Модуляторы регенерации тканей

1 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к белкам, которые стимулируются в поврежденных или регенерирующих тканях, а также к ДНК,кодирующей эти белки. Кроме того, настоящее изобретение относится к терапевтическим композициям, и к способам лечения с использованием белков. Уровень техники Динамическое ремоделирование архитектуры тканей происходит в процессе развития и во время восстановления тканей после повреждения. Для изучения этого процесса, мы сосредоточили свои исследования на модели повреждения почки, вызванного поражением в результате ишемической реперфузии. Почки обладают способностью восстанавливать свои ткани после повреждения в эпителии проксимальных канальцев посредством сложной серии событий, включающих гибель клеток, пролиферацию выживших эпителиальных клеток проксимальных канальцев, образования частично дифференцированного регенеративного эпителия поверх оголенной базальной мембраны, и дифференцировку регенеративного эпителия с образованием полностью функциональных эпителиальных клеток проксимальных канальцев (Wallin et al., Lab. Invest. 66: 474-484, 1992; Witzgall et al., Mol. Cell Biol. 13:1933-1942, 1994; Ichimura et al. Am. J. Physiol. 269: F653-662, 1995; Thadhani et al., N. Engl. J.Med.: 1448-1460, 1996). В этом процессе репарации тканей участвуют факторы роста, такие как, IGF, EGF и HGF, поскольку он имеет адгезионную молекулу ICAM-1 эндотелиальных клеток. Однако, механизмы, с помощью которых происходит восстановление эпителиальных клеток канальцев, еще не изучены. Для идентификации молекул, участвующих в процессе повреждения и репарации эпителия канальцев, нами были проанализированы различия в мРНК-популяциях, присутствующих в поврежденных/регенерирующих почках и в нормальных почках, с помощью репрезентативного дифференциального анализа (RDA). RDA представляет собой субстрактивный метод на основе PCR, с помощью которого получают ткань-мишень или клетко-специфичные кДНКфрагменты путем многократного исключения и амплификации (HubakSchutz, Nucl. AcidsRes., 22:5640-5648, 1994). Сущность изобретения В общих чертах, настоящее изобретение относится к молекулам, ассоциированным с повреждением почек (каждая из которых в дальнейшем будет обозначаться "KIM"), и стимулируемым в почечной ткани после ее повреждения. Белки и пептиды KIM настоящего изобретения, а также их агонисты и антагонисты, и их соответствующие аналоги могут быть использо 004402 2 ваны в различных способах терапевтического лечения. Настоящее изобретение относится к очищенной и выделенной ДНК-молекуле, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID No:1, SEQ ID No: 2, SEQ IDNo:4 или SEQ ID No: 6. Настоящее изобретение также относится к комплементарным цепям этих последовательностей, к ДНК-молекулам,которые гибридизируются в жестких условиях с вышеуказанными ДНК-молекулами, и к ДНКмолекулам, которые, благодаря вырожденности генетического кода, могут гибридизироваться с любой из ДНК-молекул, определенных выше. Эти ДНК-молекулы могут быть рекомбинантными, и могут быть правильно присоединены к последовательности, регулирующей экспрессию. Кроме того, настоящее изобретение относится к вектору, содержащему очищенную и выделенную ДНК-молекулу, имеющую нуклеотидную последовательность, представленную вSEQ ID No: 6, или одну из других ДНКмолекул, определенных выше. Этот вектор может быть биологически функциональной плазмидой или вирусным ДНК-вектором. В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к прокариотической или эукариотической клетке-хозяину, стабильно трансформированной или трансфецированной вектором, содержащим ДНК-молекулу, представленную вSEQ ID No:6. В другом своем варианте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования полипептидного продукта KIM, кодированного ДНК-молекулой, описанной выше,где указанный способ предусматривает культивирование, в благоприятствующих росту условиях, прокариотических или эукариотических клеток-хозяина,трансформированных или трансфецированных ДНК-молекулой так, чтобы оно способствовало экспрессии ДНК-молекулы; и выделение полипептидного продукта указанной экспрессии. Очищенный и выделенный белок KIM человека, который, в основном, не содержит других человеческих белков, входит, в частности, в объем настоящего изобретения, поскольку он используется в способе продуцирования полипептидного продукта, имеющего частично или полностью первичную структурную конформацию и биологическую активность белка KIM. Белки KIM настоящего изобретения могут иметь аминокислотную последовательность,которая включает SEQ ID No:3, SEQ ID No: 5 или SEQ ID No: 7, либо они могут быть вариантами SEQ ID No:3, SEQ ID No:5 или SEQ IDNo:7, или они могут представлять собой очищенный или выделенный белок, кодированный ДНК-последовательностями SEQ ID No:l, SEQ 3 белки могут, в основном, не содержать других белков человека. Кроме того, настоящее изобретение относится к вариантам этих белков, таким как растворимые варианты или гибридные белки. Гибридные белки KIM настоящего изобретения могут содержать иммуноглобулин, токсин, визуализируемое соединение или радионуклид. Настоящее изобретение также относится к специфическому моноклональному антителу против белков KIM, описанных выше. Антитело против KIM может быть ассоциировано с токсином, виализируемым соединением или радионуклидом. Другим объектом исследования является гибридомная клеточная линия, которая продуцирует указанное специфическое антитело. Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут содержать фармацевтически эффективное количество белка KIM или антитела против KIM настоящего изобретения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Настоящее изобретение включает диагностические методы, такие как обнаружение присутствия или процесса восстановления ткани в поврежденных почках путем измерения концентрации KIM в моче, сыворотке, или мочевом осадке пациентов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек, или относящихся к группе риска заболевания почек. Терапевтические способы настоящего изобретения предусматривают лечение пациентов с использованием терапевтически эффективных количеств KIM, вариантов KIM, аналогов KIM,гибридных белков на основе KIM, агонистовKIM, и антител против KIM или против KIMлигандов. Другими терапевтическими соединениями настоящего изобретения являются KIMлиганды, антитела против KIM, и гибридные белки на основе KIM-лигандов. Эти соединения могут быть использованы в терапевтических методах, предусматривающих либо стимуляцию, либо ингибирование клеточных ответов,которые зависят от функции KIM. Другие способы настоящего изобретения заключаются в ингибировании роста KIMэкспрессирующих опухолевых клеток посредством контактирования этих клеток с гибридными белками, полученными на основе KIM-лиганда и либо токсина, либо радионуклида, или с антителом против KIM, конъюгированным с токсином или радионуклидом. Аналогичным образом,рост опухолевых клеток, экспрессирую-щихKIM-лиганд, может быть ингибирован либо посредством контактирования этих клеток с гибридным белком на основе KIM и токсина или радионуклида, либо с антителом против KIM,конъюгированным с токсином или радионуклидом. 4 Настоящее изобретение также относится к способам генной терапии. Такая генная терапия включает способ лечения индивидуума с почечным заболеванием, способ стимуляции роста новой ткани у этого индивидуума, и способ стимуляции выживания поврежденной ткани у индивидуума, предусматривающий введение этому индивидууму вектора, который содержит ДНК, включающую нуклеотидную последовательность SEQ ID No:1, SEQ ID No: 2, SEQ IDNo: 4 или SEQ ID No:6. Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы для визуализации тканей, либо in vitro, либо in vivo. Один из таких способов визуализации предусматривает направленную доставку визуализируемого соединения к клетке, экспрессирующей белок, имеющий последовательности SEQ ID No:3, SEQ IDNo: 5 или SEQ ID No:7, где указанную доставку осуществляют посредством контактирования этой клетки либо с моноклональным антителом настоящего изобретения, либо с гибридным белком, содержащим белок, описанный выше и присоединенный к визуализируемому соединению. В in vivo-методах эта клетка присутствует в организме индивидуума, а белок или моноклональное антитело вводят этому индивидууму. Настоящее изобретение также относится к диагностическим способам, таким как способ идентификации повреждения или регенерации клеток почки в организме индивидуума, предусматривающий сравнение уровней экспрессии последовательностей SEQ ID No:l, SEQ ID No: 2, SEQ ID No: 4 или SEQ ID N0:6 в почечных клетках индивидуума с контрольным уровнем экспрессии этих последовательностей в почечных клетках контроля. Другой способ настоящего изобретения заключается в идентификации стимуляции экспрессии последовательностей SEQ ID No:l, SEQ ID No: 2, SEQ ID No: 4 или SEQ ID No:6 в клетке путем осуществления контакта этой клетки с антисмысловым зондом с последующей оценкой гибридизации с РНК в этой клетке. В еще одном варианте диагностические способы настоящего изобретения предусматривают обнаружение присутствия или оценку концентрации молекулы настоящего изобретения в моче, сыворотке или в другой физиологической жидкости организма, либо в образцах мочевого остатка или ткани. Измеренные молекулы, ассоциированные с повреждением, могут коррелировать с присутствием, уровнем или продолжительностью патологического процесса. Эта корреляция может быть также использована для оценки эффективности терапевтической схемы лечения. Краткое описание рисунков Фиг. 1 представляет нуклеотидную последовательность крысиного кДНК-клона 3-2 с 5 предполагаемой рамкой считывания для белка,соответствующей нуклеотидам 615-1535. Фиг. 2 представляет кДНК-последовательность крысиного клона 1-7 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 145-1065. Фиг. 3 представляет кДНК-последовательность крысиного клона 4-7 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 107-1822. Фиг. 4 представляет кДНК и выведенные аминокислотные последовательности человеческого клона Н 13-10-85 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 1-1002. Верхняя строка этих последовательностей представляет кДНКпоследовательность (SEQ ID No:6), а нижняя строка представляет выведенную аминокислотную последовательность (SEQ ID No:7). Фиг. 5 иллюстрирует оптимальное сравнение (BESTFIT) нуклеотидной последовательности человеческого клона Н 13-10-85 с нуклеотидной последовательностью крысиного клона 3-2. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Мы идентифицировали гены KIM посредством определения различий в экспрессии мРНК для регенерирующих и нормальных почек с использованием репрезентативного дифференциального анализа (RDA). RDA представляет собой субтрактивный метод на основе PCR,с помощью которого получают ткани-мишени или клеткоспецифичные кДНК-фрагменты путем многократного исключения и амплификации. Представленность (копийность) кДНК, исходя из РНК для 48 ч.-пост-ишемической почки взрослой крысы, получали методом исключения(субтрактивным методом) с использованием образца от нормальной (ложнооперированной) почки взрослой крысы. В этой процедуре последовательности, которые являются одинаковыми для образцов постишемической и нормальной почки, удаляют, оставляя те последовательности, которые экспрессируются, в основном,лишь в поврежденной почечной ткани. Эти гены кодируют белки, которые могут иметь благоприятное терапевтическое значение для заболевания почек, или белки, которые могут участвовать в процессе повреждения. Было получено,секвенировано, и охарактеризовано несколько клонов. Затем эти клоны были исследованы на характер их экспрессии во время репарации и развития почек, и на их распределение в тканях с помощью Нозерн-блот-анализа и in situгибридизации РНК. Идентификационные номера последовательностей Нуклеотидным и аминокислотным последовательностям, упоминаемым в настоящем описании, были присвоены следующие идентификационные номера:SEQ ID No:1 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 3-2;SEQ ID No:2 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 1-7;SEQ ID No:4 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 4-7;SEQ ID No:5 - аминокислотная последовательность, кодированная крысиной кДНКвставкой 4-7;SEQ ID No:6 - нуклеотидная последовательность человеческого кДНК-клона Н 13-1085;SEQ ID No:7 - аминокислотная последовательность, кодированная человеческим кДНКклоном Н 13-10-85. Определение терминов Термин "белок KIM", используемый в настоящем описании наряду с термином "KIM",означает белок, кодированный мРНК, которая избирательно стимулируется после повреждения почек. Одна группа из представляющих интерес белков KIM включает белки, кодированные мРНК, которая избирательно стимулируется в любой период времени через одну неделю после любого инсульта, который приводит к повреждению почечной ткани. Примерами периода времени, в течение которого такая стимуляция может быть идентифицирована, являются периоды времени, 10, 24, 48 и 96 ч после инсульта. Примерами типов инсульта являются инсульты, которые приводят к ишемическому повреждению, токсическому повреждению, или повреждению другого типа. Термин "агонист KIM" означает молекулу,которая может специфически индуцировать клеточный ответ, обычно, стимулируемый посредством взаимодействия KIM с KIMлигандом. Агонистом KIM может быть вариантKIM, или специфическое антитело против KIM,или растворимая форма КIМ-лиганда. Термин "агонист KIM" означает молекулу,которая может специфически ассоциироваться сKIM-лигандом или KIM, тем самым, блокируя или ингибируя каким-либо другим способом связывание KIM с KIM-лигандом. Этот антагонист связывания блокирует или ингибирует ответы, которые так или иначе должны "запускаться" посредством связывания KIM-лиганда сKIM или с агонистом KIM. Примерами антагонистов KIM являются некоторые варианты KIM,гибридные белки на основе KIM, и специфические антитела против KIM-лиганда или KIM. Термин "KIM-лиганд" означает молекулу,которая нековалентно и специфически связывается с белком KIM. Таким лигандом может быть белок, пептид, стероид, антитело, аминокислотное производное, или молекулы другого типа, в любой форме, включая природные, рекомбинантно продуцированные, или каким-либо дру 7 гим способом синтезированные молекулы. KIMлиганд может присутствовать в любой форме,включая растворимые формы, мембраноассоциированные формы, или в виде части гибридной конструкции с иммуноглобулином,жирной кислотой или другими молекулами.KIM-лигандом может быть интегрин. Мембрано-ассоциированный KIM-лиганд может действовать как рецептор, который, при его связывании или ассоциации с KIM, индуцирует клеточный ответ. В некоторых случаях KIM может ассоциироваться с более, чем одним KIMлигандом, либо он может ассоциироваться сKIM-лигандом как частью комплекса с одним или несколькими другими молекулами или кофакторами. Если оба KIM-лиганд и KIM связаны с клеточными мембранами, то в этом случае,KIM может ассоциироваться и реагировать сKIM-лигандом, который связывается с той же самой клеткой, что и KIM, либо он может ассоциироваться и реагировать с KIM-лигандом,связанным с другой клеткой. Если присоединение KIM происходит между молекулами, связанными с разными клетками, то эти две клетки могут быть одинаковыми или различными по своему клеточному типу или происхождению,фенотипическими или метаболическими условиями, либо по типу или степени клеточного ответа (например, роста, дифференцировки или апоптоза) для данного стимула. Термин "присоединение KIM" означает контактирование и связывание KIM с KIM-лигандом. Термин "сравнительный анализ первичных последовательностей" означает определение положения одной последовательности (нуклеотидной или аминокислотной последовательности) по отношению к другой для того, чтобы провести сравнение соответствующих частей одной последовательности с другой. Один из примеров способа осуществления этой процедуры описан в работе Needleman и др. (J. Mol.Biol., 48:443-453, 1970). Этот метод может быть соответствующим образом осуществлен с помощью компьютерных программ, таких как программа Align (DNAstar,Inc.). Как хорошо известно специалистам, гомологичные или функционально эквивалентные последовательности имеют функционально эквивалентную локализацию цистеиновых остатков в консервативном цистеиновом скелете, включая аминокислотные вставки или делеции, которые изменяют линейную локализацию этих цистеинов,но существенно не влияют на их взаимосвязь в складчатой структуре белка. Поэтому, внутренние "бреши" и аминокислотные инсерции в последовательностях - кандидатах не учитываются при вычислении уровня гомологии аминокислотной последовательности или идентичности между последовательностями - кандидатами и стандартными последовательностями. Одной из характеристик, часто используемых для установления гомологии белков, является сходство 8 числа и положения цистеиновых остатков у двух сравниваемых белков. Термин "антисмысловая ДНК" относится к последовательности хромосомной ДНК, которая является транскрибированной. Термин "антисмысловой зонд" означает зонд, который содержит, по крайней мере, часть антисмысловой ДНК для представляющей интерес части нуклеиновой кислоты. Термин "клонирование" означает использование техники in vitro-рекомбинации для встраивания конкретного гена или другой ДНКпоследовательности в векторную молекулу. Для успешного клонирования нужного гена необходимо использовать методы генерирования ДНКфрагментов в целях присоединения фрагментов к векторным молекулам; встраивания составной ДНК-молекулы в клетку-хозяина, в которой оно может реплицироваться; и отбора клона, имеющего нужный ген для реципиентных клетокхозяина. Термин "кДНК" означает комплементарную или копийную ДНК, продуцированную из РНК-матрицы под действием РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы). Таким образом, "кДНК-клон" означает дуплексную ДНК-последовательность, комплементарную представляющей интерес РНК-молекуле,присутствующей в векторе клонирования. Термин "кДНК-библиотека" означает коллекцию рекомбинантных ДНК-молекул, содержащих кДНК-вставки, которые, взятые вместе,отражают представленность мРНК-молекул,присутствующих во всем организме или в ткани в зависимости от источника РНК-матриц. Такая кДНК-библиотека может быть получена методами, известными специалистам, и описанными например, в руководстве Maniatis, Т., et al.,(1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual(см. выше) . Обычно РНК сначала выделяют из клеток организма, из генома которого желательно клонировать конкретный ген. Для целей настоящего изобретения, предпочтительными являются клетки млекопитающих, а в частности,клеточные линии человека. Альтернативно,РНК может быть выделена из опухолевых клеток, происходящих из опухолей животных, а предпочтительно из опухолей человека. Так,например, библиотека может быть получена из опухоли предстательной железы, но может быть использована и любая другая опухоль. Используемый в настоящем описании термин "ДНК-полиморфизм" относится к состоянию, при котором в конкретном сайте ДНК могут присутствовать две или более различных нуклеотидных последовательностей. Термин "экспрессирующий вектор" включает векторы, которые способны экспрессировать содержащиеся в нем ДНК- последовательности, то есть, эти кодирующие последовательности правильно присоединены к другим последовательностям, способствующим их эффек 9 тивной экспрессии. Это означает, хотя и не всегда может быть точно установлено, что эти экспрессирующие векторы должны реплицироваться в организме-хозяине либо как эписомы,либо как интегральная часть хромосомной ДНК. Полезным, но не обязательным, элементом эффективного экспрессирующего вектора является маркерная кодирующая последовательность,представляющая собой последовательность,кодирующую белок, который наделяет клетки,содержащие этот белок, фенотипичным свойством (таким как, устойчивость к тетрациклину),позволяющим осуществлять их реальную идентификацию. В целом, термин "экспрессирующий вектор" дает функциональное определение,и любая ДНК-последовательность, которая способна к эффективной экспрессии конкретного содержащегося в ней ДНК-кода, также определяется этим термином, поскольку он применяется к конкретной последовательности. Поскольку в настоящее время такие векторы часто используются в виде плазмид, то термины"плазмида" и "экспрессирующий вектор" являются в большинстве случаев взаимозаменяемыми. Однако настоящее изобретение может включать другие формы экспрессирующих векторов, которые имеют эквивалентные функции,и которые со временем станут известны специалистам. Термин "функциональное производное" означает "фрагменты", "варианты", "аналоги" или "химические производные" молекулы."Фрагмент" молекулы, такой как, любой из антигенов настоящего изобретения, означает любую полипептидную субпопуляцию этой молекулы. Термин "вариант" такой молекулы означает природную молекулу, в основном, аналогичную либо целой молекуле, либо ее фрагменту. Термин "аналог" молекулы означает не встречающуюся в природе молекулу, в основном, аналогичную либо целой молекуле, либо ее фрагменту. Термин "ген" означает полинуклеотидную последовательность, кодирующую пептид. Термин "гомогенный", если он относится к пептидной или ДНК-последовательности, означает, что первичная молекулярная структура (то есть, последовательность аминокислот или нуклеотидов), в основном, всех молекул, присутствующих в композиции, считается идентичной. Термин "выделенный" относится к белку настоящего изобретения, или к любому гену,кодирующему любой такой белок, которые, в основном, не содержат других белков или генов,соответственно, или других примесей, с которыми они обычно ассоциируются в природе, и которые как таковые присутствуют в форме, не существующей в природе. Термин "метка" относится к молекуле,способной к детекции, неограничивающими примерами которой являются радиоактивные"зонд" означает цепь нуклеиновой кислоты, основная последовательность которой комплементарна цепи-мишени. Термин "рекомбинантные клетки-хозяева" относится к клеткам, которые были трансформированы векторами, сконструированными с использованием техники рекомбинантных ДНК. Как определено в настоящем описании, рекомбинантные клетки-хозяева, благодаря своей трансформации, продуцируют антитела или их модификации в значительно меньших количествах, или, в более общем смысле, в количествах,меньших, чем те детектируемые количества,которые обычно продуцируют нетрансформированные хозяева. Термин "в основном, чистый" означает любой белок настоящего изобретения, или любой ген, кодирующий любой такой белок, который, в основном, не включает других белков или генов, соответственно, или других примесей, с которыми они обычно ассоциируются в природе, и которые как таковые присутствуют в форме, не существующей в природе. Молекула считается, "в основном, аналогичной" другой молекуле, если аминокислотные последовательности обеих молекул являются, в основном, одинаковыми, и если обе эти молекулы обладают одинаковой биологической активностью. Таким образом, при условии, что эти две молекулы обладают аналогичной активностью, они считаются вариантами, поскольку этот термин используется в настоящем описании даже в том случае, если одна из этих молекул содержит дополнительные аминокислотные остатки, не встречающиеся в другой молекуле,или если последовательности аминокислотных остатков этих молекул не являются идентичными. В настоящем описании молекула, называемая "химическим производным" другой молекулы, в том случае, если она содержит дополнительные химические группы, которые обычно не являются частью этой молекулы. Такие группы могут улучшать растворимость молекул, их абсорбцию, время их биологической полужизни,и т.п. Альтернативно, эти группы могут снижать токсичность молекулы, устранять или ослаблять любое нежелательное побочное действие молекулы и т.п. Группы, способные опосредовать такие эффекты, описаны, например, вRemington's Pharmaceutical Sciences, 16 th ed.,Mack Publishing Co., Easton, Penn. (1980). Термин "вектор" означает ДНК-молекулу,происходящую от плазмиды или бактериофага,в которую могут быть встроены или клонированы фрагменты ДНК. Вектор может содержать один или несколько рестрикционных сайтов, и 11 может быть способным к автономной репликации в определенном хозяине или организме-переносчике,таком, в котором данная клонированная последовательность может реплицироваться. Соединения настоящего изобретения Настоящее изобретение относится к кДНКпоследовательности SEQ ID No:1, SEQ ID No:2,SEQ ID No:4 или SEQ ID No:6, а также к последовательностям, которые включают последовательность SEQ ID No:1, SEQ ID No: 2, SEQ IDNo: 4 или SEQ ID No:6, и к производным этих последовательностей. Настоящее изобретение также относится к векторам, липосомам, и другим носителям, которые включают эти последовательности или их производные. Кроме того,настоящее изобретение относится к белкам,транскрибированным из SEQ ID No:1, SEQ IDNo:5 или SEQ ID No:7, и к их производным и вариантам. В одном из своих вариантов, настоящее изобретение также относится к растворимым вариантам белка KIM, который обычно синтезируется в виде мембрано-ассоциированного белка, и который стимулируется после повреждения ткани. В растворимых вариантах отсутствует, по крайней мере, часть трансмембранной и внутримембранной области нативного белкаKIM. В некоторых примерах, растворимый вариант не содержит всей трансмембранной или внутримембранной области нативного белкаKIM. Растворимые варианты включают гибридные белки, к которым относятся производные белков KIM, не содержащие, по крайней мере,части трансмембранной и внутримембранной области нативного белка KIM. Объем настоящего изобретения включает все типы гибридных белков KIM, особенно те белки, которые содержат his-tag-, Ig-tag- и myc-tag-формы молекулы. Эти KIM-гибриды могут обладать свойствами,которые могут быть предпочтительными с терапевтической точки зрения, такие как, увеличенное время полужизни, которое сообщается формой Ig-tag. В объем настоящего изобретения также входят гибридные белки, которые включают части выбранных доменов белка KIM. Эти варианты могут отличаться от природного белка KIM по своей аминокислотной последовательности, или по признакам, которые не относятся к аминокислотной последовательности, или по тому и другому. Варианты аминокислотной последовательности продуцируются в том случае, когда одна или несколько аминокислот в природном белке KIM заменены другой или другими аминокислотами, аминокислотным производным или не встречающейся в природе аминокислотой. Особенно предпочтительными вариантами являются природный белок KIM, или его природные биологически активные фрагменты, последовательности которых отличаются от последовательностей дикого 12 типа благодаря заменам одной или нескольких консервативных аминокислот, где указанные замены оказывают, обычно, минимальный эффект на вторичную структуру и гидрофобную природу белка или пептида. Варианты могут также иметь последовательности, которые отличаются от природной последовательности благодаря заменам одной или нескольких консервативных аминокислот, а также благодаря делециям, или инсерциям, которые не оказывают нежелательного действия на биологическую активность белка KIM. Консервативные замены обычно предусматривают замену одной аминокислоты на другую аминокислоту с аналогичными свойствами, например, такие, как замены в пределах следующих групп: валин, глицин; глицин, аланин; валин, изолейцин; аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; аспарагин,глутамин; серии, треонин; лизин, аргинин; и фенилаланин, тирозин. Неполярными (гидрофобными) аминокислотами, являются аланин,лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин. Полярными нейтральными аминокислотами являются глицин,серии, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, и глутамин. Положительно заряженными (основными) аминокислотами являются аргинин, лизин и гистидин. Отрицательно заряженными(кислотными) аминокислотами являются аспарагиновая и глутаминовая кислота. Другие аминокислотные замены могут быть взяты из нижеследующей таблицы, а еще некоторые замены описаны Dayhoff в "Atlas ofProtein Sequence and Structure (1988)". Таблица 1. Консервативные аминокислотные замены Аминокислота Код Замена любой из Аланин А D-Ala, Gly, бета-Ala, L-Cys, D-Cys АргининR D-Arg, Lys, гомо-Аrg, D-гомо-Аrg, Met, DАспарагин Аспарагиновая кислота Цистеин Глутамин Глутаминовая кислота Глицин Изолейцин Лейцин Лизин Другими вариантами настоящего изобретения являются варианты с модификациями, 13 которые способствуют увеличению стабильности пептида. Такие варианты могут содержать,например, одну или несколько непептидных связей (которые заменяют пептидные связи) в пептидной последовательности. Такими вариантами являются варианты, которые включают остатки, не являющимися природными Lаминокислотами, такие как, D-аминокислоты либо не встречающиеся в природе или синтетические аминокислоты, такие как, бета- или гамма-аминокислоты и циклические варианты. Включение в полипептид D-аминокислот вместо L-аминокислот может способствовать повышению устойчивости этого полипептида к протеазам. См., например, патент США 5219990. В общих чертах, заменами, которые, как ожидается, индуцируют изменения функциональных свойств полипептидов KIM, являются замены, в которых: (i) гидрофильные остатки,например, серии или треонин, заменены гидрофобными остатками, например, лейцином, изолейцином, фенилаланином, или аланином; (ii) любой остаток заменен на цистеиновый остаток(или наоборот); (iii) остаток, имеющий электроотрицательный заряд, например, глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота, заменен на остаток, имеющий электроположительную боковую цепь, например, лизин, аргинин или гистидин (или наоборот); или (iv) остаток, который не имеет объемной боковой цепи, например,глицин, заменяют на остаток (или наоборот) имеющий такую объемную боковую цепь, например, фенилаланин. Пептиды настоящего изобретения могут быть также модифицированы путем различных изменений, таких как, инсерции, делеции и замены консервативных или неконсервативных аминокислот, где указанные модификации могут давать некоторые преимущества при их использовании. Настоящее изобретение включает,в частности, варианты сплайсинга. В других вариантах осуществления настоящего изобретения, варианты с аминокислотными заменами, которые являются менее консервативными, также могут приводить к образованию нужных производных, например,путем индуцирования изменений заряда, конформации и других биологических свойств. Такими заменами являются, например, замена гидрофобного остатка на гидрофильный остаток, замена любого остатка на цистеин или пролин, замена остатка, имеющего объемную боковую цепь на остаток, имеющий небольшую боковую цепь, или замена остатка, имеющего суммарный отрицательный заряд на остаток,имеющий суммарный положительный заряд. Если результат данной замены не может быть предсказан с уверенностью, то для определения присутствия или отсутствия нужных свойств,эти производные могут быть легко проанализи 004402 14 рованы методами, описанными в настоящей заявке. В объем настоящего изобретения входят варианты, включающие белки и пептиды с аминокислотными последовательностями, имеющими по крайней мере 80% гомологию с белкомKIM. Более предпочтительно, чтобы гомология этой последовательности составляла по крайней мере 90% или по крайней мере 95%. Для определения гомологии, длина сравниваемых последовательностей должна составлять, по крайней мере, 8 аминокислотных остатков, обычно, по крайней мере, 20 аминокислотных остатков. Варианты соединений настоящего изобретения также включают любой белок, который 1) имеет аминокислотную последовательность, имеющую, по крайней мере, 40% гомологию с белкомKIM настоящего изобретения, и который 2) после оптимального сравнения его первичной последовательности с последовательностью KIM(как показано на фиг. 5 для последовательностей человеческого и крысиного KIM-1), имеет,по крайней мере, 80% цистеиновых остатков,соответствующих цистеиновым остаткам в белке KIM настоящего изобретения. Если возможно сделать замены каркасной цепи, то также возможно заменить функциональные группы, которые связывают каркасную цепь с группами, характеризующимися аналогичными признаками. Эти замены могут быть сначала консервативными, то есть, заменяемая группа будет иметь приблизительно тот же размер, форму, гидрофобность и заряд, что и исходная группа. Модификация разрыва цепи может включать, например, химическую in vitroили in vivo-дериватизацию части природного белка KIM, а также изменения в ацетилировании, метилировании, фосфорилировании, карбоксилировании или гликозилировании. Настоящее изобретение также включает агенты, которые специфически связываются с белком, или с фрагментом белка (SEQ ID No:3,5 или 7). Этими агентами являются лиганды и антитела (включая моноклональные антитела,одноцепочечные антитела, двухцепочечные антитела, Fab-фрагменты, и т.п., которые могут быть негативными антителами; человеческими антителами; гуманизированными ("очеловеченными") антителами; антителами, близкими к антителам приматов; или химерными антителами). Дополнительные описания этих категорий агентов приводятся в заявке РСТ 95/16709, описание которой вводится в настоящую заявку посредством ссылки. Экспериментальные методы 1. Получение РНК из ишемической и нормальной почек взрослой крысы. Почки, подвергшиеся ишемическому повреждению, получали как описано Witzgall etal., (J. Clin. Invest., 93:2175-2188, 1994). Для этого почечную артерию и вену от одной почки взрослой крысы Sprague-Dawley зажимали на 40 15 мин, а затем подвергали реперфузии. Поврежденные почки удаляли из крыс через 24 ч и через 48 ч после реперфузии. Были также получены почки от ложнооперированных нормальных взрослых крыс Sprague-Dawley. Из этих органов получали полную РНК в соответствии с протоколом, разработаннымGlisin et al. (Biochemistry 13:2633, 1974). Для этого выделенные органы сразу помещали в буфер GNC (4M тиоцианат гуанидина, 0,5% ДСН, 25 мМ цитрат натрия, 0,1% противовспениватель Sigma) и измельчали на льду с помощью дезинтегратора Polytron. Клеточный дебрис удаляли путем центрифугирования на малой скорости в клинической центрифуге, а супернатант помещали на 5,7 М CsCl, 25 мМ ацетат натрия, 1 мМ, 1 мМ EDTA-градиент. РНК осаждали путем центрифугирования в градиенте с использованием ротора SW40Ti при 22K в течение 15 ч. Затем РНК ресуспендировали в стерильной DEPC-обработанной воде, дважды осаждали в 1/10 объеме 3 М ацетата натрия и 2,5 объемах EtOH. Poly(A)+PHK выделяли с использованием набора для очистки мРНК (Pharmacia, catalog27-9258-02). 2. Метод репрезентативного дифференциального анализа (RDA) для выделения RDAфрагментов 1-7, 3-2 и 4-7. Двухцепочечную кДНК синтезировали изChoice System cDNA Synthesis Kit" catalog18090. Первую нить синтезировали путем праймирования с oligo dT и с использованием обратной транскриптазы Superscript II. Вторую нить генерировали с использованием ДНКполимеразы I E. coli и РНКазы Н с использованием ДНК-полимеразы Т 4 в условиях, рекомендованных BRL.RDA-анализ осуществляли, в основном,как описано HubankSchatz (Nucleic Acid Research 22:5640-48, 1994). Для этого кДНК почки,полученной через 48 ч после ишемии, гидролизовали рестриктирующим ферментом Dpn II, и лигировали в олигенуклеотиды R-Bgl-12/24 (см. ссылку на точную последовательность). Для генерирования первоначальной представленности проводили PCR-амплификацию (осуществляемую с использованием полимеразы Taq Perkin-Elmer и ее соответствующий PCR-буфер) лигированной посредством линкера кДНК. ЭтотPCR-продукт обозначали "тестер-ампликон". Ту же самую процедуру использовали для генерирования "драйвер-ампликона" из кДНК почки ложнооперированной крысы. Гибридизацию тестери драйверампликонов с последующей селективной амплификацией осуществляли три раза, в результате чего генерировали Дифференциальный продукт Один (DP1), Дифференциальный продукт Два (DP2) и Дифференциальный продукт 16 Три (DP3). Генерирование продукта DP1 осуществляли как описано HubankSchatz (NucleicAcid Research 22:5640-48, 1994). Продукты DP2 и DP3 также генерировали как описано HubankSchatz (см. выше), за исключением того, что отношения драйвер:тестер было заменено на отношение 5333:1 для DP2, и на отношение 40000:1 или 4 000:1 для DP3. Три RDA-продукта клонировали из DP3 в клонирующий вектор pUC18: RDA-продукт 1-7(252 п.о.), в случае, когда DP3 генерировали с использованием отношения 40000:1; и RDAпродукт 3-2 (445 п.о.) и 4-7 (483 п.о.), в случае,когда DP3 генерировали с использованием отношения 4000:1. ДНК-фрагменты субклонировали с использованием набора Pharmacia Sureclone kit (catalog27-9300-01) для застраивания концов PCR-фрагментов ферментом Кленова и для облегчения лигирования фрагментов по тупым концам в вектор pUC18. 3. Нозерн-блот-анализ. Ро 1 у(А)+РНК (2,5 мкг), полученную от нормальной почки взрослой крысы (ложнооперированной), от почки взрослой крысы, взятой через 48 ч после ишемии, и от почки 18 дневного эмбриона, подвергали электрофорезу и Нозерн-блот-анализу (Cate, Cell 45:685, 1986) на мембране GeneScreen (Dupont). Гибридизацию в PBS-буфере (50 мМ Трис 7,5, 1 М NaCl,0,1% пирофосфат Na, 0,2% PVP, 0,2% Фиколл,0,2% BSA, 1% ДСН) , содержащем 10% сульфата декстрана и 100 мкг/мл тРНК, осуществляли при 65 С с использованием трех различных зондов: RDA-продукта 1-7, RDA-продукта 3-2,RDA-продукта 4-7. Все продукты подвергали радиоактивному мечению с использованием набора для рандомизированного праймированияPharmacia's "Ready to Go" (catalog27-925101). RDA-продукты 1-7, 3-2 и 4-7 гибридизировались с мРНК, присутствующими во всех трех образцах, а большинство из них интенсивно гибридизировалось с мРНК, присутствующими в РНК-образцах почки, полученной через 48 ч после ишемии. Нозерн-блот-анализ тканей взрослой крысы указывал на то, что ген 1-7 экспрессировался на очень низких уровнях на почке, яичках, селезенке и легких нормальной взрослой крысы. Ген 3-2 экспрессировался в печени, почке, селезенке, и в головном мозге. Ген 4-7 экспрессировался в селезенке, почке, легких, яичках, сердце,головном мозге, печени, и в скелетной мышце. Присутствие мРНК различных размеров в некоторых тканях в блотах 1-7 и 3-2 свидетельствовало о том, что первичный продукт транскрипции гена 1-7 и гена 3-2 может подвергаться альтернативному сплайсингу и/или полиаденилированию. 4. Выделение кДНК-клонов 3-2 и 4-7. кДНК-библиотеку генерировали из 4 мкгChoice System для синтеза кДНК, и набора для клонирования Stratagene Lambda ZapIIcloning kit (catalog236201) в соответствии с инструкциями, рекомендованными производителями. 105 клонов скринировали с использованием RDA-продукта 3-2 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После третьего скрининга было выделено четыре чистых фаговых клона. Клонированные вставки,полученные от фага, выделяли путем процедурыLambda Zap II kit. Самую большую вставку приблизительно 2,6 т.п.о. (обозначенную кДНКклоном 3-2) подвергали ДНК-секвенированию. Последовательность этой вставки (SEQ ID No:l) показана на фиг. 1. кДНК-клон 3-2 (К-12 Е. coliSOLR/р 3-25-1) был депонирован в АТСС 98061. Последовательность кДНК-клона 3-2 была идентична кДНК-клону 1-7 (SEQ ID No:2),за исключением того, что в SEQ ID No:l вставку представляли нуклеотиды 136-605. Таким образом, последовательность SEQ ID No:2 представляла собой форму варианта сплайсинга SEQ IDNo:l. кДНК-клон 1-7 (К-12 Е. coli SOLR/p1-73l) был депонирован в АТСС 98060. 105 клонов скринировали с использованием RDA-продукта 1-7 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После третьего скрининга было выделено четыре чистых фаговых клона. Клонированные вставки,полученные от фага, выделяли путем процедурыLambda Zap II kit. Самую большую вставку приблизительно 2,6 т.п.о. (обозначенную кДНКклоном 1-7) подвергали ДНК-секвенированию; последовательность этой вставки (SEQ ID No:2) показана на фиг. 2. 105 клонов скринировали с использованием RDA-продукта 4-7 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше и гибридизированного в PBS при 65C). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После второго скрининга было выделено два чистых фаговых клона. Клонированные вставки, полученные от фага, выделяли путем процедуры in vivoвырезания в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору Stratagene Lambda Zap IIkit. Самую большую вставку приблизительно 2,4 т.п.о. (обозначенную кДНК-клоном 4-7) подвергали ДНК-секвенированию. Последовательность этой вставки (SEQ ID No: 4) показана на фиг. 3. кДНК-клон 4-7 (Е. coli К-12 SOLR/p473-l) был депонирован в АТСС 98062. 5. Характеризация кДНК-клонов 1-7, 3-2 и 4-7A) ДНК-последовательность и последовательность белка: Последовательность кДНК-клона 3-2 (фиг. 1; SEQ ID No:l) содержит открытую рамку считывания для 307 аминокислот (фиг. 1; SEQ IDNo:3). Сигнальная последовательность, состоящая из 21 аминокислоты, была получена, исходя из анализа Von Heijne (Von Heijne et al., Nucl.Acids. Res. 14:14683 (1986, а трансмембранная область, локализованная приблизительно в области аминокислот 235-257, указывала на то,что продукт 3-2 является белком клеточной поверхности. Последовательность кДНК-клона 1-7 (фиг. 2; SEQ ID No:2) содержит открытую рамку считывания для 307 аминокислот, которая идентична открытой рамке считывания, содержащейся в кДНК-клоне 3-2 (SEQ ID No:3). Последовательность кДНК-клона 4-7 (Фиг. 3; SEQ IDNo:4) содержит открытую рамку считывания для 572 аминокислот (SEQ ID No:5). Трансмембранная область локализована приблизительно на участке, соответствующем аминокислотам 501-521.B) in situ - анализ мРНК 1-7, 3-2 и 4-7 в контрлатеральной и постишемической почках взрослой крысы:in situ -Гибридизацию осуществляли методом, описанным Finch et al., Dev. Dynamics 203:223-240, 1995. Для этого, ишемическую и контрлатеральную почки подвергали перфузионной фиксации с использованием 4% формальдегида в PBS. Затем, почки подвергали дополнительной фиксации в течение ночи при 4 С и обрабатывали. Парафиновые срезы очищали от парафина и снова гидратировали, а затем фиксировали с использованием 4% формальдегида в PBS, гидролизовали протеиназой К, снова фиксировали, после чего ацетилировали уксусным ангидридом в триэтаноламиновом буфере. Затем срезы дегидратировали и гибридизировали с 32 Р-меченными рибозондами в течение ночи при 55 С, где 32 Р-меченные рибозонды, генерированные из RDA-продуктов 3-2 или 1-7, субклонировали в BamHl-сайт pGEM-11Z. После гибридизации, срезы промывали в высокой степени жестких условиях (2 х SSC, 50% формамид при 65 С). И наконец, срезы дегидратировали, покрывали эмульсией (NBT-2) для авторадиографии, и выдерживали в течение по крайней мере одной недели. Гранулы серебряного красителя проявляли, срезы подвергали контрастному окрашиванию толуидиновым синим и микрофотографировали. 19 Анализы на экспрессию мРНК 1-7 и 3-2,проводимые методом in situ-гибридизации, указывали на то, что эти гены в значительной степени стимулируются в клетках поврежденной почки по сравнению с их экспрессией в срезах нормальной почки. Эта экспрессия наблюдалась в регенеративных клетках коркового слоя и внешнего слоя мозгового вещества, но в основном, она наблюдалась в клетках проксимальных канальцев. Анализ характера in situ-экспресии РНК 47 также выявил значительно более высокий уровень экспрессии этого гена в поврежденной ишемической почке по сравнению с уровнем экспрессии в нормальной почке взрослой крысы. Участком экспрессии были, очевидно, инфильтрующие клетки. 6. Выделение человеческого кДНК-клона,который перекрестно гибридизируется с крысиным кДНК-клоном 3-2. Был получен 32 Р-меченный ДНК-зонд, содержащий нуклеотиды 546-969 вставки клона 32, показанного на фиг. 1, и этот зонд использовали для скрининга лямбда gt10-кДНКбиблиотеки печени эмбриона человека(Clonetech CatalogHL5003a). 1 х 106 бляшек скринировали в дубликате с использованием стандартных условий, описанных выше, за исключением того, что температура скрининга составляла 55 С. Для промывки в условиях высокой жесткости, фильтры промывали в 2 х SSC при 55 С. Было идентифицировано 50 положительных фагов, после чего бляшки очищали и получали ДНК. Фаговые ДНК подвергали Саузерн-блот-анализу с использованием тех же самых зондов, которые были описаны выше. Саузерн-блот-фильтр подвергали конечной промывке 0,5 х SSC при 55 С. Два клона были идентифицированы как положительные. Вставку клона Н 13-10-85 секвенировали, и выявляли область, которая кодирует белок, являющийся в высокой степени идентичным белку 3-2, показанному на фиг. 3. Нуклеотидная последовательность (SEQID No:6) и предсказанная аминокислотная последовательность (SEQ ID No:7) родственного белка человека 3-2 показаны на фиг. 4. Как видно из оптимального анализа (Bestfit), проиллюстрированного на Фиг. 5, человеческий родственный белок 3-2 на 43,8% идентичен и на 59,1% подобен крысиному белку 3-2. Оба эти белка содержат IgG-, муциновый, трансмембранный и цитоплазматический домены. Шесть цистеинов в IgG-доменах обоих белков являются консервативными. 7. Продуцирование гибридного белка"KIM-1-Ig". Гибридный белок внеклеточного доменаKIM и Fc-область иммуноглобулина (Ig) были использованы в качестве инструмента для исследования молекулярной и клеточной биологии поврежденной/регенерирующей почки, а 20 также в качестве терапевтической молекулы. Для продуцирования гибридного белка KIM-Ig с внеклеточным доменом человеческого и крысиного белка KIM-1, фрагмент кДНК внеклеточного домена KIM-1 амплифицировали с помощью PCR, и клонировали в экспрессирующий вектор Biogen, pCA125, для кратковременной экспрессии в клетках COS. Экспрессирующий вектор рСА 125 продуцирует гибридный белок,который имеет структуру, кодированную геном,клонированным в N-конце, и Fc-область Ig человека в С-конце. Клетки COS трансфецировали плазмидами SJR 103 или 104, экспрессирующими гибридный белок, который содержит последовательности человеческого белка KIM 2631147 (SEQ ID No:6, SJR 103) или последовательности 599-1319 крысиного белка KIM (SEQDMEM в "клеточной фабрике" (Nunc, Naperville,II) . Через 2-3 дня после трансфекции, среду собирали, концентрировали с использованием концентратора Amicon, и гибридный белок очищали с использованием колонки с Сефарозой-Белком А. После очистки чистоту гибридного белка оценивали с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН. Диагностическое использование соединений настоящего изобретения Анти-KIM антитела настоящего изобретения, которые специфически связываются с белком, имеющим последовательность SEQ IDNo:3, SEQ ID No: 5 или SEQ ID No: 7, или его фрагментом, могут быть использованы в нескольких диагностических методах. Эти агенты могут быть помечены детектируемыми маркерами, такими как флуоресцентно или радиографически непрозрачные вещества, и введены индивидууму для визуализации тканей, которые экспрессируют белок KIM. Эти агенты могут быть также связаны с веществами, такими как,пероксидаза хрена, которые могут быть использованы в качестве иммуноцитохимических красителей, позволяющих визуализировать областиKIM-положительных клеток на гистологических срезах. Таким образом, специфическое антитело может быть использовано как таковое, и участки, в которых оно связывается, могут быть визуализированы в "сэндвич"-анализе с использованием антитела против иммуноглобулина, которое само является связанным с детектируемым маркером. Специфические антитела против белкаKIM могут быть также использованы в иммуноанализе для обнаружения присутствия KIM или для определения его концентрации в образцах тканей и физиологических жидкостей организма. Эти концентрации могут коррелировать с различными состояниями тканей. В своем варианте, представляющем особый интерес, настоящее изобретение относится к способу диагно 21 стирования повреждения почек, или к способу мониторинга процесса репарации почек путем измерения концентрации KIM или фрагментовKIM в моче, плазме или сыворотке пациента. Аналогично, концентрация KIM может быть измерена в мочевом осадке, а в частности, в клеточном дебрисе мочевого осадка. Плотные слои клеток почечных канальцев, которые могут присутствовать в мочевом осадке пациента,страдающего заболеванием почек на начальной стадии, могут содержать повышенные уровни белка KIM и мРНК. Специфические антитела против белкаKIM могут быть также связаны с твердыми носителями, такими как шарики или чашки, и использованы для удаления лиганда из раствора либо в целях измерения, либо в целях очистки и характеризации белка или его характерных свойств (таких как, посттрансляционные модификации). Такая характеризация белка KIM пациента может быть использована для идентификации делеционных мутантов или дефектов процессинга, которые нарушают функцию KIM и ассоциируются с аномальными фенотипами пациента. Каждый из этих методов является стандартным и известен любому специалисту в области иммунологии. В других методах визуализации, осуществляемых в целях диагностической визуализации тканей, экспрессирующих КIМ-лиганды, особенно опухолей, могут быть использованы KIM или его фрагменты, связанные с визуализируемыми молекулами. Другие диагностические методы основаны на демонстрации стимулированных KIM-мРНК в тканях, которые указывают на процессы, связанные с повреждением. Эти способы были протестированы, и было показано, что они могут быть успешно использованы в модели ишемического повреждения у крыс, как описано ниже. Для того, чтобы определить повышается ли количество белка KIM после повреждения ткани, мы исследовали гомогенаты контрлатеральной почки и пост-ишемической почки, полученной через 24 и 48 ч после 40-минутного зажима почечной артерии и вены одной почки у каждой крысы. Почечный гомогенат оценивали на присутствие белка KIM-1. С помощью Вестерн-блот-анализа идентифицировали три белка,которые были обнаружены, с использованием двух различных антител, в почках, подвергнутых ишемическому повреждению, и которые не были обнаружены в гомогенатах от контрлатеральной почки, не подвергнутой ишемическому повреждению. Кажущиеся молекулярные массы полос составляли приблизительно 40 кДа, 50 кДа и 70-80 кДа. Эти три вида белков, обнаруженных с помощью Вестерн-блот-анализа, могут представлять гликозилированные формы того же самого белка при условии, что присутствуют потенциальные сайты N- и О-связанного гликозилирования. Тот факт, что каждый из 22 этих белков реагирует с двумя различными сериями поликлональных антител, подтверждает мнение, что они являются родственными белкуKIM-1 и не являются полосами перекрестного реагирования. Это мнение подтверждают результаты частичного CNBr-расщепления трех белков, которые имеют общие фрагментыCNBr-расщепления. Поскольку не предполагалось, что цитоплазматический домен белкаKIM-1 содержит какие-либо посттрансляционные модификации, то два самых малых продукта гидролизата (4,7 кДа и 7,4 кДа), обнаруженные с помощью антител, направленных против цитоплазматического домена KIM-1, должны иметь тот же самый размер для трех различных полос белка KIM-1, в том случае, если они происходят от того же самого белка. Мы наблюдали, что белки 40 кДа и 70-80 кДа KIM-1 дают фрагменты, мигрирующие при предсказанном размере. Гидролизат 50 кДа-полосы белка также давал тот же самый отличительный признак Сконцевого пептида полосы. В последовательности KIM-1 присутствуют два предполагаемых сайта для Nгликозилирования и муциновый домен, где Огликозилирование должно покрывать полипептидную цепь. Три полосы KIM-1, обнаруженные в пост-ишемической почке, должны соответствовать вариантам гликозилирования того же самого корового белка. Де-N-гликозилирование с использованием PNGaзы F приводило к сдвигу во всех трех полосах до низкомолекулярной массы, соответствующей потере около 3 кДа,что указывало на то, что все три белка являютсяN-гликозилированными. Различия в О-гликозилировании могут быть объяснены различиями в размерах этих трех полос. Терапевтическое использование соединений настоящего изобретения Терапевтические способы настоящего изобретения предусматривают избирательное стимулирование или ингибирование клеточного ответа, который зависит от присоединения KIM. Если KIM и KIM-лиганд оба являются мембрано-ассоциированными и экспрессируются различными клетками, то в KIM-экспрессирующих клетках или в клетках, экспрессирующих KIMлиганд, или в тех и других может индуцироваться трансдукция сигнала. Ответ, запущенный присоединением KIM в клетках, экспрессирующих KIM-лиганд, может быть продуцирован посредством контактирования клетки с экзогенным белком KIM, KIMгибридными белками, или активирующими антителами против KIM-лиганда, либо in vitro,либо in vivo. Кроме того, ответы клеток, экспрессирующих KIM-лиганд, которые тем или иным способом стимулируются эндогеннымиKIM, могут быть блокированы посредством контактирования клеток, экспрессирующихKIM-лиганд, с антагонистом KIM-лиганда (например, антителом-антагонистом, которое свя 23 зывается с KIM-лигандом) или посредством контактирования эндогенного KIM с антителом против KIM или с другой KIM-связывающей молекулой, которая препятствует эффективному связыванию KIM с КIМ-лигандом. Аналогично ответы, индуцированные посредством связывания KIM в KIM-экспрессирующей клетке, могут стимулироваться или ингибироваться экзогенными соединениями. Так,например, ответ, стимулированный связыванием KIM в KIM-экспрессирующей клетке, может быть генерирован благодаря контактированию этой клетки с растворимым KIM-лигандом, или с некоторыми активирующими антителами против KIM. Кроме того, ответы KIM-экспрессирующей клетки, которые могут быть запущены тем или иным способом благодаря взаимодействию с эндогенным KIM-лигандом, могут блокироваться посредством контактированияKIM (например, блокирующим антителом, которое связывается с KIM таким образом, что это связывание способствует предупреждению эффективного сигнал-генерирующего присоединения KIM), или посредством контактирования эндогенного KIM-лиганда с антителом противKIM-лиганда или с другой молекулой, связывающейся с KIM-лигандом, связывание которой способствует предупреждению эффективного присоединения KIM к КIМ-лиганду. Которое из указанных выше событий может быть использовано в терапевтических целях зависит от соответствующего этиологического механизма, либо патологического процесса, который необходимо ингибировать, либо от терапевтически желаемого процесса, который необходимо стимулировать, как это очевидно любому специалисту. Так, например, если связывание KIM приводит к желаемому росту клеток,сохранению зрелого фенотипа, устойчивости к апоптозу, индуцированному различными инсультами, или к другим с медицинской точки зрения желательным ответам, то может быть использован один из вышеуказанных механизмов, который индуцирует ответ, стимулируемый присоединением KIM. Альтернативно, если присоединение KIM приводит к нежелательным последствиям, таким как опухолевый рост, нежелательная потеря клеточной функции, восприимчивость к апоптозу, или стимуляция воспалительных реакций, то, в этом случае могут быть использованы ингибирующие механизмы. Ниже приводятся примеры ранее описанных терапевтических способов настоящего изобретения. Одним из примеров терапевтического использования соединений настоящего изобретения, родственных белку KIM, является лечение индивидуума с почечным заболеванием,способствующее росту у этого индивидуума новой ткани, либо способствующее заживлению поврежденной ткани у этого индивидуума; где указанное лечение предусматривает введение 24 этому индивидууму терапевтически эффективного количества белка KIM настоящего изобретения, или фармацевтической композиции, содержащей белок настоящего изобретения. Белком, используемым в этих способах, может быть фрагмент полноразмерного белка KIM, растворимый белок KIM-лиганда или гибридный фрагмент, или агонист KIM. Эти методы также могут быть осуществлены путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела-агониста настоящего изобретения, либо фармацевтической композиции, которая содержит антитело-агонист настоящего изобретения. Белок KIM может быть введен одновременно с терапевтически эффективным количеством второго соединения, которое оказывает дополнительное благоприятное действие. Тканями, представляющими интерес в этих методах, являются любые ткани, а предпочтительными тканями являются почечная ткань, печень,нервная ткань, сердце, желудок, тонкая кишка,спинной мозг, или легкие. Конкретными почечными заболеваниями, которые могут быть подвергнуты эффективному лечению путем введения соединений настоящего изобретения, являются острая почечная недостаточность, острый нефрит, хроническая почечная недостаточность,нефротический синдром, недостаточная функция почечных канальцев, почечные трансплантаты, токсические повреждения, повреждения в результате гипоксии, и травмы. Дефектами почечных канальцев являются либо врожденные,либо приобретенные почечные заболевания,такие как поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз, и губчатая почка. Этот список заболеваний не ограничивается вышеуказанными заболеваниями и может включать множество других почечных расстройств (см. например,работу Harrison Principles of Internal Medicine,13th ed., 1994, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки). Индивидуумом,участвующим в этих методах, может быть человек. Терапевтическое лечение, направленное на ингибирование роста у индивидуума нежелательной ткани, экспрессирующей KIM-лиганд,включает стадию введения этому индивидууму терапевтически эффективного количества антагониста KIM (например, антитела-антагониста,которое связывается с KIM-лигандом), либо стадию введения терапевтически эффективного количества антитела против KIM, или другойKIM-связывающей молекулы, которая блокирует связывание KIM с тканью, экспрессирующейKIM-лиганд. В одном представляющем интерес варианте, антагонист KIM или антитело противKIM может быть использовано в терапевтических целях для ингибирования или блокирования роста опухолей, который зависит от белкаKIM. Другие способы настоящего изобретения предусматривают уничтожение опухолевых 25 клеток, экспрессирующих KIM-лиганд, или ингибирование их роста посредством контактирования этих клеток с гибридным белком KIM или токсина или радионуклида, или с антителом против KIM-лиганда, конъюгированного с токсином или радионуклидом. Эти клетки могут присутствовать в организме индивидуума, а белок или конъюгированное антитело вводят в организм индивидуума. Настоящее изобретение также относится к способу направленной доставки токсина или радионуклида к КIМ-экспрессирующей клетке,предусматривающему контактирование этой клетки с гибридным белком, содержащим KIMлиганд и токсин или радионуклид, или с антителом против KIM-лиганда, конъюгированного с токсином или радионуклидом. Другим вариантом настоящего изобретения является способ подавления роста KIM-экспрессирующей опухолевой клетки, предусматривающий контактирование этой клетки с гибридным белком, содержащим KIM-лиганд и токсин или радионуклид, или с антителом против KIM-лиганда,конъюгированного с токсином или радионуклидом; где указанная клетка присутствует в организме индивидуума, а белок вводят этому индивидууму. Термин "индивидуум", используемый в настоящем описании, означает любое млекопитающее, которому может быть введен KIM. Конкретными индивидуумами, подвергаемыми лечению способом настоящего изобретения,являются люди, а также не относящиеся к человеку приматы, овцы, лошади, крупный рогатый скот, козы, свиньи, собаки, кошки, кролики,морские свинки, хомячки, песчанки, крысы и мыши, а также органы, опухоли, и клетки, полученные или происходящие от этих хозяев. Использование соединений настоящего изобретения в генной терапии Гены KIM настоящего изобретения вводят в поврежденную ткань, или в ткань, рост которой желательно стимулировать. Такая генная терапия стимулирует продуцирование белкаKIM трансфецированными клетками, индуцируя, тем самым, клеточный рост и/или выживание клеток, которые экспрессируют белок KIM. В конкретном варианте метода генной терапии, ген, кодирующий белок KIM, может быть введен в почечную ткань-мишень. БелокKIM должен стабильно экспрессироваться и стимулировать рост, деление и дифференцировку ткани, либо он должен потенцировать выживание клеток. Кроме того, ген KIM может быть введен в клетку-мишень с использованием ряда хорошо известных методов, в которых используются модели на основе вирусных или невирусных моделей. Методами, не предусматривающими использование вирусов, являются электропорация; метод с использованием мембранных гибридов с липосомами; высокоскоростная бомбардиров 004402DEAE-декстран-опосредованная трансфекция; и прямая микроинъекция в одиночную клетку. Так, например, ген KIM может быть введен в клетку путем копреципитации фосфатом кальция (Pillicer et al., Science, 209: 1414-1422 (1980; путем механической микроинъекции и/или акселерации частиц (Anderson(1980; путем переноса ДНК с помощью липосом (например, LIPOFECTIN-опосредованная трансфекция, Fefgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA, 84: 471-477, 1987; GaoHuang, Biochim.DEAE-декстран-опосредованной трансфекции; путем электропорации (патент США 4956288); или способами с использованием полилизина, в которых ДНК конъюгируют для доставки ДНК,предпочтительно, к гепатоцитам печени (Wolffet al., Science, 247: 465-468, 1990; Curiel et al.,Human Gene Therapy 3: 147-154, 1992). Клетки-мишени настоящего изобретения могут быть трансфецированы путем прямого переноса гена. См., например, Wolff et al., "Direct Gene Transfer Info Moose in Vivo", Science,247: 1465-68, 1990. Во многих случаях желательно использовать вектор-опосредованную трансфекцию. Все эти методы хорошо известны специалистам, и могут быть использованы для встраивания полинуклеотидной последовательности в вектор, (см., например, Sambrook et al.,Molecular Cloning. A Laboratory manual, ColdMolecular Biology, J. WileySons, N. Y. 1992,оба эти руководства вводятся в настоящее описание посредством ссылки). Активация промотора может быть тканеспецифической или индуцируемой метаболическим продуктом или введенным веществом. Такими промоторами/ энхансерами являются, но не ограничиваются ими, нативный промотор белка лиганда c-ret,предранний промотор/энхансер цитомегаловируса (Karasuyama et al., J. Exp. Med., 169:13,1989); промотор бета-актина человека (Gunninget al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84: 4831, 1987); глюкокортикоид-индуцибельный промотор,присутствующий в длинном концевом повторе вируса опухоли молочной железы мыши(MMTV LTR) (Klessing et al., Mol. Cell Biol., 4: 1354, 1984); длинные концевые повторы вируса мышиного лейкоза Молони (MuLV LTR) (WiessLaboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1985); ранний промотор SV40 (BernoistChambon,Nature, 290: 304, 1981); промотор вируса саркомы Рауса (RSV) (Yamamoto et al., Cell, 22:787,1980); промотор тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV) (Wagner et al., Proc. Natl. Acad.(Yamada et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82: 3567, 1985). Гены KIM могут быть также введены с помощью специфических вирусных векторов,используемых в системах переноса генов, которые в настоящее время хорошо известны. См.,например, Madzak et al., J. Gen. Virol., 73: 153336, 1992 (паповавирус SV40); Berkner et al., Curr.al., Eds.), Greene Publishing Associacates, 1989,все указанные работы вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Предпочтительными векторами являются ДНК-вирусы, к которым относятся аденовирусы(предпочтительно, векторы на основе вирусов(предпочтительно вектор на основе простого герпеса), и парвовирусы (предпочтительно, векторы на основе "дефектных" или неавтономных парвовирусов, более предпочтительно векторы на основе аденоассоциированного вируса, а наиболее предпочтительно векторы на основеAAV-2). См., Ali et al., Gene Therapy 1: 367- 384: патенты США 4797368 и 5399346, и обсуждение, приведенное ниже. Выбор конкретной векторной системы для переноса, например, последовательности KIM зависит от ряда факторов. Одним из важных факторов является природа популяции клетокмишеней. Хотя ретро-вирусные векторы были основательно изучены и использованы в ряде методов генной терапии, однако, они, в основном, не пригодны для инфицирования клеток,которые не делятся, но они могут быть использованы в противораковой терапии, поскольку они лишь интегрируются в их геном и экспрессируют свои гены в реплицирующихся клетках. Эти векторы могут быть использованы ex vivo, и с этой точки зрения они представляют интерес,поскольку они стабильно интегрируются в геном клетки-мишени. Аденовирусы представляют собой эукариотические ДНК-вирусы, которые могут быть модифицированы для эффективной доставки терапевтического или репортерного трансгена к различным типам клеток. Основные типы аденовирусов тип 2 и тип 5 (Ad2 и Ad5, соответст 004402 28 венно) , которые вызывают респираторные заболевания у человека, используются в настоящее время для генной терапии мышечной дистрофии Дюшенна (DMD) и кистозного фиброза(CF) . Оба эти аденовируса, Ad2 и Ad5, принадлежат к подклассу аденовирусов, которые не ассоциируются со злокачественными опухолями человека. Векторы на основе аденовирусов способны обеспечивать исключительно высокие уровни доставки трансгена, практически, ко всем типам клеток, независимо от их митотической стадии. Высокие титры (1013 бляшкообразующих единиц/мл) рекомбинантного вируса могут быть легко продуцированы в клетках 293(трансформированная аденовирусом, комплементационная клеточная линия почек эмбриона человека: АТСС CRL 1573), и могут храниться в замороженном виде в течение длительного периода времени без каких-либо заметных потерь. Эффективность этой системы в доставке терапевтического трансгена in vivo которая возмещает генетический дисбаланс, была продемонстрирована на модели животных для различных заболеваний. См., Watanabe, Atherosclerosis, 36: 261-268, 1986; Tanzawa et al., FEBS Letters 118Invest., 93: 1889-1893, 1994; все указанные работы вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Действительно, рекомбинантный и дефектный по репликации аденовирус, кодирующий ДНК для трансмембранного регулятора кистозного фиброза (CFTR), был разрешен для использования, по крайней мере, в двух клинических испытаниях с участием пациентов с кистозным фиброзом (CF). См., например, Wilson,Nature, 365: 691-692, 1993. Дополнительным подтверждением безопасности использования рекомбинантных аденовирусов для генной терапии является широкомасштабный эксперимент, проведенный с участием группы людей,которым вводили вакцину на основе "живого" аденовируса. Рекомбинантные в первой генерации и дефектные по репликации аденовирусы, которые были разработаны для генной терапии DMD и других наследственных заболеваний, содержали делеции всей области Е 1 а и части области Elb. Этот дефектный по репликации вирус выращивали в клетках 293, содержащих функциональный ген Е 1 а аденовируса, который кодирует транс-активный белок Е 1 а. Е 1-делетированные вирусы способны реплицироваться и продуцировать инфекционный вирус в клетках 293, которые содержат продукты гена области Е 1 а иE1b в транс-положении. Продуцированный в результате вирус способен инфицировать многие типы клеток, и может экспрессировать встроенный ген (при условии, что он несет свой собственный промотор), но он не способен реплицироваться в клетке, которая не содержит 29 ДНК-область Е 1, даже если эта клетка инфицирована с очень высокой множественностью инфекции. Аденовирусы обладают тем преимуществом, что они имеют широкий круг хозяев; могут инфицировать покоящиеся клетки или клетки, находящиеся в конечной стадии дифференцировки, такие как нервные клетки; и являются,в основном неонкогенными. Очевидно, что аденовирусы не интегрируются в геном хозяина. Поскольку они существуют вне хромосомы, то риск инсерционного мутагенеза является совсем незначительным. См. выше, Ali et al., 373. Рекомбинантные аденовирусы (rAdV) продуцируют очень высокие титры; их вирусные частицы являются умеренно стабильными, а уровни экспрессии являются высокими; при этом, аденовирусы могут инфицировать широкий круг хозяев. Их природными клетками-хозяевами являются эпителиальные клетки дыхательных путей, а поэтому эти вирусы могут быть использованы для терапии рака легких. Перенос, опосредованный бакуловирусом,имеет несколько преимуществ. Бакуловирусный перенос гена может происходить в реплицирующихся и нереплицирующихся клетках, и он может также происходить в почечных клетках,гепатоцитах, нервных клетках, клетках селезенки, клетках кожи и в мышечных клетках. Бакуловирусы не реплицируются в клетках млекопитающих и являются непатогенными для этих клеток. У человека отсутствуют уже выработанные антитела к рекомбинантному бакуловирусу,которые могут блокировать инфекцию. Кроме того, бакуловирус способен встраивать и трансдуцировать большое количество ДНК-вставок. Аденоассоциированные вирусы (AAV) были также использованы в качестве векторов для соматической генной терапии. AAV представляет собой небольшой одноцепочечный (оц) ДНК-вирус с простой организацией генома (4-7 т.п.о.), что делает его идеальным субстратом для генетической инженерии. Две открытые рамки считывания кодируют серию полипептидов rep и cap. Полипептиды rep (rер 78, rер 68,гер 62 и rер 40) участвуют в репликации, "спасении" и интеграции генома AAV. Белки cap (VP1,VP2 и VP3) образуют капсид вириона. Фланкирующие открытые рамки считывания rep и cap у 5'- и 3'-концов представляют собой инвертированные концевые повторы в 145 п.о. (ITR) , из которых первые 125 п.о. способны к образованию Y- или Т-образных дуплексных структур. Важное значение разработки векторов на основеAAV заключается в том, что полные домены rep и cap могут быть вырезаны и заменены терапевтическим или репортерным трансгеном. См., В.J. Carter, "Handbook of Parvoviruses, ed. , P. Tijsser, CRC Press, pp. 155-168 (1990). Было показано, что ITR представляют собой минимальную последовательность, необходимую для репликации, "спасения", упаковки, и интеграции генома AAV. 30 Аденоассоциированные вирусы (AAV) имеют важное значение в генной терапии. Их вирусные частицы очень стабильны, а рекомбинантные AAV (rAAV) имеют "лекарственноподобные" свойства, благодаря чему rAAV могут быть очищены путем осаждения или путем центрифугирования в градиенте CsCl. Эти вирусы являются термостабильными, и могут быть лиофизилизованы с получением порошка, а затем снова гидратированы до восстановления полной активности. Их ДНК стабильно интегрируется в хромосомы хозяина, поскольку их экспрессия является продолжительной. ВирусыAAV имеют широкий круг хозяев, и не вызывают известного заболевания, а поэтому рекомбинантные векторы являются нетоксичными. После введения в клетку-мишень нужные последовательности могут быть идентифицированы стандартными методами, такими как гибридизация нуклеиновой кислоты с использованием зондов, содержащих последовательности,которые являются гомологичными/ комплементарными последовательностями гена, встроенного в вектор. В другом методе эта последовательность (или последовательности) могут быть идентифицированы путем обнаружения присутствия или отсутствия функции "маркерного" гена (например, активности тимидинкиназы,устойчивости к антибиотику, и т.п.), индуцированной благодаря введению экспрессирующего вектора в клетку-мишень . Фармацевтические препараты и введение Соединения настоящего изобретения получают в соответствии со стандартной практикой, такой как введение в вектор-носитель. Термин "фармацевтически приемлемый носитель" означает один или несколько органических или неорганических ингредиентов, природных или синтетических, с которыми мутантный онкоген или мутантный онкопротеин может быть объединен для облегчения его применения. Подходящим носителем является стерильный физиологический раствор, хотя могут быть использованы и другие водные и безводные изотонические стерильные растворы и стерильные суспензии, которые применяются в фармацевтической практике и известны каждому специалисту. В этом смысле термин "носитель" включает в себя липосомы и tat-белок ВИЧ-1 (см., Chen et al.,Anal. Biochem. 227: 168-175, 1995), а также любую плазмиду и вирусные экспрессирующие векторы. Любые новые полипептиды настоящего изобретения могут быть использованы в форме фармацевтически приемлемой соли. Подходящими кислотами и основаниями, которые способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с полипептидами настоящего изобретения, являются кислоты и основания, хорошо известные специалистам, такие как неорганические и органические кислоты и основания. 31 Соединение настоящего изобретения вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве, которое означает количество соединения, продуцирующее терапевтически желаемый эффект или оказывающее влияние на конкретное состояние пациента, подвергаемого лечению. Эффективное количество соединений настоящего изобретения способно ослаблять или уменьшать прогрессирование заболевания,дегенеративного состояния, или повреждения. Эффективное количество может быть определено для каждого конкретного индивидуума, исходя, частично, из характерных физических свойств индивидуума, симптомов, подвергаемых лечению, и желаемых результатов. На основании этих факторов и с использованием всего лишь рутинного экспериментирования, эффективное количество может быть определено любым специалистом. Липосомная система доставки соединения настоящего изобретения может представлять собой любую из ряда моноламеллярных везикул, мультиламеллярных везикул, или стабильных плюриламеллярных везикул, и может быть получена и введена методами, хорошо известными специалистам, например, методами, описанными в патентах США 5169637,4762915, 5000958 или 5185154. Кроме того, может оказаться желательным продуцировать новые полипептиды настоящего изобретения, а также другие выбранные полипептиды, такие как, липопротеины, для усиления их связывания с липосомами. Так, например, лечение острой почечной недостаточности у человека с использованием белка KIM, инкапсулированного в липосомы, может быть осуществлено in vivo путем введения белка KIM в клетки, необходимого для такого лечения с использованием липосом. Эти липосомы могут быть доставлены в почечную артерию с помощью катетера. Рекомбинантный белок KIM выделяют, например, из клеток СНО с помощью иммуноаффинной хроматографии или любым другим стандартным методом, а затем смешивают с липосомами, и вводят в липосомы с высокой эффективностью. Инкапсулированный белок может быть проанализирован in vitro на любое действие, направленное на стимуляцию клеточного роста. Соединения настоящего изобретения могут быть введены любым терапевтическим приемлемым способом. Они могут быть введены путем инъекции, парентеральными способами,такими как внутривенное, внутрисосудистое,внутриартериальное, подкожное, внутримышечное, внутриопухолевое, внутрибрюшинное,интарвентрикулярное(внутрижелудочковое),интраэпидуральное (внутримозговое) введение,а также путем перорального, интраназального,внутриглазного, ректального или местного введения. В настоящем изобретении также предусматривается введение препарата пролонгированного действия, такого как "депо" - инъекция 32 или разлагаемые имплантаты. В частности, рассматривается местное применение путем доставки препарата в определенный участок организма, такой как доставка посредством катетера к одному или нескольким участкам, таким как,почечная артерия или сосуд, снабжающие кровью локализированную в данном участке опухоль. Хотя настоящее изобретение описано достаточно подробно и сопровождается иллюстрациями и примерами, приведенными для лучшего его понимания, однако, в него могут быть внесены некоторые изменения и модификации,которые не должны выходить за рамки объема изобретения и сформулированной ниже формулы изобретения. Список последовательностей ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность,кодирующую полипептид, содержащий аминокислоты 21-290 SEQ ID NO: 7. 2. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность,кодирующую полипептид, содержащий аминокислоты 1-290 SEQ ID NO: 7. 3. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где кодируемый полипептид дополнительно содержит Fc-домен Ig. 4. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотиды 278-1147 SEQ ID NO: 6 или последовательность, комплементарную нуклеотидам 278-1147 SEQ ID NO: 6. 5. Экспрессирующий ДНК-вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1 или 2. 41 6. Экспрессирующий ДНК-вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.4. 7. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.5 или 6. 8. Способ получения полипептида, причем указанный способ предусматривает культивирование клетки-хозяина по п.7 в среде для культивирования клеток и выделение полипептида,экспрессированного вектором в указанной клетке-хозяине. 9. Выделенный полипептид, содержащий аминокислоты 21-290 SEQ ID NO: 7. 10. Полипептид, содержащий полипептид по п.9 и иммуноглобулин, токсин или меченую группу. 11. Антитело, специфично связывающееся с полипептидом по п.9. 12. Антитело по п.11, конъюгированное с токсином или меченой группой. 13. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки,токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2 или вектора по п. 5 или 6. 14. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2 или вектора по п. 5 или 6. 15. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п.1 или 2 или вектора по п.5 или 6. 16. Способ по любому из пп.13-15, где указанным субъектом является человек. 17. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель,содержащий нуклеиновую кислоту по п.1 или 2 или вектор по п.5 или 6, диспергированные в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации. 18. Способ оценки наличия или хода восстановления поврежденной почки у субъекта,предусматривающий стадию измерения концентрации нуклеиновой кислоты по п.1 или 2 в моче, сыворотке или мочевом осадке указанного субъекта, страдающего повреждением или заболеванием почек или подвергающегося риску их развития. 19. Способ визуализации клеток или ткани,продуцирующих полипептид по п.9, предусмат 004402 42 ривающий стадию взаимодействия клеток или ткани с антителом по п.12. 20. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки,токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9. 21. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки,токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12. 22. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9. 23. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12. 24. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9. 25. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12. 26. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель,содержащий полипептид по п.9, диспергированный в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации. 27. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель,содержащий антитело по п. 11 или 12, диспергированные в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации. 28. Способ оценки наличия или хода восстановления поврежденной почки у субъекта,предусматривающий стадию измерения концентрации полипептида по п.9 в моче, сыворотке или мочевом осадке указанного субъекта, страдающего повреждением или заболеванием почек или подвергающегося риску их развития.