymology, edited by A.J. Barrett, Academic Press, Inc., Philadelphia,(1981), pp. 737-754. Альфа-2-макроглобулин способен образовывать макромолекулярный комплекс с фибролазой, NAT и другими протеиназами. В отличие от других протеиназ, которые образуют диссоциируемый комплекс с 2-макроглобулином, фибролаза и NAT являются двумя примерами фибринолитических протеиназ, которые образуют комплекс, который не диссоциирует с 2-макроглобулина при физиологических условиях. Когда, например, очищенный человеческий 2-макроглобулин и NAT инкубируют вместе, образование комплекса начинается в течение секунд и почти заканчивается в пределах нескольких минут. Данный феномен показывает, что образование комплекса in vitro может происходить быстро и указывает на возможную быстроту образования комплекса между 2-макроглобулином и NAT или другими фибринолитическими металлопротеиназами in vivo. Хотя 2-макроглобулин является одним из главных белков плазмы, в циркуляции, тем не менее, находится конечное количество 2-макроглобулина, которое будет доступно для нейтрализации фибринолитической металлопротеиназы. Способность связывания 2-макроглобулина, таким образом, является насыщаемой. Как только способность к связыванию 2-макроглобулина превышается, концентрация несвязанной фибринолитической металлопротеиназы возрастает пропорционально тому как к образцу добавляется дополнительное количество фибринолитической металлопротеиназы. Присутствие 2-макроглобулина в общей циркуляции пациента представляет собой препятствие системному (например, внутривенному) введению фибролазы, NAT и других фибринолитических металлопротеиназ, которые связываются 2-макроглобулином в общей циркуляции крови. Если насыщаемый уровень природного 2-макроглобулина не будет достигнут путем системно введенной дозы таких фибринолитических металлопротеиназ, последние будут эффективно нейтрализоваться и становиться неэффективными для терапевтических целей. В одном из исследований in vivo, проведенных на кроликах, оценивали биологическую эффектив-2 007654 ность происходящей из яда фибролазы после системного внутривенного введения. Ahmed et al., Haemostasis, выше. Использованная доза фибролазы составляла 3,7 мг на килограмм, что по оценкам приводило к конечной концентрации в крови, примерно составляющей 60 мкг/мл у кролика массой 3,0 кг. Данное количество выбирали на основе исследований по оценке инактивации данного фермента в присутствии крови или плазмы, преимущественно вследствие действия 2-макроглобулина (см. сс. 336 и 339). В другом исследовании in vivo у собак оценивали биологический эффект рекомбинантной фибролазы на лизис сгустка. Markland et al., Circulation, выше. Четыре миллиграмма данного материала на килограмм (массы тела животного) вводили струйно в течение 5 мин проксимально от предварительно индуцированного тромба в левой сонной артерии через катетерное устройство (см. с. 2450). Здесь опять было отмечено, что инактивация фибролазы происходит в общей циркуляции крови преимущественно вследствие присутствия 2-макроглобулина (см. с. 2454, вторую колонку, последний параграф). Как показывают данные, два исследования, дезактивирующие эффекты 2-макроглобулина, могут преодолеваться введением системных дозировок фибринолитической металлопротеиназы, которые превышают насыщаемый уровень природного 2-макроглобулина (исследование на кроликах) или путем доставки фермента локально в участок сгустка (исследование на собаках) и избежания системного введения. С другой стороны, дозы фибринолитической металлопротеиназы в избытке насыщаемого уровня 2-макроглобулина, при системной или местной доставке, могут превышать уровни, которые безопасны и хорошо переносятся подвергающимся лечению субъектом. Примечательно, что фибринолитические металлопротеиназы способны разрушать не только фибрин, но также могут приводить к деградации других структурных белков, и поэтому они потенциально токсичны in vivo, когда присутствуют в больших количествах, которые превышают насыщаемый уровень 2-макроглобулина. Образование кровяного сгустка или другой основанной на фибрине закупорки также вызывает беспокойство при использовании стационарного катетера или другого устройства сосудистого доступа. Имеется много состояний, которые требуют повторяющегося периодически или длительного применения устройства сосудистого доступа, такого как катетер, трансплантат для доступа, футляр, игла, артериовенозная фистула или шунт. Например, в различных процедурах, ассоциированных с гемодиализом,химиотерапией, переливанием или обменом крови, и в других процедурах, где используется повторная внутривенная или внутриартериальная доставка лекарственных средств (или забор жидкостей), можно использовать постоянный катетер или другое постоянно или наполовину постоянно имплантированное медицинское устройство. Кровяные сгустки могут образовываться внутри или вокруг устройства или могут прикрепляться к любому устройству, которое введено в сосудистое пространство, особенно когда данное устройство остается в сосудистом пространстве в течение длительных периодов времени или когда устройство имеет одно или несколько очень маленьких отверстий. Кроме того, другие основанные на фибрине закупоривающие объекты могут прикрепляться к любой части стационарного устройства сосудистого доступа, что может препятствовать или мешать его надлежащему функционированию. Было бы полезно располагать быстрым и эффективным способом лечения, т.е. разрушения, растворения или лизиса сгустков или других закупорок, которые образовались внутри или вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикреплены к нему. В отсутствие эффективного способа лечения сгустков, которые образовались внутри или вокруг устройства сосудистого доступа, может потребоваться замена стационарного устройства врачом, что приводит к дополнительным расходам и риску для пациента. В соответствии с этим, целью настоящего изобретения является предоставление безопасного и эффективного способа лечения кровяного сгустка или закупорки внутри или вокруг стационарного устройства доступа. Также целью настоящего изобретения является предоставление способа восстановления раскрытого состояния полностью или частично закупоренного стационарного устройства сосудистого доступа. Дальнейшей целью настоящего изобретения является предоставление способа восстановления функциональности стационарного устройства сосудистого доступа, где функциональность была изменена закупоркой, основанной на фибрине. Также целью настоящего изобретения является предоставление безопасного и биологически эффективного пути применения местно введенных фибринолитических металлопротеиназ для лизиса кровяных сгустков in vivo. Сущность изобретения В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу терапевтического лечения кровяного сгустка в стационарном устройстве сосудистого доступа путем введения через указанное устройство для сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы в фармацевтически приемлемом растворе, где данное количество не превышало 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела подлежащего лечению субъекта-человека. В некоторых осуществлениях устройство сосудистого доступа стационарно установлено в артерии или вене субъектачеловека. В некоторых осуществлениях устройство сосудистого доступа представляет собой катетер,-3 007654 шунт, трансплантат для доступа, иглу или футляр. В некоторых осуществлениях устройство сосудистого доступа используется для введения или удаления жидкостей из сосудистой области. В некоторых осуществлениях устройство сосудистого доступа согласно изобретению используется в сочетании с гемодиализом, переливанием, удалением или обменом крови, химиотерапией или любой другой процедурой,которая требует введения или удаления жидкостей из вены или артерии. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу лизиса кровяных сгустков в стационарном устройстве сосудистого доступа путем местного введения в указанный сгусток некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2 макроглобулином, в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, без значительного превышения при этом уровня насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного субъекта-человека, в фармацевтически приемлемом растворе. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу восстановления раскрытого состояния полностью или частично закупоренного стационарного устройства сосудистого доступа. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу восстановления функции закупоренного стационарного устройства сосудистого доступа. Краткое описание чертежей Фиг. 1 А-1 С. Фиг. 1 А представляет собой фоновую ангиограмму сонной артерии взрослой свиньи перед индуцированным баллонным катетером повреждением и образованием закупоривающего тромба; фиг. 1 В - ангиограмму, снятую на 4 сутки у того же животного, перед введением NAT способом согласно изобретению; фиг. 1 С - ангиограмму через 2 ч после введения 30 мг NAT через катетер PRO (см. фиг. 3 для иллюстрации данного устройства); на фиг. 2 проиллюстрирован тип катетерного устройства, сконструированного для локализованной доставки тромболитического средства в кровеносный сосуд; фиг. 3 представляет собой вид на боковой разрез катетерного устройства альтернативного типа для локализованной доставки тромболитического средства в кровеносный сосуд; фиг. 4 представляет собой гистограмму оцененной максимальной дозы NAT у пациентов с периферической закупоркой сосудов; на фиг. 5 проиллюстрировано применение NAT в модели закупорки катетера in vitro; на фиг. 6 проиллюстрированы итоговые результаты 6 экспериментов, средние данные которых показывают, что NAT разрешает закупорки in vitro максимум на 40% быстрее Abbokinases Open Catо, коммерческого продукта урокиназы для очистки катетеров. Подробное описание изобретения В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу лечения кровяного сгусткаin vivo у субъекта-человека фибринолитической металлопротеиназой, охватывающему местное введении безопасного, биологически эффективного количества фибринолитической металлопротеиназы в кровяной сгусток, например, путем использования катетера или другого устройства сосудистого доступа. Обычно стационарные сгустки фибрина локализуются в кровеносном сосуде (артериальном или венозном, природном или синтетическом (например, трансплантат у субъекта-человека. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу лечения кровяного сгустка, расположенного внутри или вокруг стационарного катетера, шунта, иглы или другого устройства сосудистого доступа, или прикрепленного к нему. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу восстановления раскрытого состояния полностью или частично закупоренного стационарного устройства сосудистого доступа. В некоторых осуществлениях данное изобретение относится к способу восстановления функциональности стационарного устройства сосудистого доступа, где функциональность была изменена или в некоторой степени нарушена закупоркой, основанной на фибрине. Под безопасным, биологически эффективным количеством подразумевается количество, достаточное для деградации фибрина и облегчения лизиса сгустка (например, тромба), при том, что уровень фермента существенно не превышает уровень насыщения 2-макроглобулина в системе циркуляции подлежащего лечению пациента (т.е. уровни, которые могут вызывать повреждение стенок кровеносных сосудов). Обычно данное количество заключено в интервале от 0,025 до 1,7 мг на килограмм массы тела для подлежащего лечению субъекта-человека, что определено в исследовании, проведенном с образцами крови от субъектов-людей, которые изучали in vitro на содержание и связывающую способность 2 макроглобулина. Из результатов данного исследования in vitro можно определить насыщаемый уровень 2-макроглобулина in vivo для всех практических целей, что обеспечивает, таким образом, выявление биологически эффективного количества с учетом не только минимального уровня фибринолитической металлопротеиназы, требуемой для биологической эффективности, но также максимального уровня для хорошо переносимого введения. Данное исследование описано в дальнейших подробностях ниже среди примеров. Термины местно или местный, применяемые к пути доставки фибринолитической металлопротеиназы, указывают здесь на внутриартериальное или внутривенное введение или непосредственно в сам кровяной сгусток (т.е. внутрь тромба) или в непосредственной близости от сгустка (проксимально или-4 007654 дистально относительно кровотока), и достаточно близко для того, чтобы большая часть фибринолитической металлопротеиназы была поглощена сгустком. Для лечения сгустков, находящихся внутри или вокруг устройства сосудистого доступа, или прикрепленных к нему, или для восстановления раскрытого состояния или функции устройства сосудистого доступа, доставка фибринолитической металлопротеиназы главным образом осуществляется через само устройство сосудистого доступа и поэтому, по существу, является местной. В некоторых осуществлениях вторичное устройство сосудистого доступа, такое как катетер, может использоваться для доставки фибринолитической металлопротеиназы в имплантированное медицинское устройство, такое как эндопротез сосуда. Термин катетерное средство доставки или устройство сосудистого доступа используется здесь в общепринятом смысле, указывающем на трубчатое медицинское устройство для вставки в каналы, сосуды, ходы или полости тела для целей инъекции или отбора жидкостей или для поддержания хода открытым. В общем, такие средства обычно включают в себя удлиненный гибкий корпус катетера, содержащий один или несколько внутренних ходов (или просветов); проксимальную часть, обеспечивающую введение материала (т.е. средству лизиса сгустка) в корпус катетера и его протекание через просвет; дистальную часть, необязательно имеющую конический конец; и один или несколько выходных портов на конце дистальной части или вблизи нее для обеспечения выхода материала из катетера в ответ на прилагаемое давление. Используемые здесь термины протеолитическая деградация, растворение, лизис и терапевтическое лечение все используются здесь для ссылки на деградацию, дезинтеграцию, декомпозицию,распад или другое удаление кровяного сгустка или другой основанной на фибрине закупорки. Кровяной сгусток может частично или полностью закупоривать просвет сосуда или медицинского устройства. Сходным образом, восстановление раскрытого состояния относится к любому измеряемому усилению кровяного потока (например, по объему или скорости) через сосуд или просвет устройства или выходной порт из-за растворения там кровяного сгустка. Используемый здесь термин кровяной сгусток или закупорка относится к любой массе, скоплению, затруднению или разрастанию на основе фибрина. Обычно кровяные сгустки являются результатом свертывания крови в артерии или вене и ослабляют, затрудняют, мешают или полностью или частично блокируют поток крови через эти сосуды. Кровяные сгустки также могут образовываться внутри или вокруг любого чужеродного объекта, введенного в сосудистое пространство. Кровяные сгустки могут быть стационарными, такими как тромб (кровяной сгусток, который образуется в сосуде и остается там) или могут перемещаться, как эмбол (кровяные сгустки, которые двигаются от участка, где они образовались, в другое место организма). Кровяные сгустки также могут широко варьировать по размеру,форме и композиции и могут включать в себя сферические массы, а также лоскуты или другие плоские структуры. Иногда кусок атеросклеротической бляшки, маленькие кусочки опухоли, жировые глобулы,воздух, амниотическая жидкость или другие материалы, находящиеся в крови, могут действовать тем же образом, что и кровяной сгусток. Если данные массы содержат фибрин или другие вещества, чувствительные к деградации под действием фибринолитической металлопротеиназы, то один из способов согласно изобретению может использоваться для их лечения. Другой способ согласно изобретению далее иллюстрируется ниже в отношении закупорки периферических артерий (РАО). РАО происходит из заболевания периферических сосудов вследствие атеросклероза. Симптомы развиваются медленно в течение многих лет по мере прогрессирования атеросклероза, с критическим уровнем ишемии, достигаемым примерно у 15-20% пациентов с заболеванием нижних конечностей. Медикаментозное лечение ограничено и преимущественно направлено на профилактику или снижение риска, с использованием медикаментов, таких как средства снижения уровня липидов или противотромбоцитарные средства, программ отмены курения и физических упражнений. Jackson andClagett, Chest, Volume 114, pp. 666S-682S (1998). Клинические проявления заболевания периферических сосудов могут включать в себя острые приступы угрожающей конечности ишемии или более хронические признаки заболевания сосудов (например, перемежающаяся хромота). Кроме указанных выше превентивных мер, хроническую РАО обычно не лечат до начала умеренного ограничения образа жизни или угрожающей конечности ишемии. В зависимости от затронутого сегмента сосуда и степени закупорки, доступное медицинское вмешательство включает в себя подкожную транслюминальную ангиопластику, хирургическую реваскуляризацию и тромболиз. Исследования показали, что внутривенная инфузия средств лизиса сгустка, особенно на ранних стадиях закупорки, может предотвращать необходимость хирургического вмешательства. Как продемонстрировано в испытании Rochester, где сравнивали тромболиз активатором плазминогена урокиназой, с хирургией при лечении острой РАО (Ouriel et al., Journal of Vascular Surgery, 1994, Volume 19, pp. 1021-1030), примерно 33% пациентов в части исследования с тромболизом успешно излечивались лишь в результате медикаментозного вмешательства, избегнув, таким образом, более инвазивной процедуры. Наоборот, 98% пациентов оперативной части исследования подвергались эндоваскулярной или хирургической процедуре. Другие медицинские нарушения, где участвуют закупоренные кровяные сгустки, можно эффективно лечить сходным образом настоящим способом, среди них в качестве неограничивающих примеров -5 007654 острый инфаркт миокарда, ишемический инсульт, глубокий тромбоз вен и легочную эмболию. В некоторых осуществлениях способ согласно изобретению может также использоваться для растворения сгустков, которые происходят в постоянно имплантированных медицинских устройствах, таких как стационарные катетеры и трансплантаты доступа для гемодиализа. Другие типовые имплантированные медицинские устройства включают в себя шунты, части для доступа, иглы, футляры или другие устройства сосудистого доступа. В некоторых осуществлениях данное изобретение может использоваться для терапевтической доставки любой фибринолитической металлопротеиназы, которая способна образовывать комплекс с 2 макроглобулином. Такие фибринолитические металлопротеиназы, если встречаются в природе, могут быть очищены из их природных источников, например, фибролаза из змеиного яда. Альтернативно, полипептидные средства - фибринолитические металлопротеиназы, последовательности нуклеиновой кислоты и аминокислотные последовательности которых известны, могут продуцироваться путем использования общепринятых способов рекомбинантной экспрессии и очистки. В общем, в рекомбинантных способах используется молекула ДНК, кодирующая интересующую фибринолитическую металлопротеиназу, которая встроена в подходящий вектор для экспрессии в подходящей клетке-хозяине. Вектор выбирают, чтобы он был функциональным в конкретной используемой клетке-хозяине, т.е. совместим с механизмом клетки-хозяина, так, что может происходить экспрессия ДНК. Векторы также могут содержать 5'-фланкирующую последовательность (также обозначаемую как промотор) и другие элементы регуляции экспрессии, функционально связанные с подлежащей экспрессии ДНК, а также другие известные элементы, такие как элемент инициации репликации, элемент терминации транскрипции, полную последовательность интрона, содержащую донорный и акцепторный участки сплайсинга, последовательность сигнального пептида, элемент - участок связывания рибосомы,последовательность полиаденилирования, полилинкерную область для вставки кодирующей нуклеиновой кислоты и элемент - маркер селекции. Данный вектор может также необязательно содержать последовательность-метку, т.е. олигонуклеотидную последовательность, локализованную на 5'- или 3'-конце последовательности, кодирующей полипептид, которая кодирует поли-His или другую малую иммуногенную последовательность. Данная метка будет экспрессироваться вместе с интересующим белком и может служить в качестве аффинной метки для очистки данного полипептида из клетки-хозяина. Если это требуется, метка может впоследствии удаляться из очищенного белка различными способами, например, с использованием селективной пептидазы. В тех случаях, где требуется, чтобы полипептид секретировался из клетки-хозяина, может использоваться сигнальная последовательность для направления полипептида из клетки-хозяина, где он синтезировался. Обычно сигнальная последовательность расположена в кодирующей области последовательности нуклеиновой кислоты или непосредственно с 5'-конца кодирующей области. Были идентифицированы многие сигнальные последовательности, и могут использоваться любые, которые функциональны в выбранной клетке-хозяине. После того, как вектор сконструирован и нуклеиновая кислота встроена в надлежащий участок вектора, завершенный вектор может быть встроен в подходящую клетку-хозяин для амплификации и/или экспрессии полипептидов. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими (как Е. coli) или эукариотическими (как дрожжевая клетка, клетка насекомого или клетка позвоночных). Подходящие клетки или клеточные линии хозяина могут представлять собой клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО) или клетки 3 Т 3. Выбор подходящих клеток хозяина-млекопитающего и способы трансформации, культивирования, амплификации, скрининга и продукции и очистки продукта известны в данной области. Другие подходящие клеточные линии млекопитающих представляют собой клеточные линии обезьян COS-1 и COS-7, и клеточную линию CV-1. Дальнейшие типовые клетки хозяина-млекопитающего охватывают клеточные линии приматов и клеточные линии грызунов, включая трансформированные клеточные линии. Нормальные диплоидные клетки, клеточные линии, происходящие из культуры первичной ткани in vitro, а также первичные эксплантаты, также являются подходящими. Клетки-кандидаты могут иметь генотипический дефицит по гену селекции или могут содержать ген селекции доминантного действия. Другие подходящие клеточные линии млекопитающих охватывают в качестве неограничивающих примеров HeLa, мышиные клеткиL-929, линии 3 Т 3, происходящие от мышей Swiss, Balb-c или NIH, клеточные линии хомячков ВНК или НаK. Также в качестве клеток-хозяев могут применяться бактериальные клетки, например, различные штаммы Е. coli, и различные штаммы дрожжевых клеток. Встраивание (также обозначаемое как трансформация или трансфекция) вектора в выбранную клетку-хозяин может выполняться с использованием таких способов, как кальций-фосфатный, электропорация, микроинъекция, липофекция или способ DEAE-декстран. Выбранный способ частично является функцией используемого типа клетки-хозяина. Данные способы и другие подходящие способы хорошо известны специалистам в данной области. Клетка-хозяин при культивировании в подходящих условиях может синтезировать интересующую-6 007654 фибринолитическую металлопротеиназу. Клетки-хозяева могут культивироваться с использованием стандартных сред, хорошо известных специалистам в данной области. Данные среды обычно содержат все питательные вещества, необходимые для роста и выживания клеток. Подходящими средами для культивирования клеток Е. coli являются, например, бульон Luria (LB) и/или бульон Terrific (ТВ). Подходящими средами для культивирования эукариотических клеток являются RPMI 1640, MEM, DMEM,причем все они могут дополняться сывороткой и/или факторами роста, как это требуется для культивирования конкретной клеточной линии. Обычно в качестве дополнения к среде добавляют антибиотик или другое вещество, которое может применяться для селективного роста трансформированных клеток. Конкретное используемое соединение определяется конкретным элементом-маркером селекции, присутствующем на плазмиде, которой трансформирована данная клетка-хозяин. Например, там, где маркер селекции обеспечивает устойчивость к канамицину, добавляемым к культуральной среде соединением будет канамицин. Количество белка, продуцируемого в клетке-хозяине, может оцениваться с использованием стандартных способов, известных в данной области, включая анализ путем вестерн-блота, SDS-электрофорез в полиакриламидном геле, неденатурирующий гель-электрофорез, разделение путем ВЭЖХ, иммунопреципитация и/или анализы активности, такие как анализы связывания ДНК путем оценки сдвигов в геле. Если белок секретируется из клетки-хозяина, отличной от грамотрицательной бактерии, большая часть его, вероятно, будет находиться в культуральной среде клеток. Если он не секретируется, он будет присутствовать в цитоплазме. В случае внутриклеточного белка клетки хозяина обычно вначале разрушают механически. В случае белка, характеризующегося периплазматической локализацией, для высвобождения периплазматического содержимого в буферный раствор могут применяться механическое разрушение или осмотическая обработка, и затем полипептид выделяют из данного раствора. Очистка из раствора может затем выполняться с использованием различных способов. Если белок синтезируется так, что он содержит метку, такую как гексагистидин или другой, малый пептид на своем С- или N-конце, он может быть, по существу, очищен в одностадийной процедуре путем пропускания раствора через аффинную колонку, где матрикс колонки характеризуется высоким сродством в отношении данной метки или непосредственно в отношении полипептида (т.е. моноклональное антитело). В случае, если полипептид не имеет метки, и антитело недоступно, для очистки могут применяться другие хорошо известные процедуры, например, ионообменная хроматография, хроматография на молекулярных ситах, хроматография на обращенной фазе, ВЭЖХ, нативный гель-электрофорез в сочетании с элюцией из геля, и препаративное изоэлектрофокусирование (прибор/способ Isoprime, HoeferScientific). В некоторых случаях для достижения повышенной чистоты могут комбинироваться два или большее число способов. Полипептид - новый действующий тромболитик (NAT), использованный здесь для иллюстрации воплощения данного изобретения, в основном относится к фибринолитически активной металлопротеиназе SEQ ID NO: 1. Полипептид NAT кодируется молекулой кДНК с SEQ ID NO: 2, хотя любая молекула ДНК с вариантной последовательностью, кодирующей тот же самый полипептид, может использоваться для экспрессии и производства в соответствии с конкретными способами, дальнейшие ссылки на которые приведены ниже. Фибролаза описана в научной и патентной литературе; см. ссылки, приведенные выше. Обычно форма фибролазы, которая используется при воплощении данного изобретения, характеризуется последовательностью SEQ ID NO: 3, которая кодируется молекулой кДНК SEQ ID NO: 4 или ее вариантами,кодирующими ту же аминокислотную последовательность. Предпочтительно для рекомбинантной экспрессии NAT используется дрожжевая система экспрессии. Особое внимание уделяется штаммам Pichia, например, Pichia pastoris, как обладающим максимальным преимуществом и предпочтительным для применения. Подробное описание такой системы может быть обнаружено в патенте США 4855231 (Stroman et al.), патенте США 4812405 (Lair et al.), патенте США 4818700 (Cregg et al.), патенте США 4885242 (Cregg), и патенте США 4837148 (Cregg),описания которых включены сюда в качестве ссылки. При экспрессии фибролазы в такой системе обычно используется молекула ДНК SEQ ID NO: 5, кодирующая препро-последовательность (нуклеотиды 1-783), в дополнение к зрелому полипептиду (нуклеотиды 784-1392). При экспрессии NAT в такой системе обычно используется молекула ДНК SEQ ID NO: 6, кодирующая препро-последовательность(нуклеотиды 1-783), в дополнение к зрелому полипептиду (нуклеотиды 784-1386). Фибринолитическую металлопротеиназу, использованную согласно изобретению, независимо от того, представляет ли она собой NAT, фибролазу, или некоторую другую фибринолитическую металлопротеиназу, вводят в виде фармацевтически приемлемого раствора, отдельно или в присутствии дополнительных фармацевтически приемлемых ингредиентов. Если это требуется, такой раствор может включать в себя, в дополнение к фибринолитической металлопротеиназе и растворителю (т.е. дистиллированной воде или физиологическому раствору), стандартные ингредиенты, такие как стабилизаторы (для предотвращения агрегации белка или физической или химической деградации водных сред), наполнители (для обеспечения наполнения), разбавители, антибактериальные средства, антиоксиданты и так далее,в общепринятых количествах. Известные наполнители, которые могут быть включены в композицию,-7 007654 охватывают многоатомные спирты (включая маннит, сорбит и глицерин); сахара (включая глюкозу и сахарозу); и аминокислоты (включая аланин, глицин и глутаминовую кислоту). См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Истон, Пенсильвания. См. также WO 01/24817 А 2 (которая включена сюда полностью в качестве ссылки), где описаны различные композиции фибринолитических средств, используемых согласно настоящему изобретению. Требуется, чтобы фармацевтическая композиция была забуферена перед введением (биологически совместимым буферным средством, например, лимонной кислотой или солью лимонной кислоты) до рН,нейтральной или близкой ней (7,0) и обычно составляющей от 6,5 и до 8,0 (0,5). Если ион металла фибринолитической металлопротеиназы представляет собой цинк, как в фибролазе или NAT, будет предпочтительно включить в качестве стабилизатора водорастворимую соль цинка(например, сульфат цинка или ацетат цинка). Для дальнейшего усиления долгосрочной стабильности и срока хранения композиции также является предпочтительным замораживать раствор или преобразовывать его в лиофилизованный (высушенный вымораживанием) продукт, который оттаивает или восстанавливается перед использованием, в зависимости от обстоятельств. В порядке иллюстрации, замораживаемая жидкая медицинская композиция, которая может использоваться согласно способу данного изобретения, включает в себя фибролазу или NAT, водорастворимую цинковую соль, буфер на основе лимонной кислоты, необязательно дополнительный стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из водорастворимых солей кальция, и, необязательно, наполнитель (например, маннит). Для увеличения стабильности при замораживании-оттаивании может также добавляться поверхностно-активное вещество, такое как Tween 80 (BASF, Gurnee, Иллинойс). Буфер Tris (Sigma,St. Louis, Миссури) или другой буфер с буферной емкостью выше рН 7,0 может добавляться для стабилизации рН на уровне рН 7,4 или выше. Большая часть данных ингредиентов присутствует в малых количествах, изменяющихся от 0,001 до 2,0 ммоль/л (мМ), или в количествах менее 10% (мас./об.). Буферное средство добавляют в количестве, достаточном для достижения требуемого значения рН, и данное количество может изменяться в зависимости от конкретного препарата. В порядке дальнейшей иллюстрации, лиофилизируемая или лиофилизированная фармацевтическая композиция, которая может использоваться согласно способу данного изобретения, включает в себя фибролазу или NAT, цинковый стабилизатор (например, водорастворимую соль цинка, такую как указанные выше) и буфер на основе лимонной кислоты, с другими наполнителями (например, такими наполнителями как маннит, глицин и т.д.) или без них. Лиофилизованная композиция также может содержать сахар-дисахарид, такой как сахароза или трегалоза, в качестве средства защиты при лиофилизации. Для защиты фибринолитической металлопротеиназы (например, фибролазы или NAT) от стрессов лиофилизации может добавляться поверхностно-активное вещество, такое как Tween 80. рН в идеале поддерживается на уровне рН 8,00,5 с использованием подходящего буфера с pKa в данном интервале (например, Tris). Количество ингредиентов соответствует указанным выше. Как отмечалось, в некоторых осуществлениях способ согласно изобретению использовали для местного введения биологически эффективных количеств фибринолитической металлопротеиназы в интервале дозировок от 0,025 до 1,7 мг/кг. Предпочтительно, данное количество будет заключено в интервале примерно от 0,1 до 0,5 мг/кг. Концентрация раствора составляется в соответствии с этим в разведениях,на которые влияют потребности введения. В отличие от лечения тромбоза природной артерии или вены, такого как РАО, лечение кровяного сгустка, находящегося в имплантированном или стационарном устройстве сосудистого доступа, связано с дополнительными затруднениями. Например, в случае закупорки центральной венозной линии мертвый объем катетера (т.е. внутренний диаметр катетера, умноженный на его длину) определяет максимальный объем, который может быть помещен внутрь катетера. Например, катетер с внутренним диаметром 1,0 мм и длиной 40,0 см обладает мертвым объемом, составляющим 0,3 мл. Поскольку объем может быть столь ограниченным, важно определить надлежащую концентрацию раствора. Соответственно, повышенная концентрация раствора является эффективным средством для увеличения количества лекарственного средства, доступного для растворения целевого кровяного сгустка. В некоторых осуществлениях способ согласно изобретению касается применения фибринолитической металлопротеиназы для лечения закупорок, ассоциированных с устройством сосудистого доступа. Такие сгустки могут находиться внутри или вокруг устройства сосудистого доступа или могут быть прикреплены к нему. Обычно сгустки образуются в просвете или выходном порте устройства, такого как катетер, и могут препятствовать функционированию катетера. Сгустки также могут находиться снаружи устройства сосудистого доступа, в виде нашлепки, которая может закрывать выходной порт и, таким образом, предотвращать введение лекарственного средства или забор крови. Сгустки также могут прикрепляться к устройству сосудистого доступа, что препятствует надлежащему функционированию устройства. Данная помеха может быть результатом частичной закупорки или блокады, т.е. когда некоторая часть жидкости может проходить, или полной закупорки, при которой жидкость проходить не может. Для демонстрации одного из способов согласно изобретению использовали модель закупорки катетера in vitro для симуляции сгустка в устройстве типа стационарного катетера. В данной модели покрытые коллагеном пастеровские пипетки использовали для симуляции стационарной части катетера. Кровь-8 007654 человека забирали посредством палочки для взятия крови из пальца под действием капиллярных сил на длину 3,0 мм, и давали ей возможность свернуться. Кончик одной из пипеток вводили в пузырек, содержащий солевой раствор, а другой - в раствор 4 мг NAT (100 мкл с концентрацией раствора 40 мг/мл). На фиг. 5 проиллюстрированы результаты данной модели закупорки катетера in vitro, которые указывают на то, что сгусток в солевом растворе остается интактным, в то время как раствор 40 мг/мл активно растворяет сгусток. В другом эксперименте отдельную группу пипеток (каждая из которых содержит на своем конце кровяной сгусток) вводили и инкубировали в пузырьке, содержащем следующее: 100 мкл солевого раствора, 100 мкл раствора урокиназы (5000 МЕ/мл) и 100 мкл раствора NAT, где количество лекарственного средства изменялось от 0,5 до 4 мг при увеличении концентрации раствора от 5 до 40 мг/мл. На фиг. 6 проиллюстрированы итоговые результаты многочисленных экспериментов, где полученные в результате средние данные показывают, что NAT разрешает закупорки in vitro максимум на 40% быстрее, чем Abbokinase Open Cath, коммерческий продукт урокиназы для очистки катетера (вторая колонка, 500 ME Великобритании). На фиг. 6 также демонстрируется зависимая от дозы природа NAT, в понятиях скорости, с которой действует NAT, протеолитически расщепляя кровяной сгусток. Для лечения относительно малой закупорки стационарного катетера, такой как симулированная моделью закупорки катетера in vitro, предпочтительный интервал для лечения может составлять примерно от 5 до 40 мг/мл фибролазы, NAT или другой фибринолитической металлопротеиназы. Однако в зависимости от типа и размера устройства сосудистого доступа или другого медицинского устройства, и положения, размера и степени сгустка или закупорки, могут требоваться меньшие или большие дозы. Например, сгусток в относительно большом шунте для гемодиализа будет, вероятно, требовать более высокой концентрации фибринолитической металлопротеиназы, чем сгусток, блокирующий выходной порт катетера диаметром 10 мм. В соответствии с этим, концентрации для данного показания могут изменяться в пределах от 0,1 мг/мл или менее до значений свыше 80 мг/мл. Для кровяных сгустков, находящихся внутри, вокруг стационарного катетерного устройства или прикрепленных к нему, эффективная доза может доставляться любыми путями, включая пульсирующую инфузию, длительную инфузию, болюсное введение или комбинацию всех трех. За счет сложностей, вызванных затруднениями мертвого объема, в общем, предпочтительным является болюсное введение. В обычном случае способ согласно изобретению осуществляется в сочетании с управляемой катетером процедурой тромболиза. Такие процедуры охватывают применение предварительно стерилизованного устройства доставки лекарственного средства катетерного типа, боковые стенки которого могут быть сделаны из тонкого, полужесткого или гибкого биологически совместимого материала (например,полиолефина, фторполимера или другого инертного полимера). В общем, подходящие катетеры содержат по меньшей мере одну внутреннюю полость (или просвет), проходящую по всей длине устройства. Материал, из которого сконструирован катетер, является достаточно гибким для того, чтобы двигаться внутри сосудистого русла без причинения травмы стенкам кровеносных сосудов, но при этом достаточно жестким для того, чтобы дотянуться до участка обработки, притом, что внутренняя полость устройства остается полностью расширенной. Обычно такое катетерное устройство изменяется в интервале от 2 до 20 по французской шкале для диаметров катетеров (1/3 мм равняется 1 французской единице) и составляет в длину от 2 до 6 футов или более. Типовые катетерные устройства для внутрисосудистой доставки тромболитических лекарственных средств согласно изобретению проиллюстрированы на фиг. 2 и 3, виды практического применения которых подробно описаны в приведенных ниже примерах. Однако может использоваться любое общепринятое устройство катетерной доставки или сосудистого доступа, которое подходит для данного способа,включая, в качестве неограничивающих примеров, указанные здесь конкретные устройства. Например, на фиг. 2 проиллюстрирован тип катетерного устройства, сконструированного для локализованной доставки тромболитического средства в кровеносный сосуд. Устройство, показанное в боковом поперечном разрезе, содержит боковые отверстия в конце доставки, через которые испускается продукт инфузии (тромболитическое средство) при приложенном давлении жидкости. Диаметры катетерных трубок на данной фигуре и последующей фигуре увеличены относительно общего размера для лучшего отображения деталей. См. также фиг. 3, на которой иллюстрируется боковой поперечный разрез альтернативного типа катетерного устройства для локализованной доставки тромболитического средства в кровеносный сосуд. Данное устройство содержит узкие щели, обозначаемые как выходные отверстия для ответа на давление (PRO), которые прорезаны в стенке катетера с регулярными интервалами, так,что продукт инфузии выходит при достижении давления жидкости внутри катетера критической точки,что вызывает открывание щели. Данное устройство может использоваться в сочетании с автоматическим, управляемым поршнем, устройством пульсовой инфузии (не показано, но описано ниже), способным доставлять порции лекарственного средства для инфузии. Для кровяных сгустков, которые находятся в вене или артерии и не ассоциированы с введением устройства сосудистого доступа или другого медицинского устройства, эффективная доза фибринолитической металлопротеиназы может доставляться через катетер в локальный участок обработки путем пульсирующей инфузии, непрерывного введения, болюсной инфузии или сочетания всех трех способов.-9 007654 Сила раствора (т.е. концентрация) фибринолитической металлопротеиназы в растворе для лечения также является значимым параметром для данных типов сгустков. Более конкретно, следует выбрать интервал между минимальным разведением фибринолитической металлопротеиназы для эффективности на нижней границе (что особенно важно для болюсного введения) и максимальной растворимостью фибринолитической металлопротеиназы на высшей границе. В общем, используют концентрации растворов, находящиеся в пределах примерно от 0,1 до 80 мг/мл. Затем выбирают объем болюса (или общий объем множественных болюсов в случае пульсовой доставки) для доставки эффективного количества фибринолитической металлопротеиназы в предписанных выше пределах. Описание конкретных осуществлений Изобретение далее иллюстрируется следующими примерами, которые, как подразумевается, являются только иллюстративными и не ограничивают изобретение описанными осуществлениями. В данных примерах и по всему описанию данного изобретения кг означает килограммы массы тела тестируемого субъекта, мг означает миллиграммы, мл означает миллилитры и мин означает минуты. Иллюстрируемая фибринолитическая металлопротеиназа, а именно, новый действующий тромболитик(NAT), получена рекомбинантным способом и создана согласно способам, указанным выше. Пример 1. Тромболиз при подостром тромбозе общей сонной артерии взрослых свиней.NAT исследовали в модели подострого тромбоза сонной артерии у взрослых свиней со средней массой тела 75 кг в контрактной лаборатории (Charles River Laboratories, Southbridge, Массачусетс). Назначением данного исследования было определение фибринолитической активности NAT в модели тромбоза, которая имеет отношение к закупорке периферических артерией у человека. В данной модели на животных сонную артерию подвергали тромбозу по всей ее длине (примерно 20 см от ее начала у аорты до бифуркации сонной артерии) сочетанием баллонного повреждения, тромбина и застоя. Размер тромба приближается к размеру тромба, встречающегося у человека с закупоркой периферических артерий. После успешного тромбоза животным позволяли восстанавливаться в течение четырех суток. Четырехсуточный период выбирали для обеспечения интенсивного перекрестного связывания фибрина, ремоделирования тромба и инфильтрации клеток. Примечательно, что размер и возраст тромба в данной модели вполне обоснованы в плане величины или длительности симптомов ишемии, о которых сообщали в последнем опубликованном испытании TOPAS тромболиза активаторами плазминогена при закупорке периферических артерий у человека. Для ссылки см. Ouriel et al., New EnglandJournal of Medicine, Volume 338, pp. 1105-1111 (1998). В кратком изложении, общая сонная артерия может быть подвергнута тромбозу по всей ее длине путем баллонного повреждения, направляемого флуороскопией. Используемые баллоны характеризуются повышенным размером и не соответствуют диаметру сосуда. Баллоны заполняют газом при давлениях выше двенадцати атмосфер, что вызывает сдавливающее повреждение внутреннего слоя сосуда. В то время как баллон раздувается, его двигают назад и вперед для того, чтобы сорвать эндотелий сосудов. Процедура применения баллонов очень травматична и приводит к образованию высоко тромбогенной поверхности сосудов, и повторяется во всей длине общей сонной артерии. После тщательного повреждения всей артерии баллон отводят назад в проксимальное положение вблизи аорты и раздувают для прекращения тока через сосуд. После закупорки через дистальный порт баллонного катетера вводят 50 ед. бычьего тромбина для стимуляции свертывания. Баллон остается раздутым в течение периода 30 мин, что приводит к тромботической закупорке сосуда. Через 30 мин баллон сдувают и записывают ангиограмму для подтверждения того, что сосуд стал закупоренным. С данными процедурами закупорка сосуда осуществлялась более чем в 90% случаев. На фиг. 1 А представлена фоновая ангиограмма сонной артерии взрослой свиньи перед индуцированным баллонным катетером повреждением и образованием закупоривающего тромба. Стрелки показывают положение и присутствие контрастирующей среды в левой общей сонной артерии, указывая на то, что ток крови в данной артерии не прекращен (т.е. кровеносный сосуд раскрыт или имеет ). Фиг. 1 В представляет собой ангиограмму, полученную на 4 сутки у того же животного перед введением NAT согласно способу данного изобретения. Стрелка указывает на положение левой общей сонной артерии,однако, контрастирующая среда не течет в артерии вследствие присутствия закупоривающего тромба. Фиг. 1 С представляет собой ангиограмму через 2 ч после введения 30 мг NAT через катетер PRO (см. фиг. 3 для иллюстрации данного устройства). Стрелка указывает на наличие в сосуде контрастирующей среды, что демонстрирует восстановление раскрытия левой каротидной артерии. Минимальный остаточный тромб виден в просвете артерии. После того как тромбоз произошел, баллонный катетер, направляющий катетер и футляр для доступа удаляют, и животному дают возможность восстанавливаться в течение четырех суток. На четвертые сутки животных подвергали повторной анестезии, опять подтверждали наличие закупорки, и под контролем флуороскопии проводили катетер для доставки лекарственных средств с множественными отверстиями (см. фиг. 2 и 3), и располагали его так, что боковые отверстия локализовались внутри тромба. Тромболиз за счет NAT наблюдали ангиографически с использованием фиксированных дозировок NAT,которые изменялись от 10 до 30 мг (или примерно от 0,1 до 0,4 мг/кг на основе массы), как показано на фиг. 1 А-1 С.- 10007654 Как проиллюстрировано изображением на фиг. 1B, NAT эффективен в восстановлении антеградного потока, что оценивали путем ангиографии. Для более количественной оценки поток через целевой сосуд подсчитывали количественно по 4-балльной шкале (в интервале от 0 до 3), где 0 = нет потока,1 = поток по оценке составляет менее 30% от такового в противоположной (нетромбозированной) сонной артерии,2 = поток по оценке составляет 30-80% от такового в противоположной сонной артерии,3 = поток, который не отличается от такового в противоположной сонной артерии. Изображению, показанному на фиг. 1 В, начисляли степень потока, эквивалентную трем (3), что является часто встречающимся результатом в тромбозированных сосудах, обработанных фиксированной 30 мг дозировкой NAT (примерно 0,4 мг/кг на свинью массой 75 кг). Табл. 1-3 в следующих ниже примерах иллюстрируют режим лечения и средние коэффициенты потока, полученные из серийных ангиограмм. Во всех исследованиях непрерывно осуществляли мониторинг дыхания, температуры тела, частоты сердечных сокращений и артериального давления крови, и данные характеристики оставались в физиологических пределах без изменений, наблюдаемых после введения NAT. Пример 2. Выбор катетеров PRO и импульсно-распылительной доставки. При клиническом обслуживании закупорки периферических артерий тромболитические средства доставляли через катетеры, которые расположены вблизи или тромба или погружены в него. Как показано на фиг. 2 и 3, имеется два типа обычно применяемых катетера. Одна из разновидностей, катетер с боковыми отверстиями (фиг. 2), имеет очень маленькие круглые боковые отверстия (2), прорезанные в катетере (4) вблизи закрытого дистального конца 6, и выходной порт 8 (для раствора фибринолитической металлопротеиназы) в уплотнительном кольце 10, прикрепленном к проксимальному концу 12. Катетер 4 сконструирован из гибкого, продолговатого, биосовместимого полимерного трубочного материала, полого и тонкостенного, с однородным диаметром от 2 до 20 французских единиц, и, предпочтительно, от 3 до 5 французских единиц. Катетер содержит два непроницаемых для излучения маркера 14 на внешней поверхности вблизи дистального конца 6, которые отграничивают часть катетера, содержащую боковые отверстия 2. На практике данный катетер вставляют в хирургическое отверстие в закупоренной артерии или вене, и под наблюдением путем флуороскопии по принятым стандартным процедурам осторожно продвигают по кровеносному сосуду, так что дистальный конец 6 располагается внутри или вблизи тромба. Маркеры 14, которые явственно выявляются на изображении флуороскопа, могут служить для управления расположения данной части катетера, так что продукт инфузии, исходящий из боковых отверстий 2, будет непосредственно контактировать с тромбом. Затем фармацевтический раствор фибринолитической металлопротеиназы впрыскивают при мягком давлении из подобного шприцу резервуара 16 во входной порт 8 и продвигают в направлении дистального конца 6 с его выходом через отверстия 2 в тромб, вызывая деградацию фибринозного материала. Когда инфузии фибринолитической металлопротеиназы проводили с использованием данного типа катетера, большая часть содержащего фибринолитическое средство раствора стремится выйти через проксимальные боковые отверстия (т.е. ближайшие к выходному порту 8 для лекарственного средства), что вносит отрицательный вклад в однородность доставки лекарственного средства в участок лечения. Также имеется возможность обратного тока крови внутрь катетера через боковые порты 2 при отрицательном давлении. Другая разновидность катетера, также состоящая из полого тонкостенного биологически совместимого полимерного материала, показанного на фиг. 3, имеет исключительно тонкие щели 2, которые прорезаны лазером в гибком катетере 4 с регулярными интервалами вблизи закрытого дистального конца 6. Данные щели, которые обозначены как выходные отверстия для ответа на давление (PRO), являются достаточно тесными для того, чтобы продукт инфузии не выходил до достижения давления жидкости внутри катетера критической точки и стимуляции одновременного расширения данных щелей и, таким образом, их временного открытия. Катетер также может содержать внешние непроницаемые для излучения маркеры 8 для помощи расположения данного устройства в участке тромба. В идеале такие инфузионные катетеры PRO используют в сочетании с автоматическим, управляемым поршнем, устройством пульсовой инфузии (не показано), способным доставлять регулируемые порции лекарственного средства для инфузии малого объема во входной порт 10 в уплотнительном кольце 12, прикрепленном к проксимальному концу 14 катетера 4. Когда порция доставлена, давление внутри катетера моментально возрастает. В ответ выходные отверстия для ответа на давление (щели 2) моментально открываются и позволяют продукту инфузии (например, фармацевтическому раствору фибринолитической металлопротеиназы) выйти. Теоретическое преимущество импульсной доставки продукта инфузии и катетера типа PRO состоит в том, что продукт инфузии доставляется однородно через щели по всей длине катетера, в то время как продукт инфузии, доставляемый через катетер с боковыми отверстиями (фиг. 2), следует по пути наименьшего сопротивления и, как указывалось, вытекает из проксимальных боковых щелей в неоднородной манере. Модель на свиньях четырехсуточного тромбоза сонной артерии использовали для оценки производительности двух указанных выше типов катетеров, с применением фиксированных дозировок 30 мгNAT (примерно 0,4 мг/кг на свинью массой 75 кг). Результаты суммированы в табл. 1. Таблица 1 Сравнение ангиографических коэффициентов потока, полученных с NAT при использовании катетера с боковыми отверстиями и инфузионного катетера PRO СМ: клапанный инфузионный катетер с боковыми отверстиями Cragg-McNamara (Micro Therapeutics, Inc.,San Clemente, Калифорния). PS: пульсово-распылительная доставка, определяемая путем использования катетера с выходными отверстиями для ответа на давление (PRO) (UniFuse Catheter, AngioDynamics, Inc., Queensbury, НьюЙорк), используемые в сочетании с автоматическим, пульсовым устройством инфузии (PULSESPRAY INJECTOR Как показано в табл. 1, ангиографические коэффициенты потока в группе, обработанной пульсовораспылительным вариантом, характеризовались чуть более высокими начальными коэффициентами потока на 30-минутной ангиограмме, что сохранялось до 4-часовой временной точки. Хотя статистически значимых различий не было получено, результаты ангиограмм в общем следует расценивать как соответствующие указанным выше. Поэтому катетер типа PRO в сочетании с пульсово-распылительной доставкой является предпочтительным способом доставки фибринолитической металлопротеиназы в сочетании с данным изобретением. Пример 3. Оценка времени доставки лекарственного средства. Острую закупорку периферических артерий обычно лечат активаторами плазминогена, такими как урокиназа, доставляемыми в виде инфузии, которая часто длится 24 ч, и иногда в течение 48 ч. Длительная инфузия предполагает поддержание низкого уровня образования плазмина в течение продолжительного периода времени для эффективного растворения закупоривающего тромба. Поскольку NAT и фибролаза являются фибринолитическими металлопротеиназами, такие продолжительные инфузии могут оказаться ненужными. Для оценки того, влияет ли скорость доставки на лизис сгустка по ангиографии,фиксированную дозу 30 мг NAT (примерно 0,4 мг/кг на свинью массой 75 кг) доставляли с использованием катетеров PRO и пульсово-распылительного устройства. С использованием пульсов объемом 0,1 мл 5 мг/мл раствор NAT доставляли в течение 6 мин (10 пульсов в минуту) или в течение 60 мин (один пульс в минуту). Результаты показаны в табл. 2.- 12007654 Таблица 2 Сравнение времени доставки лекарственного средства для NAT, доставляемого катетером PRO и пульсово-распылительного инъектора Как видно из табл. 2, доставка 30 мг NAT за 6 мин приводит к среднему коэффициенту потока, составляющему 2,7, у трех животных на 30-минутной ангиограмме, что сохранялось к 4-часовой временной отметке. Доставка 30 мг NAT путем пульсовой инфузии в течение 60 мин, наоборот, дала менее впечатляющие результаты. Хотя эти данные не сравнивали статистически, данные результаты указывают на предпочтительность доставки NAT при более скором импульсном режиме. Пример 4. Оптимизация объема пульсов. Устройство пульсово-распылительной инфузии программировали для доставки объемов пульсов от 0,1 до 0,5 мл на пульс. Для определения того, оказывает ли объем пульса какое-либо влияние на ангиографические исходы при использовании в качестве модели свиней, объемы пульсов по 0,2 мл сравнивали с объемами 0,4 мл. NAT доставляли фиксированной дозой 10 мг (эквивалентно 0,15 мг/кг на свинью массой 75 кг). Результаты показаны в табл. 3. Таблица 3 Сравнение результатов ангиографии, полученных с использованием NAT, доставленного при объеме пульсов 0,2 или 0,4 мл Как показано в табл. 3, после 30 мин средний ангиографический коэффициент был немного выше в группе объема пульса 0,4 мл. Однако на четырехчасовой временной отметке среднее по группе было немного выше в группе объема пульса 0,2 мл. По существу, из данных исследований нельзя сделать какоголибо заключения в отношении того, является ли один из объемов пульса наилучшим. Результаты в предшествующем тексте и таблицах указывают на то, что фактически все из данных режимов лечения NAT эффективны при лечении закупорки периферических артерий способом доставки согласно изобретению и что данные результаты по меньшей мере сравнимы с таковыми для активаторов плазминогена, таких как урокиназа, лечение которыми является современным лечением выбора тромбо- 13007654 литическими средствами. Данные результаты демонстрируют, что катетер PRO с пульсово-распылительной доставкой, как оказывается, обеспечивает наилучшие ангиографические результаты. По массе тела животных в данном исследовании (70-100 кг) фиксированная дозировка 30 мг примерно эквивалентна 0,3-0,4 мг/кг на основе массы. Снижение фиксированной дозировки NAT до 10 мг приводит к снижению групповых средних ангиографических коэффициентов через 4 ч, и у некоторых животных раскрытие сосуда не достигалось. Это указывает на то, что доза 10 мг NAT, как оказалось, является пороговой дозой для биологической активности в данной модели. По массе тела животных в данном исследовании (70-100 кг) фиксированная дозировка 10 мг примерно эквивалентна 0,1-0,15 мг/кг на основе массы. Изменение объема пульса от 0,2 до 0,4 мл, как оказалось, существенно не влияет на ангиографические коэффициенты раскрытия. Пример 5. Установление интервала безопасных, хорошо переносимых, биологически эффективных доз для человека. Не существует удовлетворительной литературы по концентрации или биохимической активности 2-макроглобулина у пожилых пациентов с заболеванием периферических сосудов (PVD). Поскольку концентрации 2-макроглобулина представляют собой ключевую детерминанту безопасности и, вероятно, относятся к переносимости фибринолитических металлопротеиназ in vivo, у пациентов с PVD проводили перекрестное эпидемиологическое исследование для оценки концентрации 2-макроглобулина в сыворотке и емкости связывания фибринолитической металлопротеиназы (с использованием NAT в качестве тестируемого средства). Двести шестьдесят пациентов рекрутировали в двух центрах (Cleveland Clinic Foundation, Cleveland,Огайо, и Rochester General Hospital, Rochester, Нью-Йорк). Собирали демографическую информацию и другие характеристики пациентов и сыворотку получали для измерения 2-макроглобулина, емкости связывания NAT (путем титрования образцов сыворотки отдельных пациентов с использованием ВЭЖХанализа, в котором детектируется несвязанный NAT) и других параметров химии сыворотки. Первичный выходной параметр представлял собой определение взаимоотношений между концентрацией 2 макроглобулина в крови и количеством NAT (в микрограммах на миллилитр сыворотки), которое может нейтрализоваться in vitro (емкость связывания NAT). Сравнение характеристик пациентов в данном исследовании с таковыми двух наибольших опубликованных исследований тромболиза в РАО (т.е. исследований STILE и TOPAS) выявило, что популяция пациентов в данном исследовании отображалась в предыдущих исследованиях тромболиза в РАО; для дальнейших подробностей предшествующих исследований см. Annals of Surgery, Volume 220, pp. 251266 (1994) и Ouriel et al., New England Journal of Medicine, Volume 338, pp. 1105-1111 (1998) соответственно. Оценочную максимальную дозу (EMD) для NAT рассчитывали для каждого пациента с использованием емкости связывания NAT и оценки объема плазмы каждого пациента. Результаты исследования предсказывают, что средний пациент мог получать дозировку 1,7 мг/кг (доставленную местно или системно) без превышения способности 2-макроглобулина к связыванию и нейтрализации NAT. Результаты данного исследования суммированы на фиг. 4. На фиг. 4 оценочную максимальную дозу NAT рассчитывали для каждого из 216 субъектов в данном исследовании. Результаты данного исследования отображены вверху в виде гистограммы, где при визуальной оценке может наблюдаться колоколообразное распределение. Предсказано, что средний пациент данного исследования способен переносить 1,7 мг/кг NAT (пик колоколообразного распределения). Дозировки, вводимые в исследованиях на животных, показаны для ссылки (правая сторона) и, как можно видеть, превышают оценочную максимальную дозу NAT для 99% популяции исследования. Таким образом, предписанный для изобретения интервал от 0,025 до 1,7 мг/кг представляет собой рациональную оценку дозы, которую могут безопасно получать пациенты (на основе объема плазмы и способности связывать NAT для 2-макроглобулина) без появления свободного NAT в циркуляции. В заключение, результаты типовых фармакологических исследований, примеров 1-4, приведенных выше, указывают на биологическую эффективность фибринолитической металлопротеиназы в качестве средства лизиса сгустка в моделях тромбоза на животных, где тромб сравним по размеру и возрасту с тем, который часто возникает при закупорке периферических артерий у человека. Дозировки, выявленные в моделях на животных, получали без отношения или оценки потенциальных видов токсичности для животного. Эффективные дозировки для кроликов и собак (3,7 и 4,0 мг/кг соответственно), как описаноAhmed et al. и Markland et al. (см. выше), могут дать возможность для ветеринарного применения фибринолитических металлопротеиназ. Однако введение доз 3,7 и 4,0 мг/кг при рассмотрении в свете данных по человеку привело бы к передозировке у 99% исследованной популяции. Поэтому опубликованные исследования на животных не дают возможности для терапевтического применения фибринолитических металлопротеиназ у человека безопасным, а также биологически эффективным способом. С другой стороны, данные, представленные в примере 5, дают возможность для такого применения у человека.- 14007654 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ лизиса кровяного сгустка внутри или вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка для применения у человека, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа количества фибринолитической металлопротеиназы, которое не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека. 2. Способ протеолитической деградации кровяного сгустка внутри или вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка для применения у человека,предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количества достаточно для облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного человека. 3. Способ по п.1 или 2, предусматривающий от 0,1 до 80 мг/мл фибринолитической металлопротеиназы. 4. Способ по п.1 или 2, предусматривающий от 0,1 до 50 мг/мл фибринолитической металлопротеиназы. 5. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой катетер. 6. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой шунт. 7. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой трансплантат для доступа. 8. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой иглу. 9. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют для введения жидкой композиции в артерию или вену человека. 10. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют для отбора крови из артерии или вены человека. 11. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой гемодиализа. 12. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой переливания крови. 13. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с химиотерапией. 14. Способ по п.1 или 2, который применяется для лечения закупорки периферических артерий. 15. Способ по п.1 или 2, где устройство сосудистого доступа используют в связи с отбором крови. 16. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток расположен на внутренней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа. 17. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток расположен на внешней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа. 18. Способ по п.1 или 2, где указанный кровяной сгусток прикреплен к стационарному устройству сосудистого доступа. 19. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в артерии. 20. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в вене. 21. Способ по п.1 или 2, в котором указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство с боковыми отверстиями. 22. Способ по п.1 или 2, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство доставки с выходными отверстиями для ответа на давление (PRO). 23. Способ по п.1 или 2, в котором раствор фибринолитической металлопротеиназы вводят с помощью болюса. 24. Способ по п.1 или 2, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя новый действующий тромболитик (NAT). 25. Способ по п.1 или 2, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя фибролазу. 26. Способ восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа для применения у человека, имеющего закупорку на основе фибрина, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы,которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количества достаточно для облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа 2-макроглобулина у указанного человека, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека. 27. Способ восстановления функционирования стационарного устройства сосудистого доступа для применения у человека, имеющего закупорку на основе фибрина, предусматривающий введение через указанное устройство сосудистого доступа некоторого количества фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, где данного количествадостаточно для- 15007654 облегчения лизиса сгустка, но оно не превышает уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина у указанного человека, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека. 28. Применение фибринолитической металлопротеиназы в количестве, не превышающем 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела человека, в фармацевтически приемлемом растворе, при производстве лекарственного средства для терапевтического лечения кровяного сгустка внутри или вокруг указанного стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка. 29. Применение фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2 макроглобулином, в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превышающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, находящегося внутри,вокруг стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему сгустка, в фармацевтически приемлемом растворе, при производстве лекарственного средства для протеолитической деградации кровяного сгустка внутри или вокруг указанного стационарного устройства сосудистого доступа или прикрепленного к нему кровяного сгустка. 30. Применение по п.28 или 29, где фибринолитическая протеиназа находится в концентрации от 0,1 до 80 мг/мл. 31. Применение по п.28 или 29, где фибринолитическая протеиназа находится в концентрации от 0,1 до 50 мг/мл. 32. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой катетер. 33. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой шунт. 34. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой трансплантат для доступа. 35. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа представляет собой иглу. 36. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют для введения жидкой композиции в артерию или вену человека. 37. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют для отбора крови из артерии или вены человека. 38. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой гемодиализа. 39. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с процедурой переливания крови. 40. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с химиотерапией. 41. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют при лечении закупорки периферических артерий. 42. Применение по п.28 или 29, где устройство сосудистого доступа используют в связи с отбором крови. 43. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток расположен на внутренней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа. 44. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток расположен на внешней поверхности стационарного устройства сосудистого доступа. 45. Применение по п.28 или 29, где указанный кровяной сгусток прикреплен к стационарному устройству сосудистого доступа. 46. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в артерии. 47. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа расположено в вене. 48. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство с боковыми отверстиями. 49. Применение по п.28 или 29, где указанное устройство сосудистого доступа включает в себя катетерное устройство доставки с выходными отверстиями для ответа на давление (PRO). 50. Применение по п.28 или 29, где указанное лекарственное средство получают для болюсного введения. 51. Применение по п.28 или 29, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя новый действующий тромболитик (NAT). 52. Применение по п.28 или 29, в котором фибринолитическая металлопротеиназа включает в себя фибролазу. 53. Применение фибринолитической метллопротеиназы в количестве, которое образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, и в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превы- 16007654 шающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, у субъектачеловека, в фармацевтически приемлемом растворе, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела субъекта-человека, при производстве лекарственного средства для восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа,характеризующегося закупоркой на основе фибрина. 54. Применение фибринолитической металлопротеиназы в количестве, которое образует комплекс с альфа-2-макроглобулином, и в количестве, достаточном для облегчения лизиса сгустка, но не превышающем уровня, значительно превышающего уровень насыщения альфа-2-макроглобулина, у субъектачеловека, в фармацевтически приемлемом растворе, где указанное количество не превышает 1,7 мг фибринолитической металлопротеиназы на килограмм массы тела субъекта-человека, при производстве лекарственного средства для восстановления функционирования стационарного устройства сосудистого доступа, характеризующегося закупоркой на основе фибрина. 55. Способ по пп.1, 2, 26 и 27, где концентрация предусмотренной фибринолитической металлопротеиназы составляет от 5,0 до 40 мг/мл. 56. Применение по пп.28, 29, 53 и 54, где концентрация предусмотренной фибринолитической металлопротеиназы составляет от 5,0 до 40 мг/мл. 57. Доза фибринолитической металлопротеиназы, которая образует комплекс с альфа-2 макроглобулином, где указанная доза колеблется от 0,5 до 4,0 мг. 58. Доза по п.57, где указанная доза выбрана из группы, состоящей из 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 и 4,0 мг. 59. Доза по п.57, где фибринолитическая металлопротеиназа представляет собой новый действующий тромболитик (NAT). 60. Доза по п.57, где фибринолитическая металлопротеиназа представляет собой фибролазу. 61. Способ восстановления раскрытия стационарного устройства сосудистого доступа, предусматривающий введение указанного устройства в контакт с дозой по любому из пп.57-59. 62. Способ по п.61, где фибринолитическая металлопротеиназа ковалентно связывается с альфа-2 макроглобулином. Фиг. 4 Гистограмма оценочной максимальной дозы NAT у пациентов с закупоркой периферических сосудов Фиг. 5 Модель закупорки катетера in vitro
МПК / Метки
МПК: A61K 38/46
Метки: способ, фибринолитических, стационарного, использованием, металлопротеиназ, лечения, закупорки, катетера
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/28-7654-sposob-lecheniya-zakuporki-stacionarnogo-katetera-s-ispolzovaniem-fibrinoliticheskih-metalloproteinaz.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ лечения закупорки стационарного катетера с использованием фибринолитических металлопротеиназ</a>
Способ лечения заболевания хронической закупорки легочных путей
Номер патента: 6382
Опубликовано: 29.12.2005
Авторы: Кристенсен Зигфрид Б.IV, Торфи Теодор
МПК: A61K 31/275, A61P 11/00
Метки: лечения, способ, закупорки, легочных, заболевания, путей, хронической
Формула / Реферат:
1. Способ лечения заболевания хронической закупорки легочных путей (ЗХЗЛП), который включает введение млекопитающему, страдающему от ЗХЗЛП, эффективного количества соединения, которым является метил-4-циано-4-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)циклогекс-1-ен-1-карбоксилат; 4-циано-4-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)циклогекс-1-ен-1-карбоновая кислота; метил-цис-[4-циано-4-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)циклогексан-1-карбоксилат];...
Способ лечения с использованием конъюгатов лиганд-иммуноген
Номер патента: 5823
Опубликовано: 30.06.2005
Авторы: Лу Йингдзуан, Лоу Филип Стюарт
МПК: A61P 35/00, A61K 39/00
Метки: лиганд-иммуноген, конюгатов, способ, лечения, использованием
Формула / Реферат:
1. Способ усиления опосредованной эндогенным иммунным ответом специфической элиминации популяции патогенных клеток у животного-хозяина, несущего указанную популяцию, где члены указанной клеточной популяции имеют доступные для лиганда сайты связывания, причем указанный способ включает в себя стадию введения указанному хозяину композиции конъюгата лиганд-иммуноген, включающей в себя комплекс лиганда и иммуногена, где указанный иммуноген...
Способ лечения бесплодия у женщин с использованием фолликулостимулирующего гормона
Номер патента: 4924
Опубликовано: 28.10.2004
Авторы: Дьюр-Майерз Луиз, Лумей Эрнест
МПК: A61P 5/06, A61K 38/24
Метки: лечения, женщин, использованием, гормона, бесплодия, способ, фолликулостимулирующего
Формула / Реферат:
1. Способ лечения бесплодия у женщин, включающий введение нуждающейся в этом женщине фолликулостимулирующего гормона (FSH) и/или его биологически активного аналога в первоначальной дозе в диапазоне от 100 до 600 ME с последующей второй дозой по меньшей мере 3 дня спустя в фазе стимуляции. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что FSH и/или его биологически активный аналог вводят в дозе в диапазоне от 300 до 600 ME в каждый третий день первых 6...
Терапевтическая композиция для введения толтеродина с контролируемым высвобождением и способ лечения мочевого пузыря с её использованием
Номер патента: 2720
Опубликовано: 29.08.2002
Авторы: Кристенсен Хелле, Стрембом Ян, Хокк Улла, Грен Торкель, Ольссон Биргитта, Оруп Якобсен Лене, Крейльгор Бо, Рингберг Андерс, Халлен Бенгт, Нильвебрант Лисбет, Викберг Мартин
МПК: A61P 13/10, A61K 9/22
Метки: высвобождением, терапевтическая, пузыря, способ, лечения, использованием, введения, контролируемым, композиция, мочевого, толтеродина
Формула / Реферат:
1. Способ лечения нестабильного или гиперактивного мочевого пузыря, включающий в себя введение больному, нуждающемуся в подобном лечении, толтеродина или родственного толтеродину соединения или его фармацевтически приемлемой соли в фармацевтически эффективном количестве в составе композиции с контролируемым высвобождением, способной поддерживать в сыворотке существенно постоянную концентрацию активного фрагмента или фрагментов в течение, по...
Производные оксаиндена, способ их получения (варианты), фармацевтический состав на их основе, их применение и способ лечения с их использованием
Номер патента: 25
Опубликовано: 26.02.1998
Авторы: Шимиг Дьюла, Ковач Габор, Гиглер Габор, Блашко Габор, Божинг Даниэль, Новак Лайош, Драбант Шандор, Сантаи Чаба, Семереди Каталин, Эдьед Андраш, Чёргё Маргит, Пирок Дьордь, Ковач Петер, Такач Габорне, Гадо Клара
МПК: C07D 307/77, A61K 31/34
Метки: производные, варианты, использованием, оксаиндена, фармацевтический, лечения, основе, применение, состав, способ, получения
Формула / Реферат:
1. Производные оксаиндена общей формулы (I), где R1 представляет собой низший С1-4 алкил, низшую С1-4 алкоксигруппу или низший С3-6 циклоалкил, R2 представляет собой водород, низший С1-4 алкил или низший С3-6 циклоалкил, R3 представляет собой водород, низший С1-4 алкил, низшую С1-4 алкоксигруппу или бензилоксигруппу, Х представляет собой водород, алифатический С1-4 ацил или бензоиловую или нафтоиловую группу, возможно замещенные одной или...
Предыдущий патент: Способы и композиции обнаружения и анализа полинуклеотидов с помощью светособирающих полихромофоров
Следующий патент: Производные аминоиндана в качестве ингибиторов обратного захвата серотонина и захвата норэпинефрина
Случайный патент: Пептид, способный связываться с интерлейкин-1-beta-конвертирующим ферментом (ice), и фармацевтические композиции на его основе