Стабилизированные жидкие и лиофилизированные композиции adamts13

Настоящее изобретение относится к стабильной композиции белка ADAMTS13 для лечения или профилактики болезни или состояния, связанного с дисфункцией ADAMTS13 или фактора фон Виллебранда (VWF). Также предложена лиофилизированная композиция ADAMTS13. Кроме того, предложены способ получения стабильной композиции ADAMTS13, набор, содержащий указанную композицию, и способ лечения и профилактики болезни или состояния, связанного с дисфункцией VWF или ADAMTS13. Перекрестные ссылки на родственные заявки Настоящая заявка претендует на приоритет временной заявки США 61/244353, поданной 21 сентября 2009 г., которая фактически положительным образом целиком включена сюда в качестве ссылки. Заявление относительно прав на изобретения, сделанные в рамках федерально спонсируемых исследований или разработок - не применимо. Ссылка на "Перечень последовательностей," таблицу или приложение с распечаткой компьютерной программы, представленное на компакт-диске - не применимо. Известный уровень техники Белки ADAMTS (дезинтегрин и металлопротеиназа с мотивами тромбоспондина типа I) представляют собой семейство металлопротеиназ, содержащих ряд консервативных доменов, включая цинкзависимый каталитический домен, богатый цистеином домен, дезинтегрин-подобный домен, и по меньшей мере один, а в большинстве случаев - множество повторов тромбоспондина типа I (см. обзор Nicholson et al., ВМС Evol Biol. 2005 Feb 4;5(1):11). Эти белки, эволюционно родственные семействам ADAM и ММР металлопротеиназ (Jones GC, Curr Pharm Biotechnol. 2006 Feb.; 7(1):25-31), являются секретируемыми ферментами, которые были ассоциированы с рядом заболеваний и состояний, включая тромбоцитопеническую тромбогемолитическую пурпуру (ТТР) (Moake JL, Semin Hematol. 2004 Jan;41(1):4-14),расстройства соединительной ткани, раки, воспаление (Nicholson et al.), и тяжелую форму малярии, вызванную Plasmodium falciparum (Larkin et al., PLoS Pathog. 2009 Mar; 5(3): e1000349). Вследствие таких ассоциаций, ферменты ADAMTS были признаны потенциальными терапевтическими мишенями для ряда патологий (Jones GC, Curr Pharm Biotechnol. 2006 Feb;7(1):25-31). Один из членов семейства ADAMTS, ADAMTS13, расщепляет фактор фон Виллебранда (vWF) между остатками Tyr 1605 и Met 1606. Потеря активности ADAMTS13 была ассоциирована с рядом состояний, таких как ТТР (Moake JL, Semin Hematol. 2004 Jan; 41(1): 4-14), острое и хроническое воспалениеPlasmodium falciparum (Larkin ef al., PLoS Pathog. 2009 Mar; 5(3): e1000349). Тромбоцитопеническая тромбогемолитическая пурпура (ТТР) представляет собой расстройство,характеризующееся тромботической микроангиопатией, тромбоцитопенией и микрососудистым тромбозом, который может вызывать различные степени ишемии и инфаркта тканей. Клинически, пациенты с ТТР диагностируются по таким симптомам, как тромбоцитопения, шизоциты (фрагменты эритроцитов) и повышенные уровни лактатдегидрогеназы (Moake J L. Thrombotic microangiopathies. N Engl J Med. 2002; 347: 589-600; Moake J. L. von Willebrand factor, ADAMTS-13, and thrombotic thrombocytopenic purpura.concepts in von Willebrand disease. Annu Rev Med. 2005; 56:173-191). В 1982 г. Moake et al. обнаружили необычно крупные мультимеры фактора фон Виллебранда (ULvWF) в плазме пациентов с хронической рецидивирующей ТТР (Moake J L, Rudy С К, Troll J H, WeinsteinM J, Colannino N M, Azocar J, Seder R H, Hong S L, Deykin D. Unusually large plasma factor VIII: von Willebrand factor multimers in chronic relapsing thrombotic thrombocytopenic purpura. N Engl J Med. 1982; 307:1432-1435). Связь между UL-vWF и ТТР получила подтверждение благодаря независимым результатам Furlan et al. и Tsai and Lian, показывающим, что большинство пациентов, страдающих ТТР, имеют дефицит металлопротеазы плазмы, которой, как теперь известно, является ADAMTS13, расщепляющаяacid sequence of purified von Willebrand factor-cleaving protease. Blood. 2001; 98:1654-1661). Было показано, что мутации гена ADAMTS13 вызывают ТТР (Levy G G, Nichols W. С., Lian E. С.,Foroud T., McClintick J. N., McGee В. М., Yang A. Y., Siemieniak D. R., Stark K. R., Gruppo R., Sarode R.,-1 024267H. M. Mutations in a member of the ADAMTS gene family cause thrombotic thrombocytopenic purpura. Nature. 2001; 413:488-494). Идиопатическая ТТР, часто вызываемая аутоантителами, ингибирующими активность ADAMTS-13, является более распространенным расстройством, встречающимся у взрослых и детей старшего возраста и может рецидивировать с регулярными интервалами у 11-36% пациентов (TsaiHe-нейтрализующие аутоантитела могут также ингибировать активность ADAMTS путем индуцирования клиренса из циркуляции (Scheiflinger F., Knobl P., Trattner В., Plaimauer В., Mohr G., Dockal M.,Dorner F., Rieger M. Nonneutralizing IgM и IgG antibodies to von Willebrand factor-cleaving protease(ADAMTS-13) in a patient with thrombotic thrombocytopenic purpura. Blood. 2003; 102: 3241-3243). Активность ADAMTS13 плазмы у здоровых взрослых меняется в интервале значений от 50 до 178% (Moake J.L Thrombotic thrombocytopenic purpura and the hemolytic uremic syndrome. Arch Pathol Lab Med. 2002; 126:1430-1433). У большинства пациентов с наследственной или приобретенной ТТР, активностьADAMTS13 плазмы отсутствует или составляет менее 5% от нормальной. Без лечения коэффициент смертности превышает 90%, но плазменная терапия снижала смертность до примерно 20% (Moake J. L.von Willebrand factor. Blood. 1989; 73: 2074-2076). После секреции эндотелиальными клетками эти мультимеры UL-vWF расщепляются ADAMTS13 в циркуляции на ряд более мелких мультимеров по специфическим сайтам расщепления в молекуле vWF (Tsai H. M., Nagel R. L., Hatcher V. В., Sussman I. I. Endothelial cell-derived high molecular weight von Willebrand factor is converted into plasma multimer pattern byADAMTS13 расщепляет связь Tyr842-Met843 в центральном домене А 2 зрелой субъединице vWF и требует для проявления активности присутствия цинка или кальция (Dent J. A., Berkowitz S. D., Ware J.,Kasper С. K., Ruggeri Z. M. Identification of a cleavage site directing the immunochemical detection of molecular abnormalities in тип IIA von Willebrand factor. Proc Natl Acad Sci USA. 1990; 87:6306-6310). vWF существует в форме "клубка пряжи" и волокон, как показывает электронная микроскопия (Slayter H., Loscalzomicroscopy и quasi-elastic light scattering. J Biol. Chem. 1985; 260:8559-8563). Кроме того, атомная силовая микроскопия подтверждает, что vWF существует в глобулярной конформации в статических условиях и расправленном нитеобразном состоянии после воздействия сдвиговой нагрузки (Siedlecki С. A., Lestini В.J, Kottke-Marchant K. K., Eppell S. J., Wilson D. L., Merchant R. E. Shear-dependent changes in the threedimensional structure of human von Willebrand factor. Blood. 1996; 88: 2939-2950). Это может также происходить in vivo, когда один конец нити vWF прикреплен к поверхности. Тромбы у пациентов с ТТР состоят из незначительного количества фибрина и преимущественно изvWF и тромбоцитов, что позволяет предположить, что причиной тромбоза является vWF-медиируемая агрегация тромбоцитов (Asada Y., Sumiyoshi A., Hayashi T., Suzumiya J., Kaketani K. Immunohistochemistry of vascular lesion in thrombotic thrombocytopenic purpura, with special reference to factor VIII related antigen. Thromb Res. 1985; 38:469-479). Пациенты с рецидивирующей ТТР имеют сверхкрупные мультимеры в плазме. Мультимеры UL-vWF накапливаются со временем, поскольку персистенция ингибитора (антиADAMTS13 Ab) снижает активность ADAMTS13. Мультимеры UL-vWF являются гиперактивными и разворачиваются в результате воздействия сдвиговой нагрузки, вызывающей агрегацию тромбоцитов,приводящую к интраваскулярному тромбозу (Tsai Н. М. von Willebrand factor, ADAMTS13, and throm-2 024267thrombotic and thrombocytopenic purpura. J Thromb Haemost. 2003; 1:2038-2040; обсуждение 2040-2035). Считается, что присутствие гиперреактивных мультимеров UL-vWF в плазме вследствие дефицитаADAMTS13 может быть ассоциировано с повышенным риском артериального тромбоза, связанного с коронарной болезнью сердца. Соответственно, существует потребность в фармацевтических композициях белков ADAMTS13,пригодных для лечения различных болезней и состояний, ассоциированных с дисфункцией ADAMTS13 и VWF. Настоящее изобретение предусматривает, среди других аспектов, композиции ADAMTS13, пригодные для фармацевтического введения, а также способы лечения субъектов с болезнями или состояниями, ассоциированными с дисфункцией ADAMTS13 и VWF. Краткое описание изобретения В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает композиции ADAMTS13 (А 13), пригодные для фармацевтического введения. Предпочтительно в некоторых вариантах реализации изобретение предусматривает композиции А 13, которые могут храниться на протяжении длительных периодов времени без потери активности или чрезмерного агрегирования. В определенных вариантах реализации,композиции по изобретению могут храниться в течение по меньшей мере 6 месяцев при температуре по меньшей мере до примерно 37 С. В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композициюADAMTS13 (А 13), содержащую: (а) от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В близком аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), в которой композицию лиофилизируют из жидкой композиции,содержащей: (а) от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном аспекте изобретения предусматриваются композиции рекомбинантного ADAMTS13(rA13), пригодные для фармацевтического введения. В некоторых вариантах реализации предложенные тут композиции обладают высокой специфической активностью и являются стабильными при хранении на протяжении длительных периодов времени. В другом аспекте изобретения, предусматриваются композиции, имеющие пониженную димеризацию или агрегацию А 13 и rA13. В определенных вариантах реализации, предложенные тут композиции замедляют образование димеров А 13 и rA13 и агрегацию при хранении на протяжении длительных периодов времени. В некоторых вариантах реализации, такие композиции являются пригодными для фармацевтического введения. В одном аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики расстройства, ассоциированного с образованием и/или присутствием одного или нескольких тромбов и к способу дезинтеграции одного или нескольких тромбов у нуждающегося в этом пациента. Примерами расстройств, ассоциированных с образованием и/или присутствием одного или нескольких тромбов, являются наследственная тромбоцитопеническая тромбогемолитическая пурпура (ТТР), приобретенная ТТР,артериальный тромбоз, острый инфаркт миокарда (AMI), инсульт, сепсис и диссеминированое внутрисосудистое коагулирование (DIC). В одном варианте реализации, способы лечения или профилактики включают введение предложенной тут композиции А 13 или rA13. В другом аспекте, настоящее изобретение предусматривает способы лечения или профилактики инфаркта у нуждающегося в этом пациента. В определенных вариантах реализации, предусматриваются способы лечения или профилактики болезни или состояния, ассоциированного с инфарктом, включая,без ограничений, инфаркт миокарда (сердечный приступ), эмболию легких, цереброваскулярные происшествия, такие как инсульт, окклюзивное заболевание периферических артерий (такое как гангрена),антифосфолипидный синдром, сепсис, гигантоклеточный артериит (GCA), грыжу и заворот кишок. В одном варианте реализации способы лечения или профилактики включают введение предложенной тут композиции А 13 или rA13. В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способы составления композиций А 13 или rA13 с высокой стабильностью и/или высокой специфической активностью. В определенных вариантах реализации, способы пригодны для составления композиций растворов и лиофилизатов, которые могут храниться на протяжении длительных периодов времени при температуре до по меньшей мере примерно 37 С без потери высокой специфической активности, желательной для фармацевтического введения. В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает наборы для фармацевтического введения А 13 или rA13. Наборы по изобретению в определенных вариантах реализации могут содержать жидкие или лиофилизированные композиции, которые могут храниться на протяжении длительных периодов времени. Краткое описание чертежей Фиг. 1. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0 с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина,(2) фосфатного буфера, или (3) цитрата натрия. Растворы хранят при 4 или 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. (А) FRETS-активность VWF73 (активность VWF73, определенная методом спектроскопии резонансного переноса енергии флуоресценции) и (В) концентрацию белка ADAMTS13, измеренную методом ELISA (иммуноферментного твердофазового анализа), определяют в указанные моменты времени. Фиг. 2. Была приготовлена и лиофилизирована композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl, 2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0 с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина, (2) фосфатного буфера или (3) цитрата натрия. Лиофилизированные композиции хранят при 4 С или 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Композиции ADAMTS13 восстанавливают стерильной водой и (А) FRETS-активность VWF73 и (В) концентрацию белка ADAMTS13,измеренную методом ELISA, определяют в указанные моменты времени. Фиг. 3. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0 с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина,(2) фосфатного буфера, или (3) цитрата натрия и образцы загружают непосредственно в колонку для гель-фильтрации Superose 6 или лиофилизируют и восстанавливают стерильной водой перед загрузкой. Композиции ADAMTS13 затем анализируют методом гель-фильтрации. Фиг. 4. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, и 20 мМ гистидина при рН 7,0. Растворы хранят при (А) 4 С или (В) 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Композиции ADAMTS13 затем анализируют методом гель-фильтрации в указанные моменты времени. Фиг. 5. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, и 20 мМ гистидина при рН 7,0 и затем лиофилизирована. Лиофилизированные композиции затем хранят при (А) 4 С или (В) 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Композиции ADAMTS13 восстанавливают в стерильной воде в указанные моменты времени и анализируют методом гель-фильтрации. Фиг. 6. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, и 20 мМ гистидина при рН 7,0 и затем хранилась (А) в растворе или(В) лиофилизированной при 4 или 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Лиофилизированные композиции восстанавливают в стерильной воде и образцы хранившихся в растворе и лиофилизированных композиций характеризуют путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 7. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80 и 20 мМ натрийфосфатного буфера при рН 7,0, и затем хранилась(А) в растворе или (В) лиофилизированной при 4 или 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Лиофилизированные композиции восстанавливают в стерильной воде и образцы хранившихся в растворе и лиофилизированных композиций характеризуют путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 8. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, и 20 мМ тринатрия цитрата при рН 7,0, и затем хранилась (А) в растворе или (В) лиофилизированной при 4 или 37 С в течение периода времени до 6 месяцев. Лиофилизированные композиции восстанавливают в стерильной воде и образцы хранившихся в растворе и лиофилизированных композиций характеризуют путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 9. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, и 20 мМ гистидина при рН 7,0 и затем лиофилизирована. Лиофилизированные образцы хранят при 4 или 37 С в течение 3 месяцев и затем восстанавливают в стерильной воде. Образцы ADAMTS13 затем характеризуют методом инфракрасной спектроскопии с Фурьепреобразованием и результаты сравнивают со свежеприготовленным и лиофилизированным образцом. Фиг. 10. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0, с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина,-4 024267(2) фосфатного буфера или (3) цитрата натрия. Растворы хранят при 4 или 37 С в течение 6 месяцев. Лиофилизированные композиции восстанавливают стерильной водой и чистоту всех образцов определяют с помощью анализа методом обращеннофазовой ВЭЖХ. Фиг. 11. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0, с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина,(2) фосфатного буфера или (3) цитрата натрия. Образцы раствора композиции также лиофилизируют и восстанавливают стерильной водой. Раствор и восстановленные лиофилизированные композиции характеризуют с помощью анализа методом дифференциальной сканирующей калориметрии. Фиг. 12. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80, при рН 7,0, с 20 мМ буферного агента, выбранного из (1) гистидина,(2) фосфатного буфера, или (3) цитрата натрия. z-Средний диаметр ADAMTS13 в композициях характеризуют путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 13. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl, 0-2% сахарозы, 0-3% маннита, 0 мМ-2 мМ кальция, 0,05% полисорбата 80 и 20 мМ гистидина при рН 7,0 и анализируют методом гель-фильтрации. Полная хроматограмма приведена на панели (А),увеличенный участок с пиком димера приведен на панели (В). Фиг. 14. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl и 20 мМ гистидина при рН 5,5, 6,5, 7,5, 8,5, и 9,5. Композиции хранят при 4 или 40 С в течение 24 ч. Затем определяют FRETS-активность VWF73 и концентрацию белка ADAMTS13, измеренную методомELISA, для указанных значений рН композиции. Фиг. 15. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 150 мМ NaCl,2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80 и 20 мМ гистидина при рН 7,0 с (12 В и D) и без (12 А и С) 2 мМCaCl2. Жидкие композиции хранят при 25 С (12 А и В) или 37 С (12 С и D) в течение трех недель. Стабильность фермента измеряют с помощью FRETS-анализа VWF73 в указанные моменты времени. Фиг. 16.(А) Рекомбинантный ADAMTS13 загружают на колонку для гель-фильтрации Superose 6 GL, уравновешенную буфером, содержащим 20 мМ Na2HPO4 (рН 7,5) и 500 мМ NaCl, и молекулярные частицы разделяют по размеру и форме. Получают три пула элюирования, соответствующие агрегированному А 13 (пул 1), димернму А 13 (пул 2) и мономерному А 13 (пул 3). Затем определяют FRETS-активность(В) Олигомерное состояние и полидисперсность объединенных фракций дополнительно оценивают путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 17. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 2% сахарозы,0,05% полисорбата 80, 20 мМ гистидина при рН 7,0 и NaCl в количестве (А) 0 мМ, (В) 30 мМ, (С) 60 мМ,(D) 90 мМ, (Е) 120 мМ или (F) 150 мМ. Приготовленные композиции ADAMTS13 затем лиофилизируют и визуально осматривают внешний вид полученного лиофилизированного осадка. Фиг. 18. Лиофилизированные осадки рекомбинантного ADAMTS13, полученные из композиций, содержащих от 0 до 150 мМ NaCl, восстанавливают в воде. Состояние агрегации восстановленных белковADAMTS13 определяют с помощью анализа методом гель-фильтрации. Фиг. 19. Была приготовлена композиция рекомбинантного ADAMTS13 в буфере, содержащем 0,05% полисорбата 80, 20 мМ гистидина при рН 7,0, сахарозы в концентрации от 5 мМ до 20 мМ и NaCl в концентрации от 0 до 150 мМ. Активность белка ADAMTS13 в каждой композиции определяют с помощьюFRETS-анализа VWF73. Фиг. 20. Были лиофилизированы буферы с высоким и низким содержанием соли. Буфер с высоким содержанием соли (А) включает 20 мМ гистидина (рН 7,0), 150 мМ NaCl, 2% сахарозы, 0,05% полисорбата 80 и 2 мМ CaCl2, а буфер с низким содержанием соли (В) включает 20 мМ гистидина (рН 7,0), 30 мМ NaCl, 1% сахарозы, 3% маннита, 0,05% полисорбата 80, и 2 мМ CaCl2. Две композиции затем лиофилизируют в стандартных условиях и полученные лиофилизированные осадки затем визуально осматривают. Фиг. 21. Мультимерное состояние рекомбинантного ADAMTS13, выделенного методом катионообменной хроматографии (А) до и (В) после гель-фильтрации анализируют методом эксклюзионной хроматографии с использованием колонки Superose 6 GL. Фиг. 22. Мультимерное состояние рекомбинантного ADAMTS13, выделенного методом катионообменной хроматографии (А) до и (В) после гель-фильтрации анализируют методом динамического светорассеяния. Фиг. 23.(А) Стандартный и (В) продленный протоколы лиофилизации композиций rADAMTS13. Фиг. 24. Сравнение лиофилизированных осадков rADAMTS13, полученных лиофилизацией (А) композицийrA13 1-4 с использованием стандартного протокола лиофилизации, (В) композиций rA13 1-4 с использованием продленного протокола лиофилизации, (С) композиций rA13 5-8 с использованием стандартного протокола лиофилизации и (D) композиций rA13 5-8 с использованием продленного протокола лиофилизации. Композиции и протоколы лиофилизации, использованные для получения этих данных, приведены в примере 12. Фиг. 24. Лиофилизированные осадки рекомбинантного ADAMTS13, полученного из композиций, содержащих (А) 30 мМ NaCl или (В) 60 мМ NaCl, по стандартному (A LYO) или продленному (В LYO) протоколам лиофилизации, восстанавливают в воде. Состояние агрегации восстановленных белков ADAMTS13 определяют путем проведения анализа методом динамического светорассеяния. Фиг. 25. Олигомерное состояние и полидисперсность композиций ADAMTS13, изготовленных с использованием (А) 30 мМ NaCl или (В) 60 мМ NaCl, оценивают путем проведения анализа методом динамического светорассеяния после лиофилизации по стандартному или продленному протоколу. Фиг. 26. Доменная структура протеазы ADAMTS13, расщепляющей фактор фон Виллебранда (VWF) человека. Прекурсорный ADAMTS13 полипептид состоит из сигнального пептида (S), пропептида (Р), за которыми идут структурные признаки зрелого полипептида, содержащего каталитический домен металлопротеазы, дезинтегрин-подобный домен, мотив тромбоспондина типа 1 (TSP1), цистеин-богатый и спейсерный домен, 7 дополнительных TSP1 повторов и 2 CUB домена. Десять потенциальных сайтов Nгликозилирования помечены замкнутыми окружностями. Фиг. 27. Гидродинамические диаметры композиций ADAMTS13, изготовленных с разными буферными агентами, определенные путем проведения анализа методом динамического светорассеяния (DLS). Фиг. 28. Влияние сдвигового напряжения на рекомбинантный ADAMTS13 человека, определенное путем проведения анализа методом динамического светорассеяния (DLS). Фиг. 29. Стабильность при замораживании-оттаивании рекомбинантного ADAMTS13 человека, определенная по FRETS-активности. Фиг. 30. Стабильность при замораживании-оттаивании рекомбинантного ADAMTS13 человека, определенная путем проведения анализа методом динамического светорассеяния (DLS). Фиг. 31. Фотостабильность лиофилизированного рекомбинантного ADAMTS13 человека, определенная методом SE-ВЭЖХ. Фиг. 32. Фотостабильность жидких и лиофилизированных рекомбинантных ADAMTS13 человека, определенная путем проведения анализа методом динамического светорассеяния (DLS). Фиг. 33. Фотостабильность жидких и лиофилизированных рекомбинантных ADAMTS13 человека, определенная по FRETS-активности. Фиг. 34. Влияние кальция и цинка на FRETS-активность рекомбинантного ADAMTS13 человека. Фиг. 35. Влияние содержания соли и сахара на олигомерное состояние композиции лиофилизированного рекомбинантного ADAMTS13 человека, определенное методом SE-ВЭЖХ. Содержание сахара для каждой композиции должно быть указано в г/л, а не как молярные концентрации (например, 20 мМ = 20 г/л). Фиг. 36. Лиофилизированные осадки, полученные лиофилизацией композиций рекомбинантногоADAMTS13 человека, приготовленных в соответвтсии с табл. 15. Фиг. 37. Анализ методом динамического светорассеяния (DLS) олигомерного состояния рекомбинантногоADAMTS13 человека, лиофилизированного по стандартой 3-дневной программе лиофилизации, хранившегося в течение 6 месяцев при (Верхняя панель) 4 С; (Средняя панель) 30 С и (Нижняя панель) 40 С. Фиг. 38. Анализ методом динамического светорассеяния (DLS) олигомерного состояния рекомбинантногоADAMTS13 человека, лиофилизированного по продленной 10-дневной программе лиофилизации, хранившегося в течение 6 месяцев при (Верхняя панель) 4 С; (Средняя панель) 30 С и (Нижняя панель) 40 С. Фиг. 39. Анализ методом динамического светорассеяния (DLS) олигомерного состояния композиций рекомбинантного ADAMTS13 человека, приготовленных с разными концентрациями белка после хранения при 4, 30 и 40 С. Детальное описание изобретенияADAMTS13 представляет собой металлопротеазу плазмы, которая расщепляет мультимеры фактора фон Виллебранда (VWF) и понижающе регулирует их активность в агрегации тромбоцитов. Тромбоцитопеническая тромбогемолитическая пурпура (ТТР) представляет собой тяжелое заболевание, ассоциированное с необычно крупным, гемостатически гиперактивным фактором фон Виллебранда (VWF) и тяжелым дефицитом ADAMTS-13. Продукт-кандидат рекомбинантного ADAMTS13 был разработан в качестве рекомбинантного белка для заместительной терапии при лечении ТТР, вызванной дефицитомADAMTS13 (Plaimauer and Scheiflinger, Semin Hematol. 2004 Jan; 41(1):24-33; Plaimauer В. et al., F. Blood. 2002 Nov. 15;100(10): 3626-32. Epub 2002 Jul 12 и Bruno K. et al., J Thromb Haemost. 2005 May;3(5): 106473, все описания которых настоящим положительным образом целиком включены сюда в качестве ссылок). Настоящее изобретение основано частично на открытии жидких и лиофилизированных композиций очищенных белков ADAMTS с повышенной стабильностью, которые удовлетворяют требованиям, установленным Международной конференцией по гармонизации технических требований к фармацевтическим препаратом, предназначенных для использования людьми (International Conference on Harmonisationof Technical Requirements of Pharmaceuticals for Human Use (ICH Guideline, PHARMACEUTICAL DEVELOPMENT Q8(R2), 2005. Гемостатическая активность VWF очень сильно зависит от размера мультимеров. Металлопротеаза плазмы ADAMTS13 является основной идентифицированной протеазой, которая физиологически регулирует размер мультимеров VWF. ADAMTS13 расщепляет домен А 2 VWF между Tyr 1605 и Met 1606,образуя типичные фрагменты расщепления 176 и 140 кДа и мультимеры VWF меньшего размера, присутствующие в циркуляции. Человеческий ген ADAMTS13 содержит 29 экзонов и охватывает приблизительно 37 kb (т.п.н.) на хромосоме 9q34. Транскрипт 4,7 kb преимущественно синтезируется в звездчатых клетках печени, но также и в сосудистых эндотелиальных клетках и тромбоцитах, и кодирует первичный продукт трансляции из 1427 аминокислотных остатков. Полипептид-прекурсор ADAMTS13 состоит из сигнального пептида и пропептида, который заканчивается на С-конце потенциальным сайтом фурина для расщепления, за которым идет последовательность зрелой расщепляющей VWF протеазы. Зрелый полипептид ADAMTS13 (1353 аминокислотных остатка) содержит структурные признаки, характерные для всех членов семейства ADAMTS: репролизин-подобный металлопротеазный домен, дезинтегринподобный домен, центральный повтор тромбоспондина типа 1 (TSP1), цистеин-богатый домен, содержащий мотив RGD (аргинин-глицин-аспарагиновая кислота), возможно выжный для взаимодействий с интегрином, и спейсерный домен, за которым расположена уникальная комбинация 7 последовательно расположенных TSP1 повторов (TSP1/2-8) и два домена CUB (фиг. 26). Зрелый ADAMTS13 имеет расчетную молекулярную массу примерно 145 кДа, в то время как очищенный выделенный из плазмы ADAMTS13 имеет кажущуюся молекулярную массу примерно 180 кДа,возможно, вследствие посттрансляционных модификаций, совместимых с (consisting with) присутствующими консенсусными последовательностями 10 потенциальных сайтов N-гликозилирования, и нескольких сайтов О-гликозилирования и одного сайта С-маннозилирования в повторах TSP1. VWFпротеолитическая активность ADAMTS13 очень сильно зависит от двухвалентных катионов. Мотив активного сайта в домене металлопротеазы содержит сильно консервативный мотив HEXXHXXGXXHD с тремя гистидиновыми остатками, который координирует каталитический ион Zn2+ и прогнозируемый кальций-связывающий сайт, предположительно координируемый Glu 83, Asp 173, Cys 281 и Asp 284. Функциональные роли доменов ADAMTS13 были исследованы преимущественно с использованием систем для in vitro анализа, продемонстрировавших, что N-концевые участки от металлопротеазы до спейсерного домена являются критически важными для VWF-расщепления. С-концевые TSP1 повторы и домены CUB кажутся важными для распознавания субстрата VWF и связывания с потенциальными поверхностными рецепторами, такими как CD36 на эндотелиальных клетках. Одним из важных результатов разработки композиций белков является идентификация путей инактивации и путей агрегации или деградации соответствующего белка. Полная время-зависимая инактивация рекомбинантного человеческого белка ADAMTS13 течение 1 недели наблюдалась при 40 С в жидкой композиции при проведении анализа активности методом FRETS (спектроскопия резонансного переноса енергии флуоресценции). Как раскрыто тут, было обнаружено, что такая инактивация может быть-7 024267 снижена в присутствии 2 мМ Са 2+. При 25 С FRETS-активность далее не снижалась в присутствии Са 2+. При 4 С активность жидких композиций ADAMTS13 была стабильной на протяжении 24 недель в отсутствие Са 2+. Кроме этого, было обнаружено, что в идентичных лиофилизированных композициях инактивация не происходит или является незначительной, когда композиция хранится при 40 С в отсутствие Са 2+. Добавление 2 или 4 мМ Са 2+ не влияет на стабильность при 40 С. Соответственно, авторы изобретения обнаружили, что время-зависимая агрегация белковADAMTS13 в жидкой композиции (например, хранящейся при 40 С) вносит значительный вклад в деградацию и/или потерю ферментативной активности. Важно, что настоящее изобретение предусматривает, что такая агрегация может быть существенно уменьшена путем лиофилизации и/или добавления Са 2+ к жидким композициям. Дополнительно было обнаружено, что добавление неионного поверхностноактивного вещества (например, 0,05% Tween 80) уменьшает образование агрегатов ADAMTS13 в лиофилизированных композициях. Кроме того, было обнаружено, что присутствие одного или нескольких Сахаров и/или сахароспиртов в значительной степени стабилизирует ADAMTS13 во время лиофилизации и способствует образованию улучшенного лиофилизированного осадка.II. Определения В используемом тут значении "ADAMTS13" или "А 13" относятся к металлопротеазе семействаADAMTS (дезинтегрин и металлопротеиназа с мотивами тромбоспондина типа I), которая расщепляет фактор фон Виллебранда (vWF) между остатками Tyr 1605 и Met 1606. В контексте настоящего изобретения, белок ADAMTS13 охватывает любой белок ADAMTS13, например, ADAMTS13 млекопитающего,такого как примат, человек (NP620594), обезьяна, кролик, свинья, жвачное животное (ХР 610784), грызун, мышь (NP001001322), крыса (ХР 342396), хомяк, песчанка, животные семейства псовых, животные семейства кошачьих, лягушка (NP001083331), курица (ХР 415435), и их биологически активные производные. Также охвачены мутанты и варианты белков ADAMTS13, обладающие активностью, также как и функциональные фрагменты и слитые белки с участием ADAMTS13. Кроме того, белки ADAMTS13 по изобретению могут дополнительно содержать метки, способствующие очистке, детектированию, или обоим этим целям. Описанные тут белки ADAMTS13 могут быть дополнительно модифицированы фрагментом, имеющим терапевтическое значение, или фрагментом, пригодным для визуализации in vitro или in vivo. Человеческие белки ADAMTS13 включают, без ограничений, полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность с номером доступа GenBank NP620594 или ее процессированный полипептид, например полипептид с удаленным сигнальным пептидом (аминокислоты 1-29) и/или пропептид(аминокислоты 30-74). Специалистам известны многие природные варианты человеческого ADAMTS13,которые охвачены композициями по настоящему изобретению, некоторые из которых включают мутации, выбранные из R7W, V88M, H96D, R102C, R193W, T196I, H234Q, A250V, R268P, W390C, R398H,Q448E, Q456H, P457L, P475S, C508Y, R528G, Р 618 А, R625H, I673F, R692C, A732V, Е 740 К, A900V,S903L, C908Y, C951G, G982R, C1024G, А 1033 Т, R1095W, R1095W, R1123C, C1213Y, T1226I, G1239V иR1336W. Дополнительно белки ADAMTS13 включают природные и рекомбинантные белки, которые были подвергнуты мутациям, например одной или нескольким консервативным мутациям заменимых аминокислот. Предпочтительно аминокислоты, существенные для ферментативной активностиADAMTS13, не мутируют. Они включают, например, остатки, про которые точно известно или предполагается, что они являются существенными для связывания металла, таких как остатки 83, 173, 224, 228,234, 281 и 284, и остатки, входящие в активный сайт фермента, например остаток 225. Аналогично, в контексте настоящего изобретения белки ADAMTS13 включают альтернативные изоформы, например изоформы с отсутствующими аминокислотами 275-305 и/или 1135-1190 полноразмерного человеческого белка. В используемом тут значении термин "биологически активное производное" относится к любому полипептиду, обладающему, по существу, такой же биологической функцией, как и ADAMTS13. Полипептидные последовательности биологически активных производных могут содержать делеции, вставки и/или замещения одной или нескольких аминокислот, отсутствие, присутствие и/или замещение которых, соответственно, не оказывает существенного отрицательного влияния на биологическую активность полипептида. Биологическая активность указанных полипептидов может быть измерена, например, по уменьшению или задержке адгезии тромбоцитов к эндотелию, уменьшению или задержке агрегации тромбоцитов, уменьшению или задержке образования цепочек тромбоцитов, уменьшению или задержке образования тромбов, уменьшению или задержке роста тромба, уменьшению или задержке окклюзии сосудов, протеолитическому расщеплению vWF, дезинтеграции тромбов, или по расщеплению пептидного субстрата, например, пептида FRETS-VWF73 (Kokame et al., Br J Haematol. 2005 Apr;129(1):93-100) или его варианта. Аналогично, белки ADAMTS13 могут быть дополнительно модифицированы, например, путем посттрансляционных модификаций (например, гликозилирования одной или нескольких аминокислот, выбранных из человеческих остатков 142, 146, 552, 579, 614, 667, 707, 828, 1235, 1354, или любых других природных или рекомбинантных участков модификации) или путем ex vivo химической или фермента-8 024267 тивной модификации, включая, без ограничений, гликозилирование, модификацию водорастворимым полимером (например, пегилирование, сиалирование, присоединение гидроксиэтилкрахмальных цепей(HESylation) и т.д.), мечение и т.п. В используемом тут значении "одна единица активности ADAMTS13" определяется как количество активности в 1 мл пула нормальной человеческой плазмы независимо от используемого метода анализа. Например, одна единица FRETS-VWF73 активности ADAMTS13 представляет собой количество активности, необходимое для расщепления такого же количества субстрата FRETS-VWF73 (Kokame et al., Br JHaematol. 2005 Apr;129(1): 93-100), как и расщепляемое одним мл пула нормальной человеческой плазмы. В используемом тут значении термины "ADAMTS13" и "биологически активное производное", соответственно, также включают полипептиды, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК. Рекомбинантная ADAMTS13 ("rADAMTS13"), например рекомбинантная ADAMTS13 человека("r-hu-ADAMTS13"), может быть получена любым способом, известным специалистам. Один конкретный пример раскрыт в WO 02/42441, который включен сюда в качестве ссылки в отношении способа получения рекомбинантной ADAMTS13. Он может включать любой известный специалистам способ (i) получения рекомбинантной ДНК методами генной инженерии, например путем обратной транскрипции РНК и/или амплификации ДНК, (ii) введения рекомбинантной ДНК в прокариотические или эукариотические клетки путем трансфекции, т.е. с помощью электропорации или микроинъекции, (iii) культивации указанных трансформированных клеток, например, непрерывным или периодическим способом, (iv) экспрессии ADAMTS13, например, конститутивно или при индукции, и (v) выделения указаннойADAMTS13, например, из культуральной среды или путем сбора трансформированных клеток, для (vi) получения по существу очищенной рекомбинантной ADAMTS13, например, с помощью анионообменной хроматографии или аффинной хроматографии. Термин "биологически активное производное" включает также химерные молекулы, такие как, например, ADAMTS13 (или ее биологически активное производное) в комбинации с Ig, для улучшения биологических/фармакологических свойств, таких как, например, период полувыведения ADAMTS13 из системы кровообращения млекопитающего, в частности,человека. Ig может также иметь сайт связывания с необязательно мутированным рецептором Fc. В используемом тут значении термин "тромб" относится к кровяному сгустку, особенно тромбоцитсодержащему кровяному сгустку, микротромбу и/или эмболу. причем указанный тромб может быть прикрепленным или нет к артериальному или венозному кровеносному сосуду и может частично или полностью блокировать кровоток в артериальном или венозном кровеносном сосуде. В используемом тут значении, термины "витамин В 3", "никотинамид", "ниацинамид", "ниацин" и"никотиновая кислота" могут использоваться взаимозаменяемо по отношению к любому члену семейства витаминов В 3. В используемом тут значении "терапевтически эффективное количество или доза" или "достаточное количество или доза" относится к дозе, вызывающей эффекты, с целью создания которых она вводится. Точная доза будет зависеть от цели лечения, и будет уточняться квалифицированным специалистом с использованием известных методик (см., например, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3,1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); и Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, WilliamsWilkins). В используемом тут значении "физиологическая концентрация" соли относится к концентрации соли от примерно 100 до примерно 200 мМ фармацевтически приемлемой соли. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничений, хлорид натрия и калия, ацетат натрия и калия, цитрат натрия и калия, фосфат натрия и калия. В используемом тут значении "субфизиологическая концентрация" соли относится к концентрации соли менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительных вариантах реализации, субфизиологическая концентрация соли составляет менее примерно 80 мМ фармацевтической соли. В другом предпочтительном варианте реализации, субфизиологическая концентрация соли составляет менее примерно 60 мМ фармацевтической соли. В используемом тут значении термин "примерно" обозначает приблизительный интервал, находящийся в пределах плюс или минус 10% от указанного значения величины. Например, фраза "примерно 20%" охватывает интервал значений 18-22%. В используемом тут значении примерно также включает точное указанное количество. Таким образом, "примерно 20%" означает "примерно 20%", а также "20%". В используемом тут значении "хранение" означает, что композиция не вводится субъекту немедленно после приготовления, а содержится в течение некоторого периода времени в определенных условиях (например, при определенной температуре и т.д.) перед применением. Например, жидкая или лиофилизированная композиция может храниться на протяжении дней, недель, месяцев или лет, перед введением субъекту при различных температурах, таких как охлажденной (от 0 до 10 С) или при комнатной температуре (например, температура до 32 С). В используемом тут значении термин "питательная среда химически определенного состава" относится к синтетической питательной среде, в которой известны природа и концентрация всех компонен-9 024267 тов. Питательные среды химически определенного состава не содержат бактериальных, дрожжевых, животных или растительных экстрактов, хотя они могут включать или нет индивидуальные компоненты растительного или животного происхождения (например, белки, полипептиды и т.д.). Неограничивающие примеры коммерчески доступных питательных сред химически определенного состава включают различные среды EX-CELL (SAFC Biosciences, Inc), различные среды Игла, модифицированные по Дульбекко (DME) (Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc), питательная смесь Хэма (Sigma-Aldrich Co;SAFC Biosciences, Inc) и т.п. Способы приготовления культуральных сред химически определенного состава известны специалистам, например, в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217 и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. В используемом тут значении термин "не содержащая олигопептида культуральная среда" относится к безбелковой среде, не содержащей олигопептидов, таких как, например, олигопептиды, выделенные из гидролизата белка. В одном варианте реализации среда не содержит олигопептидов, состоящих из двадцати или больше аминокислот. В одном варианте реализации настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов, состоящих из пятнадцати или больше аминокислот. В другом варианте реализации изобретения среда не содержит олигопептидов, состоящих из десяти или больше аминокислот. В одном варианте реализации среда не содержит олигопептидов, состоящих из семи или больше аминокислот. В другом варианте реализации среда не содержит олигопептидов, состоящих из пяти или больше аминокислот. В еще одном варианте реализации среда не содержит олигопептидов, состоящих из трех или больше аминокислот. Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов, состоящих из двух или больше аминокислот. Способы приготовления не содержащих олигопептидов культуральных сред известны специалистам, например, в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217, и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. В используемом тут значении термин "бессывороточная культуральная среда" относится к культуральной среде без добавок животной сыворотки. Хотя бессывороточные среды часто представляют собой питательные среды химически определенного состава, бессывороточные среды могут содержать добавки отдельных животных или растительных белкв или белковых фракций. Способы приготовления бессывороточных культуральных сред известны специалистам, например, в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217 и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770,описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. В используемом тут значении термин "культуральная среда, не содержащая животного белка", относится к культуральной среде, которая не содержит добавок животной сыворотки, белка или белковой фракции. Хотя культуральные среды, не содержащие животного белка, часто представляют собой питательные среды химически определенного состава, культуральные среды, не содержащие животного белка, могут содержать растительные или дрожжевые гидролизаты. Способы приготовления культуральных сред, не содержащих животного белка, известны специалистам, например, в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217 и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770,описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок."Экспрессионный вектор" представляет собой конструкт нуклеиновой кислоты, полученный рекомбинантно или методами синтеза, с рядом определенных элементов нуклеиновой кислоты, которые позволяют осуществлять транскрипцию конкретной нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине. Экспрессионный вектор может быть частью плазмиды, вируса, или фрагментом нуклеиновой кислоты. Типично, экспрессионный вектор включает нуклеиновую кислоту, предназначенную для транскрипции, функционально связанную с промотором. Термин "гетерологичный", при использовании по отношению к частям нуклеиновой кислоты, указывает, что нуклеиновая кислота содержит две или больше субпоследовательностей, которые в природе не находятся в такой же взаимосвязи друг с другом. Например, нуклеиновая кислота, которую типично получают рекомбинантными методами, содержит две или больше последовательностей из неродственных генов, расположенные таким образом, чтобы получить новую функциональную нуклеиновую кислоту, например, промотор из одного источника и кодирующую область из другого источника. Аналогично,гетерологичный белок указывает, что белок содержит две или больше субпоследовательностей, которые в природе не находятся в такой же взаимосвязи друг с другом (например, слитый белок)."Промотор" определяется как набор контрольных последовательностей нуклеиновой кислоты, которые направляют транскрипцию нуклеиновой кислоты. В используемом тут значении промотор включает необходимые последовательности нуклеиновой кислоты рядом со стартовым сайтом транскрипции,такие как, в случае промотора полимеразы II типа, элемент ТАТА. Промотор также необязательно включает дистальные энхансерные или репрессорные элементы, которые могут быть расположены на расстоянии нескольких тысяч пар оснований от стартового сайта транскрипции. "Конститутивный" промотор представляет собой промотор, активный в большей части условий окружающей среды и развития."Индуцируемый" промотор представляет собой промотор, активный при регуляции окружающей среды или условий развития. Термин "функционально связанный" относится к функциональной связи между контрольной последовательностью экспрессии нуклеиновой кислоты (такой как промотор, или набор связующих сайтов фактора транскрипции) и второй последовательностью нуклеиновой кислоты, где контрольная последовательность экспрессии направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты, соответствующей второй последовательности. III. Композиции и составление композиций ADAMTS13 В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции белков ADAMTS13(А 13) и rADAMTS13 (rA13). В одном варианте реализации, композиции по изобретению являются стабильными при хранении при температуре до по меньшей мере примерно 40 С в течение по меньшей мере примерно 6 месяцев. В других вариантах реализации, предложенные тут композиции сохраняют значительную активность ADAMTS13 при хранении на протяжении длительных периодов времени. В еще одних вариантах реализации, композиции по изобретению уменьшают или замедляют димеризацию,олигомеризацию и/или агрегацию белка ADAMTS13. В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает композиции ADAMTS13,содержащие терапевтически эффективное количество или дозу белка ADAMTS13, от субфизиологической до физиологической концентрацию фармацевтически приемлемой соли, стабилизирующую концентрацию одного или нескольких сахаров и/или сахароспиртов, неионное поверхностно-активное вещество, буферный агент, обеспечивающий нейтральное значение рН композиции, и необязательно, соль кальция и/или цинка. В общем, предложенные тут стабилизированные композиции А 13 являются пригодными для фармацевтического введения. В предпочтительном варианте реализации белок А 13 представляет собой человеческий ADAMTS13 или его биологически активное производное или фрагмент. В определенных вариантах реализации композиции ADAMTS13 представляют собой жидкие композиции. В других вариантах реализации композиции ADAMTS13 являются лиофилизированными композициями, которые получают путем лиофилизации жидкой композиции, предложенной тут. В определенных вариантах реализации предложенных тут композиций белок ADAMTS13 представляет собой человеческий ADAMTS13 (hA13) или рекомбинантный ADAMTS13 человека (rhA13),или его биологически активное производное или фрагмент. В одном варианте реализации аминокислотная последовательность hA13 соответствует материалу с номером доступа GenBank NP620594. В другом варианте реализации аминокислотная последовательность hA13 содержит аминокислоты 75-1427NP620594, его природный или консервативный вариант, или его биологически активный фрагмент. В определенных вариантах реализации ADAMTS13 предусматривается в терапевтически эффективной дозе от примерно 0,05 до примерно 10 мг/мл. В других вариантах реализации ADAMTS13 присутствует в концентрации от примерно 0,1 до примерно 10 мг/мл. В еще одних вариантах реализацииADAMTS13 присутствует в концентрации от примерно 0,1 до примерно 5 мг/мл. В другом варианте реализации ADAMTS13 присутствует в концентрации от примерно 0,1 до примерно 2 мг/мл. В еще одних вариантах реализации ADAMTS13 может присутствовать в количестве примерно 0,01 мг/мл или примерно 0,02 мг/мл, 0,03 мг/мл, 0,04 мг/мл, 0,05 мг/мл, 0,06 мг/мл, 0,07 мг/мл, 0,08 мг/мл, 0,09 мг/мл, 0,1 мг/мл,0,2 мг/мл, 0,3 мг/мл, 0,4 мг/мл, 0,5 мг/мл, 0,6 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,8 мг/мл, 0,9 мг/мл, 1,0 мг/мл, 1,1 мг/мл,1,2 мг/мл, 1,3 мг/мл, 1,4 мг/мл, 1,5 мг/мл, 1,6 мг/мл, 1,7 мг/мл, 1,8 мг/мл, 1,9 мг/мл, 2,0 мг/мл, 2,5 мг/мл,3,0 мг/мл, 3,5 мг/мл, 4,0 мг/мл, 4,5 мг/мл, 5,0 мг/мл, 5,5 мг/мл, 6,0 мг/мл, 6,5 мг/мл, 7,0 мг/мл, 7,5 мг/мл,8,0 мг/мл, 8,5 мг/мл, 9,0 мг/мл, 9,5 мг/мл, 10,0 мг/мл, или в более высокой концентрации. В одном варианте реализации концентрация композиции относительно чистого ADAMTS13 может быть определена спектроскопическим методом (т.е., общий белок, измеренный при А 280) или другим объемным методом определения (например, анализ Бредфорда, окрашивание серебром, вес лиофилизированного порошка и т.д.). В других вариантах реализации, концентрация ADAMTS13 может быть определена с помощью анализа ADAMTS13 методом ELISA (твердофазового иммуноферментного анализа) (например, мг/мл антигена). В еще одних вариантах реализации концентрация ADAMTS13 в композиции, предусмотренной настоящим изобретением, может быть выражена как уровень ферментативной активности. Например, в одном варианте реализации композиция ADAMTS13 может содержать от примерно 10 единиц FRETSVWF73 активности до примерно 10000 единиц FRETS-VWF73 активности или другой пригодной единицы ферментативной активности А 13 (IU). В других вариантах реализации композиция может содержать от примерно 20 единиц FRETS-VWF73 (UFV73) активности до примерно 8000 единиц FRETS-VWF73 активности или от примерно 30 UFV73 ДО примерно 6000 UFV73, или от примерно 40 UFV73 ДО примерно 4000UFV73, или от примерно 50 UFV73 до примерно 3000 UFV73, или от примерно 75 UFV73 до примерно 2500 UFV73,или от примерно 100 UFV73 до примерно 2000 UFV73, или от примерно 200 UFV73 до примерно 1500 UFV73, или находиться в других приблизительных интервалах значений. В предпочтительном варианте реализации,предложенная тут композиция ADAMTS13 содержит от примерно 150 до примерно 600 UFV73. В определенных вариантах реализации, композиция содержит примерно 10 единиц FRETS-VWF73 активности,или примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900,1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700,2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000, 4100, 4200, 4300, 4400, 4500,4600, 4700, 4800, 4900, 5000, 5100, 5200, 5300, 5400, 5500, 5600, 5700, 5800, 5900, 6000, 6100, 6200, 6300,6400, 6500, 6600, 6700, 6800, 6900, 7000, 7100, 7200, 7300, 7400, 7500, 7600, 7700, 7800, 7900, 8000, 8100,- 11024267 8200, 8300, 8400, 8500, 8600, 8700, 8800, 8900, 9000, 9100, 9200, 9300, 9400, 9500, 9600, 9700, 9800, 9900,10000 или больше единиц FRETS-VWF73 активности. Аналогично, в определенных вариантах реализации, концентрация ADAMTS13 может быть выражена как ферментативная активность на единицу объема, например, в единицах ферментативной активности А 13 на мл (IU/мл). Например, в одном варианте реализации, композиция ADAMTS13 может содержать от примерно 10 до примерно 10000 IU/мл. В других вариантах реализации, композиция может содержать от примерно 20 до примерно 8000 IU/мл, или от примерно 30 до примерно 6000 IU/мл, или от примерно 40 до примерно 4000 IU/мл, или от примерно 50 до примерно 3000 IU/мл, или от примерно 75 до примерно 2500 IU/мл, или от примерно 100 до примерно 2000 IU/мл, или от примерно 200 до примерно 1500 IU/мл, или находиться в других приблизительных интервалах значений. В предпочтительном варианте реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 содержит от примерно 150 до примерно 600 IU/мл. В другом предпочтительном варианте реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 до примерно 1000 IU/мл. В определенных вариантах реализации композиция содержит примерно 10 IU/мл или примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400,450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200,2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000,4100, 4200, 4300, 4400, 4500, 4600, 4700, 4800, 4900, 5000, 5100, 5200, 5300, 5400, 5500, 5600, 5700, 5800,5900, 6000, 6100, 6200, 6300, 6400, 6500, 6600, 6700, 6800, 6900, 7000, 7100, 7200, 7300, 7400, 7500, 7600,7700, 7800, 7900, 8000, 8100, 8200, 8300, 8400, 8500, 8600, 8700, 8800, 8900, 9000, 9100, 9200, 9300, 9400,9500, 9600, 9700, 9800, 9900, 10000 или больше IU/мл. В определенных вариантах реализации стабилизированные композиции ADAMTS13, предусмотренные настоящим изобретением, будут содержать соль в концентрации от субфизиологической до физиологической, например от 0 до примерно 200 мМ фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте реализации композиция ADAMTS13 будет содержать физиологическую концентрацию соли, например от примерно 100 до примерно 200 мМ фармацевтически приемлемой соли. В других вариантах реализации композиция ADAMTS13 будет содержать примерно 0 мМ, или примерно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35,40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 мМ, или больше фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия или калия. Предпочтительно было обнаружено, что композиции ADAMTS13, содержащие субфизиологическую концентрацию фармацевтически приемлемой соли, образуют плотные лиофилизированные осадки с гладкой поверхностью. Кроме того, было обнаружено, что лиофилизированные композиции белковADAMTS13 с низким содержанием соли снижают агрегацию белка по сравнению с композициями, приготовленными с физиологическими концентрациями соли. Соответственно, в предпочтительном варианте реализации, настоящее изобретение предусматривает композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие субфизиологическую концентрацию фармацевтически приемлемой соли, например,менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли. В одном варианте реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли содержит менее примерно 100 мМ фармацевтической соли. В предпочтительном варианте реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли содержит менее примерно 80 мМ фармацевтической соли. В другом предпочтительном варианте реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли содержит менее примерно 60 мМ фармацевтической соли (т.е., от примерно 0 мМ до примерно 60 мМ соли). В другом предпочтительном варианте реализации, композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли будет содержать от примерно 30 мМ до примерно 60 мМ фармацевтически приемлемой соли. В еще одних вариантах реализации, композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли будет содержать примерно 0 мМ, или примерно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90,95 или 100 мМ фармацевтически приемлемой соли. В предпочтительном варианте реализации, композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В предпочтительном варианте реализации, соль является хлоридом натрия или калия. Было также обнаружено, что включение умеренных уровней (т.е., от примерно 2 до примерно 6%) одного или нескольких сахаров и/или сахароспиртов способствует получению плотных лиофилизированных осадков с гладкой поверхностью и помогает стабилизировать ADAMTS13 при лиофилизации. Соответственно в одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает композицииADAMTS13, содержащие от примерно 2 до примерно 6% одного или нескольких сахаров и/или сахароспиртов. Может быть использован любой сахар, такой как моно-, ди- или полисахариды, или водорастворимые глюканы, включая, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу,сахарозу, декстран, трегалозу, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, растворимый крахмал, гидроксиэтилкрахмал и карбоксиметилцеллюлозу. В конкретном варианте реализации в качестве добавки сахара используется сахароза или трегалоза. Сахароспирты определяются как углеводород содержащий от примерно 4 до примерно 8 атомов углерода и гидроксиьную группу. Неограничивающие примеры сахароспиртов, которые могут быть использованы в предложенных тут композициях ADAMTS13, включают маннит, сорбит, инозит, галактит, дульцит, ксилит и арабит. В одном варианте реализации, в качестве добавки сахароспирта используется маннит. В предпочтительном варианте реализации композицияADAMTS13 содержит добавку как сахара, так и сахароспирта. Сахары и сахароспирты могут быть использованы индивидуально или в комбинации. В некоторых вариантах реализации сахар, сахароспирт или их комбинация будут присутствовать в композиции в концентрации от примерно 0,5 до примерно 7%. В одном варианте реализации содержание сахара и/или сахароспирта в композиции будет составлять от примерно 0,5 до примерно 5%. В определенных вариантах реализации сахар, сахароспирт, или их комбинация будут присутствовать в концентрации от примерно 1 до примерно 5%. В предпочтительном варианте реализации сахар, сахароспирт или их комбинация будут присутствовать в концентрации от примерно 2 до примерно 6%. В другом предпочтительном варианте реализации сахар, сахароспирт или их комбинация будут присутствовать в концентрации от примерно 3 до примерно 5%. В определенных вариантах реализации конечная концентрация может составлять примерно 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6,0, 6,5 или 7,0% сахара, сахароспирта или их комбинации. В конкретных вариантах реализации предложенная тут композиция может содержать сахар в концентрации от примерно 0,5 до примерно 5,0% и сахароспирт в концентрации от примерно 0,5 до примерно 5,0%. Может быть использована любая комбинация концентраций сахара и сахароспирта, например сахар присутствует в концентрации примерно 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6,0, 6,5 или 7,0%, и сахароспирт присутствует в концентрации примерно 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6,0, 6,5 или 7,0%. Было также обнаружено, что предпочтительно включение неионного поверхностно-активного вещества существенно снижает агрегацию композиций ADAMTS13. Соответственно в одном варианте реализации предусматриваются композиции ADAMTS13, содержащие стабилизирующую концентрацию неионного детергента. Фармацевтически приемлемые неионные поверхностно-активные вещества, которые могут быть использованы в композициях по настоящему изобретению, известны специалистам в области фармацевтики и включают без ограничений Полисорбат 80 (Tween 80), Полисорбат 20 (Tween 20) и различные полоксамеры или плюроники, включая Pluronic F-68, и BRIJ 35, или их смеси. В предпочтительном варианте реализации неионное поверхностно-активное вещество, используемое в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, представляет собой Полисорбат 80. В определенных вариантах реализации поверхностно-активное вещество может быть использовано в предложенной тут композиции в концентрации от примерно 0,001 до примерно 0,2%. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество используется в концентрации от примерно 0,01 до примерно 0,1%. В другом предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество используется в концентрации примерно 0,05%. Например, в определенных вариантах реализации композиция может содержать неионное поверхностно-активное вещество в концентрации примерно 0,001, 0,005, 0,01, 0,02,0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,125, 0,15, 0,175, 0,2% и т.п. Кроме того, было обнаружено, что композиции ADAMTS13 были стабилизированными при изготовлении композиций с нейтральным рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. Соответственно, в определенных вариантах реализации предусматриваются композиции ADAMTS13, которые содержат буферный агент, пригодный для поддержания композиции при нейтральном рН. Фармацевтически приемлемые буферные агенты хорошо известны специалистам и включают без ограничений фосфатные буферы, гистидин, цитрат натрия, HEPES, Tris, Bicine, глицин, N-глицилглицин, ацетат натрия, карбонат натрия,глицилглицин, лизин, аргинин, фосфат натрия и их смеси. В предпочтительных вариантах реализации буфер выбирают из гистидина, фосфатного буфера, HEPES и цитрата натрия. В одном предпочтительном варианте реализации буфером является гистидин или HEPES. В конкретном варианте реализации буфер представляет собой гистидин. В другом конкретном варианте реализации буфер представляет собойHEPES. В одном варианте реализации рН предложенных тут композиций составляет от примерно 6,5 до примерно 9,0. В определенных вариантах реализации рН композиции составляет примерно 6,5 или примерно 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9,или 9,0. В предпочтительном варианте реализации рН композиции А 13 составляет от примерно 6,0 до примерно 8,0. В более предпочтительном варианте реализации рН композиции А 13 составляет от примерно 6,5 до примерно 7,5. В конкретном варианте реализации рН композиции А 13 составляет примерно 7,0. В другом конкретном варианте реализации, рН композиции А 13 составляет 7,00,2. Настоящее изобретение также показывает, что включение кальция дополнительно стабилизирует композиции ADAMTS13. Соответственно, в определенных вариантах реализации, предусматриваются стабилизированные композиции ADAMTS13, которые содержат от примерно 0,5 до примерно 20 мМ кальция (например, хлорид кальция). В предложенных тут композициях может быть использована любая фармацевтически приемлемая соль кальция. Неограничивающие примеры солей кальция, которые могут быть использованы, включают, например, CaCl2, СаСО 3, Са(С 6 Н 11 О 7)2, Са 3(РО 4)2, Ca(C18H35O2)2 и т.п. В одном варианте реализации кальций присутствует в композиции ADAMTS13 по изобретению в концентрации от примерно 0,5 до примерно 10 мМ. В другом варианте реализации кальций присутствует в композиции ADAMTS13 в концентрации от примерно 2 до примерно 5 мМ. В предпочтительном варианте реализации кальций присутствует в композиции ADAMTS13 в концентрации от примерно 2 до примерно 4 мМ. В определенных вариантах реализации концентрация кальция составляет примерно 0,5 мМ, или примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мМ. В конкретном варианте ре- 13024267 ализации концентрация кальция составляет примерно 2 мМ. В другом предпочтительном варианте реализации концентрация кальция составляет примерно 3 мМ. В еще одном предпочтительном варианте реализации концентрация кальция составляет примерно 4 мМ. Аналогично было обнаружено, что в определенных условиях включение цинка дополнительно стабилизирует композицию ADAMTS13, предложенную тут. Например, фиг. 34 показывает, что включение от примерно 2 до примерно 10 мкМ цинка дополнительно стабилизирует кальцийсодержашие композиции ADAMTS13. Любая фармацевтически приемлемая соль цинка может быть использована в предложенных тут композициях. Неограничивающие примеры солей цинка, которые могут быть использованы,включают, например, ZnSO47H2O, ZnSO32H2O, Zn3(PO4)2, и (С 6 Н 5 О 7)2Zn32 Н 2 О и т.п. В одном варианте реализации в предложенных тут композициях ADAMTS13 используется ZnSO4. В некоторых вариантах реализации цинк присутствует в композиции ADAMTS13 изобретения в концентрации от примерно 0,5 до примерно 20,0 M. В предпочтительном варианте реализации цинк включается в композицииADAMTS13 в концентрации от примерно 0,5 до примерно 10,0 М. В определенных вариантах реализации концентрация цинка составляет примерно 0,5 или примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 М. В некоторых вариантах реализации предложенные тут композиции ADAMTS13 могут дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей и/или разбавителей. Кроме этого предложенные тут композиции могут дополнительно содержать другие лекарственные средства, носители, адъюванты, разбавители, усилители проникновения в ткани, солюбилизаторы и т.п. Способы приготовления композиций и композиций для фармацевтического введения известны квалифицированным специалистам (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed.,Mack Publishing Co., Easton, PA (1990. В одном варианте реализации предложенные тут композиции ADAMTS13 будут иметь тоничность(tonocity) в интервале значений от примерно 200 до примерно 400 мосмоль/л, или в интервале значений от примерно 250 до примерно 350 мосмоль/л. В определенных вариантах реализации предложенная тут композиция ADAMTS13 будет иметь тоничность, например, примерно 200 мосмоль/л, или примерно 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390 или 400 мосмоль/л. Примеры агентов регулирования тоничности, которые могут быть использованы в предложенных тут композициях, включают без ограничений хлорид натрия, декстрозу, сахарозу, ксилит, фруктозу, глицерин, сорбит, маннит, трегалозу, хлорид калия, маннозу, хлорид кальция, хлорид магния, другие неорганические соли, другие сахара, другие сахароспирты и их комбинации. В определенных вариантах реализации композиция ADAMTS13 может содержать по меньшей мере один агент регулирования тоничности или по меньшей мере два, три, четыре, пять или больше агентов регулирования тоничности. Предложенные тут композиции ADAMTS13 могут быть составлены для введения с помощью известных способов, таких как внутривенное введение, например, в виде болюса или путем непрерывной инфузии на протяжении периода времени внутримышечным, интраперитонеальным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, интрасиновиальным, интратекальным, пероральным, местным путями или ингаляцией. В определенных вариантах реализации предложенные тут композицииADAMTS13 могут быть введены системно или местно. Системное введение включает, без ограничений: пероральный, субдермальный, интраперитонеальный, подкожный, трансназальный, сублингвальный или ректальный пути введения. Местное введение включает без ограничений местный, подкожный, внутримышечный и интраперитонеальный пути введения. В одном аспекте изобретения предусматривается композиция мономерного белка ADAMTS13. В определенных вариантах реализации композиция мономерного белка ADAMTS13, по существу, не содержит агрегированного ADAMTS13, димерного ADAMTS13, или как агрегированного, так и димерногоADAMTS13. В некоторых вариантах реализации мономерная композиция имеет более высокую удельную активность, чем аналогичная композиция, содержащая агрегированный и/или димерный белокADAMTS13. В конкретном варианте реализации композицию мономерного ADAMTS13 получают способом, включающим гель-фильтрацию или эксклюзионную хроматографию. В одном конкретном варианте реализации белок ADAMTS13 представляет собой человеческий ADAMTS13 (hA13) или рекомбинантный ADAMTS13 человека (rhA13), или его биологически активное производное или фрагмент. В другом аспекте предусматриваются рецептуры композиций мономерного ADAMTS13. В одном варианте реализации композиция является фармацевтически приемлемой композицией мономерного белка ADAMTS13. В определенных вариантах реализации, композиция, по существу, не содержит агрегированного ADAMTS13, димерного ADAMTS13, или как агрегированного, так и димерногоADAMTS13. В некоторых вариантах реализации, композиции мономерного ADAMTS13 имеют более высокую удельную активность, чем аналогичные композиции, содержащие агрегированный и/или димерный белок ADAMTS13. В конкретном варианте реализации, мономерную композицию ADAMTS13 получают способом, включающим гель-фильтрацию или эксклюзионную хроматографию. В одном конкретном варианте реализации, белок ADAMTS13 в композиции представляет собой человеческийADAMTS13 (hA13) или рекомбинантный ADAMTS13 человека (rhA13), или его биологически активное производное или фрагмент. В определенных вариантах реализации композиция мономерного белкаADAMTS13 составляется в соответствии с рецептурой, предложенной тут. В варианте реализации настоящее изобретение предусматривает композиции ADAMTS13, содержащие от примерно 0,0,5 до примерно 10,0 мг/мл белка ADAMTS13, от примерно 0 до примерно 200 мМ фармацевтически приемлемой соли, сахара и/или сахароспирта, неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент. В определенных вариантах реализации композиции могут дополнительно содержать кальций и/или цинк. В других вариантах реализации композиция может быть забуферена с рН от примерно 6,5 до 9,0. В определенных вариантах реализации композиции А 13 являются пригодными для фармацевтического введения. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13, содержащую от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностноактивное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В одном варианте реализации, предусматривается стабилизированная композиция ADAMTS13, содержащая от 0,05 мг/мл до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 мМ до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 мМ до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество; и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5, содержащая от примерно 50 единиц на мл до примерно 1000 единиц на мл активности ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации, фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В другом варианте реализации, настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13, содержащие от 0,05 мг/мл до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 мМ до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 1 мМ до 10 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество; и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В предпочтительном варианте реализации, композиция содержит от примерно 2 мМ до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации, фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В другом варианте реализации, настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта; неионное поверхностно-активное вещество; и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации, сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахараозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации,сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахараозы и маннита. В конкретном варианте реализации, смесь сахараозы и маннита состоит из примерно 1% сахарозы и примерно 3% маннита. В определенных вариантах реализации, композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция, предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; от примерно 0,01 до 0,1% неионного поверхностно-активного вещества и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы,состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, BRIJ 35, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации, сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В конкретном варианте реализацииповерхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В определенных вариантах реализации, композиция содержит от примерно 1 о примерно 10 мМ кальция,предпочтительно, от примерно 2 мМ до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации, фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5, где буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В определенных вариантах реализации буферный агент присутствует в концентрации от примерно 5 до примерно 100 мМ, предпочтительно от примерно 10 до примерно 50 мМ. В другом предпочтительном варианте реализации, рН композиции составляет 7,00,2. В определенных вариантах реализации, композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция,предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до примерно 20 мкМ цинка. В определенных вариантах реализации композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция,предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13, содержащую от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; от 0 до 60 мМ NaCl; от 2 до 4 мМ кальция; от 2 до 4% маннита; от 0,5 до 2% сахарозы; от 0,025 до 0,1% полисорбата 80; и от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до примерно 20 мкМ цинка. В другом варианте реализации предусматриваются стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН приблизительно между 6,5 и 7,5. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В одном варианте реализации предусматривается стабилизированная композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащая от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5, содержащая от примерно 50 единиц на мл до примерно 1000 единиц на мл активности ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 1 до 10 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композицияADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В конкретном варианте реализации смесь сахараозы и маннита состоит из примерно 1% сахарозы и примерно 3% маннита. В определенных вариантах реализации композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция, предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; от примерно 0,01 до 0,1% неионного поверхностно-активного вещества и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации поверхностноактивное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68,BRIJ 35 и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В определенных вариантах реализации композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция, предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации, композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5, где буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В определенных вариантах реализации буферный агент присутствует в концентрации от примерно 5 до примерно 100 мМ, предпочтительно от примерно 10 до примерно 50 мМ. В другом предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В определенных вариантах реализации композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция, предпочтительно от примерно 2 мМ до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В другом варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированные композиции ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащие от 0,05 до 10,0 мг/мл ADAMTS13; менее примерно 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; от 0,5 до 20 мМ кальция; сахар и/или сахароспирт; неионное поверхностно-активное вещество и буферный агент для поддержания рН от примерно 6,5 до примерно 7,5. В определенных вариантах реализации композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до примерно 20 мкМ цинка. В определенных вариантах реализации композиция содержит от примерно 1 до примерно 10 мМ кальция, предпочтительно от примерно 2 до примерно 4 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации фармацевтически приемлемой солью является хлорид натрия или хлорид калия. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 с низким содержанием соли, содержащую от 0,05 до 10,0 мг/млADAMTS13; менее примерно 100 мМ NaCl; от 2 до 4 мМ кальция; от 2 до 4% маннита; от 0,5 до 2% сахарозы; от 0,025 до 0,1% полисорбата 80; и от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до примерно 20 мкМ цинка. В предпочтительном варианте реализации композиция ADAMTS13 с низким содержанием соли представляет собой лиофилизированную композицию. В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е.,FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли;(с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композицияADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активностиADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буфер- 17024267 ный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13, композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80; и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации, стабилизированная композицияADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации, композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 60 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80 и (g) от 10 м до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В родственном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композицияADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активностиADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации, сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностноактивного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80 и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В родственном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активностиADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностноактивное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композицияADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композицияADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации, стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации, композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностноактивного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активностиIV. Стабильность композиций ADAMTS13 В определенных вариантах реализации предложенные тут композиции ADAMTS13 могут быть стабильными на протяжении длительного периода времени при хранении при определенной температуре,например при примерно -80, -20, 4, 18 С, комнатной температуре, 25, 30, 35, 37, 40 С или выше. В некоторых вариантах реализации длительный период времени составляет, по меньшей мере, примерно неделю. В других вариантах реализации длительный период времени может составлять, по меньшей мере,примерно 2 недели или, по меньшей мере, примерно 3 недели, или, по меньшей мере, примерно 1 месяц,или по меньшей мере примерно 2 месяца, или по меньшей мере примерно 3, 4, 5, 6, 7, 8 ,9 ,10, 11, 12,14,16, или 18 месяцев. В еще одних вариантах реализации композиции по изобретению могут быть стабильными на протяжении по меньшей мере примерно 2, 3, 4, 5 или больше лет. В определенных вариантах реализации изобретения стабильность может быть измерена по одному или нескольким биофизическим и/или ферментативным свойствам белка А 13 или rA13 в композиции. Неограничивающие примеры свойств, которые могут быть использованы для оценки стабильности,включают ферментативную активность, удельную активность, степень моно- или полидисперсности белка, степень димеризации, олигомеризации или агрегации белка, степень развернутости белка. Квалифицированный специалист сможет легко определить другие показатели стабильности, которые могут быть использованы для оценки стабильности композиций ADAMTS13, включая, без ограничений, гель-фильтрацию, динамическое или статическое светорассеяние, аналитическое ультрацентрифугирование, обращеннофазовая (rp) ВЭЖХ, ионообменная хроматография, инфракрасная спектроскопия с Фурье-преобразованием, калориметрия, дифференциальная сканирующая калориметрия, ЯМР спектроскопия, масс-спектрометрия, малоугловое рентгеновское рассеяние (SAX), электрофорез на полиакриламидном геле и т.п. В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает композиции А 13 или rA13,сохраняющие по меньшей мере примерно 50% общей активности ADAMTS13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации, предусматривается композиция,сохраняющая по меньшей мере примерно 60%, или по меньшей мере примерно 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94,95, 96, 97, 98, 99 или 100% общей активности ADAMTS13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В другом варианте реализации предусматриваются композиции, которые сохраняют по меньшей мере примерно 50% удельной активности ADAMTS13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации предусматривается композиция, сохраняющая по меньшей мере примерно 60%, или по меньшей мере примерно 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% удельной активности ADAMTS13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации композиции по изобретению будут обладать удельной активностью,равной по меньшей мере примерно 600 ед. (U) FRETS-VWF73 активности на мг белок ADAMTS13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации, предложенная тут композиция будет иметь удельную активность после хранения на протяжении длительного периода времени, равную по меньшей мере примерно 700 ед/мг А 13, или по меньшей мере примерно 800, 900,1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 ед/мг или выше. В одном варианте реализации предложенная тут композиция А 13 будет иметь полидисперсность,определенную путем проведения анализа методом динамического светорассеяния, менее примерно 50% после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации композиция А 13 будет иметь полидисперсность менее примерно 45%, или полидисперсность менее примерно 40,35, 30, 25, 20, 15, 10, 5%, измеренную с помощью анализа методом динамического светорассеяния после хранения на протяжении длительного периода времени. В другом варианте реализации изобретения предложенная тут композиция А 13 будет иметь популяцию белка А 13, состоящую из по меньшей мере примерно 50% мономеров А 13 после хранения на протяжении длительного периода времени. В других вариантах реализации, композиция может содержать по меньшей мере примерно 60% мономеров А 13 или по меньшей мере примерно 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96%,97, 98, 99% или более высокую процентную часть мономеров А 13.V. Экспрессия и очистка ADAMTS13 В определенных вариантах реализации белок ADAMTS13, используемый в предложенных тут композициях, может быть экспрессирован, продуцирован или очищен в соответствии с раскрытым ранее способом, например в US 6926894, US 2005/0266528, US 2007/0015703, патентной заявке США. 12/437384, патентной заявке США 12/847999 и WO 2002/42441, которые все целиком включены сюда в качестве ссылок. А. Клетки-хозяева и векторы Рекомбинантные белки ADAMTS могут быть получены путем экспрессии в любой пригодной системе прокариотического или эукариотического хозяина. Примеры эукариотических клеток включают,без ограничений, клетки млекопитающих, такие как СНО, COS, HEK 293, ВНК, SK-Hep и HepG2; клетки насекомых, например клетки SF9, клетки SF21, клетки S2, и клетки High Five; и дрожжевые клетки, например, клетки Saccharomyces или Schizosaccharomyces. В одном варианте реализации, белки ADAMTS могут экспрессироваться в бактериальных клетках, дрожжевых клетках, клетках насекомых, клетках птиц, клетках млекопитающих, и т.п. Например, в клеточной линии человека, клеточной линии хомяка,или клеточной линии мыши. В одном конкретном варианте реализации, клеточная линия представляет собой клеточную линию СНО, ВНК или НЕК. В предпочтительном варианте реализации, клеточная линия является клеточной линией СНО. В одном варианте реализации клетки могут быть любой клеткой млекопитающего, пригодной для культивирования, предпочтительно в производственном процессе (т.е., по меньшей мере 1 л), для получения желательного белка ADAMTS, такого как ADAMTS13. Примеры включают линию почек обезьянCV1, трансформированную SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); линию почек человеческого эмбриона(клетки 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham et al., J. Gen Virol.,36:59 (1977; клетки почек детенышей хомяка (ВНК, ATCC CCL 10); клетки яичника китайского хомячка/-DHFR, такие как субклон DUKX-B11 (СНО, Uriaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216(1980; мышиные клетки Сертоли (ТМ 4, Mather, Biol. Reprod, 23:243-251 (1980; клетки почек обезьян(CV1 ATCC CCL 70); клетки почек африканских зеленых мартышек (VERO-76, ATCC CRL-1587); клетки человеческой карциномы шейки матки (HeLa, ATCC CCL 2); клетки почек собаки (MDCK, АТСС CCL 34); клетки печени крысы Buffalo (BRL 3 А, АТСС CRL 1442); клетки легкого человека (W138, АТССCCL 75); клетки печени человека (Hep G2, НВ 8065); опухоль молочной железы мыши (ММТ 060562,АТСС CCL51); клетки TRI (Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci., 383:44-68 (1982; клетки MRC 5; клеткиFS4; и линию гепатомы человека (Hep G2). Предпочтительно клеточная линия представляет собой клеточную линию грызунов, особенно, клеточную линию хомяка, такую как СНО или ВНК. Различные векторы могут быть использованы для экспрессии белка ADAMTS (например,ADAMTS13), которые могут быть выбраны из эукариотических и прокариотических экспрессионных векторов. В определенных вариантах реализации, предусматривается плазмидный вектор для использования при экспрессии белка ADAMTS (например, ADAMTS13). В общем, плазмидные векторы, содержащие репликон и контрольные последовательности, полученные от видов, совместимых с клеткойхозяином, используются для таких хозяев. Вектор может нести участок репликации, а также маркирующие последовательности, способные обеспечивать фенотипическое селектирование в трансформированных клетках. Плазмида будет содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую белокADAMTS (например, ADAMTS13), функционально связанный с одной или несколькими контрольными последовательностями, например промотором. Предпочтительным способом получения стабильных клонов СНО клеток, экспрессирующих рекомбинантный белок ADAMTS, является следующий. DHFR-дефицитную клеточную линию СНО DUKXB11 трансфицируют DHFR экспрессионным вектором для обеспечения экспрессии соответствующего рекомбинантного белка, по существу как описано в патенте США 5250421 (Kaufman et al., GeneticsInstitute, Inc.). Проводят селектирование путем выращивания в среде, не содержащей гипоксан- 21024267 тин/тимидин (НТ), и амплификацию соответствующей области, кодирующей экспрессию рекомбинантного белка ADAMTS и гена DHFR, осуществляют путем выращивания клеток при возрастающей концентрации метотрексата. В соответствующих случаях, клеточные линии СНО могут быть адаптированы для выращивания в среде, не содержащей сыворотки и/или белка, по существу как описано в US 6100061(Reiteret al., Immuno Aktiengesellschaft). В другом предпочтительном варианте реализации, стабильные клетки НЕК 293 получают путем трансфекции конструктом, содержащим гигромициновый селектируемый маркер, и селекции трансформантов по стойкости к антибиотикам. Способность определенных вирусов инфицировать клетки или проникать в клетки путем рецептормедиируемого эндоцитоза, и интегртироваться в геном клетки-хозяина и стабильно и эффективно экспрессировать вирусные гены делает их привлекательными кандидатами для переноса чужеродных нуклеиновых кислот в клетки (например, клетки млекопитающих). Соответственно, в определенных вариантах реализации, вирусный вектор используется для введения нуклеотидной последовательности, кодирующей белок ADAMTS (например, ADAMTS13) в клетку-хозяина для экспрессии. Вирусный вектор будет содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую белок ADAMTS (например,ADAMTS13), функционально связанный с одной или несколькими контрольными последовательностями, например, промотором. Альтернативно, вирусный вектор может не содержать контрольной последовательности и будет вместо этого использовать контрольные последовательности клетки-хозяина для осуществления экспрессии белка ADAMTS. Неограничивающие примеры вирусных векторов, которые могут быть использованы для доставки нуклеиновой кислоты, включают аденовирусные векторы, векторы AAV, и ретровирусные векторы. В одном варианте реализации аденовирусный экспрессионный вектор включает конструкты, содержащие аденовирусные последовательности, достаточные для поддержания упаковки конструкта и, в конечном счете, экспрессии конструкта ADAMTS, клонированного в него. Аденовирусные векторы позволяют вводить чужеродные последовательности размером до 7 т.п. (kb) (Grunhaus et al., Seminar in Virology, 200(2):535-546, 1992. В другом варианте реализации аденоассоциированный вирус (AAV) может быть использован для введения нуклеотидной последовательности, кодирующей белок ADAMTS (например, ADAMTS13) в клетку-хозяина для экспрессии. Системы AAV были описаны ранее и в общем хорошо известны специалистам (Kelleher and Vos, Biotechniques, 17(6):1110-7, 1994; Cotten et al., Proc Natl Acad Sci USA,89(13):6094-6098, 1992; Curiel, Nat Immun, 13(2-3):141-64, 1994; Muzyczka, Curr Top Microbiol Immunol,158:97-129, 1992). Детали, касающиеся получения и использования векторов rAAV, описаны, например,в патентах США 5139941 и 4797368, каждый из которых целиком включен сюда в качестве ссылки. В одном варианте реализации ретровирусный экспрессионный вектор может быть использован для введения нуклеотидной последовательности, кодирующей белок ADAMTS (например, ADAMTS13) в клетку-хозяина для экспрессии. Такие системы были описаны ранее и в общем хорошо известны специалистам (Mann et al., Cell, 33:153-159, 1983; Nicolas and Rubinstein, In: Векторы: A survey of molecular cloning vectors and their uses, Rodriguez and Denhardt, eds., Stoneham: Butterworth, pp. 494-513, 1988; Temin, In:Gene Transfer, Kucherlapati (ed.), New York: Plenum Press, pp. 149-188, 1986). В конкретном варианте реализации ретровирусный вектор представляет собой лентивирусный вектор (см., например, Naldini et al.,Science, 272(5259):263-267, 1996; Zufferey et al., Nat Biotechnol, 15(9):871-875, 1997; Blomer et al., J Virol.,71(9):6641-6649, 1997; патенты США 6013516 и 5994136). Неограничивающие примеры векторов для прокариотической экспрессии включают плазмиды, такие как pRSET, pET, pBAD, и т.д., где промоторы, используемые в прокариотических экспрессионных векторах, включают lac, trc, trp, recA, araBAD, и т.д. Примеры векторов для эукариотической экспрессии включают: (i) для экспрессии в дрожжах - такие векторы, как pAO, pPIC, pYES, pMET, с использованием таких промоторов, как АОХ 1, GAP, GAL1, AUG1 и т.д.; (ii) для экспрессии в клетках насекомых - такие векторы, как рМТ, рАс 5, pIB, pMIB, pBAC, и т.д., с использованием таких промоторов, как РН, р 10, МТ,Ас 5, OplE2, gp64, polh, и т.д., и (iii) для экспрессии в клетках млекопитающих - такие векторы, как pSVL,pCMV, pRc/RSV, рсДНК 3, pBPV и т.д., и векторы, полученные из вирусных систем, таких как вирус коровьей оспы, аденоассоциированные вирусы, герпесвирусы, ретровирусы, и т.д., с использованием таких промоторов, как CMV, SV40, EF-1, UbC, RSV, ADV, BPV, и -actin. В определенных вариантах реализации экспрессия ADAMTS13 в клеточной культуре может предусматривать использование микроносителя. Настоящее изобретение предусматривает, среди других аспектов, способы крупномасштабной экспрессии белка ADAMTS. В некоторых вариантах реализации варианты реализации с использованием клеточных культур могут осуществляться в больших биореакторах в условиях, пригодных для обеспечения высокой площади поверхности культуры на единицу объема для достижения высоких значений плотности клеток и экспрессии белка. Одним из средств обеспечения таких условий роста является использование микроносителей для клеточных культур в биореакторах типа смесителя. В другом варианте реализации такие требования к условиям роста достигаются путем использования суспензионной клеточной культуры. В. Способы культивации В определенных вариантах реализации, экспрессия ADAMTS13 может включать использование системы клеточной культуры, при проведении процесса в периодическом или непрерывном режиме. Например, при использовании периодических клеточных культур, они могут осуществляться в режимах разовых партий, подпитываемых периодических культур, или повторно-периодических культур. Аналогично, непрерывные клеточные культуры могут проводиться, например, перфузионным, турбидостатным или хемостатным способом, периодическая и непрерывная культивация клеток может осуществляться в суспензионных условиях или в условиях прикрепления. При работе в суспензионных условиях, клетки будут находиться в свободно суспендированном состоянии и смешаны с культуральной средой. Альтернативно, в условиях прикрепления, клетки будут связаны с твердой фазой, например, микроносителем,пористым микроносителем, дисковым носителем, керамическим картриджем, полыми волокнами, плоским листом, гелевой матрицей и т.п. Периодическая культура типично является крупномасштабной клеточной культурой, в которой клеточный инокулят культивируют до максимальной плотности в танке или ферментере, и собирают и перерабатывают как разовую партию. Подпитываемая периодическая культура типично представляет собой периодическую культуру, которая поддерживается свежими питательными веществами (например, лимитирующими рост субстратами) или добавками (например, прекурсорами продуктов). Питательный раствор обычно является высококонцентрированным во избежание разбавления биореактора. В повторно-периодической культуре, клетки помещают в культуральную среду и выращивают до желательной плотности клеток. Для того, чтобы избежать начала спада и гибели клеток, культуру затем разводят полной питательной средой перед тем, как клетки достигнут своей максимальной концентрации. Количество и частота разведений меняются в широких пределах и зависят от характеристик роста клеточной линии и удобства процесса культивации. Процесс может быть повторен столько раз, сколько потребуется и, если клетки и среда не удаляются при пересевах, объем культуры будет ступенчато возрастать при каждом разбавлении. Увеличивающийся объем можно обрабатывать при использовании реактора достаточного размера, позволяющего проводить разбавления в сосуде, или путем разделения разбавленной культуры на несколько сосудов. Обоснование этого типа культуры заключается в поддержании клеток в состоянии экспоненциального роста. Серийная субкультура характеризуется тем, что объем культуры всегда ступенчато увеличивается, может проводиться множество сборов выращенных клеток, клетки продолжают расти и процесс может продолжаться столько, сколько потребуется. В определенных вариантах реализации белок ADAMTS (например, ADAMTS13) может быть выделен после сбора супернатанта периодической культуры. Непрерывная культура может быть суспензионной культурой, которая непрерывно пополняется питательными веществами за счет поступления свежей среды, причем объем культуры обычно поддерживается постоянным благодаря сопутствующему удалению отработанной среды. В хемостатном и турбидостатном методах, отбираемая среда содержит клетки. Таким образом, клетки, остающиеся в сосуде с клеточной культурой, должны расти для поддержания стабильного состояния. В хемостатном методе,скорость роста типично контролируют путем регулирования скорости разбавления, т.е., скорости прибавления свежей среды. Скорость роста клеток в культуре может регулироваться, например, при субмаксимальной скорости роста, путем изменения скорости разбавления. В отличие от этого, при турбидостатном методе, скорость разбавления задается таким образом, чтобы она обеспечивали максимальную скорость роста, которой могут достигнуть клетки при данных рабочих условиях, таких как рН и температура. В перфузионной культуре отбираемая среда не содержит клеток, которые остаются в сосуде для культивирования, например, с помощью фильтрации или методов центрифугирования, позволяющих возвращать клеток в культуру. Однако используемые для фильтрации мембраны типично не удерживают 100% клеток и поэтому некоторая их часть удаляется при отборе среды. Это не критично для перфузионных культур с очень высокими скоростями роста, поскольку большинство клеток остается в сосуд для культивирования. Система смесительного реактора может быть использована для периодических и непрерывных клеточных культур, выращиваемых в суспензионных условиях или в условиях прикрепления. Обычно система смесительного реактора может эксплуатироваться как любой обычный смесительный реактор с любым типом мешалки, таким как Rushton, гидрокрыло с переменным углом наклона лопастей или лопастная типа Marine. С. Культуральные средыADAMTS13 может экспрессироваться в культуральных средах, которые не содержат экзогенно добавленного белка. "Безбелковая культуральная среда" и родственные термины относится к культуральной среде, не содержащей белка, происходящего из источника, экзогенного по отношению к или отличного от клеток в культуре, которые в естественных условиях выделяют белки в процессе роста. В одном варианте реализации белок ADAMTS13 может экспрессироваться в среде, которая не содержит экзогенно добавленного белка (т.е., безбелковой) и содержит добавки цинка, кальция, и/или никотинамида (витамина В 3). В определенных вариантах реализации безбелковая культуральная среда содержит поли- 23024267 амин. Например, в концентрации по меньшей мере 2 мг/л или равной или составляющей примерно от 2 до 30 мг/л, или равной или составляющей примерно от 2 до 8 мг/л. В конкретном варианте реализации полиамин представляет собой путресцин. Типичные примеры безбелковых культуральных сред описаны в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217, публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770 и патентной заявке США 12/847999, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. Способы приготовления не содержащих животного белка и химически определенных культуральных сред известны специалистам, например, в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217,и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. В одном варианте реализации культуральная среда, используемая для экспрессии белка ADAMTS13, представляет собой не содержащую животного белка или не содержащую олигопептидов среду. В определенных вариантах реализации, культуральная среда могут быть химически определенной. В определенных вариантах реализации, культуральные среды могут содержать по меньшей мере один полиамин в концентрации от примерно 0,5 мг/л до примерно 10 мг/л. Белок ADAMTS13 также может экспрессироваться в культуральных средах, которые не содержат экзогенно добавленных олигопептидов. В одном варианте реализации ADAMTS13 экспрессируется в культуральной среде, которая не содержит экзогенно добавленных олигопептидов (т.е., не содержащей полипептидов) и содержит добавки цинка, кальция и/или никотинамида (витамина В 3). В определенных вариантах реализации не содержащая олигопептидов культуральная среда содержит полиамин. Например, в концентрации по меньшей мере 2 мг/л или равной, или составляющей примерно от 2 до 30 мг/л,или равной, или составляющей примерно от 2 до 8 мг/л. В конкретном варианте реализации полиамин представляет собой путресцин. Типичные примеры не содержащих олигопептидов культуральных сред описаны в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217, публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, и патентной заявке США 12/847999 описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. Белок ADAMTS13 также может экспрессироваться в культуральных средах, которые не содержат сыворотки. В одном варианте реализации ADAMTS13 экспрессируется в культуральной среде, которая не содержит экзогенно добавленной сыворотки (т.е., бессывороточной) и содержит добавки цинка, кальция и/или никотинамида (витамина В 3). В определенных вариантах реализации бессывороточная культуральная среда содержит полиамин. Например, в концентрации по меньшей мере 2 мг/л, или равной или составляющей примерно от 2 до 30 мг/л, или равной или составляющей примерно от 2 до 8 мг/л. В конкретном варианте реализации полиамин представляет собой путресцин. Типичные примеры бессывороточных культуральных сред описаны в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217, публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, и патентной заявке США 12/847,999, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. Белок ADAMTS13 также может экспрессироваться в культуральных средах, которые не содержит животных белков. В одном варианте реализации ADAMTS13 экспрессируется в культуральной среде,которая не содержит экзогенно добавленных животных белков или полипептидов (т.е., не содержащих животного белка) и содержит добавки цинка, кальция, и/или никотинамида (витамина В 3). В определенных вариантах реализации не содержащая животного белка культуральная среда содержит полиамин. Например, в концентрации по меньшей мере 2 мг/л, или равной или составляющей примерно от 2 до 30 мг/л, или равной или составляющей примерно от 2 до 8 мг/л. В конкретном варианте реализации полиамин представляет собой путресцин. Типичные примеры не содержащих животного белка культуральных сред описаны в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217, публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, и патентной заявке США 12/847,999, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок. Белки ADAMTS13 также могут экспрессироваться в культуральных средах, содержащих дополнительно добавки кальция, цинка и/или витамина В 3, как описано в патентеной заявке США 12/847999,описание которой, по существу, целиком включено сюда в качестве ссылки. В определенных вариантах реализации среда может быть не содержащей животного белка, не содержащей олигопептида, или питательной средой химически определенного состава. В определенных вариантах реализации не содержащую животного белка или не содержащую олигопептидов среду получают, как описано в патентах США 6171825 и 6936441, WO 2007/077217 и публикациях патентных заявок США 2008/0009040 и 2007/0212770, описания которых целиком включены сюда в качестве ссылок, которые оба целиком включены сюда в качестве ссылок и содержат дополнительно добавки кальция, цинка и/или витамина В 3. В конкретном варианте реализации культуральная среда химически определенного состава может быть подобной среде Игла, модифицированной по Дульбекко (DMEM), которая содержит дополнительно добавки кальция, цинка и/или витамина В 3, для увеличения удельной активности белка ADAMTS, экспрессируемого клетками, культивируемыми в среде. В еще одних вариантах реализации, культуральная среда не содержит животных компонентов. В другом варианте реализации, культуральная среда содержит белок, например животный белок из сыворотки, такой как сыворотка плода коровы. В другом варианте реализации культура включает экзогенно добавленные рекомбинантные белки. В другом варианте реализации белки получены от сертифицированного не зараженного патогенами животного.D. Очистка ADAMTS13 Способы очистки нативного ADAMTS13 из пула плазмы хорошо известны специалистам. Аналогично, способы экспрессии и очистки рекомбинантного ADAMTS13 также известны специалистам. Например, рекомбинантная экспрессия и очистка описаны Plaimauer and Scheiflinger, Semin Hematol. 2004Thromb Haemost. 2005 May;3(5):1064-73 и патентной заявке США 12/847999, все описания которых настоящим положительным образом целиком включены сюда в качестве ссылок. Дополнительно описание настоящего изобретения предусматривает дополнительные способы очистки рекомбинантного ADAMTS13. В одном варианте реализации, рекомбинантный ADAMTS13 экспрессируют в рекомбинантных клетках СНО и очищают из полученной кондиционированной среды методом катионообменной хроматографии на матрице POROS HS. Для удаления нежелательного димерного, мономерного и/или агрегированного ADAMTS13 композицию затем подвергают эксклюзионной гель-фильтрации. Композиции ADAMTS13 будут также обычно подвергаться по меньшей мере одной,предпочтительно, двум, стадиям удаления или инактивации вирусов. В определенных вариантах реализации предложенные тут способы получения композицииADAMTS13 будут дополнительно включать по меньшей мере одну стадию инактивации или удаления вирусов. В определенных вариантах реализации предложенные тут способы будут включать по меньшей мере две или по меньшей мере три стадии инактивации или удаления вирусов. Неограничивающие примеры стадий инактивации или удаления вирусов, которые могут быть использованы с предложенными тут способами, включают обработку системой растворитель/детергент (Horowitz et al., Blood Coagul Fibrinolysis 1994 (5 Suppl 3):S21-S28 и Kreil et al., Transfusion 2003 (43):1023-1028, описания которых настоящим положительным образом целиком включены сюда в качестве ссылок), нанофильтрацию(Hamamoto et al., Vo Sanxg 1989 (56)230-236 и Yuasa et al., J Gen Virol. 1991 (72 (pt 8: 2021-2024, описания которых настоящим положительным образом целиком включены сюда в качестве ссылок). В предпочтительном варианте реализации, настоящее изобретение предусматривает способы получения композиций ADAMTS13, включающие обработку системой растворитель/детергент и нанофильтрацию. В одном варианте реализации предусматривается способ обеспечения вирусно-безопасныхADAMTS13 белковых композиций, включающий стадии: (а) культивации клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок ADAMTS13, в культуральной среде; (b) отбора части супернатанта культуральной среды, содержащего белок ADAMTS13; (с) обогащения белка ADAMTS13 с помощью хроматографической стадии; (d) осущетсвления по меньшей мере одной стадия инактивации или удаления вирусов и (е) составление композиций обогащенного ADAMTS13 в соответствии с предложенным тут составом, с получением при этом безвирусной композиции ADAMTS13. В одном варианте реализации культуральная среда содержит цинк, кальций и необязательно никотинамид (витамин В 3). В предпочтительном варианте реализации стадия культивации клеток включает непрерывную культуру (например, перфузионную или хемостатическую культуру). В другом предпочтительном варианте реализации культура поддерживается при температуре от 34 до 37 С. В еще одном предпочтительном варианте реализации культура поддерживается при рН от 6,9 до 7,2. В одном варианте реализации стадия удаления вируса представляет собой нанофильтрацию. В аспекте варианта реализации, настоящее изобретение предусматривает способ производства стабилизированной композиции ADAMTS13, включающий стадии: (а) экспрессии белка ADAMTS13, или его биологически активного производного, в клетках, культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М, и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ; (b) очистки белка ADAMTS13 и (с) приготовления композиции в соответствии с любой из предложенных тут рецептур. В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает способ производства стабилизированной композиции ADAMTS13, включающий стадии: (i) экспрессии белка DAMTS13 или его биологически активного производного в клетках, культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ; (ii) очистки белка ADAMTS13 и (iii) приготовления композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизиро- 25024267 ванная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68 и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80 и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает способ производства стабилизированной композиции ADAMTS13, включающий стадии: (i) экспрессии белка ADAMTS13 или его биологически активного производного в клетках, культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ; (ii) очистки белка ADAMTS13 и (iii) приготовления композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли,композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли,композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,0 0,2. В одном варианте реализации стабилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, содержащую: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 60 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80; и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает способ производства стабилизированной композиции ADAMTS13, включающий стадии: (i) экспрессии белка ADAMTS13 или его биологически активного производного в клетках, культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ; (ii) очистки белка ADAMTS13 и (iii) приготовления композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 единиц до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13, композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации, композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностно-активного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностноактивного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации рН композиции составляет 7,0 0,2. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13), где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 200 мМ NaCl; (с) от 2 до 4 мМ кальция; (d) от 2 до 4% маннита; (е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80 и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). В одном варианте реализации настоящее изобретение предусматривает способ производства стабилизированной композиции ADAMTS13, включающий стадии: (i) экспрессии белка ADAMTS13 или его биологически активного производного в клетках, культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ; (ii) очистки белка ADAMTS13 и (iii) приготовления композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности ADAMTS13 (т.е., FRETS-VWF73 активности) на мг ADAMTS13; (b) от 0 до 100 мМ фармацевтически приемлемой соли; (с) от 0,5 до 20 мМ кальция; (d) сахар и/или сахароспирт; (е) неионное поверхностно-активное вещество и (f) буферный агент для поддержания рН в интервале значений от 6,0 до 8,0. В одном варианте реализации, стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 200 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В другом варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 400 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 600 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В более предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 800 единиц активности А 13 на мг ADAMTS13. В еще одном предпочтительном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит по меньшей мере 1000 единиц активности А 13 на мгADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированная композиция ADAMTS13 содержит от примерно 100 до примерно 2000 единиц активности ADAMTS13 на мг ADAMTS13. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 1,0 до примерно 10,0 мМ кальция. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 2,0 до примерно 4,0 мМ кальция. В другом варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 2 до примерно 6% сахара и/или сахароспирта. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит от примерно 3 до примерно 5% сахара и/или сахароспирта. В конкретном варианте реализации композиция содержит примерно 4% сахара и/или сахароспирта. В одном варианте реализации сахар и/или сахароспирт выбирают из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы, маннита, и их комбинации. В предпочтительном варианте реализации сахар и/или сахароспирт представляет собой смесь сахарозы и маннита. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 0,01 до примерно 0,1% неионного поверхностноактивного вещества. В предпочтительном варианте реализации композиция содержит примерно 0,05% неионного поверхностно-активного вещества. В одном варианте реализации поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, Pluronic F-68, и BRIJ 35. В предпочтительном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли композиция содержит от примерно 5 до примерно 100 мМ буферного агента. В предпочтительном варианте реализации, композиция содержит от примерно 10 до примерно 50 мМ буферного агента. В другом варианте реализации, буферный агент представляет собой гистидин или HEPES. В предпочтительном варианте реализации, буферный агент представляет собой гистидин. В одном варианте реализации, рН композиции составляет от примерно 6,5 до 7,5. В предпочтительном варианте реализации, рН композиции составляет 7,00,2. В одном варианте реализации стабилизированной лиофилизированной композиции А 13 с низким содержанием соли, композиция дополнительно содержит от примерно 0,5 до 20 мкМ цинка. В конкретном варианте реализации, настоящее изобретение предусматривает стабилизированную лиофилизированную композицию ADAMTS13 (А 13) с низким содержанием соли, где композицию лиофилизируют из жидкой композиции, содержащей: (а) по меньшей мере 100 единиц активности(е) от 0,5 до 2% сахарозы; (f) от 0,025 до 0,1% полисорбата 80 и (g) от 10 до 50 мМ гистидина (рН 7,00,2). 1. Обработка растворителем и детергентом (S/D) Для инактивации различных вирусных загрязнений, которые могут присутствовать в композицииADAMTS13, один или несколько ADAMTS13 промежуточных растворов могут быть подвергнуты обработке растворителем/детергентом (S/D). Способы обработки растворов детергентами хорошо известны специалистам (см. обзор, Pelletier JP et al., Best Pract Res Clin Haematol. 2006; 19(1): 205-42, содержание которого положительным образом целиком включено сюда в качестве ссылки). В общем, любая стан- 28024267 дартная S/D обработка может быть использована в сочетании с предложенными тут способами. Например, типичный пример протокола S/D обработки приведен ниже. В одном варианте реализации Triton X-100, Tween-20, и три(н-бутил)фосфат (TNBP) прибавляют к промежуточному раствору ADAMTS13 в конечной концентрации, равной или составляющей примерно 1,0, 0,3 и 0,3% соответственно. Смесь затем перемешивают при температуре, равной или составляющей примерно от 18 до 25 С в течение по меньшей мере примерно часа. 2. Нанофильтрация и ультра/диафильтрация Для снижения вирусной нагрузки композиции белка ADAMTS13, предложенной тут, композиция,или промежуточная композиция, может быть подвергнута нанофильтрации с использованием пригодного устройства для нанофильтрации. В определенных вариантах реализации, устройство для нанофильтрации будет иметь средний размер пор, равный или составляющей примерно от 15 до 200 нм. Примеры нанофильтров, пригодных для данного применения, включают, без ограничений, DVD, DV 50, DV 20(Pall), Viresolve NFP, Viresolve NFR (Millipore), Planova 15N, 20N, 35N, и 75N (Planova). В конкретном варианте реализации нанофильтр может иметь средний размер пор, равный или составляющей примерно от 15 до 72 нм, или равный или составляющей примерно от 19 до 35 нм, или равный или составляющий примерно 15, 19, 20, 35 или 72 нм. В предпочтительном варианте реализации нанофильтр будет иметь средний размер пор, равный или составляющий примерно 19, 20 или 35 нм, такой как фильтр Asahi PLANOVA 20N или PLANOVA 35N или эквивалентный им. После нанофильтрации фильтрат может необязательно быть сконцентрирован путем ультрафильтрации и/или состав буфера отрегулирован путем диафильтрации. В определенных вариантах реализации,ультрафильтрация осуществляется в кассете с безнапорным (open channel) сетчатым фильтром и мембрана для ультрафильтрации имеет номинальное отсечение по молекулярному весу (NMWCO), равное или составляющее менее примерно 175 кДа, или равное или составляющее менее примерно 170, 160, 150,140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30 кДа или меньше. В предпочтительном варианте реализации ультрафильтрационная мембрана имеет NMWCO не более 30 кДа. В другом предпочтительном варианте реализации, ультрафильтрационная мембрана имеет NMWCO не более 30 кДа. 3. Лиофилизация и термообработка В еще одних вариантах реализации, вирусная активность лиофилизированной композицииADAMTS13, которая может быть ранее подвергнута другим стадиям инактивации или удаления вирусов,таким как нанофильтрация, может быть ополнительно снижена путем термообработки лиофилизированной композиции. Термообработки как способ инактивации вирусной нагрузки факторов крови хорошо известны специалистам (см., например, Piszkiewicz et al., Thromb Res. 1987 Jul 15;47(2):235-41; Piszkiewicz et al., Curr Stud Hematol Blood Transfus. 1989;(56): 44-54; Epstein and Fricke, Arch Pathol Lab Med. 1990 Mar;114(3):335-40).VI. Введение и способы лечения Композиции могут быть введены с целью терапевтического или профилактического лечения. В общем, для терапевтического применения, композиции вводятся субъекту с заболеванием или состоянием,ассоциированным с дисфункцией ADAMTS13 или VWF, или иначе нуждающиеся в нем, в "терапевтически эффективной дозе". Композиции и количества, эффективные для такого использования, будут зависеть от тяжести заболевания или состояния и от общего состояния здоровья пациента. Разовое или кратное введение композиций может осуществляться в зависимости от дозы и частоты, необходимых для пациента и переносимых им."Пациент" или "субъект" в целях настоящего изобретения включает как людей, так и других животных, в частности, млекопитающих. Таким образом, композиции, рецептуры и способы являются применимыми как для терапии людей, так и для применения в ветеринарии. В конкретном варианте реализации пациент является млекопитающим, и в одном варианте реализации, представляет собой человека. Другие известные способы лечения и терапии состояний, ассоциированных с дисфункцией ADAMTS13 или VWF, могут быть использованы в комбинации с композициями и способами, предусматриваемыми изобретением. В одном аспекте изобретения предусматриваются способы изготовления стабилизированной композиции rA13, обладающей высокой удельной активностью. В одном варианте реализации способ включает стадии экспрессии белка ADAMTS13 или его биологически активного производного в клетках,культивируемых в среде, содержащей цинк в концентрации от примерно 2 до примерно 12 М и кальций в концентрации от примерно 0,5 до примерно 1,5 мМ, очистки белка А 13, и приготовления композиции,как описано выше. В определенных вариантах реализации культуральные среды дополнительно содержат добавки витамина В 3 в концентрации от примерно 1 до примерно 20 мг/л. В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способы лечения или профилактики болезни или состояния, ассоциированного с дисфункцией ADAMTS13 или VWF. В другом варианте реализации изобретение предусматривает способы лечения или профилактики болезни или состояния, ассоциированного с образованием и/или присутствием одного или нескольких тромбов. В другом варианте реализации изобретение предусматривает способы дезинтеграции одного или нескольких тромбов у ну- 29