Специфические для семян льна промоторы, способы их применения, трансгенные семена и растения льна

006549 Область изобретения Данное изобретение относится к способам генетической инженерии растений, применимым для изменения компонентов семян растений. Более конкретно, данное изобретение относится к промоторам,которые были получены из льна и способны управлять экспрессией неприродных генов в семенах льна, а также семенах других растений. Предпосылки изобретения Лен или лен обыкновенный (Linum usitatissimum) является коммерчески важной масличной культурой. Льняное масло и кормовая мука их жмыха льняного семени являются ценными сырьевыми материалами, получаемыми из семян льна. Дополнительный экономически важный сырьевой материал, льняное волокно, получают из стебля этого растения. Масляную фракцию льна используют для непищевых целей, например, в производстве лака и краски, и совсем недавно эту фракцию стали применять в производстве ряда годных в пищу продуктов, таких как маргарины и масла и заправки для салатов, благодаря недавно выведенным так называемым сортам Linola (Green (1986) Can. J. Plant Sci., 66: 499-503). Льняную муку используют прежде всего в качестве компонента кормов жвачных животных, тогда как льняное волокно используют в производстве льняных тканей. Вследствие экономической важности льна в качестве источника сырьевых материалов, желательно было бы дополнительно улучшать и разнообразить "портфель" сортов льна как в отношении агрономической продуктивности, например, урожая семян,устойчивости к патогенам и низким климатическим температурам, так и в отношении выхода и качестве сырьевых материалов для удовлетворения последующих применений. Хотя можно получать улучшенные сорта льна посредством общепринятой селекции растений, как это доказывается развитием сортов Linola,выведение элитной линии агрономического растения требует больших инвестиций в селекцию растений из-за продолжительности времени, необходимого для селекции. Технология генетической инженерии растений позволяет выделять гены непосредственно из неродственных видов и переносить эти гены в элитные агрономические предшествующие культуры, значительно уменьшая тем самым время, требуемое для выведения новых сортов. Кроме того, генетическая инженерия растений делает возможным производство продуктов, не получаемых природно из льна, например, терапевтических агентов. Для выведения новых сортов льна посредством генетической инженерии растений решающее значение имеет регуляция экспрессии вводимого чужеродного или неприродного гена. Желаемые характеристики экспрессии для неприродного гена, такие как уровень экспрессии неприродного гена, конкретные ткань или орган растения, в которых экспрессируется этот неприродный ген, и конкретное время в цикле роста растения, в которое этот неприродный ген экспрессируется, будут варьироваться в зависимости от приложения, для которого разрабатывается данная линия растения. Например, модификация состава масла семян может требовать низких уровней семяспецифической экспрессии фермента, участвующего в метаболизме жирных кислот на ранней стадии развития семян (см., например, патент США 5420034). С другой стороны, экспрессия фармацевтического белка может предпочтительно требовать высоких уровней листоспецифической экспрессии при сборе листьев растений (см., например, патент США 5929304). Для манипулирования характеристиками экспрессии неприродных генов можно воздействовать на многочисленные факторы. Одним фактором является выбор используемого промотора транскрипции. В настоящее время доступен широкий спектр совместимых с растениями промоторов, и некоторые из лучших задокументированных промоторов включают в себя конститутивные промоторы, такие как промотор 35-S CaMV (Rothstein et al. (1987), Gene 53: 153-161) и промотор убикитина (Патент США 5 614 399),тканеспецифические промоторы, такие как семяспецифические промоторы, например, промотор фазеолина (Sengupta-Gopalan et al., (1985), PNAS USA 82: 3320-3324), и индуцируемые промоторы, такие как индуцируемые теплом (Czarnencka et al., (1989), Mol. Cell. Biol. 9 (8): 3457-3464), ультрафиолетовым светом (УФ), элиситорами и повреждением (Lois et al., (1989) EMBO J. 8 (6): 1641-1648), или химикалиями,например, эндогенными гормонами (Skriver et al., (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88(16): 7266-7270). Другие факторы, которыми можно манипулировать для регуляции параметров экспрессии неприродного гена в растениях, включают в себя факторы модификации транскрипции, такие как интроны, сайты полиаденилирования и сайты терминации транскрипции. Можно также манипулировать параметрами экспрессии неприродного гена с помощью факторов, которые влияют на трансляцию, таких как сайты связывания рибосомы и смещение кодонов, которая проявляется хозяином. Кроме того, сам неприродный ген может влиять на жизнеспособность трансгенного растения, в частности, возможные уровни экспрессии. В некоторых случаях можно преодолеть эту проблему экспрессией белка тканеспецифическим образом, например, в листьях или семенах, или ограничением накопления белка в различных субклеточных компартментах, таких как, например, цитоплазма, эндоплазматический ретикулум или вакуоли, обычно в присутствии или в отсутствие специфических нацеливающих последовательностей, способных направлять данный белок в эти компартменты. Другим фактором, который будет влиять на параметры экспрессии, является местоположение, в котором конструкция встроена в хромосому хозяина. Этот эффект мог бы дать объяснение тому, почему различные растения, трансформированные одной и той же рекомбинантной конструкцией, могут иметь колеблющиеся уровни экспрессии рекомбинантного белка.-1 006549 Насколько известно авторам изобретения, экспрессия неприродных генов в семенах льна документирована только в патентной заявке РСТ WO 98/18948. Эта заявка описывает два гена, кодирующие стеароил-ацильный белок-носитель десатуразы (SAD), полученные из льна. Ассоциированные с SAD промоторные последовательности применимы для модификации льна и других растений для экспрессии эндогенных или чужеродных генов. Однако способы, описанные WO 98/18948, ограничивается тем фактом, что промоторы SAD не являются семяспецифическими во льне и обеспечивают экспрессию в листьях, стеблях, цветках и семенах. Таким образом, экспрессия неприродных генов может приводить к нежелательным побочным эффектам в тканях, не являющихся тканью семян. Кроме того, применение промоторов SAD позволяет регулировать уровень экспрессии и тайминг экспрессии в ограниченных пределах. Существует необходимость дальнейшего улучшения способов экспрессии неприродных генов в семенах льна и семенах других растений. Краткое изложение изобретения Данное изобретение относится к улучшенным способам для семяспецифической экспрессии неприродных генов в растениях. В частности, данное изобретение относится к усовершенствованным способам семяспецифической экспрессии неприродных генов во льне. Таким образом, в одном аспекте данное изобретение представляет способ экспрессии представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты в семенах льна, включающий:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора льна;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна; и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора льна. В предпочтительном варианте данного изобретения по меньшей мере одна характеристика экспрессии, например, тайминг экспрессии в жизненном цикле растения, обеспечиваемая промотором неприродной последовательности нуклеиновой кислоты, является сходной с характеристикой экспрессии, которая придается природной последовательности нуклеиновой кислоты. В дополнительных предпочтительных вариантах, семяспецифическим промотором льна является промотор олеозина, промотор запасного белка 2S или промотор бобово-подобного запасного белка семян. В следующем аспекте данное изобретение представляет трансгенные семена льна, полученные в соответствии со способом, включающим:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты,содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна; и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора. В следующем аспекте данное изобретение представляет растения льна, способные завязывать семена, полученные способом, включающим:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна; и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора. Еще в одном дополнительном аспекте данное изобретение представляет новые семяспецифические промоторы льна, применимые для экспрессии неприродных генов в семенах льна и семенах других видов растений, применимые, например, для модификации состава белка или масла этих семян. В предпочтительном варианте семяспецифический промотор включает:NO: 4), фиг. 3 (SEQ ID NO: 6) или фиг. 4 (SEQ ID NO: 8), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а);(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая имеет существенную гомологию последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b);(d) последовательность нуклеиновой кислоты, которая является аналогом последовательности нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с); или(е) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b), (с) и (d) при жестких условиях гибридизации. В другом аспекте данное изобретение включает химерные последовательности нуклеиновых кислот, содержащие первую последовательность нуклеиновой кислоты, полученную из льна, функционально связанную со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, неприродной относительно указанной первой последовательности нуклеиновой кислоты, причем указанная первая последовательность нуклеиновой кислоты содержит новый семяспецифический промотор льна. Другие признаки и преимущества данного изобретения станут легко понятными из следующего подробного описания. Должно быть понятно, что подробное описание и конкретные примеры, показывающие предпочтительные варианты данного изобретения, приводятся только в качестве иллюстрации,так как разнообразные изменения и модификации в рамках идеи и объема данного изобретения будут очевидными специалистам в данной области из данного подробного описания. Краткое описание рисунков Теперь данное изобретение будет описано со ссылкой на рисунки, в которых фиг. 1 показывает последовательность ДНК (SEQ ID NO:1) геномного клона льна, кодирующую белок олеозин 16,0 кД (SEQ ID NO:2 и 3); фиг. 2 - последовательность ДНК (SEQ ID NO:4) геномного клона льна, кодирующую белок олеозин 18,6 кД (SEQ ID NO:5); фиг. 3 - последовательность ДНК (SEQ ID NO: 6) геномного клона льна, кодирующую запасной белок 2S (SEQ ID NO:7); фиг. 4 - последовательность ДНК (SEQ ID NO:8) геномного клона льна, кодирующую бобовоподобный запасной белок 54,5 кД (SEQ ID NO:9-12); фиг. 5 - Саузерн-блот-анализ геномной ДНК льна, зондированной последовательностями ДНК олеозина льна; фиг. 6 - Нозерн-блот-анализ семяспецифической экспрессии олеозинов льна; фиг. 7 - Нозерн-блот-анализ экспрессии в процессе развития олеозинов льна во время развития семян; фиг. 8 - активность GUS зародышей льна, подвергнутых бомбардировке генными конструкциями промотор олеозина льна-GUS-терминатор; фиг. 9 - экспрессию GUS в развивающихся зародышах льна и семенах Arabidopsis растений, трансформированных гибридом промотор гена белка 2S-GUS; фиг. 10 - тканеспецифическую экспрессию GUS в трансгенных растениях льна, трансформированных генной конструкцией промотор линина-GUS-терминатор линина; фиг. 11 - временную экспрессию GUS в трансгенных растениях льна, трансформированных генной конструкцией промотор линина-GUS-терминатор линина; фиг. 12 - экспрессию GUS в трансгенных растениях Brassica napus (L1-L9), трансформированных генной конструкцией промотор линина-GUS-терминатор линина; фиг. 13 - экспрессию GUS в трансгенных растениях Arabidopsis, трансформированных генной конструкцией промотор линина-GUS-терминатор линина, на различных стадиях развития семян. Подробное описание изобренеия Как упоминалось выше, данное изобретение относится к усовершенствованным способам экспрессии неприродных генов в растениях, в частности льне. Данное изобретение представляет способы, делающие возможной семяспецифическую экспрессию неприродных генов во льне. Способы данного изобретения являются выгодными потому, что достигается улучшенная регуляция экспрессии неприродных генов в семенах льна. Экспрессия неприродного гена ограничивается семенами, что ограничивает потенциал нежелательных побочных эффектов, происходящих из экспрессии в других органах и тканях растения. Кроме того, обеспеченная методология позволяет усовершенствовать контроль над параметрами экспрессии, такими как уровень экспрессии неприродного гена и тайминг экспрессии неприродного гена в цикле развития растения. Способы данного изобретения особенно полезны благодаря тому, что в соответствии с данным изобретением состав семян в отношении ценных сырьевых материалов, таких как масло, белок и полисахариды, может быть изменен как качественно, так и количественно. Таким образом, в одном аспекте данное изобретение представляет способ экспрессии представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты, включающий:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора льна;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора льна. В применении здесь, термин "неприродный" относится к любой последовательности нуклеиновой кислоты, в том числе последовательности РНК или ДНК, которая обычно не ассоциирована с семяспецифическим промотором. Этот термин включает в себя гетерологичные последовательности нуклеиновых кислот, которые получены из другого вида растения, нежели промотор, а также гомологичные последовательности нуклеиновых кислот, которые получены из того же самого вида растения, что и промотор, но не являются связанными с этим промотором в растении дикого типа (нетрансгенном растении). Неприродная последовательность нуклеиновой кислоты при связывании с семяспецифическим промотором, полученным из льна, приводит к образованию химерной конструкции. Эту химерную конструкцию вводят в клетку растения льна для создания трансгенной клетки растения льна, что приводит к детектируемо отличающемуся фенотипу данной клетки растения льна или растения льна, выращенного из нее, в сравнении с нетрансгенной клеткой растения льна или растением льна, выращенным из нее. Непрерывная последовательность нуклеиновой кислоты, идентичная последовательности нуклеиновой кислоты этой химерной конструкции, не присутствует в нетрансформированных клетке растения льна или растении льна, выращенном из нее. В этом отношении, химерные молекулы нуклеиновых кислот включают те последовательности, которые содержат промотор льна, связанный с последовательностью нуклеиновой кислоты, полученной из другого вида растения, или последовательностью нуклеиновой кислоты из льна, но обычно не связанной с данным промотором. Химерные последовательности нуклеиновых кислот, в применении здесь, включают в себя также последовательности, содержащие промотор льна и последовательность нуклеиновой кислоты, которая обычно связана с этим промотором, но дополнительно содержащие неприродную последовательность нуклеиновой кислоты. Например, если промотор представляет собой специфический для семян льна промотор олеозина, последовательности, "неприродные" для промотора олеозина льна, включают в себя также последовательность, содержащую гибрид гена олеозина льна, природно связанного с промотором олеозина, с представляющей интерес кодирующей последовательностью, которая природно не связана с этим промотором. Термин "неприродный" включает в себя также гибридный ген, описанный выше, который дополнительно включает в себя последовательность расщепления, разделяющую последовательность нуклеиновой кислоты, которая обычно связана с промоторной последовательностью, и ген, кодирующий представляющий интерес белок. Термин "последовательность нуклеиновой кислоты" обозначает последовательность нуклеотидных или нуклеозидных мономеров, состоящих из природно встречающихся оснований, сахаров и межсахарных (каркасных) связей. Этот термин включает в себя также модифицированные или замещенные последовательности, содержащие не встречающиеся в природе мономеры или их части, которые функционируют сходным образом. Последовательности нуклеиновых кислот данного изобретения могут быть рибонуклеиновыми (РНК) или дезоксирибонуклеиновыми (ДНК) кислотами и могут содержать природно встречающиеся основания, в том числе аденин, гуанин, цитозин, тимидин и урацил. Эти последовательности могут также содержать модифицированные основания, такие как ксантин, гипоксантин, 2 аминоаденин, 6-метил-, 2-пропил- и другие алкиладенины, 5-галогенурацил, 5-галогенцитозин, 6 азаурацил, 6-азацитозин и 6-азатимин, псевдоурацил, 4-тиоурацил, 8-галогенаденин, 8-аминоаденин, 8 тиоладенин, 8-тиоалкиладенины, 8-гидроксиладенин и другие 8-замещенные аденины, 8 галогенгуанины, 8-аминогуанин, 8-тиолгуанин, 8-тиоалкилгуанины, 8-гидроксилгуанин и другие 8 замещенные гуанины, другие аза- и деазаурацилы, тимидины, цитозины, аденины или гуанины, 5 трифторметилурацил и 5-трифторцитозин. Термин "семяспецифический" промотор означает, что ген, экспрессируемый под контролем промотора, преимущественно экспрессируется в семенах растения при отсутствии экспрессии или без существенной экспрессии, обычно менее 5% от общего уровня экспрессии, в других тканях растения. В следующем аспекте данное изобретение представляет новые семяспецифические промоторы льна, применимые для экспрессии неприродных генов в семенах льна и семенах других видов растений. Эти промоторы могут быть использованы для модификации, например, состава белка, масла или полисахаридов этих семян. В предпочтительном варианте, семяспецифический промотор включает:NO:4), фиг. 3 (SEQ ID NO:6) или фиг. 4 (SEQ ID NO:8), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а);(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая имеет существенную гомологию последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b);(d) последовательность нуклеиновой кислоты, которая является аналогом последовательности нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с); или (е) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b), (с) и (d) при жестких условиях гибридизации. Термин "последовательность, которая имеет существенную гомологию последовательности" означает те последовательности нуклеиновых кислот, которые имеют незначительные или несущественные изменения последовательности от последовательностей, описанных в (а) или (b), т.е. последовательности, которые функционируют по существу таким же образом и способны направлять семяспецифическую экспрессию неприродных последовательностей нуклеиновых кислот. Эти изменения могут быть связаны с локальными мутациями или структурными модификациями. Последовательности нуклеиновых кислот, имеющие существенную гомологию, включают в себя последовательности нуклеиновых кислот,имеющие по меньшей мере 65%-ную, более предпочтительно по меньшей мере 85%-ную и наиболее предпочтительно 90-95%-ную идентичность с последовательностями нуклеиновых кислот, показанными на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), фиг. 2 (SEQ ID NO: 4), фиг. 3 (SEQ ID NO:6) или фиг. 4 (SEQ ID NO:8). Термин "последовательность, которая гибридизуется" означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая может гибридизоваться с последовательностью (а), (b), (с) или (d) при жестких условиях гибридизации. Подходящие "жесткие условия гибридизации", которые стимулируют гибридизацю ДНК, известны специалистам в данной области или могут быть найдены в Current Protocols in MolecularBiology, John WileySons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Например, могут использоваться следующие условия: 6,0 х хлорид натрия/цитрат натрия (SSC) при приблизительно 45 С с последующей промывкой 2,0 хSSC при 50 С. Жесткость может быть выбрана на основании условий, используемых в стадии промывки. Например, концентрация соли в стадии промывки может быть выбрана из высокой жесткости около 0,2 хSSC при 50 С. Кроме того, температура в стадии промывки может быть при условиях высокой жесткости, при около 65 С. Термин "последовательность нуклеиновой кислоты, которая является аналогом" означает последовательность нуклеиновой кислоты, которая была модифицирована в сравнении с последовательностью(а), (b) или (с), причем эта модификация не изменяет применимость этой последовательности (т.е. в качестве семяспецифического промотора), описанную здесь. Модифицированная последовательность или аналог могут иметь улучшенные свойства в сравнении с последовательностью, показанной в (а), (b) или(с). Одним примером модификации для получения аналога является замена одного из природно встречающихся оснований (т.е. аденина, гуанина, цитозина или тимидина) последовательности, показанной на фиг. 1, 2, 3 или фиг. 4, модифицированным основанием, таким как ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин,6-метил-, 2-пропил- и другие алкиладенины, 5-галогенурацил, 5-галогенцитозин, 6-азаурацил, 6 азацитозин и 6-азатимин, псевдоурацил, 4-тиоурацил, 8-галогенаденин, 8-аминоаденин, 8-тиоладенин, 8 тиоалкиладенины, 8-гидроксиладенин и другие 8-замещенные аденины, 8-галогенгуанины, 8 аминогуанин, 8-тиолгуанин, 8-тиоалкилгуанины, 8-гидроксилгуанин и другие 8-замещенные гуанины,другие аза- и деазаурацилы, тимидины, цитозины, аденины или гуанины, 5-трифторметилурацил и 5 трифторцитозин. Другой пример модификации включает в себя модифицированные гетероатомы фосфора или кислорода в фосфатном скелете, короткоцепочечные алькильные или циклоалкильные межсахарные связи или короткоцепочечные гетероатомные или гетероциклические межсахарные связи в молекуле нуклеиновой кислоты, показанной на фиг. 1, 2, 3 или фиг. 4. Например, последовательности нуклеиновых кислот могут содержать фосфоротиоаты, фосфотриэфиры, метилфосфонаты и фосфородитиоаты. Дополнительным примером аналога молекулы нуклеиновой кислоты данного изобретения является пептиднуклеиновая кислота (ПНК), в которой дезоксирибоза- (или рибоза-)фосфатный скелет в ДНК(или РНК) заменен полиамидным скелетом, который сходен со скелетом, обнаруживаемым в пептидах(Р.Е. Nielsen, et al. Science 1991, 254, 1497). Было показано, что ПНК-аналоги являются устойчивыми к деградации ферментами и имеют пролонгированное существование in vivo и in vitro. ПНК также сильнее связываются с комплементарной последовательностью ДНК вследствие отсутствия обусловленного зарядом отталкивания между цепями ПНК и ДНК. Другие аналоги нуклеиновых кислот могут содержать нуклеотиды, содержащие полимерные скелеты, циклические скелеты или ациклические скелеты. Например, эти нуклеотиды могут иметь структуры морфолино-скелета (патент США 5 034 506). Аналоги могут также содержать группы, например, репортерные группы, группу для улучшения фармакокинетических или фармакодинамических свойств последовательности нуклеиновой кислоты. В другом аспекте данное изобретение представляет химерные последовательности нуклеиновых кислот, содержащие первую последовательность нуклеиновой кислоты, полученную из льна, функционально связанную со второй последовательностью нуклеиновой кислоты, неприродной относительно указанной первой последовательности нуклеиновой кислоты, причем указанная первая последовательность нуклеиновой кислоты содержит новый семяспецифический промотор льна. Предпочтительно этот промотор выбран из группы промоторов фиг. 1, 2, 3 или 4 или последовательность нуклеиновой кислоты,гибридизующуюся с ними при жестких условиях.-5 006549 В соответствии с данным изобретением химерные последовательности нуклеиновых кислот могут быть включены известным образом в рекомбинантный экспрессирующий вектор, который обеспечивает хорошую экспрессию в клетке семени. Таким образом, данное изобретение включает в себя рекомбинантный экспрессирующий вектор, содержащий химерную последовательность нуклеиновой кислоты данного изобретения, пригодный для экспрессии в клетке семени. Термин "подходящий для экспрессии в клетке семени" означает, что рекомбинантные экспрессирующие векторы содержат химерную последовательность нуклеиновой кислоты данного изобретения,регуляторный участок и участок терминации, выбранные на основании клетки семени, которая должна использоваться для экспрессии, которая функционально связана с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид желательного аминокислотного состава. Термин "функционально связан" означает, что химерная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая этот полипептид,связана с регуляторной последовательностью и участком терминации, которые делают возможной экспрессию в клетке семени. Типичная конструкция состоит в направлении 5'3' из регуляторного участка,заканчивающегося промотором, способным направлять экспрессию в растении, участком, кодирующим полипептид, и участком терминации транскрипции, функциональными в клетках растений. Эти конструкции могут быть получены в соответствии с методологией, хорошо известной специалистам в области молекулярной биологии (см., например, Sambrook et al. (1990), Molecular Cloning, 2nd Ed. Cold Spring Harbor Press). Получение конструкций может включать в себя такие способы, как рестрикционное расщепление, лигирование, гель-электрофорез, секвенирование ДНК и ПЦР. Большое разнообразие клонирующих векторов доступно для выполнения необходимых стадий клонирования. Особенно подходящими для этой цели являются клонирующие векторы с системой репликации, которая является функциональной в Escherichia coli, такие как pBR322, серия pUC, серия M13mp,pACYC184, pBluescript и т.д. Последовательности нуклеиновых кислот могут быть введены в эти векторы, и эти векторы могут быть использованы для трансформаци Е. coli, которая может выращиваться в подходящей среде. Плазмиды могут быть извлечены из этих клеток при сборе и лизисе клеток. Конечные конструкции могут быть введены в растительные векторы, совместимые по интеграции в растение, такие как Ti- и Ri-плазмиды. Способы экспрессии неприродных генов в семенах льна в соответствии с данным изобретением могут осуществляться с использованием любого семяспецифического промотора льна и не ограничиваются конкретным выбранным семяспецифическим промотором льна. В предпочтительных вариантах данного изобретения семяспецифический промотор льна придает неприродной последовательности нуклеиновой кислоты по меньшей мере один параметр экспрессии, который сходен или идентичен параметру экспрессии, придаваемому природной последовательности нуклеиновой кислоты природным промотором. Термин "параметр экспрессии" в применении здесь означает любое измеримое свойство или действие, придаваемое семяспецифическим промотором льна последовательности нуклеиновой кислоты, функционально связанной с этим семяспецифическим промотором льна. Таким образом, в предпочтительных вариантах тайминг экспрессии в жизненном цикле растения неприродной последовательности нуклеиновой кислоты является сходным или идентичным с таймингом экспрессии природной последовательности нуклеиновой кислоты. В дополнительных предпочтительных вариантах, уровень экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты является сходным или идентичным уровню экспрессии природной последовательности нуклеиновой кислоты. В дополнительных характерных вариантах реакция неприродного гена на изменения в условиях освещения, изменениях в длине волны или интенсивности света, например, на изменения температуры, повреждения ткани, изменения в концентрации химических агентов, например, фитогормонов и пестицидов, является сходной реакции природной последовательности нуклеиновой кислоты на эти стимулы. Другие желательные параметры экспрессии,придаваемые семяспецифическим промотором льна, могут быть известны специалистам в данной области, и семяспецифический промотор льна может быть выбран в соответствии с этим. Семяспецифические промоторы льна, которые могут быть использованы в соответствии с данным изобретением, включают в себя промоторы, связанные с запасными белками семян, такими как все альбумины и глобулины, в том числе вициллин- и бобовоподобные белки, а также семяспецифические промоторы, не связанные с запасными белками семени, такие как промоторы олеозинов. Особый интерес представляют также промоторы, ассоциированные с метаболизмом жирных кислот, например, промоторы белка-носителя ацила (АСР), сатураз, десатураз, элонгаз и т.п. В предпочтительных вариантах данного изобретения используемым семяспецифическим промотором является промотор олеозина, промотор бобовоподобного запасного белка семян или промотор запасного белка 2S. В особенно предпочтительных вариантах семяспецифический промотор имеет последовательность, показанную на фиг. 1, 2, 3 или 4, или любые другие последовательности, полученные из льна и гибридизующиеся с любой из этих четырех последовательностей нуклеиновых кислот при жестких условиях. Дополнительные семяспецифические промоторы могут быть использованы в соответствии с данным изобретением. Эти промоторы могут быть получены различными способами. Если был выделен белок семени льна, он может быть частично секвенирован, так что может быть сконструирован нуклеино-6 006549 вокислотный зонд для идентификации РНК, специфической для этого семени. Для дополнительного усиления РНК, специфически связанной с семенем, может быть получена кДНК из клеток семян, и из этой кДНК могут быть вычтены мРНК или кДНК из клеток не семян (из других тканей). Затем оставшуюся кДНК семян можно использовать для зондирования библиотеки геномной ДНК на комплементарные последовательности. Последовательности, гибридизующиеся с этой кДНК, могут быть затем получены, и ассоциированный с ними промоторный участок может быть выделен. Можно также подвергнуть скринингу библиотеки геномной ДНК, полученные из тканей семян льна, с использованием известных семяспецифических генов из других видов растений и затем выделить их ассоциированные промоторы. Изза относительного обилия запасных белков семян в семенах можно также получить информацию о последовательности посредством случайного секвенирования библиотек кДНК семян льна. Эти последовательности кДНК, соответствующие последовательности известных запасных белков льна, могут быть использованы для идентификации ассоциированного с ними промотора. Базы данных, содержащие информацию о последовательности из крупномасштабного секвенирования, например, из Arabidopsis и кукурузы, могут быть подвергнуты поиску на известные семяспецифические белки и/или промоторы, и эта информация может быть использована для идентификации промоторных последовательностей в льне,которые имеют сходство последовательности. Могут быть использованы альтернативные способы для выделения дополнительных семяспецифических промоторов льна, и специалистами в данной области могут быть обнаружены и использованы в соответствии с данным изобретением новые семяспецифические промоторы льна. Представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты, связанная с промотором, может быть любой представляющей интерес последовательностью нуклеиновой кислоты, в том числе любой РНК- или ДНК-последовательностью, кодирующей представляющий интерес пептид или белок, например, фермент, или последовательностью, комплементарной геномной последовательности, причем эта геномная последовательность может быть по меньшей мере одной из открытых рамок считывания,интроном, некодирующей лидерной последовательностью или любой последовательностью, причем эта комплементарная последовательность будет ингибировать транскрипцию, процессинг мессенджер-РНК,например, сплайсинг или трансляцию. Представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты может быть синтетической, природно выделенной или их комбинацией. Представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты могла бы быть фрагментом природной последовательности,например, включать только каталитический домен или структуру особой важности. В зависимости от природы представляющей интерес нуклеиновой кислоты может быть желательным синтез этой последовательности с предпочтительными для растений кодонами. Предпочтительные для растений кодоны могут быть определены из кодонов наивысшей частоты встречаемости в белках, экспрессируемых в наибольшем количестве представляющих интерес конкретных видов растений. Представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать любой из разнообразных рекомбинантных белков. Примеры рекомбинантных белков, которые могут экспрессироваться способами данного изобретения, включают в себя белки с благоприятной каталитической функцией или ценный белок, который будет накапливаться до высоких уровней и экстрагироваться, если желательно. Белки с каталитической функцией включают в себя, но не ограничиваются ими, белки, которые придают новый биохимический фенотип развивающимся семенам. Новые фенотипы могут включать в себя такие модификации, как измененный состав белков семян или масла семян или состав полисахаридов семян, повышенное продуцирование предсуществующих желательных продуктов или свойств и уменьшение или даже супрессию нежелательного генного продукта с использованием антисмысловой технологии, рибозима или технологий ко-супрессии (Izant and Weintraub (1984) Cell 26: 1007-1015, антисмысловые; Hazelhoff and Gerlach (1988) Nature 334: 585-591, рибозим; Napoli et al. (1990) Plant Cell 2: 279-289, ко-супрессия). Ожидается, что желаемые белки могли бы экспрессироваться во всех зародышевых тканях, хотя в различных зародышевых тканях, таких как зародышевая ось и семядоли, может быть обнаружена разная клеточная экспрессия. Представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты может экспрессироваться на любой стадии в развитии семян. Тайминг экспрессии может зависеть от конкретной применимости данного изобретения. Экспрессия ферментов, участвующих в модификации масла, может быть желательной на ранней стадии развития семян, например, перед накоплением запасного белка семян. Кроме промоторного участка и представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты, последовательность нуклеиновой кислоты, способную терминировать транскрипцию, обычно включают в экспрессирующие векторы. Терминаторы транскрипции предпочтительно представляют собой около 200 - 1000 пар нуклеотидных оснований и могут содержать любые такие последовательности,функциональные в растениях, такие как участок терминации нопалинсинтазы (Bevan et al., (1983) Nucl.Acid. Res. 11: 369-385), терминатор фазеолина (van der Geest et al., (1994) Plant J. 6(3): 413-423), терминатор гена октопинсинтазы Agrobacterium tumefaciens или другие подобным образом функционирующие элементы. Эти участки терминации транскрипции могут быть получены, как описано An (1987), Methodsin Enzym. 153: 292, или могут уже присутствовать в плазмидах, доступных из коммерческих источников,-7 006549 таких как ClonTech, Palo Alto, California. Выбор подходящего терминатора оказывает влияние на скорость транскрипции. Химерная конструкция может дополнительно содержать энхансеры, такие как лидер AMV (Joblingand Gehrke (1987), Nature 325: 622-625), или интроны. Должно быть понятно, что конструкция экспрессирующего вектора может зависеть от таких факторов, как выбор вида растения и/или типа экспрессируемого полипептида. Экспрессирующие векторы обычно содержат также маркерный ген. Маркерные гены включают в себя все гены, которые позволяют отличить трансформированные клетки растения от нетрансформированных клеток, в том числе селектируемые и пригодные для скрининга маркерные гены. Удобно, когда маркер может быть маркером устойчивости к гербициду, например, глифозату или фосфинотрицину, или к антибиотику, такому как канамицин, G418, блеомицин, гигромицин, хлорамфеникол и т.п., которые придают признак, на который может быть проведен отбор при помощи химических средств. Скринируемые маркеры могут быть использованы для идентификации трансформантов посредством наблюдения. Они включают в себя, но не ограничиваются ими, -глюкуронидазу или ген uidA, ген -лактамазы или зеленый флуоресцентный белок (Niedz et al. (1995) Plant Cell Rep. 14: 403). Для введения последовательностей нуклеиновых кислот в клетки растений для специалиста в общем доступны различные способы. Сообщалось об опосредованной Agrobacterium трансформации клеток растений льна, и трансформанты льна могут быть получены в соответствии со способами, описанными Dong and McHughen (1993) Plant Science 88: 61-77, хотя многие другие способы (см. ниже) могут быть также использованы для введения химерных конструкций ДНК в клетки льна, если желательно. Трансформированным растениям льна, выращенным в соответствии с общепринятыми сельскохозяйственными способами, известными лицу с квалификацией в данной области, дают завязать семена. Затем семена льна могут быть получены из зрелых растений льна и анализированы на желательные измененные свойства в сравнении с семенами дикого типа. Два или более поколения растений могут быть выращены и либо перекрестно опылены, либо самоопылены для идентификации растений и штаммов с желаемыми фенотипическими характеристиками,включая выработку рекомбинантного полипептида. Может быть желательным обеспечение гомозиготности в растениях для гарантии непрерывного наследования рекомбинантного признака. Способы отбора гомозиготных растений хорошо известны специалистам в области селекции растений и включают в себя периодическое самоопыление и отбор и культивирование пыльников и микроспор. Гомозиготные растения могут быть также получены трансформацией гаплоидных клеток или тканей с последующей регенерацией гаплоидных проростков, затем превращаемых в диплоидные растения любым числом известных способов (например, обработкой колхицином или другими разрушающими микротрубочки агентами). Данное изобретение включает в себя также трансгенные семена льна, полученные в соответствии со способом, предусматривающим(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна; и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора. В предпочтительных вариантах данного изобретения семяспецифический промотор выбран из группы семяспецифических промоторов льна, состоящей из промотора запасного белка 2S, промотора глобулина, промотора олеозина и промотора бобово-подобного запасного белка семян. Специфические промоторные последовательности показаны на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), фиг. 2 (SEQ ID NO:4), фиг. 3 (SEQ ID NO:6) и фиг. 4 (SEQ ID NO:8). Далее, данное изобретение представляет растения льна, способные завязывать семена, полученные способом, включающим:(а) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов (1) семяспецифический промотор, полученный из льна; и(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна; и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора.-8 006549 Далее данное изобретение представляет способы применения новых промоторов, показанных на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), фиг. 2 (SEQ ID NO: 4), фиг. 3 (SEQ ID NO: 6) и фиг. 4 (SEQ ID NO: 8), в видах растений, иных чем лен. Таким образом, данное изобретение включает в себя также получение химерных конструкций нуклеиновых кислот, содержащих промотор, выбранный из группы промоторов, показанных на фиг. 1, 2, 3 и 4, и представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, и экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты семяспецифическим образом в видах растений, иных, чем лен, под контролем промотора льна. В другом аспекте данного изобретения представлен способ экспрессии представляющей интерес нуклеиновой кислоты в семенах растений, включающий(а) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов(1) семяспецифический промотор, выбранный из группы семяспецифических промоторов, состоящий из (i) последовательности нуклеиновой кислоты, показанной на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), фиг. 2 (SEQID NO: 4), фиг. 3 (SEQ ID NO: 6) или фиг. 4 (SEQ ID NO:8), где Т может быть также U;(ii) последовательности нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а);(iii) последовательности нуклеиновой кислоты, которая имеет существенную гомологию последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты (i) или (ii); и(iv) последовательности нуклеиновой кислоты, которая является аналогом последовательности нуклеиновой кислоты (i), (ii) или (iii);(v) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (i), (ii), (iii) или (iv) при жестких условиях гибридизации; и(2) указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты;(b) введение химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения;(c) выращивание указанной клетки растения в зрелое растение, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем указанного семяспецифического промотора. Различные способы доступны для введения последовательностей нуклеиновых кислот, в частности,ДНК, в растительные клетки-хозяева, в общем. Например, химерные конструкции ДНК могут быть введены в клетки-хозяева, полученные из двудольных растений, таких как табак, и масличных видов, таких как Brassica napus, с использованием стандартных векторов Agrobacterium при помощи протокола трансформации, например, описанного Moloney et al. (1989), Plant Cell Rep. 8: 238-242 или Hinchee et al. (1988)Bio/Technol. 6: 915-922; или других способов, известных специалистам с квалификацией в данной области. Например, применение Т-ДНК для трансформации растительных клеток получило интенсивное исследование и достаточно полно описано в Европейском патенте ЕР 0 120 516, Hoekema et al., (1985),Chapter V In: The Binary Plant Vector System Offset-drukkerij Kanters BV, Alblasserdam); Knauf et al. (1983),Genetic Analysis of Host Expression by Agrobacterium, p. 245, In: Molecular Genetics of Bacteria-Plant Interaction, Puhler, A. ed. Springer-Verlag NY); and An et al., (1985), (EMBO J., 4: 277-284). Трансформация Agrobacterium может быть также использована для трансформации однодольных видов растений (патент США 5 591 616). Удобным образом, эксплантаты могут культивироваться с Agrobacterium tumefaciens или Agrobacterium rhizogenes для создания возможности переноса транскрипционной конструкции в растительную клетку-хозяина. После трансформации с использованием Agrobacterium клетки растений диспергируют в подходящую среду для отбора, затем извлекают каллус, побеги и в конце концов растения.Agrobacterium-хозяин будет нести плазмиду, содержащую гены vir, необходимые для переноса Т-ДНК в клетки растений. Для инъекции и электропорации (см. ниже) "разоруженные" Ti-плазмиды (не имеющие опухолевых генов, в частности, участка Т-ДНК) могут быть введены в растительную клетку. Применение способов без использования Agrobacterium позволяет применять конструкции, описанные здесь, для получения трансформации и экспрессии в большом разнообразии однодольных и двудольных видов растений. Эти способы особенно применимы для трансформации видов растений, которые являются неподатливыми в системе трансформации с Agrobacterium. Другие способы для переноса генов включают в себя бомбардировку частицами (Sanford (1988), Trends in Biotechn. 6: 299-302), электропорацию (Fromm et al., (1985), PNAS USA, 82: 5824-5828; Riggs and Bates, (1986), PNAS USA 83:56025606), опосредованное ПЭГ поглощение ДНК (Potrykus et al., (1985). Mol. Gen. Genetics, 199: 169-177),микроинъекцию (Reich et al., Bio/Techn. (1986) 4:1001-1004) и карборундовые вискеры (Kaeppler et al.(1990) Plant Cell Rep. 9: 415-418). В следующих конкретных приложениях, например, для В. napus, клетки-хозяева, нацеленные на прием рекомбинантных конструкций ДНК, обычно получают из черешков семядолей, как описано Moloney et al. (1989), Plant Cell Rep. 8: 238-242. Другие примеры с использованием коммерческих масличных семян включают в себя трансформацию семядолей в эксплантатах сои (Hinchee et al. (1988) Bio/Technol. 6: 915-922) и трансформацию стеблей хлопчатника (Umbeck et al., (1987) Bio/Techn. 5: 263-266).-9 006549 После трансформации клетки, например, листовые диски, выращивают в селективной среде. Как только начинают прорастать побеги, их отрезают и помещают на укореняющую среду. После образования достаточного количества корней, эти растения переносят в почву. Затем предполагаемые трансформированные растения испытывают на присутствие маркера. Саузерн-блоттинг выполняют на геномной ДНК с использованием подходящего зонда, чтобы показать интеграцию в геном клетки-хозяина. Способы, представленные в данном изобретении, могут быть использованы в сочетании с большим спектром видов растений. Особенно предпочтительные клетки растений, применяемые в соответствии с данным изобретением, включают в себя клетки из следующих растений: сои (Glycine max), рапса (Brassica napus, Brassica campestris), подсолнечника (Helianthus annuus), хлопчатника (Gossypium hirsutum),кукурузы (Zea mays), табака (Nicotiana tobacum), люцерны (Medicago sativa), пшеницы (Triticum sp.), ячменя (Hordeum vulgare), овса (Avena sativa L.), сорго (Sorghum bicolor), Arabidopsis thaliana, картофеля(Solanum sp.), льна/льна обыкновенного (Linum usitatissimum), сафлора (Carthamus tinctorius), гвинейской масличной пальмы (Eleais guineeis), земляного ореха (Arachis hypogaea), американского ореха (Bertholletia excelsa), кокосового ореха (Cocus nucifera), клещевины (Ricinus communis), кориандра (Coriandrumsativum), тыквы крупноплодной столовой (Cucurbita maxima), жожоба (Simmondsia chinensis) и риса(Oryza sativa). Данное изобретение имеет многочисленные применения, которые включают в себя улучшение внутренней ценности семян растений посредством накопления ими измененных полипептидов или новых рекомбинантных пептидов или посредством включения или устранения метаболической стадии. Применение данного изобретения может приводить к улучшенному качеству белка (например, увеличенным концентрациям незаменимых или редких аминокислот), улучшенному качеству липидов посредством модификации состава жирных кислот или улучшенному или увеличенному составу углеводов. Примеры включают в себя экспрессию богатых серой белков, таких как белки, обнаруженные в люпинах и американском орехе, в семенах, с серонесодержащими аминокислотами. Улучшенное качество белков могло бы также достигаться экспрессией белка или фрагмента белка, который обогащен незаменимыми аминокислотами, в том числе лизином, цистеином, метионином и триптофаном. Альтернативно, мог бы экспрессироваться (жирный ацил)-кофермент А-трансферазный фермент, способный модифицировать соотношения жирных кислот в триглицеридах (запасных липидах). В случаях, когда рекомбинантному белку позволяют накапливаться в семенах, этот белок мог бы быть также пептидом, который имеет фармацевтическую или промышленную ценность. В этом случае этот пептид можно было бы экстрагировать из семян и использовать в неочищенном или очищенном виде, в зависимости от того, как это требуется для предполагаемого использования. Полипептиды, которые экспрессируются в семенах, могут быть также фрагментами или производными природного белка. Фармацевтически применимые белки могут включать в себя, но не ограничиваются ими, антикоагулянты, такие как гирудин, антитела, в том числе моноклональные антитела и фрагменты антител, вакцины, цитокины или факторы роста, такие как бычий фактор роста, холинергический фактор дифференцировки (CDF), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста рыб, гонадотропин, колониестимулирующий фактор гранулоцитов (G-CSF), колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов(GM-CSF), гормон роста человека, интерферон альфа (IFN-), интерферон бета (IFN-), интерферон гамма (IFN-), интерлейкин 1-альфа (ILl-), интерлейкин 1-бета (IL1-), интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-3 (IL-3), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-5 (IL-5), интерлейкин-6 (IL-6), интерлейкин-10 (IL-10),ингибирующий фактор лейкоза (LIF), тиоредоксин, колониестимулирующий фактор макрофагов (МCSF), фактор роста миеломоноцитов, фактор роста нервной ткани (NGF), онкостатин М, фактор роста тромбоцитов (PDGF), пролактин, трансформирующий фактор роста альфа (TGF-), трансформирующий фактор роста бета 2 (TGF-2), фактор некроза опухолей альфа (TNF-) и фактор некроза опухолей бета(TNF-). Фармацевтически полезные белки могут также включать в себя белки млекопитающих, например, но не только, -1-антитрипсин, белки, действующие против ожирения, белки крови, коллаген, коллагеназу, эластин, эластазу, энтеропептидазу, фибриноген, гемоглобин, сывороточный альбумин человека, инсулин, лактоферрин, миоглобин и белки легочного сурфактанта. Применимые в промышленности пептиды могут включать, но не ограничиваются ими, -амилазу или другие амилазы, амилоглюкозидазу, арабиназу, каталазу, целлобиогидролазу, целлюлазы, хитиназы,химотрипсин, дегидрогеназы, эндоглюканазу, химозин, эндогалактаназу, эстеразы, -галактозидазу, галактозидазу или другие галактозидазы, желудочные липазы, глюканазы, глюкозоизомеразу, гемицеллюлазы, гидролазы, изомеразу, лигниназы, липазы, лиазы, лизоцимы, оксидазы, оксидоредуктазу, папаин, пектиназы, пектинлиазу, пероксидазы, фосфатазы, фитазу, протеазы, пуллуланазы, редуктазы, сериновые протеазы, тиоредоксин, трансферазу, трипсин и ксиланазу. Следующие далее неограничительные примеры являются иллюстрирующими данное изобретение. Примеры Пример 1. Выделение семяспецифических промоторов льна. Семяспецифические кДНК-клоны выделяли из библиотеки семяспецифических кДНК льна. Эти кДНК-клоны секвенировали и использовали BLAST (упрощенный инструмент поиска с локальным со- 10006549 поставлением) для сравнения этих последовательностей с другими в общедоступных базах данных, таких как Genbank. Это сравнение выявило, что расшифрованная аминокислотная последовательность нескольких из выделенных кДНК имела высокую степень сходства с олеозинами как низкомолекулярного,так и высокомолекулярного класса, альбумином 2S и бобово-подобными запасными белками. Получали зонды индивидуально из (частей) кДНК, кодирующих олеозины, альбумин 2S и бобовоподобные запасные белки, и их использовали для скрининга геномной библиотеки, полученной из линии Forge льна,которая является гомозиготной в отношении четырех генов устойчивости к ржавчине (Anderson et al.(1997), The Plant Cell 9: 641-651). После скрининга с высокой жесткостью были идентифицированы несколько позитивных лямбда-клонов для каждого зонда. Вставки субклонировали в плазмидный векторpBluescript и секвенировали. Информация последовательности выявила, что авторы выделили геномные копии кДНК олеозинов, альбумина 23 и бобовоподобных белков. Информация последовательности геномных клонов, содержащих последовательности, кодирующие высоко- и низкомолекулярные изоформы олеозинов, альбумин 2S, и гена бобовоподобного белка представлены на фиг. 1-4, соответственно. Фиг. 1 и SEQ ID NO:1 показывают ДНК-последовательность геномного клона льна, кодирующую белок олеозина 16,0 кД (низкомолекулярного или L-изоформы). Идентифицированы и указаны предполагаемые регуляторные элементы. Они включают в себя инвертированные повторы (пары оснований 805-813 и 821-829; пары оснований 1858-1866 и 1877-1885), прямые повторы (пары оснований 184-193 и 1102 и 1111); пары оснований 393-402 и 1701-1710); пары оснований 683-692 и 1546-1555; пары оснований 770-781 и 799-810; пары оснований 955-964 и 1936-1945; пары оснований 1483-1496 и 1513-1526; чувствительный к абсцизовой кислоте элемент (ABRE) (пары оснований 1859-1866), САСА-бокс (пары оснований 1933-1936), ТАТА-бокс (пары оснований 1925-1931) и САТ-бокс (пары оснований 1989-1993). Указан также сигнал полиаденилирования (пары оснований 3020-3025). Открытая рамка считывания прерывается 1 коротким интроном (который отмечен), и 2 экзона транслируются и указаны в однобуквенных аминокислотных кодах IUPAC. Фиг. 2 и SEQ ID NO: 4 показывают ДНК-последовательность геномного клона льна, кодирующую белок олеозина 18,6 кД (высокомолекулярного или Н-изоформы). Идентифицированы и указаны предполагаемые регуляторные элементы. Они включают в себя прямые повторы (пары оснований 14-25 и 14271438; пары оснований 80-89 и 1242-1251; пары оснований 177-186 и 837-846; пары оснований 1281-1290 и 1242-1251; пары оснований 1591-1600 и 1678-1687). Открытая рамка считывания не прерывается интронами и транслируется и показана в однобуквенных аминокислотных кодах IUPAC. Фиг. 3 и SEQ ID NO:6 показывают ДНК-последовательность геномного клона льна, кодирующую запасной белок 2S. Нуклеотидное секвенирование этого клона выявило, что он имеет открытую рамку считывания из 174 аминокислот, которая показывает гомологию с группой растительных запасных белков 2S. Эта последовательность кодирует открытую рамку считывания с 38% общим сходством с запасным белком 23 Brassica oleracea, в том числе обладает абсолютным консерватизмом богатого глутамином отрезка QQQGQQQGQQQ (SEQ ID NO:13). Кроме того, промотор гена запасного белка 23 содержал предположительные промоторные регуляторные элементы. Они включают в себя богатые AT повторы(пары оснований 25-36, 97-108 и 167-190), RY-подобный повтор (пары оснований 240-247), G-боксподобный элемент (пары оснований 274-280), семяспецифический бокс-подобный мотив (пары оснований 285-290) и ТАТА-бокс (пары оснований 327-333). Фиг. 4 и SEQ ID NO:8 показывают ДНК-последовательность геномного клона льна, кодирующую бобово-подобный запасной белок семян льна 54,4 кД. Этот ген бобово-подобного запасного белка семян будет называться также "линином". Расшифрованную аминокислотную последовательность гена линина сравнивали с бобовоподобным белком из R. communis, предшественником бобовых из М. salicifolia, Q.robur и G. hirsutum, предшественником глутелина из О. sativa и запасным белком семян 12 S из А. thaliana. Ген линина показывает идентичность/сходство последовательности с соответствующими белками из R. communis, М. salicifolia, Q. robur, G. hirsutum, O. sativa и A. thaliana 59/15, 47/16, 50/17,45/17, 43/18 и 43/18 процентов, соответственно. Идентифицированы и указаны предполагаемые регуляторные элементы промоторного участка. Они включают в себя инвертированные повторы (пары оснований 265-276 и 281-292; пары оснований 513-524 и 535-545), повторы (пары оснований 1349-1360 и 13671378; пары оснований 1513-1529 и 1554-1572), чувствительный к абсцизовой кислоте элемент (ABRE)(пары оснований 1223 и 1231), бокс бобовых (RY-повторы) (между парами оснований 1223 и 1231), возможный участок бокса вицилина (пары оснований 1887-1894), СААТ-бокс (пары оснований 1782-1785) и ТАТА-бокс (пары оснований 1966-1970). Показан также сигнальный пептид для нацеливания на мембрану ЭР (пары оснований 2034-2080). Открытая рамка считывания прерывается 3 короткими интронами(которые отмечены), и 4 экзона транслируются и указаны в однобуквенных аминокислотных кодах IUPAC. Фиг. 5 показывает Саузерн-блот-анализ геномной ДНК льна. 60 мкг геномной ДНК льна выделяли из листьев, расщепляли EcoRI (дорожка 1), HindIII (дорожка 2) и BamHI (дорожка 3) и наносили на соответствующие дорожки. А) Гибридизации выполняли со случайным образом праймированной 32 Рмеченой 3 Т-кДНК (высокомолекулярной изоформы олеозина льна). В) Гибридизации выполняли со случайным образом праймированной 32 Р-меченой 7R-кДНК (низкомолекулярной изоформы олеозина льна).- 11006549 Эти результаты показывают, что кДНК леозина 3 Т (высокомолекулярной изоформы олеозина), и 7R(низкомолекулярной изоформы олеозина) гибридизуются с геномной ДНК льна. Более конкретно, эти результаты показывают, что 3 Т, по-видимому, представляет 2-копийный ген в льне, как видно из двух полос в каждой дорожке расщепления. Подобным образом, 7R, по-видимому, представляет мультигенное семейство льна, так как были обнаружены многочисленные полосы для каждого расщепления. Пример 2. Семяспецифическая экспрессия генов олеозина льна. Фиг. 6 показывает Нозерн-блот-анализ семяспецифической экспрессии олеозинов льна. Осуществляли Нозерн-гибридизацию мРНК двух олеозинов в различных тканях. Десять мкг общей РНК экстрагировали из различных тканей, R, корень; С, семядоля; L, лист; S, семенная капсула; Е, зародыш. Мембрану зондировали (А) кДНК, кодирующей высокомолекулярную (Н) изоформу (идентичной кодирующей последовательности, представленной на фиг. 2), и (В) кДНК, кодирующей низкомолекулярную (L) изоформу (идентичной кодирующей последовательности, представленной на фиг. 1). Оба транскрипта экспрессируются только в зародыше и семенной капсуле, которая содержит зародыши. Пример 3. Экспрессия генов олеозина льна во время развития семян. Фиг. 7 показывает Нозерн-блот-анализ экспрессии олеозинов льна во время развития семян. 15 мкг на дорожку общей РНК наносили в каждую дорожку на агарозном/формальдегидном геле и блоттировали на мембрану HybondN+. 10J: Эту мембрану зондировали с использованием 32 Р-dСТР-меченой кДНК олеозина льна (низкомолекулярной изоформы). Указанные стадии представляют число дней после цветения (DPA). 3 Т) 15 мкг на дорожку общей РНК наносили в каждую дорожку на агарозном/формальдегидном геле и блоттировали на мембрану HybondN+. 3 Т: Эту мембрану зондировали с использованием 32 Р-dСТР-меченой кДНК олеозина льна (высокомолекулярной изоформы). Оба транскрипта экспрессировались на ранней стадии развития (6 DPA, ранняя стадия семядолей). Экспрессия является максимальной при 16-20 DPA (поздняя стадия семядолей) и снижается при 22 DPA (зрелые зародыши). Пример 4. Временная семяспецифическая экспрессия -глюкуронидазы (GUS) под регуляторным контролем регуляторных последовательностей олеозина льна. Две конструкции получали с использованием стандартных способов молекулярной биологии (например, см. Sambrook et al. (1990), Molecular Cloning, 2nd Ed. Cold Spring Harbor Press), в том числе расщеплений рестриктазами, лигирования и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Конструкция рSС 54: Репортерную кодирующую последовательность -глюкуронидазы из вектораGUSN358S (Clontech Laboratories) помещали между промоторной последовательностью от нуклеотида 21 до нуклеотида 1852 и терминаторной последовательностью от 2395 до 3501 (как описано на фиг. 1). Эту вставку клонировали в pBluescript и полученный вектор назван PSC54. Конструкция рSС 60: Репортерную кодирующую последовательность -глюкуронидазы из вектораGUSN358S (Clontech Laboratories) помещали между промоторной последовательностью от нуклеотида 1 до нуклеотида 2023 и терминаторной последовательностью от 2867 до 3925 (как описано на фиг. 2). Эту вставку клонировали в pBluescript и полученный вектор назван рSC60.pSC54, рSC60 и не содержащую промотора конструкцию GUS (контроль) вводили в зародыши льна с использованием бомбардировки частицами при помощи стандартных протоколов (например, см.Abenes et al. (1997) Plant Cell reports 17:1-7). Фиг. 8 показывает активность GUS зародышей льна, подвергнутых бомбардировке pSC54, pSC60 и не содержащей промотора конструкцией GUS, измеренную спустя 48 ч после бомбардировки частицами. Как можно видеть, регуляторные последовательности олеозина льна являются достаточными для направления экспрессии GUS в зародышах льна. Пример 5. Стабильная семяспецифическая экспрессиия -глюкуронидазы (GUS) в льне и Arabidopsis под регуляторным контролем промотора гена запасного белка 2S. Конструкцию репортерного гена GUS получали путем встраивания 5' и 3' участков фрагмента ДНК,описанного на фиг. 3, в не содержащий промотора вектор GUS pBI101 следующим образом. Ампликон 400 п.н. из 5'-конца ДНК-фрагмента, описанного на фиг. 3, амплифицировали с использованием ПЦР с применением следующих праймеров (местоположение показано на фиг. 3): 5' праймер (I): 5' -TCCACTATGTAGGTCATA-3' (SEQ ID NO:14) 3' праймер (I): S'-CTTTAAGGTGTGAGAGTC-3' (SEQ ID NO:15) Эти ПЦР-праймеры содержали также сайты рестрикции для HindIII и BamHI, которые использовали для клонирования 5'UTR-ампликона 400 п.н. в сайты HindIII/BamHI вектора pBI101 впереди репортерного гена GUS. Ампликон 736 п.н. из 3'-нетранслируемого участка (3'-UTR) ДНК-фрагмента, описанного на фиг. 3, амплифицировали с использованием ПЦР с применением следующих праймеров (местоположение показано на фиг. 3): 5' праймер (2): 5'-AGGGGTGATCGATTA-3' (SEQ ID NO:16) 3' праймер (2): 5'-GATAGAACCCACACGAGC-3' (SEQ ID NO:17) Эти ПЦР-праймеры содержали также сайты рестрикции для SacI и EcoRI. Участок терминации NOS вектора pBI101 вырезали расщеплением SacI/EcoRI и заменяли подобным образом расщепленным ампликоном 3'UTR 736 п.н. ДНК-фрагмента, описанного на фиг. 3.- 12006549 Затем репортерную конструкцию GUS электропорировали в штамм Agrobacterium tumefaciens AGLI и трансформацию льна (Finnegan et al. (1993) Plant Mol Biol. 22(4): 625-633) и Arabidopsis (Valvekens et al.Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 5536-5540) проводили в соответствии с описанными ранее протоколами. Различные ткани из растений льна и Arabidopsis, несущие репортерную конструкцию GUS, анализировали гистологически на обнаружение активности GUS. В случае льна, ткань листа, ткань корня и зародыши средней зрелости, вырезанные из развивающихся семян, окрашивали на активность GUS. ДляArabidopsis, развивающиеся семена окрашивали на GUS in situ в их стручках. Окрашивание GUS проводили погружением тканей в гистохимический буфер, содержащий 0,5 мМ Х-глюк, 0,5 М калий-фосфатный буфер (рН 7,0), 1 мМ ЭДТА, 0,5 М сорбитал, 0,5 мМ феррицианид калия и 0,5 мМ ферроцианид калия. Реакцию окрашивания проводили в течение 12-16 ч при 37 С и эту реакцию останавливали добавлением 95% этанола. Ткани затем осветляли освобождением от хлорофилла промывкой в 95% этаноле перед фотографированием. Фиг. 9 показывает явное доказательство сильной активности GUS в развивающихся зародышах льна и семенах Arabidopsis и отсутствие доказательства экспрессии репортерного гена GUS в корнях или листьях льна или в стенках стручков Arabidopsis. Пример 6. Стабильная семяспецифическая экспрессия -глюкуронидазы (GUS) во льне, Arabidopsis и Brassica napus под регуляторным контролем регуляторных последовательностей гена бобовоподобного запасного белка льна. Конструкцию получали с использованием стандартных способов молекулярной биологии, в том числе расщеплений рестриктазами, лигирования и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для получения ДНК-фрагмента, содержащего приблизительно 2 т.п.н. из 5'-участка инициации транскрипции бобовоподобного запасного белка семян льна, в конфигурации, подходящей для лигирования в кодирующуюGUS последовательность, использовали подход на основе ПЦР. Он включал в себя применение полимеразной цепной реакции для амплификации точной последовательности, желаемой для экспрессионного анализа. Для выполнения необходимой ПЦР-амплификации синтезировали два олигонуклеотидных праймера (Beckman Oligo 1000M ДНК-синтезатор), которые имеют следующие последовательности: 5'праймер: 5'TATCTAGACTCAAGCATACGGACAAGGGT 3' (SJ-634) (SEQ ID NO:18) Изображенные курсивом основания соответствуют нуклеотидным положениям 1-21 в последовательности, представленной на фиг. 4. Дополнительные 5'-нуклеотиды этой последовательности в праймере не являются идентичными промоторной последовательности, но были включены для помещения сайта XbaI в 5'-конце продукта амплификации. Сайт XbaI (5'-TCTAGA-3') (SEQ ID NO:19) подчеркнут. Синтезировали второй праймер (3'), который имел следующую последовательность: 3'-праймер: 5'GGTTATCATTGTATGAACTGA 3' (SJ-618) (SEQ ID NO:20). Этот праймер содержит точный комплемент (показанный курсивом) последовательности, показанной на фиг. 4 от основания 2343 до основания 2363. Этот праймер сконструирован без дополнительного сайта рестриктазы вследствие того, что природный сайт NcoI (5'-CCATGG-3') (SEQ ID NO:21) охватывает стартовый кодон между парами оснований 2034 и 2039, делая тем самым возможной вставку промотора запасного белка в подходящий клонирующий вектор. Эти два праймера использовали в реакции ПЦР-амплификации с получением ДНК-фрагмента, содержащего последовательность между нуклеотидом 1 и нуклеотидом 2342 гена запасного белка семян льна с сайтом XbaI на 5'-конце и сайтом NcoI на расстоянии 302 п.н. от 3'-конца. ПЦР-амплификацию выполняли с использованием фермента Pfu (Stratagene) с применением условий, рекомендуемых изготовителем фермента, и программы температур 94 С (денатурация) в течение 1 мин, 55 С (отжиг) в течение 1 мин и 72 С (удлинение) в течение 3,5 мин. Матрицей был геномный клон запасного белка семян бобовых, показанный на фиг. 4. Затем полученный продукт амплификации расщепляли XbaI и NcoI для удаления желаемого промоторного участка 2 т.п.н. Этот промоторный фрагмент клонировали в сайты XbaI и NcoI расщепленнойNcoI и EcoRI и вставку GUS клонировали в pBluescriptKS+ (Stratagene), которая была приспособлена для содержания сайта NcoI в сайте множественного клонирования). Полученная плазмида, содержащая гибрид промотор-GUS, была названа pPGUS1318. Терминатор запасного белка семян бобовых из льна также амплифицировали из вышеупомянутого геномного клона. Для выполнения необходимой ПЦРамплификации синтезировали олигонуклеотидные праймеры, имеющие следующие последовательности: 5'-праймер: 5' GCAAGCTTAATGTGACGGTGAAATAATAACGG 3' (SJ-620) (SEQ ID NO:22) Изображенные курсивом основания соответствуют нуклеотидным положениям 3780-3803 в последовательности, представленной на фиг. 4. Дополнительные 5'-нуклеотиды от этой последовательности в данном праймере не являются идентичными данной промоторной последовательности, но были включены для помещения сайта HindIII в 5'-конце продукта амплификации. Сайт HindIII (5'-ААGСТТ-3') (SEQID NO:23) подчеркнут. Синтезировали второй праймер (3'), который имел следующую последовательность: 3'-праймер: 5'TAGGTACCTGGCAGGTAAAGACTCTGCTC 3' (SJ-618) (SEQ ID NO:24). Этот праймер содержит точный комплемент (показанный курсивом) последовательности, показанной на фиг. 4 от основания 4311 до основания 4290. Дополнительные 5'-нуклеотиды от этой последова- 13006549 тельности в праймере не являются идентичными промоторной последовательности, но были включены для помещения сайта КрnI на 5'-конце продукта амплификации. Сайт КрnI (5'-GGTACC-3') (SEQ IDNO:25) подчеркнут. Эти два праймера использовали в реакции ПЦР-амплификации с получением ДНК-фрагмента, содержащего последовательность между нуклеотидом 3779 и нуклеотидом 4311 терминатора гена запасного белка семян льна с сайтом HindIII на 5'-конце и сайтом KpnI на 3'-конце. ПЦР-амплификацию выполняли, как описано выше. Вышеуказанный вектор pPGUS1318, который содержит амплифицированный промотор, расщепляли XhoI и обрабатывали фрагментом Кленова для создания тупого конца. Затем этот вектор расщепляли KpnI и амплифицированную, как описано выше, терминаторную последовательность встраивали таким образом, что она была расположена 3' (справа) от кодирующей GUS последовательности. Полученный вектор, содержащий промотор запасного белка семян льна, GUS и терминатор запасного белка семян льна, назван pPGUST. Вставку XbaI-KpnI pPGUST, которая содержит конструкцию промотор линина-кодирующая GUS последовательность-терминаторная последовательность линина, лигировали в сайты XbaI-KpnIpSBS3000 (Этот вектор является производным бинарной плазмиды pPZP221 Agrobacterium (Hajdukiewiczet al., 1994, Plant Molec. Biol. 25: 989-994). В рSBS3000 растительный ген устойчивости к гентамицинуpPZP221 был заменен конструкцией промотор убикитина петрушки - ген фосфинотрицинацетилтрансферазы-последовательность терминации убикитина петрушки для придания устойчивости к гербициду глюфозинату аммония). Полученный вектор назван pSBS2089. Кроме того, вставка XbaI-KpnI pPGUST,которая содержит конструкцию промотор линина-кодирующая GUS последовательность-терминаторная последовательность линина, лигировали в сайты XbaI-KpnI бинарной плазмиды pCGN1559 Agrobacterium (MacBride and Summerfield, 1990, Plant Molec. Biol. 14: 269-276, которая придает устойчивость к антибиотику канамицину. Полученный вектор был назван pSBS2083. Плазмиды pSBS2089 и pSBS2083 электропорировали в штамм Agrobacterium EHA101. Штамм Agrobacterium EHA101 (pSBS2089) использовали для трансформации льна и Arabidopsis, штамм Agrobacterium EHA101 (pSBS2083) использовали для трансформации Brassica napus. Трансформацию льна выполняли, по существу, как описано в Jordanand McHughen (1988) Plant cell reports 7: 281-284, за исключением того, что трансгенные побеги отбирали на 10 мкМ L-фосфоинотрицине, вместо канамицина. Трансформацию Arabidopsis выполняли по существу, как описано в "Arabidopsis Protocols; Methods in Molecular Biology" Vol. 82. Edited by Martinez-ZapaterIM and Salinas J. ISBN 0-89603-391-0 pg 259-266 (1988), за исключением того, что предположительные трансгенные растения отбирали на агарозных чашках, содержащих 80 мкМ L-фосфинотрицин. Трансформацию Brassica napus выполняли по существу, как описано в Moloney et al. (1989), Plant Cell Reports,8: 238-242. Фиг. 10 показывает тканеспецифическую экспрессию GUS в трансгенных растениях льна, трансформированных генной конструкцией линин-GUS (pSBS2089). Экспрессию GUS измеряли в корнях (R),стеблях (S), листьях (L), почках (В) и зародыше (Е). Некоторая экспрессия наблюдалась в почках и максимальная экспрессия достигалась в тканях зародыша. Не было детектируемой экспрессии ни в одной из нетрансформированных тканей (дикого типа, WT). Фиг. 11 показывает временную экспрессию GUS в трансгенных растениях льна, трансформированных конструкцией линин-GUS (pSBS2089). Как можно видеть, максимальная экспрессия достигалась в зрелых (предварительно высушенных) зародышах льна. Фиг. 12 показывает абсолютную экспрессию GUS в трансгенных растениях Brassica napus (L1-L9),трансформированных генной конструкцией линин-GUS (pSBS2083). Как можно видеть, в растенияхBrassica napus может быть достигнут высокий уровень экспрессии. При сравнении индивидуальных трансгенных растений можно также видеть типичную вариацию в экспрессии, обусловленную эффектом позиционирования. Фиг. 13 показывает экспрессию GUS в трансгенных стручках Arabidopsis (трансформированных генной конструкцией линин-GUS (pSBS2089 во время развития семян. Как можно видеть, в тканях семян Arabidopsis может быть достигнут высокий уровень экспрессии. Максимальная экспрессия достигается на стадии 4 (зрелые, но не полностью высохшие) развития семян. Не наблюдали детектируемой экспрессии в тканях, не относящихся к семенам, таких как листья, стебли, корни и стенки стручков (результаты не показаны). Хотя данное изобретение было описано со ссылкой на предпочтительные примеры, должно быть понятно, что данное изобретение не ограничивается описанными примерами. Напротив, предполагается,что данное изобретение включает в себя различные модификации и эквиваленты, находящиеся в рамках идеи и объема прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки включены здесь в качестве ссылки в полном объеме в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка были особо и индивидуально указаны как включенные в качестве ссылки в полном объеме. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ обеспечения экспрессии представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты в семенах льна, включающий:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов:(2) указанную представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора льна;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семени под контролем указанного семяспецифического промотора. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере один параметр экспрессии, придаваемый указанным семяспецифическим промотором его природной последовательности нуклеиновой кислоты,придается указанной неприродной последовательности нуклеиновой кислоты. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанным параметром экспрессии является тайминг экспрессии, уровень экспрессии, реакция на изменение условий освещенности, реакция на изменение температуры, реакция на изменение концентрации химического агента. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный семяспецифический промотор выбран из группы промоторов, включающей промоторы олеозина, промоторы запасного белка 2S и промоторы бобовоподобного запасного белка семян. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный семяспецифический промотор льна содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2023, как показано на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный семяспецифический промотор льна содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-1852, как показано на фиг. 2 (SEQ ID NO:4), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный семяспецифический промотор льна содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-417, как показано на фиг. 3 (SEQ ID NO: 6), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный семяспецифический промотор льна содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2037, как показано на фиг. 3 (SEQ ID NO:6), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(с) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 9. Способ по п.1, отличающийся тем, что экспрессия указанной представляющей интерес нуклеиновой кислоты приводит к изменению в составе белков или жирных кислот в указанном семени. 10. Трансгенное семя льна, полученное в соответствии со способом, включающим:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов:(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семени под контролем указанного семяспецифического промотора. 11. Трансгенное семя льна по п.10, отличающееся тем, что по меньшей мере один параметр экспрессии, придаваемый указанным семяспецифическим промотором его природной последовательности нуклеиновой кислоты, придается указанной неприродной последовательности нуклеиновой кислоты. 12. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанным параметром экспрессии является тайминг экспрессии или уровень экспрессии. 13. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанный семяспецифический промотор является промотором запасного белка семян, промотором олеозина, промотором запасного белка 2S или промотором бобовоподобного запасного белка семян. 14. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанный семяспецифический промотор содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2023, как показано на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 15. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанный семяспецифический промотор содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-1852, как показано на фиг. 2 (SEQ ID NO:4), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 16. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанный семяспецифический промотор содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-417, как показано на фиг. 3 (SEQ ID NO:6), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 17. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что указанный семяспецифический промотор содержит:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2037, как показано на фиг. 4 (SEQ ID NO:8), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 18. Трансгенное семя льна по п.11, отличающееся тем, что экспрессия указанного представляющего интерес неприродного гена приводит к изменению в составе белков и жирных кислот семени. 19. Трансгенное растение льна, способное к завязыванию семян, полученное способом, включающим:(a) получение химерной конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей в 5'3'-направлении транскрипции в виде функционально связанных компонентов:(2) представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты, причем указанная представляющая интерес нуклеиновая кислота является неприродной относительно указанного семяспецифического промотора;(b) введение указанной химерной конструкции нуклеиновой кислоты в клетку растения льна и(c) выращивание указанной клетки растения льна в зрелое растение льна, способное завязывать семена, причем указанная представляющая интерес последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семени под контролем указанного семяспецифического промотора. 20. Выделенный семяспецифический промотор, способный регулировать экспрессию в растении,содержащий:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2023, как показано на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(с) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 21. Выделенный семяспецифический промотор, способный регулировать экспрессию в растении,содержащий:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-1852, как показано на фиг. 2 (SEQ ID NO:4), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 22. Выделенный семяспецифический промотор, способный регулировать экспрессию в растении,содержащий:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-417, как показано на фиг. 3 (SEQ ID NO:6), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 23. Выделенный семяспецифический промотор, способный регулировать экспрессию в растении,содержащий:(a) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2037, как показано на фиг. 4 (SEQ ID NO:8), где Т может быть также U;(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (а); или(c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (а) или (b) при жестких условиях гибридизации. 24. Выделенная химерная последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая:(a) первую последовательность нуклеиновой кислоты, включающую семяспецифический промотор,полученный из льна, который содержит:(1) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2023, как показано на фиг. 1 (SEQ ID NO:1), где Т может быть также U;(2) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (1) при жестких условиях гибридизации;(3) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (1); и(b) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, неприродную относительно указанного семяспецифического промотора льна. 25. Выделенная химерная последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая:(a) первую последовательность нуклеиновой кислоты, включающую семяспецифический промотор,полученный из льна, который содержит:(1) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-1852, как показано на фиг. 2 (SEQ ID NO:4), где Т может быть также U;(2) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (1) при жестких условиях гибридизации;(3) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (1); и(b) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, неприродную относительно указанного семяспецифического промотора льна. 26. Выделенная химерная последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая:(а) первую последовательность нуклеиновой кислоты, включающую семяспецифический промотор,полученный из льна, который содержит:(1) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-417, как показано на фиг. 3 (SEQ ID NO: 6), где Т может быть также U;(2) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (1) при жестких условиях гибридизации;(3) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (1); и(b) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, неприродную относительно указанного семяспецифического промотора льна. 27. Выделенная химерная последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая:(a) первую последовательность нуклеиновой кислоты, включающую семяспецифический промотор,полученный из льна, который содержит:(1) последовательность нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотиды 1-2037, как показано на фиг. 4 (SEQ ID NO:8), где Т может быть также U;(2) последовательность нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты (1) при жестких условиях гибридизации;(3) последовательность нуклеиновой кислоты, которая комплементарна последовательности нуклеиновой кислоты (1); и(b) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, неприродную относительно указанного семяспецифического промотора льна. 28. Способ обеспечения экспрессии представляющей интерес последовательности нуклеиновой кислоты в семени льна, включающий:(a) введение химерной последовательности нуклеиновой кислоты по любому из пп.24-27 в клетку растения и(b) выращивание указанной клетки растения в зрелое растение, способное к завязыванию семян,причем вторая последовательность нуклеиновой кислоты экспрессируется в семенах под контролем семяспецифического промотора. 29. Способ по п.28, отличающийся тем, что указанная клетка растения выбрана из группы растений,состоящей из сои (Glycine max), рапса (Brassica napus, Brassica campestris), подсолнечника (Helianthus(Medicago sativa), пшеницы (Triticum sp.), ячменя (Hordeum vulgare), овса (Avena sativa L.), сорго (Sorghum bicolor), Arabidopsis thaliana, картофеля (Solanum sp.), льна/льна обыкновенного (Linum usitatissmium), сафлора (Carthamus tinctorius), гвинейской масличной пальмы (Eleais guineeis), земляного ореха(Arachis hypogaea), американского ореха (Berthollettia excelsa), кокосового ореха (Cocus nucifera), клещевины (Ricinus communis), кориандра (Coriandrum sativum), тыквы крупноплодной столовой (Cucurbitamaxima), жожоба (Simmondsia chinensis) и риса (Oryza sativa). 30. Растение, полученное способом по п.28. 31. Растительная клетка, содержащая химерную последовательность нуклеиновой кислоты по п.24. 32. Семя растения, содержащее химерную последовательность нуклеиновой кислоты по п.24.- 28006549 33. Семя растения, полученное из растения, полученного способом по п.25. 34. Рекомбинантный экспрессирующий вектор, содержащий промотор по п.23. 35. Рекомбинантный экспрессирующий вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты по п.24.