Сироп для лечения заболеваний дыхательных путей, предназначенный для перорального введения, включающий экстракт корня примулы

013378 Область изобретения Изобретение относится к улучшенному жидкому фармацевтическому препарату для перорального введения, представляющему собой сироп, содержащему сапонины примулы I и II, где образования геля в сиропе избегают путем контролирования содержания сапонина примулы формулы I или путем контролирования соотношения между сапонинами примулы формул I и II. Предшествующий уровень техники Сапонины примулы структурных формул I и II, соответственно находятся в цветах примулы. Экстракты ее корней (корня) первоначально применяли для лечения таких респираторных состояний, как бронхит, поскольку они обладают противозастойным действием и свойствами разжижения и устранения мокроты. Сапонины примулы обладают раздражающе-отхаркивающими свойствами, и в соответствии с их образом действия эти сапонины примулы классифицируют как модификаторы поверхностного натяжения. Главным показанием для применения корня примулы представляет собой лечение таких проблем дыхательных путей, как кашель, астма, бронхит и катар. Ответственными за эти действия являются секретолитические и секретомоторные тритерпеноидные сапонины, такие как сапонин примулы формулы I и сапонин примулы формулы II, которые присутствуют в растительном материале в сравнительно высоких количествах до 12 мас.%. Цветы примулы можно применять в виде настойки или микстуры, содержащей сапонины примулы формул I и II. СН 244953 описывает способ выделения чистых сапонинов примулы, характеризующийся тем, что корень примулы экстрагируют водным спиртом и сапонины осаждают с помощью добавления кислоты. Неочищенный продукт обрабатывают известковым молоком с образованием соли кальция, которую далее превращают в свободный сапонин путем окисления.DE 576445 раскрывает способ выделения сапонинов примулы с помощью применения среды для щелочного экстрагирования, характеризующийся тем, что они также могут содержать гидрофосфат кальция (V). Существует общая точка зрения в данной области техники, что все сапонины приводят к образова-1 013378 нию геля в водном растворе, в котором они содержатся (J. Jemen, Uvod v galensko farmacijo, 1. del, kolska knjiga Zagreb, 1955). Описание чертежей На фиг. 1 представлены две фотографии сиропа, содержащего более чем 20 мг сапонина примулы формулы I на 100 г сиропа, в котором не образовался гель через 6 месяцев хранения. На фиг. 2 представлены три фотографии сиропа, содержащего менее 20 мг сапонина примулы формулы I на 100 г сиропа, в котором образовался гель и который стал густым через 6 месяцев хранения. Подробное описание изобретения В настоящее время неожиданно обнаружили, что если в сиропе содержание сапонина примулы формулы I превышает 20 мг на 100 г сиропа, предпочтительно превышает 35 мг на 100 г сиропа,если сироп не содержит сапонина примулы II или если массовое соотношение между сапонином примулы I и II больше 10, предпочтительно больше 12,образование геля в сиропе не происходит даже после длительного хранения. Соответственно, согласно изобретению предложен сироп для лечения заболеваний дыхательных путей, предназначенный для перорального введения, включающий экстракт корня примулы, который содержит либо а) сапонин примулы формулы I в количестве, превышающем 20 мг на 100 г сиропа, предпочтительно превышающем 35 мг на 100 г сиропа, либо б) сапонины примулы формул I и II при массовом соотношении между ними больше 10, предпочтительно больше 12, при этом содержание сапонина примулы формулы I соответствует указанному в подпункте (а), где сапонины формул I и II приведены ниже Согласно еще одному аспекту изобретения, значение рН сиропа для перорального введения может находиться между 3 и 7, предпочтительно между 4 и 6. В одном из воплощений настоящего изобретения сироп дополнительно содержит левоментол, метилпарагидроксибензоат и сахарозу. Сперва корень примулы экстрагировали в очищенной воде с помощью горячей или холодной экс-2 013378 тракции, при температурах от 25 до 80 С, предпочтительно с помощью экстракции водой при 65-75 С или с помощью любого уже известного способа экстракции, такого как, например, спиртовая экстракция,упомянутая, например, в Wagner et al., Deutsche Apothek. Z. 126: 1489-1493; 1986; Tscheche et al. LiebigsMueller et al., Journal of Chromatography A, 1112 (2006), 218-223. Вслед за этим экстракт фильтровали, а содержание сапонинов примулы формул I и II определяли с помощью способа тонкослойной хроматографии (TLC), описанного в примерах. Далее экстракт корня примулы можно смешивать с любым другим экстрактом, например, тимьяна, приготовленного с помощью идентичного способа экстракции или с помощью любого другого способа экстракции, известного в данной области техники. Оба лекарственных вещества можно также сначала смешивать, а потом экстрагировать вместе. Количество экстрактов корня примулы из одной или разных партий, необходимое для приготовления сиропа для перорального введения, содержащего более чем 20 мг на 100 г сиропа для перорального введения, предпочтительно более 35 мг на 100 г сиропа для перорального введения, не содержащего сапонина примулы II, или где массовое соотношение между сапонинами примулы формул I и II выше 10,предпочтительно выше 12, рассчитывают и добавляют в сосуд для приготовления. В одном из воплощений настоящего изобретения количество сухого корня примулы для приготовления сиропа для перорального введения составляет от 0,1 до 5 г на 5 мл сиропа для перорального введения, предпочтительно от 0,2 до 0,5 г на 5 мл сиропа для перорального введения. В другом воплощении настоящего изобретения количество добавленного экстракта корня примулы составляет от 0,1 до 1,5 мл на 5 мл сиропа для перорального введения. Кроме упомянутых выше компонентов сироп для перорального введения дополнительно может содержать другие эксципиенты, обычно обнаруживаемые в фармацевтических композициях, такие как альтернативные растворители, агенты, маскирующие вкус, антиоксиданты, наполнители, подкислители, ингибиторы ферментов и другие компоненты, как описано в Handbook of Pharmaceutical Excipients, Rowe etal., Eds., 4oe edition, Pharmaceutical Press (2003), которое включено здесь путем ссылки. Сироп для перорального введения по изобретению также может включать консервант для предотвращения роста микроорганизмов, таких как бактерии, дрожжи и грибы и т.д. Подходящие консерванты могут быть выбраны из одного или более чем одного хлоргексидина; метилпарагидроксибензоата (Нипагина); пропилпарагидроксибензоата (Нипазола); бутилпарагидроксибензоата и их солей; диазолидинилмочевины (Germall II. RTM); четвертичных соединений, например бензалкония хлорида и цетилпиридиния хлорида, фенилэтилового спирта и т.п. Концентрация консервантов может варьировать от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,5% (мас./об.). Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению также может включать суспендирующий/стабилизирующий агент для предотвращения осаждения активного материала. Подходящие стабилизирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, полисахаридные стабилизаторы, такие как ксантановые, гуаровые и трагакантовые смолы, а также целлюлозные производные ГПМЦ (гидроксипропилметилцеллюлоза), метилцеллюлоза и Авицел RC-591 (микрокристаллическая целлюлоза/натрий карбоксиметилцеллюлоза). В другом воплощении в качестве стабилизирующего агента можно также применять поливинилпирролидон (ПВП). Фармацевтическая композиция, содержащая сапонины примулы I и II, также дополнительно может включать один или более чем один маскирующий вкус агент. Маскирующим вкус агентом может быть подсластитель, ароматизатор или их комбинация. Подсластитель может представлять собой сахар или заместитель сахара, выбранный из лактозы, маннита, сахарозы, глюкозы или их смеси. Наиболее предпочтительный сахар представляет собой сахарозу. Маскирующие вкус агенты типично составляют до приблизительно 0,1 или 5 мас.% от массы всей фармацевтической композиции. Корригент здесь представляет собой вещество, способное усиливать вкус или аромат композиции. Подходящие натуральные или синтетические корригенты можно выбрать в стандартных справочниках,например Fenaroli's Handbook of Flavor Ingredients, 3rd edition (1995). He ограничивающие объем изобретения примеры подходящих натуральных ароматов, некоторые из которых можно легко имитировать синтетическими агентами или их комбинациями, включают миндаль, анис, яблоко, абрикос, бергамот,чернику, черную смородину, голубику, какао, карамель, вишню, корицу, гвоздику, кофе, кориандр, клюкву, тмин, укроп, эвкалипт, фенхель, инжир, имбирь, виноград, грейпфрут, гуаву, хмель, лимон, лакрицу,лайм, солод, мандарин, черные патоки, мускатный орех, апельсин, персик, грушу, мяту перечную, ананас, малину, розу, колосовую мяту, клубнику, мандарин, чай, ваниль, хвою и т.д. Также применяют, особенно, если композиция предназначается исходно для применения в педиатрии, аромат тутти-фрутти или аромат жевательной резинки, смешанный ароматизатор, основанный на фруктовых ароматах. Предпочитаемые в настоящее время ароматизаторы включают анис, корицу, какао, апельсин, перечную мяту,вишню (особенно, дикую вишню), виноград, аромат жевательной резинки и ваниль. Дикая вишня наиболее предпочтительна. Ароматизаторы можно применять в одиночку или в комбинации по двое или более. Типично, ароматизатор, или масло, или эссенция, содержащая ароматизатор, если присутствует, то находится в композиции в концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/мл, предпочтительно-3 013378 от приблизительно 0,2 до приблизительно 3 мг/мл и наиболее предпочтительно от приблизительно 0,5 до приблизительно 2 мг/мл. Примеры антиоксидантов включают аскорбиновую кислоту и ее производные, токоферол и его производные, бутилгидроксиланизол и бутилгидроксилтолуол, но не ограничиваются ими. Примеры окислителей включают лимонную кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, аскорбиновую кислоту, ортофосфорную кислоту, каприновую кислоту, олеиновую кислоту, глутаминовую кислоту и гидроксипропилметилцеллюлозы ацетата сукцинат, целлюлозы ацетата фталат, целлюлозы ацетата тримеллитат, гидроксипропилметилцеллюлозы фталат, карбоксиметилэтилцеллюлозу и карбомер, но не ограничиваются ими. Изобретение пояснено с помощью следующих примеров, которые не ограничивают его объем. Примеры Экстрагирование из корней примулы. 49 кг перемолотого сухого корня примулы отвешивали в сосуд вместе с 99 кг тимьяна. Смесь гомогенизировали и переносили в корзину для экстракции, которую помещали в экстрактор. 775 л очищенной воды нагревали до 70-75 С, и экстракцию проводили в течение 2 ч при температуре от 65 до 75 С. Экстракт затем фильтровали через фильтровальные пакеты с диаметром поры 2 мкм и охлаждали до комнатной температуры. Приготовление сиропа. 3,09 кг корня примулы и экстракт тимьяна взвешивали в сосуде для приготовления и добавляли 0,62 г левоментола. После гомогенизации добавляли 3,15 кг сахарозы и 8,75 г метилпарагидроксибензоата. Смесь перемешивали до полного растворения ингредиентов, фильтровали и разливали по бутылкам. Таблица содержания сапонина примулы формулы I и сапонина примулы формулы II в различных партиях сиропа-4 013378 Способ ТСХ (тонкослойной хроматографии) для определения количества и идентификации сапонинов примулы I и II. Аппарат: денситометр + аппликатор. Стандарт: сапонин примулы I: рабочий стандарт, полученный от PhytoLab GmbHСо, Germany; сапонин примулы II: рабочий стандарт, полученный от PhytoLab GmbHСо, Germany. Растворители и реагенты: 1) метанол: для анализа (ч.д.а.); 2) вода: очищенная; 3) бутанол (н-бутанол, 1-бутанол): ч.д.а.; 4) аммиак, концентрированный: аммиак, концентрированный R (Европейская фармакопея, мин. 25%); 5) серная (VI) кислота, мин. 96%: ч.д.а.; 6) концентрированная уксусная кислота, ледяная: ч.д.а.; 7) анисальдегид (4-метоксибензальдегид): ч.д.а.; 8) реагент для обнаружения: 255 мл метанола + 30 мл концентрированной уксусной кислоты + 15 мл серной (VI) кислоты + 1,5 мл анисальдегида. Колонка:Sep-Pak Vac 3 сс (200 мг) С-18 картриджи, Waters, Part. No. WAT054945. Кондиционирование колонки. Сначала дважды промывали колонку 2 мл метанола и затем дважды 2 мл водной смеси растворителей: метанол = 9:1 (об./об.). Колонка готова для введения раствора образца (РО). Условия хроматографии. Плашка: плашка для ВЭТСХ (высокоэффективной тонкослойной хроматографии), силикагель (60)F254, толщина слоя 0,2 мм, 2010 см, Merck. Подвижная фаза: бутанол:метанол:аммиак, концентрированный = 50:10:25 (об./об./об.) Хроматографический контейнер: выстлан фильтровальной бумагой и насыщен подвижной фазой в течение 1 ч. Применение: с аппликатором AS 30 (Desaga) или линомат IV (Camag) или любым другим удобным устройством. Автоматический аппликатор, нанесение в полосы, объемы нанесения см. в нижеприведенной таблице, длина нанесения составляет 8 мм, пространство между нанесениями составляет 5 мм и скорость нанесения составляет 3 с/мкл. Растворы стандарта и образца наносят по очереди (14 нанесений на плашку: 8 раз стандартный раствор (СР) и 6 раз раствор образца (РО, в линии для нанесения приблизительно 1,5 см от нижнего края плашки. Схема нанесения Прокрашивание: прокрашивание по длине 7,5 см в хроматографическом контейнере, измеренной от линии нанесения. Высушивание плашки на воздухе в потоке горячего воздуха после прокрашивания. Обнаружение: готовят плашки для погружения в хроматографический контейнер (подходит CamagChromatogram Immersion Device III) и заливают реагентом для обнаружения. Погружают плашку в подготовленную ванну приблизительно на примерно 1 с и затем нагревают плашку при 105 С в течение 10 мин. Приготовление растворов. Стандартный раствор (СР). Аккуратно взвешивали приблизительно 2,5 мг стандарта сапонина примулы I в 10 мл мерную колбу, растворяли приблизительно в 4 мл метанола и разбавляли метанолом до нужного объема. Переносили пипеткой 1,0 мл этого раствора в 10 мл мерную колбу и разбавляли метанолом до нужного объема. Раствор образца (РО). Аккуратно взвешивали приблизительно 5,0 г сиропа в 25 мл мерную колбу, растворяли в воде и разбавляли водой до нужного объема. Дозу объемом 2,0 мл этого раствора наносили на предварительно кондиционированную колонкуSep-Pak Vac 3cc (200 мг) С-18. Затем промывали колонку (при помощи применения меньшего давления) четыре раза 2,5 мл смеси растворителей вода:метанол = 9:1 (об./об.). Промывки отбрасывали. Остаток сапонинов примулы отмывали на колонке без уменьшенного давления (и/или с минимальным давлением только в начале и в конце промывки) 4,0 мл метанола в чистую подходящую мерную колбу. Элюат представлял собой раствор образца (РО), который можно было непосредственно наносить на-5 013378 плашку для ВЭТСХ. Оценка. Сухую плашку регистрировали на денситометре. Площади пиков интегрировали. Условия измерения в приборе: CAMAG TLC сканнер II размер плашки: 2010 стартовая позиция X: устанавливается вручную (17,5 мм) стартовая позиция Y: устанавливается вручную (15,0 мм)Y-устанавливаемая позиция (O-Aboleich): 25,0 мм позиция нанесения Y: 10,0 мм конечная линия (Bahnende): 50,0 мм расстояние между полосами (Bahnabstand): 13,0 мм количество сканов/стр. 1 (Anzahl Bahnen/Seite 1): 14 количество сканов/стр. 2 (Anzahl Bahnen/Seite 2): 0 позиция фронта (Frontposition): 80,0 мм скорость сканирования (Messgeschwindigkeit): 4,0 мм/с лампа: вольфрамовая длина волны: 610 мм абсорбция (экстинкция)/флуоресценция: отсутств. отражение (ремиссия)/трансмиссия: отраж. Условия измерения в приборе: денситометр CD 60, DESAGA Способ измерения: ремиссия, экстинкция лампа: D+T (дейтерий + вольфрам) щель: высота = 6,0 мм ширина = 0,2 мм длина волны: 610 нм функция калибровки: у = ах+b без (0,0) Идентификация сапонинов примулы. Пятно сапонина примулы I на хроматограмме раствора образца (РО) обладало таким же значениемRf, как и пятно сапонина примулы I на хроматограмме стандартного раствора (СР). Пятно сапонина примулы II находилось ниже пятна сапонина примулы I на хроматограмме раствора образца (РО), с примерным значением Rf 0,28. Приблизительное значение Rf сапонина примулы I - 0,32. Анализ. Результат выражен как сумма сапонина примулы I и сапонина примулы II/100 г сиропа. Расчет. При помощи 8 стандартов калибровочную кривую строят по каждой плашке. Уравнение калибровочной кривой для сапонина примулы IY = АX + В,где Y = средняя площадь пика компонента,X = масса компонента/пятно, в мкг,А = наклон калибровочной кривой,В = смещение калибровочной кривой. где XPAI = масса сапонина примулы I/пятно для раствора образца (РО), в мкг,YPAI = средняя площадь пятна сапонина примулы I при 6-кратном нанесении раствора образца (РО),А = наклон калибровочной кривой для сапонина примулы I,В = смещение калибровочной кривой для сапонина примулы I,XPAI = масса сапонина примулы I/пятно для раствора образца (РО), считывание в денситометре, в мкг,50 = (254)/2, коэффициент разведения, в мл,100 = коэффициент превращения на 100 г сиропа,10 = фактор разведения, в мкл,fr1 = 110-3 = превращение из мкг в мг, в мг/мкг,fr2 =1103 = превращение из мкл в мл, в мл/мкл,WSa = масса образца, в г,-6 013378F = фактор разведения. В случае, когда обнаруживают еще одно дополнительное пятно на хроматограмме раствора образца(РО), относящееся к сапонину примулы II, значение Rf приблизительно 0,28, это пятно оценивали в отношении функции калибровки сапонина примулы I. По шести измерениям рассчитывают среднюю площадь пика сапонина примулы II (YPAII) и YPAII подставляют в уравнение калибровочной кривой для сапонина примулы I где XPAII = масса сапонина примулы II/пятно раствора образца (РО), в мкг,YPAII = средняя площадь пятна сапонина примулы II (дополнительное пятно) при 6-кратном нанесении раствора образца (РО),А = наклон калибровочной кривой для сапонина примулы I,В = смещение калибровочной кривой для сапонина примулы I где 50 = (254)/2, коэффициент разведения, в мл,100 = коэффициент превращения на 100 г сиропа,10 = фактор разведения, в мкл,1.11 = фактор коррекции,fr1 = 110-3 = превращение из мкг в мг, в мг/мкг,fr2 = 110-3 = превращение из мкл в мл, в мл/мкл,WSa = масса образца, в г,F = фактор разведения. мг сапонинов примулы/100 г сиропа = мг сапонина примулы I /100 г сиропа + мг сапонина примулыII/100 г сиропа. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Сироп для лечения заболеваний дыхательных путей, предназначенный для перорального введения, включающий экстракт корня примулы, который содержит либо а) сапонин примулы формулы I в количестве, превышающем 20 мг на 100 г сиропа, предпочтительно превышающем 35 мг на 100 г сиропа, либо б) сапонины примулы формул I и II при массовом соотношении между ними больше 10, предпочтительно больше 12, при этом содержание сапонина примулы формулы I соответствует указанному в подпункте (а), где сапонины формул I и II приведены ниже 2. Сироп по п.1, характеризующийся тем, что значение рН составляет от 3 до 7, предпочтительно от 4 до 6. 3. Сироп по любому из пп.1 и 2, характеризующийся тем, что дополнительно содержит левоментол,метилпарагидроксибензоат и сахарозу. Фиг. 1 Две фотографии сиропа экстракта примулы, содержащего более 20 мг/100 г сиропа сапонина примулы I,в котором не образуется гель через 6 месяцев хранения Фиг. 2 Три фотографии сиропа экстракта примулы, содержащего менее 20 мг/100 г сиропа сапонина примулы I,в котором образуется гель и который становится вязким через 6 месяцев хранения