Способ получения суспензии частиц натамицина

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУСПЕНЗИИ ЧАСТИЦ НАТАМИЦИНА Настоящее изобретение относится к способу получения суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения натамицина, который включает воздействие на натамицин влажным размолом при рН 4,6 или меньше или при рН 6,7 или больше, при которых собственный поверхностный заряд измельченного натамицина является достаточным для сохранения суспензии стабильной без стабилизатора. Хе ван Пим, Местерс Габриэль Маринус Хенрикус, Вилдебор Виллем Йоханнес, Эннар Стефен Л.А., Вис Альберт-Йон (NL) Воробьева Е.В. (RU)(71)(73) Заявитель и патентовладелец: ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL) Область изобретения Настоящее изобретение относится к способу измельчения частиц, в частности к способу измельчения частиц органических соединений. Известный уровень техники Известны различные способы уменьшения размера частиц. Данные способы включают измельчение сухих порошков и частиц, суспендированных в жидкости. В большинстве случаев для последней категории используют стабилизаторы с целью предотвращения агрегации суспендированных частиц. Стабилизаторы состоят из поверхностно-активных веществ, загустителей, например гидроколлоидов и/или других агентов, которые влияют на взаимодействие между частицами и движение частиц в фазе жидкости/текучей среды. Если частицы являются достаточно большими, может происходить седиментация суспендированных в жидкости частиц. Для предотвращения данного явления увеличивают вязкость жидкой фазы добавлением стабилизаторов, таких как загустители, например гидроколлоиды и другие растворимые полимеры. Однако добавление загустителей не может полностью предотвратить седиментацию больших частиц. Следовательно, частицы, в конечном счете, образуют осадок. Данное является основным недостатком применения суспензий частиц, потому что 1) осадок часто также легко повторно не суспендируется,и 2) частицы неоднородно распределяются по всей суспензии. Седиментация не происходит вообще, если частицы очень маленькие. Таким образом, выгодно уменьшать размер частиц. Однако мелкие частицы могут легко образовывать агрегаты, которые осаждаются, если агрегаты являются достаточно большими. Таким образом, следует предотвращать агрегацию частиц в данных системах. Одним подходом является создание суспензии сразу же после измельчения. Однако данное не возможно во всех применениях. Другим подходом является использование добавок,таких как стабилизаторы.WO 98/35666 описывает, как напроксен, полученный от поставщика в порошковой форме, превращают в форму наночастиц путем методик размалывания в присутствии поверхностного модификатора.WO 91/06292 описывает способ получения гидрофобного/аэрофильного твердого вещества, которое может диспергироваться в воде в форме дискретных микрочастиц, где твердое вещество измельчают в водной среде в присутствии гидроколлоида для получения суспензии микрочастиц.US 2876160 описывает обеспечение физической стабильности нерастворимого в воде материала путем включения материала в химически модифицированный крахмал. В US 4006025 по существу нерастворимый в воде спектральный сенсибилизирующий краситель диспергируют в воде и затем измельчают или предпочтительно гомогенизируют при повышенной температуре в присутствии поверхностно-активного вещества.US 5858410 описывает способ получения наносуспензий кавитацией или срезанием и ударными силами в присутствии поверхностно-активных веществ или загустителей.WO 2007/014566 описывает суспензии, содержащие кристаллические частицы коэнзима Q10, диспергированные в водном растворе матричного материала, такого как встречающиеся в природе или модифицированные полисахариды, встречающиеся в природе гидроколлоиды, крахмал, полученный из природного источника, или модифицированный крахмал. ЕР 0807431 описывает способ производства каротиноидных композиций, содержащих поверхностно-активное вещество.GB 1148801 описывает стабилизированные композиции нистатина, содержащие коллоидный диоксид кремния. Агрегация - и седиментация как ее последствие - малых частиц часто предотвращается добавлением стабилизаторов. Однако, как обозначено выше, добавления данных соединений часто бывает не достаточно, чтобы добиться предотвращения агрегации и седиментации частиц. Кроме того, добавление стабилизаторов может быть нежелательным в некоторых применениях, а именно применениях, в которых не содержащие стабилизаторов композиции являются более пригодными, стабилизаторы не предусмотрены по причине законодательства и/или стабилизаторы не совместимы с активным веществом. Также добавление стабилизатора может привести к более высоким затратам и может, таким образом, быть экономически непривлекательным. Кроме того, использование стабилизатора может быть бесперспективным с экологической точки зрения. Вследствие вышеуказанного, существует потребность в стабильных композициях малых частиц,имеющих хорошие седиментационные свойства и по существу не содержащих стабилизаторов. Подробное изложение изобретения Настоящее изобретение относится к способу получения суспензии или дисперсии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения. Способ включает воздействие на твердое органическое соединение измельчением влажным размолом в условиях рН, в которых собственный поверхностный заряд измельченного органического соединения является достаточным для сохранения стабильной суспензии. В варианте осуществления суспензия, полученная по способу согласно изобретению, является стабильной и по существу не содержащей стабилизаторов. Другими словами, суспензия является стабильной в условиях по существу отсутствия стабилизаторов. Стабильная суспензия, содержащая измельченные частицы, может быть изготовлена влажным размолом в отсутствие существенного количества стабилизатора (добавки, увеличивающей стабильность). Стабилизатор не является необходимым до, во время и/или после примененного способов измельчения (например, влажного размола) для обеспечения стабильности суспензии. Специалисту будет понятно, что "по существу" в данном отношении означает, что суспензия может содержать стабилизатор, но в случае, если суспензия содержит стабилизатор, его количество в суспензии является слишком низким, чтобы оказывать сколько-нибудь заметное стабилизирующее влияние на суспензию. В варианте осуществления суспензия не содержит какого-либо стабилизатора. Вариант изобретения относится к способу получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора, способу, содержащему стадии а) воздействия на твердое органическое соединение влажным размолом при определенных значениях рН для получения суспензий тонкодисперсных частиц твердого органического соединения, имеющих каждая определенное значение рН; б) определения того, какая из полученных суспензий является стабильной; и в) получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения путем воздействия на твердое органическое соединение измельчением влажным размолом в условиях, в которых суспензия стабильна согласно стадии б. В стадии а твердое органическое соединение может суспендироваться в четко выраженных жидкостях или сверхкритических текучих средах, содержащих одно или больше буферных веществ и имеющих конкретные значения рН, а затем каждая суспензия может быть подвергнута мокрому размолу для получения суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения. В другом варианте в стадии а твердое органическое соединение может быть суспендировано в жидкости или сверхкритической текучей среде, имеющей какое-нибудь значение рН,например воде или растворе, содержащих буферное вещество, и/или перед влажным размолом, или во время влажного размола рН суспензии корректируют, например, добавлением кислоты, основания или буферного вещества до определенного значения рН. Так или иначе, осуществляют влажный размол при определенных значениях/условиях рН. Конечно, влажный размол твердого органического соединения при определенных значениях рН в стадии а может осуществляться одновременно, но может также осуществляться последовательно. Чтобы определить оптимальные условия для получения устойчивой суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора, стадии а и б могут произвольно повторяться по меньшей мере один раз. В другом варианте изобретение предоставляет способ получения устойчивой суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора, способ, содержащий стадии а) воздействия на твердое органическое соединение мокрым размолом при каком-нибудь значении рН и изменения рН суспензии после размалывания для получения суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения, имеющих каждая определенное значение рН; б) определения того, какая из полученных суспензий стабильна; и в) получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения путем воздействия на твердое органическое соединение измельчением влажным размолом в условиях, в которых суспензия стабильна согласно стадии б. В стадии а твердое органическое соединение может быть суспендировано в жидкости или сверхкритической текучей среде, имеющей одно значение рН, и может затем подвергаться влажному размолу при данном значении рН для получения суспензии тонкодисперсных частиц. Затем берут образцы суспензии тонкодисперсных частиц (которые имеют одно значение рН), и рН каждого образца корректируют до определенного значения рН с помощью пригодного соединения, например, кислоты, основания или буферного вещества, для получения суспензии, имеющей каждая определенное значение рН. С целью нахождения оптимальных условий для получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора стадии а и б могут произвольно быть повторены по меньшей мере один раз. В другом варианте изобретение относится к способу получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора, способу, содержащему стадии а) суспендирования твердого органического соединения в жидкости или сверхкритической текучей среде; б) измерения дзета-потенциала суспензии при определенных значениях рН; в) получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения путем воздействия на твердое органическое соединение измельчением влажным размолом в условиях, в которых суспензия стабильна согласно стадии б. Определенные значения рН могут быть достигнуты путем суспендирования твердого органического соединения в жидкостях или сверхкритических текучих средах, причем каждая жидкость или текучая среда имеет определенное значение рН. В другом варианте твердое органическое соединение может суспендироваться в жидкой или сверхкритической текучей среде, имеющей одно значение рН, а определенные условия рН создаваться в устройстве, измеряющем дзета-потенциал полученной суспензии (дзета-потенциал измеряют при совокупности величин рН). Для определения, какие из полученных суспензий стабильны, могут использоваться способы, известные в технике, в том числе определение дзета-потенциала суспензий, содержащих тонкодисперсные частицы твердого органического соединения; определение седиментации тонкодисперсных частиц в суспензиях со временем; или определение размера тонкодисперсных частиц в суспензиях со временем. Ра-2 022628 зумеется, может также использоваться комбинация данных способов. Условия/величины рН, используемые в стадиях а или б способа согласно изобретению, предпочтительно находятся между 1 и 14. "Определенный", который используется в настоящем документе, означает несколько суспензий, причем каждая суспензия имеет различный рН, например суспензия, имеющая рН 2, суспензия, имеющая рН 3, и т.д. Предпочтительно получают по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13 или 14 различных суспензий, причем каждая суспензия имеет определенное значение рН между 1 и 14. Предпочтительно включаются суспензии, имеющие по меньшей мере одно значение рН на единицу рН. В стадии б определяют стабильность суспензий, полученных в стадии а, т.е. определяют, какая суспензия стабильна, а какая суспензия не стабильна. Так, стадия б может включать стадию определения стабильности суспензий и на ее основании определения/оценки того, какие суспензии стабильны и какие не стабильны. Пригодные способы для определения/измерения стабильности включают способы, изложенные выше. Конечно, другие способы определения/измерения стабильности суспензий, содержащих частицы, также включаются в настоящее изобретение. Другие пригодные способы известны специалисту. Если для определения стабильности используются измерения дзета-потенциала, то суспензии считаются стабильными в контексте настоящего изобретения, если дзета-потенциал, который измерен динамическим рассеянием света, как изложено в настоящем документе, составляет, например, по меньшей мере 10 мВ или выше или, например, по меньшей мере -10 мВ или ниже. Предпочтительно дзетапотенциал составляет по меньшей мере 15 мВ или выше, по меньшей мере 20 мВ или выше, по меньшей мере 25 мВ или выше, по меньшей мере 30 мВ или выше, по меньшей мере 35 мВ или выше, по меньшей мере 40 мВ или выше, по меньшей мере 45 мВ или выше, по меньшей мере 50 мВ или выше, по меньшей мере 55 мВ или выше и наиболее предпочтительно по меньшей мере 60 мВ или выше. В другом варианте дзета-потенциал может также предпочтительно составлять по меньшей мере -15 мВ или ниже, по меньшей мере -20 мВ или ниже, по меньшей мере -25 мВ или ниже, по меньшей мере -30 мВ или ниже, по меньшей мере -35 мВ или ниже, по меньшей мере -40 мВ или ниже, по меньшей мере -45 мВ или ниже,по меньшей мере -50 мВ или ниже, по меньшей мере -55 мВ или ниже и наиболее предпочтительно по меньшей мере -60 мВ или ниже. Если в качестве способа определения стабильности суспензий используется седиментация тонкодисперсных частиц суспензий, суспензии считают стабильными в контексте настоящего изобретения,если, например, процентное содержание ниже фронта осаждения, измеренное, как изложено в настоящем документе, составляет по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% спустя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, а предпочтительно 8 дней (после размалывания). Если для получения показателей стабильности суспензий определяют размер частиц в суспензиях,суспензии в контексте настоящего изобретения считают стабильными, если, например, средний размер частиц, заданный формулой Стокса (Stokes) для несвободного осаждения в ламинарном потоке, не увеличивается больше, чем с коэффициентом 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, более предпочтительно среднее увеличение размера частиц должно быть меньше, чем с коэффициентом 1,5, 1,3, 1,2, 1,1, 1,05, 1,01, 1,005, 1,001 в течение по меньшей мере 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после измельчения, например,размалыванием. В предпочтительном варианте осуществления средний размер частиц не увеличивается в течение всего обозначенного периода. Формулой Стокса является указанная ниже:Pparticle: плотность частицы продукта. В вышеприведенной формуле стоксовский диаметр частицы, который обусловлен гидродинамическим поведением частицы в жидкости, определяется как эквивалент диаметру сферической частицы,имеющей такое же гидродинамическое поведение (см., например, Camp T.R. (1946), Sedimentation and thesedimentation. Trans. Am. Soc. Civ. Eng. 109:629-653). В другом варианте суспензии считаются стабильными в контексте настоящего изобретения, если средний размер частиц (d4,3), который определен лазерной дифрактометрией, не увеличивается больше,чем с коэффициентом 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, более предпочтительно среднее увеличение размера частиц должно быть меньше, чем с коэффициентом 1,5, 1,3, 1,2, 1,1, 1,05, 1,01, 1,005,1 001 в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после уменьшения размеров, например, размалыванием. В предпочтительном варианте осуществления средний размер частиц не увеличивается в течение всего обозначенного периода. На основе вышеуказанных способов выбирают значения/условия рН, пригодные для размалывания. Например, значения/условия рН, при которых суспензии стабильны, например, значения/условия рН суспензий с дзета-потенциалом, составляющим по меньшей мере -10 мВ или ниже, или с процентным содержанием под фронтом осаждения, измеренным, как изложено в настоящем документе, составляет по меньшей мере 70% спустя 8 дней (после размалывания), могут применяться во время влажного размола в стадии в способа изобретения для получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения. Стабильная суспензия тонкодисперсных частиц может быть получена уже на стадии б, если одна из проверенных суспензий является стабильной. Однако стадии а и б преимущественно предназначены для мелкомасштабных получений и испытаний стабильности суспензии. Специалист, поймет, что испытание стабильности суспензий не будет осуществляться в большом, например промышленном, масштабе. Стадия с предназначена для фактических получений стабильных суспензий,например, получений в промышленном масштабе. В одном варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет способ получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора согласно изобретению, способ, содержащий стадию, например, воздействия на твердое органическое соединение измельчением путем влажного размола в условиях рН, в которых дзета-потенциал измельченного органического соединения составляет 10 мВ или выше или -10 мВ или ниже. В данных условиях дзета-потенциала суспензии, как было найдено, являются стабильными. Следовательно, в варианте осуществления измельчение влажным размолом осуществляют в отсутствие стабилизатора в условиях, в которых дзета-потенциал измельченного органического соединения составляет 10 мВ или выше. Предпочтительно дзета-потенциал измельченного органического соединения составляет 15 мВ или выше, 20 мВ или выше, 25 мВ или выше, 30 мВ или выше, 35 мВ или выше, 40 мВ или выше, 45 мВ или выше, 50 мВ или выше, 55 мВ или выше и наиболее предпочтительно 60 мВ или выше. В другом варианте осуществления измельчение влажным размолом осуществляют в отсутствие стабилизатора в условиях, в которых дзета-потенциал измельченного органического соединения составляет -10 мВ или ниже. Предпочтительно дзета-потенциал измельченного органического соединения составляет -15 мВ или ниже, -20 мВ или ниже, -25 мВ или ниже, -30 мВ или ниже, -35 мВ или ниже, -40 мВ или ниже, -45 мВ или ниже,-50 мВ или ниже, -55 мВ или ниже и наиболее предпочтительно -60 мВ или ниже. Основное преимущество способа согласно изобретению состоит в том, что благодаря способу согласно изобретению нет необходимости в применении стабилизаторов, обычно используемых для стерической или электростатической стабилизации суспензий или которые увеличивают вязкость суспензий. Суспензия, полученная способом по изобретению, остается стабильной в течение длительного времени при различных значениях рН и даже без буферизации. В контексте настоящего изобретения термин "суспензия" относится к смеси твердого тела в жидкой или сверхкритической текучей среде. Другими словами, он обозначает твердые частицы в жидкой среде. Термины "суспензия" и "дисперсия" в контексте настоящего изобретения используются взаимозаменяемо. Среда может быть водной, частично водной или даже неводной. Среда может также быть сверхкритической текучей средой. Предпочтительно среда является жидкостью, рН которой можно установить. Термин "стабилизаторы", который используется в настоящем документе, означает, например, поверхностно-активные агенты, а именно поверхностно-активные вещества, загустители, например гидроколлоиды, полиэлектролиты, блок-сополимеры, и поливалентные катионы и анионы, которые обычно используются для обеспечения стерической или электростатической стабилизациисуспензий. В контексте настоящего изобретения термин "собственный поверхностный заряд" относится к "естественному" поверхностному заряду частицы, т.е. поверхностному заряду, который не был изменен добавлением стабилизаторов. Поверхностный заряд частицы может быть измерен способами, известными в технике, а именно, например, титрованием. Термин "стабильный" в контексте стабильной суспензии относится к суспензии, в которой агрегация частиц в основном или полностью предотвращена, т.е. к суспензии, в которой средний размер частиц в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после уменьшения размеров,например истиранием, не увеличивается больше, чем с коэффициентом 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, более предпочтительно среднее увеличение размера частиц во время данного периода должно быть меньше,чем с коэффициентом 1,5, 1,3, 1,2, 1,1, 1,05, 1,01, 1,005, 1,001. В предпочтительном варианте осуществления размер частиц не увеличивается совсем. В настоящем изобретении стабильность достигается влажным размолом при рН, при котором собственный поверхностный заряд соединения является достаточным, чтобы минимизировать агрегацию, т.е. при рН, при котором агрегация затруднена. Специалист может представить несколько способов для определения пригодного рН. В одном варианте осуществления пригодный рН определяют (i) влажным размолом при определенных значениях рН, (ii) определением, при каком рН средний размер частиц не увеличивается больше, чем с коэффициентом 10, 9, 8, 7, 6, 5,4, 3 или 2 в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после размалывания,и затем (iii) выбором данного рН для условий влажного размола. Выбранный рН является пригодным,т.е. таким, при котором тонкодисперсные частицы могут быть получены без необходимости использова-4 022628 ния стабилизаторов для стабилизации суспензии. Пригодный рН может быть интервалом значений рН(например, рН 4 или рН 8 или рН между 5 и 9, даны только некоторые примеры), означая, что не одно конкретное значение рН является пригодным, а несколько значений рН в пределах интервала являются пригодными для получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц. В варианте осуществления изобретение предлагает способ получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения в отсутствие стабилизатора согласно изобретению, способ, содержащий стадии,например, а) воздействия на твердое органическое соединение влажного размола при определенных значениях рН; б) определение среднего размера частиц полученного измельченного твердого органического соединения в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после влажного размола; в) получения стабильной суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения путем воздействия на твердое органическое соединение измельчения посредством влажного размола в условиях, в которых средний размер частиц полученного измельченного твердого органического соединения не увеличивается больше, чем с коэффициентом 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, более предпочтительно,среднее увеличение размера частиц должно быть меньше, чем с коэффициентом 1,5, 1,3, 1,2, 1,1, 1,05,1,01, 1,005, 1,001 в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 или 30 дней после влажного размола. Специалист может использовать дзета-потенциал, который связан с собственным поверхностным зарядом, для получения критерия о пригодности интервала рН. Значение дзета-потенциала заключается в том, что его величина может быть связана со стабильностью суспензий. Соединения с "высоким" дзетапотенциалом электрически стабилизированы. В применении к идентичным суспензиям, чем больше абсолютная величина дзета-потенциала, тем выше абсолютная величина эффективного поверхностного заряда и более стабильна суспензия. Дзета-потенциал может быть измерен с помощью способов, известных в технике, например, путем использования анализатора дзета-потенциала, как описано в Hunter R.J.(1998), Introduction to modern colloid science, Oxford Science press, с. 241-247. Предпочтительно способ согласно изобретению, т.е. размалывание, осуществляют при низкой ионной силе, т.е. при ионной силе менее 0,50, 0,40, 0,30 или 0,20 М, более предпочтительно менее 0,10 или 0,05 М, еще более предпочтительно менее 0,01 М (см., например, Hunter R.J. (1998), Introduction to modern colloid science, Oxford Science press, с. 207). В контексте настоящего изобретения термин "тонкодисперсные частицы" относится к частицам со средним диаметром 10 мкм или меньше. В предпочтительном варианте осуществления диаметр частицы составляет 5 мкм или меньше, 3 мкм или меньше, 1 мкм или меньше, 0,9 мкм или меньше, 0,8 мкм или меньше, 0,7 мкм или меньше, 0,6 мкм или меньше, 0,5 мкм или меньше, 0,4 мкм или меньше, 0,3 мкм или меньше и более предпочтительно 0,2 мкм или меньше. Наиболее предпочтительно он относится к частицам с диаметром 0,1 мкм или меньше, 0,075 мкм или меньше, 0,050 мкм или меньше или даже 0,040 мкм или меньше. Размер частиц определяют исходя из среднего размера частиц, который в контексте настоящего изобретения выражают как d4,3, который измеряют методами лазерной дифракции, например рассеянием света. Рассеяние света возвращает сигнал, который переводится в сферу эквивалентного диаметра. Оборудование для рассеяния света известно в технике, например анализатор размера частиц лазерной дифракцией под названием Beckman Coulter LS230, который использует рассеяние лазерного света вместе с измерениями широкоуглового рассеяния света. Предпочтительно по меньшей мере 50, 60, 70,80, 90, 95, 97% и наиболее предпочтительно 99% (мас./мас.) или больше частиц в суспензии имеют средний диаметр, равный или меньше вышеуказанного среднего диаметра. Другие методики определения размера частиц, такие как микроскопия, сканирующая электронная микроскопия (SEM), просвечивающая электронная микроскопия (ТЕМ), Halo LM10 (Nanosight), Coulter Counter Multisizer 3 (Beckman Coulter) могут, конечно, также использоваться для определения размера частиц. Измельчение достигается влажным размолом. Методики размола известны в технике и включают размалывание в среде, такое как размол в бисерной мельнице, вибрационный размол, размол на шаровой мельнице; размол на струйной мельнице, например, с использованием микронной коллоидной мельницы,струйной мельницы или струйного распылителя; дисперсионное измельчение и коллоидное измельчение; измельчение дисковым истиранием; и гомогенизацию. Используемые мельницы и гомогенизаторы могут содержать охлаждающее оборудование для поддержания температуры ниже значения, при котором измельчаемые материалы разлагаются или иначе теряют активность и могут содержать оборудование для сохранения размалываемых материалов в контролируемой атмосфере. В контексте настоящего изобретения фраза "влажный размол" относится к процессу воздействия механических сил на рассматриваемый твердый материал, который диспергируется или суспендируется в фазе жидкости или текучей среды (в случае сверхкритических жидкостей) с целью разбивания твердого материала на более мелкие фрагменты (т.е. измельчения частиц). Механические силы для влажного дробления могут применяться разными способами, и существует множество различных методик, пригодных для влажного дробления. "Влажный размол", который используется в настоящем документе,включает также методики гомогенизации, такие как методики, в которых к твердому материалу применяется сила, вызванная большим падением давления по малой площади. В настоящем контексте термины"дробление" и "размол" используются взаимозаменяемо. В варианте осуществления изобретения влаж-5 022628 ному размолу в способе согласно изобретению предшествует сухое дробление. Влажный размол в способе согласно изобретению может быть выполнен с или без использования абразивного материала. В одном варианте осуществления изобретения влажный размол выполняют с использованием мелющего тела. В контексте настоящего изобретения термин "мелющее тело" относится к сферическим бусинам из пластмассы, а именно полистирола; металлу, а именно оксиду циркония или стали; или стеклу, которые, как известно, используются в технике для размалывания соединений. Мелющие тела могут иметь различную твердость и плотность в зависимости от используемого материала. Металлические мелющие тела могут быть стабилизированы, например, иттрием. Могут использоваться смеси бусин из различных соединений. В одном варианте осуществления используется мелющее тело из оксида циркония, стабилизированного иттрием. Размер бусин в мелющем теле может изменяться. В способе согласно изобретению используются бусины со средним диаметром в диапазоне от нескольких микрометров до нескольких миллиметров. В способе изобретения могут также использоваться смеси бусин различных размеров. В одном варианте осуществления используются 0,3, 0,5 и 0,8 мм бусины из оксида циркония, стабилизированного иттрием(Tosoh Corporation, Япония). В контексте настоящего изобретения термин "органическое соединение" относится к любому члену большого класса соединений, молекулы которых содержат углерод и водород; следовательно, карбиды,карбонаты, оксиды углерода и элементарный углерод не являются органическими, как подразумевается в настоящем документе. Полусинтетические производные органических соединений также включены в настоящее изобретение. Способ изобретения может удобно использоваться для слабо растворимых органических соединений. В контексте данного изобретения соединение является слабо растворимым в конкретном растворителе, если оно имеет растворимость менее 30 г/л при комнатной температуре в данном конкретном растворителе, а именно, например, в органических растворителях, таких как этанол, в масле или в воде. Предпочтительно органическое соединение является продуктом питания, пищевой добавкой,кормовым продуктом, сельскохозяйственным продуктом или фармацевтическим составом, таким как органический пигмент, например каротиноид, например бета-каротин, апокаротин или его сложный эфир, ликопен, лютеин, зеаксантин, кантаксантин или астаксантин; антибиотиком, например беталактамом; витамином; бензохиноном, например коэнзимом Q10; протеином; ферментом; пептидом; липидом; полисахаридом; или полиеновым антибиотиком, например натамицином, нистатином, амфотерицином В, триенином, этрускомицином, филипином, chainin, дермостатином, лимфосарцином, кандицидином, ауреофунгином А, ауреофунгином В, гамицином А, гамицином В или лацензамицином. В еще одном варианте осуществления органическим соединением является кофе, какао, зерно/крупа, гранулы крахмала, названы только некоторые. В контексте настоящего изобретения термин "натамицин" относится к любому типу натамицина,соединение, которое также известно как пимарицин и которое является фунгицидным полиеновым соединением. Натамицин известен в технике, см., например, ЕР 0678241; US 5942611; US 5591438 и ЕР 0600983. Суспензию тонкодисперсных частиц, полученных при использовании способа согласно изобретению, можно впоследствии переработать в физически раздельные частицы и мелющее тело (диспергированную среду) для удаления мелющего тела из конечного продукта. Данное может быть сделано любым известным в технике способом отделения твердых веществ от суспензии, в том числе центрифугированием, фильтрацией и седиментацией, названы только некоторые. Из суспензии тонкодисперсных частиц, полученной по способу изобретения, может в конечном счете быть образован продукт добавлением известных в технике добавок и соединений для образования продукта, а именно добавлением загустителей, поверхностно-активных веществ и полимеров. В предпочтительном варианте осуществления суспензия тонкодисперсных частиц, полученная способом изобретения, является стабильной. Образование продукта из суспензии может также включать сушку суспензии. Суспензия может быть высушена любым известным в технике способом, который не разрушает продукт. В одном варианте осуществления суспензию сушат распылительной сушкой, вакуумной сушкой, оросительным охлаждением, модифицированной распылительной сушкой, пленочной сушкой,дроблением, лиофильной сушкой или процессами сушки, которые используют сверхкритический СО 2 или любые другие сверхкритические текучие среды. В другом варианте изобретение относится к суспензии тонкодисперсных частиц твердого органического соединения, получаемой по способу согласно изобретению. Предпочтительно суспензия является стабильной и по существу не содержащей стабилизаторов, предпочтительно без стабилизаторов. Суспензия может быть жидкой, но может также подвергаться сушке и, таким образом, быть высушенной, например порошком. В другом варианте изобретения суспензия тонкодисперсных частиц, полученная по способу согласно изобретению, используется в способе получения порошка, покрытия, пленки или фольги. Данный способ включает использование суспензии тонкодисперсных частиц и формирование суспензии в концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу с использованием способов,известных специалисту. Концентрированная суспензия, паста, порошок, пленка, покрытие или фольга,-6 022628 получаемые по данному способу, являются другим вариантом настоящего изобретения. С использованием способа изобретения может быть получен диспергируемый порошок, который приводит к тонкодисперсным частицам при дисперсии в жидкости. Такой диспергируемый порошок также охвачен настоящим изобретением. Полученная дисперсия тонкодисперсных частиц является стабильной в условиях по существу отсутствия стабилизаторов. Тонкодисперсные частицы, находящиеся в форме суспензии, концентрированной суспензии, пасты,порошка, покрытия, пленки или фольги или в любой другой пригодной форме, могут использоваться в пищевой или кормовой промышленности, в садоводстве, в сельском хозяйстве или в фармацевтической промышленности. В одном варианте осуществления они используются в или на молочном продукте, а именно на сыре и в покрытиях сыра. В другом варианте осуществления они используются в или на фруктах, субстрате для роста грибов или культивированном мицеллии, картофеле, луковицах и на растениях и цветах. В еще одном варианте осуществления суспензия или другие формы используются в фармацевтических рецептурах, а именно в производстве капсул и таблеток, в которых они могут использоваться в качестве активного вещества или в качестве инертного наполнителя или добавки, например, в рецептурах с контролируемым высвобождением. В одном варианте осуществления суспензию используют в покрытии, в качестве добавки для придания цвета или пигмента. Пищевой продукт, кормовой продукт, продукт садоводства, сельскохозяйственный продукт или фармацевтический продукт, содержащие суспензию тонкодисперсных частиц согласно изобретению или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу согласно изобретению,являются другой частью настоящего изобретения. Примеры Пример 1. Измерение распределения частиц по размерам и среднего размера частиц различных органических соединений. Измерения были выполнены для следующих органических соединений: натамицина (DSM Gist,Delft, Нидерланды), нистатина (DSM, Delft, Нидерланды), какао (Blooker Cocoa, Amsterdam, Нидерланды) и кофе (Douwe Egberts Coffee, Utrecht, Нидерланды). Для натамицина в пример были включены два продукта, содержащий каждый различным образом сформированные частицы натамицина; продукт натамицина, содержащий дисковидные частицы и продукт натамицина, содержащий игольчатые частицы. Перед использованием кофе фильтровали через сито 150 мкм. Образцы вышеуказанных органических соединений диспергировали в деминерализованной воде, пока величина затенения, которую измеряли техникой лазерной дифракции с использованием лазерного дифракционного анализатора размеров частиц LS230 от BeckmanCoulter, Fullerton, СА, США не составляла между 45 и 55%. Данная величина затенения достигалась при концентрации частиц приблизительно 1% (мас./мас.). Затем с помощью данного устройства анализировали распределение частиц по размерам в течение 90 с. В устройстве использовался красный лазер и вольфрамовая лампа с длинами волны 450, 600 и 900 нм для измерения размера частиц. Для устройства был нужен показатель преломления жидкой фазы и частицы и мнимый показатель преломления частиц для определения распределения частиц по размерам из необработанных данных. Данные величины вводили в устройство измерения вручную (показатели преломления жидкости: 1,33; показатель преломления натамицина: 1,6; нистатина: 1,6; какао: 2,0; кофе: 2,0; мнимый показатель преломления натамицина: 0,01; нистатина: 0,01; какао: 1,0; кофе: 1,0). Из распределения частиц по размерам был определен средний размер частиц. Средний размер частиц, предоставленный устройством измерения,представлял собой размер частиц на основе объема, d4,3. Распределение в интервале размеров частиц дано в виде процента от суммы. Из табл. 1 следует, что большинство частиц дисковидного продукта натамицина имеет диаметр между 10,0 и 50,0 мкм, в то время как большинство частиц игольчатого продукта натамицина имеет диаметр в интервале от 5,0 до 10,0 мкм. Большинство частиц нистатина имеет диаметр в интервале от 2,0 до 5,0 мкм. Большинство частиц какао имеет диаметр в интервале от 10,0 до 50,0 мкм. Большинство частиц кофе имеет диаметр в интервале от 50,0 до 200,0 мкм. На основании распределения частиц по размерам был рассчитан средний диаметр различных органических соединений. Средний размер частицы (d4,3) частиц дисковидного продукта натамицина представляет 14,6 мкм; средний размер частицы (d4,3) частиц игольчатого продукта натамицина представляет 6,4 мкм; средний размер частицы (d4,3) частиц продукта нистатина представляет 3,4 мкм; средний размер частицы (d4,3) частиц какао продукта представляет 22,6 мкм; средний размер частицы (d4,3) частиц кофейного продукта представляет 76,5 мкм. Таблица 1 Распределение частиц по размерам для частиц различных органических соединений Пример 2. Получение суспензии тонкодисперсных частиц натамицина в шаровой мельнице с использованием мелющего тела при разных временах измельчения. Был получен буферный раствор с рН 8 путем смешивания 13,75 мл раствора лимонной кислоты 0,1 моль/л с 486,25 мл раствора гидроксида натрия 0,2 моль/л, к буферному раствору добавили 25 г дисковидного натамицина (14,3:14,6 мкм; DSM Gist, Delft, Нидерланды) и порошок диспергировали посредством перемешивания. Дробильную камеру (300 мл) шаровой мельницы (Dynomill KDL Special от BachofenAG, Basel, Швейцария) заполнили на 75% (об./об.) 0,3 мм бусинами оксида циркония, стабилизированного иттрием (Tosoh Corporation, Tokyo, Япония). Шаровая мельница функционировала при 2000 об/мин. Суспензию натамицина прокачивали через шаровую мельницу при скорости потока 6,1 г/с. Суспензию, выходящую из шаровой мельницы, возвращали в сосуд, содержащий остальную часть суспензии. Суспензию многократно пропускали через камеру шаровой мельницы во время эксперимента измельчения. Время пребывания суспензии в дробильной камере и сосуде составляло 26,7 и 59,4 с соответственно. Образцы суспензии, выходящей из мельницы, отбирали спустя 2, 5, 10, 20, 30, 45, 60, 75 и 90 мин. Размер частиц в образцах суспензии измеряли для каждого образца посредством лазерной дифракции с использованием лазерного дифракционного анализатора размеров частиц марки LS230 отBeckmanCoulter (Fullerton, СА, США). Измеренный средний размер частиц представлен в табл. 2. Таблица 2 Средний размер частиц (d4,3) тонкодисперсных частиц натамицина как функция времени измельчения Пример 3. Влияние размера бусин мелющего тела и скорости вращения на средний размер частиц. Эксперимент, описанный в примере 2, был повторен с таким же типом мелющего тела. Также использовались мелющие тела с размерами бусин 0,5 и 0,8 мм и скоростью вращения 3000, 4500 и 6000 об/мин. Результаты в табл. 3 показывают, что время измельчения уменьшается, если уменьшается размер бусин и/или увеличивается скорость вращения. Данное означает, что уменьшение размера частиц является более быстрым в случае, если размер бусин мелющего тела становится меньше и/или скорость вращения становится более высокой. Таблица 3 Время измельчения (в минутах), требуемое для получения частиц натамицина со средним размером частиц 0,18 мкм Пример 4. Влияние буферной системы, используемой во время измельчения, на средний размер частиц. Был повторен эксперимент, описанный в примере 2, с оговоркой, что натамицин суспендировали в воде. Значение рН полученной тонкодисперсной суспензии натамицина было 5,5. Средний размер частиц после измельчения составлял 0,18 мкм. Эксперимент, описанный в примере 2, был также повторен при использовании буфера динатрийгидрофосфата (0,20 моль/л) и лимонной кислоты (0,10 моль/л) при различных значениях рН в пределах 6-8. Результаты в табл. 4 показывают, что рН в исследованном интервале значительно не влияет на ко-8 022628 нечный средний размер частиц (0,18 мкм) и что время достижения конечной частицы было, по существу,одинаковым для всех значений рН. Данное указывает, что рН не имеет значительного влияния на эффективность измельчения. Таблица 4 Влияние рН на средний размер частиц и время измельчения Пример 5. Уменьшение размера частиц с использованием гомогенизатора. Порошок дисковидного натамицина был диспергирован в воде при концентрации 3000 м.д. Средний размер частиц суспензии натамицина был приблизительно 15 мкм. Суспензию гомогенизировали с помощью гомогенизатора (Panda 2K, ns100L, GEA NIRO SOAVI, Cell disrupter (R-type и получили суспензию, содержащую тонкодисперсные частицы натамицина. В табл. 5 показан средний размер частицы(d4,3) частиц полученной суспензии в виде функции давления гомогенизации для различного количества циклов гомогенизации. Результаты в табл. 5 показывают, что средний размер частиц можно значительно понизить с помощью гомогенизатора и что уменьшение размера частиц усиливается при увеличении давления гомогенизации и количества циклов через гомогенизатор. Таблица 5 Средний размер частиц как функция давления гомогенизатора и количества циклов Пример 6. Определение дзета-потенциала суспензий тонкодисперсного натамицина. Суспензию, содержащую тонкодисперсный натамицин, получали по существу, как описано в примере 2, но измельчение осуществляли в деминерализованной воде без коррекции рН кислотой или основанием. К водному раствору, содержащему 1 мМ KCl, добавляли образцы тонкодисперсного продукта и получали водные растворы, содержащие 0,1% (мас./мас.) тонкодисперсного продукта. Значение рН суспензии корректировали титрованием 0,25 М HCl и 0,10 М NaOH в устройстве измерения дзетапотенциала (автоматизированная система). Значение рН изменялось в диапазоне 3-10 с шагами 10,2 единиц рН. Дзета-потенциал измеряли для каждого значения рН в Zetasizer (Malvern, Worcestershire, Великобритания). Результаты показаны в табл. 6. Из результатов можно сделать вывод, что изоэлектрическая точка тонкодисперсного натамицина находится при рН примерно 5,4. Результаты показывают, что рН, пригодная для образования стабильных суспензий тонкодисперсного натамицина влажным размолом в отсутствие стабилизатора, может быть найдена при рН примерно 4,6 или ниже (дзета-потенциал приблизительно+10 мВ или выше) или при рН примерно 6,7 или выше (дзета-потенциал приблизительно -20 мВ или ниже). Таблица 6 Дзета-потенциал тонкодисперсных суспензий натамицина при различных значениях рН Пример 7. Седиментационные свойства суспензий тонкодисперсного и нетонкодисперсного натамицина. В данном эксперименте анализировали стабильность суспензий тонкодисперсного и нетонкодисперсного натамицина путем наблюдения седиментационного поведения суспензий. Суспензию тонкодисперсного натамицина получали по существу так, как описано в примере 2 с оговоркой, что натамицин диспергировали в деминерализованной воде и рН не устанавливали. Затем в водном растворе, содержащем 0,01 М NaCl, готовили суспензию с конечной концентрацией натамицина 1% (мас./мас.). Значение рН образцов суспензии устанавливали с помощью 0,01 М NaOH и HCl 0,01 М. Образцы суспензии хранили и рН корректировали спустя 10 и 24 ч в случае необходимости. После 24 ч образцы суспензии оставались неизмененными. 10 мл каждого отдельного образца помещали в пластмассовую пипетку (стерильная и утилизируемая пластмассовая пипетка на 10 мл; внутренний диаметр 7 мм; Bibby Sterilin Ltd. ложении при 4 С. За седиментационным поведением образцов следили во времени путем измерения объема выше и ниже седиментационного фронта внутри каждой пипетки. Результаты показаны в табл. 7. Проценты указывают объемную долю ниже фронта седиментации. Таблица показывает, что процентная доля объема ниже фронта седиментации уменьшается со временем при определенных условиях рН. Данное означает, что частицы образуют осадок. Скорость, при которой это происходит, меняется в зависимости от рН. Например, при рН 3 и 10 седиментация незначительна, в то время как, например, при рН 4 седиментация значительна. В дополнение к седиментационным свойствам суспензии тонкодисперсного натамицина были определены седиментационные свойства исходного материала, т.е. нетонкодисперсного натамицина,имеющего размер частиц приблизительно 15 мкм, при значениях рН, указанных в табл. 7. В течение 24 ч все частицы суспензии при всех различных значениях (рН от 3 до 10) полностью выпали в осадок. Данное отличается от седиментационного поведения любого из образцов суспензии тонкодисперсного натамицина, в которых вряд ли наблюдалась какая-либо седиментация спустя 24 ч (см. табл. 7). Поэтому можно сделать вывод, что скорость седиментации суспензии тонкодисперсного натамицина значительно уменьшается по сравнению со скоростью седиментации суспензии нетонкодисперсного натамицина. Сравнение результатов в табл. 7 с дзета-потенциалом, измеренным в примере 6, показывает, что скорость седиментации уменьшается по мере увеличения разности между рН и изоэлектрической точкой(пи). Данное поведение можно объяснить увеличением электростатического отталкивания по мере увеличения разности между рН и пи. Таблица 7 Седиментационные свойства тонкоизмельченного натамицина Пример 8. Получение диспергируемого порошка суспензии, содержащего тонкодисперсные частицы натамицина. Была получена суспензия тонкодисперсного натамицина в воде по существу так, как описано в примере 4. Частицы суспензии имели средний размер частиц 0,18 мкм. 20 мл тонкодисперсной суспензии натамицина заморозили в жидком азоте до помещения в высокий вакуум на 24 ч. Данный процесс сублимационной сушки привел к сухому порошку. Типичный образец данного порошка повторно диспергировали в воде путем перемешивания с очень низким усилием и полученную суспензию ввели в устройство измерения размера частиц лазерной дифракцией LS230 (BeckmanCoulter, Fullerton, СА, USA). Суспензию непрерывно прокачивали через оборудование и измеряли распределение частиц по размерам. Результаты данного измерения показаны в табл. 8. Результаты показывают, что гранулы тонкодисперсных частиц, полученные влажным размолом и последующей сушкой (при например сублимационной сушкой), могут, по меньшей мере частично, повторно диспергироваться в исходную (т.е. тонкодисперсную) суспензию частиц при помещении в жидкую среду, например воду. Таблица 8 Средний размер частиц и количество частиц, имеющих диаметр 0,5 мкм Пример 9. Испытание тонкодисперсного натамицина на растворимость. Суспензию тонкодисперсного натамицина, полученную по существу так, как описано в примере 7(с размером менее 0,2 мкм), разбавили в 70 раз водой при комнатной температуре. Суспензию перемешали. Образцы отбирали спустя 5 с и затем каждые 10 с. Частицы отделяли от суспензии фильтрованием на 0,02 мкм шприц-фильтре (Whatman International Ltd, Англия). Концентрацию натамицина в остающемся растворе измерили с помощью спектрофотометра (Uvikon 933, Kontron Instruments). Результаты показывают, что тонкодисперсные частицы растворяются очень быстро. Раствор достигал насыщения в течение 5 с (приблизительно 43 м.д. натамицина в растворе и остающиеся твердые частицы). Такое же испытание повторили с неразмолотыми дисковидными частицами натамицина со средним размером частиц приблизительно 15 мкм. В данном случае насыщенная концентрация была достигнута приблизительно спустя 2 ч. В другом эксперименте исследовали поведение в растворе различных суспензий натамицина при суспендировании известного количества частиц натамицина в 500 мл раствора фосфатного буфера (0,01 М, рН 6,8). Полученную суспензию перемешивали с помощью магнитной мешалки при 300 об/мин. Со временем отбирали образцы суспензии. Данные образцы фильтровали на 0,02 мкм шприц-фильтре(Whatman International Ltd, Англия) для удаления взвешенных частиц натамицина. Затем анализировали концентрацию натамицина в фильтрате посредством УФ-спектрофотометра (Uvikon 933, Kontron Instruments) при длине волны 304 нм. Чтобы перевести измеренную спектрофотометром меру поглощения света в концентрацию натамицина в м.д., строили градуировочную кривую. В качестве второго способа количественного определения натамицина использовали анализ ВЭЖХ. Для данного измерения к фильтрату добавляли метанол (1:1 по объему). Затем смесь загружали в колонку ВЭЖХ для количественного определения натамицина. В табл. 9 представлены результаты для различных концентраций трех типов суспензий натамицина: суспензии, содержащие частицы натамицина, имеющие средний размер частиц приблизительно 15 мкм; суспензии, содержащие частицы натамицина, имеющие средний размер частиц приблизительно 6 мкм; и суспензии, содержащие частицы натамицина, имеющие средний размер частиц приблизительно 0,18 мкм. Данный средний размер частиц был измерен методом лазерной дифракции, как описано ранееPublications). Анализируемыми растворами были следующие.A: суспензия 15 мкм дисковидных частиц натамицина (концентрация: 837 м.д.).B: суспензия 15 мкм дисковидных частиц натамицина (концентрация: 94,5 м.д.).C: суспензия 6 мкм игольчатых частиц натамицина (концентрация: 765 м.д.).D: суспензия 6 мкм игольчатых частиц натамицина (концентрация: 76,5 м.д.).E: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 1185 м.д.).F: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 719 м.д.).G: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 118 м.д.). Н: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 74 м.д.).I: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 50 м.д.).J: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 23 м.д.).K: суспензия тонкоизмельченных частиц натамицина (концентрация: 5 м.д.). Таблица 9 Концентрация растворенного натамицина в течение времени (мин) для трех типов частиц натамицина при различных концентрациях суспензии натамицина (концентрации приведены в м.д.) Н.О. означает "не определялась". Сравнение поведения в растворе суспензий А и F показывает, что концентрация растворенного натамицина является более высокой для тонкодисперсных частиц натамицина, чем для 15 мкм частиц натамицина, даже при том, что концентрация натамицина в суспензии, содержащей тонкодисперсные частицы натамицин, является более низкой (719 м.д. против 837 м.д.). Сравнение поведения в растворе суспензий С и F показывает, что концентрация растворенного натамицина является более высокой для тонкодисперсных частиц натамицина, чем для 6 мкм частиц ната- 11022628 мицина, даже при том, что концентрация натамицина в суспензии, содержащей тонкодисперсные частицы натамицин, является более низкой (719 м.д. против 837 м.д.). Результаты демонстрируют, что тонкодисперсные частицы натамицина имеют более высокую растворимость и скорость солюбилизации по сравнению с частицами натамицина 6 мкм и 15 мкм. Данное может быть выгодным, особенно в применениях, в которых требуется высокая концентрация растворенного натамицина. Пример 10. Получение суспензий тонкодисперсных частиц нистатина в шаровой мельнице с использованием мелющих тел при различных временах измельчения. Эксперимент был по существу выполнен так, как в случае натамицина (см. пример 2). Полученный размер частиц представлен в табл. 10. Аналогичные средние размеры частиц были получены, когда эксперимент повторили в буфере динатрийгидрофосфат/лимонная кислота, имеющем рН 5 (d4,3: 0,17 мкм после времени измельчения 240-270 мин) или рН 8 (d4,3: 0,17 мкм после времени измельчения 210-240 мин) или когда эксперимент повторили в деминерализованной воде (d4,3: 0,17 мкм). Таблица 10 Средний размер частицы (d4,3) тонкодисперсных частиц нистатина как функция времени измельчения Пример 11. Определение дзета-потенциала тонкодисперсного нистатина. Измельчение нистатина и измерение дзета-потенциала выполняли по существу так, как описано для натамицина в примере 6. Результаты показаны в табл. 11. Из результатов можно понять, что изоэлектрическая точка тонкодисперсного нистатина находится около рН 4,6. Из результатов можно сделать вывод,что пригодное значение рН для образования стабильных суспензий тонкодисперсного нистатина влажным размолом в отсутствие стабилизатора может находиться при рН приблизительно 4,4 или ниже (дзета-потенциал приблизительно 10 мВ или выше) или рН приблизительно 5,8 или выше (дзета-потенциал приблизительно -20 мВ или ниже). Таблица 11 Дзета-потенциал суспензий тонкодисперсного нистатина при различных величинах рН Пример 12. Седиментационные свойства суспензий тонкоизмельченного нистатина. Эксперимент был по существу выполнен также, как для натамицина (см. пример 7). Результаты показаны в табл. 12. Проценты показывают объемную долю ниже фронта седиментации. Таблица показывает, что процентное содержание объема ниже фронта седиментации уменьшается со временем при определенных условиях рН. Данное означает, что частицы образуют осадок. Скорость,при которой данное происходит, меняется в зависимости от рН. При рН 8 и выше седиментация не значительна, в то время как, например, при рН 4 седиментация происходит намного быстрее. В дополнение к седиментационным свойствам тонкодисперсных суспензий нистатина седиментационные свойства исходного материала, т.е. нетонкодисперсного нистатина, имеющего размер частиц приблизительно 3,4 мкм, были определены при различных величинах рН. У суспензий нетонкодисперсного нистатина при рН 4-6 процентное содержание объема ниже фронта седиментации составляло приблизительно 25% спустя один день. Данное отличается от седиментационного поведения тонкодисперсных суспензий нистатина, для которых едва ли наблюдалась какая-либо седиментация спустя один день. Следовательно, можно сделать вывод, что скорость седиментации суспензий тонкодисперсного нистатина значительно уменьшена по сравнению со скоростью седиментации суспензий нетонкодисперсного нистатина. Сравнение вышеупомянутых результатов с дзета-потенциалом, измеренным в примере 11, показы- 12022628 вает, что скорость седиментации уменьшается по мере увеличения разности между рН и изоэлектрической точкой (пи). Данное поведение можно объяснить увеличением электростатического отталкивания с увеличением разности между рН и пи. Таблица 12 Седиментационные свойства тонкоизмельченного нистатина Пример 13. Провокационный тест с использованием тонкодисперсного натамицина. Для проверки эффективности тонкодисперсного натамицина в применении к сырам был выполнен эксперимент, в котором поверхность свежего рассольного сыра Гауда была заражена штаммом Penicillium discolor и обработана композициями, содержащими натамицин с различным размером частиц. Количество спор плесневых грибов, которые смогли прорасти на обработанных поверхностях сыра,является показателем фунгицидной активности анализируемого натамицина. Сыры (10 на каждый тип частиц натамицина), как полагали, больше не были защищены натамицином, если по меньшей мере у 50% анализируемых сыров было больше двух растущих колоний. Сыры были покрыты покрытием, содержащим базовый полимер Craymul 4386 (Cray Valley, Brummen) и содержащим частицы натамицина. Затем сыры заразили в день ноль Penicillium discolor PED1,CR1A и Penicillium discolor PED74, LI при концентрации 1,1103/см 2. Ежедневно рост плесневых грибов на сыре визуально проверяли в течение трех недель. Эксперимент выполняли с тремя различными частицами натамицина: дисковидными частицами натамицина, имеющими средний диаметр частицы 15 мкм; измельченными дисковидными частицами натамицина, измельчение которых было остановлено, когда средний диаметр частицы составлял 1,23 мкм; и тонкодисперсными частицами натамицина, имеющими средний диаметр частицы 0,18 мкм. Измельчение для обоих продуктов осуществлялось в воде; рН суспензии составлял 5,9; рН не корректировали кислотой или основанием. Концентрация натамицина в покрытии составляла 150 м.д. или 250 м.д. для всех частиц натамицина. В качестве контроля анализировали 10 сыров, не содержащих натамицина в покрытии. Данные сыры имели среднее время сохранения 5-6 дней. Результаты показаны в табл. 13. Из результатов можно сделать вывод, что защита от роста плесневых грибов увеличивается, если используются более высокие концентрации натамицина. Тонкодисперсные частицы натамицина обеспечивают самую длительную защиту от роста плесневых грибов. Из результатов эксперимента ясно, что уменьшение размера частиц натамицина увеличивает защиту от роста плесневых грибов. Таблица 13 Предохранение сыра от роста плесневых грибов в днях Пример 14. Получение суспензии тонкодисперсных частиц какао в шаровой мельнице с использованием мелющего тела. Получение тонкодисперсных частиц было выполнено по существу так, как описано в примере 2, за исключением того, что порошок какао (Blooker Cocoa, Amsterdam, Нидерланды) суспендировали в деминерализованной воде для получения 1% (мас./об.) суспензии какао. 100 мл полученной суспензии вводили в камеру размола шаровой мельницы (Dynomill KDL Special от Bachofen AG, Basel, Швейцария), которая была наполнена вплоть до 75% (об./об.) 0,3 мм бусинами оксида циркония, стабилизированного иттрием (Tosoh Corporation, Tokyo, Япония). Шаровая мельница функционировала при 2000 об/мин в периодическом режиме. Данное означает, что бисерная мельница была заполнена суспензией без циркуляции суспензии через сосуд, который был соединен с бисерной мельницей. Значение рН суспензии после влажного размола составляло 6,4. После 16 ч измельчения был получен средний размер частиц 0,14 мкм. Нетонкодисперсный какао-продукт имел средний размер 22,6 мкм, что показывает, что влажный размол привел к значительному уменьшению размера частиц. Пример 15. Седиментационные свойства суспензий тонкодисперсного какао. Эксперимент был по существу выполнен так, как для натамицина (см. пример 7). При рН 5 и выше не наблюдалась значительная седиментация в течение 72 ч. При рН 3 и 4 значительная седиментация наблюдалась в течение 24 ч. В дополнение к седиментационным свойствам суспензий тонкодисперсного какао, седиментационные свойства исходного материала, т.е. нетонкодисперсного какао, имеющего размер частиц приблизительно 23 мкм, были определены при величинах рН, аналогичных использовавшимся в примере 7. В течение 24 ч все частицы в суспензии при всех величинах рН полностью образовали осадок. Данное отличается от седиментационного поведения суспензий тонкодисперсного какао, для которых не наблюдалась значительная седиментация спустя 72 ч при величинах рН 5 и выше. Можно поэтому сделать вывод,что скорость седиментации суспензий тонкодисперсного какао значительно уменьшается при определенных величинах рН по сравнению со скоростью седиментации суспензий нетонкодисперсного какао. Пример 16. Получение суспензии тонкодисперсных кофейных частиц в шаровой мельнице с использованием мелющего тела. Тонкодисперсные частицы получали по существу так, как описано в примере 2, за исключением того, что кофейный порошок (Douwe Egberts Coffee, Utrecht, Нидерланды) фильтровали через сито 150 мкм и мелкие частицы суспендировали в деминерализованной воде для получения 1% (мас./об.) суспензии кофе. 100 мл полученной суспензии ввели в камеру размола шаровой мельницы (Dynomill KDL Special от Bachofen AG, Basel, Швейцария), которая была наполнена вплоть до 75% (об./об.) 0,3 мм бусинами оксида циркония, стабилизированного иттрием (Tosoh Corporation, Tokyo, Япония). Шаровая мельница функционировала при 2000 об/мин в периодическом режиме. Данное означает, что бисерная мельница была заполнена суспензией без циркуляции суспензии через сосуд, который был соединен с бисерной мельницей. Значение рН суспензии после влажного размола составляло 6,9. После 8 ч измельчения был достигнут средний размер частиц (4,3) 31 мкм. Не размолотый кофейный продукт имел средний размер 76,5 мкм, что указывает на то, что влажный размол привел к значительному уменьшению размеров частиц. Тем не менее, средний размер частиц был все еще больше, чем для других исследованных продуктов. Однако отдельная фракция, представляющая 5,7% (мас./мас.) продукта, была мельче 0,2 мкм. Для неразмолотых кофейных частиц ни одна из частиц не была меньше 0,2 мкм. Данное показывает, что путем измельчения может быть произведена значительная фракция очень мелких кофейных частиц. Для натамицина и нистатина наблюдалось явное влияние времени измельчения на уменьшение среднего размера частиц. Поэтому можно сделать вывод, что более длительные времена измельчения кофейных частиц могут привести к дальнейшему уменьшению размера частиц. Таблица 14 Гранулометрический состав размолотых и неразмолотых кофейных частиц Пример 17. Седиментационные свойства суспензий молотого кофе. Эксперимент был по существу выполнен так, как для натамицина (см. пример 7). Молотый продукт образовал осадок при определенных условиях рН. При рН 5 и выше значительная седиментация не наблюдалась в течение 24 ч. При более низком рН, например рН 3 и 4, седиментация была значительной в течение 24 ч. В дополнение к седиментационным свойствам суспензий тонкодисперсного кофе седиментационные свойства исходного материала, т.е. немолотого кофе, имеющего размер частиц приблизительно 76 мкм, были определены при величинах рН, аналогичных тем, которые использовались в примере 7. В течение 24 ч все частицы в суспензии при всех величинах рН полностью образовали осадок. Данное отличается от седиментационного поведения суспензий тонкодисперсного кофе, для которых не наблюдалась значительная седиментация спустя 72 ч при величинах рН 5 и выше. Можно поэтому сделать вывод, что скорость седиментации суспензий тонкодисперсного кофе значительно уменьшается при определенных величинах рН по сравнению со скоростью седиментации суспензий нетонкодисперсного кофе. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения суспензии частиц натамицина, имеющих средний размер 1 мкм или меньше,являющейся стабильной в отсутствие стабилизатора, причем способ содержит стадию воздействия на натамицин влажным размолом при рН 4,6 или меньше или при рН 6,7 или больше. 2. Способ по п.1, где влажный размол выполняют с использованием мелющих тел. 3. Способ по п.1 или 2, где влажному размолу предшествует сухое дробление. 4. Способ по одному из пп.1-3, который включает стадию физического разделения мелющих тел и частиц натамицина. 5. Способ по одному из пп.1-4, который включает стадию высушивания частиц натамицина. 6. Способ по п.1, где частицы натамицина имеют средний размер 0,5 мкм или меньше, предпочтительно 0,2 мкм или меньше. 7. Суспензия частиц натамицина, полученная способом по одному из пп.1-6. 8. Суспензия частиц натамицина по п.7, в которой частицы натамицина имеют средний размер 1 мкм или меньше. 9. Суспензия частиц натамицина по п.7 или 8, в которой частицы натамицина имеют средний размер 0,5 мкм или меньше. 10. Суспензия частиц натамицина по одному из пп.7-9, в которой частицы натамицина имеют средний размер 0,2 мкм или меньше. 11. Применение суспензии по одному из пп.7-10 для получения концентрированной суспензии, пасты, порошка, покрытия, пленки или фольги. 12. Концентрированная суспензия, паста, порошок, пленка, покрытие или фольга, полученные из суспензии по одному из пп.7-10. 13. Применение суспензии по одному из пп.7-10 или концентрированной суспензии, пасты, порошка, пленки, покрытия или фольги по п.12 для получения продуктов пищевой или кормовой промышленности, садоводства, сельского хозяйства или фармацевтической промышленности. 14. Пищевой продукт, содержащий суспензию по одному из пп.7-10 или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу по п.12. 15. Кормовой продукт, содержащий суспензию по одному из пп.7-10 или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу по п.12. 16. Садоводческий продукт, содержащий суспензию по одному из пп.7-10 или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу по п.12. 17. Сельскохозяйственный продукт, содержащий суспензию по одному из пп.7-10 или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу по п.12. 18. Фармацевтический продукт, содержащий суспензию по одному из пп.7-10 или концентрированную суспензию, пасту, порошок, пленку, покрытие или фольгу по п.12.