Последовательности пептидов и композиции

В настоящем изобретении представлен полипептид, состоящий из не более чем 100 аминокислот,который содержит одну или более последовательностей, которые по меньшей мере на 60% гомологичны с любой из SEQ ID NO:1-6, или содержит два или более эпитопов из 7 или более аминокислот, каждый эпитоп по меньшей мере на 60% гомологичен субпоследовательности любой из SEQ ID NO:1-6, которая имеет такую же длину, как и эпитоп Столофф Грегори Алан, КапарросВандерлей Уилсон Ромеро (GB) Медведев В.Н. (RU) где полипептид является иммуногенным для позвоночного, экспрессирующего аллель главного комплекса гистосовместимости (МНС), и где полипептид не является полным белком вируса гриппа. 017387 Изобретение относится к последовательностям пептидов, композициям, содержащим последовательности пептидов, и, в частности, к вакцинам против гриппа, содержащим последовательности и композиции, и к применению этих последовательностей. Настоящее изобретение, в частности, относится к вакцинам, которые защищают от множества штаммов вируса гриппа, включая вирусы, существующие в разных видах (например, защищают от гриппа человека и от птичьего гриппа), а также вирусы, которые могут появиться в будущем, мутируя из существующих вирусов (например, мутированная форма птичьего гриппа, которая может возникнуть в будущем и передаваться от человека к человеку, что потенциально может вызвать пандемию гриппа). Защита от заболевания является крайне важной для выживания всех животных, и механизмом защиты, задействованным для этой цели, является иммунная система животного. Следовательно, понимание иммунной системы является ключом к разработке новых и более сложных видов лечения человека, а также животных. Механизм работы иммунной системы изучают в течение многих лет. Иммунная система состоит из ряда клеток различных типов и множества молекул, что делает ее крайне сложной. Даже после многих лет изучения полный объем компонентов иммунной системы и их взаимодействие друг с другом до сих пор не до конца понятны. Много лет назад было установлено, что после перенесенного заболевания человек может приобрести некоторую защиту в будущем от этого заболевания, но при этом не приобретает защиту против другого заболевания, которым этот человек не болел. Этот фундаментальный аспект иммунной системы интерпретировался в то время как то, что иммунная система обладает своего рода "памятью" об определенных патогенах, и если воздействие таких патогенов имело место, то память становится специфичной к определенному заболеванию. Постепенно стало известно, что воздействие менее агрессивных вариантов патогенов может вызвать защиту против более агрессивных вариантов (например, воздействие коровьей оспы для защиты против оспы или воздействие инактивированного возбудителя сибирской язвы, для защиты против живого возбудителя сибирской язвы). Таким образом возникла идея вакцинации. В настоящее время известно, что иммунная система имеет по меньшей мере две стороны: врожденный иммунитет и приобретенный иммунитет. Врожденная иммунная система в полной мере является полностью функциональной до проникновения патогена в систему, в то время как приобретенная иммунная защита включается после проникновения патогена в организм. Затем приобретенная иммунная защита обеспечивает специфическую атаку на данный патоген. Врожденный иммунитет состоит из нескольких компонентов, включая фагоциты, такие как макрофаги, которые (как указывает их название)"едят" или поглощают чужеродные тела, такие как патогены. Обычно, но не только, настоящее изобретение относится к приобретенной иммунной защите, и если не оговорено специально, то под термином "иммунная система" в контексте настоящего изобретения понимают приобретенную иммунную защиту. Для лучшего понимания работы иммунной системы, следует подробно рассмотреть роль ее отдельных звеньев. Что касается приобретенной иммунной защиты, то хорошо известно, что иммунитет против патогенов обеспечивается действием лимфоцитов, которые представляют собой самый распространенный тип клеток иммунной системы. Существуют два типа лимфоцитов: В-лимфоциты и Т-лимфоциты. Обычно их называют В-клетками и Т-клетками, соответственно. В-клетки способны созревать в плазматические клетки, которые производят антитела. Антитела являются крайне важными компонентами иммунной системы животных. Они продуцируются в ответ на некоторую характерную часть поступающего патогена (антиген патогена - антигены определяют как чужеродная молекула, распознаваемая иммунной системой) и обычно специфичны к данному патогену. Однако, если два патогена сходны между собой или, по меньшей мере, содержат одинаковый антиген, то в этом случае антитела, продуцируемые против одного патогена, могут быть эффективны против другого(они могут давать перекрестную реакцию). Это объясняет тот факт, почему введение коровьей оспы может защитить от оспы. Важно, что антитела "распознают" только небольшую часть антигенной молекулы патогена, а не патоген в целом. Эти части называют эпитопами. Т-клетки не обладают или не продуцируют антитела. Вместо этого, они распознают фрагменты (т.е. эпитопы) чужеродного антигена, связанные с главным комплексом гистосовместимости (МНС) (или в случае человека, с лейкоцитарным антигеном человека (HLA с помощью специального рецептора, известного как TCR (Т-клеточный рецептор). Т-клетки между собой разделяются на субпопуляции, которые могут обладать либо регуляторной функцией, либо эффекторной функцией. Эффекторные клетки вовлечены в "воздействие", удаление чужеродных субстанций. Например, цитотоксические Т-клетки(CTL) являются эффекторными клетками, которые способны разрушать инфицированные клетки, а также другие нежелательные виды клеток, например, клетки опухоли. Регуляторные Т-клетки, с другой стороны, помогают эффекторным Т- и В-клеткам стать более эффективными. Благодаря этой функции регуляторные Т-клетки часто называют хелперными Т-клетками. Другие регуляторные Т-клетки, называемые супрессорными Т-клетками, как предполагают, ингибируют иммунные ответы, но они менее изучены.-1 017387 Регуляторные Т-клетки также могут взаимодействовать с компонентами врожденной иммунной системы для усиления своей активности. У здорового человека лимфоциты иммунной системы пребывают в неактивном "покоящемся" состоянии до тех пор, пока не запускается иммунный ответ. Если требуется иммунный ответ, то лимфоциты становятся активными, пролиферируют и начинают выполнять свои специализированные функции. Например, любая покоящаяся Т-клетка, несущая на своей поверхности TCR, которая распознает эпитоп поступившего патогена, связанного с молекулой МНС, активируется, пролиферирует (что называется клональная экспансия) и полученное потомство начинает активно выполнять свои заранее определенные эффекторные функции, необходимые для борьбы с поступившими организмами. По завершению иммунного ответа (т.е. патогены и/или инфицированные клетки удалены), лимфоциты вновь возвращаются в состояние покоя. Однако это состояние покоя не эквивалентно начальному неактивному состоянию покоя. Активированные, но покоящиеся лимфоциты позднее могут быть быстро рекрутированы и индуцированы для пролиферации в ответ на инфекцию, вызванную тем же самым или близкородственным патогеном. Способность активированных покоящихся лимфоцитов на быстрый и более мощный ответ после второй встречи с патогеном эффективно обеспечивает иммунную систему памятью. Использование памяти иммунной системы является основой для всех долговременных препаратов (например, вакцин) и остается целью при разработке более долговременных иммунотерапевтических лекарственных средств. Для того чтобы клетки могли выполнять свои функции в комплексных системах организма животного, клетки должны иметь рецепторы на своей поверхности. Эти рецепторы способны распознавать специфические вещества, которые контролируют различные важные процессы, такие как активация,пролиферация и адгезия к другим клеткам или поверхностям. Например, в случае иммунной системы рецепторы Т- и В-клеток позволяют им не только распознавать антиген, но и взаимодействовать друг с другом и, таким образом, регулировать свою активность. Без этих рецепторов клетки были бы лишены важного средства коммуникации и были бы не способны эффективно и согласовано взаимодействовать,что является важным для иммунной системы многоклеточного организма. Для того, чтобы специфически распознавать и бороться с широким спектром патогенов окружающей среды, иммунная система обладает двумя типами высоковариабельных антигенных рецепторов на лимфоцитах: антитела В-клеток и рецепторы Т-клеток или TCR. В организме существует громадное количество возможных антигенных рецепторов для распознавания иммунной системой многообразия проникающих патогенов. Фактически человек имеет приблизительно 1012 различных В-клеточных и Т-клеточных рецепторов. Каждая отдельная В-клетка имеет только один тип рецептора и для реакции с антигеном должна быть выбрана В-клетка, имеющая "наиболее подходящий" рецептор для антигена этого патогена. Такой процесс называется клональная селекция. Согласно одной из теорий, отвечать может один клон (моноклональный ответ) или несколько клонов (олигоклональный ответ) или большое число клонов (поликлональный ответ), в зависимости от числа антигенов/эпитопов патогена, и от специфичности различных выбранных В-клеток для этих антигенов/эпитопов. Существует главное отличие между типами антигена, которые могут быть распознаны В-клетками и Т-клетками. Насколько известно, только рецепторы на поверхности В-клеток (т.е. антитела) способны непосредственно распознавать антигены, например, белки на поверхности вирусов и бактерий или чужеродные молекулы, растворенные в жидкостях организма. Антитела также могут быть выработаны в растворимой форме В-клетками, если они активированы и созрели до плазматических клеток. Антитела также называют иммуноглобулинами (сокращенно Ig). С другой стороны, Т-клеточные рецепторы распознают только короткие пептиды, также известные как Т-клеточные эпитопы, на поверхности клеток организма. Эти Т-клеточные эпитопы получаются при деградации белков большего размера, которые являются либо собственными белками (т.е. белками, находящимися в организме от рождения) или не собственными белками (т.е. происходящими из чужеродных инфицирующих организмов). Лишь эпитопы,полученные из чужеродных пептидов, т.е. антигенов, обычно способны индуцировать иммунный ответ организма. Сразу после поступления эпитопы связываются специальным типом молекулы, МНС (главный комплекс гистосовместимости) и полученный комплекс затем презентируется на клеточной поверхности для связывания с Т-клеточным рецептором. Следует понимать, что вследствие разрушающей природы иммунного ответа этот ответ должен действовать только против чужеродных патогенов, а не против клеток или белков собственного организма. Таким образом, иммунной системе необходимо различать "свое" и "чужое". Предполагается, что хотя клоны лимфоцитов, реагирующие против "своего", производятся, они удаляются до того, как может произойти какая-либо реакция. Этот процесс называется "клональная делеция". Также предполагается, что любые реагирующие на "свое" лимфоциты должны сохраняться, но только в "выключенном" состоянии. Такой механизм называется клональной толерантностью. Вне зависимости рассматриваемого процесса,остается неясным, что именно представляет собой базовый механизм, позволяющий лимфоидным тканям, таким как тимус, распознавать индивидуальные Т-клеточные клоны, реагирующие против "своего"-2 017387 в пуле Т-лимфоцитов, реагирующих только против "чужого". Авторы настоящего изобретения исследовали более полно механизм распознавания "свое/чужое", что привело к созданию настоящего изобретения. Авторы изобретения создали способ прогнозирования иммуногенности вещества, например пептида, который способствует более быстрой идентификации иммуногенных пептидных последовательностей в больших белках. Уже много лет известно, что главный комплекс гистосовместимости (МНС) играет ключевую роль в иммунной системе животных. Молекулы МНС позволяют Т-клеткам распознать антигены, как уже обсуждалось выше. Существует три главных типа молекул МНС: класс I, класс II и класс III. Молекулы МНС класса I и класса II представляют собой гликопротеины, которые представлены на поверхности клетки, в то время как класс III представляет собой обычно растворимые молекулы, которые представлены внутри клетки. Существует большое число различных типов молекул МНС. Например, у человека(где МНС обозначается как HLA, человеческий лейкоцитарный антиген) обнаружено несколько сотен различных аллелей генов, кодирующих молекулы МНС, что означает, что в человеческой популяции существует много различных типов HLA. МНС различных видов обычно называют в соответствии с различными соглашениями, так МНС мыши обозначается Н-2, крысы - RT1 и кролика - RLA. Различные области генов, кодирующих различные молекулы МНС в организме, обычно обозначают индивидуально,как например HLA-A, HLA-C и т.д. у человека. Молекула МНС является критически важной молекулой иммунной системы, поскольку является молекулой, презентирующей эпитопы антигенов для иммунной системы. Например, если Т-клетка обеспечивает ответ на определенный патоген, то патоген должен иметь по меньшей мере один антиген (например, белок), который имеет по меньшей мере один эпитоп (например, пептидная часть белка), который может связываться с молекулой МНС на поверхности клетки и, таким образом, взаимодействовать с Т-клеткой, которая связывается с комплексом МНС-пептид. Таким образом, иммунный ответ зависит от способности МНС связать эпитоп. Если нет эпитопа, с которым будет связывается МНС, или если нет Тклетки, которая будет связываться с комплексом МНС-пептид, то иммунный ответ не будет происходить. Тем не менее, по отношению к "своим" белкам, один из нескольких эпитопов может связаться с молекулой МНС и, тем самым, потенциально вызвать иммунный ответ. В таких случаях должен быть обеспечен специфический "сигнал" для реагирующих на "свое" клонов лимфоцитов для их уничтожения или"выключения". Поскольку, как указано выше, свои собственные и чужеродные (т.е. "чужие") пептиды могут связываться с молекулами МНС, то связыванию различных пептидов с молекулами МНС было уделено особое внимание исследователей в области иммунологии. Многие исследователи пытались рассчитать или прогнозировать силу связи между определенными типами МНС (особенно HLA и Н-2) и пептидными последовательностями, чтобы рассчитать иммунный ответ или определить его недостаточность (т.е. "сигнал",требуемый для распознавания "своего" и "чужого"). Примеры таких исследований включают следующие:spectrometry", Science, Vol. 255, 1261-1263, (1992). В целом, в уровне техники были сделаны попытки спрогнозировать иммуногенность определенных пептидов путем расчета силы связи между этим пептидом и известным связывающим окружением конкретной молекулы МНС. Связи включает в себя "карман" в молекуле МНС, который изменяется и принимает пептид определенной длины (например, 7-15 аминокислот). Структура "кармана" может быть известна по результатам предшествующих рентгеноструктурных исследований. Сила связывания может быть рассчитана математически с помощью подходящих алгоритмов атомного и молекулярного взаимодействия. Альтернативно, в уровне техники были предприняты попытки "рассчитать" силу связывания пептида на основании мотивов, присутствующих в пептиде, например, определенных аминокислот, представленных в определенных положениях в пептиде определенной длины, например, пролин в положении 3 в пептиде из 8 аминокислот, связывающемся с определенной известной молекулой HLA. В целом, данные подходы не дали больших результатов. Авторы настоящего изобретения полагают, что они, на основании указанных выше теорий, улучшили понимание того, каким образом Т-клетки, реагирующие против собственных молекул, таких как собственные белки, идентифицируются перед их элиминацией (клональная делеция) или "молчанием"(клональная толерантность). Соответственно, авторы изобретения смогли идентифицировать специфические иммуногенные последовательности, которые могут обеспечить защиту от специфических патогенов, и создали вакцины против данных патогенов, используя идентифицированные последовательности. В случае настоящего изобретения, авторы изобретения создали пептиды для вакцин против гриппа, которые вызывают Т-клеточный ответ. Ранее вакцины против гриппа создавали путем идентификации действующего штамма вируса гриппа и последующего создания вакцины, специфичной к данному вирусу. Как правило, действие вацин было основано на В-клеточном ответе (ответ антител), при этом антитело реагирует с поверхностными антигенами (т.е. гемагглютинин и нейраминидаза) специфического штамма вируса гриппа, против которого оно было выработано. Как правило, поверхностные белки, содержащие антигены, различаются у разных штаммов вируса гриппа, поскольку вирус имеет тенденцию к мутации в поверхностных белках для получения нового вируса. Последствием этого является то, что общепринятые вакцины обычно защищают только против одного специфического вирусного штамма и не защищают против нового штамма, который появился в результате мутации. Таким образом, требуется новая вакцина для появляющегося штамма. Очевидная проблема данного подхода заключается в том, что существует период времени между появлением нового вируса и созданием вакцины, в течение которого нет соответствующей защиты против вируса. Если вирус является особенно опасным, то это может привести к миллионам смертей,как это происходило при больших пандемиях гриппа в последнем столетии. Известно, что цитотоксические Т-лимфоциты могут обеспечивать иммунный ответ против штаммов вируса гриппа. Последние исследования показали, что ответ CTL у человека может быть направлен против множественных эпитопов. Предполагается, что существует доминантный ответ на эпитоп HLA-A2,ограниченный М-1 58-66. Данные исследования включают в себя А.С. Boon et al., J. Virol, Jan. 2002, 58290; S. Tamura et al. Jpn. J. Infect. Dis., Dec. 2004, 236-47; G. Deliyannis et al. J. Virol., May 2002, 4212-21; СGianfrani et al. Hum. Immunol., May 2000, 438-52; and J. Jameson et al. J. Immunol., Jun. 1999, 7578-83. Недавно было проведено исследование специфических иммуногенных пептидов, которые могут-4 017387 быть эффективны для создания вакцины против гриппа, вызывающей Т-клеточный ответ. Обычно такая работа включает в себя изучение ответа CTL на тестируемые белки гриппа, например, у трансгенных мышей. Тестируемые пептиды, как правило, являются короткими последовательностями, которые могут быть реактивными для одного типа МНС (или HLA), и их получают из специфического тестируемого штамма гриппа. Например, в "Вакцине", 2005, 5231-44, N. Hu et al. раскрывает тестирование пептида дикого типа M1 58-66 в мышах HLA Tg, экспрессирующих HLA-A2, -В 7 или -В 27. Результаты показали,что пептид представляет собой эпитоп гриппа, распознаваемый трансгенными мышами, экспрессирующими HLA-A2. В журнале Clin. Exp. Immunol., октябрь 2005, 45-52, А. С. Boon et al. раскрывает пептиды гриппа A, Ml 58-66 и NP 44-52, как эпитопы, распознаваемые в субъектах HLA-A0101 и HLA-А 0201. В журнале Cell Immunol., апрель 2005, 110-123, Е. Cheuk et al. раскрывает пептид гриппа A, NP 383-391,как эпитоп, распознаваемый в мышах, дефицитных по классу I HLA-B27/H2. С помощью программ для предсказания эпитопов авторы изобретения идентифицировали еще три В 27-рестриктированных эпитопа гриппа А: ВР-2 702-710, РВ-1 571-579 и РВ-2 368-376. В журнале J. Immunol., февраль 2004, 2453-60,А.С. Boon et al. раскрывает клоны CTL человека, специфичные для природных вариантов HLA-В 3501 рестриктированного эпитопа в NP 418-426. В журнале J. Immunother., январь-февраль 2003, 41-6, A. Trojan et al. описывает HLA-А 3-рестриктированный 9-членный RLEDVFAGK пептид, который способен индуцировать специфическую реактивность CTL. НLА-А 2-рестриктированный матриксный пептидGILGFVFTL вируса гриппа А также является раскрытым. В журнале J. Gen. Virol., июль 2001, 174 9-55,S. Tourdot et al., идентифицирует мышиный D(k)-рестриктированный эпитоп, полученный из белка полимеразы РВ-1 штамма вируса гриппа A/PR/8/34, соответствующего аминокислотным остаткам 34 9-357(ARLGKGYMF). В журнале J. Immunol., апрель 2001, 4627-33, G.T. Belz et al. идентифицирует иммуногенный пептид (SSYRRPVGI) белка РВ-1 полимеразы вируса гриппа, соответствующий аминокислотным остаткам 703-711 и мимеотоп (ISPLMVAYM) белка РВ-2 полимеразы. В патенте СШАCTL-эпитопа: NP 335-350 и NP 380-393. Дополнительные исследования показали, что данные, полученные на трансгенных мышах, можно использовать в качестве надежной модели для исследования ответов CTL у человека. В журнале Int. Immunol., апрель 1995, 597-605, S. Man et al. показали, что доминантный эпитоп вируса гриппа А, распознаваемый HLA-A2.1-рестриктированными цитотоксическими Т-лимфоцитами HLA-A2.1-трансгенных мышей, представлял собой пептидный эпитоп матриксного белка 1 (М-1), который является иммунодоминантным в ответах CTL у человека. Дополнительные исследования в этой области были проведены EJ.Bernhard et al. (J. Exp. Med., Sep 1998, 1157-62) и E. Cheuk et al. (J. Immunol., Nov 2002, 5571-80). Однако, несмотря на интенсивное изучение известных эпитопов, еще не было получено ничего убедительного для формирования основы вакцины против гриппа, которая способна защитить более чем от одного штамма вируса гриппа. Кроме того, вакцины на основе отдельных эпитопов, даже если и обеспечивают некоторую защиту, то являются специфичными для определенного HLA, что делает их неэффективными для большей части человеческой популяции. Таким образом, важная проблема известных вакцин, основанных на В-клеточном или Т-клеточном ответе, заключается в том, что они защищают только от существующего вирусного штамма и не обеспечивают защиту от возможных вирусных штаммов, которые могут развиться. С появлением особо опасного штамма H5N1 в птичьей популяции, стала более острой потребность в получении вакцины для предупреждения пандемии у человека, с учетом вероятной мутации штамма H5N1. Кроме того, вакцины на основании известных пептидов, вызывающих Т-клеточные ответы могут быть неэффективны в больших группах популяции. Соответственно, целью настоящего изобретения является решение проблем, известных из уровня техники, как описано ранее. Другой целью настоящего изобретения является получение полипептида,который способен вызвать CTL-иммунный ответ у позвоночных против большинства штаммов вируса гриппа и/или у большинства субъектов, экспрессирующих различающиеся МНС (HLA). Другой целью настоящего изобретения является получение вакцины против гриппа с применением полипептида изобретения. Предпочтительно вакцина способна обеспечить защиту против большинства штаммов вируса гриппа и/или в большинстве организмов, экспрессирующих различные МНС (HLA). Соответственно, настоящее изобретение относится к полипептиду из не более 100 аминокислот, который содержит одну или несколько последовательностей, которые по меньшей мере на 60% гомологичны любой последовательности SEQ ID NO:1-6, или содержит два или более эпитопов с 7 или более аминокислотами, каждый эпитоп по меньшей мере на 60% гомологичен субпоследовательности любой последовательности SEQ ID NO:1-6, которая имеет такую же длину, как и эпитоп. где полипептид является иммуногенным у позвоночного, экспрессирующего аллель главного комплекса гистосовместимости (МНС), и полипептид не является полным белком вируса гриппа. Таким образом, полипептид представляет собой полипептид, который может содержать всю (или может содержать по меньшей мере две части по 7 или более аминокислотных остатков) последовательность, указанную выше, но в целом не может иметь более чем 100 аминокислотных остатков. Полипептид также должен быть иммуногенным у позвоночного, экспрессирующего аллель МНС (HLA у человека). Под иммуногенным полипептидом в настоящем контексте понимают полипептид, который вызывает иммунный ответ у позвоночного, как, например, путем связывания с МНС позвоночного и обуславливая его реакцию с цитотоксическим Т-лимфоцитом. Один из способов определения, обладает ли полипептид иммуногенностью, описан в эксперименте 1 далее. Однако настоящее изобретение не ограничивается указанными способами и специалист в данной области техники может выбрать любой известный способ определения иммуногенности. Как указано выше, полипептид может быть полипептидом, содержащим два эпитопа, состоящих из 7 или более аминокислотных остатков, которые реагируют с одним или более МНС и, таким образом,вызывают широкий ответ CTL. Ответ может быть у одного индивида или по меньшей мере у двух различных индивидов (и индивиды могут принадлежать к одному виду или к разным видам). Таким образом, полипептид может содержать по меньшей мере два различных эпитопа из 7 или более аминокислотных остатков, каждый из которых отдельно обеспечивает ответ у другого субъекта. Эпитоп в контексте настоящего изобретения представляет собой полипептид, который способен к связыванию с МНС в позвоночном, предпочтительно, вызывая иммунный ответ, например, стимулируя комплекс МНС-эпитоп взаимодействовать с CTL. Один из способов определения, обладает ли полипептид иммуногенностью,описан в эксперименте 1 далее. Однако настоящее изобретение не ограничивается указанными способами и специалист в данной области техники может выбрать любой известный способ определения является ли полипептид эпитопом или содержит ли он эпитоп. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что указанные выше последовательности включают большинство эпитопов CTL, которые могут обеспечить защиту против гриппа широкому спектру популяций позвоночных. Кроме того, авторы изобретения проанализировали все известные последовательности штаммов вируса гриппа для всех видов и обнаружили, что специфические последовательности замечательно сохраняются во всех известных штаммах вируса гриппа. По существу, маловероятно, что эти последовательности будут существенно изменяться в новых штаммах, возникающих в результате мутации существующих штаммов. Соответственно, эпитопы в пределах этих последовательностей обеспечивают защиту, с высокой вероятностью будут представлены в неизмененной форме в новых штаммах,поскольку мутация обычно не происходит в этих участках. Следовательно, указанные эпитопы дают прекрасную возможность не только для обеспечения защиты от существующих штаммов гриппа (например, от штамма "птичьего гриппа" H5N1), но также для защиты от еще неизвестных штаммов (таких как мутированная форма H5N1, которая может легко передаваться от человека к человеку и создавать основу для пандемии). Как описано выше, последовательности были идентифицированы после анализа всех известных последовательностей штаммов вируса гриппа во всех видах. Таким образом, последовательности представляют собой консенсусные последовательности, полученные с помощью указанного выше анализа. Несмотря на то, что последовательности являются консенсусными, в некоторых случаях последовательности полностью соответствуют природным последовательностям известных штаммов вируса гриппа. Благодаря необычайной консервативности последовательностей среди всех вирусов всех видов, консенсусные последовательности даже при их отличии от истинных последовательностей отличаются только по небольшому числу остатков и, таким образом, содержат много меньших по размеру эпитопов (8 членный, 9-членный, 10-членный и т.д.), в которых нет отличий от природных последовательностей. Таким образом, указанные выше консенсусные последовательности, в целом, содержат много эффективных эпитопов, которые являются такими же, как и природные эпитопы и эффективные эпитопы, которые только немного отличаются от природных эпитопов. Для специалиста в данной области техники является очевидным, что изобретение распространяется не только на консенсусные последовательности и их эпитопы, но также на соответствующие истинные последовательности любых штаммов вируса гриппа. Таким образом, последовательности, имеющие некоторую гомологию с консенсусными последовательностями, также входят в рамки изобретения. Указанная гомология позволяет сделать замену, например,вплоть до 3 аминокислот в 8-членном эпитопе (62,5% гомологии) или в 9-членном, 10-членном или 11-6 017387 членном эпитопе. Предпочтительно, чтобы в последовательности было сделано не более 10 таких замен по изобретению, причем последовательность соответствует полным последовательностям SEQ ID NO:16 (66,6% гомологии для 30-членного эпитопа). Такие замены являются предпочтительно консервативными заменами, в соответствии с известными методами замены. Учитывая, что изобретение относится и к консенсусной последовательности, и к соответствующим природным последовательностям, в изобретении также описан полипептид с не более 100 аминокислотами, который содержит одну или несколько последовательностей, определяемых с помощью следующих аминокислотных остатков белка вируса гриппа, или который содержит два или более эпитопов,имеющих 7 или более аминокислот, из последовательности, определяемой с помощью следующих аминокислотных остатков белка вируса гриппа: где полипептид является иммуногенным у позвоночного, экспрессирующего аллель главного комплекса гистосовместимости (МНС), и где полипептид не является полным белком вируса гриппа. Нумерация последовательностей, указанных в настоящем изобретении, задана в соответствии с хорошо известными принципами. Таким образом, нумерация начинается с 1 от известного кодона инициации трансляции (ATG). Этот кодон соответствует метионину (М) в сегменте генома вируса гриппа, кодирующем белок, представляющий интерес. Другими словами нумерация начинается с 1, с учетом того,что метионин показан как первая аминокислота в представляющей интерес белковой последовательности, согласно применению и определению в базах данных, где эти последовательности выложены (т.е.GenBank, SwissProt и т.д.). Настоящее изобретение будет описано более подробно в качестве примера со ссылкой на следующие фигуры, где: На фиг. 1A-1F показана продукция IFN- культурами первичных спленоцитов мышей, вакцинированных FLU-v и NRP, которых стимулировали Con А (10 мкг/мл), растворимым лизоцимом (5 мкг/мл),очищенными растворимыми полипептидами (Р 1 (фиг. 1 А), Р 2 (фиг. 1B), Р 3 (фиг. 1 С), Р 4 (фиг. 1D), P5(Ju) человеческими клетками, трансфецированными либо лизоцимом, Р 1, Р 2, Р 3, Р 4, Р 5 либо Р 6, согласно протоколу, описанному в примере 1 далее (отношение спленоцитов к трансфецированным клеткам равно 10:1). Продукция IFN- представлена в виде разницы между уровнем продукции в ответ на рассматриваемый антиген минус количество IFN-, выработанное в ответ либо на растворимый лизоцим, либо на соответствующую клетку, трансфецированную лизоцимом. Фоновые уровни продукции IFN-, опосредованные лизоцимом, составляли для растворимого антигена 2510 пг/мл, для антигена в Т 1 31643 пг/мл,и для антигена в клетках Jurkat 196 пг/мл; На фиг. 2 показана продукция IFN- в первичных культурах спленоцитов мышей, вакцинированныхFLU-v и NRP после стимуляции Con A (10 мкг/мл), растворимым лизоцимом (5 мкг/мл), очищенным растворимым препаратом полипептида FLU-v (P1, Р 2, Р 3, Р 4, Р 5 и Р 6, всего 5 мкг/мл) и сингенными поHLA-антигенам T1 (T1) и несингенными JURKAT (Ju) человеческими клетками, трансфецированными либо штаммами вируса A/New Caledonia/20/99, A/NYMC/X-147 или В/Johannesburg/5/99, либо трансфецированными лизоцимом согласно протоколу, описанному в примере 1 далее (отношение спленоцитов к трансфецированным клеткам равно 10:1). Продукция IFN- представлена в виде разницы между уровнем продукции в ответ на рассматриваемый антиген минус количество IFN-, выработанное в ответ либо на растворимый лизоцим, либо на соответствующую клетку, трансфецированную лизоцимом. Фоновые уровни продукции IFN-, опосредованные лизоцимом, составляли для растворимого антигена 2510 пг/мл, для антигена в Т 1 31643 пг/мл, и для антигена в клетках Jurkat 196 пг/мл; и На фиг. 3 А и 3 В показана выживаемость животных после летального инфицирования штаммом вируса гриппа A/PR/8/34; животных иммунизировали подкожно либо FLU-v, либо NRP-v в дни 1 и 15, и на 20-й день всех животных заражали интраназально 45 мкл вируса (5107 БОЕ на дозу) под анастезией; на фиг. 3 А показаны результаты эксперимента, где животным вводили внутрибрюшинно 100 мкг сыворотки крыс против мышиных CD8 в дни 19 и 22; на фиг. 3 В показаны результаты эксперимента, где животным вводили внутрибрюшинно неспецифические сыворотки крыс в дни 19 и 22; стрелкой указана дата интра-7 017387 назального заражения, ромбами указана дата введения животным анти-СD8 сыворотки. Полипептид, описанный выше, обычно содержит один или более (предпочтительно, два или более эпитопов). Указанные эпитопы предпочтительно являются Т-клеточными эпитопами, например эпитопами цитотоксического Т-лимфоцита (CTL). Как правило, полипептид является иммуногенным по штамму вируса гриппа, и, предпочтительно, по большинству штаммов вируса гриппа. В контексте настоящего описания, под полипептидом, иммуногенным по штамму вируса гриппа, понимают полипептид, который является частью белка вируса гриппа и который вызывает ответ иммунной системы, как,например, проявление реактивности CTL при связывании с МНС. Один способ определения, обладает ли полипептид иммуногенностью, описан в эксперименте 1 далее. Однако настоящее изобретение не ограничивается указанными способами и специалист в данной области техники может выбрать любой известный способ определения иммуногенности. В настоящем изобретении полипептид содержит две или более последовательностей, описанных выше. В основном, две, три, четыре, пять или более таких последовательностей могут быть представлены в полипептиде по желанию. Чем больше подобных эпитопов представлено, тем большая степень защиты, предоставляемая субъектам в популяции людей и/или животных с различными HLA или МНС. Полипептид по настоящему изобретению также может по желанию содержать одну или более других последовательностей, которые не являются эпитопами. Как правило, другие последовательности представляют собой один или более белков вируса гриппа. Эти последовательности могут быть расположены между двумя или более последовательностями (эпитопами), описанными выше, или могут быть расположены на одном или на обоих концах полипептида. Присутствие указанных других последовательностей не должно влиять на функцию полипептида, при условии, что полипептид в целом не становится слишком большим, мешая презентированию эпитопов иммунной системе позвоночного. В конкретных вариантах осуществления изобретения, если полипептид гомологичен SEQ ID NO:1, то другие последовательности представляют собой предпочтительно одну или более последовательностей белкаM1 вируса гриппа (предпочтительно, штамма вируса гриппа А), если полипептид гомологичен SEQ IDNO:2, то другие последовательности представляют собой, предпочтительно, одну или более последовательностей белка Ml вируса гриппа (предпочтительно, штамма вируса гриппа В) , если полипептид гомологичен SEQ ID NO:3, то другие последовательности представляют собой, предпочтительно, одну или более последовательностей белка NP вируса гриппа (предпочтительно, штамма вируса гриппа А) , если полипептид гомологичен SEQ ID NO:4, то другие последовательности представляют собой предпочтительно одну или более последовательностей белка NP вируса гриппа (предпочтительно, штамма вируса гриппа В), если полипептид гомологичен SEQ ID NO:5, то другие последовательности представляют собой предпочтительно одну или более последовательностей белка РВ 1 вируса гриппа и, если полипептид гомологичен SEQ ID NO:6, то другие последовательности представляют собой, предпочтительно, одну или более последовательностей белка М 2 вируса гриппа. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления другие последовательности указанных выше белков представляют собой последовательности в пределах следующих консенсусных последовательностей или последовательности, которые по меньшей мере на 60% гомологичны последовательности в пределах следующих консенсусных последовательностей: Гомология, о которой шла речь выше, в отношении этих последовательностей предпочтительно составляет 75, 85, 95% или, по существу, 100%. В настоящем изобретении, штамм вируса гриппа конкретно не ограничен, и полипептиды могут быть иммуногенными против и/или полученными из любого известного штамма вируса гриппа. Однако предпочтительно, чтобы соответствующий штамм являлся штаммом вируса гриппа А или вируса гриппа В. Возможные штаммы вируса гриппа, которые мутируют из любого из существующих штаммов, также могут быть штаммами, против которых данные пептиды иммуногенны или из которых данные пептиды получены. Белки, в которых расположены последовательности, определяющие полипептиды настоящего изобретения, выбирают из белков M1, NP, РВ и М 2 любого штамма вируса гриппа (особенно из штаммов А-9 017387 и В) (консенсусные последовательности которых для всех проанализированных последовательностей,или альтернативно, положения которых внутри белка описаны выше). Следующие специфические белки были проанализированы авторами изобретения, и предпочтительно белки вируса гриппа, упоминаемые в изобретении, выбраны из этих специфических белков или из мутаций этих белков. Таким образом, специфические последовательности, гомологичные SEQ ID NO:1-6, описанным выше, предпочтительно представляют собой последовательности соответствующих положений нижеследующих белков. Аналогичным образом последовательности по настоящему изобретению, определяемые по положениям аминокислотных остатков в белках любого штамма вируса гриппа, а именно остатки 36-75 белка M1 (особенно в Ml гриппа А), остатки 124-158 белка Ml (особенно в Ml гриппа В), остатки 255-275 белка NP (особенно в NP гриппа А), остатки 306-326 белка NP (особенно в NP гриппа В), остатки 395-428 белка РВ 1 и остатки 32-55 белка М 2, представляют собой, предпочтительно, последовательности нижеследующих специфических белков. Список дан в форме номер версии (gi номер)(идентификация базы данных (например,gb дляGenBank)номер в NCBI другая необязательная информация (например, номер нуклеотидной последовательности в базе данных, из которой получена белковая последовательность). Все последовательности и соответствующие штаммы вируса гриппа, из которых они выделены, могут быть получены из открытой базы данных белков NCBI, которая доступна в режиме он-лайн по следующему URL-адресу:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/querv/static/help/helpdoc.ht mlProtein. База данных по белкам содержит даные о последовательностях из транслируемых кодирующих регионов последовательностей ДНК в