Устойчивые к насекомым растения хлопчатника и методы их идентификации
Номер патента: 18012
Опубликовано: 30.04.2013
Авторы: Хабекс Верле, Мунс Софи, Бергхман Эвелин, Палинк Димитри, Тролиндер Линда
Формула / Реферат
1. Способ идентификации присутствия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям, представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает амплификацию фрагмента ДНК размером 100-500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных биологических образцах, с использованием полимеразной цепной реакции по крайней мере с двумя праймерами, один из которых распознает указанную 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, или указанную 3'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, другой праймер из указанных праймеров, распознает последовательность внутри чужеродной ДНК, имеет последовательность комплементарную SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112, и анализ присутствия характерной последовательности ДНК, которая содержит часть указанной чужеродной ДНК и часть указанных непосредственно фланкирующих ее 5'- и 3'-прилегающих областей.
2. Способ по п.1, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер, распознающий 3'-прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 141 или SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112.
3. Способ по п.1, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или указанный праймер, распознающий 3'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438.
4. Способ по п.3, где указанные праймеры содержат последовательности SEQ ID No. 3 и SEQ ID No. 4, соответственно, или последовательности SEQ ID No. 5 и SEQ ID No. 7, соответственно.
5. Способ по п.4, где способ включает амплификацию фрагмента примерно 189 или 197 пн с использованием протокола ПЦР идентификации указанной чужеродной ДНК, фланкированной 5'- и 3'-прилегающими областями.
6. Набор для идентификации присутствия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированых в АТСС под номером РТА-8398, при этом набор включает один праймер, распознающий указанную 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, или один праймер, распознающий указанную 3'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и один праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, где указанная чужеродная ДНК имеет нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112.
7. Набор по п.6, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер, распознающий 3'-прилегающую область, состоящую из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 141 или SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112.
8. Набор по п.6, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер, распознающий 3'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112.
9. Набор по п.6, включающий праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 4, и праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 3, или включающий праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 5, и праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 7.
10. Способ скрининга семян на наличие чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает определение последовательности ДНК, специфичной для указанной чужеродной ДНК, фланкированной по 5'- и 3'-прилегающим областям, со специфическими праймером, который специфически распознают указанную 5'- или 3'-прилегающую область, в партиях образцов семян после амплификации фрагмента ДНК между 100 и 500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных образцах семян, используя полимеразную цепную реакцию с применением по меньшей мере двух праймеров, где один из указанных праймеров распознает 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида в позиции 1 до нуклеотида в позиции 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от нуклеотида в позиции 1 до нуклеотида в позиции 463, или 3'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида в позиции 113 до нуклеотида в позиции 438, а другой праймер из указанных праймеров распознает последовательность внутри чужеродной ДНК, имеющую нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID No.1 от нуклеотида в позиции 141 до нуклеотида в позиции 192 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от позиции 1 до позиции 112.
11. Способ определения зиготности растений, растительного материала или семян, содержащих чужеродную ДНК, содержащую кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает амплификацию фрагментов ДНК 100-500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных биологических образцах с использованием полимеразной цепной реакции по крайней мере с тремя праймерами, два из указанных праймеров специфически распознают растительную ДНК перед вставкой, такой как 5'-прилегающую область указанного элитного результата, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или 3'-прилегающую область указанного элитного результата, где указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, или ДНК перед вставкой, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 10 или комплементарную ей, третий из указанных праймеров распознает последовательность внутри чужеродной ДНК, имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112, и анализ присутствия характерной последовательности ДНК, которая содержит часть указанной чужеродной ДНК и часть указанных непосредственно фланкирующих ее 5'- и 3'-прилегающих областей.
12. Способ определения наличия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, посредством гибридизации с комплементарно меченым зондом нуклеиновой кислоты, в котором соотношение зонд:целевая нуклеиновая кислота амплифицировано посредством рециклинга целевой последовательности нуклеиновой кислоты, где указанный способ включает:
a) гибридизацию указанной целевой последовательности нуклеиновой кислоты с первым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 158 или комплементарную ей, или с указанным первым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 95 до нуклеотида 112 или комплементарную ей;
b) гибридизацию указанной целевой последовательности нуклеиновой кислоты со вторым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 123 до нуклеотида 140 или комплементарную ей, или указанным меченым зондом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 130 или комплементарную ей, где указанные первый и второй олигонуклеотиды перекрываются по крайней мере на один нуклеотид, и где или первый, или второй указанный олигонуклеотид является меченым и является указанным меченым зондом;
c) расщепление только меченого зонда внутри дуплекса зондщелевая последовательность нуклеиновой кислоты с помощью фермента, который вызывает селективное расщепление зонда, приводящее к диссоциации дуплекса, оставляющей целевую последовательность интактной;
d) рециклинг целевой последовательности нуклеиновой кислоты повторением стадий (а)-(с) и
е) детекция расщепленного меченого зонда и, таким образом, определение наличия названной целевой последовательности нуклеиновой кислоты.
13. Трансгенное растение хлопчатника, или клетки, части, его семя или потомство, где каждый из них содержит в своем геноме чужеродную ДНК, содержащую кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, геномная ДНК которых при анализе с применением протокола для идентификации указанной чужеродной ДНК, фланкированной по указанным 5'- и 3'-прилегающим областям, с двумя праймерами, включающими нуклеотидные последовательности SEQ ID No. 3 и SEQ ID No. 4 соответственно, дает фрагмент ДНК примерно 189 пн.
Текст
УСТОЙЧИВЫЕ К НАСЕКОМЫМ РАСТЕНИЯ ХЛОПЧАТНИКА И МЕТОДЫ ИХ ИДЕНТИФИКАЦИИ Изобретение предоставляет специфические трансгенные хлопчатники, растительный материал и семена, характеризующиеся тем, что эти продукты несут специфический результат трансформации в специфическом положении в геноме хлопка. Также предоставлены способы, которые позволяют быструю и несомненную идентификацию результата в биологических образцах. Область техники, к которой относится изобретение Это изобретение относится к трансгенным растениям хлопчатника, растительным материалам и семенам, характеризующимся носительством особого результата трансформации, в особенности наличием гена, кодирующего белок, который придает устойчивость к насекомым, в определенном месте генома хлопка. Растения хлопчатника по изобретению сочетают устойчивость к насекомым с агрономическим преимуществом, генетической стабильностью и адаптивностью к различным генетическим средам, эквивалентным нетрансформированным линиям хлопчатника в отсутствие насекомых. Это изобретение дополнительно предоставляет способы и наборы для идентификации наличия растительного материала,включающего особенно результат трансформации EE-GH6 в биологических образцах. Уровень техники Фенотипическая экспрессия трансгена в растении определяется как структурой самого гена, так и его расположением в геноме растения. В то же время наличие трансгена (в виде чужеродной ДНК) в различных местоположениях в геноме будет влиять на весь фенотип растения различными путями. Агрономически или производственно успешное введение коммерчески интересной характеристики в растения с помощью генетической манипуляции может быть длительной процедурой в зависимости от различных факторов. Фактическая трансформация и регенерация генетически трансформированных растений является лишь первым в последовательности селекционных шагов, которые включают обширную генетическую характеризацию, скрещивание и оценку в полевых испытаниях, с течением времени приводящие к селекции элитного результата. Хлопковое волокно является наиболее важным текстильным сырьем во всем мире. Примерно 32 миллиона гектаров хлопка возделывается ежегодно в мире. Хлопок является пятой по величине сельскохозяйственной культурой в США в соответствии с посевной площадью, с более чем 6 миллионами гектаров, возделанных в 2000 году. Наиболее вредными видами насекомых, питающихся хлопчатником, являются Helicoverpa zea (совка хлопковая или коробочный червь), Helicoverpa armigera (американский коробочный червь), Heliothisvirescens (табачная листовертка) and Helicoverpa punctigera. Целенаправленная идентификация элитного результата становится все более важной в свете обсуждения новых продуктов/пищи, разделения ГМО и не-ГМО продуктов и идентификации патентных материалов. В идеале, такой идентификационный способ является как простым, так и быстрым, без необходимости в пространных лабораторных исследованиях. Более того, способ должен предоставлять результаты, которые позволяют целенаправленную идентификацию элитного результата без интерпретации экперта, но выдерживают экспертную оценку в случае необходимости. Здесь описываются определенные способы для использования в идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах.EE-GH6 был идентифицирован как элитный результат из популяции трансгенных растений хлопчатника при выведении устойчивого к насекомым хлопка (Gossypium hirsutum), содержащего ген, кодирующий инсектицидный кристаллический белок из Bacillus thuringiensis. Трансгенные растения хлопчатника содержат химерный ген, кодирующий Bt инсектицидный кристаллический белок (как описано вWO02/057664) под контролем растительного промотера. Растения хлопчатника, содержащие ген устойчивости к насекомым, были описаны в области техники. Однако, ни одно из описаний в области техники не обучает или рекомендует настоящее изобретение. Сущность изобретения Настоящее изобретение относится к трансгенному растению хлопчатника или его семенам, клеткам или тканям, включая стабильно интегрированную в их геном экспрессионную кассету, которая содержит ген устойчивости к насекомым, содержащий кодирующую последовательность гена cry2Ae (как описано здесь в примере 1.1), который устойчив к насекомым и, в отсутствие давления насекомых, имеет агрономические параметры в значительной степени эквивалентные нетрансгенной изогенной линии. Под давлением насекомых, растение будет иметь превосходящий агрономический фенотип по сравнению с нетрансгенным растением. В соответствии с настоящим изобретением растение хлопчатника или его семена, клетки или ткани содержат элитный результат EE-GH6. Точнее говоря, настоящее изобретение относится к трансгенному растению хлопчатника, его семенам, клеткам или тканям, геномная ДНК которого характеризуется тем, что при анализе по ПЦР идентификационному протоколу, который описан здесь, с использованием двух праймеров, направленных на 5'или 3'-прилегающие области EE-GH6 и чужеродной ДНК, соответственно, дает фрагмент, специфический для EE-GH6. Праймеры могут быть направлены на 5'-прилегающую область в последовательностиSEQ ID No. 1 или SEQ ID No. 11 и чужеродную ДНК соответственно, как праймеры включающие или состоящие из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 5 и SEQ ID No. 7 соответственно, и дающие фрагмент ДНК между 100 и 700 пн, преимущественно 197 пн. Праймеры также могут быть направлены на 3'-прилегающую область в последовательности SEQ ID No. 2 и чужеродную ДНК соответственно, как праймеры содержащие или состоящие из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 4 и SEQ ID No. 3 соответственно, и давать фрагмент ДНК между 100 и 700 пн, преимущественно около 189 пн. Эталонные семена, содержащие элитный результат по изобретению, были помещены в АТСС под номером РТА-8398. Один вариант осуществления настоящего изобретения является семенами, содержащими элитный результат EE-GH6, размещенными как АТСС номер РТА-8398, которые вырастут в растение хлопчатника, устойчивое к насекомым, особенно Helicoverpa sp. или Heliothis sp. Семена с АТСС номером РТА-8398, являются партией семян, состоящей по крайней мере из 95% трансгенных семян,гомозиготных по трансгену, содержащих элитный результат по изобретению, которые вырастут в устойчивые к насекомым растения, также толерантные к глюфозинату. Семена могут быть высеяны и растущие растения обработаны глюфозинатом, как описано здесь для получения 100% устойчивых к глюфозинату растений, содержащих элитный результат по изобретению. Изобретение далее относится к клеткам, тканям, потомкам и потомству от растений, содержащих элитный результат по изобретению, выросших из семян, размещенных в АТСС с номером РТА-8398. Изобретение также относится к растениям,которые могут быть получены размножением и/или скрещиванием с растениями хлопчатника, содержащими элитный результат по изобретению, выращенными из семян, помещенных в АТСС под номером РТА-8398. Изобретение также относится к растениям хлопчатника, содержащим элитный результат EEGH6. Изобретение также относится к способу идентификации трансгенных растений, или их клеток или тканей, содержащих элитный результат EE-GH6, который является способом, основанным на идентификации наличия характеризующих последовательностей ДНК или аминокислот, кодируемых таковой последовательностью ДНК, в трансгенных растениях, клетках или тканях. В соответствии с предпочтительным вариатом осуществления изобретения, такие характеризующие последовательности ДНК являются последовательностями длиной 15 пн, предпочтительно 20 пн, наиболее предпочтительно 30 пн или более, которые содержат сайт вставки трансгена, то есть часть чужеродной ДНК и часть генома хлопчатника (5'- или 3'-прилегающую область) непосредственно прилегающие друг к другу, что позволяет специфическую идентификацию элитного результата. Настоящее изобретение также относится к способам идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, эти способы основаны на праймерах или зондах, которые специфически распознают 5'- и/или 3'-прилегающие области ЕЕ-GH6. Более определенно, изобретение относится к способу, состоящему из амплификации последовательности нуклеиновой кислоты, представленной в биологических образцах, с использованием полимеразной цепной реакции с по крайней мере двумя праймерами, один из которых распознает 5'- и/или 3'прилегающую область EE-GH6, а другой распознает последовательность внутри чужеродной ДНК так,чтобы получить фрагмент преимущественно 100-500 пн. Праймеры могут распознавать последовательность внутри 5'-прилегающей области EE-GH6 (SEQ ID No. 1, от позиции 1 до позиции 140 или SEQ IDNo. 11 от позиции 1 до позиции 463) или внутри 3'-прилегающей области EE-GH6 (фрагмент SEQ ID No. 2 от позиции 113 до позиции 438) и последовательность внутри чужеродной ДНК (фрагмент SEQ ID No. 1 от позиции 141 до 192 или SEQ ID No. 2 от позиции 1 до позиции 112), соответственно. Праймер, распознающий 5'-прилегающую область может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 7 и праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 5, описанные здесь. Праймер, распознающий 3'-прилегающую область может включать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 3 или SEQ ID No. 6, и праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 4, описанную здесь. Настоящее изобретение более определенно относится к способу идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, этот метод заключается в амплификации последовательности нуклеиновой кислоты, присутствующей в биологическом образце, с применением полимеразной цепной реакции с двумя праймерами, имеющими нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 3 и -SEQ ID No. 4 соответственно, для получения фрагмента ДНК примерно 189 пн, или с двумя праймерами, имеющими нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 5 или SEQ ID No. 7 соответственно, для получения фрагмента примерно 197 пн. Настоящее изобретение таже относится к специфическим прилегающим последовательностям EEGH6, описанным здесь, которые могут быть использованы для разработки специфических способов идентификации для EE-GH6 в биологических образцах. Такие специфические прилегающие области могут быть также использованы как материал контроля сравнения в идентификационном анализе. Более конкретно, изобретение относится к 5'- и 3'-прилегающим областям EE-GH6, которые могут быть использованы для разработки специфических праймеров и зондов, как далее описывается здесь. Также подходят в качестве референсного материала нуклеиновые кислоты, преимущественно около 180-200 пн,содержащие последовательность, которая может быть амплифицирована с праймерами, имеющими нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 7 и SEQ ID No. 5 или SEQ ID No. 4 и SEQ ID No. 3. Изобретение также относится к способам идентификции наличия EE-GH6 в биологических образцах, основанным на использовании таких специфических праймеров и зондов. Праймеры могут состоять из нуклеотидной последовательности от 17 до 200 последовательных нуклеотидов, вабраных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклетида 1 до нуклеотида 140, или SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или комплементарной последовательности нуклеотидов SEQ ID No. 2 от нуклео-2 018012 тида 113 до нуклеотида 438, комбинированной с праймерами, состоящими из нуклеотидной последовательности от 17 до 200 последовательных нуклеотидов, выбранным из комплементарной нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192, или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112. Праймеры могут также включать эти нуклеотидные последовательности в расположении на их 3'-конце, и также содержать неотносящиеся последовательности или последовательности, производные от упомянутых нуклеотидных последовательностей, но содержащие несоответствующие основания. Изобретение также относится к наборам для идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, названные наборы содержат по крайней мере один праймер или зонд, которые специфически распознают 5'- или 3'-прилегающую область EE-GH6 или специфическую перестановку в чужеродной последовательности ДНК в EE-GH6. Набор по изобретению может содержать, в дополнение к первому праймеру, который специфически распознает 5'- или 3'-прилегающую область EE-GH6, второй праймер, который специфически распознает последовательность внутри чужеродной ДНК EE-GH6, для использования в ПЦР идентификационном протоколе. Наборы по изобретению могут содержать по крайней мере два специфических праймера,один из который распознает последовательность внутри 5'-прилегающей области EE-GH6, а другой распознает последовательность внутри чужеродной ДНК. Праймер, распознающий 5'-прилегающую область, может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 3, и праймер, распознающий трансген, может содержать нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 4, или другой праймер или комбинацию праймеров, как описано здесь. Изобретение далее относится к набору для идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, названный набор включает ПЦР праймеры, имеющие нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 3 и SEQ ID No. 4 для использования в EE-GH6 ПЦР идентификационном протоколе описанном здесь. Изобретение также относится к набору для идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, где этот набор содержит зонд, имеющий последовательность, соответствующую (или комплементарную ей) последовательности, имеющей 80-100% идентичности со специфической областью EE-GH6. Преимущественно, последовательность зонда соответствует специфической области,включающей часть 5'- или 3'-прилегающей области EE-GH6. Наиболее предпостительно специфический зонд имеет последовательность (или комплементарную ей) с 80-100% идентичности с последовательностью от 120 до 160 нуклеотида SEQ ID No. 1 или SEQ ID No. 2 от нуклеотида 102 до 123. В соответствии с другой особенностью изобретения, обнаруженные ДНК последовательности содержат сайт вставки результата и имеют достаточную длину полинуклеотидов как геномной ДНК, так и чужеродной ДНК (трансгена), так что могут применяться как праймеры или как зонды для определенияEE-GH6. Такие последовательности могут содержать как минимум 9 нуклеотидов геномной ДНК хлопка и такое же количество нуклеотидов чужеродной ДНК (трансгена) EE-GH6 сразу же по обе стороны от места вставки, соответственно. Более предпочтительно, такие последовательности ДНК содержат по крайней мере 9 нуклеотидов геномной ДНК хлопка и такое же количество нуклеотидов чужеродной ДНК непрерывно с сайтом вставки в SEQ ID No. 1 или SEQ ID No. 2. Способы и наборы, охваченные данным изобретением, могут быть использованы для других целей,таких как, но не ограничивающихся, следующими: определение наличия или отсутствия EE-GH6 в растениях, растительном материале или продуктах, таких как, но не ограничивающихся, пищевые или кормовые продукты (свежие или обработанные), включающие или состоящие из растительного материала; дополнительно или альтернативно, способы и наборы по настоящему изобретению могут быть использованы для идентификации трансгенного растительного материала в целях разделения трансгенного и нетрансгенного материала; дополнительно или альтернативно, способы и наборы по настоящему изобретению могут быть использованы для определения качества (то есть процента чистого материала) растительного материала, содержащего EE-GH6. Кроме того, изобретение относится к 5'- и 3'-прилегающим областям EE-GH6, также как и к специфическим праймерам и зондам, разработанным на основе 5'- и/или 3'-прилегающих последовательностейEE-GH6. Изобретение также относится к геномной ДНК, полученной из растений, содержащих элитный результат EE-GH6. Такая геномная ДНК может быть использована как материал контроля сравнения в идентификационном анализе описанном здесь. Краткое описание чертежей Следующие примеры, неподразумевающиеся как ограничивающие изобретение описанными здесь конкретными вариантами осуществления, могут быть поняты в сочетании с сопутствующими чертежами,включенными здесь посредством ссылки, на которых фиг. 1 схематически представляет взаимосвязь между цитированными нуклеотидными последовательностями и праймерами, черная полоска: чужеродная ДНК; заштрихованная черная полоска: перестройка в чужеродной ДНК, специфическая для EE-GH6; светлая полоска: ДНК растительного происхождения; заштрихованная светлая полоска: делеция мишени перед вставкой; стрелки: олигонуклеотидные праймеры, числа под полосками показывают нуклеотидные позиции; (с) относится к комплементарной нуклеотидной последовательности; NA: не применимо. Фиг. 2 представляет результаты, полученные в ПЦР идентификационном протоколе, разработанном для EE-GH6. Последовательность нанесения на гель: линия 1: маркер молекулярного веса (100 пн лестница); линии 2-5: образцы ДНК из хлопчатников, содержащих трансгенный результат EE-GH6; линии 6 и 7: образцы ДНК из трансгенных хлопчатников не содержащие элитный результат EE-GH6, но содердащих сходный ген устойчивости к насекомым; линия 8: негативный контроль (без ДНК); линия 9: маркер молекулярного веса. Фиг. 3: представляет результаты, полученные в ПЦР протоколе оценки зиготности, разработанном для EE-GH6. Последовательность нанесения на гель: линия 1: маркер, молекулярного веса (100 пн лестница); линии 2 и 3: Образцы ДНК хлопчатников, содержащих трансгенный результат EE-GH6 в гомозиготной форме; линии 4-6: образцы ДНК хлопчатников, содержащих трансгенный результат ЕЕ-GH6 в гетерозиготной форме; линия 7: контрольный образец ДНК из хлопчатника дикого типа; линия 8: негативный контроль (без ДНК); линия 9: маркер молекулярного веса. Подробное описание Включение рекомбинантной ДНК молекулы в растительный геном в основном происходит вследствие трансформации клетки или ткани. Конкретный сайт включения обычно возникает из-за "случайной" интеграции. ДНК, введенная в растительный геном, как результат трансформации растительной клетки или ткани рекомбинантной ДНК или "трансформирующей" ДНК и берущая начало из такой трансформирующей ДНК, здесь и далее упоминается как "чужеродная ДНК", содержащая один или более "трансгенов". "Растительная ДНК" в контексте настоящего изобретения будет упоминаться как ДНК, происходящая из растений, которые были трансформированы. Растительная ДНК обычно будет находиться в том же самом генетическом локусе, что и в растениях дикого типа. Чужеродная ДНК может быть охарактеризована расположением и конфигурацией в сайте включения рекомбинантной молекулы ДНК в растительный геном. Сайт растительного генома, в который была вставлена рекомбинантная ДНК, также упоминается как "сайт вставки" или "сайт-мишень". Вставка рекомбинантной ДНК в область растительного генома,упоминаемой как "растительная ДНК перед вставкой", может быть ассоциирована с делецией растительной ДНК, упоминаемой как "делеция сайта-мишени". "Прилегающая область" или "прилегающая последовательность" используются здесь в отношении последовательностей по крайней мере 20 пн, преимущественно не менее 50 пн, и до 5000 пн ДНК, отличной от введенной ДНК, преимущественно ДНК из растительного генома, которые расположены или непоспедственно выше (положение "апстрим") и являются непрерывными или непосредственно ниже (положение "даунстрим") и являются непрерывными с чужеродной ДНК. Процедуры трансформации, приводящие к случайной интеграции чужеродной ДНК,будут приводить к трансформантам с различными прилегающими областями, которые являются характерными и уникальными для каждого трансформанта. Когда рекомбинантная ДНК введена в растительный геном посредством традиционного скрещивания, его сайт вставки в растительный геном, или его прилегающие обычно не изменяются. "Область вставки", как используется здесь, относится к области,соответствующей области по крайней мере 40 пн, предпочтительно 100 пн, и до 10000 пн, окруженной последовательностью, которая содержит верхнюю и/или нижнюю прилегающие области чужеродной ДНК в растительном геноме. Принимая во внимание минорные различия из-за мутаций внутри видов, область вставки будет сохранять, при скрещивании с растениями того же вида, по крайней мере 85%, предпочтительно 90%, более предпочтительно 95% и наиболее предпочтительно 100% идентичность последовательности с последовательностью, содержащей вверх- и вниз-прилегающие области чужеродной ДНК в растении, первоначально полученном после трансформации. Результат определен как (искусственный) генетический локус, который, в результате генетической инженерии, несет трансген, содержащий по крайней мере одну копию интересующего гена. Типичным аллельным состоянием результата является наличие или отсутствие чужеродной ДНК. Результат характеризуется фенотипически экспрессией трансгена. На генетическом уровне, результат является частью генетической организации растения. На молекулярном уровне, результат может быть охарактеризован посредством рестрикционной карты (например, как определено на Саузерн-блоттинге), по вверх- и внизприлегающим последовательностям трансгена, расположением молекулярных маркеров и/или молекулярной конфигурацией трансгена. Обычно трансформация растений трансформирующей ДНК, содержащей по крайней мере один интересующий ген, приводит к популяции трансформантов, содержащих массу различных результатов, каждый из которых является уникальным. Элитный результат, как используется здесь, является результатом, выбранным из группы результатов, полученных путем трансформации одной и той же трансформирующей ДНК или путем возвратного скрещивания с растениями, полеченными путем такой трансформации, на основе экспрессии и стабильности трансгена(-ов) и их совместимости с оптимальными агрономическими характеристиками растения,содержащего его. Так, критериями выбора элитного результата являются один или более, предпочтительно два или более, преимущественно все из нижеследующих: а) что наличие чужеродной ДНК не ставит под угрозу другие желаемые характеристики растения,такие как относящиеся к агрономическим показателям или коммерческой ценности; б) что результат характеризуется хорошо определенной молекулярной конфигурацией, которая стабильно наследуется и для которой могут быть разработаны соответствующие способы контроля идентичности; в) что интересующий ген(-ы) демонстрирует корректную, подходящую и стабильную пространственную и временную фенотипическую экспрессию, как в гетерозиготном (или гемизиготном), так и в гомозиготном состоянии результата, на коммерчески приемлемом уровне в пределах условий окружающей среду, в которые растения, содержащие результат, вероятно будут помещены при нормальном агрономическом использовании. Предпочтительно, чтобы чужеродная ДНК была ассоциирована с позицией в растительном геноме,которая позволяет легкую интрогрессию в желаемую коммерческую генетическую среду. Статус результата как элитного результата подтверждается интрогрессией элитного результата в различные подходящие генетические среды и наблюдением выполнения одного, двух или всех из вышеупомянутых а), б) и в) критериев. Так, "элитный результат" относится к генетическому локусу, содержащему чужеродную ДНК, которая соответствует критериям, описанным выше. Растение, растительный материал или потомство, такое как семена, могут содержать один или более элитных результатов в их геноме. Способы, разработанные для идентификации элитного результата или растения, растительного материала, или продуктов, которые содержат растительный материал, содержащий элитный результат, основаны на специфических геномных характеристиках элитного результата, таких как специфическая рестрикционная карта области генома, содержащей чужеродную ДНК, молекулярные маркеры или последовательности прилегающих области(-ей) чужеродной ДНК. Когда одна или обе прилегающие области чужеродной ДНК отсеквенированы, могут быть разработаны праймеры и зонды, которые специфически распознают эту (эти) последовательность(-и) в нуклеиновой кислоте (ДНК или РНК) образца посредством методов молекулярной биологии. Например, метод ПЦР может быть разработан для идентификации элитного результата в биологических образцах (таких как образцы растений, растительного материала или продуктов, содержащих растительный материал) . Такая ПЦР основана на по крайней мере двух специфических "праймерах", один из которых распознает последовательность внутри 5'- или 3'-прилегающей области элитного результата, а другой распознает последовательность внутри чужеродной ДНК. Праймеры предпочтительно имеют последовательность между 15 и 35 нуклеотидами, которые при оптимальных ПЦР условиях "специфически распознают" последовательность внутри 5'- или 3'-прилегающей области элитного результата и чужеродной ДНК элитного результата соответственно, таким образом, что специфический фрагмент ("интеграционный фрагмент" или дискриминирующий ампликон) амплифицируется из образца нуклеиновой кислоты, содержащего элитный результат. Это означает, что только целевой интеграционный фрагмент, и никакие другие последовательности с растительного генома или чужеродной ДНК, амплифицируется при оптимальных условиях ПЦР. ПЦР праймеры, подходящие для изобретения, могут быть следующими: олигонуклеотиды длиной 17-100 пн, содержащие нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, предпочтительно 20 последовательных нуклеотидов, выбранных из 5'-прилегающей последовательности (SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или SEQ IDNo. 11 от позиции 1 до позиции 463) на своем 3'-конце (праймеры, распознающие 5'-прилегающие последовательности); или олигонуклеотиды длиной 17-200 пн, содержащие нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, предпочтительно 20 последовательных нуклеотидов,выбранных из 3'-прилегающей последовательности (комплементарная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438) на своем 3'-конце (праймеры, распознающие 3'-прилегающие последовательности); или олигонуклеотиды длиной 17-200 пн, содержащие нуклеотидную последовательность, по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, предпочтительно 20 последовательных нуклеотидов, выбранных из ДНК последовательностей вставки (комплементарная последовательность SEQID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192) на своем 3'-конце (праймеры, распознающие чужеродную ДНК); или олигонуклеотиды длиной 17-40 пн, содержащие нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, предпочтительно 20 последовательных нуклеотидов, выбранных из ДНК последовательностей вставки (SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112). Праймеры могут быть, конечно же, длиннее, чем упомянутые 17 последовательных нуклеотидов, и могут быть длиной, например, 20, 21, 30, 35, 50, 75, 100, 150, 200 пн и даже длиннее. Праймеры могут целиком состоять из последовательности нуклеотидов, выбранной из упомянутых нуклеотидных последовательностей прилегающих областей и чужеродной ДНК. Однако нуклеотидная последовательность праймеров на их 5'-конце (то есть за пределами расположенных на 3'-конце 17 последовательных нуклеотидов) является менее критичной. Так, 5'-последовательность праймеров может состоять из нуклеотидной последовательности, выбранной из прилегающей последовательности или чужеродной ДНК, соответствующим образом, но может содержать несколько (например, 1, 2, 5, 10 несоответствий). 5'-5 018012 концевая последовательность праймера может даже полностью состоять из нуклеотидной последовательности, не имеющей отношения к прилегающим последовательностям или чужеродной ДНК, такой как, например, нуклеотидная последовательность, представляющая собой сайт распознавания для фермента рестрикции. Такие посторонние последовательности или прилегающие ДНК последовательности с несоответствиями должны быть, предпочтительно, не более 50 или даже 25 нуклеотидов. Более того, подходящие праймеры могут содержать или состоять из нуклеотидной последовательности на их 3'-конце, перекрывающей область соединения последовательностей растительной ДНК и чужеродной ДНК (расположенной в нуклеотидах 14-141 в SEQ ID No. 1 и нуклеотидах 112-113 в SEQ IDNo. 2), предоставляя упомянутые 3'-расположенные 17 последовательных нуклеотидов, не полученные исключительно не из чужеродной ДНК, не из растительных последовательностей в SEQ ID No. 1 или 2. Специалисту в данной области техники будет также немедленно очевидно, что правильно выбранные ПЦР праймеры также не должны содержать последовательностей, комплементарных друг другу. В контексте изобретения, "комплементарная нуклеотидной последовательности, предаставленной вSEQ ID No: X" является нуклеотидная последовательность, которая может быть получена из представленной нуклеотидной последовательности посредством замены нуклеотидов на их комплементарные нуклеотиды в сответствии с правилами Чаргаффа (Chargaff's rules) (A=T; G=C) и чтением последовательности в 5'-3' напрвлении, то есть в обратном направлении с представленной нуклеотидной последовательностью. Примерами подходящих праймеров являются олигонуклеотидные последовательности SEQ ID No. 7 (праймеры, распознающие 5'-прилегающую область), SEQ ID No. 5 (праймеры, распознающие чужеродную ДНК, для использования с праймерами, распознающими 5'-прилегающую область), SEQ ID No. 4(праймеры, распознающие чужеродную ДНК, для использования с праймерами, распознающими 3'прилегающую область), SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 6 (праймеры, распознающие 3'-прилегающую область). Другие примеры подходящих олигонуклеотидных праймеров содержат на их 3'-конце следующие последовательности или состоят из таких последовательностей: а. праймеры, распознающие 5'-прилегающую последовательность: нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 111 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 104 до нуклеотида 123; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 10 6 до нуклеотида 125; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 112 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 103 до нуклеотида 123; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 109 до нуклеотида 125; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 109 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 113 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 99 до нуклеотида 116; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 102 до нуклеотида 123; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 104 до нуклеотида 125; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 108 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 114 до нуклеотида 130; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 100 до нуклеотида 116; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 101 до нуклеотида 123; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 103 до нуклеотида 125; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 110 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 109 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 111 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 108 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 112 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 107 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 113 до нуклеотида 129; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 287 до нуклеотида 306; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 288 до нуклеотида 306; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 289 до нуклеотида 306; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 290 до нуклеотида 306; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 264 до нуклеотида 281; нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 265 до нуклеотида 281;b. праймеры, распознающие чужеродную ДНК, для использования с праймерами, распознающими 5'-прилегающую последовательность: комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 159; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 158; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 158; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 160; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 167 до нуклеотида 184; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 136 до нуклеотида 157; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 137 до нуклеотида 157; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 157; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 159; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 161; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 140 до нуклеотида 156; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 156; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 136 до нуклеотида 158; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 160; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 155; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 139 до нуклеотида 161;c. праймеры, распознающие 3'-прилегающую последовательность: комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 385; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 384; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 386; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 383; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 387; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 125 до нуклеотида 142; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 366 до нуклеотида 382; комплементарная нуклеотидная последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 94 до нуклеотида 115;Y" означает нуклеотидную последовательность, включающую оба нуклеотидных конца. Предпочтительно амплифицируемый фрагмент имеет длину между 50 и 500 нуклеотидами, такую как длина между 100 и 350 нуклеотидами. Специфические праймеры могут иметь последовательность,которая на 80-100% идентична последовательности внутри 5'- или 3'-прилегающей области элитного результата и чужеродной ДНК элитного результата, соответственно, наделенную несовпадениями, которые все еще позволяют специфическую идентификацию элитного результата с помощью этих праймеров при оптимизированных условиях ПЦР. Диапазон допустимых несоответствий, однако, может быть легко определен экспериментально и известен специалистам в данной области техники. Определение интеграционного фрагмента может происходить различными путями, например, посредством определения размера на гель-электрофорезе. Интеграционные фрагменты могут также быть прямо отсеквенированы. Другие последовательность-специфические методы определения амплифицированных фрагментов ДНК также известны в области техники. Поскольку последовательности праймеров и их относительное расположение в геноме являются уникальными для элитного результата, амплификация интеграционного фрагмента будет происходить только в биологических образцах, содержащих элитный результат (его нуклеиновую кислоту). Предпочтительно, когда проводят ПЦР для идентификации наличия EE-GH6 в неизвестных образцах, включают контроль с набором праймеров, с которыми фрагмент "гена домашнего хозяйства" растительных видов может быть амплифицирован. Гены домашнего хозяйства являются генами, которые экспрессируются в большинстве типов клеток и которые связаны с основными метаболическими активностями, свойственными всем клеткам. Предпочтительно, фрагмент, амплифицированный из гена домашнего хозяйства,является фрагментом, который длиннее, чем амплифицированный интеграционный фрагмент. В зависимости от анализируемых образцов могут быть включены другие контроли. Стандартные ПЦР протоколы описаны в области техники, например в "PCR Applications Manual"Roche Molecular Biochemicals, 2nd Edition, 1999) и других источниках. Оптимальные условия для ПЦР,включая последовательность специфических праймеров, точно определены в "Протоколе ПЦР идентификации" для каждого элитного результата. Тем не менне, понятно, что некоторые параметры протокола ПЦР идентификации могут нуждаться в регулировке в соответствии с конкретными условиями лаборатории и могут быть слегка модифицированы для достижения сходных результатов. Например, использование различных способов выделения ДНК может потребовать регулировки, например, количества праймеров, полимеразы и используемых условий отжига. Подобным образом, выбор других праймеров может потребовать других оптимальных условий для протокола ПЦР идентификации. Эти в условиях,однако, будут очевидны специалисту в области техники и, более того, детально описаны в руководствах по применению ПЦР, таких как цитированные выше. Как вариант, специфические праймеры могут быть использованы для амплификации интеграционного фрагмента, который может быть использован в качестве "специфического зонда" для идентификации EE-GH6 в биологических образцах. Контакт нуклеиновых кислот образца с зондом при условиях,позволяющих гибридизацию зонда и соответствующего фрагмента нуклеиновой кислоты, приводит к образованию гибридов нуклеиновая кислота/зонд. Образование таких гибридов может быть определено(например, посредством мечения нуклеиновой кислоты или зонда), в результате чего образование таких гибридов указывает на наличие EE-GH6. Такие методы идентификации, основанные на гибридизации со специфическим зондом (как на твердом носителе, так и в растворе) описаны в области техники. Специфический зонд является предпочтительно последовательностью, которая при оптимизированных условиях специфически гибридизуется с участком в 5'- или 3'-прилегающей области элитного результата и предпочтительно также содержит непрерывную с ним часть чужеродной ДНК (здесь и далее называемую"специфическая область"). Предпочтительно, специфический зонд содержит последовательность 50-500 пн, предпочтительно 100-350 пн, которая по крайней мере на 80%, предпочтительно на 80-85%, более предпочтительно на 85-90%, особенно предпочтительно на 90-95%, наиболее предпочтительно на 95100% идентична (или комплементарна) нуклеотидной последовательности специфической области. Предпочтительно, специфический зонд будет содержать последовательность около 15-100 последовательных нуклеотидов, идентичных (или комплементарных) специфической области элитного результата. Олигонуклеотиды, подходящие в качестве ПЦР праймеров для определения элитного результатаEE-GH6 могут также быть использованы для разработки ПЦР-основанного протокола для определения статуса зиготности элитного результата. С этой целью, два праймера, распознающие локус дикого типа,разработаны таким образом, что они направлены друг к другу и сайт вставки расположен между праймерами. Эти праймеры могут быть праймерами, специфически распознающими 5'- и 3'-прилегающие последовательности, содержащиеся в SEQ ID No. 1 (SEQ ID No. 11) или SEQ ID No. 2, соответственно. Эти праймеры могут быть также праймерами, специфически распознающими 5'- или 3'-прилегающие последовательности (такие как праймеры, имеющие последовательность SEQ ID No. 7 или SEQ ID No. 6). Этот набор праймеров, вместе с третьим праймером, комплементарным последовательности трансформирующей ДНК (таким как праймер, имеющий последовательность SEQ ID No. 5) позволяет одновременную диагностическую ПЦР амплификацию EE-GH6 специфического локуса, также как и локуса дикого типа. Если растение гомозиготно по трансгенному локусу или по локусу дикого типа, то диагностическая ПЦР приведет к одиночному типичному ПЦР продукту, предпочтительно типичной по длине, как для трансгенного, так и для Wt (дикого типа) локуса. Если растение является гомизиготным по трансгенному ло-8 018012 кусу, возникнут два локус-специфических ПЦР продукта, отражая амплификацию как трансгенного, так и локуса дикого типа. Более того, способы определения, специфические для элитного результата EE-GH6, которые отличны от ПЦР-основанных методов амплификации, также могут быть разработаны с использованием предоставленной здесь информации о последовательностях, специфических для элитного результата. Такие альтернативные способы определения включают методы детекции амплификации линейного сигнала,основанные на инвазивном расщеплении определенных структур нуклеиновых кислот, также известном как технология InvaderTM, (как описывается, например в патентах US 5985557 "Invasive Cleavage of Nucleic Acids", 6001567 "Detection of Nucleic Acid sequences by Invader Directed Cleavage, включенных здесь посредством ссылки). С этой целью, целевая последовательность может гибридизоваться с нуклеотидной последовательностью SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 148 или его комплементарной последовательностью, или упомянутого выше меченного зонда нуклеиновой кислоты, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 95 до нуклеотида 112 или комплементарную ей, и далее гибридизуется со вторым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 123 до нуклеотида 140 или комплементарную ей,или с упомянутым выше меченным зондом нуклеиновой кислоты, содержащим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 130 или комплементарную ей, где первый и второй олигонуклеотиды перекрываются по крайней мере на 1 нуклеотид. Дуплексная или триплексная структура, полученная в результате такой гибридизации, позволяет провести селективное расщепление зонда ферментом (Cleavase), оставляющим целевую последовательность интактной. Расщепленный меченый зонд впоследствии детектируется, потенциально посредством промежуточного шага, приводящего к дальнейшей амплификации сигнала."Набор", как используется здесь, относится к комплекту реагентов для использования в способах по изобретению, более детально, идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах или определения зиготности EE-GH6-содержащего растительного материала. Более детально, предпочтительный вариант осуществления набора по изобретению содержит по крайней мере один или два специфических праймера, как описано выше для идентификации элитного результата, или три специфических праймера для определения зиготности. При желании, набор может также содержать любой другой реагент, описанный здесь в протоколе ПЦР идентификации. Альтернативно, в соответствии с другим вариантом осуществления этого изобретения, набор может содержать специфический зонд, как описано выше, который специфически гибридизуется с нуклеиновой кислотой биологического образца для идентификации наличия в нем EE-GH6. Добавочно, набор может дополнительно содержать любой другой реагент (такой как, но не ограничивающийся этим, гибридизационный буффер, метка) для идентификации EE-GH6 в биологических образцах, с использованием специфического зонда. Набор по изобретению может быть использован, и его компоненты могут быть специфически изменены, в целях контроля качества (например, чистоты партий семян), определения наличия или отсутствия элитного результата в растительном материале или материале, содержащем или происходящем из растительного материала, таком как, но не ограничиваясь, пищевые или кормовые продукты. Как используется здесь, "идентичность последовательности" по отношению к нуклеотидной последовательности (ДНК или РНК), относится к числу позиций с идентичными нуклеотидами разделенному на число нуклеотидов в более короткой из двух последовательностей. Сравнение двух нуклеотидных последовательностей осуществляется по алгоритму Вилбура и Липмана (Wilbur and Lipmann, 1983, Proc.Nat. Acad. Sci. USA 80:726) с использованием размера окна 20 нуклеотидов, размера слова 4 нуклеотида,и размера пропуска 4. Выполняемый с помощью компьютера анализ и интерпретация данных последовательности, включая сравнение последовательностей как описано выше, может, например, быть удобно осуществлен с использованием пакета программ для анализа последовательностей Genetics ComputerGroup(GCG, University of Wisconsin Biotechnology center). Последовательности отмечены как "существенно одинаковые", когда такие последовательности имеют идентичность последовательностей по крайней мере примерно 75%, особенно примерно 80%, более особенно примерно 85%, наиболее особенно примерно 90%, в особенности 95%, главным образом примерно 100%. Понятно, когда РНК последовательности указаны как существенно одинаковые, или имеющие определенный уровень идентичности последовательности с последовательностями ДНК, тимидин (Т) в ДНК последовательности рассматривается эквивалентным урацилу (U) в последовательностях РНК. Термин "праймер", как использовано здесь, включает любую нуклеиновую кислоту, которая способна служить затравкой для синтеза образующейся нуклеиновой кислоты в матрица-зависимом процессе, таком как ПЦР. Типично, праймеры являются олигонуклеотидами от 10 до 30 нуклеотидов, но и более длинные последовательности могут быть использованы. Праймеры могут быть представлены в двухцепочечной форме, однако одноцепочечная форма является более предпочтительной. Зонды могут быть использованы в качестве праймеров, но они предназначены для связывания с целевой ДНК или РНК, и не должны использоваться в процессе амплификации. Термин "распознавание", как используется здесь, когда относится к специфическим праймерам,указывает на факт, что специфические праймеры специфически гибридизуются с последовательностью нуклеиновой кислоты в элитном результате при условиях, описанных в методе (такие как условия для протокола ПЦР идентификации), при этом специфичность определяется наличием позитивного и негативного контролей. Термин "гибридизирование", как используется здесь, когда относится к специфическим зондам,указывает на факт, что зонд связывается со специфической областью последовательности нуклеиновой кислоты элитного результата в условиях стандартной строгости. Условия стандартной строгости, как используется здесь, относится к условиям гибридизации, описанным здесь, или к традиционным условиям гибридизации, как описано Sambrook et al., 1989 (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press, NY), которые, например, содержат следующие шаги: 1) иммобилизация фрагментов растительной геномной ДНК на фильтр, 2) предгибридизация фильтра в течение 1-2 часов при 42 С в 50% формамид, 5 X SSPE, 2 X Реагента Денхарта и 0,1% SDS, или в течение 1-2 часов при 68 С в 6 X SSC, 2 X Реагента Денхарта и 0,1% SDS, 3) добавление меченого гибридизационного зонда, 4) инкубация в течение 16-24 часов, 5) отмывка фильтра в течение 20 мин при комнатной температуре в 1 X SSC, 0,1 %SDS, 6) отмывка фильтра 3 раза по 20 минут каждая при 68 С в 0,2 X SSC, 0,1%SDS, и 7) экспозиция фильтра в течение 24-48 ч с рентгеновской пленкой при -70 С с усиливающим экраном. Как использовано здесь, биологические образцыэто образцы растений, растительного материала или продуктов, содержащих растительный материал. Термин "растение" подразумевается охватывать ткани растений хлопчатника (Gossypium hirsitum) на любой стадии зрелости, как и любые клетки, ткани или органы, взятые или произошедшие из любого такого растения, включая без ограничения какие-либо семена, листья, стебли, цветы, корни, одиночные клетки, гаметы, клеточные культуры, культуры тканей или протопласты, "Растительный материал", как используется здесь, относится к материалу, который получен или произошел из растений. Продукты, содержащие растительный материал, имеют отношение к пище, кормам или другим продуктам, которые получены с использованием растительного материала или могут быть загрязнены растительным материалом. Понятно, что в контексте настоящего изобретения, такие биологические образцы тестируются на наличие нуклеиновой кислоты, специфической дляEE-GH6, подразумевая наличие нуклеиновой кислоты в образце. Так, методы, относящиеся здесь к идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах, указывают на идентификацию в биологических образцах нуклеиновых кислот, которые содержат элитный результат. Как использовано здесь, "содержащий" должно толковаться как определяющий наличие заявленных признаков, чисел, шагов, реагентов или компонентов, как указано, но не исключает наличия или добавления одного или более признаков, чисел, шагов, реагентов или компонентов, или их групп. Так, например, нуклеиновая кислота или белок, содержащие последовательность нуклеотидов или аминокислот,могут содержать больше нуклеотидов или аминокислот, чем фактически указано, то есть быть вставленной в большую нуклеиновую кислоты или белок. Химерный ген, содержащий последовательность ДНК,которая функционально или структурно определена, может содержать дополнительные последовательности ДНК, и так далее. Настоящее изобретение также относится к развитию элитного результата EE-GH6 в хлопке в растениях, содержащих этот результат, в потомство, полученное от этих растений и в растительные клетки,или растительный материал, полученный из этого результата. Растения, содержащие элитный результатEE-GH6, были получены как описано в примере 1. Растения хлопчатника или растительный материал, содержащий EE-GH6, могут быть идентифицированы в соответствии с протоколом ПЦР идентификации, описанном для EE-GH6 в Примере 2. Коротко, геномная ДНК хлопка, представленная в биологическом образце, амплифицируется ПЦР с использованием праймера, который специфически распознает последовательность внутри 5'- или 3'-прилегающей области EE-GH6, такого как праймер с последовательностью SEQ ID No. 3, и праймера, который распознает последовательность в чужеродной ДНК, такого как праймер с последовательностью SEQ ID No. 4. ДНК праймеры, которые амплифицируют часть эндогенной последовательности хлопка, используются как положительный контроль ПЦР амплификации. Если при ПЦР амплификации материал дает фрагмент ожидаемого размера, то материал содержит растительный материал из хлопчатника, несущего элитный результат EE-GH6. Растения, несущие элитный результат EE-GH6, характеризуются их устойчивостью к насекомым,также как и толерантностью к глюфозинату. Растения, несущие элитный результат EE-GH6, также характеризуются наличием агрономических свойств, которые сравнимы с коммерчески доступными сортами хлопка в США, в отсутствие давления насекомых. Наблюдалось, что наличие чужеродной ДНК в области вставки в геноме растения хлопчатника, описанное здесь, привносит особенно интересные фенотипические и молекулярные характеристики в растения, содержащие этот результат. Нижеследующие примеры описывают идентификацию элитного результата и разработку способов для специфической идентификации элитного результата EE-GH6 в биологических образцах. Если не указано обратное в Примерах, все рекомбинантные техники проводились в соответствии со стандартными протоколами, описанными в "Sambrook J and Russell DW (eds.) (2001) Molecular Cloning: AMolecular Biology LabFax, 2nd Edition, Academic Press, San Diego". Стандартные материалы и методы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) могут быть найдены в "McPherson MJ and Moller SG (2000) PCR(The Basics), BIOS Scientific Publishers Ltd., Oxford" и в "PCR Applications Manual, 3rd Edition (2006),Roche Diagnostics GmbH, Mannheim или www.roche-applied-science.com " В описании и примерах сделаны ссылки на следующие последовательности:SEQ ID No. 8: праймер 1 для амплификации контрольного фрагмента;SEQ ID No. 9: праймер 2 для амплификации контрольного фрагмента;SEQ ID No. 10: Нуклеотидная последовательность растительной геномной целевой последовательности перед вставкой EE-GH6;(длинная) Примеры 1. Идентификация элитного результата EE-GH6. Устойчивый к насекомым хлопок был разработан путем трансформации хлопка вектором, содержащим кодирующую последовательность модифицированного cry2Ae гена, функционально связанную с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus. Элитный результат EE-GH6 был отобран на основании обширной процедуры отбора, основанной на хорошей экспрессии и стабильности гена устойчивости к насекомым, и была оценена его совместимость с оптимальными агрономическими характеристиками, такими как высота растения, высота до вершины,крепление семенной коробочки, устойчивость, мощность, длина волокна, прочность волокна и выход волокна хлопчатника. Отобранный результат был введен в различные коммерческие генетические среды, и были сравнены результаты полевых испытаний в различных местоположениях. Растения были подвергнуты действию насекомых-вредителей в различных вариантах. Растения показали хороший контроль насекомых. Более того, результат имел нормальную морфологию листьев, цветов и семенных коробочек, отличную фертильность, и не показал заболеваний или ненормальной восприимчивости к насекомым во множестве генетических сред. В течение интрогрессии во множественные генетические среды не наблюдалось абберантных проблем или аномалий. 2. Идентификация прилегающих областей элитного результата EE-GH6. Последовательность областей, прилегающих к чужеродной ДНК в элитном результате EE-GH6, была определена с использованием, когда возможно, методики TAIL-ПЦР (чередующейся ассиметричнотемпературной (TAIL-) PCR), описанного Liu et al. (1995, Plant J. 8(3):457-463). В этой методике используются три вложенных праймера в последовательных реакциях вместе с более коротким случайно вырожденным праймером таким образом, что относительная эффективность амплификации специфических и неспецифических продуктов может контролироваться при помощи температуры. Специфические праймеры были отобраны так, чтобы отжиг происходил на границе чужеродной ДНК и на основании условий отжига. Небольшое количество (5 мкл) неочищенных, вторичных и четвертичных, ПЦР продуктов были проанализированы в 1% агарозном геле. Четвертичные ПЦР продукты были очищены, и была установлена их нуклеотидная последовательность. 2.1. Правая (5') прилегающая область. Нуклеотидная последовательность фрагмента, определенного как содержащего 5'-прилегающую область, была определена (SEQ ID No. 1). Последовательность между нуклеотидами 1-140 соответствует растительной ДНК, когда как последовательность между нуклеотидами 141-192 соответствует чужеродной ДНК. Была также определена нуклеотидная последовательность более длинного фрагмента, содержащего 5'-прилегающую область (SEQ ID No. 11). Последовательность между нуклеотидами 1-463 соответствует растительной ДНК, когда как последовательность между нуклеотидами 464-555 соответствует чужеродной ДНК. 2.2. Левая (3') прилегающая область. Нуклеотидная последовательность фрагмента, определенного как содержащего 3'-прилегающую область, полученного на TAIL-ПЦР, была определена (SEQ ID No. 2). Последовательность между нук- 11018012 леотидами 1-112 соответствует чужеродной ДНК, когда как последовательность между нуклеотидами 113-438 соответствует растительной ДНК. 2.3. Идентификация растительной ДНК перед вставкой. Растительная ДНК перед вставкой была амплифицирована ПЦР амплификацией с использованием праймеров NEL115 (SEQ ID No. 6) и NEL117 (SEQ ID No. 7). Была определена нуклеотидная последовательность амплифицированного фрагмента (SEQ ID No. 10). Область между нуклеотидными позициями 141-148 была определена, как подвергшаяся перестановке (делеция целевого сайта), при сравнении с полученной из растений нуклеотидной последовательностью в 5'- и 3'-прилегающих областях элитного результата EE-GH6. 3. Разработка протокола идентификации EE-GH6 с применением полимеразной цепной реакции. 3.1. Праймеры. Специфические праймеры, распознающие последовательность внутри элитного результата, были разработаны. Был разработан праймер, который распознает последовательность внутри 3'-прилегающей областиEE-GH6. Второй праймер был далее выбран внутри последовательности чужеродной ДНК так, чтобы праймеры перекрывали последовательность примерно 189 пн. Следующие праймеры были определены как дающие особенно чистые и воспроизводимые результаты в реации ПЦР для EE-GH6 ДНК:GHI059: 5'-ggT.TTC.gCT.CAT.gTg.TTg.AgC-3' (SEQ ID No.: 4) (цель: ДНК вставки). Праймеры, выявляющие эндогенную последовательность, преимущественно добавляются в ПЦРсмесь. Эти праймеры служат внутренним контролем в неизвестных образцах и в ДНК-положительном контроле. Положительный результат с парой эндогенных праймеров (наличие ПЦР амплифицированного фрагмента 445 пн) указывает на наличие в препарате геномной ДНК достаточного количества ДНК подходящего качества для синтеза ПЦР продукта. Были выбраны эндогенные праймеры для распознавания гена "домашнего хозяйства" в хлопке:GHI002: 51-CAA.CTC.CTC.CAg. TCA.TCT.CCg-31 (SEQ ID No.: 9). 3.2. Амплифицированные фрагменты. Ожидаемые амплифицированные фрагменты в ПЦР реации: для пары праймеров GHI001-GHI002: 445 пн (эндогенный контроль). для пары праймеров GHI058-GHI059: 189 пн (EE-GH6 элитный результат). 3.3. ДНК-матрица. ДНК-матрица была выделена из листовой массы в соответствии с Edwards et al. (Nucleic Acid Research, 19, pi 349, 1991). Когда используемая ДНК выделяется другим способом, должна быть проведена тестовая ПЦР с использованием различного количества ДНК-матрицы. Обычно 50 нг геномной ДНКматрицы дает наилучшие результаты. 3.4. Назначенные положительные и отрицательные контроли. Для избежания ложных положительных или отрицательных результатов, было определено, что следующие позитивные и негативные контроли должны быть включены в ПЦР прогон. Мастер-микс контроль (ДНК-негативный контроль). Это ПЦР, в котором не добавляется ДНК в реакцию. Когда наблюдается ожидаемый результат, то есть отсутствие ПЦР продукта, это означает, что ПЦР смесь не была загрязнена целевой ДНК. ДНК-положительный контроль (образец геномной ДНК, содержащей последовательность трансгена). Успешная амплификация положительного контроля указывает на то, что ПЦР проходила при условиях, которые позволяют амплификацию целевой последовательности. Контроль с ДНК дикиго типа. Это ПЦР, в котором ДНК-матрица является геномной ДНК, выделенной из нетрансгенных растений. В качестве ожидаемого результата, отсутствие амплификации трансгенного ПЦР продукта, а только амплификация эндогенного ПЦР-продукта указывает на отсутствие детектируемой фоновой амплификации трансгена в образце геномной ДНК. 3.5. Условия ПЦР. Оптимальные результаты были получены при следующих условиях: ПЦР-смесь для 25 мкл реакций содержит: 2,5 мкл ДНК-матрицы 2,5 мкл 10 х Amplification Buffer (поставляемого вместе с Taq-полимеразой); 0,5 мкл 10 mM dNTP's; 0,4 мкл GHI001 (10 пмоль/мкл); 0,4 мкл GHI002 (10 пмоль/мкл); 0,7 мкл GHI058 (10 пмоль/мкл); 0,7 мкл GHI059 (10 пмоль/мкл); 0,1 мкл Taq ДНК-полимеразы (5 МЕ/мкл) вода до 25 мкл; профиль термоциклирования для достижения оптимальных результатов следующий: 4 мин при 95 С. Далее: 1 мин при 95C; 1 мин при 57C; 2 мин при 72C; в течение 5 циклов. Далее: 30 с при 92 С; 30 с при 57 С; 1 мин при 72 С; в течение 25 циклов. Далее: 10 мин при 72 С. 3.6. Анализ в агарозном геле. Для оптимальной визуализации результатов ПНР было определо, что 10-20 мкл ПЦР образца должны быть нанесены на 1,5% агарозный гель (трис-боратный буфер) с подходящим маркером молекулярного веса (например, 100 пн лестница PHARMACIA). 3.7. Подтверждение результатов. Было определено, что данные образцов трансгенной растительной ДНК внутри одного ПЦР прогона и одной и той же ПЦР-смеси не должны быть акцептируемыми, если не 1) ДНК-положительный контроль показал ожидаемый ПЦР-продукт (трансгенный и эндогенный фрагменты), 2) ДНК-негативный контроль является отрицательным по ПЦР амплификации (фрагментов нет) и 3) контроль ДНК дикого типа показывает ожидаемый результат (амплификация эндогенного фрагмента). Если следовать Протоколу ПЦР идентификации EE-GH6, как описано выше, то линии, содержащие видимое количество трансгенного и эндогенного ПЦР продуктов ожидаемого размера, указывают, что соответствующее растение, из которого была выделена матрица геномной ДНК, унаследовало элитный результат EE-GH6. Линии, не содержащие видимого количества трансгенного ПЦР продукта и содержащие видимое количество эндогенного продукта, указывают, что соответствующее растение, из которого была выделена матрица геномной ДНК, не содержит элитного результата. Линии, не содержащие видимого количества ни трансгенного ни эндогенного ПЦР продуктов, указывают, что качество и/или количество геномной ДНК не позволило пройти синтезу ПЦР продуктов. Эти растения не должны учитываться. Выделение геномной ДНК должно быть повторено, и проведена новая ПЦР с соответствующими контролями. 3.8. Применение определяющего ПЦР протокола для идентификации EE-GH6. Перед попыткой скрининга должна быть проведена тестовая ПЦР со всеми соответствующими контролями. Разработанный протокол может потребовать оптимизации для компонентов, которые могут быть различны для разных лабораторий (выделение ДНК матрицы, Taq ДНК-полимераза, качество праймеров, dNTP's, амплификатор, и так далее). Амплификация эндогенной последовательности играет ключевую роль в протоколе. Необходимо достигнуть таких условий ПЦР и амплификации, при которых амплифицируется эквимолярные количества эндогенной и трансгенной последовательностей на известной трансгенной геномной ДНК-матрице. Когда же целевой эндогенный фрагмент не амплифицируется, иликогда целевая последовательность не амплифицируется при той же самой интенсивности окрашивания этидиум-бромидом, как можно судить по электрофорезу в агарозном геле, может потребоваться оптимизация условий ПЦР. Материал листьев ряда растений хлопчатника, некоторые из которых содержат EE-GH6, был протестирован в соответствии с описанным выше протоколом. Образцы элитного результата EE-GH6 и хлопка дикого типа были использованы в качестве положительного и отрицательного контролей, соответственно. Фиг. 2 иллюстрирует результат, полученный в протоколе ПЦР идентификации EE-GH6 для ряда образцов хлопчатника. Было обнаружено, что образцы в линиях 2-5 содержат элитный результат, поскольку была детектирована полоска 189 пн, когда образцы в линиях 6 и 7 не содержат EE-GH6. Линии 6 и 7 содержат другой хлопковый элитный результат (включая растения, содержащие другой химерный ген устойчивости к насекомым); линия 8 представляет образец с отрицательным контролем (вода), и линии 1 и 9 представляют маркер молекулярного веса (100 пн лестница). 4. Применение специфического фрагмента интеграции в качестве зонда для определения материала,содержащего EE-GH6. Специфический фрагмент интеграции EE-GH6 получен ПЦР амплификацией с использованием специфических праймеров GHI058 (SEQ ID No. 3) и GHI059 (SEQ ID No. 4), или путем химического синтеза и помечен. Фрагмент интеграции использовался в качестве зонда для определения EE-GH6 в биологических образцах. Нуклеиновая кислота была экстрагирована из образцов в соответствии со стандартными процедурами. Эта нуклеиновая кислота затем контактировала со специфическим зондом в условиях гибридизации, оптимизированных для образования гибрида. Образование гибрида далее было детектировано для проверки наличия нуклеиновой кислоты EE-GH6 в образце. Необязательно, перед контактом со специфическим зондом нуклеиновая кислота в образце была амплифицирована с использованием специфических праймеров. Альтернативно, нуклеиновая кислота метилась перед контактом со специфическим зондом вместо интеграционного фрагмента. Необязательно, специфические зонды связывались с твердым носителем (таким как, но не ограничиваясь, фильтр, полоска или шарики), перед контактом с образцами. 5. Протокол для ПЦР-основанного определения зиготности ЕЕ-GH6 в растительном материале хлопка. 5.1. Праймеры. Два праймера, распознающие нуклеотидную последовательность локуса дикого типа перед вставкой элитного результата, были разработаны таким образом, что они направлены навстречу друг другу и сайт вставки располагается между ними. Этот комплект праймеров, вместе с третьим праймером, комплементарным последовательности чужеродной ДНК и направленным в сторону прилегающей ДНК,позволяет одновременную ПЦР амплификацию как локуса EE-GH6, так и локуса дикого типа. Следующие праймеры были найдены дающими особенно чистые и воспроизводимые результаты в ПЦР реакциях определения зиготности на ДНК EE-GH6:NEL115 5'-ACT.gAT.ggC.TCA.ACg.gTT.AC-3' (SEQ ID No.: 6) (цель: растительная ДНК выше 5'прилегающей области) DPA286 5'-gAT.CgC.CAT.ggA.gCC.ATT-3' (SEQ ID No.: 5) (цель: ДНК вставки);NEL117 5'-AAA.TCA.CAg.gCA.gAg.ggA.Ag-3' (SEQ ID No.: 7) (цель: растительная ДНК 3'прилегающей области). 5.2. Амплифицируемые фрагменты. Ожидаемые амплифицируемые фрагменты в ПЦР реакциях: для пары праймеров GHI065-GHI066: 451 пн (локус дикого типа); для пары праймеров GHI057-GHI065 : 197 пн (локус EE-GH6). 5.3. ДНК- матрица. ДНК-матрица была выделена из листовой массы в соответствии с Edwards et al. (Nucleic Acid Research, 19, pi 349, 1991). Когда используемая ДНК выделяется другим способом, должна быть проведена тестовая ПЦР с использованием различного количества ДНК-матрицы. Обычно 50 нг геномной ДНКматрицы дает наилучшие результаты. 5.4. Назначенные положительные и отрицательные контроли. Для избежания ложных положительных или отрицательных результатов было определено, что следующие позитивные и негативные контроли должны быть включены в ПЦР прогон. Мастер-микс контроль (ДНК-негативный контроль). Это ПЦР, в котором не добавляется ДНК в реакцию. Когда наблюдается ожидаемый результат, то есть отсутствие ПЦР продукта, это означает, что ПЦР смесь не была загрязнена целевой ДНК. ДНК-положительный контроль (образец геномной ДНК, содержащей последовательность трансгена). Успешная амплификация положительного контроля указывает на то, что ПЦР проходила при условиях, которые позволяют амплификацию целевой последовательности. Контроль с ДНК дикого типа. Это ПЦР, в котором ДНК-матрица является геномной ДНК, выделенной из нетрансгенных растений. В качестве ожидаемого результата, отсутствие амплификации трансгенного ПЦР-продукта, а только амплификация эндогенного ПЦР-продукта указывает на отсутствие детектируемой фоновой амплификации трансгена в образце геномной ДНК. 5.5. Условия ПЦР. Оптимальные результаты были получены при следующих условиях: ПЦР-смесь для 25 мкл реакций содержит: х мкл ДНК-матрицы (150 нг); 2,5 мкл 10 х Amplification Buffer (поставляемого вместе с Taq-полимеразой); 0,5 мкл 10 mM dNTP's; 0,5 мкл NEL115 (10 пмоль/мкл); 0,5 мкл NEL117 (10 пмоль/мкл); 0,2 мкл DPA286 (10 пмоль/мкл); 0,1 мкл Taq ДНК-полимеразы (5 МЕ/мкл); вода до 25 мкл. Профиль амплификации для достижения оптимальных результатов следующий: 4 мин при 95 С. Далее: 1 мин при 95 С; 1 мин при 57 С; 2 мин при 72 С; в течение 5 циклов. Далее: 30 с при 92 С; 30 с при 57 С; 1 мин при 72 С; в течение 25 циклов Далее: 10 мин при 72C. 5.6. Анализ в агарозном геле. Для оптимальной визуализации результатов ПЦР было определо, что 10-20 мкл ПЦР образца должны быть нанесены на 1,5% агарозный гель (трис-боратный буфер) с подходящим маркером молекулярного веса (например, 100 пн лестница PHARMACIA). 5.7. Подтверждение результатов. Данные образцов трансгенной растительной ДНК внутри одного ПЦР прогона и одной и той же ПЦР-смеси не должны быть акцептируемыми, если не: положительный контроль показал ожидаемый ПЦР-продукт (амплификация трансгенной цели),положительный контроль ДНК дикого типа показывает ожидаемый результат (амплификация эндогенной цели),негативный контроль является отрицательным по ПЦР амплификации (фрагментов нет). Линии, содержащие видимое количество трансгенного ПЦР продукта ожидаемого размера и не содержащие видимого количества ПЦР продукта дикого типа, указывают, что соответствующее растение,из которого была выделена матрица геномной ДНК, является гомозиготным по трансгенной кассете. Линии, содержащие видимое количество трансгенного ПЦР продукта и ПЦР продукта дикого типа ожидаемых размеров, указывают, что соответствующее растение, из которого была выделена матрица геномной ДНК, является гемозиготным по трансгенной кассете. Линии, не содержащие видимого количества трансгенного ПЦР продукта и содержащие видимое количество ПЦР продукта дикого типа, указывают, что соответствующее растение, из которого была выделена матрица геномной ДНК, не унаследовало соответствующей последовательности трансгена и, таким образом, гомозиготно по локусу дикого типа. Линии, не содержащие видимого количества ни трансгенного ни дикого типа ПЦР продуктов, указывают, что качество и/или количество геномной ДНК не позволило пройти синтезу ПЦР продуктов. Эти растения не могут учитываться. Выделение геномной ДНК должно быть повторено, и проведена новая ПЦР с соответствующими контролями. 5.8. Применение протокола определения зиготности для идентификации зиготности растений, содержащих EE-GH6. Фиг. 3 иллюстрирует результат, полученный в ПЦР для определения зиготности EE-GH6 для ряда образцов растений хлопчатника. Образцы в линиях 2-3 содержат ПЦР фрагмент (197 пн) , характерный для элитного результата EE-GH6, когда образцы в линиях 4-7 содержат фрагмент, характерный для наличия локуса дикого типа. Линии 4-6 содержат оба фрагмента.Линии 2-3, таким образом, содержат EEGH6 в гомозиготной форме, линии 4-6 содержат EE-GH6 в гомизиготной форме, и линия 7 содержит локус дикого типа в гомозиготной форме (азиготной по EE-GH6). Линия 8 представляет образец отрицательного контроля (вода), и линии 1 и 9 представляют маркер молекулярного веса (100 пн лестница). 6. Интрогрессия EE-GH6 в предпочтительные сорта. Элитный результат EE-GH6 введен посредством повторяющихся возвратных скрещиваний в коммерческие сорта хлопка, такие как, но не ограничиваясь, FM5013, FM5015, FM5017, FM989, FM832,FM966 и FM958, FM989, FM958, FM832, FM991, FM819, FM800, FM960, FM966, FM981, FM5035,FM5044, FM5045, FM5013, FM5015, FM5017 или FM5024. Наблюдалось, что интрогрессия элитного результата в эти сорта не влияет значительно на какуюлибо из желательных фенотипических или агрономических характеристик этих сортов (отсутствие прочного связывания), когда экспрессия трансгена, как определено по уровню толерантности к глюфозинату,соответствует коммерчески приемлемым уровням. Это подтверждает статус результата EE-GH6 как элитного результата. Элитный результат EE-GH6 может быть преимущественно комбинирован с другими элитными результатами, доступными на рынке, особенно другими элитными результатами генами устойчивости к насекомым для управления устойчивостью к насекомым, такими как, но не ограничивающимся, результат 3006-210-23 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 03-036-02 р) результат 281-24-236 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 03-036-0Ip); результат MONl 58985 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства CDIA 00-342-О 1 р); результат MON531 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 94-308-0Ip), результат СОТ 102 (=Syngentavip3A) Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 03-155-01 р, результат EE-GH5 описанный в патентной заявке ЕР 07075299.3. Элитный результат EE-GH6 может также быть комбинирован с элитным результатом устойчивости к гербициду,таким как результат MON1 445 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 95-045-0Ip) или результат MON88913 (Сообщение службы инспекции о здоровых растениях и животных при госдепартаменте сельского хозяйства США 04-086- 15018012 0Ip). Как использовано в формуле изобретения ниже, если четко не указано обратное, термин "растение" подразумевается охватывать растительные ткани, на любой стадии зрелости, также как и любые клетки,ткани или органы, взятые или произошедшие из таких растений, включая без ограничений, любые семена, листья, стебли, цветы, корни, одиночные клетки, гаметы, клеточные культуры или протопласты. Референсные семена, содержащие элитный результат EE-GH6, были помещены как EE-GH6 в АТСС (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209) 19 апреля 2007, под АТСС номером доступа РТА-8398. Альтернативное название EE-GH6 - GBH119. Как использовано в формуле изобретения ниже, если четко не указано обратное, термин "растение" подразумевается охватывать растительные ткани, на любой стадии зрелости, также как и любые клетки,ткани или органы, взятые или произошедшие из таких растений, включая без ограничений, любые семена, листья, стебли, цветы, корни, одиночные клетки, гаметы, клеточные культуры или протопласты. Рассмотренное выше описание изобретения предполагается быть иллюстративным и неограничивающим. Различные изменения или модификации в описанных вариатах осуществления могут возникнуть у специалиста в области техники. Данные изменения или модификации могут быть произведены без отклонения от смысла или объема изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ идентификации присутствия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus,где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательностьSEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям,представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает амплификацию фрагмента ДНК размером 100-500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных биологических образцах, с использованием полимеразной цепной реакции по крайней мере с двумя праймерами, один из которых распознает указанную 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, или указанную 3'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, другой праймер из указанных праймеров, распознает последовательность внутри чужеродной ДНК, имеет последовательность комплементарную SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112, и анализ присутствия характерной последовательности ДНК, которая содержит часть указанной чужеродной ДНК и часть указанных непосредственно фланкирующих ее 5'- и 3'-прилегающих областей. 2. Способ по п.1, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер, распознающий 3'прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 141 или SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112. 3. Способ по п.1, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или указанный праймер, распознающий 3'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер,распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438. 4. Способ по п.3, где указанные праймеры содержат последовательности SEQ ID No. 3 и SEQ ID No. 4, соответственно, или последовательности SEQ ID No. 5 и SEQ ID No. 7, соответственно. 5. Способ по п.4, где способ включает амплификацию фрагмента примерно 189 или 197 пн с использованием протокола ПЦР идентификации указанной чужеродной ДНК, фланкированной 5'- и 3'прилегающими областями. 6. Набор для идентификации присутствия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus,где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательностьSEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированых в АТСС под номером РТА-8398, при этом набор включает один праймер, распознающий указанную 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, или один праймер, распознающий указанную 3'прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и один праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, где указанная чужеродная ДНК имеет нуклеотидную последовательность комплементарнуюSEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112. 7. Набор по п.6, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер, распознающий 3'прилегающую область, состоящую из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, состоит из нуклеотидной последовательности 17-200 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 141 или SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112. 8. Набор по п.6, где указанный праймер, распознающий 5'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или указанный праймер,распознающий 3'-прилегающую область, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, и указанный праймер, распознающий последовательность внутри чужеродной ДНК, содержит на его 3'-конце нуклеотидную последовательность по крайней мере из 17 последовательных нуклеотидов, выбранных из нуклеотидной последовательности комплементарной SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112. 9. Набор по п.6, включающий праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 4, и праймер,содержащий последовательность SEQ ID No. 3, или включающий праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 5, и праймер, содержащий последовательность SEQ ID No. 7. 10. Способ скрининга семян на наличие чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах,депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает определение последовательности ДНК, специфичной для указанной чужеродной ДНК, фланкированной по 5'- и 3'-прилегающим областям, со специфическими праймером, который специфически распознают указанную 5'- или 3'прилегающую область, в партиях образцов семян после амплификации фрагмента ДНК между 100 и 500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных образцах семян, используя полимеразную цепную реакцию с применением по меньшей мере двух праймеров, где один из указанных праймеров распознает 5'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида в позиции 1 до нуклеотида в позиции 140 или нуклеотидной последовательности SEQ ID No. 11 от нуклеотида в позиции 1 до нуклеотида в позиции 463, или 3'-прилегающую область, имеющую нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида в позиции 113 до нуклеотида в позиции 438, а другой праймер из указанных праймеров распознает последовательность внутри чужеродной ДНК, имеющую нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID No.1 от нуклеотида в позиции 141 до нуклеотида в позиции 192 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от позиции 1 до позиции 112. 11. Способ определения зиготности растений, растительного материала или семян, содержащих чужеродную ДНК, содержащую кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательностиSEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, при этом способ включает амплификацию фрагментов ДНК 100-500 пн из нуклеиновой кислоты, представленной в указанных биологических образцах с использованием полимеразной цепной реакции по крайней мере с тремя праймерами, два из указанных праймеров специфически распознают растительную ДНК перед вставкой, такой как 5'-прилегающую область указанного элитного результата,где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от позиции 1 до позиции 463, или 3'-прилегающую область указанного элитного результата, где указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438,или ДНК перед вставкой, имеющую нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 10 или комплементарную ей, третий из указанных праймеров распознает последовательность внутри чужеродной ДНК,имеющую нуклеотидную последовательность комплементарную SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 192 или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 1 до нуклеотида 112, и анализ присутствия характерной последовательности ДНК, которая содержит часть указанной чужеродной ДНК и часть указанных непосредственно фланкирующих ее 5'- и 3'-прилегающих областей. 12. Способ определения наличия в биологических образцах чужеродной ДНК, содержащей кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицы Rubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ IDNo. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, посредством гибридизации с комплементарно меченым зондом нуклеиновой кислоты, в котором соотношение зонд:целевая нуклеиновая кислота амплифицировано посредством рециклинга целевой последовательности нуклеиновой кислоты, где указанный способ включает:a) гибридизацию указанной целевой последовательности нуклеиновой кислоты с первым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 141 до нуклеотида 158 или комплементарную ей, или с указанным первым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 95 до нуклеотида 112 или комплементарную ей;b) гибридизацию указанной целевой последовательности нуклеиновой кислоты со вторым олигонуклеотидом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 123 до нуклеотида 140 или комплементарную ей, или указанным меченым зондом нуклеиновой кислоты, включающим нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 130 или комплементарную ей, где указанные первый и второй олигонуклеотиды перекрываются по крайней мере на один нуклеотид, и где или первый, или второй указанный олигонуклеотид является меченым и является указанным меченым зондом;c) расщепление только меченого зонда внутри дуплекса зондщелевая последовательность нуклеи- 18018012 новой кислоты с помощью фермента, который вызывает селективное расщепление зонда, приводящее к диссоциации дуплекса, оставляющей целевую последовательность интактной;d) рециклинг целевой последовательности нуклеиновой кислоты повторением стадий (а)-(с) и е) детекция расщепленного меченого зонда и, таким образом, определение наличия названной целевой последовательности нуклеиновой кислоты. 13. Трансгенное растение хлопчатника, или клетки, части, его семя или потомство, где каждый из них содержит в своем геноме чужеродную ДНК, содержащую кодирующую последовательность гена модифицированного cry2Ae, функционально связанного с транзитным пептидом малой субъединицыRubisco, под контролем промотора 35S Cauliflower Mosaic Virus, где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 5'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, где указанная 5'прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 1 от нуклеотида 1 до нуклеотида 140, или нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 11 от нуклеотида 1 до нуклеотида 463, и где указанная чужеродная ДНК непосредственно фланкирована по 3'-прилегающей к указанной чужеродной ДНК области, указанная 3'-прилегающая область имеет нуклеотидную последовательность комплементарную последовательности SEQ ID No. 2 от нуклеотида 113 до нуклеотида 438, где указанная чужеродная ДНК, фланкированная по 5'- и 3'-прилегающим областям представлена в эталонных семенах, депонированных в АТСС под номером РТА-8398, геномная ДНК которых при анализе с применением протокола для идентификации указанной чужеродной ДНК, фланкированной по указанным 5'- и 3'прилегающим областям, с двумя праймерами, включающими нуклеотидные последовательности SEQ IDNo. 3 и SEQ ID No. 4 соответственно, дает фрагмент ДНК примерно 189 пн. Список последовательнотей
МПК / Метки
МПК: C12Q 1/68, C12N 15/82
Метки: идентификации, методы, хлопчатника, насекомым, устойчивые, растения
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/25-18012-ustojjchivye-k-nasekomym-rasteniya-hlopchatnika-i-metody-ih-identifikacii.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Устойчивые к насекомым растения хлопчатника и методы их идентификации</a>
Растения, устойчивые к микотоксину трихоцену, и способы их получения
Номер патента: 6737
Опубликовано: 28.04.2006
Авторы: Рид Джанет Н., Питерс Черил, Досон Джон Л., Сэлмерон Джон Маньюэл, Хон Томас М.
МПК: C12N 15/29, A01H 5/00, C12N 15/54...
Метки: получения, устойчивые, растения, микотоксину, трихоцену, способы
Формула / Реферат:
1. Растительная клетка, включающая гетерологичный полинуклеотид, кодирующий трихотецен-3-О-ацетилтрансферазу, который экспрессируется в растительной клетке, и обусловливает устойчивость растительной клетки к трихотецену, несущему С-3 гидроксильную группу, причем указанный гетерологичный полинуклеотид включает: а) нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 Fusarium sporotrichioides или последовательность по меньшей мере на 65% идентичную...
Линия клеток растения сахарной свеклы и растение сахарной свеклы, устойчивые к имидазолиноновым и сульфонилмочевинным гербицидам, семена указанного растения, способы получения указанной клеточной линии и гибридных растений свеклы, устойчивых к данным гербицидам, и применение имидазолинонового гербицида для борьбы с сорняками, растущими на полях с указанными растениями сахарной свеклы
Номер патента: 3297
Опубликовано: 24.04.2003
Авторы: Пеннер Доналд, Райт Терри Р.
Метки: борьбы, применение, данным, сахарной, растение, гибридных, указанными, клеток, линии, растений, устойчивых, гербицида, способы, линия, сульфонилмочевинным, сорняками, растениями, устойчивые, клеточной, получения, указанной, свеклы, полях, растущими, растения, гербицидам, имидазолиноновым, семена, указанного, имидазолинонового
Формула / Реферат:
1. Линия клеток растения сахарной свеклы с мутированным геном ацетолактатсинтазы, в котором в положении 562 цитозин замещен на тимин и в положении 337 гуанин замещен на аденин, устойчивая к имидазолиноновым и сульфонилмочевинным гербицидам, способная регенерировать в растение сахарной свеклы, причем указанная устойчивость передается при общепринятом кроссбридинге регенерированных растений с растениями, чувствительными к данным гербицидам. 2....
Линия клеток растения сахарной свеклы и растение сахарной свеклы, устойчивые к имидазолиноновому гербициду, семена указанного растения, способы получения указанной клеточной линии и гибридных растенийсвеклы, устойчивых к данному гербициду, и применение указанного гербицида для борьбы с сорняками, растущими на полях с указанными растениями сахарной свеклы
Номер патента: 3296
Опубликовано: 24.04.2003
Авторы: Райт Терри Р., Пеннер Доналд
Метки: растения, клеток, устойчивые, гербициду, полях, линии, гибридных, гербицида, указанной, указанными, сорняками, клеточной, имидазолиноновому, растение, получения, линия, сахарной, растущими, растенийсвеклы, семена, растениями, свеклы, указанного, способы, устойчивых, данному, применение, борьбы
Формула / Реферат:
1. Линия клеток растения сахарной свеклы с мутированным геном ацетолактатсинтазы, в котором в положении 337 гуанин замещен на аденин, устойчивая к имидазолиноновому гербициду, способная регенерировать в растение сахарной свеклы, причем указанная устойчивость передается при общепринятом кроссбридинге регенерированных растений с растениями, чувствительными к данному гербициду. 2. Линия клеток по п.1, которая получена из чувствительных клеток...
Очищенная ксантозин-n7-метилтрансфераза из растения кофе, кодирующие ее нуклеиновые кислоты, трансгенные клетки растения кофе, трансгенные растения кофе и кофейные зерна, не содержащие кофеина, и способы уменьшения синтеза кофеина в клетках растения кофе
Номер патента: 3835
Опубликовано: 30.10.2003
Авторы: Моисиади Истефо, Стайлис Джон И., Неупане Каби Радж
Метки: клетки, кислоты, кодирующие, очищенная, кофеина, нуклеиновые, содержащие, трансгенные, синтеза, кофейные, клетках, растения, уменьшения, ксантозин-n7-метилтрансфераза, способы, зерна, кофе
Формула / Реферат:
1. Очищенная ксантозин-N7-метилтрансфераза из растения кофе Coffea arabica с выведенной аминокислотной последовательностью содержащая триптические фрагменты, имеющие аминокислотные последовательности (i) Ile Asn Tyr Ala Ser Gly Ala Ser Gly Ile Leu Asp Gln - Gly, или (ii) Ile Asn Tyr Ala Ser Gly Ala Ser Gly Ile Leu Asp Gln Thr, или (iii) Gln Tyr Val Pro Cys Tyr Phe (Thr/Asp) Phe Ile Asp (Asp) (Gln) Asp. 2. Выделенная последовательность кДНК,...
Очищенные аминоциклопропан-1-карбоксилат-синтаза и аминоциклопропан-1-карбоксилат-оксидаза растения кофе, кодирующие их нуклеиновые кислоты, способы трансформации клеток растения кофе и трансформированные клетки растения кофе
Номер патента: 4060
Опубликовано: 25.12.2003
Авторы: Моисиади Истефо, Неупане Каби Радж, Стайлис Джон И.
МПК: A01H 5/00, C12N 15/52
Метки: очищенные, трансформированные, аминоциклопропан-1-карбоксилат-оксидаза, клетки, кофе, трансформации, растения, кодирующие, кислоты, нуклеиновые, аминоциклопропан-1-карбоксилат-синтаза, клеток, способы
Формула / Реферат:
1. Очищенная аминоциклопропан-1-карбоксилат(АЦК)-синтаза из растения кофе Coffea arabica с выведенной аминокислотной последовательностью SEQ. ID NO.10, приведенной на фиг. 1. 2. Выделенная последовательность кДНК, определяющая экспрессию АЦК-синтазы по п.1, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ. ID NO.11, приведенную на фиг. 2, а также варианты указанной кДНК, полученные на основе вырожденности генетического кода. 3. Очищенная...
Предыдущий патент: Катехоламиновые производные, полезные для лечения болезни паркинсона
Следующий патент: Способ, устройство и рамная конструкция для очистки поверхностей труб и трубная конструкция для распределения частиц
Случайный патент: Способы лечения и предупреждения неблагоприятного воздействия активных форм кислорода.