Засухоустойчивые растения

Настоящее изобретение касается области трансгенных и нетрансгенных растений с новыми фенотипами. Здесь представлены белки SlPP2C1 и кодирующие их нуклеиновые кислоты, которые являются полезными в предоставлении новых фенотипов растений, особенно засухоустойчивости. Область изобретения Изобретение касается области биотехнологии и селекции растений. Предоставлены засухоустойчивые растения, в частности засухоустойчивые овощи, такие виды, как томат (Solarium Lycopersicum), а также способы получения генетически модифицированных или мутантных засухоустойчивых растений. Изобретение предоставляет новый ген, называемый SlPP2C1, кодирующий белок SlPP2C, который является отрицательным регулятором реакции абсцизовой кислоты (ABA). Понижающая регуляция, модификация или сайленсинг гена SlPP2C1 приводят к получению растений, имеющих значительно повышенную засухоустойчивость. Предоставлены также растения, семена, плоды и части растений, содержащие в своем геноме мутантный аллель SlPP2C1 и имеющие значительно повышенную засухоустойчивость. В настоящем документе в другом варианте осуществления изобретения предоставлены способы получения засухоустойчивых растений, содержащих в своем геноме один или несколько мутантных аллелейSlPP2C1. Предпосылки к созданию изобретения Абсцизовая кислота (ABA) фитогормонов имеет важное значение для регулирования абиотических стрессовых реакций (таких как засуха, засоление, холодовой шок, скарификация, патогенная атака), а также для развития семян и периода покоя. Экраны для мутантов с измененными абиотическими стрессовыми реакциями или покоем семян были часто использованы и привели к выявлению генов, важных для биосинтеза ABA и сигнальной трансдукции ABA. С помощью такого экрана были выявлены Arabidopsis АВА-нечувствительные мутанты abi1-1 и abi2-1 (Koornneef и др. 1984, Physiol Plantarum 61: 377383). Клонирование и характеристика гена AtABI1 показали, что он кодирует серин/треониновую протеинфосфатазу типа 2 С (РР 2 С, Leung и др. 1994, Science 264: 1448-1452; Meyer и др. 1994, Наука 264: 14521455). AtABI2 также кодирует протеинфосфатазу типа 2 С. Мутанты abi1-1 и abi2-1 несут мутации в геныAtABI1 и AtABI2, которые приводят к идентичным Gly-Asp заменам в эквивалентных позициях (Leung и др. 1997, Plant Cell 9: 759-771). Оба мутанта были показаны со сниженной активностью фосфатазы (Bertauche и др. 1996, Eur. J. Biochem 241: 193-200; Leung и др. 1997, выше), которые предполагают, чтоAtABI1 и AtABI2 являются положительными регуляторами чувствительности к ABA. Тем не менее, конститутивная сверхэкспрессия AtABI1 замедляла активность ABA в протопласте кукурузы, и мутантыAtABI1 и AtABI2 снижения функции были показаны как имеющие сверхчувствительную реакцию к ABA(Scheen 1998, PNAS 95:975-980; Gosti и др. 1999, Plant Cell 11: 1897-1909; Merlot и др. 2001, Plant J. 25:295-303). В целом, был сделан вывод, что AtABI1 и AtABI2 являются отрицательными регуляторами реакции ABA. Точный механизм, с помощью которого мутации в abi1-1 и abi2-1 вызывают нечувствительность к ABA, до сих пор неизвестен, хотя это может быть связано с преимущественной ядерной локализацией мутантных белков (Moes и др. 2008, Plant J. 54: 806-819). AtABI1 и AtABI2 важны для покоя семян, но также и для роста рассады и регулирования устьичной щели, что указывает на то, что эти белки действуют до основных точек ветвления, которые контролируют ткане-специфические ABA сигнальные каскады (Leung и др. 1997, выше). Семьдесят шесть PP2Cs были выявлены в Arabidopsis, из которых одна подгруппа РР 2 С-А), состоящая из девяти генов, была связана с сигнальной трансдукцией ABA (Schweighofer и др. 2004, Trendsin Plant Science Vol. 9: 236-243). Некоторые из генов Arabidopsis, принадлежащих к этой группе, также были найдены для кодирования отрицательных регуляторов реакции ABA. Например, AtP2C-HA (Rodriguez и др. 1998, Plant Mol. Biol. 38: 879-883) (также называемый AtHAB1, Saez и др. 2004, Plant J. 37: 354369) является репрессором сигнального пути ABA, регулирующим многочисленные реакции ABA, такие как закрытость устьиц, прорастание семян и торможение вегетативного роста. Также НАВ 2, похоже,имеет аналогичную регуляторную роль. AtPP2CA (Kuhn и др. 2006, Plant Physiol. 140:127-139) также был описан как отрицательный регулятор ABA с мутантом, показывающим сверхчувствительность к ABA. Интересно, что мутант разрушения гена показал сверхчувствительную к ABA реакцию закрытости устьиц, в то время как транспирация (потеря воды) мутанта ничем не отличалась от растений дикого типа. Также Yoshida и др. (2006, Plant Physiology 140:115-126) изучали бессмысленную потерю функции мутации в AtPP2CA, которая имела 1/100 активности протеинфосфатазы дикого типа, и в результате чего мутантные растения Arabidopsis показали ABA серхчувствительность во время прорастания семян, но мутантные растения не показывали никаких изменений к засухоустойчивости по сравнению с диким типомABI1 и ABI2 являются репрессорами сигнальных путей ABA, которые регулируют многие реакцииABA, такие как закрытость устьиц, осмотическую водопроницаемость плазматических мембран, засухоустойчивость и ризогенез, реакцию на глюкозу, стресс избыточного освещения, прорастание семян и торможение вегетативного роста. AHG1 (At5g51760) является отрицательным регулятором ABA во время прорастания семян (Nishimura и др 2007, Plant J. 50: 935-949), и AHG3 (At3g11410) является отрицательным регулятором ABA во время прорастания семян и холодной акклиматизации. Три другие,At5g9220, At2g29380 и At1g07430, могут, в конце концов, не участвовать в передаче сигналов ABA, так как утратившие мутации не выявили никаких изменений в чувствительности к ABA (Yoshida и др., 2006:-1 025000 Биосинтез и передача сигналов ABA, таким образом, чрезвычайно сложные, и хотя различные гены были выявлены в Arabidopsis, которые принимали участие (группа РР 2 С-А), их роль в ABA зависимых реакциях, таких как абиотический стресс, покой семян и рост рассады в значительной степени неясна. Кроме того, белковые последовательности показывают небольшую закрепленность, и аминокислотные последовательности делятся небольшой идентичностью последовательности. Гены сгруппированы вместе филогенетически, на основании белковых доменов (или мотивов), таких как каталитический домен(протеин серин/треониновая фосфата подобный домен), который, как правило, расположен в Стерминалах белков. N-терминал значительно варьируется и может играть важную роль в соединении субстратов или предоставлять конкретные сайты присоединения к сигнальным комплексам. В дополнение к неясной функции in vivo также мало известно о внутриклеточной локализации, субстратах и специфичности ферментов или о том, как эти мономерные ферменты регулируются in vivo.WO 2007/088234 описывает, что комбинированная инактивация ABI1 и НАВ 1 укрепляет реакцию кSaez и др. 2006, Plant Physiol 141:1389-1399. Хотя двойные мутанты abi1 hab1 приводят к засухоустойчивости в Arabidopsis thaliana, остается необходимость в предоставлении генов, которые подходят для создания засухоустойчивости в сельскохозяйственных культурах, особенно в полевых культурах (например, рис, кукуруза, соя, пшеница, ячмень,рожь, сорго, капуста декоративная и т.д.) и овощных культурах (например, помидоры, огурцы, лук, морковь, капуста, цветная капуста, брокколи, арбуз, дыня, салат, лук-порей, шпинат, редис, картофель, артишоки, маш-салат, тыква, кабачки, фасоль, горох, перец и т.д.). Особенно в овощных культурах нехватка воды может быть большой проблемой, так как корни многих культур мелкие, и так как продукты часто продаются в свежем виде, нехватка воды может привести к снижению качества овощей и снижению урожайности. Плоды и семена овощей, такие как томаты, чувствительны к нехватке воды во время цветения и во время созревания плодов и развития семян. Завязь может быть серьезно уменьшена из-за нехватки воды во время развития плода. Обычная практика для решения потенциальных ситуаций водного стресса - это полив сельскохозяйственных культур и/или культиваров или сортов растений с засухоустойчивостью, насколько это доступно. Кроме того, могут быть использованы перегной и сырые покровы. Несмотря на усилия разведения, растения томатов остаются чувствительными к засухе, и не существует коммерческого культивара с засухоустойчивостью. Настоящее изобретение предоставляет новые гены, называемые SlPP2C1, пригодные для создания засухоустойчивых сельскохозяйственных культур, особенно томатов и других овощных растений. Настоящее изобретение также предоставляет способы получения засухоустойчивых растений. Также предоставлены и сами засухоустойчивые растения, семена и части растений (собранные плоды и т.д.). Общие определения Термин "последовательность нуклеиновой кислоты" (или молекула нуклеиновой кислоты) относится к ДНК или РНК молекуле в одной или двухцепочной форме, в частности ДНК, кодирующей белок или фрагмент белка согласно данному изобретению. "Изолированная нуклеиновая кислота" относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая больше не находится в природной среде, из которой она была выделена, например последовательности нуклеиновых кислот в бактериальной клеткереципиенте или в растительном ядерном или пластидном геноме. Термин "белок" или "полипептид" взаимозаменяемы и относятся к молекулам, состоящим из цепочки аминокислот, независимо от конкретного способа действия, размера, 3-мерной структуры и происхождения. "Фрагмент" или "часть" белка SlPP2C1, таким образом, может еще называться "белок"."Изолированный белок" используется для обозначения белка, который уже не находится в своей природной среде, например в искусственных условиях или в рекомбинантной бактериальной или растительной клетке-реципиенте. Термин "ген" означает последовательность ДНК, содержащую участок (участок транскрипции), который записан в молекуле РНК (например, мРНК) в клетке, функционально связанной с подходящими регулируемыми участками (например, промоторами). Ген может, таким образом, состоять из нескольких функционально связанных последовательностей, таких как промотор, 5' лидерная последовательность,включающая, например, последовательности, участвующие в инициации трансляции, а (белок) кодирующий участок (кДНК или геномной ДНК), а также 3' нетранслируемую последовательность, включающую, например, сайты терминации транскрипции."Химерный ген" (или рекомбинантный ген) относится к любому гену, который обычно не встречается в природе в видах, в частности генах, в которых одна или несколько частей последовательности нуклеиновых кислот присутствуют, которые не связаны друг с другом в природе. Например, промотор не связан в природе с частью или целым транскрибируемым участком или с другим регуляторным участком. Термин "химерный ген" подразумевает включение экспрессии конструкции, в которых промотор или транскрипция регуляторной последовательности функционально связана с одной или несколькими кодирующими последовательностями или антисмысловой (обратным дополнением к смысловой нити) или последовательностью обращенных повторов (смысл и антисмысл, посредством чего РНК транскрипт-2 025000 формирует двухцепочную РНК на транскрипции). "Цис-ген" - это химерный ген, который является предпочтительным из всех последовательностей генов, и, по меньшей мере, транскрибируемых последовательностей, полученный из видов растений, совместимых для размножения с видами, в которые вводится ген."Экспрессия гена" означает процесс, в котором ДНК участок, который функционально связан с соответствующими регулирующими участками, в частности, промотором, транскрибируется в РНК, которая является биологически активной, то есть которая способна быть переведенной в биологически активный белок или пептид (или активный фрагмент пептида), либо быть активной (например, в посттранскрипционном сайленсинге генов или РНК-интерференции). Кодирующая последовательность может быть в смысловой ориентации и кодирует желаемый биологически активный белок или пептид или активный фрагмент пептида. В подходах сайленсинга генов, ДНК последовательность предпочтительно присутствует в виде ДНК антисмысловых или инвертированных ДНК повторах, состоящих из короткой последовательности гена-мишени в антисмысловой или в смысловой и антисмысловой ориентации (инвертированный повтор). "Эктопическая экспрессия" относится к экспрессии в тканях, в которых ген, как правило, не выражен."Активный белок" или "функциональный белок" - это белок, который имеет активность белка, измеримую в искусственных условиях, например при анализе активности в искусственных и/или в естественных условиях, например, по фенотипу, предоставляемому белком. Белок "дикого типа" представляет собой полностью функциональный белок, представленный в диком виде растений. "Мутантный белок" это белок, включающий одну или несколько мутаций в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих белки, причем мутация приводит к (мутантных молекул нуклеиновой кислоты кодирования)"ограничению функций" или "потере функции" белка, как, например, измеримых активностью белка в искусственных условиях по сравнению с активностью белка дикого типа, например в анализе активности и/или в естественных условиях, например, по фенотипу, предоставляемому мутантным аллелем."Мутация" в молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, представляет собой изменение одного или нескольких нуклеотидов по сравнению с диким типом последовательности, например, путем замены, удаления или вставки из одного или нескольких нуклеотидов. "Точечная мутация" заключается в замене одного нуклеотида, или вставке, или удалении одного нуклеотида."Несмысловая" мутация - это (точечная) мутация в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих белок, в результате чего кодон превращается в терминирующий кодон. Это приводит к преждевременному терминирующему кодону, присутствующему в мРНК и в усеченном белке. Усеченный белок, возможно, имеет сниженную функцию или потерю функции."Миссенс" мутация - это (точечная) мутация в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих белок, в результате чего кодон меняют для кодирования различных аминокислот. Полученный белок, возможно, имеет сниженную функцию или потерю функции."Сплайс-сайт" мутация - это мутация в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих белок, в результате чего РНК сплайсинг пре-мРНК изменяется, что приводит к мРНК, имеющей различные нуклеотидные последовательности, и белку, имеющему различные последовательности аминокислот по сравнению с диким типом. Полученный белок, возможно, имеет сниженную функцию или потерю функции. Мутация "сдвига рамки" - это мутация последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих белки, в которых рамки считывания мРНК изменены, ведущие к различным последовательностям аминокислот. Полученный белок, возможно, имеет сниженную функцию или потерю функции. Мутация в регуляторной последовательности, например, в промоторе гена, - это изменение одного или нескольких нуклеотидов по сравнению с диким типом последовательности, например, путем замены,удаления или вставки из одного или нескольких нуклеотидов, что приводит, например, к снижению или к отсутствию мРНК транскрипта полученного гена."Сайленсинг" относится к понижающей регуляции или полному ингибированию экспрессии гена гена-мишени или семейства генов."Ген-мишень" в подходах сайленсинга генов - это ген или семейство генов (или один или несколько конкретных аллелей гена), из которых эндогенная экспрессия гена подавляется или полностью замедляется (подавляется), когда химерный ген сайленсинга (или "химерный ген РНК-интерференции") выражается, например, и производит сайленсинг РНК транскрипта (например, dsPHK или hairpinRNA способны к сайленсингу эндогенной экспрессии гена-мишени). В подходах мутагенеза, ген-мишень является эндогенным геном, который должен мутировать, что приводит к изменению (снижению или потере) экспрессии генов или изменению (снижения или потери) функции кодируемого белка."Смысловой" РНК транскрипт, как правило, получен путм соединения промотора в двухцепочную молекулу ДНК, в которой смысловая нить (кодирующая цепь) молекулы ДНК в 5' к 3' ориентации, так что при транскрипции РНК смысл транскрибируется, который имеет одинаковую последовательность нуклеотидов в смысловой ДНК нити (за исключением того, что Т заменяется U в РНК). "Антисмысловой" РНК транскрипт, как правило, получен путем соединения промотора в комплементарную нить (антисмысловые нити) смысловой ДНК, таким образом, при транскрипции антисмысловая РНК транскри-3 025000 бируется."Транскрипция регуляторной последовательности" здесь определяется как последовательность нуклеиновой кислоты, которая способна регулировать скорость транскрипции (кодирования) последовательности, функционально связанной с транскрипцией регуляторной последовательности. Транскрипция регуляторной последовательности, как определено здесь, таким образом, включает в себя все последовательности элементов, необходимых для инициации транскрипции (элементов промотора), для поддержания и регулирования транскрипции, включая, например, ослабители и усилители. Хотя, главным образом, растущая (5') транскрипция регуляторных последовательностей в кодирующей последовательности относится к регуляторной последовательности, обнаруженной в снижении (3') кодирующей последовательности, также подпадает под это определение. Используемый здесь термин "промотор" относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, которая контролирует транскрипцию одного или нескольких генов, расположенных выше по отношению направления транскрипции инициации транскрипции участка гена, и структурно определен наличием участков,связывающих ДНК-зависимую РНК-полимеразу, участки инициации транскрипции и любые другие последовательности ДНК, в том числе, но не ограничиваясь транскрипционными факторами участков связывания, репрессора и активатора связывания участков белка и любой другой последовательности, известному одной из способностей в науке, чтобы прямо или косвенно регулировать количество транскрипции промотора. "Конститутивный" промотор - это промотор, активный в большинстве тканей в самых физиологических и развивающихся условиях. "Индуцируемый" промотор - это промотор, который физиологически (например, наружное применение некоторых соединений) или эволюционно регулируется. "Тканеспецифичный" промотор действует только в определенных типах тканей или клеток. В соответствии с документом термин "функционально связанный" относится к соединению полинуклеотидных элементов в функциональной взаимосвязи. Нуклеиновая кислота "функционально связана", когда она находится в функциональной взаимосвязи с другой последовательностью нуклеиновых кислот. Например, промотор, или, скорее, транскрипция регуляторной последовательности, функционально связан с кодирующей последовательностью, если это влияет на транскрипцию кодирующей последовательности. "Функционально связан" означает, что последовательности ДНК, будучи связанными,как правило, являются смежными и, при необходимости, объединяют два участка кодирования белка,смежных и в рамке считывания, чтобы произвести "химерный белок". "Химерный белок" или "гибридный белок" представляет собой белок, состоящий из различных белков "доменов" (или мотивов), который не был найден в качестве такового в природе, но который был объединен для формирования функционального белка, который показывает функциональность присоединнных доменов. Химерный белок также может быть гибридным белком двух или более белков, встречающихся в природе. Термин "домен", используемый в настоящем документе, означает любую часть(части) или домен(ы) белка с определенной структурой или функцией, которые могут быть переданы другому белку для обеспечения нового гибридного белка, по меньшей мере, с функциональной характеристикой домена. Конкретные домены могут также быть использованы для идентификации представителей белков, принадлежащих к SlPP2C1 группе белков, таких как SlPP2C1 ортологов из других видов растений. Примеры доменов, найденных в белках SlPP2C1, - это серин/треониновая фосфатаза 2 С (РР 2 С или РР 2 С типа) каталитический домен, который включает в себя примерно 84-391 аминокислот из SEQ ID NO: 2 или Nтерминальный участок SlPP2C белков (аминокислоты 1-83 из SEQ ID NO: 2). Термин "пептид-мишень" относится к аминокислотной последовательности, которая нацелена на белки внутриклеточных органелл, таких как пластиды, предпочтительно хлоропласты, митохондрии, или в межклеточное пространство (секрецию сигнального пептида). Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая пептид-мишень, может быть объединена (в рамке) в последовательность нуклеиновых кислот, кодирующую терминальный конец аминокислоты (N-терминальный конец) белка."Конструкт нуклеиновой кислоты" или "вектор" в данном документе подразумеваются как искусственные молекулы нуклеиновой кислоты, которые получены в результате использования технологии рекомбинантной ДНК и которые используются для доставки экзогенной ДНК в клетку-реципиента. Основной вектор может быть, например, двоичным или супербинарным вектором (см., например, US 5591616,US 2002138879 и WO 9506722), совместной интеграции вектора или Т-ДНК вектора, как известно в науке и в данном документе, в который интегрирован химерный ген, или, если подходящая транскрипция регуляторной последовательности уже существует, только желаемая последовательность нуклеиновых кислот (например, кодирующая последовательность, антисмысловая или последовательность инвертированного повтора) интегрирована на выходе транскрипции регуляторной последовательности. Векторы обычно включают дальнейшие генетические элементы, чтобы облегчить их использование в молекулярном клонировании, такие как, например, селектируемые маркеры, несколько сайтов клонирования и т.п."Клетка-реципиент", или "рекомбинантная клетка-реципиент", или "трансформированная клетка" это термины, относящиеся к новой отдельной клетке (или организму), возникающей в результате по меньшей мере из одной молекулы нуклеиновой кислоты, особенно содержащей химерный ген, кодирующий желаемый белок или последовательность нуклеиновых кислот, которые при транскрипции уступают антисмысловой РНК или РНК инвертированного повтора (или шпильки РНК) для сайленсинга-4 025000 пают антисмысловой РНК или РНК инвертированного повтора (или шпильки РНК) для сайленсинга целевого гена/семейства генов были введены в указанные клетки. Клетка-реципиент - это предпочтительно растительная клетка или бактериальная клетка. Клетка-реципиент может содержать конструкт нуклеиновой кислоты в качестве экстрахромосомной (эписомной) репликации молекул или более предпочтительно включает в себя интегрированный химерный ген в ядерном или пластидном геноме клеткиреципиента. Термин "селектируемый маркер" - это термин, подобный одному из обычных нововведений в науке и используется здесь для описания любого генетического объекта, который, будучи выраженным, может быть использован, чтобы выбрать клетку или клетки, содержащие селектируемый маркер. Селектируемый маркер генных продуктов придает, например, устойчивость к антибиотикам или, еще лучше, устойчивость к гербицидам или иным селектируемым свойствам, таким как фенотипическое свойство (например, изменение пигментации) или потребности в питании. Термин "репортер" в основном используется для обозначения видимых маркеров, таких как зеленый флуоресцентный белок (GFP), eGFP, люцифераза, GUS и т.д. Термин "ортолог" гена или белка относится здесь к гомологичному гену или белку, найденному в другом виде, который имеет ту же функцию, что и ген или белок, но (обычно) разделившиеся в последовательности с момента времени, когда виды, скрывающие ген, разделяются (т.е. гены эволюционировали от общего предка при помощи видообразования). Ортологи гена томатов SlPP2C1, таким образом, можно определить и в других видах растений, основанных на последовательности сравнений (например, на основе процентной идентичности последовательности по всей последовательности и/или во всех определенных доменах) и/или функциональном анализе. Термины "гомологичный" и "гетерологичный" относятся к взаимодействию между нуклеиновой кислотой или последовательностью аминокислоты и ее клетки-хозяина или организма, особенно в контексте трансгенных организмов. Гомологичная последовательность, таким образом, найдена в естественных условиях в видах реципиентов (например, в растении томата, преобразованного геном томата), а гетерологичная последовательность найдена в естественных условиях в клетке-реципиенте (например, растение томата преобразовано последовательностью из растения картофеля). В зависимости от контекста термин "гомолог" или "гомологичный" альтернативно может относиться к последовательностям, которые являются потомками от общей последовательности предков (например, они могут быть ортологами)."Жсткие условия гибридизации" могут быть использованы для идентификации нуклеотидных последовательностей, которые существенно идентичны данной нуклеотидной последовательности. Жсткие условия зависят от последовательности и будут отличаться в различных обстоятельствах. Обычно жсткие условия следующие: 5 С ниже точки плавления (Tm) для определенной последовательности под определенной ионной прочностью и pH. Tm - это температура под определенной ионной прочностью и рН, при которой 50% целевой последовательности гибридизирует в идеально подходящий экземпляр. Обычно строгие условия будут выбраны таким образом, что концентрация солей составляет около 0,02 молярной при рН 7 и температуре менее 60 С. Снижение концентрации соли и/или повышение температуры увеличивает точность. Жесткие условия для РНК-ДНК гибридизации (Northern blots, используя,например, 100-й образец) - это, например, те, которые включают по меньшей мере одну промывку в 0,2SSC при 63 С в течение 20 мин или эквивалентных условиях. Жесткие условия для РНК-ДНК гибридизации (Southern blots, используя, например, 100-й образец) - это, например, те, которые включают по меньшей мере одну промывку (обычно 2) в 0,2SSC при температуре по меньшей мере 50 С, обычно при 55 С, в течение 20 мин или эквивалентных условиях. См. также Sambrook и др. (1989) и Sambrook и Russell (2001)."Идентичность последовательности" и "сходство последовательности" можно определить выравниванием двух пептидных или двух нуклеотидных последовательностей с использованием глобальных или локальных алгоритмов выравнивания. Последовательности могут затем считаться "практически идентичными" или "весьма подобными", когда они (оптимально выровнены, например, программой GAP илиBESTFIT или фильтрующей программой "Needle" (с использованием параметров по умолчанию, см. ниже) разделяют, по меньшей мере, определенный минимальный процент идентичности последовательности (как определено ниже). Эти программы используют Needleman и Wunsch глобальный алгоритм выравнивания для выравнивания двух последовательностей по всей длине, получая максимальное количество совпадений и сводя к минимуму количество пробелов. Обычно параметры по умолчанию используется с пробелом создания разрыва = 10 и пробелом расширения разрыва = 0,5 (как для нуклеотидного,так и белкового выравнивания). Для нуклеотидов используемый подсчт значений матрицы по умолчанию - это nwsgapdna и для белков подсчт значений матрицы по умолчанию - это Blosum62 (HenikoffHenikoff, 1992, PNAS 89, 915-919). Выравнивания последовательности и показатели процентной идентичности последовательности, например, могут быть определены с помощью компьютерных программ,таких как пакет GCG Висконсин, версия 10.3, доступных из Accelrys Inc., 9685 Scranton Road, San Diego,CA 92121-3752 USA или EMBOSS (http://www.ebi.ac.uk/Tools/webservices/services/emboss). Альтернативно сходство процентов или идентичность могут быть определены с помощью функции поиска в базах-5 025000 данных, таких как FASTA, BLAST и т.д., но совпадения должны быть получены и приведены в соответствие попарно, чтобы сравнить идентичность последовательности. В этом документе и в его формуле глагол "содержать" и его спряжения используются в неограниченном смысле, это подразумевает то, что пункты после слова включены, но пункты, которые не были упомянуты, также не исключены. Далее подразумевается, что, когда речь идет о "последовательности",здесь, как правило, ссылаются на реальные физические молекулы с определенной последовательностью субъединиц (например, аминокислоты). В соответствии с документом термин "растение" включает в себя целое растение или любые части или их производные, такие как органы растений (например, сжатый или несжатый запасающий орган, луковицы, клубни, плоды, листья и т.д.), растительные клетки, протопласты растений, растительные клеточные ткани культур, из которых целые растения могут быть восстановлены, растительные каллюсы, группа побегов растительных клеток и растительные клетки, которые являются неизменными в растениях или частях растений, таких как эмбрионы, пыльца, яйцеклетки, фрукты (например, собранные ткани и органы, такие как собранные помидоры и т.д.), клубни (например, картофель) цветы, листья, семена, клубни, луковицы, клонально размноженные растения, корни, корневые штаммы, стебли, верхушки корня и тому подобное. Также любая стадия развития включена, например, саженцы, незрелые и зрелые, и т.д."Сорт растения" представляет собой группу растений в пределах одного ботанического таксона низшего класса, известно, что (независимо от того, условия для признания права селекционера выполнены или нет) может быть определен на основе экспрессии характеристик, которые получаются из определенного генотипа или комбинации генотипов, может отличить от любой другой группы растений степенью выраженности по меньшей мере одной из этих характеристик и может рассматриваться как единое целое, потому что это может быть умножено без изменений. Таким образом, термин "сорт растения" не может быть использован для обозначения группы растений, даже если они того же рода, если все они характеризуются наличием 1 локуса или гена (или ряда фенотипических характеристик в связи с одним локусом или геном), но в противном случае могут отличаться друг от друга чрезвычайно, что касается других локусов и генов."F1, F2 и т.д." относятся к последовательно связанным поколениям после скрещивания двух родительских растений или родительских линий. Растения, выращенные из семян, полученных путем скрещивания двух растений или линий, называются F1 поколение. Самоопыление растений F1 приводит к поколению F2 и т.д. "Гибрид F1" растения (или F1 семя) является генерацией, полученной от скрещивания двух инбредных родительских линий. "M1 популяция" - это множество мутировавших семян/растений определенной растительной линии или сорта. "M1, М 2, М 3, М 4 и т.д." относится к последовательным поколениям, полученным после самоопыления первых мутировавших семян/растений(M1). Термин "аллель(и)" означает любую одну или более альтернативную форму гена в определенном локусе, все из которых относятся к аллели одного свойства или характеристике в определенном локусе. В диплоидной клетке организма аллели данного гена находятся в определенном месте или локусе (локусах) в хромосоме. Один аллель присутствует в каждой хромосоме пары гомологичных хромосом. Диплоидные растительные виды могут включать в себя большое число различных аллелей в определенном локусе. Они могут быть идентичными аллелями гена (гомозиготными) или двумя разными аллелями (гетерозиготными). Термин "локус" (локусы) означает определенное место или места или участок на хромосоме, где,например, ген или генетический маркер найден. Локус SlPP2C1, таким образом, место в геноме, где ген(дикий тип белка). Аллель SlPP2C1 дикого типа, например, представлена в SEQ ID NO: 1. "Мутантный аллель" относится здесь к аллелю в составе одной или нескольких мутаций в кодирующих последовательностях (мРНК или кДНК) или геномной последовательности по сравнению с диким типом аллеля. Такая мутация(и) (например, вставка, инверсия, удаление и/или замена одного или нескольких нуклеотидов) может привести к кодируемому белку, сократив в искусственных и/или в естественных условиях(снижение функции), либо не в искусственных и/или в естественных условиях (потеря функции), например, в связи с белком, будучи укороченным, или с аминокислотной последовательностью, в которой одна или более аминокислот удалены, вставлены или заменены. Такие изменения могут привести к белку,имеющему различные 3D-конформации, ставшему мишенью для различных субклеточных компартментов, имеющих измененный каталитический домен, имеющий изменение сходства субстрата и/или специфичности и т.д."Засухоустойчивость" или "существенно усиленная засухоустойчивость" или "засухоустойчивые растения" относятся здесь к (в среднем) существенно расширенным способностям растительной линии,сорта или многообразия, чтобы противостоять нехватке воды/водного стресса/засухе по сравнению с подходящими контрольными растениями (например, растения дикого типа), то есть симптомы, связанные с недостатком воды (например, увядания листьев), которые (статистически) значительно снижаются в засухоустойчивых растениях по сравнению с контрольной группой, которая подвергается тем же вод-6 025000 ным стрессовым условиям, (в среднем) восстановление и/или степень выживаемости и/или урожайность после воздействия нехватки воды/водного стресса/засухи значительно увеличилась по сравнению с контрольными растениями, такими как растения диких видов. Существуют различные методы для определения того, устойчивы ли к засухе растения, как это будет объяснено в данной работе. Предпочтительно засухоустойчивые растения имеют существенно усиленную засухоустойчивость на всех стадиях развития, но по меньшей мере на одном из следующих этапов развития: как взрослого растения, в период цветения и опыления, во множестве фруктов и развитии плода, во время развития семян, во время созревания плодов. Желательно, чтобы растение имело в дополнение и засухоустойчивость, по меньшей мере,на стадии семян, и/или во время всходов, и/или от всходов до (и включая) взрослого растения.(WT), кодирующий функциональные белки (например, в отличие от "мутантных растений", включающих мутантный аллель SlPP2C1). Такие растения - подходящие контрольные группы в фенотипических анализах. Предпочтительно растения дикого типа и/или мутанты - "культурные растения", то есть разнообразие, линии разведения и сорта видов, культивируемые человеком и имеющие хорошие агрономические характеристики, предпочтительно такие растения - не "дикие растения", то есть растения, которые обычно имеют намного хуже урожаи и агрономические характеристики, чем культурные растения и, например, растут естественно в диких популяциях. "Дикие растения" включают, например, экотипы, линии PI(интродукции растений), местные сорта и дикие присоединения или дикие родственные формы видов или так называемое видовое разнообразие или сорта, например, разнообразие или сорта обычно выращены в более ранние периоды человеческой истории, но которые не используются в современном сельском хозяйстве."Засуха" относится преимущественно к краткосрочной нехватке воды или стресса (искусственная,например нет орошения почвы, и/или природная, например без осадков), например, равна или менее чем 30 дней, 20, 15, 14, 10, 9, 8, 7, 6, 5 дней или меньше, и/или к долгосрочной нехватке воды или стресса(искусственная, например нет орошения почвы, и/или природная, например без осадков), например, равна или более чем 31 день, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 дней или более."Варианты" гена SlPP2C1 или белка включают как природные, так аллельные варианты, найденные в виде S. Lycopersicum, а также ортологи, найденные в других видах растений, таких как другие виды двудольных или однодольных растений. Подробное описание изобретения Авторы настоящего изобретения начали изучение генов, которые дифференциально выражены во множестве плодов томата, проводя анализ транскриптом (кДНК-AFLP) опыленных завязей и GA3 (гибберелловой кислоты), обработанных завязей (Vriezen и др. 2008, New Phytologist 177:60-76). Один ген,который был относительно высоко экспрессирован в неопыленных завязях и менее экспрессирован в опылнных завязях, соотнося с уровнями (высокий в неопыленных завязях и низкий после опыления)ABA (абсцизовой кислоты), характеризуется дальнейшим генерированием трансгенных растений в целях изучения роли этого гена в передаче сигналов ABA. Ген томата был назван SlPP2C1 (Solarium Lycopersicum PP2C1), так как он кодирует белок из 397 аминокислот, который содержит серин/треониновая фосфатаза 2 С каталитический домен в С-терминальном участке примерно между приблизительно аминокислотами 84-391 (как определено InterProScan). Было определено, что SlPP2C1 участвует в ABA индукции и что сверхэкспрессия этого гена под контролем промотора CaMV 35S приводит к растениям, которые менее чувствительны к ABA фитогормонам, чем дикие виды растений, а растения, в которых ген был подавлен (имеющий более низкий уровень транскрипции SlPP2C1, по меньшей мере, в ткани листа, чем растения дикого типа), имеют более высокую ABA чувствительность (см. примеры). Уменьшение уровней (дикого типа) белка SlPP2C1, таким образом, повысило чувствительность ABA, подразумевая, что белок SlPP2C1 является отрицательным регулятором передачи сигналов ABA. Удивительно, но было также обнаружено, что растения томатов, в которых уровни транскриптаSlPP2C1 были значительно снижены по сравнению с растениями дикого типа, не показали увядание вообще после 9 дней лишения воды, в то время как растения дикого типа имели увядшие листья, и сверхэкспрессивные растения SlPP2C1 показали серьезные признаки увядания. Это было тем более удивительно, так как ген SlPP2C1 и белок SlPP2C1 не имели никакой значительной идентичности последовательности с известными отрицательными регуляторами ABA, которые, как было показано, играли важную роль в засухоустойчивости в Arabidopsis, таких как ABI1 и HAB1, или с любым из белков группы А,см. табл. 1 ниже.-7 025000 Таблица 1 Идентичность последовательности белков (предположительно) Arabidopsis, участвующих в передаче сигналов ABA (Schweigerhofer и др. 2004, выше, см. фиг. 1, группа А) и белка SlPP2C1 Идентичность последовательности определяется с помощью парного выравнивания по всей длине сNeedle (Emboss), Blossum 62 матрицей, пробел создания разрыва = 10, пробел расширения разрыва = 0.5. Идентичность последовательности SlPP2C1 в Arabidopsis PP2C, подгруппе А, белках, таким образом, низкая. Примечательно, что нулевые мутации (Т-ДНК вставки, в которой мРНК не была обнаруженаRT-PCR) в белке, в котором обнаруживается наибольшее сходство, At2g29380, не показали изменения вABA чувствительности в Arabidopsis (Yoshida и др., 2006, Plant Physiology 140:115-126). Кроме того, этот ген экспрессируется в корни и стручки Arabidopsis, а не в листья и соцветия (см. фиг. 5 Xue и др. 2008. ВМС Genomics 9:550). Тот факт, что SlPP2C1 участвует в засухоустойчивости томата, может быть использован для создания трансгенных и/или нетрансгенных растений с повышенной засухоустойчивостью и предпочтительно с желаемыми агрономическими характеристиками. Различные примеры осуществления изобретения описаны здесь ниже и в неограниченных примерах. Части, описанные здесь, применимые к трансгенным подходам, как правило, применимы и к нетрансгенным подходам и наоборот, если не указано иное. В одном из вариантов осуществления здесь представлены трансгенные растения, в которых эндогенная экспрессия SlPP2C1 снижается или регулируется, по меньшей мере, в ткани листа, и которые являются засухоустойчивыми. В другом из случаев нетрансгенные растения, имеющие в составе один или несколько мутантных аллелей SlPP2C1 (либо в гомозиготной или гетерозиготной форме) и отличающиеся тем, что мутантный аллель(и) кодируют белок SlPP2C1, который снизил функциональность в искусственных и/или в естественных условиях по сравнению с диким типом белка или привел к отсутствию функциональности, в то время как мутация выражается в растениях (мутантных линиях или его потомстве), имеющих существенно повышенную засухоустойчивость по сравнению с растениями с отсутствием мутантного аллеля(ей) (дикие типы растений), представлены в настоящем документе. Такие нетрансгенные, засухоустойчивые растения в одном из случаев изобретения созданы с помощью TILLING подхода или Eco-TILLING, но также может быть созданы с использованием других известных методов мутагенеза в сочетании с методами разведения. Таким образом, в одном из случаев мутантный аллель SlPP2C1 индуцирован и определен людьми, используя методы мутагенеза ("индуцированный мутант"), а в другом случае изобретения мутантный аллель SlPP2C1 является "естественным мутантом", то есть он находится в естественных популяциях растений. "Индуцированные мутанты" предпочтительно генерируются в культивируемой зародышевой плазме и, таким образом, непосредственно присутствуют в агрономически ценных линиях. С другой стороны, "естественные мутанты", или "спонтанные мутанты", или "естественные варианты", или "естественные аллельные варианты/вариации" на основе естественной изменчивости(полиморфизма/мутаций), найденные в виде и, таким образом, вероятно, присутствуют в растительных материалах низшего агрономического качества, не культивируются в современном сельском хозяйстве,например в дикорастущих растениях. Позднее аллели должны быть переданы в культивируемые растения, имеющие хорошие агрономические характеристики, что и является одним из пунктов изобретения. Стресс засухи или стресс дегидратации является одним из самых серьезных абиотических стрессов растений, с которым приходится бороться во всем мире. Четыре десятых сельскохозяйственных земель в мире находится в засушливых и полузасушливых регионах. Кроме того, также растения, выращиваемые в регионах с относительно высоким уровнем осадков, могут пострадать в периоды засухи в течение всего вегетационного сезона. Многие сельскохозяйственные регионы имеют низкий уровень выпадения осадков и полагаются на орошение для поддержания урожайности и качества продукции. Присвоение или повышение устойчивости культурных растений к коротким и длительным периодам засухи и снижения необходимости в воде культур, выращиваемых в орошаемом земледелии, очень важно. Растения, представленные здесь, имеют более низкую необходимость к орошению, и/или более высокий урожай, и/или-8 025000 более высокий процент выживаемости при выращивании в регионах с короткими или более длительными периодами засухи. Последовательности нуклеиновых кислот и белков согласно изобретению. В одном из вариантов осуществления изобретения предоставлены последовательности нуклеиновых кислот и аминокислотные последовательности SlPP2C1, а также способы выделения и определения их "вариантов", например аллельных вариантов в пределах вида (Solarium Lycopersicum) или в пределах рода Solarium, или ортологов SlPP2C1 других видов растений, таких как другие виды овощных или полевых культур. Белок SlPP2C1 дикого типа (полученный из сорта томата Moneymaker) представлен в SEQ ID NO: 2. Это белок из 397 аминокислот, который содержит (предполагаемый) серин/треониновая фосфатаза 2 С каталитический домен с С-терминальным участком примерно между аминокислотами 84 и 391. В частности, домен содержит аминокислоты Asp-Xaa-Phe-Leu-Ile-Leu-Ala-Ser-Asp-Gly-Leu-Trp-Asp-Val (гдеXaa может быть любой аминокислотой, но предпочтительно Glu, см. аминокислоты 307-320 в SEQ IDNO: 2). Существует также (предполагаемый) аспартат марганца/магния, связывающий участок от аминокислоты 147 до 149 (DGH или Asp-Gly-His, где Asp связывает магний или марганец). Кроме того, домен,содержащий или состоящий из аминокислот от 144 до 150, т.е. GVXDGHG (где X - это любая аминокислота, предпочтительно Y) может быть вовлечен во взаимодействие с протеинкиназой."Белок SlPP2C1" (включая "варианты", такие как белки, кодируемые аллельными вариантами гена или ортологами гена) может быть определен по их идентичности аминокислотной последовательности вSEQ ID NO: 2 по всей длине, то есть белки, имеющие идентичность последовательности по меньшей мере 47, 48, 49, 50% или более (такие как, но не ограничиваясь ими, 55, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98, 99% или более) SEQ ID NO: 2 (как определено попарным выравниванием, используя Emboss "Needle", 62 Blossum матрицу, пробел создания разрыва = 10, пробел расширения разрыва = 0.5) и имея в естественных условиях функцию, которая, по существу, аналогична SlPP2C1. Также сюда включена потеря функции мутантов белков SlPP2C1 дикого типа (или их вариантов,как указано выше) или снижение функции мутантов дикого типа белков SlPP2C1 (или их варианты), как описано в другом месте, и растения или части растений в составе одного или нескольких нуклеотидов,кодирующих такие мутанты и повышенную засухоустойчивость по сравнению с растениями, включающими последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей белок дикого типа. Предпочтительно белок SlPP2C1 по изобретению также включает в себя, по меньшей мере, каталитический серин/треониновая фосфатаза домен в С-терминальном участке, то есть домене, содержащем не менее 60, 70, 80, 90% или предпочтительно по меньшей мере 95, 98, 99% или более идентичности аминокислотной последовательности к аминокислотам от 84 до 391 SEQ ID NO: 2 (как определено попарным выравниванием, используя Emboss "Needle", 62 Blossum матрицу, пробел создания разрыва =10, пробел расширения разрыва = 0.5). В одном из вариантов осуществления белок SlPP2C1 по изобретению включает в себя последовательность Asp-Xaa-Phe-Leu-Ile-Leu-Ala-Ser-Asp-Gly-Leu-Trp-Asp-Val (Xaa может быть любой аминокислотой, но предпочтительно Glu) или последовательность, которая имеет 90, или 95,или 98% или более идентичности последовательности к этой последовательности (как определено попарным выравниванием, используя Emboss "Needle", 62 Blossum матрицу, пробел создания разрыва = 10,пробел расширения разрыва = 0.5). Предпочтительно белок SlPP2C1 дополнительно содержит по меньшей мере один DGH фрагмент, то есть по меньшей мере одну DGH или GVXDGHG последовательность"Функция, которая по сути похожа на функцию SlPP2C1" относится здесь к белку с проверенной функцией чувствительности/устойчивости к стрессу засухи и/или в определении ABA чувствительности тканей растения. Растения с сверхэкспрессией SlPP2C1 или ее вариантом, по меньшей мере, в ткани листа значительно более подвержены засухе, чем дикие виды растений, и/или имеют значительно сниженную ABA чувствительность по сравнению с контрольной группой (например, с дикими видами растений и растений, трансформируемых с пустым вектором). И наоборот, растения со сниженными уровнями полностью функционального (дикого типа) белка SlPP2C1 или его варианта, по меньшей мере, в ткани листьев значительно меньше подвержены засухе, чем дикие виды растений, и/или имеют значительно большую чувствительность по сравнению ABA контрольной группой. Таким образом, функция (предполагаемая) белка SlPP2C1 может быть проверена, используя различные известные методы, предпочтительно путем сравнения фенотипа трансформированных клеток,конститутивно выражающих белок, прошедший тестирование фенотипом SlPP2C1 сверхэкспрессирующих трансформированных клеток того же вида реципиента (и сорта) (предпочтительно включающих химерный SlPP2C1, кодирующий ген, устойчиво интегрированный в геном реципиента), что позволяет провести прямое сравнение функционального влияния на фенотип трансформированных клеткок. Кроме того, трансформированная клетка, в которой ген SlPP2C1 (или вариант) будет приглушен или подавлен (например, мРНК SlPP2C1 значительно снижается, по меньшей мере, в ткани листа по сравнению с диким типом или контрольной трансформированной клеткой), может быть использована для определения функции. "Значительное сокращение" мРНК SlPP2C1 транскрипта относится к мРНК мишени, присутствующей на уровне меньше или равном 90, 80, 70, 60, 50 40, 30, 20% или меньше (10, 5-9 025000 или 0%) уровня транскрипта, находящегося в диком виде или контрольной трансформированной клетке(например, пустой трансформированной клетке вектора). Понятно, что в любых преобразовательных экспериментах определенная степень изменения фенотипа трансформированных клеток видна, как правило, из-за позиции воздействия на геном и/или по количеству копий. Квалифицированный специалист знает, как сравнить трансформированные клетки друг с другом, например, выбрав одно число копий событий и анализируя их фенотипы. Другие методы определения или подтверждения в естественных условиях функции гена/белка включают поколение модифицированных мутантов или мутантов со сниженной функцией или переходные исследования экспрессии. Исследования экспрессии гена промоторарепортера могут также предоставлять информацию о пространственно-временном образце экспрессии и роли белка. Конститутивная (сверх) экспрессия гена SlPP2C1 или ген, кодирующий сам вариант, должны привести к одному или нескольким из следующих фенотипических изменений по сравнению с дикими видами растений или контрольными трансформированными клетками. Значительно повышенная чувствительность к водному стрессу (т.е. значительно сниженная засухоустойчивость) и/или значительно сниженная ABA чувствительность."Значительно повышенная чувствительность к водному стрессу" или "значительно сниженная засухоустойчивость" относится к среднему, статистически значимому увеличению симптомов увядания листа множества растений, включающие SlPP2C1 аллели, по меньшей мере на 10% по сравнению с контрольными уровнями и может, например, быть проверена, как описано в примерах или эквивалентных экспериментах. Вкратце, множество (например, по меньшей мере 10, 15, 20 или более трансгенных линий) трансформированных растений и контрольных растений того же возраста (например, взрослые растения) насыщены водой в начале эксперимента и не были политы в течение длительного периода времени, например по меньшей мере около 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 дней или более, например от 3 до 4 недель и более (в зависимости от вида растения). Когда у контрольных растений появляются признаки увядания листьев ("легкое увядание" или "умеренное увядание"), все растения оцениваются на наличие признаков увядания листьев с использованием, например, визуальной оценки. Симптомы увядания листьев могут,например, измеряться в соотношении 4:1, а именно "очень/сильно увядшие" (4), "умеренно увядшие" (3),"слегка увядшие" (2) или "не увядшие" (1). Известно, что растения значительно снижают засухоустойчивость, если (в среднем) увядание увеличивается как минимум на 10%, предпочтительно по меньшей мере 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% по сравнению с диким видом (или пустым вектором трансформации) контрольной группы. В качестве альтернативы или в дополнение полевые испытания могут быть проведены, чтобы проверить и/или подтвердить, что не значительно сниженная засухоустойчивость видна в поле в периоды нехватки воды. Другие тесты могут быть использованы, конечно. Например, за периодом нехватки воды может последовать период восстановления (полива), и процент выживания растений может быть оценен, см., например, Zheng и др. (2009, Биохимические и биофизические исследовательские коммуникации 379: 986,LH Column). Известно, что растения значительно снижают засухоустойчивость, если процент выживания снижается как минимум на 10%, предпочтительно по меньшей мере 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% по сравнению с диким видом (или пустым вектором трансформации) контрольной группы. См. также"Значительное снижение чувствительности ABA" может быть проверено, как описано в примерах,тестируя процент прорастания семян на одной или нескольких различных концентрациях ABA и/или корневом удлинении на одной или нескольких различных концентрациях ABA. Таким образом, прорастание семян в среде, содержащей ABA, по меньшей мере на 5, 10, 20, 30, 40, 50% и более выше дляSlPP2C1 сверхэкспрессии трансформированной клетки, чем в контрольной группе семян на той же концентрации ABA. Например, 1 или 3 мкМ ABA, 50% семян дикого типа прорастают, в то время как 55,60% или более трансформированных (SlPP2C1 сверхэкспрессивных) семян прорастают. Таким образом,прорастание семян сверхэкспрессивных трансформированных клеток подавляется в меньшей степениABA. Рост корня/удлинение сверхэкспрессивных трансформированных клеток подавляется в меньшей степени ABA. Понижающая регуляция или сайленсинг SlPP2C1 гена или ген, кодирующий вариант, должны привести к одному или нескольким из следующих фенотипических изменений по сравнению с дикими видами растений или контрольными трансформированными клетками. Значительно сниженная чувствительность к нехватке воды (т.е. значительно усиленная засухоустойчивость) и/или значительно усиленная чувствительность ABA."Значительно сниженная чувствительность к нехватке воды" или "значительно усиленная засухоустойчивость" относится к среднему, статистически значимому снижению симптомов увядания листа множества растений, в которых SlPP2C1 ген подавлен или приглушн по меньшей мере на 10% по сравнению с контрольными уровнями (например, растений диких видов или пустой трансформированной клетки вектора) может, например, быть проверена, как описано в примерах или эквивалентных экспериментах. Вкратце, множество трансформированных растений (например, по меньшей мере 10, 15, 20 или более трансгенных линий) и контрольных растений того же возраста насыщены водой в начале экспери- 10025000 мента и не были политы в течение длительного периода времени, например по меньшей мере около 7, 8,9, 10, 11, 12, 13, 14 дней или более, например от 3 до 4 недель и более (в зависимости от вида растения). Когда у контрольных растений появляются признаки увядания листьев ("легкое увядание" или "умеренное увядание"), все растения оцениваются на наличие признаков увядания листьев с использованием,например, визуальной оценки. Симптомы увядания листьев могут, например, измеряться в соотношении 4:1, а именно "очень/сильно увядшие" (4), "умеренно увядшие" (3), "слегка увядшие" (2) или "не увядшие" (1). Известно, что растения значительно усиливают засухоустойчивость, если (в среднем) увядание снижается как минимум на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% по сравнению с контрольной группой растений. Альтернативно или в дополнение полевые испытания могут быть использованы для определения того, появляется ли значительно усиленная засухоустойчивость из-за понижающей регуляции или сайленсинга эндогенного гена(ов) SlPP2C1. Другие тесты могут быть использованы, конечно. Например, за периодом нехватки воды может последовать период восстановления (полива), и процент выживания растений может быть оценен, см., например, Zheng и др (2009, Биохимические и биофизические исследовательские коммуникации 379: 986,LH Column). Известно, что растения показывают значительно усиленную засухоустойчивость, если процент выживания усиливается как минимум на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 20, 30, 40, 50,60, 70, 80, 90 или 100% по сравнению с диким видом (или пустым вектором трансформации) контрольной группы. См. также Xiong и др. 2006 (Plant Physiology 142: 1065-1074) и Yu и др. 2008 (The Plant Cell 20: 1134-1151). Вышеуказанные тесты или эквивалентные анализы также могут быть использованы для определения растений, включающих мутантный аллель SlPP2C1 (например, с потерей функции или сниженной функции мутанта), имеющих значительно усиленную засухоустойчивость, как будет описано ниже."Значительная усиленная чувствительность ABA" может быть проверена, как описано в примерах. Таким образом, прорастание семян в среде, содержащей ABA, по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60% и более ниже для SlPP2C1 подавленной или приглушенной трансформированной клетки, чем в контрольной группе семян (например, дикого типа) на той же концентрации ABA. Например, 1 или 3 мкМABA, 50% семян дикого типа прорастают, в то время как 40, 35, 30% или меньше трансформированных(SlPP2C1 приглушнных) семян прорастают. Таким образом, прорастание семян подавленных или приглушенных трансформированных клеток подавляется в большей степени ABA. Рост корня подавленных или приглушенных трансформированных клеток подавляется в большей степени ABA. Точные методы могут различаться в зависимости, например, от вида растения. Тесты для определения засухоустойчивости и/или ABA чувствительности овощных видов или сельскохозяйственных культур известны в науке. Известно, что существуют альтернативные методы для оценки фенотипа. Такие методы в компетенции квалифицированного специалиста. Приведенные выше методы могут быть использованы для проверки любых предполагаемых геновSlPP2C1, таких как аллель от диких или культивируемых растений томата или томатной линии разведения или PI (интродукция растений) линии или из другого вида (например, табака или других растительные видов или видов сельскохозяйственных культур), действительно SlPP2C1 вариант, который затем может быть использован для создания трансгенных и/или нетрансгенных растений, имеющих (значительно) усиленную засухоустойчивость по сравнению с подходящими контрольными группами, такими как растения дикого типа. Известно, что относительные трансгенные растения, преимущественно растения, имеющие хорошие агрономические характеристики, преобразованы и регенерированы, то есть культивируемые растения (например, высокоурожайные сорта и селекционные линии), и что наиболее подходящие контрольные группы - пустые трансформированные клетки вектора той же линии или нескольких растений нетрансформированных линий как таковых. В дополнение в искусственных условиях активность фосфатазы может быть осуществлена для проверки активности/функциональности белка, см., например, Gosti и др. 1999, Plant Cell 11: 1897-1910, Material and Methods - PP2C Activities, стр. 1907, где белок выражен в E.coli и активность энзима проанализирована, используя 32 Р отмеченный казеин в качестве субстрата. Такие анализы активности также подходят для определения того, что конкретные виды мутантов SlPP2C1 белков (например, полученныхTILLING подходом или другими способами, см. далее в этом документе) или химерные белки сохраняют всю или частичную функциональность. См. также Bertauche и др., 1996, Eur. J. Biochem 241: стр. 195 для оценки фосфатов и стр. 194 для экспрессии в E.coli. Белок SlPP2C1 имеет "сниженную функцию в искусственных условиях", если доля дефосфорилирования 32 Р-казеина мутантным белком равна или менее 70% белка дикого типа (на тех же условиях анализа, например, 1 или 2 мкг белка инкубируют с 32 Р-казеином в течение 2 ч при температуре 30 С в присутствии 20 мМ ацетата магния, а также в присутствии окадаевой кислоты), предпочтительно равного или менее 60, 50, 40, 30, 20% 10% ("снижение функции") или около 0% белка дикого типа (т.е. полная "потеря функции"). Белок, имеющий сниженную функцию в искусственных условиях, может быть использован для того, чтобы сделать вывод, что белок также имеет "сниженную функцию или отсутствие функции в естественных условиях", т.е. в растении, например, по меньшей мере, в ткани листьев и/или в ткани плодов. Например, растение, имеющее в составе один (гетерозиготный) или два (гомо- 11025000 зиготных) аллеля, кодирующих мутантный белок с сниженной функцией или отсутствием функции в искусственных условиях, приводит к растению, имеющему значительно усиленную засухоустойчивость(по сравнению с растениями с нехваткой мутантного аллеля/аллеля дикого типа) и, следовательно, также со сниженной функцией или отсутствием функции в естественных условиях. В естественных условиях сниженная функция или потеря функции белка подтверждается анализами засухоустойчивости (например, в поле или, как описано в примерах) растений гомозиготных или гетерозиготных для мутантного аллеля. Другие предполагаемые гены/белки S1PP2C1 могут быть определены в кремнии, например, путем определения нуклеиновых кислот и белковых последовательностей в существующей нуклеиновой кислоте или базе данных белков (например, GenBank, SwissProt, TrEMBL) и с использованием стандартного программного обеспечения для анализа последовательностей, таких как последовательность инструментов поиска сходства (BLASTN, BLASTP, BLASTX, TBLAST, FASTA и т.д.). Предполагаемые аминокислотные последовательности или последовательности нуклеиновых кислот, включающие или кодирующие S1PP2C1 белок (как определено выше) выбраны, клонированные или синтезированные заново и проверены на функциональность в естественных условиях, например, путем сверхэкспрессии или сайленсинга в растении-реципиенте. Следует отметить, что назначение S1PP2C1 также используется здесь для белков, которые вытекают из видов, кроме Solarium Lycopersicum, т.е. префикс S1 же здесь не ограничивает белок какого-то конкретного вида. Один предполагаемый ортолог томата S1PP2C1 гена и белок - белок картофеля SEQ ID NO: 15(StPP2C1), кодируемый кДНК SEQ ID NO: 14 (StPP2C1). Белок StPP2C1 имеет 89,1% аминокислотную идентичность последовательности с S1PP2C1 и 91,5% нуклеотидную идентичность последовательности сS1PP2C1 (используя Emboss-Needle, пробел создания = 10.0, пробел расширения = 0,5, и Blosum62 для белков или Dnafull для нуклеиновых кислот).SlPP2C1 белки согласно данному изобретению могут быть выделены из природных источников,синтезированных заново путем химического синтеза (с использованием, например, пептида синтезатора,таких как поставляемых Applied Biosystems) или полученных с помощью рекомбинантных клеток реципиента (например, кишечной палочки). SlPP2C1 белки согласно данному изобретению могут быть использованы для повышения моно- или поликлональных антител, которые могут быть использованы, например, для обнаружения белков SlPP2C1 в образцах тканей, таких как листья (иммунохимические методы анализа и комплекты). В одном из вариантов осуществления сниженная функция или потеря функций мутантных белковSlPP2C1 предоставляются и растения и их части в составе одного или нескольких аллелей SlPP2C1, которые кодируют сниженную функцию или потерю функции мутантов. Любой тип мутации может привести к снижению функции или потере функции кодируемого белка, например вставки, удаления или замены одного или нескольких нуклеотидов в кДНК (SEQ ID NO: 1, или варианты), либо в соответствующей геномной последовательности SlPP2C1 (SEQ ID NO: 11, или варианты). "Соответствующая геномная последовательность" - это эндогенная ДНК последовательность (показанная в SEQ ID NO: 11 или варианты), из которых SEQ ID NO: 1 мРНК (кДНК), или вариант мРНК транскрибируется. Геномный участок дикого типа, который транскрибируется в РНК, состоит из нуклеотидов от 2591 до 5050, которые включают в себя 5' UTR (нуклеотиды 2591-2675 SEQ ID NO: 11), два интрона и 3' UTR (нуклеотиды 4976-5050 SEQ ID NO: 11). В искусственных условиях и/или в естественных условиях функции таких белков могут быть проверены, как описано выше. Растения, содержащие последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих такие мутантные белки со сниженной функцией или с потерей функции и усиленной засухоустойчивостью, могут быть, например, созданы с помощью TILLING подхода или идентифицированы с помощью EcoTILLING подхода, как описано ниже. В одном из вариантов осуществления изобретения (кДНК или геномные) последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих такие мутантные белки, состоят из одной или нескольких смысловых и/или несмысловых мутаций, например, переходов (замена пурина с другим пуринов (АG) или пиримидина с другой пиримидином (СТ или трансверсией (замена пурина с пиримидином, или наоборот(С / ТА / G). В одном из вариантов осуществления смысловые или несмысловые мутация(и)/в нуклеотидной последовательности, кодирующей С-терминальный участок, предпочтительно в (предполагаемом) каталитическом домене аминокислоты от 84 до 391 SEQ ID NO: 2 (или по существу, аналогичным доменом в варианте SlPP2C1 белка, то есть в домене, содержащем по меньшей мере не менее 80, 90, 95,98, 99% аминокислотной идентичности этого домена). В одном из вариантов осуществления смысловые или несмысловые мутация(и)/в нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислоты 307-320SEQ ID NO: 2 (или варианты). В одном из вариантов осуществления смысловые или несмысловые мутация(и)/в нуклеотидной последовательности, кодирующей предполагаемый участок связывания магния,то есть Asp-Gly-His (аминокислоты 147-149 SEQ ID NO: 2 или ее вариант) и/или в последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих предполагаемый домен взаимодействия протеинкиназы (аминокислоты 144-150 SEQ ID NO: 2 или, по существу, аналогичным доменом в варианте SlPP2C1 белка. В конкретном варианте осуществления последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих та- 12025000 кие мутантные белки, включают одну или несколько несмысловую мутацию аминокислот Gly148,Ser171, Ala155, Gly132 из SEQ ID NO: 2 (или эквивалент аминокислот в варианте SlPP2C1 белка). Также мутантные растения, семена и части растений, содержащие одну или более из вышеперечисленных несмысловых мутаций и имеющие значительно усиленную стрессоустойчивость, особенно засухоустойчивость, охватываются в этом документе. В конкретном варианте осуществления изобретения предоставлены засухоустойчивые растения, содержащие мутанты с потерей функции или со сниженной функцией аллеля SlPP2C1, например, в которых мутантный аллель включает в себя несмысловую мутацию в нуклеотидной последовательности, кодирующей GVXDGHG (с Х-любой аминокислотой, предпочтительно Y), или, по существу, аналогичной последовательностью (включая по меньшей мере 80, 90, 95, 98, 99% аминокислотную идентичность в этом домене), в результате чего по меньшей мере одна аминокислота заменяется, например это выражается в DVXDGHG или GVXDGHD или DVXDGHD или GVXDDHG. Функция конкретных доменов, таких как N-терминальный или каталитический домен или взаимодействие домена магния и/или протеинкиназы, может быть проанализирована, удалив все или часть домена(ов) в белке SlPP2C1 или введении одной или нескольких мутаций в домене, а также анализе полученного влияния на функции белка SlPP2C1. Кроме того, растения, включающие спонтанные или индуцированные мутации (например, полученные Тиллинг подходом или определенные EcoTILLING подходом), могут быть проанализированы для мутации и фенотипа растения, включающего мутации, в частности засухоустойчивость. В одном из вариантов осуществления потеря функции или сниженная функция белка SlPP2C1 - это укороченный белок, т.е. фрагмент одного из белков SlPP2C1, определенных ранее (включая варианты). В общем, EMS (этилметансульфонат) индуцирует замены гуанин/цитозин аденином/тимином. В случае глютамин (Gln или Q, кодируемый нуклеотидами САА или CAG) или аргинин (Apr или R, кодируемый нуклеотидами CGA) кодона замена цитозина на тимин может привести к введению в стоп-кодон в рамке считывания (например, САА/CAG/CGA к ТАА/TAG/TGA), в результате получая укороченный белок. Укороченный белок может, например, включать аминокислоты от 1 до любой из Gln (кодируются САА или CAG) или Arg аминокислот (кодируется CGA) по направлению вниз старт-кодона SEQ ID NO: 2 или варианта SEQ ID NO: 2. Альтернативно укороченный белок может, например, включать или состоять из аминокислот 1-5, 1-1-20, 1-28, 1-33, 1-35, 1-36, 1-40, 1-43, 1-44, 1-46, 1-48, 1-49, 1-50, 1-51, 1-54, 1-57, 166, 1-70, 1-71, 1-72, 1-73, 1-83 SEQ ID NO: 2 или 1-85, 1-88, 1-91, 1-93, 1-94, 1-97, 1-104, 1-106, 1-110, 1120, 1-130, 1-141, 1-149, 1-151, 1-160, 1-170, 1-200, 1-301, 1-302, 1-305, 1-307 или других укороченных белков SlPP2C1 (SEQ ID NO: 2) или варианта. Также представлены последовательности нуклеиновых кислот (геномная ДНК, кДНК, РНК), кодирующие SlPP2C1 белки, такие как, например, SlPP2C1, представленный в SEQ ID NO: 2 или их вариантах, как указано выше (в том числе химерные или гибридные белки или мутировавшие белки или укороченные белки), или в любом SlPP2C1 белке из других видов. Из-за вырождения генетический код различных последовательностей нуклеиновых кислот может кодировать ту же аминокислотную последовательность. Любая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SlPP2C1 (как определено выше, в том числе в вариантах), здесь называется SlPP2C1. Представленные последовательности нуклеиновых кислот включают условные, искусственные или синтетические последовательности нуклеиновых кислот. Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие SlPP2C1, представлены в SEQ IDNO: 1 (кДНК последовательность из томата) и SEQ ID NO: 11 (геномная ДНК из томата, кодирующая дикий вид SlPP2C1 белка). Соответствующая последовательность генома может быть выделена с помощью обычных методов, таких как PCR, с использованием специфических и вырожденных праймеров,основанных на SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11. Известно, что когда последовательности изображаются в качестве последовательности ДНК, а РНК называют, фактическая последовательность оснований молекулы РНК совпадает с той разницей, что тимин (Т) заменяет урацил (U). Также представлены последовательности нуклеиновых кислот (геномная ДНК, кДНК, РНК), кодирующие мутировавшие белки SlPP2C1, то есть белки со сниженной функцией или потерей функцииSlPP2C1, как описано выше. Например, SlPP2C1 последовательность нуклеиновых кислот состоит из одной или нескольких смысловых или несмысловых мутаций в диком типе SlPP2C1 кодирующей последовательности, передающей кодируемый белок, нефункциональный или с пониженной функцией в естественных условиях и/или в искусственных условиях. Кроме того, представлены последовательности с другими мутациями, например, сплайс-сайт мутанты, то есть мутации в геномной последовательностиSlPP2C1, ведущей к аномальному сращиванию пре-мРНК и/или сдвига рамки мутации и/или вставки и/или удаления одной или более нуклеиновых кислот. Также включены варианты и фрагменты SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот, таких как последовательности нуклеиновых кислот с гибридизацией SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот, например, в SEQ ID NO: 1, в жестких условиях гибридизации, как определено. ВариантыSlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот также включают последовательности нуклеиновых кислот, которые имеют идентичность последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11 (нуклеотиды- 13025000 2676-4975) по меньшей мере 50% или более, предпочтительно по меньшей мере 55, 60, 70, 80, 85, 90, 95,98, 99% или более (как это определены Emboss "needle", используя параметры по умолчанию, то есть пробел создания разрыва = 10, пробел расширения разрыва = 0,5, измеряемая матрица nwsgapdna). Понятно, что многие методы могут быть использованы для выявления, обобщения и выделения вариантов или фрагментов SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот, такие как гибридизация нуклеиновых кислот, PCR-технологии, in silico анализ и синтез нуклеиновых кислот, и тому подобное. ВариантыSEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11 (нуклеотиды 2676-4975) могут кодировать либо дикий вид функциональных SlPP2C11 белков (например, аллелей другого видового разнообразия томата или селекционных линий или диких присоединений или ортологов из других видов, чем томаты), или они могут кодировать мутантные аллели со сниженной функцией или с потерей функции любого из них, как, например, подготовленных или определенных методами, такими как TILLING подход или EcoTILLING подход или другими способами. Фрагменты включают части любых из вышеперечисленных SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот (или вариантов), которые могут, например, использоваться в качестве праймеров, или образцов, или конструкций подавления активности гена. Части могут быть смежными участками по меньшей мере около 10, 15, 19, 20, 21, 22, 23, 25, 50, 60, 100, 200, 300, 450, 500, 600, 700, 800, 900, или более нуклеотидов в длину, либо кодирующей нити (смысловой нити) или комплементарной нити (антисмысловой нити). Таким образом, включены фрагменты SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот,в результате чего фрагмент по меньшей мере около 20, 30, 40, 50, 60, 100, 150, 200 300, 450, 500, 600, 700,800, 900 нуклеотидов в длину составляет не менее 50, 60, 70, 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80, 90, 95, 98, 99% или более (100%) идентичности последовательности нуклеиновых кислот в другом фрагменте SlPP2C1 последовательности нуклеиновых кислот примерно такой же длины (как определено попарным выравниванием, используя Emboss "needle", параметры по умолчанию, то есть пробел создания разрыва = 10, пробел расширения разрыва = 0,5, измеряемая матрица nwsgapdna). Пары праймеров, которые могут быть использованы для PCR-амплификации SlPP2C1 транскриптов(мРНК или соответствующей кДНК) из растительных образцов ДНК тканей, например, представлены вSEQ ID NO: 3 и 4 и в паре праймеров SEQ ID NO: 9 и 10. Такие пары праймеров могут быть использованы для выявления и количественной оценки SlPP2C1 экспрессии в растительных тканях, например, в ткани листа томата. Точно так же другие специфические или вырожденные праймеры могут быть разработаны на основе SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11 (нуклеотиды 2676-4975) и используется для усиления вариантов аллелей SlPP2C1 от других линий томата или от других видов. После того как конкретный мутантный аллель SlPP2C1 был сформирован и/или определен (например, путем Тиллинг или EcoTILLING подходов), а также праймеров или образцов, специфичных для мутантного аллеля, может быть разработан, и также анализ может быть разработан, который обнаруживает присутствие и/или отсутствие мутантного аллеля в растении или части растения (с использованием аллеля конкретных анализов обнаружения). Молекулярные маркерные анализы для обнаружения и/или передачи (например, с помощью MAS, вспомогательной маркерной селекции) мутантного аллеля, могут получить развитие. Например, анализ SNP обнаружения или CAPS маркер может быть разработан, который определяет наличие мутанта SlPP2C1 нуклеиновой кислоты в ДНК растений и/или который может быть использован для передачи аллеля в другие растения. В одном из вариантов осуществления представлен мутант последовательности нуклеиновых кислот,согласно которому SlPP2C1 последовательность нуклеиновой кислоты состоит из одной или нескольких мутаций, приводящих либо к потере функции или снижению функции мутанта белка SlPP2C1. Этот аспект изобретения будет описан более подробно далее. Растения также могут быть определены или получены (например, с помощью гомологичной рекомбинации или вставки, удаления или замены одного или нескольких нуклеотидов и т.д.), которые имеют одну или несколько мутаций в SlPP2C1 регуляторном участке(ах), например промоторе, в котором экспрессия генов SlPP2C1, то есть уровни мРНК (SEQ ID NO: 1 или варианты),значительно сокращается в растении по сравнению с диким типом и растение имеет значительно усиленную засухоустойчивость. Последовательности нуклеиновой кислоты, описанной выше, или их фрагменты, в частности последовательности ДНК, кодирующие белки SlPP2C1 этого изобретения (или их варианты) могут быть вставлены в векторы экспрессии (в подавляющих подходах) или в векторы, подавляющие активность генов засухоустойчивых растений. В одном из вариантов осуществления изобретения экспрессия SlPP2C1 гена подавлена в клеткереципиенте, растении или конкретной ткани(ях), например RNAi подходами, как это описано далее. В другом варианте осуществления представлены растения, содержащие один или более мутантных аллелей SlPP2C1, в которых мутация(и) дает усиленную засухоустойчивость в растениях по сравнению с растениями с нехваткой мутантного аллеля(ей). Мутантные аллели предпочтительно порождены мутагенезом растений и семян, а также выявлением тех растений и семян, которые содержат одну или несколько мутаций в РР 2 С 1 мишени аллеле(ях) и в которых мутация приводит к отмене транскрипции или трансляции (чтобы белок SlPP2C1 не производился), или в трансляции сниженной функции или потери функции белка SlPP2C1. Снижение функционального дикого типа белка SlPP2C1, по меньшей мере, в- 14025000 ткани листа дает усиленную засухоустойчивость в растении, части растения или семени. В другом варианте осуществления предоставлены PCR праймеры и/или образцы и комплекты для обнаружения ДНК последовательности SlPP2C1. Вырожденные или PCR пары праймеров для амплификации ДНК SlPP2C1 из образцов могут быть синтезированы на основе SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11(например, основанной на нуклеотидах 2676-4975 или 2591-5050), как известно, в науке (см. Dieffenbach и Dveksler (1995) PCR праймер: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, и McPherson atal. (2000) PCR-Basics: From Background to Bench, First Edition, Springer Verlag, Germany). Кроме того,фрагменты ДНК SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11 (или их варианты) могут быть использованы в качестве образцов гибридизации. SlPP2C1 комплект обнаружения может состоять либо из SlPP2C1 специфических праймеров и/или SlPP2C1 образцов, и связан протоколом при использовании праймеров и образцов для обнаружения SlPP2C1 ДНК в исследуемой пробе. Такой комплект обнаружения может, например,быть использован для определения того, было ли растение преобразовано с помощью гена SlPP2C1 (или его части) изобретения или включает в себя одну или несколько мутантных аллелей SlPP2C1. Из-за вырождения генетического кода некоторые аминокислоты кодонов могут быть заменены другими без изменения аминокислотной последовательности белка. В другом варианте осуществления предоставлены антитела, которые специфически связываются с белком SlPP2C1 или мутантным белком SlPP2C1 согласно изобретению. В частности, моноклональные или поликлональные антитела, которые связываются с SlPP2C1 или фрагментами или их вариантами(например, мутантные белки), описаны в этом документе. Антитела могут быть получены с помощьюSlPP2C1 белка согласно изобретению в качестве антигена животных с использованием методов, известных в науке, как, например, описанные в Harlow and Lane "Using Antibodies: A laboratory manual" (New(Wiley and Sons, 1991). Антитела могут быть впоследствии использованы для выделения, идентификации, определения свойств или очищения белка SlPP2C1, с которым он связывается, например, для обнаружения белка SlPP2C1 в исследуемой пробе, что позволяет формировать иммунокомплексы и обнаруживать присутствие иммунокомплексов, например, путем ELISA (иммуноферментного твердофазного анализа) или анализа иммуноблота. Кроме того, предоставлены иммунологические комплекты, полезные для определения белков SlPP2C1, белковых фрагментов или эпитопов в исследуемой пробе. Исследуемыми пробами могут быть клетки, клеточные супернатанты, суспензии клеток, тканей и т.д. Такой комплект включает в себя, по меньшей мере, антитело, которое специфически связывается с белком SlPP2C1 и один или более реагентов иммунодетекции. Антитела могут также быть использованы для выделения/ выявления других белков SlPP2C1, например, с помощью ELISA или Western blotting. Понятно, что многие методы могут быть использованы для выявления, обобщения и выделения вариантов или фрагментов SlPP2C1 последовательностей нуклеиновых кислот, такие как гибридизация нуклеиновых кислот, PCR-технологии, in silico анализ и синтез нуклеиновых кислот и тому подобное. Таким образом, последовательность кодирования SlPP2C1 белка нуклеиновой кислоты может быть последовательностью, которая химически синтезирована или которая клонирована из любых видов растений. Трансгенные засухоустойчивые растения. Здесь представлены трансгенные растения, семена и части растений, в которых SlPP2C1 приглушен предпочтительно, по меньшей мере, в ткани листа или воздушных тканях, которые имеют усиленную засухоустойчивость по сравнению с диким типом (нетрансгенных) контрольных растений или других контрольных групп (например, пустых трансформированных клеток вектора). В одном из вариантов осуществления изобретения гомологичная или гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты используется для приглушения эндогенного SlPP2C1 гена(ов) видареципиента, который должен быть преобразован. Например, SlPP2C1 ген картофеля, такой как StPP2C1SEQ ID NO: 14 (или вариант или его фрагмент) может быть использован, чтобы приглушить SlPP2C1 экспрессию гена в трансгенных растениях томата или баклажана. Альтернативно, гомологичная SlPP2C1 последовательность нуклеиновой кислоты может быть использована. Например, последовательность происходящих из конкретных видов растений (например, из томатов) будет восстановлена в указанных видах (томата). Таким образом, в одном из вариантов осуществления ДНК SlPP2C1 соответствует или является модификацией/вариантом эндогенной SlPP2C1 ДНК видов, которые используются в качестве рецептивных видов в трансформации. Таким образом, SlPP2C1 кДНК томата или геномная ДНК (или вариант или е фрагмент) предпочтительно используется для трансформации растений томата. Кроме того (для регуляторного одобрения и общественного принятия причин), гомологичная или гетерологичная последовательность нуклеиновых кислот может быть функционально связана с транскрипцией регуляторной последовательности, особенно промотора, который также происходит от вида растения или даже из того же растения, которое будет трансформировано. Для создания растений, содержащих химерный ген, который в результате приводит к приглушению экспрессии эндогенного гена или генов семейства SlPP2C1, могут быть использованы методы, известные в науке."Сайленсинг генов" относится к понижающей регуляции или полному подавлению экспрессии ге- 15025000 нов одного или нескольких генов-мишеней, например SlPP2C1 генов в клетке-реципиенте или ткани. Понятно, что в любых преобразовательных экспериментах определенная степень изменения фенотипа трансформированных клеток видна, как правило, из-за позиции воздействия на геном и/или по количеству копий. Как правило, "слабый" и "сильный" сайленсинг генов растений отличается (все из которых являются вариантами осуществления изобретения), в котором "слабый" сайленсинг гена (РНКинтерференция) относится к растениям или части растений, в которых эндогенная экспрессия генамишени снижается примерно на 15, 20 или 30% по сравнению с контрольной тканью, и "сильный" сайленсинг генов (РНК-интерференция) относится к растениям или части растений, в которых ген эндогенной экспрессии гена-мишени снижен не менее чем на 50, 60, 70, 80, 90% или более по сравнению с контрольной тканью (например, диким типом). Сайленсинг может быть определен количественно, например, подсчитывая уровень транскрипта гена-мишени (например, с помощью количественного RT-PCR) и/или определяя и выборочно подсчитывая энзимную активность SlPP2C1 белка-мишени и/или оценивая и выборочно подсчитывая полученный фенотип (усиленная засухоустойчивость и/или усиленная чувствительность ABA). Не ограничивая масштабы изобретения растения, имеющие оптимальный уровень сайленсинга, могут быть выбраны так, чтобы в результате имеют значительно усиленную засухоустойчивость в климатических условиях, которым они подвергаются в этой области, имея минимальные отрицательные побочные эффекты, такие как снижение урожайности, уменьшение количества фруктов и т.д., по сравнению с контрольной группой. Предпочтительно выживание и/или урожайность увеличиваются в засухоустойчивых растениях. Применение ингибиторных РНК для сокращения или упразднения экспрессии генов хорошо известно в науке и является предметом нескольких рецензий (например, Baulcombe 1996, Plant Cell 8(2): 179-188; Depicker and Van Montagu, 1997, Curr Opin Cell Biol. 9(3): 373-82). Есть целый ряд доступных технологий для достижения сайленсинга генов в растениях, таких как химерные гены, которые производят антисмысловую РНК во всех или части гена-мишени (см., например, ЕР 0140308 В 1, ЕР 0240208 В 1 и ЕР 0223399 В 1), которые производят чувствительную РНК гена-мишени (также известную как "совместное подавление"), см. ЕР 0465572 В 1. Наиболее успешным подходом до сих пор является производство как смысловых, так и антисмысловых РНК гена-мишени ("инвертированные повторы"), который является двухцепочной РНК (dsPHK) или стволовым циклом структуры (петля РНК, hpRNA) в клетке и приглушает ген-мишень(и) при транскрипции из вышестоящего промотора. Методы и векторы dsPHK и hpRNA производства и сайленсинга генов были описаны в ЕР 1068311, ЕР 983370 А 1, ЕР 1042462 А 1, ЕР 1071762 А 1 и ЕР 1080208 А 1. Химерный ген для трансформации растений может, таким образом, включать транскрипцию регуляторного участка, который активен в клетках растений, функционально связанных со смысловым и/или антисмысловым фрагментом ДНК (или полной последовательностью нуклеиновой кислоты), или комплиментарного или, по существу, аналогичного SLPP2C1 гена-мишени или семейства генов. Обычно короткие (смысловые и антисмысловые) фрагменты секвенирования последовательности гена-мишени, такие как 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или 26 нуклеотиды, кодирующие и/или не кодирующие последовательности гена-мишени, достаточны. Более длинные последовательности также могут быть использованы, например, по меньшей мере около 50, 100, 200, 250, 500, 1000 или более нуклеотидов. Даже с ДНК, соответствующими или комплиментарными, полный транскрипт РНК или мРНК может быть использован, чтобы создать смысловые и/или антисмысловые конструкции. Желательно, чтобы смысловые и антисмысловые фрагменты/последовательностей были разделены спейсером последовательности, такие как интрон, который образует петлю (или шпильку) на формирование dsPHK. В принципе, любой ген или ген SlPP2C1 семейства может стать мишенью. Например, одна или несколько определенных аллелей SlPP2C1 может быть приглушена выбором участка нуклеиновой кислоты их первичных или мРНК транскриптов, специфичных для этих аллелей (см. Byzova и др. Plant 2004 218: 379-387 для специфического сайленсинга аллелей органичным определенным образом). Кроме того, вс семейство гена может стать мишенью для сайленсинга, выбрав один или более закрепленных участков для создания конструкта сайленсинга. Как упоминалось выше, участок ДНК, используемый в смысловой и/или антисмысловой ориентации, не должен быть частью кодирующего участка, но также может соответствовать или дополнять части первичного транскрипта (включая 5' и 3' нетранслируемые последовательности и интроны, как показано на 2591-5050 нуклеотидах SEQ ID NO: 11) в частях мРНК (где любые интроны были удалены и полиА окончание было добавлено). Известно, что в последовательности ДНК,которая соответствует последовательности РНК, U заменяется на Т. Также отмечено, что в химерном гене, который преобразовывает dsPHK или hpRNA мишени, способном к сайленсингу SlPP2C1 экспрессии генов, на транскрипцию в клетке-реципиенте, смысловые и антисмысловые участки не должны быть одинаковой длины и один участок может быть больше, чем другие. Так, например SEQ ID NO: 1 или их варианты, как описано выше, или фрагменты любого из них,или геномная последовательность, или первичная последовательность транскрипта SEQ ID NO: 1 (как показано в SEQ ID NO: 11 из нуклеотидов от 2591 до 5050), могут быть использованы для созданияSlPP2C1 сайленсинга гена, и вектора, и трансгенного растения, в которых один или несколько геновSlPP2C1 приглушены во всех или некоторых тканях или органах, или по индукции (см., например,Wielopolska и др. Plant Biotechnol J. 2005 6:583-90). Удобный способ создания шпильки конструкта заключается в использовании общих векторов, таких как pHANNIBAL, pHELLSGATE, pSTARGATE векторы на основе технологии Gateway (см. Wesley и др. 2004, Methods Mol Biol. 265:117-30; Wesley и др 2003, Methods Mol Biol. 236:273-86 и HelliwellWaterhouse 2003, Methods 30(4):289-95.), здесь в качестве ссылки. См. также http://www.pi.csiro.au/rnai/ других генных сайленсингов векторов, таких как индуцируемый сайленсинг векторов и векторы для сайленсинга из нескольких генов-мишеней и программыMatchPoint, которая может быть использована, чтобы найти лучшую последовательность, чтобы использовать для сайленсинга гена-мишени. При выборе консервативных последовательностей нуклеиновых кислот все SlPP2C1 генные представители семейства в растении-реципиенте могут быть приглушены. Сайленсинг всех представителей семейства растения-реципиента является конкретным вариантом осуществления. В одном из вариантов осуществления промотор, который функционально связан со смысловой и/или антисмысловой нуклеиновой кислотой (чтобы создать химерный сайленсинг/РНК-интерференции генов), выбирается из конститутивного промотора, индуцируемый промотор (например, стресс индуцируемый, индуцируемый светом, химически индуцируемый и т.д.), индуцируемый промотор гормона (например, этилен или ABA индуцируемый и т.д.) конкретный листовой промотор или промотор, активный в воздушных тканях. Также промоторы с ранней реактивной дегидратацией, такие как RD2, описаны в настоящем документе, а также другие стресс-индуцируемые промоторы, такие как RD29 (YamaguchiShinozaki и Shinozaki 1993 г, Mol Gen Genet 236: 331-340). В некоторых вариантах осуществления конкретные плоды промотора могут быть подходящими. Кроме того, промотор SlPP2C гена сам по себе может быть использован для подходов сайленсинга. Промотор с томатом состоит в SEQ ID NO: 11 из нуклеотидов 1-2675, в частности включает в себя промотор либо состоит из около 2000 нуклеотидов перед ATG трансляцией старт-кодона на позиции 2676-2679SEQ ID NO: 11) или функциональные фрагменты (например, 1500bp, 1000bp или меньшего увеличенияATG). Дополнительно 3' UTR может быть функционально связан с 3 терминальным химерным геном,так что функционально взаимосвязанные элементы ДНК, включают промотор -SlPP2C1 RNAi ген 3'UTR. Предпочтительные конститутивные промоторы включают в себя сильные конститутивные 35S промоторы или усиленные 35S промоторы ("35S промоторы") мозаичного вируса цветной капусты(CaMV) изолированных CM 1841 (Гарднер и др, 1981, Исследование нуклеиновых кислот, 2871-2887),CabbB-S (Франк и др., 1980, Cell 21, 285-294) и CabbB-CO (Hull и Howell, 1987, Вирусология 86, 482493), 35S промотор, описанный Odell и др. (1985, Nature 313, 810-812) или в US 5164316, промоторах из семейства убиквитина (например, убиквитин промотор Christensen кукурузы и др., 1992, Plant Mol. Biol. 18, 675-689, EP 0342926, см. также Cornejo и др. 1993, Plant Mol.Biol. 23, 567-581), gos2 промотор (de Pater и др., 1992 Plant J. 2, 834-844), emu промотор (Last и др., 1990, Theor. Appg. Genet. 81, 581-588), Arabidopsis промотор актина, такой как промотор, описанный An и др. (1996, Plant J. 10, 107), рисовые промоторы актина, такие как промотор, описанный Zhang и др. (1991, Plant Cell 3, 1155-1165) и промотор, описанный в US 5641876, или рисовый промотор 2 актина, как описано в WO 070067, промоторы мозаичного венозного вируса маниоки (WO 97/48819, Verdaguer и др. 1998, Plant Mol. Biol. 37,1055-1067), pPLEX виды промоторов из подземного останавливающего развитие вируса клевера (WO 96/06932, в частности промотор S7), промотор алкогольдегидрогеназы, например pAdh1S (регистрационные номера GenBankX04049, Х 00581), a TR1' промотор и TR2' промотор ("TR1' промотор" и "TR2'промотор" соответственно),которые управляют экспрессией 1' и 2' гена, соответственно, Т-ДНК (Фельтен и др., 1984, EMBO J. 3,2723-2730), промотор мозаичного вируса норичника, описанного в US 6051753 и ЕР 426641, промоторы генов гистонов, таких как Ph4a748 промотор из Arabidopsis (PMB 8: 179-191), или другие. Альтернативно, может быть использован промотор, который не является конститутивным, а специфичным для одной или нескольких тканей и органов растений (ткань предпочтительная/ткань специфичная, в том числе промоторы, регулируемые развитием). Например, промотор, активный в ткани листьев,или надземных частях растений, или эпидермисе специфичных промоторов, или охраняющих специфичных клеточных промоторах, может быть использован. Эпидермальные специфичные промоторы, такие как, например, Arabidopsis LTP1 промотор (Thoma и др., 1994 г., Plant Physiol. 105(1):35-45.), CER1 промотор (Aarts и др. 1995. Plant Cell. 7:2115-27) и CER6 промотор (Hooker и др. 2002, Plant Physiol 129:1568-80.) и ортологичные томаты LeCER6 (Vogg и др.,2004, J. Exp Bot. 55: 1401-10), обеспечивают специфичную экспрессию в наземной эпидермальной поверхности. Также подходят листовые или фотосинтетические ткани специфичных промоторов, таких как светиндуцируемая рибулоза 1,5-бисфосфата карбоксилазы, небольшой промотор субъединицы (Pssu) из Arabidopsis, как описано в US 5034322, или подсолнечнике, или горохе (США 5254799), или в Zea Mays; промотор картофеля ST-LS1, который является специфичным стволовым или листовым (Stockhaus и др. 1987, Исследование нуклеиновых кислот 15 (8): 3479-91); промотор хлорофилла а/b белка (CAB). Могут быть использованы замыкающая клетка-специфичный промотор, такой как DGP1 промотор(Li и др, Sci China С Life Sci. 2005 48 (2): 181-6), или засухоустойчивые индуцируемые промоторы, какRD29 (Yamaguchi-Shinozaki и Shinozaki 1993, см. выше), которые являются активными практически во всех органах и тканях вегетативных растений во время нехватки воды. Квалифицированный специалист может легко проверить различные промоторы на их специфику и целесообразность в методике согласно данному изобретению. Кроме того, специфика промотора может быть изменена путем удаления, добавления или замены части промотора. Такое изменение промоторов может быть функционально связано с геном-репортером, чтобы проверить их пространственновременной активность в трансгенных растениях. Другая альтернатива - использование промотора, экспрессия которого индуцируема. Примеры индуцируемых промоторов - химически индуцируемые промоторы, такие как дексаметазон, как описаноAoyama и Chua (1997, Plant Journal 11: 605-612) и в US 6063985, или тетрациклин (TOPFREE или ТОР 10 промотор, см. Gatz, 1997, Annu Rev. Plant Physiol Plant Mol Biol. 48: 89-108 и Love и др. 2000, Plant J. 21: 579-88). Другие индуцируемые промоторы - это, например, индуцируемые при изменении температуры,например промотор теплового шока, описаны в US 5447 858, в анаэробных условиях (например, промотор кукурузы ADH1S), света (US 6455760), патогенных микроорганизмов (например, ЕР 759085 или ЕР 309862) или старения (SAG12 и SAG13, см. US 5689042) или засухи (см. выше). Очевидно, что существует целый ряд других доступных промоторов. Примеры других индуцируемых промоторов - Adh1 промотор, который является индуцируемым гипоксией или холодньм стрессом, Hsp70 промотор, которого является индуцируемым тепловым стрессом, и промотор PPDK, индуцируемый светом. Одним из предпочтительных промоторов - этанол-индуцируемый промотор системы, как описано в Ait-ali и др. (2001,Plant Biotechnology Journal 1, 337-343), где лечение этанолом активизирует ALCR, который, в свою очередь, индуцирует экспрессию alc:35S промотора. См. Также Deveaux и др. (2003, The ethanol switch: a toolfor tissue-specific gene induction during plant development. Plant J. 36, 918-930). При необходимости, промотор-SlPP2C1 RNAi гена может дополнительно содержать 3'терминальную регуляцию транскрипции сигналов ("3'терминальная" или "3'UTR") (т.е. формирование транскрипта и сигналы полиаденилирования). Сигналы полиаденилирования и транскрипта образования сигналов включают nopaline ген синтазы ("3' nos") (Depicker и и др., 1982 J. Molec. Appl. Genetics 1, 561573.), октопин ген синтазы ("3'ocs") (Gielen и др., 1984, EMBO J. 3, 835-845) и Т-ДНК ген 7 ("3' ген 7")(Velten and Schell, 1985, Nucleic Acids Research 13, 6981-6998), которые действуют как 3"нетранслируемая последовательность ДНК в трансформированных клетках растений и т.д. Химерный ген SlPP2C1 сайленсинга (например, промотор, функционально связан с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая при транскрипции в растительной клетке способна к сайленсингу эндогенной SlPP2C1 экспрессии генов) может быть включен в обычным образом в ядерном геноме одной клетки растения, и так трансформированная растительная клетка может быть использована обычным способом для получения трансформированного растения, которое имеет измененный фенотип из-заSlPP2C1 сайленсинга в определенных клетках в определенное время. В этой связи Т-ДНК вектор, включающий промотор, функционально связан со смысловой и/или антисмысловой SlPP2C1 последовательностью (и, возможно 3'UTR), может быть введен в Agrobacterium tumefaciens и использован для трансформации растительных клеток, а затем трансформированное растение может быть восстановлено из трансформированных клеток растений с использованием процедур, описанных, например, в ЕР 0116718,ЕР 0270822, РСТ публикации WO 84/02913 и опубликовано в заявке на европейский патент ЕР 0242246 и в Gould и др. (1991, Plant Physiol. 95,426-434). Конструкция Т-ДНК вектора для Agrobacterium, опосредованной растительной трансформацией, хорошо известна в науке. Т-ДНК вектор может быть либо бинарным вектором, как это описано в ЕР 0120561 и ЕР 0120515 или совместно интегрированным вектором,который можно интегрировать в Agrobacterium Ti-плазмиду гомологичной рекомбинации, как описано в ЕР 0116718. Предпочтительные Т-ДНК векторы содержат промотор, функционально связанный с SlPP2C1 сайленсингом генов между Т-ДНК пограничной последовательности, или, по меньшей мере, расположен слева от правой пограничной последовательности. Пограничная последовательность описана в Gielen и др (1984, EMBO J. 3,835-845). Конечно, другие виды векторов могут быть использованы для трансформации растительной клетки, используя процедуры, такие как прямой перенос генов (как это описано,например, в ЕР 0223247), опосредованная пыльцой трансформация (как это описано, например, в ЕР 0270356 и WO 85/01856), трансформация протопластов, как, например, описанный в US 4684611, растительный РНК вирус-опосредованной трансформации (как это описано, например, в ЕР 0067553 и US 4407 956), липосомо-опосредованной трансформации (как описано, например, в US 4536 475), и другие методы, такие как методы, описанные для трансформации некоторых линий кукурузы (например, US 6140 553, Фромм и др., 1990, Bio/Technology 8, 833-839; Gordon-Kamm и др., 1990, Plant Cell 2, 603-618) и риса (Shimamoto и др., 1989, Nature 338, 274-276; Datta и др. 1990, Bio/Technology 8, 736-740) и метод трансформации однодольных (РСТ публикация WO 92/09696). Для трансформации хлопка см. также WO 00/71733, и для трансформации риса см. также способы, описанные в WO 92/09696, WO 94/00977 и WO 95/06722. Для трансформации сорго см., например, Jeoung J.M. и др. 2002, Hereditas 137: 20-8 или ZhaoZ.Y. и др. 2000, Plant Mol. Biol. 44:789-98). Для трансформации томата или табака см. также An G. и др.,- 18025000 1986, Plant Physiol. 81: 301-305; Horsch R.B. и др., 1988, в Plant Molecular Biology Manual A5, Dordrecht,Netherlands, Kluwer Academic Publishers, стр. 1-9; Koornneef M. и др., 1986, в: Nevins D.J. and R.A. Jones,eds. Tomato Biotechnology, New York, NY, USA, Alan R. Liss, Inc. стр. 169-178). Для трансформации картофеля см., например, Sherman и Bevan (1988, Plant Cell Rep. 7: 13-16). Трансформация томатов и регенерация может осуществляться по De Jong и др. (2008) Plant Journal 57:160-170 и Sun и др. (2006) Plant CellPhysiol. 47: 426-431. Кроме того, селекция и регенерация трансформированных растений из трансформированных клеток хорошо известны в науке. Очевидно, что для разных видов и даже разных сортов или сортов одного вида протоколы специально приспособлены для регенерации трансформированных клеток на высоких частотах. Кроме того, трансформация ядерного генома, а также трансформация пластидного генома, предпочтительно генома хлоропластов, включены в изобретение. Одно из преимуществ пластидной трансформации генома в том, что риск распространения трансгена(ов) может быть уменьшен. Пластидная трансформация генома может быть осуществлена, как известно, в науке, см., например, Sidorov VA и др. 1999, Plant J. 19: 209-216 или Lutz K.A. и др. 2004, Plant J. 37(6):906-13. Любое растение может быть подходящим реципиентом, например однодольные или двудольные растения, но наиболее предпочтительны растения, которые выиграют от того, что являются засухоустойчивыми, такие как, но не ограничиваясь ими, томат, перец, огурец, баклажан салат-латук, артишок, лукпорей, дыня, арбуз, морковь, Brassica (В. oleracea, В. napus, В. juncea), лук, салат ягненка, артишок, картофель, шпинат, виноград, горох, фасоль, соя и многие другие. Предпочтительны реципиенты из семейства пасленовые, например, виды рода Solarium, например,томат (S. Lycopersicum), томатное дерево (S. betaceum, син. Cyphomandra betaceae) и другие виды Solarium, такие как баклажан/бадриджан (Solarium melongena), картофель (Solarium tuberosum), пепино (S.muricatum), кокона (S. sessiliflorum) и наранхилла (S. quitoense). Семейство пасленовые также включает перцы (Capsicum annuum, Capsicum Frutescens). В предпочтительном варианте осуществления реципиент - семейство Solanaceae. В более предпочтительном варианте осуществления реципиент - вид S. lycopersicum. Желательно, чтобы реципиент культивируемый томат вида S. lycopersicum, то есть линия или разнообразие, приносящее высокие урожаи, такие как плоды по меньшей мере 50 г среднего веса или более, например по меньшей мере 80, 90,100, 200, 300 г или даже до 600 г (томаты мясистого типа). Кроме того, маленькие виды, такие как томаты черри или коктейльные томаты, охватываются, как и наполненные мякотью томаты, такие как Nunhems разнообразие Intense, например, с нехваткой геля в семенной камере. Растение-реципиент томата может быть определено или не определено различными размерами и формами плодов, такими как типRoma, тип гроздь, круглый тип. Это может быть переработанный тип томата или свежий рыночный тип. Также оба, как открытоопыляющиеся растения, так и гибриды, охватываются здесь. В одном из вариантов осуществления засухоустойчивое растение томата - это гибрид F1 растения, выращенного из гибридных семян F1. Для того чтобы создать F1 гибридные семена трансгенного растения согласно данному изобретению, две инбредные родительские линии могут быть созданы, каждая из которых содержит копии трансгена в геноме. Когда эти растения перекрестно опылялись, F1 семена были собраны, они производят трансгенные F1 гибридные растения с высокой урожайностью и засухоустойчивостью из-за трансгена. Варианты, описанные для "реципиента" растения, также относятся к нетрансгенным мутантным растениям, описанным здесь, в которых вместо трансгенов мутантный аллель SlPP2C1 присутствует эндогенно. Другие подходящие реципиенты - другие виды овощей и различные виды сочных фруктов (виноград, персики, сливы, клубника, манго, папайя и др.). Также Cucurbitaceae, например, дыня (Citrullus lanatus, Cucumis Melo) и огурцы (Cucumis sativus), и тыквы, и кабачки (Cucurbita) - подходящие реципиенты. Точно также Rosaceae - подходящие реципиенты, таких как яблоки, груши, сливы и т.д. Также полевые культуры с повышенной засухоустойчивостью представлены согласно данному изобретению. Например, маис/кукуруза (виды Zea, например, Z. mays, Z. diploperennis (chapule), Zea luxurians (Guatemalan teosinte), Zea mays subsp. huehuetenangensis (San Antonio Huista teosinte), Z. mays subsp.(Oryza species, например, О. sativa indica группа культивара или japonica группа культивара), кормовые травы, просо американское (Pennisetum spp. например, P. glaucum). Другие реципиенты включают декоративные виды (например, розы, петунии, хризантемы, лилии,герберы видов), древесные деревья (например, виды Populus, Salix, Quercus, Eucalyptus), например, волоконные виды, хлопок, лен (Linum Usitatissimum) и конопля (Cannabis sativa). В принципе, любой вид растений сельскохозяйственных культур подходит. Хлебные злаки или- 19025000 культивируемые растения относятся к видам растений, которые культивируются и разводятся людьми и исключает сорняки, такие как Arabidopsis THALIANA или дикие родственные формы, такие как томатные родственные формы Solarium pennellii, Solarium chilense, Solarium chmielewskii, Solariumhabrochaites, Solarium pimpinellifolium и др. (хотя мутантные аллели SlPP2C1 могут быть получены из таких растений и перенесены в культивируемые томаты методами разведения, см. дальше). Культурное растение может быть выращено для пищевых целей (например, овощные культуры и полевые культуры) или для декоративных целей (например, производства цветов для резки, травы для газонов и т.д.). Культурные растения, как определено здесь,- это также растения, из которых получают непродовольственные товары, такие как масло для топлива, пластиковые полимеры, фармацевтическую продукцию, пробки,волокна и тому подобное. Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения трансгенные растения, включающие транскрипцию регуляторным элементом (в частности, промотором, как описано выше), функционально связаны с молекулой нуклеиновой кислоты, которая при транскрипции способна заставить приглушить экспрессию эндогенного SlPP2C1 гена в клетках реципиента. Конструкция химерных генов и векторов, желательно стабильное, введение SlPP2C1 сайленсинга генов в геном клетки-реципиента, как правило, известны в науке. Для создания химерного гена смысловая и/или антисмысловая SlPP2C последовательность функционально связана с промотором, подходящим для экспрессии в клетке-реципиенте, используя стандартные методы молекулярной биологии. Промотор, возможно, уже может присутствовать в векторе так, чтобы нуклеиновая последовательность просто вставлялась в вектор на выходе из последовательности промотора. Вектор затем используют для трансформации клеток реципиента и химерного гена, вживляют в ядерный геном или в пластид, митохондриальный геном или геном хлоропластов, и выражалась там с помощью подходящего промотора(например, Me Bride и др., 1995 Bio/Technology 13, 362; US 5693507). Полученное трансформированное растение может быть использовано в обычной схеме селекции для получения более трансформированных растений с теми же характеристиками или введена часть гена в другие разновидности одного и того же или родственных видов растений. "Элитное событие" может быть выбрано, это трансформация с трансгеном, вставленным в определенном месте в геноме, что приводит к хорошей экспрессии желаемого фенотипа (например, оптимальному сайленсингу и засухоустойчивости). В одном из вариантов осуществления изобретения желательно усилить потерю воды, то есть уменьшить засухоустойчивость конкретных тканей и/или снизить чувствительность ABA конкретных тканей, например фруктов, сверхэкспрессией SlPP2C1, по меньшей мере, в таких тканях. Например, для получения плодов (например, томатов) с усиленной потерей воды и, следовательно, более прочной мякотью фруктов и/или усилением вкуса, фруктово-специфический или фруктово-предпочтительный промотор подходит, который функционально связан с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональный SlPP2C белок (SEQ ID NO: 2 или вариант. Чтобы придать экспрессию плодам,плод томата и очищающий специфический промотор бета-галактозидаза II (Smith и др., 1998, Plant Physiol 117.: 417-23), или томатный эпикутикулярный восковой промотор LeCER6 (Vogg и др., 2004, см. выше) могут быть использованы. Кожура плода или эпидермальный промотор могут быть идентифицированы и изолированы одним специалистом в науке с помощью микрочипов и подтверждения трансформации слияний промотора гена-репортера. Такие промоторы могут быть также использованы для SlPP2C1 сайленсинга в определенных тканях, таких как плоды. Трансгенные растения или их части, в которых SlPP2C1 приглушен, имеют значительно усиленную засухоустойчивость. Значительно усиленная засухоустойчивость (как описано выше) используется здесь для обозначения усиленной способности трансформированных клеток (по сравнению с диким типом или контрольными трансформированными клетками) переносить один или несколько периодов засухи (лишение воды/истощение, приводящее, например, к видимым симптомам увядания листьев контрольных растений), как описано выше. Желательно, чтобы растения были способны к восстановлению в дальнейшем, что ведет к снижению общей потери урожая, поскольку все больше растений выживают через m и/или урожай из сохранившихся растений существенно не снижается. Значительно усиленная засухоустойчивость может быть оценена в контролируемых условиях (теплица или камеры роста), как описано выше или используя эквивалентные методы. Например, альтернативный метод заключается в следующем: по меньшей мере около 10 трансформированных клеток в трансформации и не менее 10 контрольных растений находятся различные временные периоды (от нескольких часов до 1-4 недель и более) в окружающей среде без полива, до увядания листьев или потери тургора вызвана на контрольных растениях, а затем и полива растений, например, вновь, по меньшей мере, 1 неделю, 2 недели или больше, а восстановление фенотипа анализируется. Трансформированные клетки с усиленной засухоустойчивостью выживают по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7 дней, предпочтительно по меньшей мере на 2-5 дней без воды дольше, чем контрольно-трансформированные клетки (например, трансформированные с пустым вектором), или растения дикого типа делают в тех же условиях,и которые показывают необратимые повреждения тканей. Альтернативно, % выживаемости может быть рассчитан на определенный период времени, в которой засухоустойчивые растения имеют % выживае- 20025000 мости, который составляет не менее 10, 20, 30% и более, выше, чем в контрольной группе. Это альтернативный метод может также использоваться для определения того, имеют ли мутантные растения (т.е. нетрансгенные растения в составе одного или нескольких мутантных аллелей SlPP2C1) значительно усиленную засухоустойчивость. Известно, что когда мутантные растения анализируются на их фенотип,контрольные растения предпочтительно находятся около изогенных линий мутанта, который включает в себя дикий тип (типы) аллели. Период лишения воды/стресса и период восстановления может меняться в зависимости от вида растения. Например, в рисе 9,5 ч нехватки воды, за которыми следуют 10 дней восстановления (полива), подходят для определения того, имеет ли линия растения или трансформация усиленную засухоустойчивость по сравнению с контрольной группой, а процент выживаемости значительно увеличивается в засухоустойчивой линии (см., например, Zheng и др. Biochemical and Biophysical Research Communications 2009, 985-989). В конце концов, полевые испытания используются, чтобы показать, что трансформированные клетки (или мутантные растения описаны далее ниже) имеют значительно усиленную засухоустойчивость по сравнению с растениями дикого типа. Как уже упоминалось, трансформированные клетки с оптимальным уровнем сайленсинга могут быть выбраны, например, анализом количества копий (Южный блот анализ), уровни мРНК транскрипции (например, RT-PCR с использованием SlPP2C1 пары праймеров), либо путем анализа наличия и/или уровеня SlPP2C1 белков в различных тканях (например, SDS-PAGE, ELISA анализы и т.д.). Получаются оптимальные трансгенные линии, которые затем используются для дальнейшего пересечения/обратного скрещивания/самоопыления до высокой исполнительской элитной линии со стабильным трансгеном. В одном из вариантов осуществления представлены особенности трансгенных семян, полученных из таких растений, которые могут быть реализованы как "засухоустойчивые". Трансформированные клетки, выражающие один или несколько генов SlPP2C1 согласно данному изобретению, могут также содержать другие трансгены, такие как другие гены с засухоустойчивостью или с устойчивостью к другим биотическим или абиотическим стрессам. Для получения таких растений с "уложенными" трансгенами другие трансгены могут быть или интрогрессированы в SlPP2C1 трансформированные клетки, или трансформированные клетки могут быть преобразованы в дальнейшем с одним или несколькими другими генами, или же несколько химерных генов могут использоваться для преобразования растительной линии или разновидности. Например, несколько химерных генов могут присутствовать на одном векторе или могут присутствовать на различных векторах, которые совместно трансформированы. В одном из вариантов осуществления следующие гены сочетаются с SlPP2C1 сайленсингом согласно данному изобретению: Гены, кодирующие другие виды AP2/EREBP транскрипционных факторов,желательно те, которые играют важную роль в реакции растений на экологические стрессы, такие как,например, CBF1, CBF2, CBF3 и/или CBF4 кодирование генов из Arabidopsis (Jaglo-Ottosen и др. 1998,Science 280, 104-106, 1998; Kasuga et al. 1999 Nat. Biotechnol. 17, 287-291) или ортологов их других видов(Dubouzet и др., 2003, Plant J. 33: 751), с генами устойчивости к насекомым, такими как Bacillus Thuringiensis токсичными генами (кодирующими инсектицидные белки, таких как cry гены, VIP гены, и т.д. см. http://www.biols.susx.ac.uk/home/ для списка доступных генов), грибковые гены устойчивости, гены устойчивости к гербицидам или другим генам. Уложенные трансформированные клетки могут, таким образом, иметь более широкую экологическую толерантность стресса, например соленость, холодовой стресс, устойчивость к насекомым, патогенный возбудитель, тепловой стресс, нехватку воды и т.д. Целые растения, семена, клетки, ткани и потомства (например, F1, F2 семян/растений и т.п.) любого из трансформированных растений, описанные выше, представлены здесь и могут быть идентифицированы наличием трансгенов в ДНК, например PCR-анализом. Кроме того, "специфические линии" PCR диагностических методов могут быть разработаны, где PCR праймеры основаны на фланкирующей ДНК растения вставленного химерного гена, см. US 6563026. Кроме того, могут быть разработаны конкретные линии AFLP пептидной карты или RFLP пептидные карты, которые определяют трансгенное растение или любое растение, семена, ткани или клетки, полученные оттуда. Известно, что трансгенные растения согласно данному изобретению, не показывают нежелаемые фенотипы, такие как снижение урожайности, уменьшение плодов на растении, усиленная восприимчивость к болезням и нежелательным структурным изменениям (карликовость, деформация) и т.д., и что,если такие фенотипы проявляются в первичных трансформированных клетках, они могут быть удалены обычным методом для разведения и селекции (скрещивание/обратное скрещивание/самоопыления и т.д.). Любое из трансгенных растений, описанных здесь, может быть гомозиготным или гемизиготным для трансгена. Нетрансгенные засухоустойчивые растения и методы их разведения. Вариантом осуществления данного изобретения также является использование нетрансгенных методов, например, систем поколения мутантов-мишеней поколения и идентификации, таких как TILLING подход (Ориентация индуцированных локальных поражений в области геномики, McCallum и др., 2000,Nat Biotech 18:455, и McCallum и др. 2000, Plant Physiol. 123, 439-442, Henikoff и др. 2004, Plant Physiol.- 21025000 135: 630-636 включены сюда по ссылке) и селекция для получения растительных линий, которые включают по меньшей мере одну мутацию в эндогенном аллеле SlPP2C1 и котором растения, составляющие мутантный аллель SlPP2C1 в гетерозиготных или гомозиготных формах, имеют значительно усиленную засухоустойчивость и/или значительно усиленную чувствительность к ABA по сравнению с растениями с нехваткой мутантного аллеля (с аллелем дикого типа(ов) в локусе SlPP2C1). Таким образом, в одном из вариантов осуществления данного изобретения растения, содержащие один или более мутантных аллелей SlPP2C1 в геноме и значительно усиленную засухоустойчивость по сравнению с растениями с нехваткой указанного мутантного аллеля(ей), но включающие аллели дикого типа вместо этого, представлены в настоящем документе, а также части растений (например, собранные плоды, собранные листья и т.д.), семена, клональное разведение таких растений, потомство таких растений, составляющих мутантный аллель."Значительно сниженная чувствительность к нехватке воды" или "значительно усиленная засухоустойчивость" относится к (статистически значимо) снижению симптомов увядания листьев множества растений, включающих мутантный аллель(и) по меньшей мере на 10% по сравнению с контрольными уровнями (например, те же растения с нехваткой мутантного аллеля, таких как, не мутировавшие растения) и может быть, например, проверены, как описано выше, для трансгенных растений или используя эквивалентные альтернативные методы. Вкратце, множество мутировавших растений (преимущественно по меньшей мере 10, 15, 20 или более растений линии, включающей особую мутацию аллеля SlPP2C1) и контрольных растений того же возраста насыщены водой в начале эксперимента и не были политы в течение длительного периода времени, например по меньшей мере около 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 дней или более. Когда у контрольных растений появляются признаки увядания листьев ("легкое увядание" или"умеренное увядание"), все растения оцениваются на наличие признаков увядания листьев с использованием, например, визуальной оценки. Симптомы увядания листьев могут, например, измеряться в соотношении 4:1, а именно "очень увядшие" (4), "умеренно увядшие" (3), "слегка увядшие" (2) или "не увядшие" (1), например. Известно, что мутировавшие растения значительно усиливают засухоустойчивость,если (в среднем) увядание снижается как минимум на 10%, предпочтительно по меньшей мере 20, 30, 40,50, 60, 70, 80, 90 или 100% по сравнению с контрольной группой растений дикого типа. Например, если 10 растений проверены на симптомы увядания (w) на линию, контрольные растения могут иметь средний балл W = 40/10 = 4,0, в то время как засухоустойчивая линия может иметь средний балл W = 36/10 = 3,6 или меньше, например W = 3,4, 3,2, 2,0, 1,4 или 1,0. Альтернативно или в дополнение полевые испытания могут быть использованы для определения того, появляется ли значительно усиленная засухоустойчивость на линии из-за мутировавшего аллеляSlPP2C1. Например, множество растений, включающих особый мутировавший аллель SlPP2C1 (преимущественно по меньшей мере 10, 20, 30 или более растений линии), выращены в поле вместе с контрольными растениями и не были политы в течение длительного периода времени, например по меньшей мере около 1, 2, 3, 4 недель или более. Когда контрольные растения показывают увядание, симптомы увядания могут быть оценены, как описано выше. Альтернативно, % восстановления и/или % выживаемости после того, как они были политы (восстановлены), может быть оценен. Когда увядание листьев или потеря тургора вызвана на контрольных растениях, растения поливают снова (например, 1 неделя, 2 недели и более), а восстановление их фенотипа анализируется. Мутанты с усиленной засухоустойчивостью выживают по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7 дней, предпочтительно по меньшей мере на 2-5 дней без воды дольше, чем контрольные растения (например, дикого типа или близкие изогенные линии) в тех же условиях, и которые показывают необратимые повреждения тканей. Кроме того, % выживаемости может быть рассчитан с засухоустойчивыми растениями мутировавшей линии с (в среднем) % выживания, который увеличивается по меньшей мере на 10, 20, 30 или более по сравнению с контрольной группой. Как упоминалось ранее, другие анализы для засухоустойчивости могут быть использованы. Наиболее подходящий анализ может отличаться для различных видов сельскохозяйственных культур, то есть для томатов другие анализы могут быть подходящими, чем для салата или риса. Например, статистически значимое увеличение в растениях (включающих мутантный аллель), восстанавливающихся после периода засухи, может быть измерено и/или значительное снижение смертности растения после периода засухи может быть измерено в растениях, включающих мутантный аллель по сравнению с растениями с его нехваткой. См. например, методы, описанные в Zheng и др. (2009, см. выше), Yu и др. (2008, см. выше) или Xiong и др. 2006 (см. выше)."Значительно повышенная чувствительность к ABA" может быть проверена, как описано в примерах для трансгенных растений. Таким образом, прорастание семян в среде, содержащей ABA, по меньшей мере на 10, 20, 30, 40, 50, 60% и более, ниже для растений с мутантным аллелем SlPP2C1, чем в контрольной группе с той же концентрацией ABA. Например, 1 или 3 мкМ ABA, 50% семян дикого типа прорастают, в то время как 40, 35, 30% или меньше мутировавших семян прорастают. Таким образом,прорастание семян с мутантным аллелем подавляется в большей степени ABA. Рост корня растения с мутантным аллелем также подавляется в большей степени ABA. Предпочтительно, чтобы растения с фенотипами на засухоустойчивость и/или ABA чувствитель- 22025000 ность, как описано выше, были гомозиготные для мутантного аллеля SlPP2C1, хотя гетерозиготные растения также могут быть с фенотипом, а также могут показывать усиленную засухоустойчивость и/или усиленную чувствительность ABA. Для создания растений, включающих мутантный аллель в гомозиготной форме, самоопыление может быть использовано при необходимости в сочетании с генотипированием (определяя наличие мутантного аллеля, например, PCR методом с использованием специфических праймеров аллеля и/или последовательности). Если TILLING подход используется мутантными растениями (M1), предпочтительно самоопыленные один или несколько раз для создания, например, М 2 популяции или предпочтительно М 3 или М 4 популяции для фенотипа. В М 2 популяциях мутантный аллель находится в соотношении 1 (гомозиготный для мутантного аллеля) к 2 (гетерозиготный для мутантного аллеля): 1 (гомозиготный для аллеля дикого типа). Сегрегация засухоустойчивости должна коррелировать с сегрегацией мутантного аллеля. Растение, включающее мутантный аллель SlPP2C1 или его вариант и повышенную засухоустойчивость, может быть любого вида, как томатная последовательность, указанная в настоящем документе,может быть использована для создания и определения растений, включающих мутации в гомологах и ортологах гена, как описано ниже. Эндогенный SlPP2C1 вариант последовательности нуклеиновых кислот в растениях может быть идентифицирован, затем может быть использован в качестве целевого гена в поколении и/или идентификации растений, включающих SlPP2C1 вариант мутантного аллеля. Таким образом, мутантное засухоустойчивое растение может быть двудольных и однодольных видов. Предпочтительно растение представляет собой культурное растение, хотя это также вариант осуществления для определения мутантных аллелей в диких растениях или некультурных растениях и передачи этих методов путем селекции в культурные растения. В одном из вариантов осуществления растение, содержащее по меньшей мере один мутантный аллель SlPP2C1 (в гомозиготной или гетерозиготной форме) и имеющее значительно усиленную засухоустойчивость (и/или значительно усиленную чувствительность к ABA), относится к семейству Solanaceae,т.е. охватывающий род Solarium, Capsicum, Nicotiana и другие. В другом варианте осуществления - растения рода Solanum, например, охватывающие культивированные томаты, картофель, баклажаны и другие. В одном из вариантов осуществления засухоустойчивые растения картофеля состоят из мутантных аллелей SlPP2C1 (например, StPP2C1 из SEQ ID NO: 14 или ее вариант), кодирующих снижение функции или потерю функции белка (например, снижение функции или потерю функции белка StPP2C1 SEQ IDNO: 15 или е варианта). В особом варианте осуществления - растение из вида S. lycopersicum. Любой S. lycopersicum может быть создан и/или определен по меньшей мере одним мутантным аллелем SlPP2C1 в своем геноме, будучи засухоустойчивым. Растение томата может, таким образом, быть любым культивируемым томатом любого коммерческого сорта, любой линии разведения или пр., это может быть определенным или неопределенным, открыто опыляющимся или гибридом, производящим плоды любой формы и размера. Мутантный аллель, генерируемый и/или определнный, в частности, в растении томатов, относительно совместим для скрещивания, может быть легко перенесен в любое другое растение томата путм разведения (скрещивание с растением, включающим мутантный аллель, а затем выбрав потомство, включающим мутантный аллель). Растение может быть любого вида семейства Solanaceae или рода Solarium, вид которого либо мутировавший для генерирования мутантного аллеля (например, TILLING подход) или в котором одна или несколько физических или спонтанных мутаций в гене SlPP2C1 (или вариант) определены, например,Ecotilling подходом. Мутантный аллель находится в одном из вариантов осуществления, генерирован или определн в культурных растениях, но также может быть получен и/или определен в диких растениях или не культивируемых растениях, а затем перенесен в культурные растения с использованием, например, скрещивания и селекции (возможно использование межвидовых скрещиваний, например, с спасением зародыша для переноса мутантного аллеля). Таким образом, мутантный аллель SlPP2C1 может быть генерированSlPP2C1 ген-мишень или его вариант) и/или определен (спонтанный или природный вариант аллеля) в другие виды Solanum, включающие, например, S. cheesmanii, S. chilense, S. habrochaites, S. chmielewskii,S. lycopersicum x S. peruvianum, S. glandulosum, S. hirsutum, S. minutum, S. parviflorum, S. pennellii, S. peruvianum, S. peruvianum var. humifusum и S. pimpinellifolium, и затем превращен в культивируемое растение Solanum, например Solanum lycopersicum, традиционными методами разведения. Термин "традиционные методы разведения" охватывает здесь скрещивание, самоопыление, селекцию, двойную гаплоидную производительность, спасение зародыша, слияние протопластов и т.д., как известно селекционеру,то есть методы, отличающиеся от генетической модификации, с помощью которой аллели могут быть перенесены. Предпочтительно мутация(и) в аллеле SlPP2C1 приводит растение к тому, что оно имеет значительно усиленную засухоустойчивость и/или значительно усиленную чувствительность к ABA по сравнению с растениями с нехваткой мутантного аллеля(ей) (то есть включающих аллели SlPP2C1 дикого типа), как- 23025000 описано выше. Без ограничения изобретения мутации в SlPP2C1 (SEQ ID NO: 1, или вариантах), либо в соответствующей геномной последовательности (SEQ ID NO: 11 из нуклеотидов от 2676 до 4975 или их вариантов), в результате сниженной функциональности или потери функции белка SlPP2C1, например, через одну базовую транзицию, бессмысленную или несмысловую мутацию, или вставку или удаление одной или нескольких аминокислот или сдвиг рамки в кодирующей последовательности, которая, в свою очередь, приводит к измененному фенотипу. Наличие и тип мутации(ий) могут быть проанализированы с помощью секвенирования генов, используя SlPP2C1 специфические праймеры. "Значительное сокращение" функциональности белков SlPP2C1 предпочтительно определяется косвенно в естественных условиях фенотипом (то есть значительно усиленной засухоустойчивостью) в растениях, гетерозиготных или предпочтительно гомозиготных для мутантного аллеля. Засухоустойчивый фенотип выделяется вместе с мутантным аллелем. Тем не менее, "значительное сокращение" функциональности белков также может быть определено в искусственных условиях путем анализа протеинфосфатазы, в которой мутантнаяSlPP2C1 активность протеинфосфатазы снижается как минимум на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90(уменьшение функции) или 100% (потеря функции мутации). Для этого мутантный аллель клонируется и выражен, например, Е. coli, затем в искусственных условиях анализа фосфатазы как, например, описывает Gosti и др. 1999, Plant Cell 11: 1897-1910, Material and Methods - PP2C Activities, стр. 1907. В одном из вариантов осуществления изобретения представлено растение (предпочтительно растение томата), содержащее одну или несколько мутаций в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 11 (из нуклеотидов от 2676 до 4975), либо в последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере 45, 50,60, 70, 80, 90, 95, 98, 99% или более идентичности последовательности SEQ ID NO: 1 (как определено) или SEQ ID NO: 11 (из нуклеотидов от 2676 до 4975), или в соответствующую геномную последовательность любого из них, где мутация приводит к закодированному SlPP2C1 белку (или варианту) со сниженной активностью (по сравнению с диким типом функционального белка) или неактивности в естественных и/или в искусственных условиях, и где указано, что растение включает в себя значительно усиленную засухоустойчивость по сравнению с растением (предпочтительно томатом), включающий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей дикий вид белка SlPP2C1 (или варианта). В одном из вариантов осуществления изобретения представлено растение (предпочтительно растение томата), в состав которого входят одна или несколько мутаций в нуклеотидной последовательности,кодирующей белок SEQ ID NO: 2, или белок, включающий по меньшей мере 45, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95,98, 99% и более идентичность последовательности SEQ ID NO: 2 (как определено), и где (томат) растение имеет значительно усиленную засухоустойчивость по сравнению с (томат) растением с нехваткой указанной одной или нескольких мутаций. В одном из вариантов осуществления представлены засухоустойчивые растения (предпочтительно томат), включающие мутантный аллель SlPP2C1, отличающийся тем, что мутации с потерей функции или сниженной функцией мутации, закодированного SlPP2C1 белка, указанный белок - это белок, имеющий по меньшей мере 45, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98, 99% или более идентичности последовательности аминокислот SEQ ID NO: 2. Растение (например, растение томата) предпочтительно является гомозиготным растением для мутантного аллеля SlPP2C1. Мутантные растения можно отличить от немутантов молекулярными методами, такими как мутация(и), присутствующие в SlPP2C1 геномной ДНК или РНК (кДНК), белок SlPP2C1 и/или активность белка и т.д., а также измененными фенотипическими характеристикками по сравнению с диким типом. Мутантный аллель может быть перенесен в другие растения, которые являются совместимыми для размножения с мутантным растением, используя традиционное скрещивание и селекцию. Таким образом,мутантный аллель может быть использован для создания засухоустойчивых сортов томата любого вида,например, видовое разнообразие открытого опыления, гибридные сорта, гибриды F1, вид Roma, вид cherry, определенный или неопределенный виды и т.д. В одном из вариантов осуществления растение (предпочтительно S.Lycopersicum) содержит мутантный аллель SlPP2C1 и усиленную засухоустойчивость, это гибрид F1 растения или семена F1, из которых выращивается растение F1 гибрид. Инбредные родители,чтобы получить F гибрид, предпочтительно оба включают такой же мутантный аллель SlPP2C1 в их геноме в гомозиготной форме. В другом варианте осуществления растение, включающее мутантный аллель SlPP2C1 (например,томат), скрещивают с другим растением того же вида или близкородственных видов для создания гибридных растений (гибридных семян), содержащих мутантный аллель SlPP2C1. Такое гибридное растение также является вариантом осуществления изобретения. Также метод переноса мутантного аллеляSlPP2C1 на другое растение осуществляется, включая предоставленное растение с мутантным аллелемSlPP2C1 в своем геноме, скрещивая указанное растение с другим растением и получая семена указанного скрещивания. Выборочно растения, полученные из этих семян, могут дополнительно самоопыляться и/или скрещиваться и выбирается такое потомство, которое имеет в составе мутантный аллель и усиленную засухоустойчивость. В одном из вариантов осуществления родители, чтобы получить гибрид F1, включают различные- 24025000 мутантные аллели SlPP2C1 в гомозиготной форме, так что гибрид состоит из двух различных мутантных аллелей SlPP2C1. Например, родитель 1 может включать потерею функции мутанта, в то время как родитель 2 включает сниженную функцию мутанта. Гибрид F1 затем содержит один аллель от каждого родителя. Таким образом, также растения томатов, состоящие из двух различных мутантных аллелей SlPP2C1 в SlPP2C1 локусе и имеющие повышенную засухоустойчивость, представлены здесь. Растения, содержащие мутантный аллель SlPP2C1, кодирующий потерю функции или снижение функции белка (например, укороченный белок в результате несмысловой мутации белка, изменение аминокислотной последовательности, в результате чего, например, изменяется каталитический участок,видоизмененное сворачивание и т.д, например, из-за бессмысленной мутации, мутации сдвига рамки и/или мутации участков сплайсинга), могут быть получены и/или определены с помощью методов мутагенеза или путем скрининга природных популяций для природных вариантов в аллеле SlPP2C1. В одном из вариантов осуществления изобретения TILLING подход используется для создания таких растений и/или определения такого мутагенеза, индуцирующего мутации, и/или EcoTILLING подход используется для определения растений, таких как дикие растения или некультивируемые растения, включая естественные (спонтанные) мутации в генах SlPP2C1, которые затем могут быть переданы в культивируемые растения традиционными методами селекции. Тем не менее, любой другой способ мутагенеза может быть использован, и понятно, что оба индуцированных человеком мутанта, UV или рентгеновский мутагенез, химические мутагены и т.д., и спонтанные мутанты гена SlPP2C1, генерируемые в или переносимые в культивируемые растения и сельскохозяйственные культуры традиционной селекцией, представлены здесь. В особом варианте осуществления согласно данному изобретению засухоустойчивые растительные мутанты - растения других видов, чем томаты, например однодольное культивируемое растение, предпочтительно рис, кукуруза, пшеница или ячмень, включающее мутантный аллель SlPP2C1 в своем геноме. При использовании таких методов, как TILLING подход, усиление фрагмента гена-мишени может быть основано на SEQ ID NO: 1 или их фрагментах (например, с использованием специфических и вырожденных праймеров, например, разработанных на основе одного или более консервативных доменовSlPP2C1) или может сначала изолировать SlPP2C1 ортолог и состав базового праймера на ортологичной последовательности.TILLING подход (ориентация индуцированных локальных повреждений в геномах) - это общий обратный генетический метод, который использует традиционные методы химического мутагенеза для создания библиотек мутировавших единиц, которые затем подвергаются высокому пропускному скринингу для обнаружения мутаций. TILLING подход сочетает химический мутагенез с мутацией скриннинга групп PCR продуктов, что приводит к изоляции бессмысленных и несмысловых мутантных аллелей генов-мишеней. Таким образом, TILLING подход использует традиционный химический мутагенез (например, EMS или MNU мутагенез) или другие методы мутагенеза (например, излучения, такие какUVUV), а затем скрининг с высокой пропускной способностью для мутаций в определенных генахмишенях, таких как SIPP2C1 согласно данному изобретению. S1 нуклеазы, такие как CEL1 или ENDO1,используются для расщепления гетеродуплексов мутантного и дикого типа ДНК мишени и выявления расщепления продуктов с использованием, например, электрофореза, таких как LI-COR гелевой анализатор системы, см., например, Henikoff и др. Plant Physiology 2004, 135: 630-636. TILLING подход был применен во многих видах растений, таких как томат (см. http://tilling.ucdavis.edu/index.php/TomatoTilling), рис (Till и др. 2007, ВМС Plant Biol 7: 19), Arabidopsis (Till и др. 2006, Methods Mol Biol. 127-35), Brassica, кукуруза (Till и др. 2004, BMC Plant Biol 4: 12), и т.д. Также EcoTILLING подход, в котором мутанты в природных популяциях не обнаружены, широко используется, см. Till и др. 2006 (NatProtoc 1: 2465-77) и Comai и др. 2004, Plant J 37: 778-86). В одном из вариантов осуществления классический TILLING подход изменяется и вместо энзима, основанного на мутантном обнаружении (энзимное пищеварение с однонитевой специфической нуклеазой и высоким разрешением электрофореза полиакриламидного геля), две разные системы обнаружения высокой пропускной способности могут быть использованы, которые ранее использовались только у людей. Эти протоколы обнаружения адаптации КЧКЭ (конформации чувствительного капиллярного электрофореза, см. Rozycka и др. 2000, Genomics 70,34-40) или HRM (высокое разрешение плавления, см. Clin Chem 49, 853-860). См. также примеры. Таким образом, здесь представлены нетрансгенные растения, семена и ткани, содержащие мутантный аллель SlPP2C1 в одной или нескольких тканях и в составе одного или нескольких фенотипов, предоставляемых сниженной функцией или потерей функции белка SlPP2C1 согласно данному изобретению(например, усиленная засухоустойчивость, как описано выше) и методы для создания и выявления таких растений. Также метод для создания и/или выявления мутантного аллеля SlPP2C1 подходит для создания засухоустойчивых растений и/или метод для создания растения, включающего усиленную засухоустойчивость, предусмотрен и включает следующие этапы:(a) мутирование семян растений (например, с помощью EMS мутагенеза) для создания M1 популяции или предоставления мутировавших семян растений или предоставления растений, включающих естественные вариации,- 25025000(b) выборочное самоопыление растений (а) один или несколько раз для создания М 2, М 3 или М 4 семей,(c) подготавка ДНК растений (а) или (b) и объединение ДНК особей,(d) PCR-амплификация всех или части SlPP2C1 гена-мишени (геномной или кДНК) или ее варианта из ДНК групп,(e) обнаружение присутствия мутировавшего аллеля(ей) SlPP2C1 в продуктах PCR-амплификации и, тем самым, в ДНК группах,(f) выбор соответствующих отдельных растений, имеющих мутантный SlPP2C1 аллель(и),(g) выборочное секвенирование мутантного аллеля SlPP2C1 растения;(h) фенотипирование растений (f) или их потомства для засухоустойчивости и/или ABA чувствительности и(i) выбор засухоустойчивых растений и, возможно,(j) разведение с растением (i) для создания культивируемых засухоустойчивых растений, имеющих хорошие агрономические характеристики. Этап (а) также может просто предоставить такие растения. На этапе (с) альтернативно растительная ткань может быть сгруппирована, и ДНК выделена из группы образцов ткани для того, чтобы образовать ДНК группу разных единиц. На этапе (d) праймеры, которые усиливают все или часть гена-мишени SlPP2C1 (SEQ ID NO: 1) или его варианта, разработаны с использованием стандартных методов, таких как CODDLE(http://www.proweb.org/doddle). Праймеры могут быть разработаны для усиления, например, по меньшей мере около 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 800 bp или по меньшей мере до 1000 bp или более генамишени, то есть SEQ ID NO: 1, или варианта SEQ ID NO: 1, или геномной последовательности SEQ IDNO: 1 (т.е. дополнительно содержащий интроны, например, для томата SEQ ID NO: 11 из нуклеотидов 2676-4975). Геномная последовательность может быть легко изолирована и е последовательность определена, как описано в примерах. Предпочтительно фрагмент, содержащий весь или часть закрепленного домена белка SlPP2C1, усиливается праймером, например, С-терминальным доменом или предполагаемым магнием, связывающим описанный домен. Для видов растений, кроме помидоров, желательно сначала определить последовательность эндогенного гена SlPP2C1 для того, чтобы быть в состоянии проектировать хорошие последовательности праймеров. Последовательность может быть идентифицирована in silico или, например, разработанными вырожденными PCR праймерами и усиливающими весь или часть варианта гена SlPP2C1 (ортолог генаSlPP2C1 томата) генома растений. Последовательность эндогенного гена SlPP2C1 затем предпочтительно использована для разработки подходящих праймеров для TILLING подхода. Этап (е) может использовать S1 нуклеазы, такие как CEL1, чтобы обнаружить несоответствие между продуктом PCR амплификации, то есть между диким типом SlPP2C1 PCR продукта и мутантомCSCE или HRM для обнаружения. В CSCE гомодуплексах (WT/WT или мутант/фрагменты мутанта) формируются и гетеродуплексы (мутант/WT фрагменты). Из-за сформированного несоответствия гетеродуплексы мигрируют с другой скоростью, чем гомодуплексы, через капилляры, что позволяет идентифицировать группы, содержащие мутацию в пределах фрагмента-мишени. HRM также является неэнзимной технологией. В PCR-амплификации фрагменты гена-мишени LCgreen Plus+ TM молекулы включены между гибридизированной парой оснований двухцепочной молекулы ДНК, которые, когда найдены в молекуле, будут излучать флуоресценцию. LightScanner фиксирует интенсивность флуоресценции,в то время как пластинка постепенно нагревается. При определенной температуре PCR продукты начинают плавиться, выделяют LCgreen Plus+ TM, в которой флуоресценция уменьшается. ДНК группы, содержащие мутации (гетеродуплексы), определены, так как их температура плавления ниже, чем у гомодуплексов. Этап (j) может включать в себя традиционные методы разведения и фенотипические и/или маркерные методы селекции. Много различного видового разнообразия может быть получено таким образом. Обширные протоколы для проведения TILLING подхода были опубликованы, см., например,http://blocks.fhcrc.org/%7Esteveh/TILLINGpublications.html и Till и др. (2006) Nature Protocols 1:24652477; Till и др. (2006) Methods Mol Biol. 323:127-135 и Till и др. (2003) Methods Mol Biol. 236:205-220,включенные в данный документ в качестве ссылки. После того как растение, включающее мутантный аллель, который дает желаемый фенотип, был определен, этот аллель может быть передан другим растениям традиционными методами селекции, например, путем скрещивания растений с другим растением и сбором потомства скрещивания. На этапе (j) аллель, таким образом, может быть использован для создания растений, устойчивых к засухе, которые обеспечивают хорошие агрономические характеристики. Как уже упоминалось, следует понимать, что другие методы мутагенеза и/или селекции могут также быть использованы для создания мутантных растений согласно данному изобретению. Семена могут быть, например, облучены или химически обработаны для получения мутантных популяций. Кроме того,прямое секвенирование гена SlPP2C1 может быть использовано для скриннинга мутировавших расти- 26025000 тельных популяций для мутантных аллелей. Например, Keypoint скрининг основан на последовательности метода, который может быть использован для идентификации растений, включающих мутантный аллель SlPP2C1 (Rigola и др. PloS One, March 2009, Vol. 4(3):e4761). Таким образом, представлены нетрансгенные мутантные растения, которые производят более низкие уровни (функциональные) белка SlPP2C1 дикого типа в одной или нескольких тканях (в частности,по меньшей мере, в ткани листа) или которые полностью лишены функционального белка SlPP2C1 в определенных тканях, которые производят нефункциональный белок SlPP2C1 в некоторых тканях, например, в связи с мутациями в одном или нескольких эндогенных аллелях SlPP2C1. Эти мутанты могут быть получены с помощью методов мутагенеза, таких как TILLING подход или его вариантов, или они могут быть определены EcoTILLING подходом или любым другим способом. Аллели SlPP2C1, кодирующие нефункциональные или со сниженной функциональностью белки SlPP2C1, могут быть выделены, упорядочены или могут быть перенесены на другие растения традиционными методами селекции. В одном из вариантов осуществления растение с усиленной засухоустойчивостью из-за мутантного аллеля растений томатов 2, 3, 5, 7 или 10 примера 4, присутствующих в геноме, представлено здесь, также потомство и его части, включающие аллель. Представлена любая часть растения или его засухоустойчивого потомства, в том числе включая собранные плоды, собранные ткани или органы, семена, пыльцу, цветы и т.д. Также предусмотрены комплекты для определения того, содержит или нет растение мутантный аллель SlPP2C1 согласно данному изобретению. Такой комплект может включать в себя PCR-праймеры и зонды выявления аллелей в образце ткани. Растения (и соответствующее семя), включающее один или несколько мутантных аллелей SlPP2C1 согласно данному изобретению могут быть обозначены и/или помечены как имеющие (повышенную)"засухоустойчивость" или как "сопротивление к засухе". Предпочтительно засухоустойчивые мутантные растения также имеют хорошие другие агрономические характеристики, т.е. они не сократили количество плодов и/или снизили урожайность по сравнению с растениями дикого типа и/или качество продукта не ухудшилось. Предпочтительно урожайность и/или выживаемость таких растений выше как при долгосрочном, так и/или краткосрочном стрессе засухи. В предпочтительном варианте осуществления растение - растение томата и плод - плод томата, такой обработанный томат, свежий рыночный томат любой формы, или размера, или цвета. Таким образом,также представлены собранные продукты растений или части растений, включающие один или два мутантных аллеля SlPP2C1. Это включает в себя переработанные продукты, такие как томатная паста, кетчуп, томатный сок, разрезанные плоды томата, консервированные овощи, сухофрукты, очищенные фрукты и т.д. То же самое относится к другим видам растений. Растения или части растений, включающие один или несколько мутантных аллелей SlPP2C1, являющиеся засухоустойчивыми, могут быть сельскохозяйственными культурами (например, рис, кукуруза, соя, пшеница, ячмень, рожь, сорго, капуста и др.) или овощными культурами (например, помидоры,огурцы, лук, морковь, капуста, цветная капуста, брокколи, арбуз, дыня, салат, лук-порей, шпинат, редис,картофель, артишоки, маш-салат, тыква, кабачки, фасоль, горох, перец и др.). Различная экспрессия в естественных условиях аллелей SlPP2C1 дикого типа (или вариантов, в том числе ортологов) также может привести к растениям, имеющим значительно усиленную засухоустойчивость. Например, аллели SlPP2C1 дикого типа, включающие промоторы, имеют различный характер экспрессии, особенно сниженной экспрессии, чем аллели, найденные в культивируемых растениях томата,могут быть определены (например, в диких родственных формах томатов) и интрогрессированы (перенесены через скрещивание) в культивируемые томаты. Или аллели, имеющие мутации в промотореSlPP2C1, могут быть определены или генерированы и использованы для генерации растений, имеющих усиленную засухоустойчивость. ПоследовательностиSEQ ID NO: 1: кДНК аллеля SlPP2C1 дикого типа из томата.SEQ ID NO: 2: белковая последовательность белка SlPP2C1, кодируемого SEQ ID NO: 1.SEQ ID NO: 5 и 6: пара праймеров для усиления актиновых кДНК.SEQ ID NO: 7 и 8: пара праймеров для усиления убиквитиновых кДНК.SEQ ID NO: 9 и 10: пары праймеров для усиления SlPP2 С 1 кДНК по всей длине.SEQ ID NO: 11: геномная последовательность аллеля SlPP2C1 дикого типа из томата; регуляторные элементы транскрипции (например, элементы промотора) включены в нуклеотиды 1-2675; белок, кодирующий последовательности (экзонов), состоит из нуклеотидов 2676-3419 (экзон 1), 4247-4351 (экзон 2) и 4632-4975 (экзон 3). Первичная РНК представлена в 2591-5050 нуклеотидах.SEQ ID NO: 12 и 13: праймеры, используемые для обнаружения мутаций в SlPP2C1 мутировавших растениях томата (см. пример 4).- 27025000 Фиг. 1: А) Относительные мРНК уровни SlPP2C1 листа (темные полосы серого цвета) трансгенных линий (Т 6OE, Т 34OE, Т 55OE) в 25 раз выше по сравнению с диким видом (WT). Б) Относительные мРНК уровни SlPP2C1 в опыленных завязях (светло-серые полоски) в Т 55 ОЕ похожи на дикий тип, в то время как уровни в Т 6OE и Т 34OE ниже по сравнению с диким типом. С) Относительные мРНК уровни в трансгенных линиях T12CS и T35CS ниже, в листьях (темные полосы серого цвета) и неопыленных завязях(светло-серые полоски) по сравнению с диким типом Т 18. Средние значения биологических реплик показаны SE, уровни дикого типа были сведены к одному. Фиг. 2: А) Прорастание семян замедлено меньше ABA в сверхэкспрессии линий Т 6OE и Т 55OE и более в подавлении линий T12CS и T35CS T6 по сравнению с диким типом (WT). Линия Т 34OE ведет себя нетипично. Темно-серые линии составляют линии сверхэкспрессии, светло-серые линии представляют совместное подавление линий и черная линия представляет дикий вид. B) Рост корней замедляется больше ABA в совместном подавлении линий T12CS (белые) и T35CS (светло-серые) по сравнению с Т 18(темно-серые) и диким типом (черные). С) Рост корней замедляется меньше ABA в сверхэкспрессии линий T34OE (темно-серые), но более в Т 6OE (белые) и Т 55OE (светло-серые) по сравнению с диким типом(черные). Средний процент роста корней представлен SD. D) Через девять дней после начала полива,сдержанные подавленные линии не завяли совсем, в то время как дикий вид показывает умеренное увядание и линии сверхэкспрессии показывают сильное увядание. Следующие неограничивающие примеры описывают использование SlPP2C1 генов для модификации фенотипов растения. Если не указано иное в примерах, все рекомбинантные ДНК технологии осуществляются согласно стандартным протоколам, как описано в Sambrook и др. (1989) Молекулярное Клонирование: Лабораторный Справочник, Второе издание, Cold Spring Harbor Laboratory Press, и Sambrook и Russell (2001) Молекулярное Клонирование: Лабораторный Справочник, третье издание, Cold SpringHarbor Laboratory Press, Нью-Йорк, и в томах 1 и 2 Ausubel и др. (1994) Текущие Протоколы в Молекулярной Биологии, Текущие Протоколы, США. Стандартные материалы и методы для молекулярной работы с растениями описаны в Молекулярной Биологии Растений Labfax (1993) R.D.D. Croy, совместно опубликованной ООО BIOS Scientific Publications (Великобритания) и Blackwell Scientific Publications(Великобритания). Примеры Пример 1. Выделение и характеристика SlPP2C1. 1.1. Материалы и методы. 1.1.1. Растительный материал. Растения томатов (Solarium lycopersicum L. cv. Moneymaker) выращивали в тепличных условиях с марта по октябрь под 16/8-часовым ритмом дня и ночи. Дополнительное освещение (600 Вт, натриевые лампы высокого напряжения, Philips, Эйндховен, Нидерланды) включали ниже 200 W/m2 и выключали около 300 W/m2. Температура находилась выше 20 С в течение светового периода и 17 С в темное время суток с PRIVA Интегро версией 724 системы. Растения поливали ежедневно и удобряли каждую неделю. Листья и завязи тканей разрезали, формируя взрослые растения томатов, и корни, и гипокотили от 10 дневных проростков. Ткани были собраны с 11.00 часов до 13.00 часов, а непосредственно замораживали в жидком азоте. 1.1.2. SlPP2C1 экспрессия генов, анализ и Q-PCR. кДНК-AFLP была предварительно сформирована, как описано в Vriezen и др. (2008, НьюPhytologist, 177:60-76, см. стр. 61 и 62), по сравнению с опылнными завязями гибберелловой кислоты(GA3) и обработанными завязями. Различно выраженный фрагмент 326 bp был вырезан из геля и затем элюирующая ДНК была вновь усилена в тех же условиях и использована для селективного усиления. Фрагмент был привязан в Т-образном состоянии EcoRV, переработанном phagemid pBluescriptII SK (+)(Stratagene, Ла-Хойя, Калифорния, США) и упорядочен, используя CEQ DTCS Start Kit и CEQ2000 DNA системный анализ (Beckman Coulter, Фуллертон, Калифорния, США). Для количественного PCR анализа РНК выделена с Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Фотометрические измерения РНК были сделаны, чтобы уравновесить РНК концентрацию различных образцов. Равные количества РНК ДНКазы обработаны РНКазой свободной ДНКазы (RQ1, Promega, Madison,США). РНК (0,5 мкг), была обратно транскрибирована (RT) с использованием кДНК комплекта синтеза(iScripttm, Bio-rad Laboratories, Hercules, CA, USA) следующего протокола. В режиме реального времени количественные PCR (Q-PCR) праймеры для количественных SlPP2C1 мРНК уровней были разработаны с использованием компьютерных программ (Beacon Designer Software,Premier Biosoft International, CA, USA) и проверены кросс-гомологии с другими РР 2 С последовательностями.PCR реакции предварительно были выполнены в 96-м термоциклером (Bio-Rad iCycler, Bio-Rad Laboratories) с использованием SYBR зеленого микса (IB-SYBR Green supermix, Bio-Rad Laboratories). Программа PCR начата с 3 мин при температуре 95 С, затем 40 циклов, состоящих из 15 с при температуре 95 С и 45 с при 57 С и, наконец, температура плавления усиленного продукта была определена для проверки наличия специфического продукта. Пять мкл 25-кратной разбавленной кДНК использовали в каждом образце. Технические и биологические реплики были всегда предварительно выполнены. И актин мРНК, и убиквитин были использованы в качестве внутренних генов контроля. Разбавленная ДНКаза обработанной РНК была также включена в Q-PCR в качестве контроля для геномной ДНК. 1.1.3. Растительная трансформация. Для создания трансгенных SlPP2C1 линий кодирующий участок SlPP2C1 (SEQ ID NO: 1) PCR усилен и клонирован в pDONR вектор. PCR-праймеры, используемые для усиления целой SlPP2C1 кДНК,были созданы следующим образом: Используя Gateway клонирование, SlPP2C1 был клонирован промотором 35S мозаичного вируса цветной капусты в pAD625 вектор (de Folter и др. 2006, The Plant Journal 47: 934-946), который также содержит терминатор нопалинсинтетазы (3'nos). Трансгенные растения томатов были генерированы путем Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации и тканевой культуры, как описано в DeJong и др. (2008, см. выше). 1.1.4. Эксперимент нехватки воды. Вегетационные сосуды дикого типа и SlPP2C1 трансгенные линии одного и того же возраста и размера были насыщены водой в начале эксперимента. Несколько растений были использованы на линии. Растения не поливали в течение десяти дней. Увядание листьев было оценено визуально, когда первые признаки увядания (небольшое или умеренное увядание) было замечено в диком виде контрольной группы на день 8 и 9 соответственно. Шкала 1-4 была использована: 4 - сильно завяли, 3 - умеренно завяли, 2 немного завяли и 1 - нет признаков увядания листьев. Фотографии, представленные на фиг. 2D, были сделаны через девять дней после начала эксперимента. 1.1.5. Анализ прорастания семени и анализ роста корней. Прорастание семян. Семена трансгенных линий собирали, сушили и хранили при температуре 4 С. Семена были стерилизованы в разбавленном хлорном растворе (4% (w/v) гипохлорит), содержащий 0,1% (v/v) Твин-20,промыты и посеяны на 1/2MS среде (2,25 мг MS базальной соли с 1% (w/v) сахарозой и Nitsch витаминами, Duchefa, Haarlem, the Netherlands), содержащие 0, 1, 3, 10 или 30 мкМ ABA (Acros, Geel, Бельгия). По меньшей мере 40 семян в ABA концентрации были использованы. Пластинки были помещены в камеру роста при температуре 25 С при 16/8-часовом дне и ночи. Прорастание семян (появление корешков) было оценено по истечении десяти дней, и проценты прорастания семян были подсчитаны.