Полинуклеотид гена стрелкования b сахарной свеклы и его применение

ПОЛИНУКЛЕОТИД ГЕНА СТРЕЛКОВАНИЯ B САХАРНОЙ СВЕКЛЫ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В заявке описаны полинуклеотиды, которые близко сцеплены с обусловливающим стрелкование геном или геном В в геноме сахарной свеклы и которые можно применять для создания молекулярных маркеров. В заявке описаны также молекулярные маркеры и наборы, содержащие указанные маркеры, которые можно применять для картирования, идентификации и выделения обусловливающего стрелкование гена или гена В в геноме сахарной свеклы, и для того, что различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего типа развития генотип. В заявке описаны также анализы и способы селекции растений сахарной свеклы с использованием указанных маркеров. Гилен Йоханнес Якобус Лудгерус (FR),Крафт Томас, Пин Пьерр (SE) Веселицкая И.А., Пивницкая Н.Н.,Кузенкова Н.В., Веселицкий М.Б.,Каксис Р.А., Комарова О.М., Белоусов Ю.В. (RU) Настоящее изобретение относится к селекции с помощью маркеров и контролю качества семян сахарной свеклы. В частности, изобретение относится к полинуклеотидам, которые близко сцеплены или находятся в гене bolting (ген, обусловливающий стрелкование, ген, определяющий одно-двулетний тип развития) или гене В в геноме сахарной свеклы и которые можно применять для создания молекулярных маркеров. Изобретение относится также к молекулярным маркерам и наборам, содержащим указанные маркеры, которые можно применять для картирования, идентификации и выделения обусловливающего стрелкование гена или гена В в геноме сахарной свеклы и для того, что различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип и различные гаплоидные генотипы (гаплотипы) в группах растений сахарной свеклы, которые имеют характерный для двулетнего типа развития генотип. Изобретение относится также к трансгенным подходам, с помощью которых получают трансгенные растения, у которых ген В либо сверхэкспрессируется, либо регулируется по типу отрицательной связи. Окультуренная сахарная свекла (Beta vulgaris ssp. vulgaris L.) представляет собой двулетнее растение, которое в первый год образует запасающий корень и листовую розетку. Удлинение побега (стрелкование) и образование цветка начинается после периода низкой температуры. В противоположность этому, для многих диких свекольных рода В. vulgaris ssp. maritima характерен однолетний тип развития в результате присутствия обусловливающего стрелкование гена В в B-локусе, который картирован в центральной области хромосомы II. Доминантный аллель B-локуса часто встречается у различных диких видов свекольных, и он вызывает стрелкование в течение периодов с длинным световым днем и у таких растений отсутствует необходимость в низких температурах, которые, как правило, требуются для двулетних культиваров (Abe и др., 1997), несущих рецессивный аллель. Стрелкование (удлинение побега) является первой хорошо заметной стадией перехода от вегетативного к репродуктивному росту. У окультуренной сахарной свеклы стрелкование является нежелательным явлением, поскольку оно приводит к снижению урожая и к проблемам в процессе сбора урожая и при экстракции сахара. Из-за неполной пенетрантности B-аллеля и его зависимости от окружающей среды при селекции линий растений существует потребность в близко сцепленных с ним молекулярных маркерах для осуществления скрининга по признаку его присутствия. Производство семян сахарной свеклы для продажи часто осуществляют в регионах, в которых произрастают однолетние сорные виды свекольных, что может вызывать загрязнение образующихся семян пыльцой этих растений, приводя к присутствию генотипа, характерного для однолетнего типа развития, в предназначенных для продажи семенах. Это является неприемлемым для покупателей. Для выявления загрязнения характерным для однолетнего типа развития генотипом партии предназначенных для продажи семян выращивают в регионах, в которых однолетние виды свекольных не вырастают непосредственно после сбора семян. Растения являются неяровизированными и загрязняющие растения выявляют по наличию стрелок. Является очень желательной замена такого метода оценки основанным на применении маркеров скрининговым анализом, с помощью которого можно получать результаты за более короткий период времени, что должно приводить к снижению стоимости переработки семян. Подход, основанный на применении маркеров, может оказаться также целесообразным для селекции сахарной свеклы, например, для ускорения процесса селекции, или для интродукции нового признака изменчивости, выбранного из множества диких видов свекольных. В этих случаях важно иметь маркер, близко сцепленный с геном В, для того, чтобы точно различать однолетний и двулетний типы развития. В настоящем изобретении предложены пути создания указанных маркеров. В частности, настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, прежде всего выделенному полинуклеотиду, идентифицированному в геноме сахарной свеклы, включая его варианты и производные,где полинуклеотид генетически близко сцеплен или предпочтительно локализован в обусловливающем стрелкование гене или гене В. Изобретение относится также к применению указанного полинуклеотида для создания маркеров, которые можно применять для картирования, идентификации и выделения обусловливающего стрелкование гена или гена В в геноме сахарной свеклы. Один из объектов изобретения относится к полинуклеотиду, предлагаемому в изобретении, для которого характерна истинная косегрегация с фенотипом, ассоциированным с геном, обусловливающим стрелкование (геном В), у сахарной свеклы. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативные фрагменты, предлагаемый в изобретении и описанный выше, где полинуклеотид можно получать из области геномной ДНК, которая картирована на расстоянии 1 сМ против хода транскрипции относительно маркеров МР 0176 и GJ01 и для которой характерна косегрегация с маркером GJ131, характеризующийся истинной косегрегацией с фенотипом, который ассоциирован с геном, обусловливающим стрелкование (геном В), у сахарной свеклы. Другим вариантом осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативные фрагменты, прежде всего выделенный полинуклеотид, предлагаемый в изобретении и описанный выше, который можно получать из геномной ДНК, локализованной в области, которая ограничена мар-1 022877 керами GJ131 и GJ01. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, который можно получать из геномной ДНК сахарной свеклы, связанный с обусловливающим стрелкование геном или геном В в геноме сахарной свеклы, и который содержит один или несколько из следующих элементов: а) интронную область, которая позволяет получать продукт амплификации размером примерно 0,5 т.п.н. с помощью ПЦР-реакции с использованием "прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймераPRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, или пары праймеров, последовательности которых по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 98% и вплоть до 99% идентичны последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, при применении геномной ДНК сахарной свеклы в качестве матрицы, прежде всего получать полинуклеотидный фрагмент, который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, 3 или 4, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична указанной последовательности; б) полинуклеотидный фрагмент, содержащий нуклеотидную последовательность, которая на 70%,предпочтительно на 75%, более предпочтительно на 80%, еще более предпочтительно на 85%, но наиболее предпочтительно на 90% и вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 52; в) полинуклеотидный фрагмент, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную вSEQ ID NO: 5, или последовательность, которая на 70%, предпочтительна на 75%, более предпочтительно на 80%, еще более предпочтительно на 85%, но наиболее предпочтительно на 90% и вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 51; г) полинуклеотидный фрагмент, который после сплайсинга кодирует полипептид, последовательность которого по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 98% и вплоть до 100% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6, и необязательно также д) высококонсервативный участок, кодирующий мотив домена-приемника регулятора псевдоответа(Pseudo Response Regulator Receiver Domain) (PRR), который расположен вблизи NH2-конца, и мотив ССТ на СООН-конце. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий интронную область, которая позволяет получать продукт амплификации размером примерно 0,5 т.п.н. с помощью ПЦР-реакции с использованием "прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, или пары праймеров, последовательности которых по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 98% и вплоть до 99% идентичны последовательностям, представленным вSEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, при применении геномной ДНК сахарной свеклы в качестве матрицы. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична указанной последовательности. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, 3 или 4, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична указанным последовательностям. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который после сплайсинга кодирует полипептид, последовательность которого по меньшей мере на 80%,предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 95%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 98% и вплоть до 100% идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 5. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 51, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 51. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,который имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 52, или последовательность, которая по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и по меньшей мере вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 52. Все индивидуальные численные значения, которые подпадают под диапазон от 70-99%, указанный выше в настоящем описании, т.е. 71, 72, 73, 74, 75, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99%, должны также рассматриваться как подпадающие под объем настоящего изобретения. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент,прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент, причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2, 3 или 4, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 5, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 51, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотидный фрагмент,причем комплементарная цепь указанного полинуклеотидного фрагмента обладает способностью гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 52, прежде всего в умеренных условиях гибридизации, более предпочтительно в строгих условиях гибридизации. Одном из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, прежде всего выделенный полинуклеотид, где полинуклеотид можно получать из геномной ДНК сахарной свеклы, сцепленной с обусловливающим стрелкование геном или геном В в геноме сахарной свеклы, для чего а) осуществляют скрининг ВАС-библиотеки (бактериальная искусственная хромосома), созданной из двулетнего коммерческого культивара Н 20, с помощью "прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответ-3 022877 ственно, или пары праймеров, последовательности которых по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 98% и вплоть до 99% идентичны последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, с помощью ПЦР-реакции в следующих условиях: начальная денатурация при 95 С в течение 5 мин; затем 35 циклов амплификации по 30 с при 95 С,30 с при 60 С; 30 с при 72 С; и затем 5 мин при 72 С; б) отбирают клон ВАС SBA079-L24, содержащий два неперекрывающихся набора последовательных фрагментов, которые оба имеют последовательность, гомологичную EST (экспрессируемый ярлык)CV301305, представленную в SEQ ID NO: 1, и объединяют их в одну последовательность; в) получают генную структуру гена BvPRR7 свеклы, содержащую интроны и экзоны, на основе сравнительного анализа набора последовательных фрагментов последовательности ВАС и ESTCV301305, представленной в SEQ ID NO: 1, и гомологии последовательности с геном PRR7 из Arabidopsis. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 1. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 2. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 3. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 4. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 51. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 52. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, Т в положении 11043, С в положении 11143, С в положении 11150, А в положении 11220, С в положении 11238, А в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, G в положении 12086, Т в положении 12127, А в положении 12193, G в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 1, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет Т в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, Т в положении 11043, С в положении 11143, С в положении 11150, А в положении 11220, А в положении 11238, Т в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, G в положении 12086, Т в положении 12127, G в положении 12193, G в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 2, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, G в положении 11043, Т в положении 11143, С в положении 11150, А в положении 11220, С в положении 11238, Т в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, G в положении 12086, Т в положении 12127, G в положении 12193, G в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 3, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,-4 022877 содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, Т в положении 11043, С в положении 11143, Т в положении 11150, А в положении 11220, С в положении 11238, Т в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, G в положении 12086, Т в положении 12127, А в положении 12193, G в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 4, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, Т в положении 11043, С в положении 11143, С в положении 11150, А в положении 11220, С в положении 11238, Т в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, А в положении 12086, Т в положении 12127, А в положении 12193, А в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 5, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, С в положении 3827, Т в положении 3954, Т в положении 5284, G в положении 5714, G в положении 10954, Т в положении 11043, С в положении 11143, С в положении 11150, А в положении 11220, С в положении 11238, Т в положении 11299, А в положении 11391, G в положении 12053, G в положении 12086, Т в положении 12127, А в положении 12193, А в положении 12337 и G в положении 12837 и представляет собой аллель 6, ассоциированный с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность,представленную в SEQ ID NO: 5, причем эта последовательность несет G в положении 3695, А в положении 3827, А в положении 3954, С в положении 5284, Т в положении 5714, А в положении 10954, G в положении 11043, С в положении 11143, С в положении 11150, С в положении 11220, С в положении 11238, Т в положении 11299, G в положении 11391, А в положении 12053, G в положении 12086, С в положении 12127, G в положении 12193, G в положении 12337 и А в положении 12837 и представляет собой аллель 7, ассоциированный с двулетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотид, предлагаемый в изобретении,содержит нуклеотидную последовательность, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, аминокислотная последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 6. Одним из вариантов осуществления изобретения является продукт амплификации размером примерно 0,5 т.п.н., включая его информативный фрагмент, который можно получать с использованием"прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, при применении геномной ДНК сахарной свеклы в качестве матрицы. Конкретным вариантом осуществления изобретения является набор полинуклеотидных маркеров,который содержит множество индивидуальных маркеров, где эти маркеры создают на основе полинуклеотида, представленного в SEQ ID NO: 5, включая любой из его аллельных вариантов 1-7, которые описаны выше, и с его помощью можно выявлять различные SNP (однонуклеотидный полиморфизм, полиморфизм единичных нуклеотидов) в нуклеотидных положениях, представленных в табл. 5, где с помощью указанного набора маркеров можно идентифицировать различные аллели и таким образом осуществлять дифференциацию однолетних и двулетних линий сахарной свеклы. Одним из вариантов осуществления изобретения является одна или несколько молекул-зондов и/или один или несколько праймеров, прежде всего одна или несколько пар праймеров, но прежде всего одна или несколько пар праймеров, которая(ые) состоит из "прямого" праймера и "обратного" праймера,где праймеры обладают способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в области генома сахарной свеклы, которая генетически близко сцеплена с геном В, но прежде всего с областью в гене В, и которая содержит полинуклеотид, предлагаемый в изобретении и описанный выше, включая его информативный фрагмент, где указанный фрагмент содержит полиморфизм, прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, SSR (простые повторяющиеся последовательности), делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, этот полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидный маркер, который можно создавать из полинуклеотидной молекулы или ее информативного фрагмента, выбранного из группы полинуклеотидов, которые имеют последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, SEQ ID который кодирует полипептид, аминокислотная последовательность которого представлена в SEQ IDNO: 6, где указанный полинуклеотид содержит один или несколько полиморфизмов, прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, этот полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Одним из конкретных вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидный маркер,который создан на основе полинуклеотида, представленного в SEQ ID NO: 2, указанный маркер можно применять для выявления по меньшей мере одного из следующих SNP в 3-м интроне гена BvPRR7: а) цитозин или тимин в положении 87,б) цитозин или тимин в положении 160,в) аденин или гуанин в положении 406,и таким образом осуществлять дифференциацию характерных для однолетнего и двулетнего типа развития гаплотипов. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидный маркер, представленный одной или несколькими молекулами-зондами и/или одним или несколькими праймерами, прежде всего одной или несколькими парами праймеров, но прежде всего парой праймеров, которая состоит из"прямого" праймера и "обратного" праймера, где праймеры обладают способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в области генома сахарной свеклы, которая генетически близко сцеплена с геном В и имеет нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 2, и способностью к амплификации информативного фрагмента, где указанный фрагмент содержит один или несколько полиморфизмов, прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, представленный, например, в табл. 1, где полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать растения, которые имеют характерный для однолетнего или характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Конкретным вариантом осуществления изобретения является пара праймеров, предлагаемая в изобретении и описанная выше, которая обладает способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в 3-м интроне, представленной в SEQ ID NO: 2, и к амплификации информативного фрагмента из указанной области, который содержит полиморфизм, прежде всего полиморфизм, представляющий собой SNP С/Т в положении 87, и/или SNP С/Т в положении 160, и/или SNP A/G в положении 406. В частности, пара праймеров включает "прямой" праймер PRR7-F, представленный в SEQ ID NO: 7,и "обратный" праймер PRR7-R, представленный в SEQ ID NO: 8, предназначенные для амплификации фрагмента, который содержит SNP160, 87 и 406. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидный маркер, представленный одной или несколькими молекулами-зондами и/или одним или несколькими праймерами, прежде всего одной или несколькими парами праймеров, но прежде всего парой праймеров, которая состоит из"прямого" праймера и "обратного" праймера, где праймеры обладают способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в области генома сахарной свеклы, которая генетически близко сцеплена с геном В, прежде всего с нуклеотидной последовательностью в гене В, в частности с нуклеотидной последовательностью, которая представлена в SEQ ID NO: 5, и способностью к амплификации информативного фрагмента, где указанный фрагмент содержит один или несколько полиморфизмов, прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, представленный, например, в табл. 5, где полиморфизм является диагностическим для В-аллеля в В-локусе и позволяет различать растения,имеющие характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Конкретным вариантом осуществления изобретения является пара праймеров, предлагаемая в изобретении и описанная выше, которая обладает способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в кодирующей области гена BvPRR7, которая представлена в SEQ ID NO: 5, к амплификации информативного фрагмента из указанной кодирующей последовательности, содержащего полиморфизм,прежде всего полиморфизм, представляющий собой SNP А/С в положении 3827 и/или SNP А/Т в положении 3954, и/или SNP T/G в положении 5714, и/или SNP С/А в положении 11220, и/или SNP G/A в положении 11391, и/или SNP A/G в положении 12053, и/или SNP С/Т в положении 12127. В частности, первая пара праймеров содержит "прямой" праймер F3806, представленный в SEQ IDNO: 27, и "обратный" праймер R3807, представленный в SEQ ID NO: 28, для амплификации фрагмента,который содержит SNP3827 и SNP3954. Вторая пара праймеров содержит "прямой" праймер F3768, представленный в SEQ ID NO: 21, и"обратный" праймер R3769, представленный в SEQ ID NO: 22, для амплификации фрагмента, который содержит SNP5714. Третья пара праймеров содержит "прямой" праймер F3857, представленный в SEQ ID NO: 37, и"обратный" праймер R3858, представленный в SEQ ID NO: 38, для амплификации фрагмента, который содержит SNP11220. Четвертая пара праймеров содержит "прямой" праймер F3859, представленный в SEQ ID NO: 39, и"обратный" праймер R3860, представленный в SEQ ID NO: 40, для амплификации фрагмента, который содержит SNP11391. Пятая пара праймеров содержит "прямой" праймер F3861, представленный в SEQ ID NO: 41, и "обратный" праймер R3862, представленный в SEQ ID NO: 42, для амплификации фрагмента, который содержит SNP12053 и 12127. Одним из вариантов осуществления изобретения является предлагаемый в изобретении полинуклеотидный маркер, представленный одной или несколькими молекулами-зондами и/или одним или несколькими праймерами, прежде всего одной или несколькими парами праймеров, но прежде всего парой праймеров, которая состоит из "прямого" праймера и "обратного" праймера, где праймеры обладают способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в области генома сахарной свеклы,которая генетически близко сцеплена с геном В, прежде всего с нуклеотидной последовательностью в промоторной области гена PRR7, прежде всего с нуклеотидной последовательностью в промоторной области гена PRR7, которая представлена в SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 51 соответственно, и к амплификации информативного фрагмента, который является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать растения, которые имеют характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Конкретным вариантом осуществления изобретения является полинуклеотидный маркер, который представлен парой праймеров, выбранной из группы, включающей пару праймеров F3808 (SEQ ID NO: 29) и R3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,6 т.п.н.; пару праймеров F3855 (SEQ ID NO: 35) и R3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 1,0 т.п.н.; и пару праймеров F3855 (SEQ ID NO: 35) и R3856 (SEQ IDNO: 36) (табл. 4), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,8 т.п.н.; когда в качестве матрицы применяют геномную ДНК из двулетних линий, но не обеспечивает амплификацию в случае однолетних линий. Указанный информативный фрагмент может содержать также один или несколько полиморфизмов,прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизм, основанный на SNP, представленный, например, в табл. 5,который является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Изобретение относится также к одной или нескольким молекулам-зондам и/или одному или нескольким праймерам, прежде всего одной или нескольким парам праймеров, но прежде всего паре праймеров, которая состоит из "прямого" праймера и "обратного" праймера, где праймеры обладают способностью к ренатурации с нуклеотидной последовательностью в области генома сахарной свеклы, которая генетически близко сцеплена с геном В, прежде всего с нуклеотидной последовательностью в промоторной области гена PRR7, в частности с нуклеотидной последовательностью в промоторной области генаPRR7, которая представлена в SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 51 соответственно, и к амплификации информативного фрагмента, который является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать растения, которые имеют характерный однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего или однолетнего типа развития генотип. Другим конкретным вариантом осуществления изобретения является пара праймеров, выбранная из группы, включающей пару праймеров F3808 (SEQ ID NO: 29) и R3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,6 т.п.н.; пару праймеров F3855 (SEQ ID NO: 35) иR3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 1,0 т.п.н.; и пару праймеров F3855 (SEQ ID NO: 35) и R3856 (SEQ ID NO: 36) (табл. 4), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,8 т.п.н., когда в качестве матрицы применяют геномную ДНК из двулетних линий, но не обеспечивает амплификацию в случае однолетних линий. Описанные выше молекулы-зонды и/или праймеры можно применять в способе идентификации загрязнений характерным для однолетнего типа развития геномом поступающих в продажу семян сахарной свеклы. Одним из вариантов осуществления изобретения является набор полинуклеотидных зондов, содержащий по меньшей мере две различные молекулы-зонды, которые комплементарны подобласти в информативном полинуклеотидном фрагменте, предлагаемом в изобретении и описанном выше, который содержит полиморфный сайт, с помощью которого амплифицируют частично перекрывающиеся фраг-7 022877 менты, различающиеся только одним или двумя ошибочными спариваниями оснований в области перекрытия, при этом первый зонд, прежде всего зонд, меченный первым флуоресцентным красителем, более предпочтительно первым флуоресцентным красителем и гасителем, представляет собой один аллель, а второй зонд, прежде всего зонд, меченный вторым флуоресцентным красителем, который не идентичен первому красителю, более предпочтительно вторым флуоресцентным красителем и гасителем, представляет собой другой аллель. В конкретном варианте осуществления изобретения указанный информативный полинуклеотидный фрагмент содержит полиморфизм, где указанный полиморфизм основан на SNP3827 в доменеприемнике псевдоответа гена PRR7, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 5, а первая молекула-зонд, меченная первым флуоресцентным красителем, имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 47, а вторая молекула-зонд, меченная вторым флуоресцентным красителем, имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 48. Одним из вариантов осуществления изобретения является применение полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и представленного выше, или любого его информативного фрагмента для создания маркера, который можно применять для анализа аллельной дискриминации с целью выявления полиморфизма в геноме сахарной свеклы, где полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в Bлокусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего типа развития генотип, или применять для картирования гена В в геноме сахарной свеклы. Конкретным вариантом осуществления изобретения является применение одного или нескольких праймеров, прежде всего одной или нескольких пар праймеров, предлагаемых в изобретении и описанных выше, в анализе аллельной дискриминации с целью выявления полиморфизма в геноме сахарной свеклы, прежде всего полиморфизма, основанного на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизма, основанного на SNP, где полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в B-локусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для двулетнего типа развития генотип. В другом конкретном варианте осуществления изобретения набор молекул-зондов, предлагаемых в изобретении и описанных выше, можно применять также в указанном анализе аллельной дискриминации. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности у растения сахарной свеклы, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) анализируют нуклеотидную последовательность геномной области сахарной свеклы, генетически близко сцепленную с геном В и комплементарную или содержащую последовательность полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и описанного выше, и в) сравнивают указанную последовательность с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с двулетним фенотипом и однолетним фенотипом соответственно. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности у растения сахарной свеклы, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) амплифицируют фрагмент из указанного образца ДНК с помощью праймера, прежде всего пары праймеров, комплементарной и связывающейся с последовательностью, которая присутствует в промоторной области гена BvPRR7, в частности BvPRR7, последовательность которого представлена в SEQ IDNO: 51, и в) сравнивают указанную последовательность с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с двулетним фенотипом, но не ассоциирована с однолетним фенотипом. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности у растения сахарной свеклы, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) зондируют указанный образец ДНК молекулой-зондом, содержащей специфическую для аллеля последовательность, прежде всего специфическую для аллеля последовательность из промоторной области гена BvPRR7, в частности BvPRR7, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 51,для которой известно, что она присутствует в аллеле, ассоциированном с двулетним типом развития, но не присутствует в аллеле, ассоциированном с однолетним типом развития. В конкретном варианте осуществления изобретения в указанном способе применяют пару праймеров, выбранную из группы, включающей пару праймеров F3808 (SEQ ID NO: 29) и R3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,6 т.п.н.; пару праймеров F3855(SEQ ID NO: 35) и R3809 (SEQ ID NO: 30), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 1,0 т.п.н.; и пару праймеров F3855 (SEQ ID NO: 35) и R3856 (SEQ ID NO: 36) (табл. 4), которая обеспечивает получение продукта амплификации размером 0,8 т.п.н., когда в качестве матрицы применяют геномную ДНК из двулетних линий, но не обеспечивает амплификацию в случае однолетних линий. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ выявления специфического гаплотипа в группе растений сахарной свеклы, которые имеют характерный для двулетнего типа развития генотип, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) анализируют нуклеотидную последовательность геномной области сахарной свеклы, генетически близко сцепленную с геном В и комплементарную или содержащую последовательность полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и описанного выше, и в) сравнивают указанную последовательность с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с конкретным гаплотипом. В конкретном варианте осуществления изобретения осуществляют анализ последовательности с использованием молекулярного маркера, основой которого является полинуклеотид или его информационный фрагмент или один или несколько праймеров, прежде всего одна или несколько пар праймеров, но предпочтительно одна или несколько пар праймеров, включающая(ие) "прямой" праймер и "обратный" праймер, предлагаемые в изобретении и описанные выше. Другим конкретным вариантом осуществления изобретения является способ выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности у растения сахарной свеклы, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) анализируют нуклеотидную последовательность интронной области, которую можно получать из генома сахарной свеклы с помощью ПЦР-амплификации, с использованием "прямого" праймера PRR7-F,последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 7, и "обратного" праймера, PRR7-R, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 8, и в) сравнивают указанную последовательность с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с двулетним фенотипом или однолетним фенотипом соответственно. В одном из вариантов осуществления изобретения последовательность интронной области по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2. Еще в одном конкретном варианте осуществления изобретения интронная область имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. Другим конкретным вариантом осуществления изобретения является способ выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности растения сахарной свеклы, заключающийся в том, что а) отбирают образец генома растения сахарной свеклы, подлежащий анализу,б) анализируют нуклеотидную последовательность геномной области, содержащей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, и в) сравнивают указанную последовательность с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с двулетним фенотипом или однолетним фенотипом соответственно, и г) определяют, получен ли указанный геномный образец из генома, определяющего однолетний или двулетний фенотип. Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ, заключающийся в том, что в геномном образце из растения сахарной свеклы анализируют интронную область полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и описанного выше, с помощью "прямого" и "обратного" праймеров, фланкируя подобласть в интронной области, для которой известно, что она содержит полиморфный сайт, амплифицируя указанную подобласть и сравнивая амплифицированный фрагмент с аллельной последовательностью, для которой известно, что она ассоциирована с двулетним фенотипам или однолетним фенотипом соответственно. Еще одним конкретным вариантом осуществления изобретения является описанный выше способ,заключающийся в том, что создают набор полинуклеотидных зондов на основе SNP, содержащий две отдельных молекулы-зонда, которые отличаются по меньшей мере одним ошибочным спариванием,предпочтительно двумя или большим количеством ошибочных спариваний, которые локализованы в соседних сайтах, но прежде всего одним ошибочным спариванием, в котором первая молекула-зонд,прежде всего меченая молекула-зонд, более предпочтительно молекула-зонд, меченная первым флуоресцентным красителем и гасителем, представляет собой один аллель, а вторая молекула-зонд, прежде всего меченая молекула-зонд, более предпочтительно молекула-зонд, меченная вторым флуоресцентным красителем, который не идентичен первому красителю, и гасителем, представляет собой другой аллель, и в котором указанный набор полинуклеотидных зондов применяют для дискриминации двух аллельных вариантов. В частности, маркеры, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять в анализе аллельной дискриминации, прежде всего в анализе дискриминации различных гаплотипов в группах растений, которые имеют характерный для двулетнего типа развития генотип. Для указанного анализа используют набор полинуклеотидных зондов, содержащий две отдельные молекулы-зонды, которые комплементарны, например, подобласти гена BvPRR7, которую можно получать ПЦР-амплификацией с использованием "прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, при этом молекулы-зонды различаются только одним ошибочным спариваний оснований, прежде всего в положении 631. Первая молекула-зонд, прежде всего молекула-зонд, которая имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, и помечена первым флуоресцентным красителем, таким, например, как FAM,более предпочтительно первым флуоресцентным красителем и гасителем, представляет собой один аллель, а вторая молекула-зонд, прежде всего молекула-зонд, которая имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, и помечена вторым флуоресцентным красителем, который не идентичен первому красителю, таким как VIC, более предпочтительно вторым флуоресцентным красителем и гасителем, представляет собой второй аллель. Следующим вариантом осуществления изобретения является анализ аллельной дискриминации,предназначенный для выявления полиморфизма в геномной области генома сахарной свеклы, который обладает способностью к косегрегации с фенотипом однолетности, прежде всего полиморфизма, основанного на SNP, SSR, делеции или инсерции по меньшей мере одного нуклеотида, но прежде всего полиморфизма, основанного на SNP, где этот полиморфизм является диагностическим для B-аллеля в Bлокусе и позволяет различать характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип или различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих характерный для однолетнего и характерный для двулетнего типа развития генотип, для которого применяют молекулярный маркер, созданный на основе полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и описанного выше, или любой его информативный фрагмент. В конкретном варианте осуществления изобретения молекулярный маркер содержит пару праймеров, предлагаемых в изобретении и описанных выше. Другим конкретным вариантом осуществления изобретения является анализ аллельной дискриминации, предназначенный для выявления однонуклеотидного полиморфизма в интронной области, которую можно получать из генома сахарной свеклы с помощью ПЦР-амплификации с использованием"прямого" праймера PRR7-F, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 7, и "обратного" праймера PRR7-R, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 8, для которого применяют набор праймеров и/или полинуклеотидных зондов, предлагаемых в изобретении и описанных выше. В одном из вариантов осуществления изобретения последовательность интронной области по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99% идентична нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2. Еще в одном конкретном варианте осуществления изобретения интронная область имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. Одним из вариантов осуществления изобретения является применение полинуклеотида, предлагаемого в изобретении и описанного выше, для создания молекулярного маркера, который можно использовать для выявления отсутствия или присутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности в геноме сахарной свеклы, которое предусматривает а) идентификацию указанных полиморфных сайтов,б) оценку связи указанных полиморфизмов с отсутствием или присутствием аллеля, ассоциированного с признаком однолетности у сахарной свеклы, путем в) создания молекулы-зонда или нескольких молекул-зондов, прежде всего праймера или нескольких праймеров, предпочтительно пары праймеров или нескольких пар праймеров, но наиболее предпочтительно "прямого" и "обратного" праймера, которые распознают нуклеотидную последовательность,фланкирующих указанный полиморфный сайт, для амплификации полинуклеотида, содержащего указанный полиморфный сайт, который можно применять для анализа аллельной дискриминации. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ идентификации загрязнений характерным для однолетнего типа развития генотипом предназначенных для продажи семян, заключающийся в том, что применяют полинуклеотид, предлагаемый в изобретении и описанный выше, или его информативный фрагмент в качестве маркера для выявления присутствия или отсутствия определяющего однолетность аллеля в полученном из растения образце. В частности, изобретение относится к способу идентификации загрязнений характерным для однолетнего типа развития генотипом предназначенных для продажи семян, заключающемуся в том, что применяют полинуклеотид, предлагаемый в изобретении и описанный выше, или его информативный фрагмент в качестве маркера для идентификации загрязнений характерным для однолетнего типа разви- 10022877 тия генотипом предназначенных для продажи семян. Одним из вариантов осуществления изобретения является способ идентификации загрязнений характерным для однолетнего типа развития генотипом предназначенных для продажи семян, заключающийся в том, что применяют основанный на использовании маркера анализ аллельной дискриминации,предлагаемый в изобретении и описанный выше. Изобретение относится также к применению гена В, прежде всего гена BvPRR7, в основанном на применении трансгенов подходе к получению растений, имеющих однолетний или характеризующийся отсутствием стрелкования фенотип. В частности, изобретение относится к химерным конструкциям, содержащим кассету экспрессии,которая несет кодирующую последовательность гена В, предпочтительно кодирующую последовательность BvPRR7, представленную в SEQ ID NO: 1, но наиболее предпочтительно в SEQ ID NO: 52, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99%, под контролем регуляторных элементов, в частности под контролем регуляторных элементов, обладающих функциональной активностью в растениях. Одним из вариантов осуществления изобретения являются химерные конструкции, содержащие кассету экспрессии, которая несет кодирующую последовательность гена В, предпочтительно кодирующую последовательность BvPRR7, представленную в SEQ ID NO: 1, но наиболее предпочтительно в SEQID NO: 52, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99%, под контролем регуляторных элементов, в частности под контролем связанных с признаком однолетности промотором и терминирующих последовательностей, таких как характерные для гена PRR7, прежде всего гена PRR7 Beta vulgaris. В одном из вариантов осуществления изобретения химерная конструкция, описанная выше, может содержать также ген маркера для селекции, который позволяет различать трансформированный и нетрансформированный растительный материал при осуществлении процесса отбора. В одном из вариантов осуществления изобретения химерная конструкция, предлагаемая в изобретении, содержит маркер отрицательной селекции, прежде всего маркер для селекции, который кодирует фактор, определяющий устойчивость к токсичным для растения соединениям, таким как антибиотики или гербициды. В одном из вариантов осуществления изобретения химерная конструкция, предлагаемая в изобретении, содержит маркер положительной селекции, прежде всего маркер для селекции, который кодирует фермент, придающий трансформированному растению селективное преимущество по сравнению с нетрансформированными растениями, прежде всего преимущество с позиций питания, такой, например,как ген фосфоманнозоизомеры, ген ксилозоизомеразы. Одним из вариантов осуществления изобретения является трансформирующий вектор и/или экспрессионный вектор, прежде всего растительный трансформирующий вектор и/или экспрессионный вектор, который содержит химерную конструкцию, предлагаемую в изобретении и описанную выше. Одним из вариантов осуществления изобретения является растительная клетка, прежде всего растительная клетка растения сахарной свеклы, которая содержит химерную полинуклеотидную конструкцию или векторную молекулу, предлагаемую в изобретении и описанную выше. Одним из вариантов осуществления изобретения является растение, прежде всего растение сахарной свеклы, которое содержит растительную клетку, предлагаемую в изобретении, и экспрессирует белок, кодируемый геном В, прежде всего белок, кодируемый геном BvPRR7, например растение, имеющее однолетний фенотип. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидная конструкция, предназначенная для трансгенной супрессии экспрессии гена BvPRR7 прежде всего с помощью антисмыслового или РНКi-подхода (подхода, основанного на РНК-интерференции). Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидная конструкция, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую dsРНК, которая обладает способностью направленно воздействовать на мРНК, продуцируемые в результате транскрипции последовательности ДНК, которая кодирует белок гена В, прежде всего белок гена BvPRR7, приводя к их расщеплению. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидная конструкция, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую dsРНК, которая практически идентична по меньшей области кодирующей последовательности гена В, в частности кодирующей области генаBvPRR7, представленной в SEQ ID NO: 1, но прежде всего в SEQ ID NO: 52, или последовательности,которая идентична ей по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99%. Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотидная конструкция, которая содержит фрагмент кодирующей области гена В, в частности фрагмент кодирующей области генаBvPRR7, представленной в SEQ ID NO: 1, но прежде всего в SEQ ID NO: 52, или последовательности,которая идентична ей по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, но наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90% и вплоть до 95-99%, которая находится в кассете для РНКi под контролем конститутивного промотора, такого, например, как промотор Ubi3 из Arabidopsis. Одним из вариантов осуществления изобретения является трансформирующий вектор и/или применяемый для РНКi экспрессионный вектор, прежде всего растительный трансформирующий вектор и/или экспрессионный вектор, который содержит полинуклеотидную конструкцию, предлагаемую в изобретении и описанную выше. Одним из вариантов осуществления изобретения является растительная клетка, которая содержит полинуклеотидную конструкцию или векторную молекулу, предлагаемую в изобретении и описанную выше. Одним из вариантов осуществления изобретения является растение, прежде всего растение сахарной свеклы, которое содержит растительную клетку, предлагаемую в изобретении, и экспрессируетdsРНК, в результате чего подавляется стрелкование, и растение приобретает фенотип, характеризующийся отсутствием стрелкования. Краткое описание чертежей и последовательностей На чертежах показано: фиг. 1 - сравнение аминокислотных последовательностей REC-доменов различных видов и предполагаемого REC-домена EST CV301305 сахарной свеклы. Идентичные аминокислоты обозначены черным цветом; консервативные - серым цветом; аминокислоты с низким уровнем подобия - светло-серым цветом и неподобные - белым цветом. Bb, Bordetella bronchiseptica; Bs, Bacillus subtilis; Bv, Beta vulgaris; Ec,Escherichia coli; Kp, Klebsiella pneumoniae; Pa, Pseudomonas aeruginosa; Rc, Rhodobacter capsulatus; Sc,Streptomyces coelicolor; Sf, Shigella flexneri; St, Salmonella typhimurium; фиг. 2 - сравнение аминокислотных последовательностей белка PRR7 Arabidopsis и предсказанного фрагмента белка EST V301305 сахарной свеклы. Идентичные аминокислоты обозначены черным цветом; подобные - серым цветом; и неподобные - белым цветом; фиг. 3 - сравнительный анализ первичной структуры последовательностей геномной и мРНК генаPRR7 Arabidopsis и EST CV301305 сахарной свеклы. Консервативные нуклеотиды Arabidopsis и Beta vulgaris L. обозначены серым цветом. Интроны обозначены заштрихованными полосами; фиг. 4 - генетическая карта хромосомы II сахарной свеклы. Название маркеров приведены справа от хромосомы, а слева показаны генетические дистанции в порядке их возрастания; фиг. 5 - схематическое изображение генной структуры гена BvPRR7, включая предполагаемые экзоны и интроны. Область, консервативная EST CV301305, обозначена широкой стрелкой; фиг. 6 - сравнение аминокислотных последовательностей представителей семейства продуктов генаPRR Arabidopsis и белка BvPRR7. Идентичные аминокислоты обозначены черным цветом; консервативные - серым цветом; аминокислоты с низким уровнем подобия - светло-серым цветом и неподобные белым цветом. Мотивы REC и ССТ обозначены прямоугольниками; на фиг. 7 - филогенетическая взаимосвязь между BvPRR7 и родственными белками из других видов цветковых растений. Предсказанную аминокислотную последовательность BvPRR7 выравнивали с указанными ниже белками с помощью программы ClustalW и конструировали неукорененное филогенетическое дерево. Для выведения эволюционной истории использовали метод "объединения соседей"(Neighbor-Joining Method) (Saitou и Nei, 1987). Для выведения эволюционной истории анализируемых таксонов применяли консенсусное дерево, построенное методом "бутстрэпа" ("bootstrap") на основе 1000 реплик (Felsenstein, 1985). Ветви, соответствующие разделению, воспроизводимому менее чем в 50%"bootstrap"-реплик, удаляли (осуществляли их коллапс). Рядом с ветвями указан процент реплик деревьев, для которых ассоциированные таксоны кластеризовали, при осуществлении "bootstrap"-анализа (1000 реплик). Дерево изображено в таком масштабе, когда длины ветвей представлены в тех же единицах,представляющих собой эволюционные расстояния, которые применяли для выведения филогенетического дерева. Эволюционные расстояния рассчитывали с помощью метода коррекции Пуассона (Zuckerkandl и Pauling, 1965) и выражали в единицах, представляющих собой количество аминокислотных замен на один сайт. Все позиции, содержащие "бреши" и недостающие данные, исключали из базы данных ("опция полной делеции"). В конечной базе данных содержалось в целом 352 позиции. Филогенетический анализ осуществляли с помощью программного обеспечения MEGA4 (Tamura и др., 2007). Использовали следующие сокращения: At PRR3, Arabidopsis thaliana PRR3 (NP568919); At PRR5, Arabidopsis thaliana(ABL09477); фиг. 8 - профиль генной экспрессии BvPRR7 в двулетнем растении сахарной свеклы, выращенной в условиях длинного светового для (16 ч света, 8 ч темноты) и при постоянной температуре 18 С. Значения выражали в виде относительных уровней экспрессии, стандартизованных относительно референс-геновBvBTU и BvICDH с помощью анализа на основе геометрического усреднения (Vandesompele и др., 2002); фиг. 9 - плазмидная карта бинарного вектора, предназначенного для трансформации кДНК BvPRR7 под контролем фрагмента промотора BvPRR7, ассоциированного с однолетним типом развития растений. Селектируемый маркер представляет собой ген PMI под контролем промотора HSP80 (Brunke и Wilson, 1993); фиг. 10 - плазмидная карта бинарного вектора, предназначенного для трансгенной супрессииBvPRR7 с помощью РНКi. Инвертированный повтор для BvPRR7 состоит из кДНК-фрагмента размером 0,6 т.п.н., который клонировали между промотором Ubi3 (Norris и др., 1993) и терминатором Nos как в смысловой, так и в антисмысловой ориентации, разделенный вторым интроном гена StLS1 картофеля(Eckes и др., 1986; Vancanneyt и др., 1990). Селектируемый маркер представляет собой ген PMI под контролем промотора HSP80 (Brunke и Wilson, 1993); ПоследовательностиSEQ ID NO: 1 - нуклеотидная последовательность EST CV301305,SEQ ID NO: 2 - нуклеотидная последовательность интрона 3 BvPRR7 и ее аллельная изменчивость,предназначенная для картирования,SEQ ID NO: 3 - нуклеотидная последовательность интрона 3 аллельного варианта 1 BvPRR7 (гаплотип 1),SEQ ID NO: 4 - нуклеотидная последовательность интрона 3 аллельного варианта 2 BvPRR7 (гаплотип 2),SEQ ID NO: 5 - геномная нуклеотидная последовательность BvPRR7,SEQ ID NO: 6 - предполагаемая аминокислотная последовательность BvPRR7,SEQ ID NO: 7 - нуклеотидная последовательность праймера PRR7-F,SEQ ID NO: 8 - нуклеотидная прследовательность праймера PRR7-R,SEQ ID NO: 9 - нуклеотидная последовательность зонда PRR7(T1)-FAM,SEQ ID NO: 10 - нуклеотидная последовательность зонда PRR7(T1)-VIC,SEQ ID NO: 11 - нуклеотидная последовательность "прямого" праймера BvPRR7,SEQ ID NO: 12 - нуклеотидная последовательность "обратного" праймера BvPRR7,SEQ ID NO: 13 - нуклеотидная последовательность "прямого" праймера BvBTU,SEQ ID NO: 14 - нуклеотидная последовательность "обратного" праймера BvBTU,SEQ ID NO: 15 - нуклеотидная последовательность "прямого" праймера BvICDH,SEQ ID NO: 16 - нуклеотидная последовательность "обратного" праймера BvICDH,SEQ ID NO: 17 - нуклеотидная последовательность праймера F3766,SEQ ID NO: 18 - нуклеотидная последовательность праймера R3767,SEQ ID NO: 19 - нуклеотидная последовательность праймера F3354,SEQ ID NO: 20 - нуклеотидная последовательность праймера R3355,SEQ ID NO: 21 - нуклеотидная последовательность праймера F3768,SEQ ID NO: 22 - нуклеотидная последовательность праймера R3769,SEQ ID NO: 23 - нуклеотидная последовательность праймера F3782,SEQ ID NO: 24 - нуклеотидная последовательность праймера R3783,SEQ ID NO: 25 - нуклеотидная последовательность праймера F3784,SEQ ID NO: 26 - нуклеотидная последовательность праймера R3785,SEQ ID NO: 27 - нуклеотидная последовательность праймера F3806,SEQ ID NO: 28 - нуклеотидная последовательность праймера R3807,SEQ ID NO: 29 - нуклеотидная последовательность праймера F3808,SEQ ID NO: 30 - нуклеотидная последовательность праймера R3809,SEQ ID NO: 31 - нуклеотидная последовательность праймера F3810,SEQ ID NO: 32 - нуклеотидная последовательность праймера R3811,SEQ ID NO: 33 - нуклеотидная последовательность праймера F3853,SEQ ID NO: 34 - нуклеотидная последовательность праймера F3854,SEQ ID NO: 35 - нуклеотидная последовательность праймера F3855,SEQ ID NO: 36 - нуклеотидная последовательность праймера R3856,SEQ ID NO: 37 - нуклеотидная последовательность праймера F3857,SEQ ID NO: 38 - нуклеотидная последовательность праймера R3858,SEQ ID NO: 39 - нуклеотидная последовательность праймера F3859,SEQ ID NO: 40 - нуклеотидная последовательность праймера R3860,SEQ ID NO: 41 - нуклеотидная последовательность праймера F3861,SEQ ID NO: 42 - нуклеотидная последовательность праймера R3862,SEQ ID NO: 43 - нуклеотидная последовательность праймера F3863,SEQ ID NO: 44 - нуклеотидная последовательность праймера R3864,SEQ ID NO: 45 - нуклеотидная последовательность праймера F3865,SEQ ID NO: 46 - нуклеотидная последовательность праймера R3866,- 13022877SEQ ID NO: 47 - нуклеотидная последовательность зонда PRR7( 3827)-FAM,SEQ ID NO: 48 - нуклеотидная последовательность зонда PRR7( 3827)-VIC,SEQ ID NO: 49 - нуклеотидная последовательность "прямого" праймера BvPRR7, применяемого для анализа экспрессии генов,SEQ ID NO: 50 - нуклеотидная последовательность "обратного" праймера BvPRR7, применяемого для анализа экспрессии генов,SEQ ID NO: 51 - нуклеотидная последовательность геномной нуклеотидной последовательностиBvPRR7, включающая промоторную область размером примерно 13 т.п.н.,SEQ ID NO: 52 - нуклеотидная последовательность кодирующей области BvPRR7. Определения Технические понятия и выражения, применяемые в настоящем описании, как правило, если специально не указано иное, имеют значения, которые обычно используют в области молекулярной биологии растений. В настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения подразумевается, если из контекста ясно не следует иное, что употребляемое в единственном числе существительное включает также множественное число. Так, например, ссылка на "растение" включает одно или несколько растений, а ссылка на "клетку" включает смеси клеток, тканей и т.п. Понятие "сахарная свекла" относится ко всем видам и подвидам рода Beta, а также ко всем сортам культурной свеклы Beta vulgaris. Культурные сорта свеклы подразделяют на четыре группы: листовая свекла, огородная свекла, кормовая свекла и сахарная свекла. Понятие "сахарная свекла" относится также ко всем культурным сортам свеклы, включая сорта, выращиваемые для целей, отличных от получения сахара, например, для получения этанола, пластиков или индустриальных продуктов. В частности, понятие "сахарная свекла" относится к кормовой свекле и сахарной свекле, но наиболее предпочтительно к сахарной свекле. Понятие "однолетняя линия сахарной свеклы" относится к растению сахарной свеклы, содержащему доминантный аллель b в локусе В в гетерозиготном или гомозиготном состоянии. Понятие "двулетняя линия сахарной свеклы" относится к растению сахарной свеклы, содержащему рецессивный аллель b в локусе В в гетерозиготном состоянии. Понятие "стрелкование" относится к переходу от вегетативной розеточной стадии к стадии цветения или репродуктивного роста. Понятие "ген B" в контексте настоящего описания относится к гену, который ответствен за раннее стрелкование сахарной свеклы. У растений, несущих доминантный аллель, происходит удлинение побега и последующее цветение без предварительного нахождения при низких температурах. Понятие "яровизация" относится к процессу, при котором у некоторых растений ускоряется индукция цветения при охлаждении растений в течение определенного периода времени. Понятие "аллель" в контексте настоящего изобретения относится к альтернативным формами различных генетических единиц, ассоциированных с различными формами гена или любыми видами идентифицируемого генетического элемента, которые альтернативно наследуются, поскольку расположены в одном и том же локусе в гомологичных хромосомах. В диплоидной клетке или организме два аллеля данного гена (или маркера), как правило, расположены в соответствующих локусах на паре гомологичных хромосом. В контексте настоящего описания понятие "размножение (селекция)" и его грамматические варианты относится к любому процессу, который позволяет получать индивидуальное потомство. Размножение может быть половым или неполовым или представлять собой любую их комбинацию. Примерами размножения являются, но не ограничиваясь только ими, скрещивание, самоопыление, получение производного с удвоенным гаплоидным набором и их комбинации. Понятие "локус" в контексте настоящего изобретения относится к области на хромосоме, которая содержит ген или любой другой генетический элемент или фактор, определяющий признак. В контексте настоящего описания понятие "генетический маркер" относится к особенности индивидуального генома (например, нуклеотидной или полинуклеотидной последовательности, которая присутствует в индивидуальном геноме), ассоциированной с одним или несколькими представляющими интерес локусами. В некоторых вариантах осуществления изобретения, в зависимости от контекста, генетический маркер является полиморфным в представляющей интерес популяции или представляет собой локус, в котором присутствует полиморфизм. Генетические маркеры представляют собой, например,такие маркеры, но не ограничиваясь только ими, как однонуклеотидные полиморфизмы (SNP), инделы(т.е. инсерции/делеции), простые повторяющиеся последовательности (SSR), полиморфизмы длины рестрикционных фрагментов (RFLP), произвольно амплифицированные полиморфные ДНК (RAPD), маркеры, представляющие собой расщепленную амплифицированную полиморфную последовательность(CAPS), маркеры, полученные с помощью технологии разнообразия массивов (Diversity Arrays Technology (DArT), полиморфизмы длины амплифицированных фрагментов (AFLP). Генетические маркеры можно применять, например, для локализации на хромосоме генетических локусов, содержащих аллели,с которыми связана вариабельность экспрессии фенотипических признаков. Под поднятием "генетиче- 14022877 ский маркер" может подразумеваться также полинуклеотидная последовательность, комплементарная геномной последовательности, такая как последовательность нуклеиновой кислоты, применяемая в качестве зондов. Генетический маркер физически может быть локализован в положении на хромосоме внутри или вне генетического локуса, с которым он ассоциирован (т.е. он может являться интрагенным или экстрагенным соответственно). Другими словами, хотя генетические маркеры, как правило, применяют, когда локализация на хромосоме гена, соответствующего представляющему интерес локусу, не идентифицирована и имеет место не нулевая степень рекомбинации между генетическим маркером и представляющим интерес локусом, согласно одному из объектов настоящего изобретения можно применять также генетические маркеры, которые физически являются пограничными генетическому локусу (например, находятся внутри геномной последовательности, которая соответствует гену, такому как, но не ограничиваясь только им, полиморфизм в интроне или экзоне). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения один или несколько генетических маркеров включают от 1 до 10 маркеров, а в некоторых вариантах осуществления изобретения один или несколько генетических маркеров включает более 10 генетических маркеров. В контексте настоящего описания понятие "информативный фрагмент" относится к полинуклеотидному фрагменту с информационным содержанием, которое является восстановимым и может способствовать определению и/или характеризации представляющего интерес генетического локуса. Это информационное содержание может представлять собой полиморфизм, ассоциированный с указанным представляющим интерес локусом, такой, например, как, но не ограничиваясь только ими, однонуклеотидные полиморфизмы (SNP), инделы (т.е. инсерции/делеции), простые повторяющиеся последовательности (SSR), полиморфизмы длины рестрикционных фрагментов (RFLP), маркеры, представляющие собой произвольно амплифицированные полиморфные ДНК (RAPD), расщепленную амплифицированную полиморфную последовательность (CAPS), маркеры, полученные с помощью технологии разнообразия массивов (DArT), полиморфизмы длины амплифицированных фрагментов (AFLP), и их можно применять для создания генетического маркера. Информационное содержание "информативного фрагмента" может представлять собой также специфическую последовательность, которую можно выявлять с помощью соответствующей молекулы-зонда. В контексте настоящего описания понятие "фенотипический признак" относится к появляющейся или иным образом проявляющейся характеристике индивидуума, являющейся результатом взаимодействия генома с его окружением. Понятие "основанная на применении маркера селекция" в контексте настоящего изобретения относится к применению генетических маркеров для выявления одной или нескольких нуклеиновых кислот растения, где нуклеиновая кислота ассоциирована с требуемым признаком, для идентификации растений,которые несут гены требуемых (или нежелательных) признаков, в результате чего эти растения можно использовать (или избегать их использования) в программе селективного размножения. Понятие "микросателлитный или SSR (простые повторяющиеся последовательности) (маркер)" в контексте настоящего изобретения относится к типу генетического маркера, который состоит из многочисленных повторов коротких последовательностей оснований ДНК, которые находятся в локусах, повсеместных в растительной ДНК, и могут быть высокополиморфными. Понятие "ПЦР (полимеразная цепная реакция)" в контексте изобретения относится к методу получения относительно больших количеств специфических областей ДНК, что позволяет осуществлять различные анализы, основанные на использовании этих областей. Понятие "ПЦР-праймер" в контексте изобретения относится к относительно коротким фрагментам одноцепочечной ДНК, которые применяют в ПЦР-амплификации специфических областей ДНК. Понятие "фенотип" в контексте изобретения относится к различимой(ым) характеристике(ам) генетически контролируемого признака. Понятие "полиморфизм" в контексте изобретения относится к присутствию в популяции двух или большего количества различных форм гена, генетического маркера или наследуемого признака. Понятие "селективное размножение" в контексте изобретения относится к программе размножения,в которой используют растения, которые несут или проявляют требуемые признаки, характерные для родителей. Понятие "полинуклеотид" в контексте настоящего описания относится к полимерной высокомолекулярной молекуле, которая может быть одноцепочечной или двухцепочечной, состоящей из мономеров(нуклеотидов), которые содержат сахар, фосфат и основание, относящееся либо к пуринам, либо к пиримидинам. "Фрагмент полинуклеотида (полинуклеотидный фрагмент)" представляет собой часть данной полинуклеотидной молекулы. В высших растениях дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) представляет собой генетический материал, а рибонуклеиновая кислота (РНК) участвует в переносе информации,входящей в ДНК, на белки. "Геном" представляет собой полную совокупность генетического материала,входящего в каждую клетку организма. Таким образом, понятие "полинуклеотид" относится к полимеру ДНК или РНК, который может быть одно- или двухцепочечным, необязательно содержащему синтетические, не встречающиеся в естественных условиях или измененные нуклеотидные основания, которые могут включаться в полимеры ДНК или РНК. Если не указано иное, то подразумевается, что конкретная нуклеотидная последовательность, предлагаемая в настоящем изобретении, включает также ее полученные в результате консервативной модификации варианты (например, замены кодонов из-за вырожденности генетического кода) и комплементарные последовательности, а также определенные указанные последовательности. В частности, для замены кодонов из-за вырожденности генетического кода можно создавать последовательности, в которых в третьем положении в одном или в нескольких выбранных(или во всех) кодонах произведена замена смешанными основаниями и/или остатками дезоксиинозина(Batzer и др., 1991; Ohtsuka и др., 1985; Rossolini и др., 1994). Понятия полинуклеотид используют взаимозаменяемо с понятиями нуклеиновая кислота, нуклеотидная последовательность, кДНК и мРНК, кодируемая геном, и т.д. Подразумевается, что полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, должен находиться в выделенной форме. Понятие "выделенный" означает, что описанный и предлагаемый в изобретении полинуклеотид не является полинуклеотидом, который встречается в естественных условиях, если реально существует его встречающийся в естественных условиях дубликат. Таким образом, предполагается, что и другие соединения, описанные ниже, должны быть выделенными. В контексте растительного генома полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, отличается от его встречающихся в естественных условиях дубликатов инсерционным участком и последовательностями, фланкирующими указанный инсерционный участок. В контексте настоящего описания понятие "нуклеиновая кислота" относится к любой физической цепи мономерных единиц, которая может соответствовать цепи нуклеотидов, включая полимер нуклеотидов (например, типичный полимер ДНК или РНК), модифицированных олигонуклеотидов (например,олигонуклеотиды, содержащие основания, не являющиеся типичными для биологической РНК или ДНК,например 2'-O-метилированные олигонуклеотиды), и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота может быть одноцепочечной, двухцепочечной, многоцепочечной или представлять собой их комбинации. Если не указано иное, то конкретная нуклеотидная последовательность,предлагаемая в настоящем изобретении, необязательно содержит или кодирует комплементарные последовательности помимо любых конкретно указанных последовательностей. Понятие "ген" в широком смысле относится к любому сегменту нуклеиновой кислоты, связанному с биологической функцией. Так, гены включают кодирующие последовательности и/или регуляторные последовательности, необходимые для их экспрессии. Например, понятие "ген" относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, который экспрессирует мРНК или функциональную РНК или кодирует конкретный белок и который включает регуляторные последовательности. Гены включают также неэкспрессируемые сегменты ДНК, которые, например, образуют последовательности, распознаваемые другими белками. Гены можно получать из различных источников, включая клонирование из представляющего интерес источника или синтез из известного или предсказанного на основе информации о последовательности источника, или они могут включать последовательности, сконструированные так, что они имеют требуемые параметры."Маркерный ген" кодирует селектируемый или выявляемый путем скрининга признак. Понятие "химерный ген" относится к любому гену, который сдержит 1) последовательности ДНК,включая регуляторные и кодирующие последовательности, которые не встречаются вместе в естественных условиях, или 2) последовательности, кодирующие участки белков, которые не объединены в естественных условиях, или 3) участки промоторов, которые не объединены в естественных условиях. Таким образом, химерный ген может содержать регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, выведенные из различных источников, или содержать регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, выведенные из одного и того же источника, но собранные иным образом по сравнению с их укладкой в естественных условиях. Понятие "трансген" относится к интродуцированному путем трансформации в геном и стабильно поддерживаемому гену. К трансгенам относятся, например, гены, которые гетерологичны или гомологичны генам конкретного подлежащего трансформации растения. Кроме того, трансгены могут представлять собой нативные гены, встроенные в ненативный организм, или химерные гены. Понятие "белок", "пептид" и "полипептид" в контексте настоящего описания используют взаимозаменяемо. Понятие "кодирующая последовательность" относится к последовательности ДНК или РНК, которая кодирует конкретную аминокислотную последовательность, и не включает некодирующие последовательности. Она может представлять собой "непрерывную кодирующую последовательность", т.е. последовательность, в которой отсутствуют интрон, такую как кДНК, или может включать один или несколько интронов, ограниченных соответствующими сплайсинговыми стыками. "Интрон" представляет собой последовательность РНК, которая входит в первичный транскрипт, но которая удаляется в результате расщепления и повторного лигирования РНК в клетке с образованием зрелой мРНК, которая может транслироваться в белок. Понятие "промотор" относится к нуклеотидной последовательности, как правило, расположенной против хода транскрипции (5') относительно кодирующей последовательности, которая контролирует экспрессию кодирующей последовательности, обеспечивая распознавание РНК-полимеразой и другими факторами, необходимыми для правильной транскрипции. "Промотор" включает минимальный промотор, который представляет собой короткую последовательность ДНК, содержащую ТАТА-бокс и другие последовательности, которые обеспечивают специфичность сайта инициации транскрипции, к которому добавляют регуляторные элементы для контроля экспрессии. Понятие "промотор" относится также к нуклеотидной последовательности, которая содержит минимальный промотор плюс регуляторные элементы, которые обладают способностью контролировать экспрессию кодирующей последовательности или функциональной РНК. Этот тип промотора состоит из проксимальных и более дистально расположенных против хода транскрипции элементов, последние элементы часто относят к энхансерам. Таким образом, "энхансер" обозначает последовательность ДНК, которая может стимулировать активность промотора и может представлять собой присущий промотору элемент или гетерологичный элемент,встроенный для повышения уровня активности или тканеспецифичности помотора. Он может проявлять активность в обоих направлениях (прямом или обратном) и может функционировать даже при его смещении либо в против хода, либо по ходу транскрипции относительно промотора. И энхансеры, и другие находящиеся против хода транскрипции промоторные элементы связывают специфические для последовательности ДНК-связывающие белки, которые опосредуют их действия. Промоторы могут быть полностью выведены из нативного гена или состоять из различных элементов, выведенных из различных промоторов, присутствующих в природе, или даже состоять из различных синтетических ДНК-сегментов. Промотор может включать также последовательности ДНК, которые участвуют в связывании белковых факторов, контролирующих эффективность инициации транскрипции в ответ на физиологические или связанные с фазой развития условия."Сайт инициации" представляет собой положение, окружающее первый нуклеотид, который является частью транскрибируемой последовательности, который обозначают также как положение +1. Относительно этого сайта нумеруют все другие последовательности гена и его контролирующие области. Расположенные по ходу транскрипции последовательности (т.е. дополнительные кодирующие белок последовательности, расположенные в 3'-направлении) нумеруют положительными числами, а расположенные против хода транскрипции последовательности (главным образом контролирующиеся области,расположенные в 5'-направлении) нумеруют отрицательными числами. Промоторные элементы, в частности ТАТА-элемент, которые являются неактивными или обладают значительно пониженной промоторной активностью в отсутствие активации против хода транскрипции,обозначают как "минимальные или внутренние промоторы". В присутствии приемлемого фактора транскрипции минимальный промотор функционирует, обеспечивая транскрипцию. Таким образом, "минимальный или внутренний промотор" состоит только из всех основных элементов, необходимых для инициации транскрипции, например ТАТА-бокса и/или инициатора. Понятие "конститутивная экспрессия" относится к экспрессии с использованием конститутивного или регулируемого промотора. Понятие "обусловленная" или "регулируемая экспрессия" относится к экспрессии, контролируемой регулируемым промотором. Понятие "конститутивный промотор" относится к промотору, который может обеспечивать экспрессию открытой рамки считывания (ОРС), который обеспечивает контроль во всех или практически во всех растительных тканях в течение всех или практически всех стадий развития растения. Любой из активирующих транскрипцию элементов не характеризуется абсолютной тканеспецифичностью, но опосредует активацию транскрипции в большинстве частей растения на уровне 1% от уровня, достигаемого в растении, в котором транскрипция является наиболее активной. Понятие "регулируемый промотор" относится к промоторам, которые контролируют генную экспрессию не конститутивно, а регулируемым временем и/или пространственным положением образом, к ним относятся как тканеспецифические, так и индуцибельные промоторы. Они включают встречающиеся в естественных условиях и синтетические последовательности, а также последовательности, которые могут представлять собой комбинацию синтетических и встречающихся в естественных условиях последовательностей. Различные промоторы могут контролировать экспрессию гена в различных типах тканей или клеток или на различных стадиях развития или в ответ на различные факторы окружающей среды. В настоящее время открыты новые промоторы различных типов, которые можно применять в растительных клетках, их многочисленные примеры описаны у Okamuro и др., 1989. Типичные регулируемые промоторы, которые можно применять в растениях, включают, но не ограничиваясь только ими, индуцируемые антидотами промоторы, промоторы, выведенные из индуцируемой тетрациклином системы,промоторы, выведенные из индуцируемых салицилатами систем, промоторы, выведенные из индуцируемых спиртами систем, промоторы, выведенные из индуцируемых глюкокортикоидами систем, промоторы, выведенные из индуцируемых патогенами систем, и промоторы, выведенные из индуцируемых экдизонами систем. Понятие "тканеспецифический промотор" относится к регулируемым промоторам, которые экспрессируются не во всех растительных клетках, а только в одном или нескольких типах клеток в конкретных органах (таких как листья или семена), конкретных тканях (таких как зародыш или семядоля),или в конкретных типах клеток (таких как паренхима листа или запасающие клетки семян). К ним отно- 17022877 сятся также промоторы, регуляция которых обусловлена периодом времени, таким как ранняя или поздняя стадия эмбриогенеза, стадия созревания в развитии семян и плодов, стадия полностью дифференцированной ткани листа или начало старения. Понятие "индуцибельный промотор" относится к таким регулируемым промоторам, которые могут превращаться в специфические для одного или нескольких типов клеток под воздействием внешнего стимула, такого как химические агенты, свет, гормон, стресс или патоген. Понятие "функционально связаны" относится к ассоциации нуклеотидных последовательностей на одном фрагменте нуклеиновой кислоты так, что функция одной оказывает воздействие на функцию другой. Например, регуляторная последовательность ДНК "функционально связана с" или "ассоциирована с" последовательностью ДНК, которая кодирует РНК или полипептид, если две последовательности расположены так, что регуляторная последовательность ДНК обладает способностью воздействовать на экспрессию кодирующей последовательности ДНК (т.е. транскрипция кодирующей последовательности или функциональной РНК находится под транскрипционным контролем промотора). Кодирующие последовательности могут быть функционально связаны с регуляторными последовательностями в смысловой или антисмысловой ориентации. Понятие "экспрессия" относится к транскрипции и/или трансляции эндогенного гена, ОРС или ее части или трансгена в растениях. Например, в случае антисмысловых конструкций понятие экспрессия может относиться к транскрипции только антисмысловой ДНК. Кроме того, экспрессия относится к транскрипции и стабильной аккумуляции смысловой (мРНК) или функциональной РНК. Экспрессия может относиться также к производству белка. Понятие "сверхэкспрессия" относится к уровню экспрессии в трансгенных клетках или организмах,превышающим уровни экспрессии в нормальных или нетрансформированных (нетрансгенных) клетках или организмах. Понятие "антисмысловое ингибирование" относится к производству антисмысловых РНКтранскриптов, которые обладают способностью подавлять экспрессию белка с эндогенного гена или трансгена. Понятие "молчание гена" относится к зависящему от гомологии подавлению вирусных генов,трансгенов или эндогенных ядерных генов. Молчание гена может быть транскрипционным, когда подавление обусловлено пониженной транскрипцией пораженных генов, или пост-транскрипционным, когда подавление обусловлено повышенным круговоротом (расщепление) видов РНК, гомологичных пораженным генам (English и др., 1996). Молчание гена включает индуцированное вирусом молчание гена (Ruiz и др., 1998). Понятие "гибридизуется" в контексте настоящего описания относится к общепринятым условиям гибридизации, предпочтительно к таким условиям гибридизации, в которых используют 5SSPE, 1% ДСН, 1 раствор Денхардта в качестве раствора и/или температуры гибридизации от 35 до 70 С, предпочтительно 65 С. После гибридизации отмывку предпочтительно осуществляют сначала с использованием 2SSC, 1% ДСН, а затем 0,2SSC при температуре от 35 до 75 С, в частности от 45 до 65 С, но наиболее предпочтительно при 59 С (описание обозначений SSPE, SSC и раствор Денхардта см. у Sambrook и др. loc. cit (в указанном месте. Строгие условия гибридизации, например, описанные у Sambrook и др., выше, являются наиболее предпочтительными. Наиболее предпочтительные строгие условия гибридизации представляют собой вышеописанные условия, при которых гибридизацию и отмывку осуществляют при 65 С. Нестрогие условия гибридизации, при которых, например, гибридизацию и отмывку осуществляют при 45 С, являются менее предпочтительными, а при 35 С еще менее предпочтительными. Понятия "гомология последовательностей или идентичность последовательностей" в контексте настоящего описания используют взаимозаменяемо. Понятия "идентичный" или процент "идентичности" в отношении двух или большего количества нуклеотидных или белковых последовательностей обозначает,что две или большее количество последовательностей или подпоследовательностей являются одинаковыми или имеют определенный процент одинаковых аминокислотных остатков или нуклеотидов при сопоставлении и сравнительном анализе максимального соответствия, что оценивают с помощью одного из приведенных ниже алгоритмов сравнения последовательностей или путем визуальной оценки. Если две подлежащие сравнению друг с другом последовательности имеют различную длину, то понятие идентичность последовательностей предпочтительно относится к проценту нуклеотидных остатков более короткой последовательности, которые идентичны нуклеотидным остаткам более длинной последовательности. Идентичность последовательностей традиционно можно определять с помощью компьютерных программ, таких как программа Bestfit (Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 8 для Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive Madison, WI 53711). Программа Bestfit основана на алгоритме локальной гомологии Смита и Ватермана (Smith и Waterman, Advances in AppliedMathematics 2, 1981, c. 482-489) для поиска сегмента, имеющего самую высокую степень идентичности между двумя последовательностями. При применении Bestfit или другой программы сравнительного анализа первичной структуры последовательностей для решения вопроса о том, идентична ли конкрет- 18022877 ная последовательность на 95% референс-последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении,параметры предпочтительно регулируют так, чтобы процент идентичности рассчитывать по всей длине референс-последовательности и чтобы допускать гомологию брешей вплоть до 5% от общего количества нуклеотидов в референс-последовательности. При использовании Bestfit так называемые необязательные параметры предпочтительно имеют свои предварительно установленные ("принимаемые по умолчанию") значения. Отклонения, обнаруженные при сравнении данной последовательности и описанных выше последовательностей, предлагаемых в изобретении, могут быть обусловлены, например, добавлением,делецией, заменой, инсерцией или рекомбинацией. Такое сравнение последовательностей предпочтительно можно осуществлять также с помощью программы "fasta20u66" (версия 2.0u66, сентябрь 1998 г.,William R. Pearson и the University of Virginia; см. также у Pearson, 1990 прилагаемые примеры, а такжеhttp://workbench.sdsc.edu/). Для этой цели можно использовать установку "принимаемых по умолчанию" параметров. Другим доказательством того, что две нуклеотидные последовательности практически идентичны,является то, что две молекулы гибридизуются друг с другом в строгих условиях. Фраза "специфично гибридизуется с" относится к связыванию, образованию дуплекса или гибридизации молекулы только с определенной нуклеотидной последовательностью в строгих условиях, когда последовательность присутствует в комплексной смеси (например, общей клеточной) ДНК или РНК. Понятие "практически связан(ы)" относится к комплементарной гибридизации между нуклеиновой кислотой-зондом и нуклеиновой кислотой-мишенью и подразумевает наличие небольшого количества ошибочных спариваний, которые можно допускать при снижении строгости сред для гибридизации для достижения требуемого обнаружения последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. Понятия "строгие условия гибридизации" и "условия отмывки, соответствующие строгой гибридизации" в контексте экспериментов по гибридизации нуклеиновых кислот, таких как Саузерн- и Нозернгибридизации, зависят от последовательности и являются разными при применении различных параметров окружающей среды. Для специфичной гибридизации более длинных последовательностей используют более высокие температуры. Подробным руководством по гибридизации нуклеиновых кислот является работа Tijssen "Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes", часть I, глава 2 "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acidprobe assays", изд-во Elsevier, New York, 1993. Как правило, выбирают очень строгие условия гибридизации и отмывки, при которых температура примерно на 5 С ниже, чем температура плавления (Tm) для конкретной последовательности при определенной ионной силе и значении рН. Как правило, при использовании "строгих условий" зонд должен гибридизоваться с подпоследовательностью-мишенью, но не гибридизоваться с другими последовательностями.Tm обозначает температуру (при определенной ионной силе и значении рН), при которой 50% последовательностей-мишеней гибридизуется с точно подобранным зондом. При выборе очень строгих условий гибридизации температура равна Tm конкретного зонда. Примером строгих условий гибридизации на фильтре методом Саузерн- или Нозерн-блоттинга для гибридизации комплементарных нуклеиновых кислот, которые имеют более 100 комплементарных остатков, является применение 50%-ного формамида с 1 мг гепарина при 42 С при осуществлении гибридизации в течение ночи. Примером очень строгих условий отмывки является применение 0,15 М NaCl при 72 С в течение примерно 15 мин. Примером строгих условий отмывки является отмывка 0,2SSC при 65 С в течение 15 мин (описание SSCбуфера см. у Sambrook, ниже). Часто отмывке в очень строгих условиях предшествует отмывка в расслабленных условиях для удаления фонового сигнала зонда. Примером отмывки в условиях умеренной строгости для дуплексов, состоящих, например, более чем из 100 нуклеотидов, является применение 1SSC при 45 С в течение 15 мин. Примером расслабленных условий отмывки для дуплексов, состоящих, например, более чем из 100 нуклеотидов, является применение 4-6SSC при 40 С в течение 15 мин. Для коротких зондов (например, состоящих примерно из 10-50 нуклеотидов) строгие условия, как правило, включают концентрации солей, соответствующие менее чем 1,0 М концентрации ионов Na, как правило, примерно от 0,01 до 1,0 М концентрации ионов Na (или других солей) при рН от 7,0 до 8,3, при этом температура, как правило, составляет по меньшей мере примерно 30 С. Строгие условия также можно получать при добавлении дестабилизирующих агентов, таких как формамид. Как правило, величина отношения сигнала к шуму, равная 2 (или выше) по сравнению с обнаруженной при применении неродственного зонда в конкретном опыте по гибридизации, свидетельствует о наличии специфической гибридизации. Нуклеиновые кислоты, которые не гибридизуются друг с другом в строгих условиях, все еще являются практически идентичными, если белки, которые они кодируют, являются практически идентичными. Это имеет место, например, в случае, когда копию нуклеиновой кислоты создают с использованием максимальной вырожденности кодонов, допускаемой генетическим кодом."Растение" обозначает любое растение на любой стадии развития, в частности семенное растение. Понятие "растительная клетка" относится к структурной и физиологической единице растения,включающей протопласт и клеточную оболочку. Растительная клетка может находиться в форме выделенной отдельной клетки или культивируемой клетки или представлять собой часть высокоорганизован- 19022877 ной единицы, такой, например, как ткань растения, орган растения или целое растение."Культура растительных клеток" обозначает культуры структурных единиц растения, таких, например, как протопласты, клетки в культуре клеток, клетки в тканях растения, пыльца, пыльцевые трубки,семяпочки, зародышевые мешки, зиготы и зародыши на различных стадиях развития. Понятие "растительный материал" относится к листьям, стеблям, корням, цветкам или частям цветков, плодам, пыльце, яйцеклеткам, зиготам, семенам, отводкам, культурам клеток или тканей или любой другой части или продукту растения."Орган растения" обозначает отдельную и четко структурно оформленную дифференцированную часть растения, такую как корень, стебель, лист, листовая почка или зародыш. В контексте настоящего описания понятие "растительная ткань" относится к группе растительных клеток, организованных в виде структурной и функциональной единицы. Под это понятие подпадает любая ткань растения, присутствующая в самом растении или находящаяся в культуре. Это понятие включает, но не ограничиваясь только ими, целые растения, органы растения, семена растения, культуру ткани и любые группы растительных клеток, организованных в виде структурных и/или функциональных единиц. Использование этого понятия в сочетании с указанием какого-либо конкретного типа растительной ткани (или безотносительно к нему), как это имеет место выше или в ином месте в настоящем описании, не следует истолковывать в том смысле, что оно не может относиться к любому другому типу растительной ткани. Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, идентифицированным в геноме сахарной свеклы, включая их варианты и производные, где для полинуклеотидов продемонстрирована истинная косегрегация с фенотипом сахарной свеклы, ассоциированным с геном, который обусловливает стрелкование (т.е. с геном В), и применение указанных полинуклеотидов для создания маркеров, которые можно использовать для картирования и идентификации гена, обусловливающего стрелкование, или гена В. Полинуклеотидные маркеры, предлагаемые в изобретении, можно применять также для контроля качества партий поступающих в продажу семян путем скрининга поступающих в продажу семян двулетней сахарной свеклы в отношении загрязнителей, имеющих характерный для однолетнего типа развития генотип, и для идентификации однолетних/двулетних растений в программах размножения, в которых используют признак однолетнего типа развития для ускорения процесса селекции, или когда признак однолетнего типа развития интродуцируют вместе с новыми источниками генетической вариации. Полинуклеотиды, предлагаемые в изобретении и описанные выше, можно применять также в основанном на использовании трансгенов подходе для получения трансгенных растений сахарной свеклы,которые содержат указанные полинуклеотиды, стабильно интегрированные в геном сахарной свеклы. В частности, после экспрессии из генома продукт экспрессии можно использовать для модуляции характерного для процесса яровизации ответа (яровизационного ответа) растения сахарной свеклы. В одном из объектов изобретения яровизационный ответ можно замедлять путем подавления или регуляции по типу отрицательной связи экспрессии гена В. В другом объекте изобретения раннее стрелкование без воздействия холода можно индуцировать путем сверхэкспрессии гена В. Настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, который картирован в локусе В или находится в непосредственной близости к нему, в частности, на расстоянии 1 сМ против хода транскрипции относительно маркеров МР 0176 и GJ01 и который обладает способностью к косегрегации с маркеромGJ131 (Mhring S. и др., 2004; Gaafar R.М. и др., 2005) (фиг. 5). Одним из вариантов осуществления изобретения является полинуклеотид, включая его информативный фрагмент, предлагаемый в изобретении, который можно получать из области геномной ДНК,картированной на расстоянии менее 1 сМ, предпочтительно менее 0,75 сМ, более предпочтительно менее 0,5 сМ, еще более предпочтительно менее 0,3 сМ, но наиболее предпочтительно менее 0,25 сМ относительно гена В. Полинуклеотид, предлагаемый в изобретении, можно применять также для полной характеризации области, окружающей B-локус, включающий ген В, с целью идентификации других предполагаемых контролирующих время цветения перспективных генов (генов-кандидатов). ВАС-библиотеку создавали, используя ДНК из двулетнего поступающего в продажу культивара сахарной свеклы Н 20. Осуществляли двукратный отбор частично расщепленных (HindIII) высокомолекулярных (HMW) ДНК-фрагментов размером 100-400 т.п.п. ДНК-фрагменты встраивали путем лигирования в вектор pBeloBAC-Kan. Библиотека содержала 57600 клонов со средним размером вставки примерно 120 т.п.н., что соответствует примерно 8-кратному перекрытию генома. Избыточность оценивали путем скрининга с использованием однокопийных зондов, было установлено, что частота клонов из митохондриальной или плазмидной ДНК составляла менее 1%. Эту библиотеку ВАС применяли для выделения полноразмерной геномной последовательности гена PRR7 сахарной свеклы. В частности, для скрининга ВАС-библиотеки сахарной свеклы применяли праймеры PRR7-F иPRR7-R с помощью стандартных методов ПЦР, хорошо известных специалистам в данной области. Для скрининга пулов ДНК использовали следующие условия ПЦР: денатурацию праймеров осуществляли при температуре от 90 до 98 С, предпочтительно примерно при 95 С, в течение 2-10 мин, предпочтительно примерно в течение 5 мин, после чего осуществляли 30-40 циклов амплификации в течение 25-35 с, предпочтительно примерно 35 циклов амплификации в течение 30 с при температуре от 90 до 98 С,предпочтительно примерно при 95 С в течение 25-35 с, предпочтительно в течение 30 с при температуре от 55 до 65 С, предпочтительно примерно при 60 С, и в течение 25-35 с, предпочтительно 30 с при температуре от 68 до 75 С, предпочтительно примерно 72 С, а затем в течение 2-8 мин, предпочтительно примерно 5 мин, при температуре от 68 до 75 С, предпочтительно примерно 72 С. ПЦР-эксперименты осуществляли с помощью соответствующей реакционной смеси, включающей приемлемую полимеразу,предпочтительно полимеразу Taq. Последующий скрининг пулов ДНК в отношении BvPRR7-фрагментов позволил идентифицировать положительный ВАС-клон, несущий соответствующий фрагмент. Для получения полноразмерной последовательности гена BvPRR7 ранее идентифицированный ВАС-клон секвенировали с использованием стандартного метода секвенирования, такого, например, как метод пиросеквенирования, разработанный фирмой "454 Life Sciences". Два неперекрывающихся набора последовательных фрагментов, последовательность которых обладала гомологией с последовательностью EST CV301305, затем можно объединять в одной последовательности (SEQ ID NO: 5). На основе сравнительного анализа первичной структуры последовательностей набора последовательных фрагментов ВАС и EST CV301305 и на основе гомологии с последовательностью гена PRR7 из Arabidopsis удалось предсказать предполагаемую структуру гена BvPRR7 сахарной свеклы, включающую интроны и экзоны, которая представлена на фиг. 5. На основе указанной предсказанной геномной последовательности удалось продемонстрировать, что участок полного гена BvPRR7 размером 3,6 т.п.н. простирается на последовательности против хода транскрипции от стоп-кодона ATG и участок размером 2,2 т.п.н. простирается по ходу транскрипции относительно кодирующей области. Соответствующая аминокислотная последовательность BvPRR7 представлена в SEQ ID NO: 6. Сравнительный анализ первичной структуры аминокислотной последовательности BvPRR7 и всех представителей семейства PRR-гена из Arabidopsis,включая ТОС 1 (PRR1), PRR3, PRR5, PRR7 и PRR9, позволил проиллюстрировать выраженную консервативность мотива домена-приемника регулятора псевдоответа (PRR) (pfam00072) вблизи NH2-конца и ССТ-мотива (pfam06203) на СООН-конце (фиг. 6). Помимо семейства PRR-гена из Arabidopsis BvPRR7 характеризуется также выраженной гомологией с PRR7 зерновых культур, что проиллюстрировано с помощью филогенетического дерева, представленного на фиг. 7. Установлено, что гомолог PRR7 в зерновых культурах, более известный как Ppd, представляет собой основной определяющий фактор фотопериодической реакции (Turner и др., 2005; Beales и др., 2007). Его роль в яровизационном ответе, как это обнаружено для сахарной свеклы, пока не установлена. С учетом их гомологии с известными контролирующими время цветения генами или их возможной регуляторной функции, которую можно предположить, исходя из присутствия консервативных доменов,характерных для регуляторных белков, удалось идентифицировать несколько генов в качестве потенциальных кандидатов на роль гена В. Эти гены нуждаются в дополнительной валидации с помощью опытов, оценивающих аллельную вариабельность и/или генную экспрессию, генотипов, характерных для однолетнего и двулетнего типа развития, или на основе экспериментов по оценке комплементарности или "выключения" с использованием трансгенных подходов. Ген В можно применять в трансгенном подходе для получения трансгенных растений сахарной свеклы, которые содержат указанные полинуклеотиды, стабильно интегрированные в геном сахарной свеклы. В частности, после экспрессии из генома продукт экспрессии можно применять для модуляция яровизационного ответа растения сахарной свеклы. Согласно одному из объектов изобретения яровизационный ответ можно замедлять путем подавления или регуляции по типу отрицательной связи экспрессии гена В. В другом объекте изобретения раннее стрелкование без воздействия холода можно индуцировать путем сверхэкспрессии гена В. Ранее были разработаны методы применения молекулярных маркеров, которые можно использовать для генетического картирования, клонирования генов, размножения растений с участием маркеров и фингерпринтинга генома и исследования генетических взаимосвязей. Основой генетических маркеров являются полиморфизмы ДНК в нуклеотидных последовательностях геномных областей и их можно выявлять либо с помощью рестриктаз, или с помощью двух примированных сайтов. Известно несколько типов молекулярных маркеров, которые можно применять для основанного на использовании маркеров отбора, в том числе полиморфизмы длины рестрикционных фрагментов (RFLP),произвольно амплифицированные полиморфные ДНК (RAPD), полиморфизмы длины амплифицированных фрагментов (AFLP), простые повторяющиеся последовательности (SSR) и однонуклеотидные полиморфизмы (SNP). Информационное содержание различных типов маркеров может различаться в зависимости от метода, применяемого для получения данных о маркерах и популяции, в которой оценивали маркеры. Например, не всегда возможно различать геномные фрагменты, которые находятся в гомозиготном состоянии, и гетерозиготные фрагменты. В гетерологичной популяции типа F2, кодоминантные маркеры, такие как полиморфизмы длины рестрикционных фрагментов (RFLP, Botstein и др., 1980) и характеризующие- 21022877 ся кодоминантностью полиморфизмы длины амплифицированных фрагментов (AFLP, Vos и др., 1995),являются более информативными, чем доминантные маркеры, такие как произвольно амплифицированные полиморфные ДНК (RAPD, Welsh и McCleland, 1990) и характеризующиеся доминантностью AFLP.RFLP являются кодоминантными и их можно применять для идентификации уникального локуса. RFLP предусматривает применение рестриктаз для расщепления хромосомной ДНК в специфических коротких сайтах рестрикции, полиморфизмы являются результатом дупликаций сайтов или их делеций, или мутаций в сайтах рестрикции. При использовании AFLP требуется расщепление клеточной ДНК с помощью рестриктазы перед осуществлением ПЦР и селективных нуклеотидов в праймерах для амплификации специфических фрагментов. При использовании этого метода можно оценивать вплоть до 100 полиморфных локусов, и для каждого анализа требуется лишь относительно небольшой образец ДНК. Наиболее предпочтительным методом для амплификации нуклеотидных фрагментов, покрывающих полиморфную область растительного генома, является полимеразная цепная реакция (ПЦР) (Mullis и др., 1986), для осуществления которой используют пару праймеров, включающую "обратный" праймер и "прямой" праймер, которые обладают способностью гибридизоваться с проксимальными последовательностями, определяющими полиморфизм, в их двухцепочечном формате. В отличие от RFLP для осуществления методов, основанных на ПЦР, требуется лишь небольшой процент (примерно 10%) ДНК, применяемой в качестве матрицы, для получения больших количеств последовательности-мишени с помощью ПЦР-амплификации. Одним из таких основанных на ПЦР методов является RAPD, в котором применяют осуществляемую в расслабленных условиях амплификацию с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием только праймеров произвольной последовательности для создания специфических для штамма массивов неизвестных ДНК-фрагментов. Для этого метода требуются лишь очень небольшие образцы ДНК, и он позволяет анализировать большое число полиморфных локусов. Однако непредсказуемое поведение коротких праймеров, на которые влияют различные условиях реакции, их доминантный путь наследования и популяционная специфичность являются основными недостатками RAPD. Микросателлиты или простые повторяющиеся последовательности (SSR), полиморфизмы длины простых последовательностей (SSLP), короткие тандемные повторы (STR), мотивы простых последовательностей (SSM) и микросателлиты последовательностей-мишеней (STM) представляют собой класс повторяющихся последовательностей, которые широко распространены в геноме эукариот. Вариация количества и длины повторов является источником полиморфизма даже среди близкородственных особей. SSR-анализ основан на этих (несущих короткий повтор) последовательностях, которые селективно амплифицируют для выявления вариаций в простых повторяющихся последовательностях. Такие микросателлитные последовательности легко можно амплифицировать с помощью ПЦР с использованием пары фланкирующих локус-специфических олигонуклеотидов в качестве праймеров для выявления полиморфизмов длин ДНК (Litt и Luty, 1989; Weber и May, 1989). Мутации, затрагивающие одно положение в нуклеотидной последовательности, приводящие к заменам, делециям или инсерциям, приводят к однонуклеотидным полиморфизмам или SNP, которые встречаются примерно через каждые 1,3 т.п.н. в геноме человека (Cooper и др., 1985; Kwok и др., 1996). Большинство полиморфизмов этого типа имеет только два аллеля и их называют также биаллельными локусами. Позиционное клонирование на основе SNP может облегчать идентификацию признаков болезней и ряда биологически информативных мутаций (Wang и др., 1998). Анализы, основанные на ПЦР-удлинении, которые позволяют эффективно выявлять точечные мутации, можно применять для обнаружения SNP. Для процедуры требуются небольшое количество ДНК на образец. Тремя широко распространенными типами анализов выявления SNP с использованием метода ПЦР, являются методы, основанные на применении расщепленных амплифицированных полиморфных последовательностей (CAPS) (Konieczny и Ausubel, 1993; Thiel и др., 2004), производных CAPS(dCAPS) (Michaels и Amasino, 1998; Neff и др., 1998) и конформационного полиморфизма одной цепиCAPS-полиморфизмы представляют собой различия в длинах рестрикционных фрагментов, вызываемые SNP или инделами, которые создают или упраздняют распознаваемые обладающими эндонуклеазной активностью рестриктазами сайты рестрикции в ПЦР-ампликонах, продуцируемых специфическими для локуса олигонуклеотидными праймерами. Анализы CAPS осуществляют путем расщепления специфических для локуса ПЦР-ампликонов одной или несколькими рестриктазами и последующего разделения расщепленной ДНК на агарозных или полиакриламидных гелях.dCAPS является модификацией метода CAPS, который позволяет выявлять большинство однонуклеотидных изменений путем использования ошибочно спаренных ПЦР-праймеров. С помощью этого метода распознаваемый рестриктазой сайт, который включает SNP, интродуцируют в ПЦР-продукт с помощью праймера, который содержит одно или несколько ошибочных спариваний с ДНК-матрицей. Затем ПЦР-продукт, модифицированный таким образом, подвергают расщеплению рестриктазой и определяют присутствие или отсутствие SNP на основе полученной рестрикционной схемы. Метод SSCP позволяет разделять денатурированную двухцепочечную ДНК на неденатурирующем геле и в результате позволяет определять на основе подвижности в геле вторичную структуру, а также молекулярную массу одноцепочечной ДНК. Процедура ARMS (амплификация рефракторной мутационной системы)-ПЦР (Ye и др., 2001) предусматривает применение одной ПЦР для генотипирования SNP (Fan и др., 2003; Chiapparino и др.,2004). Состоящий из двух пар праймеров тетрапраймер используют для амплификации двух различных аллелей SNP в одной реакции ПЦР. Для амплификации таких фрагментов можно применять альтернативные методы, такие как "лигазная цепная реакция" (ЛЦР) (Barany F., 1991, для осуществления которой применяют две пары олигонуклеотидных зондов для экспоненциальной амплификации специфической мишени. Последовательности каждой пары олигонуклеотидов выбирают для того, чтобы позволять паре гибридизоваться с примыкающими последовательностями этой же цепи мишени. С помощью указанной гибридизации формируют субстрат для зависящей от матрицы лигазы. Также как в случае ПЦР, образовавшиеся продукты служат в качестве матрицы в последующих циклах и таким образом осуществляют экспоненциальную амплификацию требуемой последовательности. ЛЦР можно осуществлять с олигонуклеотидами, имеющими проксимальные и дистальные последовательности одной и той же цепи полиморфного сайта. В одном из вариантов осуществления изобретения следует создавать олигонуклеотиды, включающие фактический полиморфный сайт полиморфизма. В таком варианте осуществления изобретения условия реакции выбирают так, чтобы олигонуклеотиды могли лигироваться вместе только в том случае, когда молекула-мишень либо содержит, либо лишена специфического олигонуклеотида, который является комплементарным полиморфному сайту, присутствующему в олигонуклеотиде. В другом варианте олигонуклеотиды можно выбирать так, что они не включают полиморфный сайт (см. Segev, заявка PCT WO 90/01069). Еще один альтернативный метод, который можно применять, представляет собой "метод лигирования олигонуклеотидов" (OLA) (Landegren и др., 1988). В OLA-протоколе используют два олигонуклеотида, которые создают так, чтобы они могли гибридизоваться с примыкающими последовательностями одной цепи мишени. OLA, подобно ЛЦР, наиболее пригоден для выявления точечные мутаций. В отличие от ЛЦР в результате OLA получают "линейную", а не экспоненциальную амплификацию последовательности мишени.Nickerson с соавторами в 1990 г. описали анализ выявления нуклеиновой кислоты, который объединяет особенности и ПЦР, и OLA (Nickerson и др., 1990). В этом методе ПЦР используют для достижения экспоненциальной амплификации ДНК-мишени, которую затем выявляют с помощью OLA. Помимо необходимости в осуществлении нескольких и разнообразных стадий процессинга, одна из проблем,возникающих при применении таких комбинированных методов, состоит в том, что они включают все проблемы, связанные как с ПЦР, так и с OLA. Известны также схемы, основанные на лигировании двух (или большего числа) олигонуклеотидов в присутствии нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность образовавшегося "диолигонуклеотида", что приводит к амплификации диолигонуклеотида (Wu и Wallace, 1989), и их можно легко адаптировать для целей настоящего изобретения. Таким образом, различные анализы, основанные на применении генной последовательности, предлагаемой в изобретении и описанной выше, можно создавать и применять для скрининга растительного материала в отношении присутствия или отсутствия аллеля, ассоциированного с признаком однолетности. На основе SNP можно разрабатывать молекулярные маркеры, предпочтительно такие, как End pointTaqMan, отличающиеся от секвенированных ПЦР-продуктов тем, что их амплифицируют из однолетних и двулетних растений. При этом требуется осуществлять несколько циклов ПЦР-амплификации для того, чтобы охватить всю последовательность гена. Затем новые молекулярные маркеры следует тестировать с использованием различных генетических фонов однолетних и двулетних растений для оценки робастности молекулярного теста. В одном из вариантов осуществления изобретения молекулярный маркер представляет собой ДНКфрагмент, амплифицированный с помощью ПЦР, например SSR-маркер или RAPD-маркер. В одном из вариантов осуществления изобретения присутствие или отсутствие амплифицированного ДНКфрагмента является показателем присутствия или отсутствия самого признака или конкретного ассоциированного с признаком аллеля. В одном из вариантов осуществления изобретения различие в длине амплифицированного ДНК-фрагмента является показателем присутствия или отсутствия конкретного ассоциированного с признаком аллеля и в результате позволяет дифференцировать различные ассоциированные с признаком аллели. В конкретном варианте осуществления изобретения микросателлитные (простые повторяющиеся последовательности) (SSR) маркеры используют для идентификации подпадающих под объем изобретения аллелей в родительских растениях и/или их предках, а также в потомстве растений, полученном в результате скрещивания указанных родительских растений. В другом варианте осуществления изобретения маркер, основанный на однонуклеотидном полиморфизме, используют для идентификации подпадающих под объем изобретения аллелей в родитель- 23022877 ских растениях и/или их предках, а также в потомстве растений, полученном в результате скрещивания указанных родительских растений. Еще в одном варианте осуществления изобретения маркер, основанный на делеции или инсерции("инделе") по меньшей мере одного нуклеотида, используют для идентификации подпадающих под объем изобретения аллелей в родительских растениях и/или их предках, а также в потомстве растений, полученном в результате скрещивания указанных родительских растений. Эти маркеры можно создавать на основе последовательности полинуклеотидов, предлагаемых в изобретении и описанных выше. Согласно одному из объектов изобретения можно разрабатывать и применять маркеры, которые не полностью соответствуют представленным в настоящем описании, или еще не идентифицированные маркеры. На основе информации, представленной в настоящем описании, специалист в данной области может идентифицировать или создавать маркеры, которые не полностью соответствуют представленным в настоящем описании, но генетически близко сцеплены или предпочтительно локализованы в гене, обусловливающим стрелкование, или гене В, или сцеплены с маркерами, представленными в настоящем описании. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что другие маркеры могут найти по меньшей мере такое же применение в скрининговых анализах и связанной с маркерами селекции. Специалистам в данной области известны и доступны несколько методов или подходов, которые можно применять для идентификации и/или создания маркеров неравновесного сцепления и/или сцепленных с и/или локализованных в области гена В, а также маркеров, которые представляют собой фактически причинные мутации, ответственные характерный для двулетнего типа развития генотип. Известные специалистам в данной области подходы включают, но не ограничиваясь только ими. Применение описанных последовательностей/маркеров в основанных на использовании гибридизации подходах для идентификации другой последовательности в представляющей интерес области: праймерные последовательности, представленные в настоящем описании, и/или последовательности маркеров/генов (или их фрагмент), которые можно определять с помощью праймерных последовательностей,представленных в настоящем описании, можно применять в качестве зондов (гибридизующихся) для выделения нуклеотидных последовательностей/генов, фланкирующих маркеры, и/или сцепленных с областью гена В и/или локализованных в ней, и/или специфических для нее, из образца геномной нуклеиновой кислоты и/или образца РНК или кДНК, или пула образцов (например, осуществляя скрининг геномных ресурсов типа ВАС-библиотек или скрининг библиотек гДНК или кДНК). Применение описанных последовательностей/маркеров в основанных на использовании ПЦР подходах для идентификации другой последовательности в представляющей интерес области праймерные последовательности, представленные в настоящем описании, и/или последовательности маркеров/генов(кандидатов) (или их фрагмент), которые можно определять с помощью праймерных последовательностей, представленных в настоящем описании, можно применять в качестве праймеров для (ПЦР-)амплификации нуклеотидной последовательности/гена, фланкирующего QTL-область и/или сцепленного с ней, и/или ассоциированного с ней, и/или специфического в отношении нее из образца геномной нуклеиновой кислоты и/или образца РНК или кДНК, или пула образцов, либо выделенных из конкретной растительной ткани, либо не выделенных из нее, и/или после специфической обработки растения, и из растения сахарной свеклы и в принципе из любого другого организма, имеющего достаточную степень гомологии с сахарной свеклой. Применение описанных последовательностей/маркеров в основанных на использовании ПЦР подходах для идентификации другой последовательности в представляющей интерес области: нуклеотидные последовательности/гены одного или нескольких маркеров можно определять после создания внутренних праймеров для указанных маркерных последовательностей и применять для определения дополнительных фланкирующих последовательностей/генов в области гена В и/или генетически сцепленных и/или ассоциированных с признаком. Применение описанных последовательностей/маркеров в основанных на использовании картирования и/или сравнительного картирования для идентификации маркеров в одном(их) и том(тех) же области(ях) (определение местоположения (позиционирование) гена В на других картах): на основе информации о местоположении и/или информации о маркерах, представленной выше, маркеры любого типа можно идентифицировать на основе подходов с использованием генетического картирования, в конечном счете (если в этом есть необходимость) путем определения местоположения описанных маркеров(методом генетического картирования или экстраполяции на основе общих маркеров на картах) на генетической(их) карте(ах) (высокой плотности) и/или интегрированной(ых) генетической(их) или консенсусной(ых) карты(карт). Маркеры, которые уже являются известными и/или новые маркеры, генетически сцепленные и/или расположенные вблизи описанных маркеров и/или области гена В, можно идентифицировать и/или получать и в конечном счете применять для картирования (точного) гена В и/или клонирования гена В, и/или применения для MAS-селекции. Применение описанных последовательностей/маркеров в in-siloco-подходах (методы молекулярного моделирования на основе набора вычислительных методов) для идентификации дополнительных последовательностей/маркеров/генов-кандидатов в области(ях) гена В: праймерные последовательности,- 24022877 представленные в настоящем описании, и/или последовательности маркеров/генов-кандидатов (или их фрагмент), которые можно определять с помощью праймерных последовательностей, представленных в настоящем описании, или на основе сцепленных маркеров, можно использовать в in-silico-методах для поиска в базах данных последовательностей или белков (например, с использованием программыBLAST) (дополнительных) фланкирующих и/или гомологичных последовательностей/генов, и/или аллельного разнообразия (как геномных последовательностей, так и/или последовательностей кДНК или даже белков, полученных как из представителей рода Capsicum (перец), так и/или из любого другого организма), которые генетически сцеплены и/или ассоциированы с признаками, указанными в настоящем описании, и/или локализованы в области гена В. Применение описанных последовательностей/маркеров в основанных на физическом картировании подходах (определение местоположения гена В на физической карте или в геномной последовательности): праймерные последовательности, представленные в настоящем описании, и/или последовательности маркеров/генов (или их фрагменты), которые можно определять с помощью праймерных последовательностей, представленных в настоящем описании, или с помощью других маркеров, генетически сцепленных с маркерами, представленными в настоящем описании, и/или локализованных в области гена В,можно позиционировать на физической карте и/или в (полной) геномной последовательности в принципе любого организма, имеющей достаточную степень гомологии для идентификации (перспективных) последовательностей/маркеров/генов, которые можно применять для картирования (точного) гена В и/или клонирования гена В, и/или применения для MAS-селекции. Применение описанных последовательностей/маркеров для определения местоположения гена В на других (физических) картах или геномах (других видов, при этом для перца, естественно, первостепенный интерес имеют другие представители пасленовых (Solanaceae), такие как томаты и картофель, но можно применять также модельные виды типа Arabidopsis): праймерные последовательности, представленные в настоящем описании, и/или последовательности маркеров/генов (или их фрагменты), которые можно определять с помощью праймерных последовательностей, представленных в настоящем описании, можно применять для подходов, основанных на сравнительном картировании генома или синтении,для идентификации гомологичной области и последовательностей гомологов и/или ортологов/генов(кандидатов), генетически сцепленных с областью гена В и/или расположенных в ней, и которые можно применять для картирования (точного) гена В и/или клонирования гена В, и/или применения для MASселекции. Применение описанных последовательностей/маркеров для отбора соответствующих особей, с помощью которых можно идентифицировать маркеры в представляющей интерес области с помощью генетических подходов: праймерные последовательности и/или маркеры, представленные в настоящем описании, можно использовать для отбора особей с различными/контрастирующими аллелями гена В. Генетические подходы и/или анализ объединенных сегрегантов (BSA, Michelmore и др., 1991) можно применять для идентификации маркеров/генов в конкретной представляющей интерес области (области гена В) и/или области, ассоциированной или генетически сцепленной с описанными признаками. Применение представленной информации для поиска (позиционных) генов-кандидатов: представленную информацию можно применять для идентификации позиционных и/или функциональных геновкандидатов, которые могут быть ассоциированы и/или генетически сцеплены с описанными признаками. В частности, маркеры, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять в анализе аллельной дискриминации, прежде всего в анализе, который позволяет различать (дискриминировать) различные гаплотипы в группах растений сахарной свеклы, имеющих генотип, характерный для двулетнего типа развития. Указанный анализ базируется на применении набора полинуклеотидных зондов, содержащего две различные молекулы-зонды, которые комплементарны, например, подобласти гена BvPRR7,которую можно получать путем ПЦР-амплификации с использованием "прямого" праймера PRR7-F и"обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, где молекулы-зонды различаются только одним ошибочным спариванием оснований,прежде всего ошибочным спариванием оснований в положении 631. Другим объектом изобретения является анализ, включающий применение маркеров, с помощью которых можно осуществлять специфическую идентификацию однолетних растений и двулетних растений,и поэтому их можно применять, например, для контроля качества партий семян. В частности, в изобретении предложен анализ, базирующийся на применении набора олигонуклеотидных зондов, содержащих две различные молекулы-зонды, которые комплементарны, например, подобласти гена BvPRR7, которую можно получать путем ПЦР-амплификации с использованием "прямого" праймера PRR7-F и "обратного" праймера PRR7-R, последовательности которых представлены в SEQID NO: 7 и SEQ ID NO: 8 соответственно, где молекулы-зонды различаются только одним ошибочным спариванием оснований, прежде всего ошибочным спариванием оснований в положении 631. Большая часть производств предназначенных для продажи семян сахарной свеклы находится на юге Франции и севере Италии. В обоих регионах присутствуют однолетние сорные виды свекольных, это может приводить к загрязнению их пыльцой получаемых продуктов и как следствие, к появлению характерного для однолетнего типа развития генотипа у предназначенных для продажи семян. Это является неприемлемым для покупателей, и поэтому все предназначенные для продажи партии семян выращивают в регионах, таких как Аргентина, в которых сорные виды свекольных не вырастают непосредственно после сбора семян. Растения являются неяровизированными и наличие стрелок используют для идентификации партий, загрязненных характерным для однолетнего типа развития генотипом. Признак однолетнего типа развития растений проявляется в зависимости от состояния гена В как моногенный доминантный признак; таким образом, потребность в яровизации у двулетних растений является рецессивной. Таким образом, можно предположить, что трансформация определяющего однолетний тип развития аллеля BvPRR7 в характерный для двулетнего типа развития генотип приводит к включению признака ежегодного цветения, в характерный для двулетнего типа развития акцепторный генотип. Для подтверждения этой гипотезы кодирующей последовательностью определяющего однолетний тип развития аллеля гена BvPRR7, находящейся под контролем характерных для однолетнего типа развития промотора и фрагмента терминатора, трансформируют характерный для двулетнего типа развития генотип, такой, например, как G018. Трансформацию можно осуществлять методами, известными в данной области, такими как методы, описанные у Chang и др., 2002, используя меристему сахарной свеклы в качестве эксплантата и ген фосфоманнозоизомеразы (PMI) в качестве селектируемого маркера. Трансгенные побеги отбирают по признаку экспрессии маркера селекции, такого, например, как PMIактивность (Joersbo и др., 1998), и затем укореняют, высаживают в почву и переносят в теплицу. В качестве отрицательного контроля используют нетрансгенные побеги, которые подвергают такой же процедуре регенерации in vitro, но без заражения Agrobacterium и селекции. Растения выращивают в вегетационных камерах при постоянной температуре 18 С и фотопериоде 17 ч света и 7 ч темноты. В этих условиях ни у одного из нетрасгенных контролей не должно быть обнаружено каких-либо признаков стрелкования в течение периода наблюдения, в то время как однолетние контрольные растения в норме должны выбрасывать стрелку в пределах 8-недельного периода времени. В отличие от нетрансгенных двулетних контрольных растений у большинства трансгенов стрелкование должно начинаться через 4-10 недель, и они должны обладать основным признаком, характерным для однолетних растений, несмотря на их генетический фон, соответствующий двулетним растениям. Трансгенные растения, у которых обнаружено стрелкование и цветение, подвергают перекрестному опылению двулетней поддерживающей линией с получением потомства. У растений-потомков оценивают активность маркера селекции и затем оценивают в отношении стрелкования и цветения без яровизации. Большая часть потомков должна характеризоваться коэффициентом сегрегации 1:1 и прямой корреляцией между PMI-активностью и признаком однолетности. Эти данные должны недвусмысленно подтверждать причинную связь междуBvPRR7 и независящим от яровизации цветением у сахарной свеклы.BvPRR7 играет основную роль в яровизационном ответе сахарной свеклы и поэтому его можно применять для создания устойчивости к стрелкованию у растений сахарной свеклы путем подавления яровизационного ответа. Для этой цели кДНК-фрагмент BvPRR7, такой, например, как фрагмент размером 0,6 т.п.п., представленный в SEQ ID NO: 1, помещают в кассету для РНКi под контроль конститутивного промотора. Приемлемыми конститутивными промоторами являются, например, промотор Ubi3Arabidopsis (Norris и др., 1993), промотор 35S CaMV или другие промоторы, для которых известно, что они обеспечивают конститутивную экспрессию сахарной свеклы. Кассета экспрессии содержит также селектируемый маркерный ген под контролем приемлемого промотора. В частности, маркерный ген кодирует маркер положительной селекции, такой как фосфоманнозоизомераза или ксилозоизомераза. Инвертированный повтор BvPRR7-фрагмента может быть отделен вторым интроном от гена StLS1 картофеля (Eckes и др., 1986; Vancanneyt и др., 1990) для стабилизации РНКi-кассеты, но также для повышения эффективности процесса РНКi (Wang и Waterhouse, 2001; Smith и др., 2000). Затем РНКi-кассетой можно трансформировать определяющий признак двулетнего развития генотип сахарной свеклы, такой, например, как G018, согласно описанному выше методу. Трансгенные побеги отбирают по признаку экспрессии маркера селекции, такого, например, как PMI-активность (Joersbo и др., 1998). Дающие положительную реакцию побеги и нетрансгенные контрольные побеги укореняют и переносят в теплицу для акклиматизации в течение минимум двух недель при 18 С до их обработки для яровизации. Согласно принятым методам трансгенные растения подвергают обработке для яровизации,которая предусматривает выдерживание в течение 14 дней при постоянной температуре 6 С и 12 часовой низкой искусственной освещенности. Перед воздействием индуцирующих стрелкование условий яровизированные растения медленно акклиматизируют в течение двух недель в климатических камерах путем ступенчатого повышения температуры с 10 до 18 С. Затем растения пересаживают в более крупные горшки (2 л) и осуществляют мониторинг стрелкования, выдерживая их при постоянной температуре 18 С и фотопериоде с длительным световым днем 17 ч света/7 ч темноты. У нетрансгенных контрольных растений, как правило, стрелкование начинается в период между 4-6 неделями после яровизации. У трансгенных растений с подавленным геном BvPRR7 часто наблюдается замедление стрелкования на период времени, составляющий от лишь двух недель и вплоть до более чем 2 месяцев. В некоторых случаях стрелкование вообще не происходило в условиях, существующих в теплице. Помимо замедления стрелкования и цветения трансгенные растения развиваются нормально и не имеют фенотипических аномалий. В целом, для растений с замедлен- 26022877 ным стрелкованием характерно большее количество листьев в момент стрелкования в результате пролонгированной вегетативной стадии. Получение достаточных уровней трансгенной экспрессии в соответствующих растительных тканях является важным аспектом выращивания созданных с помощью генной инженерии культурных растений. Экспрессия гетерологичных последовательностей ДНК в растении-хозяине зависит от присутствия функционально связанного промотора, который функционирует в растении-хозяине. Выбор промоторной последовательности должен определять время, когда экспрессируется гетерологичная последовательность ДНК, и место в организме, где это происходит. Например, если существует потребность в сверхэкспрессии, то можно применять растительный промоторный фрагмент, который обеспечивает экспрессию гена во всех тканях регенерированного растения. Указанные промоторы в контексте настоящего описания обозначены как конститутивные промоторы, и они обладают активностью при большинстве условий окружающей среды и стадиях развития или клеточной дифференцировки. Примерами конститутивных промоторов являются область инициации транскрипции вируса мозаики цветной капусты (CaMV) 35S, 1'- или 2'-промотор, выведенный из Т-ДНКAgrobacterium tumefaciens, и другие области инициации транскрипции из различных растительных генов,которые известны специалистам в данной области. Такие гены включают, например, ген АР 2, АСТ 11 изGpc2 из кукурузы (GenBank NO: U45855, Manjunath и др., Plant Mol. Biol. 33, 1997, c. 97-112). В другом варианте промотор может обеспечивать экспрессию молекул нуклеиновых кислот в конкретной ткани или может более точно контролироваться условиями окружающей среды или стадией развития. Примерами условий окружающей среды, которые могут влиять на транскрипцию с помощью индуцибельных промоторов, являются анаэробные условия, повышенная температура или присутствие света. Такие промоторы в контексте настоящего описания обозначены как "индуцибельные" или "тканеспецифические" промоторы. Специалисту в данной области должно быть очевидно, что тканеспецифический промотор может обеспечивать экспрессию функционально связанных последовательностей в тканях, отличных от ткани-мишени. Таким образом, в контексте настоящего описания тканеспецифический промотор представляет собой промотор, который обеспечивает экспрессию прежде всего в тканимишени, но может контролировать также определенный уровень экспрессия в других тканях. Примерами промоторов, действие которых зависит от стадии развития, являются промоторы, которые инициируют транскрипцию только (или практически только) в определенных тканях, таких как плод, семена или цветки. Промоторы, которые обеспечивают экспрессию нуклеиновых кислот в семяпочках, цветках или семенах, являются наиболее предпочтительными согласно настоящему изобретению. В контексте настоящего описания под специфическим или предпочтительным для семени промотором подразумевается промотор, который обеспечивает экспрессию специфически или предпочтительно в тканях семян, например, указанные промоторы могут быть специфическими для семяпочки, специфическими для зародыша, специфическими для эндосперма, специфическими для интегумента, специфическими для семенной оболочки или специфическими для определенных комбинаций этих органов. Их примерами являются промотор из специфического для семяпочки гена BEL1, который описан у Reiser и др., Cell 83, 1995, c. 735-742 (GenBank NO: U39944). Другие пригодные специфические для семян промоторы выводят из следующих генов: MAC1 из кукурузы (Sheridan и др., Genetics 142, 1996, c. 1009-1020,Cat3 из кукурузы (GenBank NO: L05934, Abler и др., Plant Mol. Biol. 22, 1993, c. 10131-1038), кодирующий олеозин ген размером 18 т.п.н. из кукурузы (GenBank NO: J05212, Lee и др., Plant Mol. Biol. 26,1994, c. 1981-1987), vivparous-1 из Arabidopsis (Genbank NO: U93215), кодирующий олеозин ген из Arabidopsis (Genbank NO: Z17657), Atmycl из Arabidopsis (Urao и др., Plant Mol. Biol. 32, 1996, c. 571-576), семейство генов 2s запасающего белка семян Arabidopsis (Conceicao и др., Plant 5, 1994, c. 493-505), кодирующий олеозин ген размером 20 т.п.н. из Brassica napus (GenBank NO: M63985), napA из Brassica napus(GenBank NO: J02798, Josefsson и др., JBL 26, 1987, c. 12196-1301, семейство генов напина из Brassicanapus (Sjodahl и др., Planta 197, 1995, c. 264-271), ген, кодирующий запасающий белок 2S, из Brassica napus (Dasgupta и др., Gene 133, 1993, c. 301-302), гены, кодирующие олеозин A (GenBank NO: U09118) и олеозин В (GenBank NO: U09119) из сои, и ген, кодирующий низкомолекулярный богатый серой белок из сои (Choi и др., Mol Gen, Genet. 246, 1995, c. 266-268). В другом варианте можно идентифицировать конкретные последовательности, представляющие собой промотор с требуемыми характеристиками экспрессии или промотор с повышенной экспрессионной активностью, или эти или подобные последовательности интродуцировать в последовательности посредством мутации. Кроме того, можно осуществлять мутагенез этих последовательностей для повышения экспрессии трансгенов в конкретных видах. Кроме того, можно применять промоторы, в которых объединены элементы более одного промотора. Например, в US 5491288 описана комбинация промотора вируса мозаики цветной капусты и промотора гистона. Таким образом, элементы промоторов, представленных в настоящем описании, можно объ- 27022877 единять с элементами других промоторов. Для применения в настоящем изобретения доступны различные регулирующие транскрипцию 5'- и 3'-последовательности. Терминаторы транскрипции ответственны за терминацию транскрипции и правильное полиаденилирование мРНК. 3'-нетраслируемая регуляторная последовательность ДНК предпочтительно включает от примерно 50 до примерно 1000, более предпочтительно от примерно 100 до примерно 1000 пар оснований (нуклеотидов) и содержит растительные терминирующие транскрипцию и трансляцию последовательности. Приемлемые терминаторы транскрипции и терминаторы, для которых известно, что они функционируют в растениях, представляют собой терминатор 35S CaMV, терминаторtml, терминатор нопалинсинтазы, терминатор Е 9 rbcS гороха, терминатор для транскрипта Т 7 из гена октопинсинтазы Agrobacterium tumefaciens и 3'-конец генов протеазных ингибиторов I или II из картофеля или томатов, хотя можно применять также другие 3'-концевые элементы, известные специалистам в данной области. В другом варианте можно применять также терминатор коиксина гамма, олеозина 3 или другие терминаторы из рода Coix. Предпочтительными 3'-элементами являются элементы из гена нопалинсинтазы Agrobacterium tumefaciens (Bevan и др., 1983), терминатор для транскрипта Т 7 из гена октопинсинтазы Agrobacterium tumefaciens и 3'-концевые элементы генов протеазных ингибиторов I или II из картофеля или томатов. Поскольку последовательность ДНК, расположенная между сайтом инициации транскрипции и стартовым кодоном кодирующей последовательности, т.е. нетранслируемая лидерная последовательность, может влиять на экспрессию гена, может оказаться желательным применять конкретную лидерную последовательность. Считается, что предпочтительными лидерными последовательностями являются последовательности, которые включают последовательности, для которых предсказана способность обеспечивать оптимальную экспрессию присоединенного гена, т.е. предпочтительные консенсусные лидерные последовательности, которые могут повышать или поддерживать стабильность мРНК и предупреждать несоответствующую инициацию трансляции. Выбор указанных последовательностей должен быть очевиден специалистам в данной области в свете настоящего описания. Наиболее предпочтительными являются последовательности, выведенные из генов, характеризующихся высоким уровнем экспрессии в растениях. Другие последовательности, для которых обнаружена способность повышать генную экспрессию в трансгенных растениях, представляют собой интронные последовательности (например, из генов Adhl,bronzel, actin l, actin 2 (WO 00/760067), или интрон синтазы сазарозы) и вирусные лидерные последовательности (например, из вирусов TMV, MCMV и AMV). Например, известно несколько нетранслируемых лидерных последовательностей, полученных из вирусов, которые обладают способностью повышать экспрессию. В частности, установлено, что лидерные последовательности из вируса табачной мозаики (TMV), вируса хлорозной пятнистости кукурузы (MCMV) и вирус мозаики люцерны (AMV) обладают эффективностью в отношении повышения экспрессии (например, Gallie и др., 1987; Skuzeski и др.,1990). Другие известные в данной области лидерные последовательности представляют собой, но не ограничиваясь только ими: лидеры пикорнавирусов, например, лидер EMCV (5'-некодирующая область вируса энцефаломиокардита) (Elroy-Stein и др., 1989); лидеры потивирусов, например, лидер TEV (вирус табачной гравировки); лидер MDMV (вирус мозаичной карликовости кукурузы); лидер человеческого белка, связывающего тяжелую цепь иммуноглобулинов (BiP) (Macejak и др., 1991); нетранслируемый лидер из мРНК оболочечного белка вируса мозаики люцерны (AMV RNA 4), (Jobling и др., 1987), лидер вируса табачной мозаики (TMV) (Gallie и др., 1989; и лидер хлорозной пятнистости кукурузы (MCMV)(Lommel и др., 1991) (см. также Della-Cioppa и др., 1987). При необходимости можно включать также регуляторные элементы, такие как интрон 1 Adh (Callis и др., 1987), интрон синтазы сахарозы (Vasil и др., 1989) или элемент TMV-омега (Gallie и др., 1989). Примерами энхансеров являются элементы промотора 35S CaMV, генов октопинсинтазы (Ellis и др., 1987), гена актина I риса, гена алкогольдегидрогеназы кукурузы (Callis и др., 1987), гена I морщинистости кукурузы (Vasil и др., 1989), элемент TMV-омега (Gallie и др., 1989) и промоторы из эукриотических организмов кроме растений (например, дрожжей; Ма и др., 1988). Известно два основных метода контроля экспрессии, такие как обеспечение сверхэкспрессии и пониженной экспрессии. Для достижения сверхэкспрессии можно использовать инсерцию одной или нескольких дополнительных копий выбранного гена. Однако к настоящему времени отсутствует информация о растениях или их потомстве, исходно трансформированных одной или несколькими дополнительными копиями нуклеотидной последовательности, для которых характерна пониженная экспрессия, а также сверхэкспрессия. Известны два основных метода для достижения пониженной экспрессии, которые обычно обозначают как "антисмысловая регуляция по типу отрицательной связи" и "смысловая регуляция по типу отрицательной связи" (смысловую регуляцию по типу отрицательной связи обозначают также как "косупрессия"). В целом, эти процессы обозначают как "молчание генов". Оба эти метода позволяют осуществлять ингибирование экспрессии гена-мишени. Согласно настоящему изобретению для изменения экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты,предлагаемой в настоящем изобретении, можно применять один из следующих путей. Изменение экспрессии нуклеотидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении,предпочтительно снижение ее экспрессии, получают с помощью "смысловой" супрессии (описание см.,например, у Jorgensen и др., Plant Mol. Biol. 31, 1996, c. 957-973). В этом случае полную нуклеотидную последовательность, предлагаемую в настоящем изобретении, или ее часть включают в молекулу ДНК. Молекулу ДНК предпочтительно функционально связывают с промотором, который обладает способностью функционировать в клетке, содержащей ген-мишень, предпочтительно растительной клетке, и интродуцируют в клетку, в которой может происходить экспрессия нуклеотидной последовательности. Нуклеотидную последовательность встраивают в молекулу ДНК в "смысловой ориентации", т.е. таким образом, что кодирующая цепь нуклеотидной последовательности может транскрибироваться. В предпочтительном варианте осуществления изобретения нуклеотидная последовательность является полностью транслируемой, и вся генетическая информация, содержащаяся в нуклеотидной последовательности или ее части, транслируется в полипептид. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения нуклеотидная последовательность является частично транслируемой и продуктом трансляции является короткий пептид. В предпочтительном варианте осуществления изобретения для этой цели используют инсерцию по меньшей мере одного преждевременного стоп-кодона в нуклеотидную последовательность, что снижает трансляцию наполовину. В другом более предпочтительном варианте осуществления изобретения нуклеотидная последовательность транскрибируется, но при этом не образуется продукт трансляции. Для этой цели, как правило, используют удаление стартового кодона, например"ATG", полипептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения молекулу ДНК, которая содержит нуклеотидную последовательность или ее часть, стабильно интегрируют в геном растительной клетки. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения молекулу ДНК, которая содержит нуклеотидную последовательность или ее часть, включают во внехромосомно реплицирующуюся молекулу. В трансгенных растениях, которые содержат одну из описанных непосредственно выше молекул ДНК, экспрессию нуклеотидной последовательности, соответствующей нуклеотидной последовательности, которая содержится в молекуле ДНК, предпочтительно понижают. Предпочтительно нуклеотидная последовательность, входящая в ДНК, идентична по меньшей мере на 70% нуклеотидной последовательности, экспрессию которой понижают, более предпочтительно идентична по меньшей мере на 80%,еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 95%, еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 99%."Антисмысловая" супрессия В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения изменение экспрессии нуклеотидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении, предпочтительно снижение ее экспрессии, осуществляют с помощью "антисмысловой" супрессии. Полную нуклеотидную последовательность, предлагаемую в настоящем изобретении, или ее часть включают в молекулу ДНК. Молекулу ДНК предпочтительно функционально связывают с промотором, который обладает способностью функционировать в клетке, содержащий ген-мишень, и интродуцируют в растительную клетку, в которой может происходить экспрессия нуклеотидной последовательности. Нуклеотидную последовательность встраивают в молекулу ДНК в "антисмысловой ориентации", т.е. таким образом, что может транскрибироваться обратный комплемент (называемый также иногда некодирующей цепью) нуклеотидной последовательности. В предпочтительном варианте осуществления изобретения молекулу ДНК, которая содержит нуклеотидную последовательность или ее часть, стабильно интегрируют в геном растительной клетки. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения молекулу ДНК, которая содержит нуклеотидную последовательность или ее часть, включают во внехромосомно реплицирующуюся молекулу. С целью дополнительной иллюстрации ниже процитирован ряд публикаций, в которых описан указанный подход (Green P.J. и др., Ann. Rev. Biochem. 55, 1986, c. 569-597; van der Krol A.R. и др., AntisenseEcker J.R. и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, август 1986 г., c. 5372-5376). В трансгенных растениях, которые содержат одну из описанных непосредственно выше молекул ДНК, экспрессию нуклеотидной последовательности, соответствующей нуклеотидной последовательности, которая содержится в молекуле ДНК, предпочтительно понижают. Предпочтительно нуклеотидная последовательность, входящая в ДНК, идентична по меньшей мере на 70% нуклеотидной последовательности, экспрессию которой понижают, более предпочтительно идентична по меньшей мере на 80%,еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 90%, еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 95%, еще более предпочтительно идентична по меньшей мере на 99%. Гомологичная рекомбинация В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения по меньшей мере одну геномную копию, соответствующую нуклеотидной последовательности, предлагаемой в настоящем изобретении,модифицируют в геноме растения путем гомологичной рекомбинации, что дополнительно проиллюстрировано у Paszkowski и др., EMBO Journal 7, 1988, c. 4021-4026. Этот метод основан на способности гомологичных последовательностей распознавать друг друга и обмениваться друг с другом нуклеотидными последовательностями с помощью процесса, известного как