Иммунологический мониторинг на основе ip-10

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ НА ОСНОВЕ IP-10 Данное изобретение касается иммунологического способа, в частности способа диагностирования инфекции, вызванной микроорганизмом, включающего этапы, на которых а) инкубируют образец, включающий Т-клетки, полученные у субъекта, по меньшей мере с одним специфическим пептидным тест-антигеном микроорганизма, b) определяют специфический опосредованный Т-клетками иммунный ответ на тест-антиген путем измерения IP-10 уровня в указанном образце, с) сравнивают определенный IP-10 уровень с контрольным уровнем, и d) определяют, что указанный субъект инфицирован указанным микроорганизмом, если определенный IP-10 уровень равен или выше контрольного уровня,и/или определяют, что указанный субъект не инфицирован указанным микроорганизмом, если указанный определенныйIP-10 уровень ниже контрольного уровня, где указанный микроорганизм выбран из группы, включающей грамположительные бактерии, грамотрицательные бактерии, Listeria, энтерококки, Neisseria, вибрион, трепонема,Borrelia, лептоспира, Chlamydia, ретровирусы (ВИО, ВИЧ-1 и ВИЧ-2), цитомегаловирус, поксвирусы, вирус ЭпштейнаБарра, энтеровирус, морбилливирус, рабдовирусы, рубивирус, флавивирусы, вирусы герпеса, вирус Варицелла-Зостер,гепатит С и В, лейшманию, Toxoplasma gondii, трипаносому, плазмодий, Pneumocystis cariini, коронавирус, вирус Эбола или марбургский вирус и различные нематоды, трематоды. Способы по данному изобретению применяются в терапевтических и диагностических протоколах для человека и в ветеринарии для домашнего скота и диких животных,таким образом, данное изобретение дополнительно касается способа диагностирования инфекции у млекопитающего. Область изобретения Данное изобретение в целом касается иммунологического анализа, а конкретнее анализа по измерению опосредованной клетками иммунной реактивности (CMI). Еще конкретнее данное изобретение предусматривает анализ и набор для измерения опосредованного клетками ответа на антиген с помощью цельной крови или других приемлемых биологических образцов. Анализ используют в терапевтических и диагностических протоколах для человека и в ветеринарии для домашнего скота и диких животных. Измерение опосредованных клетками иммунных ответов важно для иммунного диагноза многих инфекционных и аутоиммунных болезней в качестве маркера иммунокомпетентности и для выявления Т-клеточных ответов на эндогенные и экзогенные антигены (а именно инфекции и вакцины). Данное изобретение предусматривает способ измерения CMI у млекопитающего путем инкубации образца от млекопитающего, который включает Т-клетки или другие клетки иммунной системы, с антигеном. Затем выявляют продуцирование IP-10. Присутствие или уровень иммунного эффектора тогда указывает на уровень опосредованной клетками отвечаемости субъекта. Предпосылки изобретения Туберкулез Открытие Mycobacterium tuberculosis (МТВ) - специфических иммунодоминантных антигенов привело к новому подходу для диагноза туберкулеза (ТВ). Ранняя работа показала возможность замены туберкулиновой кожной пробы (TST) тестом, который оценивает in vitro продуцирование интерферона гамма (IFN-) Т-клетками при ответе на определенные МТВ антигены. В то же время, главным успехом было открытие высоко иммуногенных антигенов, ранней секреторной антигенной мишени 6 (ESAT-6) и белка культурального фильтрата 10 (CFP-10) и ТВ 7.7, который значительно улучшил специфичность. Эти антигены закодированы в области различия 1 (RD1) патогена и, следовательно, отсутствуют у всех штаммов вакцины Кальметта и Герена (BCG) и у большинства нетуберкулезных микобактерий (исключение составляют Mycobacterium kansasii, Mycobacterium marinum и Mycobacterium szulgai). IFN- ответы на перекрывающиеся пептиды кодированных RD1 антигенов ESAT-6, CFP-10, TB7.7 служат основанием для выявления МТВ инфекции в двух лицензированных и коммерчески доступных тестах.QuantiFERON-TB Gold (Cellestis Limited, Carnegie, Виктория, Австралия), связанный с ферментами цельной крови иммуноанализ (ELISA), имеет знак соответствия европейским директивам качества и недавно получил одобрение Управлением по контролю за продуктами и лекарственными средствами (FDA) для выявления и латентной ТВ инфекции, и болезни.(ELISPOT), при котором применяют мононуклеарные клетки периферической крови, имеет знак соответствия европейским директивам качества и одобрен для применения в Канаде в 2005 г. При T-SPOT.TB применяют только ESAT-6 и CFP10. Однако доступные в настоящее время тесты имеют следующие недостатки: 1) чувствительность может быть ослаблена у иммуносупрессированных индивидуумов (таких как ВИЧ положительные или пациенты, получающие иммуносупрессирующее лечение); 2) в некоторых ситуациях необходим относительно большой объем крови (3 мл для QuantiFERON теста и 8 мл для T-SPOT.TB), что может ограничить его применение для младенцев, тяжело больных и анемичных детей; 3) тесты не различают активную, латентную и свежую инфекцию; 4) тесты не показали способность прогнозировать, у кого будет развиваться свежий или латентный ТВ в активный ТВ. Большинство недостатков теста происходят из-за измерения параметра эффекта IFN- на очень низких уровнях, близких к пределу даже самого чувствительного способа (в QuantiFERON тесте вплоть до 0,35 МЕ/мл (17,5 пг/мл), а в T-SPOT.TB 5 пятен/поле). Уменьшение порогового значения для усиления чувствительности в конечном счете приведет к уменьшению специфичности тестов. Недавняя публикация по QuantiFERON тесту показала, что повторное тестирование людей с результатами теста в более низком диапазоне IFN- меняется около порогового уровня, который подчеркивает возможный риск ложных положительных и ложных отрицательных результатов QuantiFERON (QFT) теста (Pai, M. et al.). Для преодоления очевидной слабости тестов чувствительность можно улучшить с помощью дополнительных М. tuberculosis специфических антигенов, что и выполнили в третьем поколении QuantiFERON тестов (QFT). Тест QuantiFERON в пробирке (QFT-IT) теперь включает дополнительный антиген под названием ТВ 7.7(р 4), и потенциальная чувствительность улучшена, но он все еще зависит от измерений при очень низких IFN- уровнях. Этот подход был опробован другими, а именно недавно показали, что монокин, индуцированныйIFN-, (MIG/CXCL9) был специфически экспрессирован in vitro после стимуляции с М. tuberculosis специфическими антигенами (ESAT-6/CFP10) и PPD. Чувствительность CXCL9, однако, была очень низкой,ниже, чем у IFN-. Провели другое меньшее исследование на основе цитометрии внутриклеточных цитокинов в CD4+ Т-клетках после ESAT-6 стимуляции, если экспрессия IFN-, IL-2, IL-4, IL-10 или активационного маркера CD40L могла отличить ТВ от не ТВ болезни. Ни один из этих маркеров, как выяснили,-1 020412 не был сопоставим или превосходил IFN- (Abramo С, et al.) (Hughes, A. et al.). Еще не были идентифицированы чувствительные и специфические маркеры для замещения IFNдля диагноза ТВ инфекции в опубликованной в настоящее время литературе. Многие упоминают IP-10 в связи с инфекциями, но не в качестве маркера в диагнозе инфекции с предварительной стимуляцией антигена. Хламидии Диагностирование половых хламидальных инфекций быстро развивалось с 1990-х. Тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT), такие как полимеразная цепная реакция (PCR), амплификация, опосредованная транскрипцией, (ТМА) и анализ ДНК со смещением цепочки (SDA), теперь являются основными. Наиболее часто используемыми и широко рассматриваемыми NAAT для хламидии в США и многих других индустриализированных странах являются Aptima (Gen-Probe), Probe-Tec (BectonDickinson) и Amplicor (Roche). Аналитические тесты Aptima Combo II одновременно проводят для С. trachomatis и Neisseria gonorrhoeae, причины гонореи. NAAT для хламидии можно выполнить на образцах мазков, отобранных из шейки (у женщин) или уретры (у мужчин). В настоящее время NAAT официально разрешены только для тестирования урогенитальных образцов. NAAT в значительной степени заменили культуру, исторический золотой стандарт для диагноза хламидии, и тесты неамплифицированной пробы, такие как Расе II (Gen-Probe). Последний тест относительно нечувствителен, успешно выявляет только 60-80% случаев инфекции у асимптоматических женщин и случайно дает ложно положительные результаты. Культуру продолжают использовать в отдельных случаях, и в настоящее время она является единственным анализом, одобренным для тестирования неполовых образцов. Диагностирование хламидий, таким образом, основано на сложной и материалоемкой технологии,такой как PCR (полимеразная цепная реакция), мало доступной для развивающихся стран. Быстрая и легкая технология улучшила бы диагностические оценки этой важной болезни. Патент Канады СА 2478138 раскрывает, что повышенные уровни в крови полипептида хемокинаCXCL10 связаны с респираторными болезнями (например, SARS, грипп и внебольничная пневмония) и используются при диагностировании пациентов. Способы предусмотрены для диагностирования и лечения пациентов, страдающих от респираторных заболеваний.WO 05/091969 раскрывает маркеры для TSE (трансмиссивные губчатые энцефалопатии), которые присутствуют до формирования обнаруживаемого патологического прионового белка, используемые для обнаружения этой инфекции до появления клинических признаков. IP-10 является только одним из нескольких раскрытых маркеров, но эта заявка не раскрывает какую-либо антигенную стимуляцию. Патентный документ US 2004-038201 раскрывает программу экспрессии отдельных генов, активированных в ответ на различные патогены в макрофагах. IP-10 снова является одним из многих упомянутых маркеров, но эта заявка не раскрывает какую-либо антигенную стимуляцию.Annalisa Azzurri et al. раскрывают уровни в плазме IFNиндуцируемого белка 10 и пентраксина 3,что являются инструментами для мониторинга воспаления и активности болезни при инфекции Mycobacterium tuberculosis. Статья показывает, что уровень IP-10 в плазме спонтанно повышается у пациентов с ТВ, в этой ссылке снова не раскрывается какая-либо антигенная стимуляция.WO 03/063759 раскрывает способ идентификации белка теплового шока (Hsp), производного пептида, используемого для диагностирования или терапии. Эффект соединений этого изобретения протестировали на моноцитах периферической крови с помощью измерения уровня IP-10 в ответ на последующую стимуляцию с LPS. Непосредственная стимуляция с тестируемыми соединениями без последующей стимуляции с LPS не приводила к повышению уровня IP-10.WO 07/039400 раскрывает способ и набор для диагноза синдрома иммунного восстановления, который связан с туберкулезом, (TB-IRS) у пациентов, инфицированных туберкулезом, а также инфицированных ВИЧ/ТВ пациентов. Для того чтобы диагностировать TB-IRS, изобретатели определили уровеньTh1 ответа против PPD и/или белка в 16 кДа по сравнению с Th1 ответом против ESAT-6, CFP-10, 85 В(отрицательный контроль) и использовали подъем Th1 ответа как показатель TB-IRS. Чтобы преодолеть проблемы ослабленной чувствительности и низкие уровни обнаруживаемогоIFN- доступными в настоящее время тестами с помощью антигенной стимуляции, данное изобретение предполагает применение альтернативного к IFN- биомаркера. Краткое описание изобретения Данное изобретение предлагает новый принцип диагностики. Тестовая система, которая может обнаруживать инфекцию, например, туберкулез, лейшманию или хламидию, основана на измерении хемокина IP-10 после стимуляции иммунных клеток антигенными белками/пептидами. Описанная тестовая система IP-10 более чувствительна, чем тесты на основе IFN- как параметра эффекта, она улучшает тестирование и диагностирование. Тест можно выполнить с помощью меньших количеств крови, поскольку образцы можно разбавлять во время инкубации или перед анализом. Тест можно выполнить за меньшее время инкубации. Кроме того, тестовая система может позволить отличие между различными стадиями инфекции, такой как, например, активная, свежая и латентная ТВ инфек-2 020412 ция. Кратко данное изобретение может быть описано как иммунологический способ, включающий этапы инкубирования образца, включающего Т-клетки, полученные от субъекта по меньшей мере с одним специфическим пептидным тест-антигеном микроорганизма, определения специфического опосредованного Т-клетками иммунного ответа на тест-антиген путем измерения IP-10 уровня в указанном образце и сравнения указанного определенного IP-10 уровня с контрольным уровнем, тем самым, определяют,сталкивался ли ранее субъект с антигеном, производящим иммунологическую реактивность к антигену,или ранее сталкивался с другими антигенами, производящими иммунологическую перекрестную реактивность к антигену. Детальное описание изобретения Данное изобретение предусматривает анализ возможности или способности субъекта установитьCMI ответ. Анализ основан на измерении продуцирования молекул иммунных эффекторов клетками иммунной системы в ответ на антигенную стимуляцию. Иммунные эффекторы можно обнаружить с помощью лигандов, таких как антитела, специфических для эффекторов, или измерением уровня экспрессии генов, кодирующих эффекторы. Следовательно, данное изобретение предусматривает средства для определения отвечаемости CMI у субъекта и, в свою очередь, предусматривает средства для диагностирования инфекционных болезней,патологических состояний, уровня иммунокомпетентности и маркер Т-клеточной отвечаемости на эндогенные или экзогенные антигены. Один аспект данного изобретения касается анализа возможности или способности субъекта установить IP-10 ответ. Анализ основан на измерении IP-10 продуцирования клетками иммунной системы в ответ на антигенную стимуляцию. Продуцирование IP-10 можно обнаружить с помощью лигандов, таких как антитела, специфические к IP-10, или измерением уровня экспрессии генов, кодирующих IP-10. Данное изобретение продемонстрировало принцип теста с помощью двух различных типов инфекции: туберкулез и хламидии. В случае туберкулеза тест, основанный на специфической к М. tuberculosis стимуляции и последующем определении IP-10, может идентифицировать людей, инфицированных М. tuberculosis. В случае хламидии тест, основанный на стимуляции экстрактом С. trachomatis, может идентифицировать людей, инфицированных хламидиями. Описанная тестовая система оценивает более высокие уровни биомаркера IP-10, чем уровни IFNмаркера, на котором в настоящее время основаны доступные анализы. Тестовая система на основе IP-10 является столь же специфической и более чувствительной, чем тесты на основе, например, IFN- как параметра эффекта, это улучшает тестирование и диагностирование иммуноскомпрометированных индивидуумов (пример 10). Тест можно выполнить с помощью меньших количеств крови, потому что образцы можно разбавить во время инкубации или перед анализом (примеры 9 и 13). Это также улучшает скорость диагноза, поскольку IP-10 продуцируется в существенных количествах после нескольких часов инкубации, как показано в примере 11. В случае туберкулеза тестовая система позволяет различать активную, свежую и латентную ТВ инфекцию и, кроме того, тестовая система потенциально способна идентифицировать людей с риском развития активной формы ТВ. Тестовая система основана на выявлении IP-10 с помощью иммуноанализа (а именно, ELISA или Luminex) и потенциально может быть разработана как удобный внелабораторный иммунохроматографический тест, применимый в учреждениях с низкими возможностями, где результат теста представлен цветной реакцией, видимой невооруженным глазом. Анализ, описанный в данном изобретении, решает ряд проблем. В настоящее время доступные анализы оценивают параметр эффекта IFN- на очень низких уровнях, близких к пределу даже самого чувствительного способа выявления (в случае тестов туберкулеза тест QuantiFERON имеет пороговый уровень для положительного теста при 0,35 международных ед./мл (17,5 пг/мл), а в T-SPOT.TB тесте 5 формирующих пятна ед./поле). Снижение порога для усиления чувствительности, в конечном счете, приведет к уменьшенной специфичности тестов. Публикации на основе теста Quantiferon показали, что повторное тестирование людей дает более низкий диапазон вариантов IFN- около порогового уровня, который подчеркивает возможность риска ложных положительных и ложных отрицательных результатов теста Quantiferon (QFT). Кроме того, нынешний тест может дать ложные отрицательные результаты у иммуносупрессированных индивидуумов, которые не способны к IFN- ответу выше порогового уровня. Поскольку высвобождение IP-10 намного выше после антигенной стимуляции по сравнению с IFN-: чувствительность выше, меньше тестов считают ложными отрицательными, результаты теста более воспроизводимы, и ожидается меньше неопределенных результатов теста у иммуносупрессированных индивидуумов. Кроме того, поскольку индуцированный антигеном IP-10 выделен в таких высоких концентрациях,можно разбавить образец до или после этапа инкубации. Это значит, что количество материала образца(например, цельная кровь), необходимое для выполнения теста, можно снизить, например, в случае с цельной кровью, вплоть до или даже ниже 0,25 мл, такого как 0,20 мл, например, 0,15 мл, такого как 0,1 мл, например, 0,05 мл. В предпочтительном варианте осуществления тест можно выполнить с количест-3 020412 вом вплоть до или даже ниже 0,1 мл. Таким образом, можно разработать "минианализ", приемлемый для пациентов с низким объемом крови (например, дети/младенцы или анемики). Кроме того, с помощью,например, отбора крови из пальца минианализ можно выполнить еще более удобно для пользователя,поскольку избегается прокол вены. Кроме того, в случае туберкулеза ни один из ныне доступных тестов не может различить активную и латентную инфекцию. В данном изобретении показано, что концентрация IP-10 в нестимулированном,но инкубированном образце материала, а именно в нулевом образце (например, цельная кровь), выше у пациентов с активной болезнью по сравнению со здоровыми индивидуумами с латентной болезнью. Данное изобретение предлагает IP-10 концентрацию в образце материала, инкубированного с неактивным раствором (нулевой) в комбинации с антиген-специфическим тестом, использовать как маркер для активной инфекции (например, туберкулез) в сравнении с латентной инфекцией (например, туберкулез). Анализ Таким образом, один аспект данного изобретения касается иммунологического способа диагностирования инфекции, вызванной микроорганизмом, включающего этапы, на которыхa) инкубируют образец, включающий Т-клетки, полученные у субъекта, по меньшей мере с одним специфическим пептидным тест-антигеном микроорганизма;b) определяют специфический опосредованный Т-клетками иммунный ответ на тест-антиген путем измерения IP-10 уровня в указанном образце;c) сравнивают указанный определенный IP-10 уровень с контрольным уровнем;d) определяют, что указанный субъект инфицирован указанным микроорганизмом, если определенный IP-10 уровень равен или выше контрольного уровня, и/или определяют, что указанный субъект не инфицирован указанным микроорганизмом, если указанный определенный IP-10 уровень ниже контрольного уровня. Следует понимать, что любой из способов, описанных в данном изобретении, является независимой платформой. Следовательно, в данном изобретении можно применять любой иммунологический способ,такой как, без ограничения, ELISA, Luminex, Multiplex, иммуноблоттинг, TRF-анализ, иммунохроматографические анализы латерального потока, методики иммуноферментного анализа, RAST (радиоаллергосорбентный тест), радиоиммуноанализы, иммунофлуоресцентные и различные иммунологические анализы с использованием сухих тест-полосок (например, хроматографический тест с полосками). Во втором аспекте данное изобретение касается способа диагностирования инфекции, вызванной микроорганизмом, причем указанный способ включает этапы, на которыхa) инкубируют образец, включающий Т-клетки, полученные у субъекта, по меньшей мере с одним специфическим пептидным тест-антигеном микроорганизма, при условии, что указанный тест-антиген не является PPD или LPS;b) определяют специфический опосредованный Т-клетками иммунный ответ на тест-антиген путем измерения IP-10 уровня в указанном образце;d) определяют, что указанный субъект инфицирован указанным микроорганизмом, если определенный IP-10 уровень выше контрольного уровня. Данное изобретение показало, что прямой стимуляции выбранным тест-антигеном (антигенами) или антигеном (антигенами) для оценивания достаточно для получения считывания, которое позволяет квалифицированному специалисту заключить, сталкивался ли образец с тест-антигеном (антигенами),производя иммунологическую реактивность к тест-антигену (антигенам), или сталкивался ранее с другими тест-антигенами, производя иммунологическую перекрестную реактивность к выбранному тестантигену (антигенам). Таким образом, в одном варианте осуществления данное изобретение также касается иммунологических способов, как описано здесь, где исключается любая дополнительная или последующая стимуляция. Последующая или дополнительная стимуляция может предусматривать любой тип стимуляции, например, примирование или стимулирование образца биологически неактивным веществом или веществом с биологическим эффектом, связанным с воспалительным ответом, таким как, без ограничения, митогены, бактериальные продукты или биологически активные белки. Таким образом, в одном варианте осуществления данное изобретение касается иммунологических способов, как описано здесь, где исключается любая дополнительная или последующая стимуляция сLPS. Следовательно, указанный способ применяют для выявления инфекции, например, у людей с высоким риском развития инфекционных болезней, таких как, без ограничения, туберкулез, хламидиоз,лейшманиоз, трипаносомозы и шистосомозы. Данное изобретение также касается способа диагностирования инфекции, вызванной микроорганизмом, где образец, включающий Т-клетки, делят по меньшей мере на две фракции иa) инкубируют первую фракцию образца с одним специфическим пептидным тест-антигеном (антигенами) для получения образца с ответом;b) инкубируют вторую фракцию образца с неактивным раствором для получения нулевого образца;d) определяют зависимое от специфического тест-антигена микроорганизма опосредованное Тклетками значение иммунного ответа образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевом образце,из IP-10, определенного в образце с ответом;e) сравнивают зависимое от специфического тест-антигена микроорганизма опосредованное Тклетками значение иммунного ответа с контрольным уровнем;f) определяют, что указанный субъект инфицирован указанным микроорганизмом, если указанное значение специфического опосредованного Т-клетками иммунного ответа на тест-антиген равно или выше контрольного уровня, и/или определяют, что указанный субъект не инфицирован указанным микроорганизмом, если указанное значение специфического опосредованного Т-клетками иммунного ответа на тест-антиген ниже контрольного уровня. В одном варианте осуществления выполнение анализа можно потенцировать с помощью сопутствующего добавления иммуностимуляторной молекулы с антигеном, выбранным для оценивания, причем указанная иммуностимуляторная молекула является цитокином, выбранным из неограниченной группы,включающей IL-2, IL-12, TNF- и IFN-. В другом варианте осуществления иммуностимуляторная молекула является растворимым рецептором (например, ди- или полимером В 7 молекул (CD80/CD86 или антителом (например, CD28 связывающее антитело). В другом варианте осуществления иммуностимуляторная молекула обладает свойством обеспечения Т-клеток костимуляторным сигналом (известным специалисту в данной области как сигнал 2), указанный костимуляторный сигнал отдельно не способен индуцировать IP-10 ответ, но усиливает IP-10 ответ, если клетки производят CMI ответ к антигену, выбранному для оценивания. В другом варианте осуществления потенцирующий анализ можно осуществить ингибированием противовоспалительных процессов, происходящих во время этапа инкубации. В одном варианте осуществления анализ можно потенцировать с ингибированием антител или растворимых рецепторов, которые связывают противовоспалительные молекулы, такие как, без ограничения, IL-4, IL-10 и TGF-. В другом варианте осуществления потенцирующий анализ можно осуществить ингибированием противовоспаления, опосредованного через ингибирование или элиминирование клеточных популяций,действующих как ингибиторы на CMI ответ, такие как регулирующие Т-клетки. Конкретно, как используется здесь, выражение очищенное белковое производное (PPD или туберкулин) является осадком невидовых специфических молекул. PPD или туберкулин получают с помощью экстракции белков из смеси М. tuberculosis или других микобактерий, таких как М. avium. PPD обычно используют при тестировании присутствия клеточного иммунитета или Th1 ответа, произведенного либо против BCG, либо против М. tuberculosis. Например, его можно получить из TubersolB Connaught Laboratories Limited, приготовленного большой Master Batch, Connaught Tuberculin (CT68), или в форме RT23,полученной от Statens Serum Institute (SSI, Копенгаген, Дания). Белок ESAT-6 (ранний секреторный антиген 6) является главным секреторным антигеном, который очистили из кратковременных культуральных фильтратов М. tuberculosis. Как упоминалось здесь, ESAT6, CFP-10 (белок культурального фильтрата 10) и 85 В можно получить из клеточного лизата и очистки с помощью рекомбинантных методик или получить как синтетические пептиды. Например, ESAT6 можно получить как рекомбинаный белок из Statens Serum Institute. Туберкулин или PPD (очищенное белковое производное) отличается от ESAT-6 (ранний секреторный антиген 6), CFP-10 (белок культурального фильтрата 10) и ТВ 7.7, которые закодированы генами (вRD-1 области), которые расположены только в геноме М. tuberculosis и не содержатся в BCG (бацилла Кальметта и Герена). Он отличается от PPD, так как PPD также содержит другие антигены, которые разделены, например, на подштаммы BCG и несколько нетуберкулезных видов микобактерий с низкой патогенностью или с ее отсутствием. Факультативно, способ может дополнительно включать разделение образца на 3 фракции и инкубацию третьей фракции образца с Т-клеточным активатором для получения положительного контроля. Здесь иммунные клетки можно инкубировать, например, в трех отдельных популяциях: нулевой контроль (например, солевой раствор), Ag стимулированный (например, специфические для хламидии или туберкулеза белки или их производное) и положительный контроль (например, фитогемагглютинин). Иммунные клетки могут быть в форме цельной крови, разбавленной цельной крови или различных очищенных продуктов клеточных популяций, подобных мононуклеарным клеткам периферической крови,моноцитам или Т-клеткам. Клетки можно получить из крови, мочи, плевральной жидкости, бронхиальной жидкости, смывов ротовой полости, тканевых биопсий, асцитов, гноя, цереброспинальной жидкости,аспирата и/или фоликулярной жидкости. Иммунные клетки инкубируют в течение, например, 4-24 ч при 37 С. В одном варианте осуществления образец делят по меньшей мере на 2 фракции иa) инкубируют первую фракцию образца по меньшей мере с одним специфическим пептидным тест-антигеном микроорганизма для получения образца с ответом;b) инкубируют вторую фракцию образца с неактивным раствором для получения нулевого образца;d) определяют зависимое от специфического тест-антигена микроорганизма опосредованное Тклетками значение иммунного ответа образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевом образце,из IP-10, определенного в образце с ответом;e) сравнивают зависимое от специфического тест-антигена микроорганизма опосредованное Тклетками значение иммунного ответа с контрольным уровнем;f) сравнивают антиген спонтанный IP-10 ответ или значение, полученное от него, с контрольным уровнем или значением, полученным от него;g) определяют, что указанный субъект инфицирован указанным микроорганизмом, если указанное значение специфического опосредованного Т-клетками иммунного ответа на тест-антиген равно или выше контрольного уровня, и/или определяют, что указанный субъект не инфицирован указанным микроорганизмом, если указанное значение специфического опосредованного Т-клетками иммунного ответа на тест-антиген ниже контрольного уровня. Более конкретно, образец делят по меньшей мере на 3 фракции иa) инкубируют первую фракцию образца с антигеном для получения образца с ответом;b) инкубируют вторую фракцию образца с неактивным раствором для получения нулевого образца;c) инкубируют третью фракцию образца со стимулирующим раствором (например, РНА) для получения образца митогена;d) определяют зависимый от антигена IP-10 ответ образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевом образце, от IP-10, определенного в образце с ответом;e) сравнивают зависимый от антигена IP-10 ответ или значение, полученное от него, с контрольным уровнем или значением, полученным от него;f) определяют зависимый от митогена IP-10 ответ образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевом образце, от IP-10, определенного в митогеном образце;g) сравнивают зависимый от митогена IP-10 ответ или значение, полученное от него, с контрольным уровнем или значением, полученным от него;h) сравнивают антиген спонтанный IP-10 ответ или значение, полученное от него, с контрольным уровнем или значением, полученным от него,тем самым, определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность к антигену, или сталкивалось ранее с другими антигенами,производя иммунологическую перекрестную реактивность к антигену, и, тем самым, определяют, имеет млекопитающее активную, свежую или латентную инфекцию, или если млекопитающее отзывается на лечение, инфекция собирается развиться, или является иммуносупрессированным. Выражение "митоген" относится к любому химическому препарату или химической композиции,содействующей клеточному делению. Митогены могут действовать и на Т-клетки, и на В-клетки, или отдельно, или одновременно. Следовательно, выражение митоген также охватывает выражения Тклеточный активатор и В-клеточный активатор и, таким образом, используется здесь равнозначно. Митогены по данному изобретению охватывают все митогены, известные специалисту, такие как, без ограничения, фитогемагглютинин (РНА), конканавалинА (conA), липополисахарид (LPS) и митоген лаконоса(PWM). В предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению митогеном является Тклеточный активатор, еще более предпочтительно митогеном является РНА. В другом предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению митогеном является моноцитный/макрофаговый активатор. Затем определяют продуцирование IP-10 с помощью любого способа выявления цитокина или хемокина, известного квалифицированному специалисту, такого как, без ограничения, методики на основе антитела, например, хМАР, мультиплексирование, Luminex, ELISA, ELISPOT, анализ латерального потока с использованием тест-полосок или методики на основе мРНК, подобные полимеразной цепной реакции реального времени (PB-PCR), или цитометрии внутриклеточного потока (IC-FACS). Количество IP-10 в ответ на антигены (например, антигены хламидиевого экстракта или специфические для туберкулеза белки или их производные) можно определить, вычитая фоновое продуцирование IP-10, и возможная инфекция с, например, М. tuberculosis, интерпретируется на основе этого антиген-специфического IP-10 ответа. Данные туберкулеза в данной заявке получают с помощью существующей технологии: QuantiFERON ТВ-Gold в пробирочном тесте (Cellestis, Carnegie, Австралия), при котором цельную кровь отбирают прямо в пробирки с вакуумом, предварительно покрытые или солевым раствором (нулевой контроль), специфическими для ТВ пептидными антигенами (Ag), или митогеном (РНА). Пробирки сразу же инкубировали в предпочтительном варианте осуществления в течение 18 ч при 37 С, где затем оценивали концентрацию цитокина с помощью технологии хМАР на платформе Luminex (Luminex Corporation, США), с помощью реагентов Biosource (Biosource Camarillo, США), и, таким образом, можно было изменить параметр эффекта от традиционного параметра IFN- на IP-10, который экспрессирован при более высоких концентрациях и лучше выполняется. Высокая чувствительность данного изобретения делает этот способ превосходным инструментом для дифференциации между активной инфекцией, латентной инфекцией, свежей инфекцией, инфекцией у ребенка/новорожденного и/или длительной латентной инфекцией. Таким образом, в одном варианте осуществления данное изобретение касается способа, где зависимый от антигена IP-10 ответ выше контрольного уровня вместе с нулевым показывает, что млекопитающее имеет активную инфекцию, латентную инфекцию, свежую инфекцию и/или длительную латентную инфекцию. В другом варианте осуществления данное изобретение касается способа, где количество материала образца (например, цельная кровь), используемого в тесте, уменьшено. В случае с цельной кровью вплоть до диапазона 3-0,1 мл, а в случае с РВМС число клеток находится в диапазоне 1106-0,05106. Такой "минианализ", приемлемый для пациентов с низким объемом крови (особенно для детей/младенцев или пациентов с анемией), является инновационным, так как он может диагностировать болезнь (например, туберкулез) без гемодинамических последствий для донора, или выполняться на очень малом количестве материала образца, например, клетки из спинальной жидкости, плевральной жидкости или крови из пуповины. Комбинация с другими маркерами Измерение IP-10 в комбинации с одним или более из следующих маркеров может сократить число ложных положительных и увеличить избирательную способность. Таким образом, в одном варианте осуществления при способе дополнительноa) определяют уровень IP-10 и МСР-1 в ответ на антигенную стимуляцию;b) объединяют определенный уровень IP-10 и МСР-1 иc) сравнивают указанный объединенный уровень с объединенным контрольным уровнем. Как понятно квалифицированному специалисту, объединенный контрольный уровень определяют с помощью измерения IP-10 уровня и любого из предложенных комбинаторных маркеров, такой как, без ограничения, МСР-1 уровень в здоровой популяции, и объединяют указанный определенный IP-10 и МСР-1 уровень посредством арифметического действия, такого как, без ограничения, сложение. Объединенный контрольный уровень определяют при выбранной пороговой точке, связанной с распределением объединенного контрольного уровня, например, среднее + 2 стандартных отклонений в здоровой популяции, или с помощью других средств, известных квалифицированному специалисту. Дополнительно комбинаторные маркеры включают IL-2 и INF-. В одном варианте осуществления данное изобретение раскрывает способ, при котором дополнительноa) определяют уровень INF- и факультативно МСР-1 и/или IL-2 в ответ на антигенную стимуляцию;b) объединяют определенный уровень IP-10 и INF- и факультативно МСР-1 и/или IL-2 и с) сравнивают указанный объединенный уровень с объединенным контрольным уровнем. В одном варианте осуществления способ включает этапы, при которыхa) определяют уровень IP-10 в ответ на антигенную стимуляцию;b) сравнивают уровень IP-10 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;c) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IP-10 реактивность на антиген;d) определяют уровень МСР-1 в ответ на антигенную стимуляцию;e) сравнивают уровень МСР-1 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;f) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли МСР-1 реактивность на антиген;g) объединяют определенную IP-10 реактивность и МСР-1 реактивность,тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность на антиген по меньшей мере с одним биомаркером. В одном варианте осуществления способ включает этапы, на которыхa) определяют уровень IP-10 в ответ на антигенную стимуляцию;b) сравнивают уровень IP-10 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;c) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IP-10 реактивность на антиген,d) определяют уровень IL-2 в ответ на антигенную стимуляцию;e) сравнивают уровень IL-2 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;f) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IL-2 реактивность на антиген;g) объединяют определенную IP-10 реактивность и IL-2 реактивность,тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность на антиген по меньшей мере с одним биомаркером. В одном варианте осуществления способ включает этапы, на которыхa) определяют уровень IP-10 в ответ на антигенную стимуляцию;b) сравнивают уровень IP-10 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;c) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IP-10 реактивность на антиген;d) определяют уровень IFN- в ответ на антигенную стимуляцию;e) сравнивают уровень IFN- с контрольным уровнем или значением, полученным от него;f) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IFN- реактивность на антиген;g) объединяют определенную IP-10 реактивность и IFN- реактивность,тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность на антиген по меньшей мере с одним биомаркером. В одном варианте осуществления способ включает этапы, на которыхa) определяют уровень IP-10 в ответ на антигенную стимуляцию;b) сравнивают уровень IP-10 с контрольным уровнем или значением, полученным от него;c) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли IP-10 реактивность на антиген;d) определяют уровень INF- и/или МСР-1 и/или IL-2 в ответ на антигенную стимуляцию;e) сравнивают уровень INF- и/или МСР-1 и/или IL-2 с контрольными уровнями для каждого биомаркера или значениями, полученными от него;f) определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее с указанным антигеном и, таким образом, производит ли INF-, и/или МСР-1, и/или IL-2 реактивность на антиген;d) объединяют определенную IP-10 реактивность, и/или INF-, и/или МСР-1, и/или IL-2 реактивность,тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность на антиген по меньшей мере с одним из рассматриваемых биомаркеров. Диагностирование В одном варианте осуществления, и как утверждалось ранее, IP-10 можно использовать для диагностирования субъектов с подозрением на различные иммунологические состояния, такие как инфекции. При использовании в диагностировании способ по данному изобретению может помочь определить наличие иммунологических состояний, таких как инфекции, обычно с помощью оценивания клинических симптомов и дополнительных лабораторных тестов. Тест может диагностировать различные стадии инфекции, а именно инфекцию, с которой индивидуум без каких-либо симптомов столкнулся недавно, инфекцию, с которой индивидуум без каких-либо симптомом этой инфекции столкнулся много лет назад,активную инфекцию у пациента, имеющего симптомы этой инфекции. В другом варианте осуществления IP-10 можно использовать для диагностирования субъектов с подозрением на туберкулез (например, активная, латентная или свежая ТВ инфекция) и отдельных пациентов с повышенным риском развития латентного туберкулеза в активный, а именно пациентов, получающих иммуносупрессивное лечение (а именно, лечение моноклональными антителами (анти-CD20 антитела (например, Rituximab) или блокирующее TNF- лечение (например, Remicade, Enbrel, Humira или стероиды или противораковую хемотерапию; или пациентов, страдающих иммуносупрессивным состоянием (например, ВИЧ инфекция, рак, IDDM (инсулинзависимый сахарный диабет) или независимый от инсулина сахарный диабет (NIDDM), аутоиммунные состояния, неполноценное питание, старческий возраст, внутривенное употребление наркотиков (IVDU) или наследственные иммунные нарушения), и индивидуумов, которые были инфицированы недавно. Фактически после стандартных рекомендаций этих пациентов следует проверить на активную, латентную или свежую ТВ перед началом лечения. В настоящее время строго рекомендовано обследовать пациентов, которые являются кандидатами на лечение блокатором TNF-, или ВИЧ положительные или при TST, или при специфическом к М. tuberculosis антигену IFN- тесте. Поскольку исследования показали, что эти тесты могут быть ненадежными у пациентов выше упомянутых категорий, IP-10 является лучшим кандидатом из-за более высокой чувствительности. В другом варианте осуществления IP-10 можно использовать для обследования индивидуумов с подозрением на хламидиевую инфекцию (например, урогенитальную инфекцию, тазовую инфекцию и/или инфекцию глаза). Данное изобретение позволяет объединить антигены от различных инфекционных агентов, которые либо колонизируют в одном органе или анатомической области, либо дают общую группу симптомов. С помощью объединения различных специфических антигенов возможно обследовать пациентов с риском или исключить общие патогены, которые приводят к клинически неотличимым состояниям, таким как урогенитальная инфекция; или восприимчивы к одинаковому лечению, например, антибиотиками. Таким образом, в одном варианте осуществления данное изобретение касается способа одновременного обследования по меньшей мере двух инфекционных болезней, включающего этапы, на которыхa) получают один образец от пациента, нуждающегося в этом, и делят указанный образец по меньшей мере на фракции;b) стимулируют одну фракцию антигенами, где указанные антигены связаны со специфическим инфекционным агентом (агентами), выбранным для оценивания (фракция с ответом) инкубации второй фракции образца с неактивным раствором (нулевая фракция);d) определяют зависимый от антигена IP-10 уровень образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевой фракции, из IP-10, определенного во фракции с ответом;e) сравнивают указанный определенный зависимый от антигена IP-10 уровень с контрольным уровнем по меньшей мере по одному из выбранных инфекционных агентов иf) отмечают указанного пациента, нуждающегося в этом, как инфицированного по меньшей мере одним из выбранных инфекционных агентов, если зависимый от антигена IP-10 уровень выше, чем IP-10 уровень в контрольной фракции. Следовательно, способы по данному изобретению можно применять для обследования людей с высоким риском инфекционных болезней, например, людей, останавливающихся или путешествующих в зонах эндемических болезней. Таким образом, в варианте осуществления по данному изобретению инфекционные болезни выбраны из группы, включающей малярию, туберкулез, менингит, японский энцефалит, холеру, лейшманию,денге и полиомиелит. В другом варианте осуществления данного изобретения инфекционные болезни выбраны из болезней, передающихся половым путем, включающих шанкроид, хламидиевую инфекцию, гонорею, венерическую лимфогранулему, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Treponema pallidum, гепатит В,Herpes simplex virus, вирус иммунодефицита человека, Human papillomavirus, моллюск, Phthirius pubis,Sarcoptes scabiei и Trichomonas vaginalis. В еще одном варианте осуществления данного изобретения инфекционные болезни выбраны из группы, включающей поддающиеся лечению болезни, вызванные желудочно-кишечными инфекционными агентами, например, Shigella, E. coli, Campylobactor, Vibrio cholerae бактерии, Cryptosporidium parvum, Salmonella bacteri и Salmonella typhi бактерии. В еще одном варианте осуществления данного изобретения инфекционные болезни выбраны из группы, включающей вызванные желудочно-кишечными инфекционными агентами, не поддающиеся лечению антибиотиками, например, ротавирусами, норовирусами, аденовирусами, саповирусами и астровирусами. В следующем варианте осуществления данного изобретения инфекционные болезни выбраны из группы, включающей связанные с кровью болезни, которые являются предметом обследования, например, в банках крови: гепатит А, гепатит Е, малярия, болезнь Шагаса, бабезиоз, лейшмания, вирус пенистости обезьян, болезнь Кройфельда-Якобса (vCJD), болезнь Кройфельда-Якобса (CJD), цитомегаловирус (CMV) и вирус Эпштейна-Барра. В одном варианте осуществления данного изобретения инфекционные болезни выбраны из группы,включающей бактериальные менингиты, вызываемые бактериями Neisseria meningitides, Streptococcuspneumoniae, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae и Haemophilus influenza. Следовательно, целью данного изобретения является создание видоспецифической диагностики,поскольку выбор специфического антигена позволяет квалифицированному специалисту дифференцировать различные виды, например, микобактерий. Прогноз В одном варианте осуществления можно использовать IP-10 для прогнозирования субъектов с диагнозами различных иммунологических состояний, таких как инфекции. При использовании в прогнозах для пациентов способ по данному изобретению может помочь предсказать ход и возможный результат иммунологических состояний, таких как инфекции, таким образом, помочь специалисту выбрать адекватный способ лечения и предсказать эффект определенного лечения для состояния. Мониторинг В одном варианте осуществления IP-10 можно использовать для мониторинга субъектов с инфекционным диагнозом. При мониторинге пациента способ по данному изобретению может помочь оценить эффективность во время лечения и после окончания лечения, например, мониторинг и предсказание возможного рецидива инфекции. Возможность мониторинга терапевтической эффективности в соответствии с данным изобретением является особенно релевантной, так как (с помощью инфекции М. tuberculosis в качестве примера) а) легко выполнить простым забором крови вместо ныне доступных способов, подобных микроскопии слюны, микобактериальной культуре, рентгеновским лучам или другим способам;b) он более воспроизводим по сравнению с микроскопией слюны, микобактериальной культурой,-9 020412 рентгеновскими лучами или другими способами;c) он является недорогим по сравнению с микроскопией слюны, микобактериальной культурой,рентгеновскими лучами или другими способами, инвазивными хирургическими процедурами, предусмотренными в биопсии, например, если подозревается экстрапульмональный туберкулез, или бронхоскопией, если пациент отрицательный по слюне;d) он является более чувствительным по сравнению с IFN- анализами на туберкулез на основе RD1 перекрывающихся пептидов;e) он может различать активный и латентный туберкулез, в то время как другие иммунные анализы различают только наличие инфекции или ее отсутствие. Обследование В одном варианте осуществления способ по данному изобретению используют с целью обследования. А именно его используют для определения субъектов без предварительного диагноза инфекций с помощью измерения уровня IP-10 по данному изобретению и корреляции оцененного уровня к предварительно установленному уровню, показывая присутствие или отсутствие различных инфекций (например, инфекция М. tuberculosis). В другом варианте осуществления способ по данному изобретению используют с целью обследования. А именно его используют для определения субъекта без предварительного диагноза инфекций, но с риском возобновления латентной болезни, с помощью измерения уровняIP-10 согласно предварительно установленному уровню по данному изобретению и корреляции оцененного уровня к присутствию или отсутствию различных инфекций (например, инфекция М. tuberculosis). Как утверждалось ранее, данное изобретение раскрывает способ одновременного обследования по меньшей мере двух инфекционных болезней. В другом варианте осуществления по данному изобретению способ можно использовать для обследования крови от доноров крови на различные болезни, такие как, без ограничения, инфекция (инфекции), вызванная, например, паразитами или вирусами. Контактное мечение В предпочтительных вариантах осуществления IP-10 можно использовать для диагноза субъектов,подвергнувшихся различным инфекциям, таким как М. tuberculosis. При использовании контактного мечения способ по данному изобретению может помочь определить присутствие инфекций, таких как инфекция М. tuberculosis. В других вариантах осуществления IP-10 можно использовать для диагноза субъектов, подвергнувшихся случаям заражения при вспышках высоко заразных инфекций, таких как, без ограничения,туберкулез, коронавирус (например, серьезный приобретенный респираторный синдром), грипп, вирус Эбола или марбургский вирус. В случае туберкулеза: при использовании в контактном мечении способ по данному изобретению может помочь определить присутствие инфекции, обычно осуществляемое с помощью оценивания TST или ныне доступного анализа высвобождения IFN-. Улучшение выявления случая заболевания В предпочтительных вариантах осуществления IP-10 можно использовать для диагноза различных болезней, таких как инфекции. При использовании в улучшенном выявлении случая заболевания способ по данному изобретению может помочь определить присутствие инфекций, таких как, без ограничения,отрицательный при микроскопии ТВ, который иначе трудно диагностировать из-за отсутствия микробиологического признака инфекции, но который обычно диагностируется оцениванием клинических симптомов, ответа на лечение и отсутствия альтернативных диагнозов или отнимающими много времени анализами (недели), такими как культура слюны. Исследования распространения В предпочтительных вариантах осуществления IP-10 можно использовать для исследования распространения различных иммунологических состояний, таких как, без ограничения, инфекций в популяциях интереса, таких как дети, ВИЧ положительные иммигранты, беженцы, работники здравоохранения,школьники, заключенные, лаборанты. При использовании в исследованиях распространения способ по данному изобретению может помочь определить присутствие инфекции, такой как латентный и активный ТВ в популяции, что обычно выполняют с помощью TST. Исследовательские цели В одном варианте осуществления IP-10 может использоваться исследовательскими институтами при обследовании на возможность новых антигенов, полученных от микроорганизма, выбранного из группы, включающей микобактерии, грамположительные бактерии, грамотрицательные бактерии, Listeria, энтерококк, Neisseria, вибрион, трепонему (сифилис), Borrelia, лептоспира, Chlamydia, ретровирусы(ВИО (вирус иммунодефицита обезьян), ВИЧ-1 и ВИЧ-2), коронавирусы, такие как серьезный острый респираторный синдром (SARS) и NL-63, цитомегаловирус, ротавирусы, метапневмовирус, респираторно синтициальный вирус (RSV), поксвирусы, вирус Эпштейна-Барра, энтеровирус, морбилливирусы,рабдовирусы (бешенство). Такие агенты, как рубивирусы (краснуха), флавивирусы (денге, желтая лихорадка), вирусы герпеса, вирус Варицелла-Зостер, гепатита С и В, лейшмания, Toxoplasma gondii, трипаносомы, плазмодий (молниеносная трехдневная малярия, трехдневная малярия, малярия овале), Pneumo- 10020412cystis cariini (PCP) и различные нематоды, трематоды, могут быть, например, липидами, полисахаридными молекулами, белками и пептидами. При использовании для лабораторных исследований способ по данному изобретению может помочь определить иммунную реактивность к исследуемому антигену, белку или пептиду, применимому в разработке вакцин и диагностических тестов. Некоторые антигенные молекулы, подобные, например, пептидам, идентифицированы как видоспецифические или болезнеспецифические, но их способность индуцировать Т-клеточную реактивностьin vivo трудно определить из-за отсутствия чувствительных маркеров. IP-10, определенный после стимуляции такими кандидатными антигенами, можно использовать для обследования и идентификации потенциально интересующих новых антигенов или молекул. Более конкретно, в случае антигенов, полученных от М. tuberculosis, С. trachomatis, ВИЧ-1 или HCV, IP-10 может использоваться исследовательскими институтами при тестировании иммуногенности этих антигенов, а именно как оценку Т-клеточной реактивности для разработки, например, вакцин. Лечебный эффект Данное изобретение предполагает, что повторное тестирование спонтанного высвобождения во время инкубации (нулевой образец) и индуцированный антигеном IP-10 (Ag образец) во время лечения можно использовать как маркер для лечебного эффекта. Если спонтанные IP-10 ответы снижены во время лечения, его можно считать успешным, тогда как, если снижение не наблюдалось, лечение следует подозревать как неудачное. Данное изобретение предлагает, что повторное тестирование спонтанного и индуцированного антигеном IP-10 во время, например, лечения ТВ можно использовать как маркер лечебного эффекта. Если ответы антиген-стимулированного IP-10 снижаются во время лечения, его можно рассматривать как успешное, тогда как, если снижение не наблюдается, лечение считают неудачным. Следует понимать, что любой обсуждаемый здесь признак и/или аспект применительно к определению по данному изобретению применяют по аналогии к "диагнозу", "прогнозу", "мониторингу", "обследованию", "целям исследования", "контактному мечению", "улучшенному выявлению случая заболевания" и "изучению распространения" по данному изобретению и наоборот. Этап инкубации Клетки системы CMI утратили способность устанавливать CMI ответ в цельной крови после продленных периодов после забора крови у субъекта, и ответы без вмешательства часто сильно снижаются или отсутствуют 24 ч после забора крови, если не обрабатывать с целью продления жизни клеток, например, без ограничения, хранение при температуре выше 10 С. В одном варианте осуществления снижение трудоемкости позволяет стимуляцию образца антигенами выполнить в пунктах медицинского обслуживания, таких как кабинеты врачей, клиники, места обслуживания амбулаторных больных и ветеринарные клиники или фермы. Как только выполнена стимуляция антигеном, уже не нужны свежие и активные клетки. IP-10 и другие биомаркеры, такие как цитокины или иммунные эффекторные молекулы, стабильны в плазме, и, таким образом, образец можно хранить, замораживать или поставлять без специальных условий или без требований срочности подобно стандартным образцам плазмы, применяемым для другой инфекционной болезни или другого диагноза болезни. Этап инкубации может длиться от 5 до 144 ч, более предпочтительно 5-120 ч, еще более предпочтительно 12-24 ч, или промежуточный период времени. Таким образом, в одном варианте осуществления по данному изобретению время инкубации составляет 5-24, 26, 30, 36, 42, 48, 72, 96, 120 или 144 ч. Так как IP-10 выделен в таких высоких концентрациях, возможно инкубировать образцы вне инкубатора, а именно на столе в лаборатории или в водяной бане со стабильной температурой или в устройстве для переноски. Это особенно полезно для развивающихся стран или поликлиник со средствами основной лаборатории. Этап инкубации можно осуществлять при температуре в диапазоне от 20 до 43 С. Таким образом, в одном варианте осуществления по данному изобретению температура инкубации может составлять 16,18, 20, 22, 25-33, 35, 37-40 или 41 С. Этап инкубации можно выполнять при нефиксированной температуре, без ограничения, от 15 до 40 С, более предпочтительно от 18 до 37 С, еще более предпочтительно от 30 до 37 С. Один вариант осуществления данного изобретения позволяет выполнить стимуляцию образца при разбавлении, с добавлением культуральной среды к клеточной культуре. Другой вариант осуществления данного изобретения позволяет выполнить стимуляцию образца с добавлением инертной разбавляющей жидкости (например, солевой раствор) к клеточной культуре. Образец Один вариант осуществления по данному изобретению рассматривает способ измерения CMI ответа у субъекта, причем указанный способ включает сбор образца у указанного субъекта, где указанный образец включает клетки иммунной системы, которые способны продуцировать иммунные эффекторные молекулы после стимуляции антигеном, инкубацию указанного образца с антигеном, а затем измерение присутствия или увеличения уровня иммунной эффекторной молекулы, где присутствие или уровень указанной иммунной эффекторной молекулы указывает на способность указанного субъекта установить опосредованный клетками иммунный ответ. В одном варианте осуществления образец получают из группы, включающей кровь, мочу, плевральную жидкость, бронхиальную жидкость, смывы ротовой полости, тканевые биопсии, асциты, гной,цереброспинальную жидкость, аспираторную и фолликулярную жидкость. В предпочтительном варианте осуществления образец получен из крови. Однако, образец также может включать клетки, выбранные из группы, включающей цельную кровь,мононуклеарные клетки из плевральной жидкости, мононуклеарные клетки периферической крови(РВМС), Т-клетки, CD4 Т-клетки, CD8 Т-клетки, гамма-дельта Т-клетки, моноциты, макрофаги и NK клетки. Удобно, когда образцом является цельная кровь, пробирку для отбора крови обработать антикоагулянтом (например, гепарином). Несмотря на то что цельная кровь является предпочтительным и наиболее удобным образцом, данное изобретение распространяется на другие образцы, содержащие иммунные клетки, такие как, без ограничения, плевральная жидкость, асцитная жидкость, лимфатическая жидкость,спинальная или церебральная жидкость, тканевая жидкость и респираторная жидкость, включая назальную и пульмональную жидкость. В одном варианте осуществления данное изобретение, таким образом, касается способа, где образец получен из крови, мочи, плевральной жидкости, бронхиальной жидкости, смывов ротовой полости, тканевых биопсий, асцитной жидкости, гноя, цереброспинальной жидкости, аспираторной и/или фолликулярной жидкости. В другом варианте осуществления данное изобретение, таким образом, касается способа, где образец включает клетки, выбранные из группы, включающей периферические мононуклеарные клетки, Тклетки, CD4 Т-клетки, CD8 Т-клетки, гамма-дельта Т-клетки, моноциты, макрофаги, дендритные клетки и NK клетки. В одном варианте осуществления образцом является цельная кровь, которая может быть собрана в трех приемлемых контейнерах, в которых присутствует антиген, митоген или "нулевой контроль". В другом варианте осуществления антигены, митоген или "нулевой контроль" можно добавить позже к аликвотам, содержащим образец, например, цельную кровь. В другом варианте осуществления образцом является цельная кровь, которая может быть собрана в пробирки для сбора, содержащие антиген, митоген или "нулевой контроль" или аликвоты цельной крови,к которым добавляют антиген, митоген или нулевой контроль. В целом, кровь держат в присутствии антикоагулянта (предпочтительно гепарин, альтернативно,например, цитрат или EDTA (этилендиаминтетраацетат. Антикоагулянт находится в пробирке для сбора крови при добавлении крови. Применение пробирок для сбора крови предпочтительно, но не обязательно, совместимо со стандартом автоматизированных лабораторных систем, и они соответствуют анализу в большом масштабе и произвольному порядку отбора образцов. Пробирки для сбора крови также минимизируют расходы на обработку и снижают лабораторный контакт с цельной кровью и плазмой и,следовательно, снижают риск персонала лаборатории от контакта с патогенным агентом, таким как, без ограничения, вирус иммунодефицита человека. Объемы аликвот цельной крови могут составлять 10-4000 мкл, например, без ограничения, 50, 1001000 мкл, 1100-2900 или 3000 мкл. Образец можно инкубировать в пробирках, лунках тканевой культуры или в других контейнерах, а антиген, митоген и "нулевой контроль" можно добавлять в соответствующих концентрациях. Пробирка для сбора крови включает вакуумную пробирку или другие подобные сосуды, но кровь можно также непосредственно собрать в открытую пробирку или капиллярную трубку. Набор Данное изобретение дополнительно рассматривает набор для определения способности субъекта устанавливать опосредованный клетками ответ. Набор имеет удобную блочную форму с одним или более блоком, приспособленным для получения образца от субъекта, такого как очищенные клетки цельной крови, биопсии или другой материал. Тот или иной блок может быть также приспособлен к содержанию гепарина, где образцом является цельная кровь. В целом, набор находится в форме, которая упакована для продажи с комплектом инструкций. Инструкции, в целом, могли бы быть в форме способа измерения CMI ответа у субъекта, причем указанный способ включает сбор образца от указанного субъекта, где указанный образец включает клетки иммунной системы, которые способны продуцировать иммунные эффекторные молекулы после стимуляции антигеном, инкубации указанного образца с антигеном, поставляемым с набором, а затем измерение присутствия или увеличения в уровне IP-10, где присутствие или уровень указанной иммунной эффекторной молекулы указывает на способность указанного субъекта устанавливать опосредованный клетками иммунный ответ. В одном варианте осуществления набор содержит антиген и моноклональные или поликлональные антитела, которые специфически реагируют с IP-10 в иммунном анализе, или специфически связывающие фрагменты указанных антител для применения в качестве диагностического реагента. Предполагаемый набор по данному изобретению может находиться в многокомпонентной форме,где первый компонент включает множество пробирок для сбора крови, второй компонент включает средства выявления на основе антитела для иммунной эффекторной молекулы, а третий компонент включает комплект инструкций, которые включают следующее: (i) сбор крови в пробирки для сбора крови; (ii) смешивание пробирок; (iii) инкубирование пробирок; (iv) центрифугирование пробирок и сбор плазмы; и (v) обнаружение иммунных эффекторных молекул в плазме. Анализ также может быть автоматизирован или полуавтоматизирован, а автоматизацией можно управлять с помощью компьютерной программы. Анализ по данному изобретению может быть автоматизирован или полуавтоматизирован для высокой пропускной способности обследования или для обследования ряда иммунных эффекторов от одного субъекта. Автоматизацией удобно управлять с помощью компьютерной программы. Данное изобретение рассматривает компьютерный программный продукт, следовательно, для определения присутствия или отсутствия или уровня IP-10 указанный продукт включает(1) код, который воспринимает как входящие значения идентичность репортерной молекулы, связанной с меченным антителом или мРНК;(2) код, который сравнивает указанные входящие значения с контрольными значениями для определения уровня репортерных молекул и/или идентичности молекулы, к которой присоединяется репортерная молекула; и(3) считываемый компьютером носитель, который хранит коды. Еще один аспект данного изобретения распространяется на компьютер для определения присутствия или отсутствия или уровня IP-10, причем указанный компьютер включает(1) носитель хранения считываемых компьютером данных, составляющий материал хранения данных, закодированный со считываемыми компьютером данными, где указанные считываемые компьютером данные I включают входящие значения, которые идентифицируют репортерную молекулу, связанную с меченным антителом или мРНК;(2) оперативное запоминающее устройство для хранения инструкций для обработки указанных считываемых компьютером данных;(3) центральный процессор, соединенный с указанным оперативным запоминающим устройством и с указанным носителем считываемых компьютером данных, для обработки указанных считываемых компьютером данных для сравнения указанных значений, чтобы обеспечить оценку идентичности или уровня репортерных молекул или молекул, к которым они присоединены; и(4) аппарат вывода, соединенный с указанным центральным процессором, для получения результатов сравнения. Специфичность и чувствительность Чувствительность любого данного диагностического теста определяет пропорцию индивидуумов с положительным ответом, которые корректно идентифицированы или диагностированы с помощью теста,например, чувствительность составляет 100%, если все индивидуумы с данным состоянием имеют положительный тест. Специфичность данного теста обследования отражает пропорцию индивидуумов без состояния, которые корректно идентифицированы или диагностированы с помощью теста, например,специфичность составляет 100%, если все индивидуумы без состояния имеют отрицательный результат теста. Чувствительность определяют как пропорцию индивидуумов с данным состоянием (например, активная ТВ инфекция), которые корректно идентифицированы с помощью описанных способов данного изобретения (например, имеют положительный результат IP-10 теста). Специфичность здесь определена как пропорция индивидуумов без состояния (например, активная ТВ инфекция), которые корректно идентифицированы с помощью описанных способов данного изобретения (например, имеют отрицательный результат IP-10 теста). Рабочая характеристическая кривая Точность диагностического теста лучше всего описана с помощью его рабочей характеристической кривой (ROC) (см. особенно Zweig, M.H., и Campbell, G., Clin. Chem. 39 (1993) 561-577). График ROC представляет собой кривую всех пар чувствительности/специфичности, следующих из непрерывного изменения порогового решения по всему диапазону наблюдаемых данных. Клиническое выполнение лабораторных тестов зависит от его диагностической точности или способности корректно классифицировать субъекты на клинически релевантные подгруппы. Диагностическая точность оценивает способность теста корректно отличать два различных состояния исследуемых субъектов. Такие состояния представляют собой, например, здоровье и болезнь, латентная или свежая инфекция по сравнению с отсутствием инфекции или доброкачественная по сравнению со злокачественной болезнью. В каждом случае, кривая ROC изображает наложение между этими двумя распределениями с помощью построения кривой чувствительности по сравнению с 1 - специфичностью для полного диапазона порогов решения. По оси у отмечена чувствительность или истинная положительная фракция [определенная как (число истинных положительных результатов теста) (число истинных положительных + чис- 13020412 ло ложных отрицательных результатов теста]. Она также упоминается как положительная при наличии болезни или состояния. Ее рассчитывают исключительно по пораженной подгруппе. По оси х отмечена ложная положительная фракция или 1 - специфичность [определенная как (число ложных положительных результатов) / (число истинных отрицательных + число ложных положительных результатов)]. Это индекс специфичности и рассчитан исключительно по непораженной подгруппе. Так как истинные и ложные положительные фракции рассчитывают исключительно отдельно с помощью результатов теста двух различных подгрупп, кривая ROC не зависит от распространения болезни в образце. Каждая точка на кривой ROC представляет пару чувствительность/специфичность, отвечающую конкретному порогу решения. Тест с идеальным различением (нет наложения в двух распределениях результатов) имеет кривую ROC, которая проходит через верхний левый угол, где истинная положительная фракция представляет собой 1,0, или 100% (идеальная чувствительность), а ложная положительная фракция представляет собой 0 (идеальная специфичность). Теоретический график для теста без различения (идентичные распределения результатов для двух групп) является 45 диагональной линией из нижнего левого угла к верхнему правому углу. Большинство кривых попадает между этими двумя крайними значениями. (Если кривая ROC полностью лежит ниже 45 диагонали, это легко исправить изменением критерия "положительности" с "более чем" на "менее чем" или наоборот.) Характерно, чем ближе график к верхнему левому углу, тем выше общая точность теста. Одной приемлемой задачей количественного определения диагностической точности лабораторного теста является выражение ее целым числом. Наиболее общей оценкой является площадь под кривойROC. Обычно, эта площадь всегда составляет 0,5 (если это не так, можно перевернуть правило решения, чтобы сделать ее такой). Значения лежат в диапазоне от 1,0 (идеальное разделение значений теста двух групп) до 0,5 (нет очевидной распределительной разницы между двумя группами значений теста). Площадь не зависит только от конкретной части кривой, такой как точка, наиболее близкая к диагонали или чувствительность при 90% специфичности, а от всей кривой. Это количественное описательное выражение того, насколько кривая ROC близка к идеальной (площадь = 1,0). Клиническую полезность нового маркера IP-10 можно определить по сравнению с и в комбинации с другими диагностическими инструментами для данной инфекции. В случае инфекции М. tuberculosis клиническую полезность нового маркера IP-10 можно определить по сравнению с общепризнанными диагностическими инструментами - маркером IFN- или TST, с помощью анализа рабочей характеристической кривой (см. пример 5). Таким образом, целью предпочтительных вариантов осуществления по данному изобретению является обеспечение иммунологического способа обнаружения, сталкивалось ли млекопитающее с антигеном, причем способ включает этапы, на которыхb) строят кривую распределения IP-10 уровня, полученного в здоровой популяции;c) строят кривую ROC (рабочая характеристическая кривая) на основе IP-10 уровня, определенного в здоровой популяции, и по IP-10 уровню, определенному в популяции, которая производит иммунологическую реактивность на рассматриваемый антиген;e) определяют по кривой ROC чувствительность, соответствующую желаемой специфичности;f) определяют по кривой распределения IP-10 уровень, соответствующий определенной чувствительности; иg) прогнозируют индивидуум, обладающий иммунологической реактивностью на антиген, если уровень IP-10 в образце равен или выше, чем указанный IP-10 уровень, соответствующий определенной специфичности, и прогнозируют индивидуум как маловероятный или не обладающий иммунологической реактивностью к антигену, если уровень IP-10 в образце ниже, чем указанный общий IP-10 уровень, соответствующий определенной специфичности. Таким образом, другой целью предпочтительных вариантов осуществления по данному изобретению является обеспечение иммунологического способа обнаружения, сталкивалось ли млекопитающее с антигеном, причем способ включает этапы, на которыхb) строят кривую распределения IP-10 уровня, полученного от здоровой популяции;c) строят кривую ROC (рабочая характеристическая кривая) на основе IP-10 уровня, определенного в здоровой популяции, и по IP-10 уровню, определенному в популяции, которая производит иммунологическую реактивность на рассматриваемый антиген;e) определяют по кривой ROC специфичность, соответствующую желаемой чувствительности;f) определяют по кривой распределения IP-10 уровень, соответствующий определенной чувствительности; иg) прогнозируют индивидуум как имеющий иммунологическую реактивность к антигену, если уровень IP-10 в образце равный или выше, чем указанный IP-10 уровень, соответствующий определенной чувствительности, и прогнозируют индивидуум как маловероятный или не имеющий иммунологической реактивности к антигену, если уровень IP-10 в образце ниже, чем указанный общий IP-10 уровень, соответствующий определенной чувствительности. Специфичность способа по данному изобретению может составлять от 70 до 100%, более предпочтительно 80-100%, более предпочтительно 90-100%. Таким образом, в одном варианте осуществления по данному изобретению специфичность данного изобретения составляет 80-99 или 100%. Чувствительность способа по данному изобретению может составлять от 70 до 100%, более предпочтительно 80-100%, более предпочтительно 90-100%. Таким образом, в одном варианте осуществления по данному изобретению чувствительность данного изобретения составляет 80-99 или 100% (см. пример 5). Уровень IP-10 сравнивают с рядом контрольных данных или контрольным значением, таким как пороговое значение, для определения, имеет ли субъект повышенный риск или вероятность, например,инфекции. Для увеличения эффективности выявления уровень IP-10 в крови можно сравнить с рядом контрольных данных, чтобы определить вероятность инфицирования субъекта, или имеет ли он повышенный риск развития, например, инфекции. Для увеличения эффективности выявления индуцированный PHA IP-10 уровень и стимулированный антигеном уровень IP-10 можно сравнить с рядом контрольных данных, чтобы определить, имеет ли субъект инфекцию или повышенный риск развития инфекции или болезни. Чтобы определить, имеет ли пациент повышенный риск развития, например, инфекции, следует установить порог. Этот порог может быть установлен лабораторией, врачом или на индивидуальной основе каждым пациентом. Альтернативно точку разделения можно определить как среднее, медиану или среднее геометрическое отрицательной контрольной группы например, неинфицированные, здоровые неподвергавшиеся пациенты без ТВ инфекции) +/-одно или более стандартное отклонение или значение, полученное от стандартного отклонения). Следующая проблема антигена заключается в том, что некоторые индивидуумы сильно отвечают на биомаркер, тогда как не отвечают на другие. Например, некоторые индивидуумы могут не показывать или IP-10, или IFN- ответы, таким образом, продуцируя низкие уровни только IP 10 или IFN-. В этих случаях одновременное измерение двух, трех, четырех или более биомаркеров усилит чувствительность анализа и увеличит число положительных отвечающих. С помощью объединения IP-10 и одного или более биомаркера, такого как, без ограничения, IFN-, IL-2 или МСР-1, поэтому возможно сделать диагностические прогнозирования, которые менее чувствительны к анергии на один биомаркер. В другом предпочтительном варианте осуществления IP-10 измерения объединяют с измерениями одного или более других биомаркеров и сравнивают с объединенным контрольным уровнем. Оцененные биомаркерные уровни можно объединить с помощью арифметических действий, таких как сложение,вычитание, умножение и арифметические операции с процентами, квадратным корнем, возведением в степень и логарифмическими функциями. Различные биомаркерные комбинации и различные средства вычисления объединенного контрольного значения можно выполнить средствами, известными квалифицированному специалисту. В другом предпочтительном варианте осуществления отдельные измерения биомаркеров (таких как, без ограничения, IP-10 в комбинации с IFN- и/или IL-2) можно объединить после того, как концентрацию отдельного биомаркера сравнили с контрольным уровнем, например, пороговой точкой. Этот подход дает результат теста, охватывающий не только отдельные антигены, но также несколько биомаркеров в одном. Различные биомаркерные комбинации и различные средства вычисления объединенного контрольного значения можно выполнить средствами, известными квалифицированному специалисту. В одном варианте осуществления по данному изобретению комбинация биомаркера IP-10 и одного из биомаркеров, выбранных из группы, включающей МСР-1, IL-2 и INF-, предусматривает синергический эффект по отношению к чувствительности и/или специфичности. В еще одном варианте осуществления по данному изобретению комбинация биомаркера IP-10,МСР-1 и IL-2 предусматривает синергический эффект по отношению к чувствительности и/или специфичности. В следующем варианте осуществления по данному изобретению комбинация биомаркера IP-10,МСР-1 и IFN- предусматривает синергический эффект по отношению к чувствительности и/или специфичности. В другом варианте осуществления по данному изобретению комбинация биомаркера IP-10, IL-2 иIFN- предусматривает синергический эффект по отношению к чувствительности и/или специфичности. Специфически, как используется здесь, синергия означает явление, когда несколько биомаркеров,действуя вместе, создают "объединенный биомаркерный сигнал" с большей чувствительностью или спе- 15020412 цифичностью для диагноза, чем предсказанная с помощью знания только отдельных биомаркеров чувствительность или специфичность, таким образом, снижается число ложного положительного и увеличивается разделяющая способность. При считывании на основе антитела, таком как, без ограничения, ELISA или иммунохроматографический тест с полосками, два или более антитела, связывающих различные биомаркеры, позволят повысить связывание общего количества биомаркера, тем самым, действуя в синергии и приводя к более сильным ответам, и повышая чувствительность теста. Объединенное считывание можно выполнить согласно изложенным здесь идеям. Оценка риска Данное изобретение успешно идентифицирует новый маркер для измерения опосредованного клетками ответа на антиген. Концентрация маркера IP-10 повышается у субъектов с опосредованным клетками иммунным ответом на антиген. И IP-10, кажется, является эффективным маркером для выявления,например, инфекции М. tuberculosis. Чувствительность выше, чем с любым другим установленным маркером, а специфичность сопоставима или лучше, чем с любыми другими установленными маркерами (см., например, примеры 4, 5 и 10). Статистическое объяснение может быть основано, например, на риске наличия болезни в зависимости от возраста, занятия, воздействия, генетического фона, HLA-типа. Пороговые точки могут варьировать в зависимости от специфических состояний тестируемого индивидуума, таких как, без ограничения, риск наличия болезни, занятие, географическое место жительства или воздействие. Пороговые точки могут варьировать в зависимости от специфических состояний тестируемого индивидуума, таких как, без ограничения, возраст, пол, генетический фон (а именно HLA-тип), приобретенная или врожденная нарушенная иммунная функция (например, ВИЧ инфекция, диабет, пациенты с нарушением почек или печени, пациенты, получающие лечение модифицирующими иммунитет лекарственными средствами, такими как, без ограничения, кортикостероиды, хемотерапия, TNF- блокаторы,ингибиторы митоза). Выполняя регулировку разрешающего или порогового предела, можно будет, таким образом, определить чувствительность теста по обнаружению инфекции, если она присутствует, или ее специфичность для исключения инфекции или болезни, если ниже этого предела. Поэтому принцип заключается в том,что значение выше пороговой точки показывает повышенный риск, а значение ниже пороговой точки показывает пониженный риск. Кроме того, тестовые образцы с неопределенными результатами следует объяснять отдельно. Неопределенные результаты определены как результат с неожиданно низким уровнем IP-10 в стимулированном митогеном образце (РНА). Окончательную пороговую точку для неопределенного IP-10 результата можно определить согласно исследуемой группе, особенно у иммуносупрессированных пороговый уровень можно выбрать при более низком уровне. Пороговые уровни Как в целом будет понятно специалисту в данной области, способы обследования опосредованной клетками иммунной реактивности представляют собой процессы принятия решения путем сравнения. Для любого процесса принятия решения необходимы контрольные значения на основе субъектов с интересующей болезнью или состоянием и/или субъектов без интересующей болезни, инфекции или состояния. Пороговый уровень (или пороговая точка) может быть основан на нескольких критериях, включая число субъектов, которые были привлечены для дополнительного инвазивного диагностического тестирования, средний риск наличия и/или развития, например, инфекции ко всем субъектам, привлеченным для дополнительного диагностического тестирования, решение, что любого субъекта, чей специфических для пациента риск выше, чем определенный уровень риска, такой как, например, 1 к 400 или 1:250(как определено организацией, проводящей обследование, или отдельным субъектом), следует привлечь для дополнительного инвазивного диагностического тестирования, или другие критерии, известные специалисту в данной области. Пороговый уровень можно регулировать на основе нескольких критериев, таких как, без ограничения, определенная группа тестированных индивидуумов. Например, пороговый уровень можно установить ниже для индивидуумов с иммунодефицитом и для пациентов с большим риском развития активной болезни, или же порог может быть более высоким в группах здоровых индивидуумов с низким риском развития активной болезни. В одном варианте осуществления данное изобретение раскрывает способ определения, имеет ли субъект инфекцию, при котором(a) получают от субъекта образец и(b) количественно определяют концентрацию IP-10, присутствующего в образце, присутствие IP-10 полипептида в образце при концентрации, равной или выше, чем выбранный порог, показывает, что субъект может быть инфицирован. Более специфически, один аспект данного изобретения касается иммунологического способа,- 16020412a) инкубируют образец, полученный от млекопитающего, по меньшей мере с одним антигеном;c) сравнивают указанный определенный IP-10 уровень с контрольным уровнем, тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном, производящим иммунологическую реактивность к антигену, или сталкивалось ранее с другими антигенами, производящими иммунологическую перекрестную реактивность к антигену. Более специфически, другой аспект данного изобретения касается иммунологического способа,включающего этапы, на которыхa) инкубируют образец, полученный от млекопитающего, по меньшей мере с одним антигеном без какой-либо последующей стимуляции и при условии, что антиген не является PPD;c) сравнивают определенный IP-10 уровень с контрольным уровнем, тем самым определяют, сталкивалось ли ранее указанное млекопитающее по меньшей мере с одним антигеном, производя иммунологическую реактивность к указанному антигену (антигенам), или сталкивалось ранее с другими антигенами, производя иммунологическую перекрестную реактивность к антигену (антигенам). В одном варианте осуществления данное изобретение касается способа по данному изобретению,где образец делят по меньшей мере на 2 фракции иa) инкубируют образец, полученный от млекопитающего, по меньшей мере с одним антигеном без какой-либо последующей стимуляции и при условии, что антиген не является PPD, для образования образца с ответом;b) инкубируют вторую фракцию образца с неактивным раствором для образования нулевого образца;d) определяют зависимый от антигена IP-10 ответ образца, вычитая IP-10 уровень, определенный в нулевом образце, от IP-10, определенного в образце с ответом;e) сравнивают зависимый от антигена IP-10 ответ или значение, полученное от него, с контрольным уровнем или значением, полученным от него,тем самым определяют, сталкивалось ли ранее млекопитающее с антигеном и, таким образом, производит ли иммунологическую реактивность к антигену, или сталкивалось ранее с другими антигенами,производя иммунологическую перекрестную реактивность к антигену, и/или инфекция собирается развиться. Отличительное значение представляет собой значение, которое определили путем измерения параметра или параметров и в здоровой контрольной популяции, и в популяции с известной инфекцией, тем самым определяющее отличительное значение, которое идентифицирует инфицированную популяцию или с предопределенной специфичностью, или с предопределенной чувствительностью, на основе анализа связи между значениями параметра и известными клиническими данными здоровой контрольной популяции и популяции инфицированных пациентов, как видно из детального обсуждения в примерах данного описания. Отличительное значение, определенное таким способом, действительно для той же экспериментальной схемы в будущих отдельных тестах. В специфических экспериментальных схемах, описанных здесь (пример 5), пороговый уровень IP10, принимаемый как пороговое значение, как обнаружили, находится в диапазоне, без ограничения, 141000 пг/мл. Предпочтительно порог находится в диапазоне от 100 до 800 пг/мл, таком как 100-600, например, в диапазоне 150-400, таком как 150-300, например, в диапазоне 150-250, таком как 175-215. Предпочтительно пороговый значение составляет 180-224 или 225 пг/мл. Разбавление образца, объединенные измерения с другими параметрами, такими как, без ограничения, интерлейкин-2, интерферон гамма и/или макрофаговый хемотаксический белок-1, или другие параметры, приведут к другим пороговым значениям, которые можно определить согласно изложенным здесь идеям. Другие экспериментальные схемы, другие образцы, другие антигены и другие параметры,конечно, приведут к другим пороговым значениям, которые специалист в данной области может определить согласно изложенным здесь идеям с помощью нормальных разработанных методик или обычных экспериментов. Уровень индуцированного специфического к антигену биомаркера также зависит от антигенов, выбранных для стимуляции. Некоторые антигены являются более мощными индукторами, чем другие, а также число различных доступных антигенов, а именно пептидов, приведет к повышенному числу отвечающих клеток и более высокому продуцированию биомаркера. Следовательно, пороговая точка также зависит от антигена и болезни. Кроме того, другие виды имеют другие спектры антигена главного комплекса гистосовместимости, следовательно, те же антигены, тестированные в различных видах, приведут к видоспецифическим порогам. Измерения биомаркерной концентрации можно перевести в международные ед. (МО). МО сопоставляется с биологической активностью биомаркера и является контролем для определения эффективности различных способов измерений. В других вариантах осуществления данного изобретения определен- 17020412 ное пороговое значение можно объединить с индексом стимуляции (определенным как концентрация антиген-стимулированного IP-10, деленная на концентрацию нестимулированной плазмы). Значение индекса стимуляции, как обнаружили, находится в диапазоне, без ограничения, 1-6 или выше. Предпочтительно индекс стимуляции составляет по меньшей мере 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,25, 2,5, 2,75,3, 3,25, 3,5, 3,75 или 4. Данное изобретение раскрывает значение индекса стимуляции в диапазоне, кратном нескольким сотням. Таким образом, рассматривается значение индекса стимуляции по меньшей мере 10, 20, 50, 75, 100, 200, 300 или даже 1000. Порог и индекс стимуляции могут быть различными для латентной инфекции, свежей инфекции,субклинической инфекции или активной инфекции. Более специфически, в случае инфекции М. tuberculosis пороговое значение и индекс стимуляции могут быть различными, например, для экстрапульмонального ТВ, пульмонального ТВ или и того, и другого, вылеченной инфекции, латентного ТВ. Порог и индекс стимуляции, уровень изменения могут быть различными, где инфекция обнаружена в присутствии ВИЧ, других совместных инфекций, иммунной супрессии. В зависимости от распространения или ожидаемого распространения присутствия болезни пороговый уровень и/или индекс стимуляции можно отрегулировать для получения как можно меньшего количества ложных положительных или как можно меньшего количества ложных отрицательных результатов, как требуется, в зависимости от тяжести болезни и последствий определения, является ли пациент положительным по тесту или отрицательным по тесту. В случае туберкулеза анализ, представленный в данном изобретении, имеет четкое преимущество над другими in vitro тестами, доступными в настоящее время. Так как антиген-специфическое продуцирование IP-10 выше, чем продуцирование IFN- (см., например, примеры 4 и 17), порог и индекс стимуляции можно регулировать в более широких диапазонах,таким образом, расширяя возможности диагностирования. Пороговый уровень может быть различным, если нужно диагностировать одного пациента с симптомами, или если тест применяют при обследовании большого числа индивидуумов в популяции. Порог и индекс стимуляции могут быть основаны на объединенных IP-10 измерениях и измерениях других биомаркеров, таких как, без ограничения, интерлейкин-2, интерферон гамма (INF-) и/или моноцит/макрофаговый хемотаксический белок-1 (МСР-1). Соединение порога и/или индекса стимуляции может привести к другим значениям, которые можно определить согласно идеям данного изобретения. Хотя любой из известных аналитических способов измерения уровней этих анализируемых образцов будет функционировать в данном изобретении, как очевидно для специалиста в данной области, аналитический способ, применяемый для каждого маркера, должен быть тем же способом, применяемым для получения контрольных данных для конкретного маркера. Если новый аналитический способ применяется для конкретного маркера или комбинации маркеров, должен быть получен новый набор контрольных данных на основе данных, полученных способом. Многопараметровый дискриминантный анализ и другие оценки риска можно выполнить на пакете статистических данных коммерчески доступной компьютерной программы Statistical Analysis System(произведенной и продаваемой SAS Institute Inc.) или с помощью других способов мультипараметрового статистического анализа или других пакетов статистических данных или программного обеспечения,известного специалисту в данной области. Как очевидно для специалиста в данной области, в любом из вариантов осуществления, обсуждаемых выше, изменение рискового порогового уровня положительного теста или использование различных априорных рисков, которые могут относиться к различным подгруппам в популяции, могло бы изменить результаты дискриминантного анализа для каждого пациента. Тесты на стабильность, описанные здесь, предполагают, что IP-10 высоко стабильный при стандартной обработке (а именно замораживание или хранение в течение длительного времени при комнатной температуре и температурах ниже 10 С); таким образом, данное изобретение заключает, что IP-10 является эффективным аналитом для клинического применения. Данные, представленные здесь, показывают, что IP-10 потенциально важный маркер для применения в прогнозировании, диагностике, мониторинге и обследовании инфекционных болезней. Для того чтобы определить клиническую тяжесть опосредованной клетками иммунной реактивности, средство для оценивания обнаруживаемого сигнала измеренного IP-10 включает контроль или контрольное средство. Контроль также позволяет рассчитать в анализе и вариантах способа набор вариантов, обработанных вариантов, вариантов, связанных с объединением IP-10 и других биомаркеров, и других вариантов,не связанных напрямую или косвенно с IP-10 уровнем. В контексте данного изобретения выражение "контроль" касается стандарта по отношению к количеству, качеству или типу, против которого можно сравнивать другие значения или характеристики, такой как, например, стандартная кривая. Контрольные данные отражают уровень IP-10 для субъектов с опосредованной клетками иммунной реактивности (также рассматривают как пораженные, подвергнувшиеся, вакцинированные, инфицированные или больные) и/или уровень IP-10 для нормальных субъектов (также рассматривают как непора- 18020412 женные, неподвергнувшиеся, невакцинированные, неинфицированные или здоровые). В еще одном варианте осуществления по данному изобретению устройство выбрано из группы,включающей анализ, иммуноанализ, тест-полоску, сухую тест-полоску, электрическое устройство, электрод, устройство для считывания (спектрофотометрические устройства для считывания, IR-устройства для считывания, изотопные устройства для считывания и аналогичные устройства для считывания), гистохимию и подобное средство, включающее контроль, фильтровальную бумагу, цветную реакцию, видимую невооруженным глазом.IFNиндуцируемый белок 10 (IP-10) или CXCL10 является хемокином. Ген IP-10 картирован на 4q21 с помощью in situ гибридизации. Экспрессия IP-10 активируется интерферонами (IFN, а именно интерфероном гамма (IFN- и воспалительными стимулирующими средствами, и он экспрессирован при многих воспалительных болезнях Th1-типа в ряде тканей и типах клеток. Последовательность гена человека можно найти в ACCESSIONВС 010954 (gi 15012099) в банке генов. Хемокины представляют собой группу небольших (приблизительно 8-14 кДа), преимущественно основных, родственных по структуре молекул, которые регулируют клеточную направленную миграцию различных типов лейкоцитов путем взаимодействий с подгруппой 7-трансмембранных, соединенных с G белком рецепторов. Хемокины также играют фундаментальные роли в развитии, гомеостазе и работе иммунной системы, и они влияют на клетки центральной нервной системы, а также на эндотелиальные клетки, вовлеченные в ангиогенез или ангиостаз. Хемокины делят на 2 главных подсемейства, СХС и СС, на основе расположения первых 2 из 4 консервативных цистеиновых остатков; 2 цистеина отделены одной аминокислотой в СХС хемокинах и расположены рядом в СС хемокинах. СХС хемокины дополнительно подразделяют на ELR и HeELR типы на основе присутствия или отсутствия смежной последовательности glu-leu-arg и N концом к СХС мотиву. Тип ELR является хемотаксическим для нейтрофилов,тогда как тип HeELR хемотаксический для лимфоцитов.IP-10 ингибирует формирование колоний костного мозга, обладает противораковой активностью invivo, является хемоаттрактантом для моноцитов человека и Т-клеток и способствует Т-клеточной адгезии к эндотелиальным клеткам. IP-10 является мощным ингибитором ангиогенеза in vivo. IP-10 может участвовать в регуляции ангиогенеза во время воспаления и онкогенеза. IP-10 является также мишеневым геном RAS и надэкспрессирован при большинстве колоректальных раков. С помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса показали, что IP-10 взаимодействовал с N концом CXCR3 через гидрофобную щель, образованную N-петлей и 40s-петлевой областью IP-10, подобно взаимодействию поверхности других хемокинов, таких как IL8. Была обнаружена дополнительная область взаимодействия,которая состояла из гидрофобной щели, образованной N концом и 30s петлей IP-10. Предполагают, что механизм, вовлекающий 30s петлю и конфигурацию бета нити 2, может объяснять взаимодействие и антагонистическую функцию IP-10 с CCR3. В случае туберкулеза высокие уровни IP-10 обнаружили при туберкулезной гранулеме лимфатического узла и легкого, в плевральных выпотах и в сыворотке или плазме пациентов с ТВ и сопутствующей инфекцией ТВ-ВИЧ, проверяя синдром восстановления иммунитета. Определение уровня IP-10 Иммунной эффекторной молекулой предпочтительно является цитокин, такой как, без ограничения,IP-10. Присутствие или уровень иммунного эффектора можно определить по уровню самой молекулы или по степени, с которой ген экспрессирован. Уровень IP-10 оценивают с помощью общепринятых аналитических способов, таких как иммунологические способы, известные в данной области. Измерения иммунного эффектора можно комбинировать с измерениями других иммунных эффекторов по уровню гена, РНК или белка согласно изложенным здесь идеям. Как заявлено выше, выявление иммунных эффекторных молекул можно выполнить по уровням белка или нуклеиновой кислоты. Следовательно, контроль присутствия или уровня указанной иммунной эффекторной молекулы включает прямые и непрямые данные. Например, высокие уровни IP-10 мРНК являются непрямыми данными, показывающими повышенные уровни IP-10. Лиганды к иммунным эффекторам, в частности, применяются при обнаружении и/или количественном анализе этих молекул. В частности, применяются антитела к иммунным эффекторам. Методики для анализов, предполагаемых здесь, известны в данной области и включают, например, сэндвич-анализы, хМАР мультиплексирование, Luminex, ELISA и ELISpot. Контроль к антителам включает части антител,оптимизированные для млекопитающих (mammalianized) антитела (например, гуманизированные(humanised, рекомбинантные или синтетические антитела и гибридные и одноцепочечные антитела. И поликлональные, и моноклональные антитела получают с помощью иммунизации с иммунными эффекторами или их антигенными фрагментами, и каждый тип используется для иммуноанализов. Способы получения обоих типов сыворотки хорошо известны в данной области. Поликлональная сыворотка менее предпочтительна, но ее относительно легко получать с помощью инъекции приемлемого лабораторного животного с эффективным количеством иммунного эффектора или его антигенной части, забора сыворотки или плазмы у животного и выделения специфической сыворотки любой из известных иммуно-абсорбентных методик. Хотя антитела, полученные этим способом,применимы фактически в любом типе иммуноанализа, они в целом менее полезны по причине потенциальной гетерогенности продукта. Применение моноклональных антител в иммуноанализе особенно предпочтительно из-за способности продуцировать их в больших количествах и гомогенности продукта. Получение гибридомных клеточных линий для продуцирования моноклонального антитела, полученного с помощью слияния бессмертной клеточной линии и лимфоцитов, сенсибилизированных против иммуногенного препарата,можно выполнить с помощью методик, хорошо известных специалистам в данной области. Выявление можно также получить или прямой оценкой IP-10 с помощью специфического антитела при иммуноанализе конкурентной флуоресцентной поляризации (CFIPA), или выявлением гомодимеризации интерферона-гамма с помощью индуцированной димеризацией флуоресцентной поляризации(DIFP). В любом случае, выявление и количественная оценка будет составлять вплоть до или менее чем 6 пг/мл. В способе, применяемом в настоящее время, в поставляемом образцовом материале предел выявления анализа составляет 6 пг/мл, с модификациями он может быть ниже. Если материал образца разбавлен, концентрация IP-10 в указанном образце будет ниже, но все еще будет определяться (см. пример 9). Другие экспериментальные схемы и другие параметры дадут другие значения, которые можно определить согласно изложенным здесь идеям. Квалифицированному специалисту известны несколько методик определения биологических маркеров, таких как IP-10. Присутствие или уровень иммунного эффектора можно определить с помощьюELISA, Luminex, ELISPOT, методик на основе мРНК, подобных RT-PCR, или внутриклеточной проточной цитометрии.Luminex Интерферон гамма (IFN-) был золотым стандартом для Th1 ответа для иммунологии инфекционных болезней и, особенно, для иммунологии ТВ. IFN-, определенный с помощью Luminex, является плохим маркером из-за более низкой чувствительности по сравнению с коммерческим ELISA, разработанным для теста Quantiferon (см. пример 10). Однако, IP-10 легко обнаруживать с помощью Luminex, и,следовательно, можно заменить IFN- как инструмент обследования в системе Luminex. Данные, предусмотренные в некоторых из примеров, ниже, получены с помощью применения Luminex, который позволяет мультиплексирование аналитов в растворе с проточной цитометрией. С помощью уместной методики Luminex по сути дела кодирует по цвету микросферы хМАР, комбинируя различные отношения двух флуоресцентных красок. Каждый комплект гранул конъюгируется с разным захваченным антителом. Применение выявления антител с помощью R-фикоэритринового мечения позволяет количественное определение реакций между антигеном и антителом, происходящих на поверхности микросферы, путем измерения относительной интенсивности флуоресценции. Система способна измерить множество образцов небольших объемов и до 100 различных аналитов можно оценить одновременно в одном 50 мкл образце. Настоящие данные получили по протоколу Biosource. Кратко, суспензии гранул от отдельного IP-10 и наборы IFN- объединили в лунках 96-луночного планшета с предварительно смоченной фильтровальной бумагой. Гранулы дважды промыли раствором для промывания и добавили буфер для инкубации. Образцы (здесь 4-50 мкл) разбавили 1:32, 1:10, 1:8 или 1:1 методом разведения и добавили в планшет. Планшет инкубировали 2 ч при комнатной температуре при 600 rpm на шейкере для титровальных планшетов. После двух промываний добавили 100 мкл коктейля выявляемых антител на лунку, и планшет инкубировали при комнатной температуре 1 ч на шейкере для титровальных планшетов. После двух промываний добавили 100 мкл раствора стрептавидина с RPE (R-фикоэритрин) на лунку. В заключение,после 30 мин инкубации и трех промываний добавили 100 мкл раствора для промывания в каждую лунку, и планшет поместили на платформу XY Luminex. Для каждой лунки проанализировали минимум 100 специфических по аналиту гранул по флуоресценции и гранул, и RPE.ELISA Данные, предусмотренные в некоторых из примеров, ниже, получены с помощью применения ELISA согласно протоколу Biosource. Образцы (5-50 мкл) добавили в лунки 96-луночного плоскодонного планшета с предварительно помещенными IP-10 антителами. Во все лунки добавили 50 мкл биотинового конъюгата. Планшет закрыли и инкубировали при комнатной температуре 3 ч, затем содержимое лунок аспирировали и промыли 4 рабочим буфером для промывания. Затем добавили 100 мкл разбавленного стрептавидин-HRP (пероксидаза хрена) во все лунки, планшет закрыли и инкубировали при комнатной температуре 30 мин. Затем лунки аспирировали и промыли 4 рабочим буфером для промывания, затем в каждую лунку добавили 50 мкл стабилизированного хромогена, а планшет инкубировали при комнатной температуре 30 мин, защищая от света. В заключение 100 мкл стоп-раствора добавили в каждую лунку, и планшет считывали на устройстве для считывания ELISA при 450 нм. Иммунохроматографические тесты (ICT) Принцип теста: ICT (например, латеральная полоска) представляет собой in vitro иммунодиагностический тест, в котором используют первичное антитело (Ab) и одно-четыре вторичных Ab, все специфические к IP-10. Первичное Ab присоединяется к коллоидальному золоту и впитывается в подушечку для образца с полосой, содержащей одно вторичное Ab в фиксированной линии. На первом этапе инкубированный образец добавляют в левую часть подушечки для образца. Сыворотка или плазма будет течь вперед на полосу, позволяя любому присутствующему IP-10 связаться с меченным коллоидальным золотом первичным Ab. Вторичное Ab иммобилизовано на линии поперек мембраны полосы. Когда карта закрыта, образец и меченное первичное Ab на полосе подушечки контактирует с краем мембраны. Затем образец и меченное первичное Ab мигрируют вдоль полосы мембраны,пересекая линию иммобилизованного вторичного Ab. Объяснение теста: любой IP-10, образовавший комплекс с меченым золотом первичным Ab, захватывается вторичным Ab на мембране, и на линии происходит изменение цвета. Тогда тест объясняется либо а) по интенсивности цвета, либо b) путем сравнения двух тестов, один из которых выполнен на образце с ответом (например, плазма стимулированного антигеном тестируемого материала, такого как цельная кровь), а другой выполнен на нулевом образце,каждый вычитает интенсивность изменения цвета в нулевом тесте от интенсивности изменения цвета в тесте Ag и сравнивают это с контролем. Считывание теста также можно автоматизировать или полуавтоматизировать с помощью компьютеризированного интерфейса. Эту схему можно было бы построить так, что автоматизированный интерфейс определит интенсивность изменения цвета на линии. Инфекция Один аспект данного изобретения касается способа, где антиген-специфических IP-10 ответ выше контрольного уровня показывает, что млекопитающее ранее сталкивалось с антигеном или сталкивалось ранее с другими антигенами, производящими перекрестную реактивность к антигену по причине, например, инфекционной стадии, такой как активная болезнь, активная субклиническая инфекция, свежая или латентная инфекция или вакцинирование). Микроорганизм По данному изобретению инфекции могут быть вызваны микроорганизмами, такими как, без ограничения, бактерии, паразиты, грибы, вирусы, прионы и/или вироиды. В представленном предпочтительном варианте осуществления микроорганизм выбран из группы,включающей микобактерии, грамположительные бактерии, грамотрицательные бактерии, Listeria, энтерококк, Neisseria, вибрион, трепонему (сифилис), Borrelia, лептоспиру, Chlamydia, ретровирусы (ВИО,ВИЧ-1 и ВИЧ-2), цитомегаловирус, поксвирусы, вирус Эпштейна-Барра, энтеровирус, морбилливирусы,рабдовирусы (бешенство), рубивирусы (краснуха), флавивирусы (денге, желтая лихорадка), вирусы герпеса, вирус Варицелла-Зостер, гепатита С и В, лейшманию, Toxoplasma gondii, трипаносомы, плазмодий(молниеносная трехдневная малярия, трехдневная малярия, малярия овале), Pneumocystis cariini (PCP),коронавирусы (например, серьезный острый респираторный синдром (SARS), вирус Эбола или марбургский вирус и различные нематоды, трематоды. В еще более предпочтительном варианте осуществления микроорганизм выбран из группы, включающей Mycobacterium, Leishmania, Chlamydia, Trypanosoma и Schistosoma. В случае, когда инфекция представляет собой или вызывается Mycobacterium, указанная Mycobacterium принадлежит комплексным организмам М. tuberculosis (М. tuberculosis, M. bovis и М. africanum),Mycobacterium, у которых область различия (RD1) не была удалена (М. kansasii, M. szulgai, M. marinum,M. flavescens, M. gastrii), Mycobacterium, патогенным для людей (М. avium и М. lepra), и другим нетуберкулезным Mycobacterium. Таким образом, в одном представленном предпочтительном варианте осуществления Mycobacterium представляет собой М. tuberculosis. В случае, когда инфекция представляет собой или была вызвана Chlamydia, указанная Chlamydia может быть выбрана из группы, включающей С. trachomatis, С. muridaram и С. suis, С. pneumoniae и/или С. psittaci. В предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению Chlamydia представляет собой С. trachomatis. Вакцинация Один аспект данного изобретения касается способа, где зависимый от антигена IP-10 ответ выше контрольного уровня показывает, что млекопитающее сталкивалось ранее с антигеном или сталкивалось ранее с другими антигенами, производя перекрестную реактивность к антигену по причине вакцинации против какого-либо упомянутого здесь микроорганизма. Ответ на вакцину на основе нежизнеспособного материала может привести к низким уровням высвобождения антиген-специфического IFN-, а так как IP-10 высвобождается в высоких количествах, его можно использовать для обнаружения ответов на вакцину в доклинических, клинических испытаниях, а затем в общепринятой установке.Mycobacterium tuberculosis, которая наиболее часто поражает легкие (пульмональный ТВ), но может также поражать все другие органы в организме, например, центральную нервную систему (менингит), лимфатическую систему, кровеносную систему (милиарный туберкулез), мочеполовую систему, кости и суставы. Инфекция М. tuberculosis может также остаться бессимптомной стадией, которая обычно известна как латентная, неактивная или субклиническая ТВ инфекция. В представленном предпочтительном варианте осуществления данное изобретение касается способа диагностирования и мониторинга различных, например, отличных, картин туберкулеза: активная туберкулезная болезнь, активная положительная микроскопия или отрицательная микроскопия ТВ инфекции, латентная туберкулезная инфекция и свежая туберкулезная инфекция. Иммунный анализ основан на оценивании продуцирования IP-10 антиген-специфическим Тлимфоцитом при взаимодействии с представляющими антиген клетками (например, моноциты/макрофаги), отвечающими на выбранные пептидные последовательности секреторных белков МТВ. Эти пептидные последовательности выбраны по их иммуногенности и их специфичности, а также потенциально можно использовать другие пептиды. Способ и набор можно применять для диагностирования активной туберкулезной болезни, для диагностирования свежей инфекции у здоровых, контактирующих с пациентом, страдающим положительным по мокроте пульмональным туберкулезом, для диагностирования здоровых с латентной инфекцией,для мониторинга ответа на лечение в случае пульмонального и экстрапульмонального туберкулеза и для различия между латентной инфекцией и активным состоянием туберкулезной болезни. Хламидия Хламидия является общим выражением для инфекции с какой-либо бактерией, принадлежащей таксономической группе Chlamydiae. Chlamydia trachomatis является главной причиной инфекции глаз человека и половых органов. С. trachomatis естественно нашли живой только внутри человеческих клеток, и она является одной из распространенных передаваемых половым путем инфекций у людей во всем мире, около четырех миллионов случаев хламидиевой инфекции наблюдается в Соединенных Штатах каждый год. Не у всех инфицированных людей проявляются симптомы инфекции. Приблизительно половина всех мужчин и три четверти всех женщин, зараженных хламидиями, не проявляют симптомы и не знают, что они инфицированы. Это может быть серьезным, но легко поддается лечению антибиотиками,если обнаруживается вовремя. Одинаково важно, хламидиевая инфекция глаз является самой частой причиной предотвратимой слепоты в мире. В представленном предпочтительном варианте осуществления данное изобретение касается способа диагностирования и мониторинга хламидиевой инфекции. Иммунный анализ основан на оценивании продуцирования IP-10 антиген-специфическим Тлимфоцитов при взаимодействии с представляющими антиген клетками (например, моноциты/макрофаги), отвечающими на неочищенные антигены или очищенные антигены, такие как, без ограничения, пептиды. Потенциально пептидные последовательности можно выбрать по их иммуногенности и их специфичности, и аналогично можно применить другие пептиды. Антиген Выбор антигена, приемлемого для данного изобретения, также рассматриваемого как тестантиген(антигены) и антиген, выбранный для оценивания, зависит от типа инфекции, которую квалифицированный специалист хотел бы определить, следовательно, выбранные антигены связаны с болезнью. Например, при мониторинге МТВ инфекции любые доступные МТВ антигены могли бы произвести необходимый ответ и наоборот. Некоторые антигены уже применяются в существующих коммерческих анализах. Следует понимать, что любой признак и/или аспект, обсуждаемый выше или ниже в связи с тест-антигеном (антигенами) по данному изобретению, применяется по аналогии с антигеном, выбранным для оценивания. Где инфекция, как полагают, связана с туберкулезом, антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей RD-1 антигены, ESAT-6, CFP10, ТВ 7.7, Ag 85, HSP-65, Ag85A, Ag85B,MPT51, МРТ 64, ТВ 10.4, Mtb8.4, hspX, Mtb12, Mtb9.9, Mtb32A, PstS-1, PstS-2, PstS-3, MPT63, Mtb39,Mtb41, MPT83, 71-KDa, PPE68 и LppX. В представленном предпочтительном варианте осуществления антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей ESAT-6, CFP-10 ТВ 7.7, Ag 85, HSP 65 и RD-1 антигены. В еще одном варианте осуществления по данному изобретению антиген представляет собой ESAT6. В другом варианте осуществления по данному изобретению антиген представляет собой CFP-10. В следующем варианте осуществления по данному изобретению антиген представляет собой ТВ 7.7. В представленном предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению антигены представляют собой RD-1 антигены. Несколько исследовательских институтов работают над идентификацией антигенов, серьезно экспрессированных отдельным инфекционным агентом, так называемые микроб- или болезнеспецифические антигены. В случае М. tuberculosis специфические антигены экспрессированы на различных стадиях инфекции, таких как, без ограничения, неактивная, латентная, активная, свежая, пульмональная, экстрапульмональная, локализованная или вылеченная стадии. Данное изобретение можно осуществить с помощью таких антигенов, которые, таким образом,обеспечивают инструмент идентификации определенной стадии (например, латентная инфекция М. tuberculosis). В предпочтительном варианте осуществления несколько антигенов от одного микроорганизма можно добавить при получении образца с ответом. При добавлении нескольких антигенов из различных типов ткани эффективность анализа повышается. В случае туберкулеза, комбинируя пептидные антигены ESAT-6, CFP-10 и ТВ 7.7 белки, увеличивается вероятность, что тест охватывает наиболее широкий диапазон типов ткани и, таким образом, дает более ясные и более надежные результаты теста в различных популяциях пациентов. Где инфекция, как полагают, связана с хламидией, антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей экстракт серовара D, основной белок наружной мембраны (МОМР), богатые цистеином белки наружной мембраны (ОМР), ОМР 2, ОМР 3, полиморфные ОМР (POMP), аденозин дифосфат/аденозин трифосфат транслоказа Chlamydia pneumonia, белки-порины В (PorBs) и СТ 521. Как видно из данного изобретения, источник инфекции может быть разным. В варианте осуществления по данному изобретению антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей фиксированные эпимастиготы, фиксированные трипомастиготы, нарушенные эпимастиготы,нарушенные трипомастиготы, очищенные антигенные фракции эпимастигот, полуочищенные антигенные фракции эпимастигот, трипомастиготные экскреторные-секреторные антигены (TESA), предоминантный вариабельный антигенный тип (VAT), вариабельный поверхностный гликопротеин (VSG),транссиалидаза (TS), например, TS13, амастиготный поверхностный белок-2 (ASP2), KMP-11m, CRA,Ag30, JL8, TCR27, Ag1, JL7, Н 49, TCR39, РЕР-2, Ag36, JL9, MAP, SAPA, TCNA, Ag13, TcD, B12, TcE,JL5, A13, 1F8, Tc-24, Tc-28, Tc-40, Cy-hsp70, MR-HSP70, Grp-hsp78, CEA, CRP, SA85-1.1, FCaBP (жгутиковый Са 2+-связывающий белок), FL-160 (жгутиковый поверхностный белок 160 кДа) и FRA (жгутиковый повторяющийся антиген), причем указанные антигены имеют отношение к трипаносомам. В предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей фиксированные эпимастиготы, фиксированные трипомастиготы, нарушенные эпимастиготы, нарушенные трипомастиготы, очищенные антигенные фракции эпимастигот, полуочищенные антигенные фракции эпимастигот, трипомастиготные экскреторныесекреторные антигены (TESA), предоминантный вариабельный антигенный тип (VAT), вариабельный поверхностный гликопротеин (VSG), транссиалидазу (TS), например, TS13, амастиготный поверхностный белок-2 (ASP2), FCaBP (жгутиковый Са 2+-связывающий белок), FL-160 (жгутиковый поверхностный белок 160 кДа) и FRA (жгутиковый повторяющийся антиген). В случае, когда инфекция связана с шистосомами, антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей нарушенное яйцо шистосомы, экскретированые/секретированные гликопротеины (ES), покровные (TG) гликопротеины, растворимый яичный антиген (SEA), растворимый экстракт S. mansoni (SWAP), гемоцианин фиссуреллы (KLH), RP26, Sj 31, Sj 32, парамиозин, Sm62-IrV5,Sm37-SG3PDH, Sm28-GST, Sm14-FABP, PR52-филамин PL45-фосфоглицераткиназа, PN8-циклофилин,МАР 3, Sm23, MAP4, Sm28-TPI, Sm97, CAA, CCA и белок теплового шока 70 Schistosoma mansoni. В предпочтительном варианте осуществления по данному изобретению антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей экскретированные/секретированные гликопротеины(ES), покровные (TG) гликопротеины, растворимые яичные антигены (SEA), растворимый экстракт S.mansoni (SWAP), гемоцианин фиссуреллы (KLH) и RP26. Что касается лейшмании, антиген или по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей нарушенные промастиготы, лейшманин, rGBP, rORFF, rgp63, rK9, rK26, rK39, PN18-циклофилин,МАР 3, Sm23, MAP4, Sm28-TPI, Sm97, CAA и CCA. Фактически любой антиген, специфический к видам, подлежащим анализу, можно применять по данному изобретению. В другом предпочтительном варианте осуществления диапазон различных антигенов различных болезней можно объединить, чтобы обеспечить инструмент обследования с низкой специфичностью для отдельной болезни, но высокой чувствительностью для "инфекции". Набор, объединяющий, например,панель антигенов микробов военнослужащих, подвергнувшихся им во время миссии (например, малярия,туберкулез, лейшманиоз, шистосомоз и/или трипаносомоз), позволит врачам выполнить одно срочное тест-обследование вместо ряда различных тестов. В другом предпочтительном варианте осуществления объединенные наборы могут включать антигены различных микробов, инфицирующий орган (например, виды Nesseria и Chlamydia, вызывающие воспаление органов таза), или включать антигены инфекционных агентов, которые вызывают общие симптомы (например, поддающуюся лечению диарею, вызванную кампилобактерной и шигелловой ин- 23020412 фекцией, можно отличить от неподдающейся лечению диареи, вызванной вирусом, например, ротавирусом). Субъект Ссылка на "субъект" включает людей или отличные от людей виды, включая приматов, домашний скот (например, овца, коровы, свиньи, лошади, осел, козы), лабораторных животных (например, мыши,крысы, кролики, морские свинки, хомячки), животных-компаньонов (например, собаки, кошки), виды птиц (например, домашняя птица, вольерные птицы), рептилий и амфибий. Данное изобретение применимо, следовательно, в медицине, а также в ветеринарии для домашних животных и диких проявлений жизни. Общие сведения Ссылка на известный уровень техники в этом описании не должна рассматриваться как признание или какая-либо форма утверждения, что этот известный уровень техники является частью общих общедоступных сведений в любой стране. Все ссылки на патенты и непатентные документы, процитированные в данной заявке, включены в данное описание ссылкой во всей их полноте. Как будет очевидно, предпочтительные признаки и характеристики одного аспекта данного изобретения можно применять для других аспектов данного изобретения. Данное изобретение может быть воплощено в других специфических формах без отступления от сущности или его существенных признаков. Вышеупомянутые варианты осуществления, следовательно, следует рассматривать во всех отношениях иллюстративными, а не ограничивающими данное изобретение, описанное здесь. Объем данного изобретения, таким образом, показан приложенной формулой изобретения, а не описанием выше, и все изменения, которые находятся в пределах значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения,должны быть охвачены ссылкой здесь. Следует понимать, что любой признак и/или аспект, обсужденный выше применительно к способам по данному изобретению, применяется по аналогии способам диагностирования. По всему данному описанию выражение "включать" или варианты, такие как "включает" или"включающий", следует понимать как включение заявленного элемента, целого или части, или группы элементов, целых или частей, но не исключение любого другого элемента, целого или части, или группы элементов, целых или частей. Данное изобретение далее будет описано посредством следующих неограничивающих фигур и примеров. Описание графических материалов Фиг.1. Корреляция между плазменным IFN-, IP-10 и IFN-. Цельную кровь стимулировали 20-24 ч или солевым раствором (нестимулированная) (1 а), специфическими к М. tuberculosis антигенами (1b),или митогеном (1 с). Продуцирование цитокина оценили в плазменных супернатантах с помощью ELISAAg-нулевой), оцененное с помощью Quantiferon ELISA и Luminex, соответственно. Значения представлены в пг/мл. Прямые линии представляют средние значения, диапазон представлен в табл. 2. Фиг. 3. ROC кривая представляет чувствительность и специфичность анализа IP-10. Ось х представляет 1-специфичность, а ось у - чувствительность. Фиг. 4. Сравнение антиген-специфического IP-10 и IFN- продуцирования. IFN- проверяли неразбавленным, IP-10 анализировали при разбавлении 1:8. Фиг. 5. Антиген-специфическое IFN- и IP-10/CXCL10 продуцирование у пациентов с отрицательным или неопределенным Quantiferon тестом. Цельную кровь 6 Quantiferon в пробирке (QFT-IT) отрицательного и одного QFT-IT неопределенного ТВ пациента стимулировали 20-24 ч или с солевым раствором, или М. tuberculosis специфическими антигенами. Продуцирование цитокина оценили в плазменном супернатанте с помощью ELISA (IFN-) и мультиплексированной технологии (IP-10). Антиген-специфическое продуцирование представляет стимулированный антигеном образец, с вычитанием нестимулированного образца. Прямые линии представляют средние значения (знаковый ранговый критерий Уилкоксона). Примеры В следующих примерах показано выполнение анализа IP-10 с помощью инфекции Mycobacteriumtuberculosis и Chlamydia trachomatis, как примерах принципа теста. Общие способы В примерах 1-17 применялась стимуляция цельной крови для демонстрации принципа, в примере 18 применялись мононуклеарные клетки очищенной крови (РВМС). Стимуляция цельной крови 1. Объем 1 мл гепаринизированной крови отобрали в три вакуумные пробирки (Cellestis, Австралия), покрытыеa) солевым раствором для получения нестимулированного образца или нулевого образца (применя- 24020412b) пептидами, полученными из белков ESAT-6, CFP-10 и ТВ-7.7 для образования антигенного образца (Ag);c) фитогемагглютинином (РНА) для образования митогенного образца. 2. Пробирки инкубировали 20-24 ч при 37 С. 3. Пробирки центрифугировали 10 мин при 2000 rpm. 4. Плазму собрали и заморозили до или ниже - 40 С. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) 1. РВМС отделили от цельной крови центрифугированием в градиенте плотности (Lymphoprep; Nycomed) и заморозили в жидком азоте до применения. 2. РВМС разморозили и пересуспендировали в RPMI 1640, дополненной 1% пенициллина/стрептомицина, 1% заменимых аминокислот, 1% глутамина, 1% пировата, 1% HEPES (N-2 гидроксиэтилпиперазин-N-2-этансульфоновая кислота) и 10% человеческой АВ сыворотки (местный банк крови, Rigshospitalet, Копенгаген). 3. Жизнеспособность и число клеток определили окрашиванием нигрозином. 4. Клетки культивировали в трех повторностях в круглодонных микротитровальных планшетах(Nunc) при 1,25105 клеток/лунка в общем объеме 100 мкл. Получение антигена экстракта серовара D штамма С. trachomatis 1. Chlamydia trachomatis серовар D штамм (UW-3/Cx) размножали в клетках HeLa 229 и фракционировали на 30 фракций с узким молекулярным весом с помощью методики мультиэлюции. 2. С. trachomatis серовар D в буфере SPG центрифугировали при 30000 g в течение 30 мин. 3. Пеллету пересуспендировали в стерильной воде и буфере Лэммли для образца 1:1 с последующим кипячением в течение 5 мин. 4. После повторной обработки ультразвуком суспензию центрифугировали при 30000 g в течение 30 мин. 5. Супернатантный неочищенный экстракт серовара D штамма С. trachomatis применяли как антиген. Стимуляция РВМС с антигеном серовара D 1. РВМС высеяли, как описано выше, и клетки стимулировалиa) с 2 мкг/мл антигена серовара D для образования образца антигена;b) без антигена для образования нестимулированого образца. 2. Клетки инкубировали при 37 С во влажном воздухе (5% СО 2 и 95% воздуха). 3. Супернатанты собрали через 5 дней для количественного определения IP-10. 4. Плазму собрали и заморозили при или ниже -40 С. Измерения биомаркераIP-10, и/или МСР-1, и/или IL-2 оценили на платформе Luminex и выполнили согласно протоколуBiosource. 1. Суспензии гранул из отдельных наборов IP-10, IL-2, МСР-2 и/или IFN- объединили в лунках 96 луночного планшета на предварительно смоченной фильтровальной бумаге. 2. Гранулы дважды промыли раствором для промывания и добавили буфер для инкубации. 3. Образцы разбавили 1:1, 1:8, 1:10 или 1:20 методом разведения и 100 мкл добавили в планшет. 4. Планшет инкубировали 2 ч при комнатной температуре при 600 rpm на шейкере для титровальных планшетов. 5. После двух промываний добавили 100 мкл коктейля выявленного антитела на лунку, и планшет инкубировали при комнатной температуре 1 ч на шейкере для титровальных планшетов. 6. После двух промываний добавили 100 мкл раствора стрептавидина с RPE на лунку. 7. После 30 мин инкубации и трех промываний добавили 100 мкл раствора для промывания в каждую лунку и планшет поместили на платформу XY Luminex. 8. Из каждой лунки проанализировали минимум 100 специфических к аналиту гранул по флуоресценции и гранул, и RPE.IP-10 ELISA Измерения IP-10 выполнили с помощью одноэтапного типа ELISA от Biosource (Invitrogen, США).IFN- ELISA (Cellestis, Австралия). Уровни IFN- анализировали с помощью программного обеспечения производителя (версия 2.50). Набор Cellestis ELISA работает в Международных ед. (ME) (1 международная ед./мл соответствует концентрации 50 пг/мл), в представленных примерах результаты ELISA IFNвыражены в пг/мл. теля от IFN- ответа нестимулированного образца вычли IFN- ответ в образце, стимулированном М.tuberculosis - специфическими антигенами, и в митогенном образце. Результат QTF-IT считали "положительным", если ответ на специфические антигены составлял 17,5 пг/мл (0,35 МЕ/мл) и 25% нестимулированного значения, не принимая во внимание митогеном стимулированный IFN- ответ; "отрицательным", если ответ на специфические антигены составил 17,5 пг/мл (0,35 МЕ/мл), а митогеном стимулированный IFN- ответ составил 25 пг/мл (0,5 МЕ/мл). Тест считали "неопределенным", если и ответ на специфические антигены составил 17,5 пг/мл (0,35 МЕ/мл), и митогеном стимулированный IFNответ составил 25 пг/мл (0,5 МЕ/мл); или IFN- ответ в нестимулированном образце составил 400 пг/мл (8 МЕ/мл), независимо от антиген-специфического или митогеном стимулированного ответа. Пример 1. Высокие уровни плазменного IP-10 индуцировали стимуляцией цельной крови с М. tuberculosis специфическими антигенами от пациентов, инфицированных М. tuberculosis. Протестировали цельную кровь 12 пациентов с положительным по мокроте туберкулезом легких из Дании (n=2) и Гвинеи-Бисау (n=9) и 11 здоровых неподвергнувшихся ТВ датчан в качестве контроля(молодые врачи, научные сотрудники и студенты факультета инфекционных болезней и подразделения клинических исследований при Hvidovre Hospital). ВИЧ положительных пациентов не было. Исследование было одобрено комитетом по этике Копенгагена и Фредериксборга и комитетом по этике ГвинеиБисау. Результаты Уровни IFN- и IP-10 (средние значения и диапазон) в плазме образцов цельной крови, инкубированных с нулевым контролем, Ag или митогеном, оцененные с помощью Luminex IP-10, Luminex IFNили коммерческим Quantiferon-IFN- ELISA, представлены в табл. 1. Продуцирование IP-10 после инкубации с М. tuberculosis специфическими антигенами четко связано с наличием инфекции М. tuberculosis у пациента; очень высокие уровни IP-10 в плазме, 1025 пг/мл(диапазон 497,3-2080,4 пг/мл), культуры цельной крови индуцировали во время стимуляции с М. tuberculosis специфическими антигенами у пациентов, инфицированных М. tuberculosis, тогда как очень низкие уровни IP-10, 40,4 пг/мл (диапазон 19,7-158,8), наблюдали в культуре цельной крови 11 здоровых датчан,не подвергавшихся инфекции или без признаков инфекции М. tuberculosis (контроли). Разница между двумя группами была высоко существенной; р 0,0001 показал, что высвобождение IP-10 действительно индуцировано антигеном. Количество стимулированного антигеном IP-10 1024 пг/мл (диапазон 497-2080 пг/мл) был существенно выше уровней IFN-, определенных с помощью ELISA, 223,5 (99-1283 пг/мл), и Luminex, 90,7 пг/мл (37-464 пг/мл), (р = 0,01 и 0,001). По сравнению с IP-10 значительно более низкие уровни в плазме IFN- определили с помощьюQunatiferon-ELISA, но разница между инфицированными ТВ и неинфицированными ТВ была все еще существенной. IFN-, оцененный с помощью Luminex, был даже ниже, чем IFN-, оцененный с помощьюQFT-IFN- ELISA, и поэтому не будут обсуждаться далее. В заключение, IP-10 является высоко специфическим маркером инфекции М. tuberculosis, когда цельную кровь от инфицированного человека стимулируют с М. tuberculosis специфическими антигенами. IP-10 намного легче оценивать, и он обладает большим потенциалом как более чувствительный маркер из-за высоких уровней высвобождения. Табл. 1. Продуцирование IFN- и IP-10 в культуре цельной крови. Цельную кровь стимулировали 20-24 ч солевым раствором (нестимулированная), М. tuberculosis специфическими антигенами или митогеном. Продуцирование цитокина оценили с помощью ELISA (IFN-) и мультиплексирования (IFN-, IP-10). а Значения представляют собой среднее (диапазон).d Достоверно различный (Р 0,008). Тест Крускала-Уоллиса. Пример 2. Повышенное спонтанное высвобождение IP-10 в плазме нестимулированной культуры цельной крови (нулевой образец) от пациентов с активной инфекцией ТВ; IP-10 - маркер активной болезни Как видно из табл. 1, пациенты с активным туберкулезом обладали в 5,6 раз более высокими плазменными уровнями IP-10 в нестимулированных образцах цельной крови (нулевой контроль) (150,9 пг/мл(61,1-991,9 по сравнению со здоровыми контрольными индивидуумами (27,1 пг/мл (17,7-140,6 р=0,0005. Не наблюдалось достоверной разницы в плазме нулевого IP-10 между пациентами с активным туберкулезом из Гвинея-Бисау и Дании (р=0,67). В заключение, это показывает, что определение спонтанного высвобождения IP-10 в комбинации со стимулированным антигеном высвобождением IP-10 можно применять для отличия здоровых индивидуумов от пациентов с активным ТВ. Пример 3. Корреляция между высвобождением IFN- и IP-10 Существует четкая корреляция между высвобождением IFN- и IP-10 в культуре цельной крови, но высвобождение IP-10 выше. Отдельные ответы на IP-10 после стимуляции нулевым контролем, антигеном или митогеном и соответствующий ELISA IFN- показаны на фиг. 1 а-с. Наблюдали четкую корреляцию между уровнями IP-10 и ELISA IFN- в плазме стимулированной антигеном цельной крови (коэффициент Спирмена r=0,87, 95% C.I 0,71-0,95, р 0,0001) (фиг. 1b) и в плазме стимулированной митогеном цельной крови, хотя не с тем же самым уровнем (r=0,54, 95% C.I. 0,15-0,78, р=0,008) (фиг. 1 с). В заключение, высвобождение IP-10 и IFN- в культуре цельной крови коррелирует, но высвобождение IP-10 имеет более высокое значение. Это делает IP-10 лучшим маркером, чем IFN- в in-vitro ТВ тестах. Пример 4. Антиген-специфическое продуцирование IP-10 выше, чем антиген-специфическое продуцированиеIFN-. Для определения количества цитокина, высвобождаемого в ответ на антигены, представляют в культуре (а именно, антиген-специфический (Ag-специфический) цитокиновый ответ). Антигенспецифический цитокиновый ответ вычислили как дельта значение (=цитокиновое продуцирование в культуре стимулированной антигеном цельной крови за вычетом количества, высвобожденного в плазму культуры нестимулированной цельной крови). Дельта значение позволяет сравнивать антигенспецифические IFN- и IP-10 цитокиновое продуцирование. Как видно на фиг. 2, IP-10 анализ оценивает более высокие значения Ag-специфического IP-10 (870,4 пг/мл (260,5-1575,9 пг/мл по сравнению с Agспецифическим IFN- (216,5 пг/мл (80,5-1273,0 пг/мл р = 0,006 (Манна-Уитни). Средние значения и диапазоны представлены в табл. 2. В заключение, IP-10 высвобождается в более высоких количествах (р=0,006), таким образом, его легче оценивать и он представляется лучшим маркером, чем IFN-. Табл. 2. Сравнение Ag-специфического INF- и IP-10 цитокинового продуцирования, оцененного с помощью Quantiferon ELISA и Luminex, соответственно (тест Крускала-Уоллиса). Пример 5. Очень высокая чувствительности и специфичность анализа IP-10 Продемонстрирована очень высокая чувствительность и специфичность анализа IP-10 с помощью ТВ как примера принципа теста. Высокую чувствительность и специфичность анализа IP-10, описанного в данном изобретении, определили с помощью анализа ROC кривой на основе уровней значений антиген-специфического IP-10 (антиген-стимулированный минус нулевой контроль). Существующий анализROC кривой основан на 12 пациентах, больных ТВ, и 11 здоровых контрольных индивидуумах, описанных в примере 1. На фиг. 3 показано, что IP-10 тест четко отделяет пациентов с активным туберкулезом и здоровых контрольных индивидуумов. В этом эксперименте в IP-10 тесте площадь под кривой (AUC) составляет 1,0. В заключение, IP-10 анализ, применяемый в диагностике инфекции М. tuberculosis, как показали,был на 100% чувствительным и на 100% специфическим, что лучше, чем ныне применяемые in vitro тесты ТВ. IP-10 тест способен четко отличить пациентов с и без туберкулезной инфекции. На основе такого ограниченного материала можно установить порог от 27,6 до 260,5 пг/мл и достичь полной сегрегации. Пример 6.IP-10 является эффективным маркером латентного ТВ у иммуносупрессированных. Цельную кровь шести пациентов с ревматоидным артритом (RA), получавших кортикостероиды и метотрексат, стимулировали нулевым контролем, одним М. tuberculosis специфическим антигеном(ESAT6) или митогеном (РНА). Концентрацию IP-10 оценивали в супернатанте с помощью Luminex, как описано выше. Известно, что пациенты 1-3 были отрицательными по тесту Quantiferon, а пациенты 4-6 были положительными по тесту Quantiferon. Как видно из табл. 3, все пациенты, несмотря на супрессию иммунитета, поддерживали высокие уровни IP-10 в ответ на положительный митогенный контроль. Высокие уровни стимулированногоESAT6 IP-10 (диапазон 668-2800 пг/мл) наблюдали у всех пациентов с латентным ТВ (положительный тест Quantiferon). В заключение, тест, основанный на IP-10, можно применять для диагностирования латентной инфекции ТВ у пациентов с супрессией иммунитета. Таблица 3 Табл. 3. Шесть пациентов с ревматоидным артритом стимулировали с нулевым контролем, ESAT-6(один из антигенов, применяемый в тесте Quantiferon) или митогеном, IP-10 оценивали с помощью Luminex. Верхние три пациента отрицательные по тесту Quantiferon, а нижние три - положительные по тесту Quantiferon. У всех пациентов не наблюдаются симптомы активного ТВ, но страдают от RA и принимают массивное иммуносупрессивное лечение от серьезного RA (кандидаты для биологического лечения, а именно TNF- блокаторами).