Комбинированная схема дозирования эритропоэтина

010889 Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к комбинированной схеме дозирования эритропоэтина, эффективной для повышения продукции и поддержания зрелых эритроцитов и таким образом, обычно, для увеличения концентрации гемоглобина. Благоприятно, что комбинированная схема дозирования может быть также циклической или повторяющейся, чтобы поддерживать увеличение концентрации гемоглобина или контролировать поддержание концентрации гемоглобина на желательных уровнях. Так, схема дозирования может быть приспособлена к тому, чтобы отвечать конкретным потребностям различных пациентов, в сравнении с обычными схемами дозирования EPO. По существу, изобретение также относится к способам лечения и к наборам для осуществления комбинированной схемы дозирования и данных способов. Предшествующий уровень техники Оксигенация тканей и органов тела является сложным процессом и зависит от эффективного проявления различных функций, например, поглощения кислорода, доставки кислорода к тканям через оксигенированную артериальную кровь, содержание кислорода в венозной крови и т.п. Неэффективное осуществление указанных функций, что может происходить по любой из разнообразных причин, таких как аномальная легочная функция, артериолярная обструкция или вазоконстрикция, или пониженная концентрация гемоглобина, может приводить к недостаточной тканевой оксигенации или тканевой гипоксии. Из-за вовлечения многочисленных и сложных функций, тканевая оксигенация, в лучшем случае,может быть определена непрямыми методами. До сих пор лечение тканевой гипоксии является наиболее важным при уходе за каким-либо пациентом, так как долговременная тканевая гипоксия, иногда называемая также аноксия, может приводить к необратимому поражению ткани. Разработаны различные способы лечения тканевой гипоксии, и хотя, вообще говоря, оптимальное лечение тканевой гипоксии должно основываться, по меньшей мере, частично на лежащей в основе причине, для многих пациентов с тканевой гипоксией будет до некоторой степени полезно повышение суммарного числа эритроцитов и обычно сопутствующее увеличение гемоглобина, связанного с ними. Однако стимуляция, воспроизведение и поддержание желательного суммарного числа эритроцитов также являются сложными процессами. То есть, каждый тип клеток, циркулирующих в кровеносной системе, происходит из пула очень примитивных гемопоэтических стволовых клеток и развивается по какому-либо из нескольких путей дифференцировки. Так, ограниченное число клеток вступает на какой-либо заданный путь в какое-либо время. При вступлении на этот путь вызревание и выживание указанных приступивших к изменениям (коммитированных) клеток-предшественников до превращения в конкретную клетку не гарантируется и даже более того, если зрелость достигается, зрелые клетки обычно имеют ограниченный жизненный ресурс. Даже если возможно вызвать превращение увеличенной относительной доли стволовых клеток в коммитированные клетки-предшественники, например, по эритроидному пути, который ведет к зрелым эритроцитам, только некоторое число этих коммитированных клетокпредшественников или ретикулоцитов будет достигать инфантильной стадии эритроцитов или становиться неоцитами. Подобным образом, только некоторое число таких образовавшихся неоцитов будет действительно выживать до превращения в зрелые эритроциты. Традиционные схемы дозирования EPO выявляют трудность стимуляции и поддержания повышенной численности эритроцитов. То есть, хотя такие схемы дозирования эффективны для повышения концентрации ретикулоцитов, циркулирующих в кровяном русле, они обычно не приводят к стойким повышениям или вообще не приводят к повышению суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Этот результат не является удивительным, когда рассматривается в свете современного понимания фармакологии EPO, того, что EPO связывается с рецепторами на коммитированных клеткахпредшественниках, предотвращая апоптоз и поддерживая развитие клеток-предшественников в ретикулоциты. Например, одна традиционная схема дозирования EPO, в частности разовая подкожная инъекцияEPO, действительно повышает концентрацию ретикулоцитов в циркулирующей крови, как можно было бы предположить на основе традиционного знания. Однако данные от субъектов, которым вводили EPO по этой схеме, показывают, что увеличение суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина является незначительным, кратковременным или и то, и другое. Вторая традиционная схема дозирования в виде еженедельных подкожных инъекций той же дозы EPO может повышать суммарное число эритроцитов и иметь результатом улучшенную концентрацию гемоглобина, однако, такая жесткая схема дозирования может быть условно оптимальной из-за того, что мешает получению согласия пациента изза боязни и/или чрезмерно высокой стоимости. Кроме того, такая схема дозирования не обеспечивает какой-либо гибкости для приспособления лечения согласно конкретной этиологии отдельных субъектов или желательному исходу лечения. Поэтому желательно, чтобы была предоставлена схема дозирования и/или способ лечения с использованием EPO, который вызывал бы увеличение воспроизведения ретикулоцитов и также повышал бы число ретикулоцитов, которые развиваются до неоцитов, и еще увеличивал бы число указанных неоцитов, выживающих до превращения в зрелые эритроциты. Такая схема дозирования могла бы обеспечить дополнительные преимущества, если была бы способна поддерживать любое такое увеличение в течение-1 010889 любого желательного или необходимого отрезка времени с менее жесткой, более гибкой схемой дозирования, чем еженедельное эквивалентное введение дозы. Сущность изобретения Данное изобретение относится к комбинированной схеме дозирования EPO, которая обеспечивает такую улучшенную эффективность, обеспечивая при этом большую гибкость в дозировании, чем традиционные схемы дозирования EPO. Более конкретно, данная схема дозирования может быть эффективна для повышения продукции и поддержания зрелых эритроцитов и, следовательно, для повышения концентрации гемоглобина. Преимуществом по отношению к традиционным схемам дозирования EPO является то, что комбинированная схема дозирования может быть циклической или повторяющейся для поддержания такого увеличения или фактически для обеспечения желательного исхода лечения, так что схема дозирования может быть приспособлена так, чтобы отвечать конкретным потребностям более широкого разнообразия пациентов. В первом аспекте данное изобретение относится, таким образом, к схеме дозирования EPO. Схема дозирования предусматривает применение по меньшей мере первого сегмента дозирования, создающего первое воздействие EPO, эффективное для, по меньшей мере, пограничного увеличения продукции ретикулоцитов, за которым следует второе воздействие EPO, по меньшей мере, погранично эффективное для поддержания ретикулоцитов, пока они развиваются в эритроциты. Желательно применение второго воздействия начинают в течение около 3 дней, но не более, чем 10 дней после первого воздействия. Каждый сегмент дозирования, таким образом, имеет эффект увеличения суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Дополнительно каждый сегмент дозирования может быть повторяющимся или циклическим столько раз, сколько желательно или необходимо для того, чтобы поддержать или привести в норму суммарное число эритроцитов или уровень гемоглобина. К тому же, первое и второе воздействие может содержать любую форму дозирования и любое количество дозы и могут быть одинаковыми или разными. В отличие от традиционных схем дозирования схема дозирования по данному изобретению может не только обеспечивать значительное начальное увеличение суммарных чисел эритроцитов и/или концентрации гемоглобина, но также может быть применена для поддержки их на любом желательном уровне. Преимущество данной схемы дозирования не только в достижении указанных эффектов, но и в том, что она также обеспечивает гибкость, которая была прежде недостаточной при применении EPO, и действительно может быть приспособлена так, чтобы отвечать конкретным потребностям каждого данного субъекта. Схема дозирования, таким образом, находит применение в лечении любого субъекта, для которого необходимо или желательно повышение и поддержание суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Во втором аспекте данное изобретение относится к способу улучшения продукции и поддержания зрелых эритроцитов и, как результат, обычно также увеличение концентрации гемоглобина. Более конкретно, способ предусматривает применение по меньшей мере первого сегмента дозирования, включающего первое воздействие EPO, эффективное для, по меньшей мере, пограничного увеличения продукции ретикулоцитов, за которым следует второе воздействие EPO, эффективное для демонстрации, по меньшей мере, некоторого увеличения способности ретикулоцитов развиваться в эритроциты. Применение второго воздействия EPO желательно начинают в течение около 3 дней, но не более, чем около 10 дней после первого воздействия, чтобы подвергнуть воздействию EPO все неоциты, образовавшиеся благодаря первому воздействию, в тот момент времени, когда ожидается созревание неоцитов в эритроциты. В некоторых вариантах воплощения может быть желательно обеспечить продолжительное воздействиеEPO на заново развившиеся неоциты, например, используя многократные малые суточные дозы, имплантат или пластырь с EPO, или EPO пролонгированного действия. Сегмент дозирования затем может быть преимущественно повторяемым через какой-либо желательный интервал, чтобы обеспечить какой-либо желательный результат, что может быть обусловлено конкретными потребностями субъекта, например с интервалами, рассчитанными по времени так, чтобы по существу поддерживать, увеличивать или уменьшать суммарное количество чисел эритроцитов. Такое регулирование количества эритроцитов и/или концентрации гемоглобина может быть благоприятным для различных субъектов, включая, но без ограничения указанным, тех, кто страдает от тканевой гипоксии, появляющейся по какой-либо причине, например из-за анемии или хронической анемии, субъектов, принимающих химиотерапию, и субъектов, получивших травматическое повреждение. Способы по данному изобретению могут быть использованы для их лечения. Компоненты для осуществления данной схемы дозирования и способа, т.е. формы дозированияEPO, легко доступны коммерчески. Однако для повышения удобства, гибкости, доступности и применимости схемы дозирования и способов, компоненты, необходимые для осуществления на практике схемы дозирования и способов по изобретению, могут быть предоставлены в сочетании друг с другом в форме набора, и такой набор входит в объем данного изобретения. Набор по изобретению, желательно, содержит по меньшей мере первый сегмент дозирования EPO,содержащий первую дозированную единицу EPO, способную обеспечить воздействие EPO, эффективное-2 010889 для, по меньшей мере, пограничного увеличения продукции ретикулоцитов. Вторая дозированная единица EPO, содержащая другое дозированное количество или другую форму EPO, чем первая, способна обеспечивать воздействие EPO, по меньшей мере, погранично эффективное для поддержания ретикулоцитов, пока они созревают в эритроциты. Набор может дополнительно включать инструкции, указывающие, что применение второго воздействия должно быть инициировано в течение около 3 дней, но не более, чем около 10 дней после первого воздействия. В некоторых вариантах осуществления инструкции могут дополнительно указывать, что схема дозирования может быть повторяющейся, например по меньшей мере около 2 недель или по меньшей мере около 4 недель, или даже по меньшей мере около 8 недель после применения предшествующего сегмента. Инструкции в некоторых вариантах воплощения набора также могут быть приспособлены для конкретных субъектов, например для субъектов, подвергающихся химиотерапии, инструкции могут указывать, что сегмент дозирования при желании может быть повторен в соответствии с химиотерапевтическим лечением. Краткое описание фигур Сопровождающие фигуры иллюстрируют различные аспекты изобретения. Краткое описание фигур следующее: фиг. 1 представляет графическое изображение традиционно понимаемой фармакологии EPO, т.е.,что применение разовой дозы EPO, вводимой подкожно здоровым субъектам, создает среднее процентное повышение уровней ретикулоцитов, которое может быть непосредственно соотнесено с размером введенной дозы EPO (% ретикулоцитов определен по площади под кривой концентрация-время); фиг. 2 представляет графическое изображение средних уровней сывороточного EPO у здоровых субъектов после традиционного дозирования EPO, например разовой подкожно вводимой дозы 40000ME (международных единиц) EPO, показывающее пик после дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 10 дней; фиг. 3 представляет графическое изображение средних процентных уровней ретикулоцитов у здоровых индивидуумов после введения той же традиционной дозы EPO, отраженного на фиг. 2, показывающее пик уровней ретикулоцитов около 7 дней после разового подкожного введения EPO с последующим возвращением в течение около 15 дней к уровням перед введением дозы; фиг. 4 представляет графическое изображение среднего числа эритроцитов у здоровых индивидуумов после введения той же традиционной дозы EPO, отраженного на фиг. 2, показывающее, что никакого заметного увеличения числа эритроцитов не наблюдается в результате или после традиционного дозирования EPO; фиг. 5 представляет графическое изображение средних уровней гемоглобина у здоровых индивидуумов после введения той же традиционной дозы EPO, отраженного на фиг. 2, показывающее, что это традиционное дозирование EPO не создает заметного или поддерживаемого увеличения уровней гемоглобина; фиг. 6 представляет графическое изображение сравнения уровней сывороточного EPO после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг в сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования создают пик EPO в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 5 дней; фиг. 7 представляет графическое изображение сравнения уровней ретикулоцитов после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, после которого следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования создают пик ретикулоцитов в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 30 дней; фиг. 8 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях эритроцитов после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO,после которого следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия,показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение числа эритроцитов по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 9 представляет графическое изображение сравнения изменения в уровнях гемоглобина после(i) традиционного дозирования EPO, введение разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, после которого следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, по-3 010889 казывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное и поддерживаемое увеличение гемоглобина по сравнению, как с традиционным дозированием,так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 10 представляет графическое изображение сравнения уровней сывороточного EPO после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введение разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, после которого следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования лекарственного средства создают пик EPO в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 5-7 дней; фиг. 11 представляет графическое изображение сравнения уровней ретикулоцитов после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования создают пик ретикулоцитов в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 30 дней; фиг. 12 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях эритроцитов после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение числа эритроцитов по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 13 представляет графическое изображение сравнения изменения в уровнях гемоглобина после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 400 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 400 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение гемоглобина по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 14 представляет графическое изображение сравнения уровней сывороточного EPO после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг в сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, со всеми схемами дозирования, создающими пик EPO в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 5-7 дней; фиг. 15 представляет графическое изображение сравнения уровней ретикулоцитов после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, со всеми схемами дозирования, создающими пик ретикулоцитов в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 30 дней; фиг. 16 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях эритроцитов после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение числа эритроцитов по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 17 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях гемоглобина после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной вводимой дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 25 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 25 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение гемоглобина по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с-4 010889 ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 18 представляет графическое изображение сравнения уровней сывороточного EPO после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования создают пик EPO в результате дозирования с последующим возвращением к эндогенным уровням в течение около 5-7 дней; фиг. 19 представляет графическое изображение сравнения уровней ретикулоцитов после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что все схемы дозирования создают пик ретикулоцитов в результате дозирования, а также - что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает пик уровней ретикулоцитов около 30 дней; фиг. 20 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях эритроцитов после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за которым следует второе воздействие 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение числа эритроцитов по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; фиг. 21 представляет графическое изображение сравнения изменений в уровнях гемоглобина после(i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения разовой подкожной дозы 800 МЕ/кг EPO, (ii) ежедневных инъекций EPO малыми дозами 50 МЕ/кг/сутки и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения сегмента дозирования, по данному изобретению, т.е. первого воздействия 800 МЕ/кг EPO, за вторым воздействием 50 МЕ/кг/сутки EPO в дни 4-16 после первого воздействия, показывающее, что дозирование согласно этому варианту воплощения сегмента дозирования создает значительное увеличение гемоглобина по сравнению, как с традиционным дозированием, так и с ежедневным введением EPO малыми дозами; и фиг. 22 представляет графическое изображение, показывающее изменение в уровнях гемоглобина после (i) традиционного дозирования EPO, т.е. введения подкожно вводимых доз 600 МЕ/кг EPO еженедельно в течение 4 недель, (ii) 1800 МЕ/кг EPO на 5 неделе и повторно на 8 неделе и (iii) дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения комбинированной схемы дозирования по изобретению,т.е., сегмента дозирования, включающего первое воздействие 600 МЕ/кг EPO на 5 неделе и второго воздействия 1200 МЕ/кг EPO на 6 неделе, повторения сегмента дозирования на неделях 8 (600 МЕ/кг EPO) и 9 (1200 МЕ/кг EPO), показывающее, что, в то время как гемоглобин начинает снижаться на 6 неделе у тех, кто получает традиционные дозы, гемоглобин удерживается на повышенном уровне у тех, кто получает дозы согласно данной комбинированной схеме дозирования. Подробное описание изобретения Варианты воплощения данного изобретения, описанные ниже, не предназначены быть исчерпывающими или ограничивать изобретение конкретными вариантами воплощения, раскрытыми в следующем подробном описании. Скорее, варианты воплощения описаны так, чтобы другие специалисты в этой области могли понять принципы и правила дозирования данного изобретения. Данное изобретение относится к комбинированной схеме дозирования EPO, которая может не только стимулировать продукцию ретикулоцитов, но также может неожиданно поддерживать неоциты, которые развиваются из них, так что значительная доля неоцитов превращается в эритроциты. Как таковая,данная схема дозирования может обеспечивать начальное увеличение суммарного числа эритроцитов и концентрацию гемоглобина более значительно, чем достигаемое посредством введения разовой традиционной дозы EPO. Более того, данная комбинированная схема дозирования может быть циклической или повторяющейся, чтобы по существу поддерживать это первоначальное увеличение. Удивительным является тот факт, что это происходит не путем более сурового графика дозирования, чем традиционное еженедельное дозирование, но фактически с более продолжительным отрезком времени между сегментами дозирования. В самом деле, вновь открытая фармакологическая функциональность EPO, раскрытая здесь, может получить преимущество в широком разнообразии путей, обеспечивая тем самым для работника здравоохранения потрясающие возможности гибкости для подбора схемы лечения согласно данной комбинации дозирования для удовлетворения любых потребностей или желаний конкретного субъекта. Более конкретно, в настоящее время неожиданно обнаружено, что EPO проявляет себя, по меньшей мере, как средство, способствующее поддержанию неоцитов, пока они развиваются в эритроциты. Хотя это и не подтверждено традиционным пониманием фармакологической активности EPO, тем не менее,-5 010889 имеются неоспоримые данные, подтверждающие эту заново открытую активность, и некоторые из них показаны на фигурах 6-22 данной заявки. Действительно, традиционное фармакологическое понимание не обеспечивает основы для указанной вновь открытой активности, так как в настоящее время не достигнуто согласие по поводу существования каких-либо рецепторов EPO на ретикулоцитах или неоцитах,делая это еще более удивительным и неожиданным. Преимущество указанной вновь открытой активности предоставляет много новых путей для терапевтического применения EPO, и каждое такое применение, основанное на эпизодическом или постоянном воздействии EPO на ретикулоциты и неоциты для улучшения их жизнеспособности и созревание в зрелые эритроциты, разумеется, входит в объем данного изобретения. Одним примером преимущества, которое может быть обеспечено посредством дозирования в соответствии с указанным новым открытием, т.е. в подтверждение поддержания и созревания ретикулоцитов и неоцитов, является то, что увеличение суммарных чисел эритроцитов и/или концентрации гемоглобина, может быть обеспечено, и тем самым могут поддерживаться или иначе регулироваться посредством значительно более гибких и менее жестких схем дозирования, чем традиционные схемы дозированияEPO. Традиционные схемы дозирования на основании традиционной фармакологии подтверждают, чтоEPO действует таким образом, что стимулирует передачу клеток-предшественников в эритроидный цикл. Вновь открытая активность EPO в сочетании со знанием того, что зрелые эритроциты обычно живут около 120 дней, дает возможность значительно менее жесткого дозирования EPO, обеспечивая в то же время подобные или даже более значительные увеличения суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Данное изобретение относится к комбинированной схеме дозирования EPO, которая посредством применения по меньшей мере одного сегмента дозирования, стимулирует становление клетокпредшественников на путь превращения их в ретикулоциты и неоциты, и затем способствует поддержанию и созреванию их, пока они превращаются в зрелые эритроциты. Термин "сегмент дозирования" относится к схеме дозирования, которая включает начальное воздействие EPO, при этом воздействие является эффективным для стимуляции измеримого увеличения продукции ретикулоцитов, каким бы незначительным это измеримое увеличение ни было, с последующим вторым воздействием, эффективным для поддержания ретикулоцитов и неоцитов и для помощи в развитии их в зрелые эритроциты. Так как ретикулоциты, только что введенные в кровоток, предположительно созревают в неоциты около 2 дней, а неоциты, вероятно, приступают к процессу созревания, начиная с 10-15 дня после введения ретикулоцитов в кровоток, второе воздействие желательно и наиболее предпочтительно инициируют, спустя от 3 до около 10 дней после прекращения первого воздействия. Кроме того, так как еще вероятно, что воздействие EPO, будь то нативный EPO или экзогенно введенный EPO, может быть необходимо для того, чтобы поддержать выживание неоцитов во время этого периода созревания, второе воздействие желательно и наиболее предпочтительно инициируют, спустя не более, чем около 10 дней после прекращения первого воздействия, и оно может быть предпочтительно дополнительно поддержано повторным применением или введением EPO пролонгированного действия, или другим продолжительным воздействием EPO, т.е. через пластырь или имплантат, по меньшей мере около 7 дней и вплоть до около 15 дней. Используемый здесь термин "воздействие" предназначается для обозначения разовой дозы, повторяющихся отдельных доз или дозирования, которое может быть обеспечено относительно непрерывно после разового введения, т.е. EPO пролонгированного действия, наложения, например содержащего EPO пластыря для чрескожного введения или имплантации имплантата EPO. То есть, конкретный способ введения дозы, и действительное ее количество не являются критическими для осуществления на практике данного сегмента или схемы дозирования. Все, что требуется, это чтобы первое воздействие было осуществлено в любом количестве и любым образом, которые эффективны для стимуляции продукции ретикулоцитов, с последующим применением второго воздействия в любом количестве и любым образом,которые эффективны для улучшения поддержания и созревания ретикулоцитов и неоцитов в зрелые эритроциты. Кроме того, любой способ введения может быть использован для каждого воздействия,включая те, которые известны в настоящее время, и те, которые будут разработаны в будущем. Более того, термин "воздействие" относится к введению дозы EPO пациенту в отличие от тех воздействий, которые пациент получает от собственных нативных уровней эндогенного EPO. Специалисты в этой области способны легко определить подходящие количества и способы воздействия для каждого случая. То есть, и только с целью предоставления дополнительного руководства и без необходимости связывания с этим, общие терапевтические руководства подтверждают, что субъекты желательно должны иметь концентрацию гемоглобина выше по меньшей мере 9 г/дл, и дозировки EPO,способные обеспечивать такой уровень гемоглобина, являются подходящими и могут быть быстро и легко определены специалистами в этой области. Специалисту понятно, что, как правило, повышенные уровни гемоглобина выше существующих клинических медицинских норм могут быть связаны в некоторых случаях с повышенным риском тромбоваскулярных случаев для пациента. Поэтому специалисты будут учитывать, что уровни гемоглобина необходимо отслеживать регулярно на протяжении всей программы лечения EPO. Так как количество EPO, которое должно быть применено в любом конкретном воздействии любо-6 010889 го заданного сегмента дозирования, ограничивается только интересами безопасности пациента и любое количество EPO может быть назначено на воздействие, сегмент дозирования или комбинированную схему дозирования, пока, по существу, не проявляются никакие токсичные эффекты из-за введения EPO. Однако вероятно, что хотя стимуляция ретикулоцитов при осуществлении первого воздействия сегмента дозирования является зависимой от дозы, насыщение дозой может быть достигнуто при дозах более чем около 2400 МЕ/кг. Таким образом, никакого вреда не может быть причинено, никакой дополнительной пользы не может наблюдаться, если первое воздействие осуществляют в избыточном количестве. С экономических позиций, первое воздействие EPO в сегменте дозирования может обеспечивать от около 150 до около 2400 МЕ/кг EPO или предпочтительно от около 600 до около 1200 МЕ/кг EPO. Как упоминалось выше, воздействие может быть обеспечено в любом известном или вновь разработанном формате. То есть, так как желательным исходом первого воздействия является стимуляция максимального количества ретикулоцитов и так как такая стимуляция, как представляется, является зависимой от дозы, первое воздействие EPO желательно может быть проведено в формате, который может обеспечить воздействие,по существу, мгновенно, например таком как любая подкожная, внутримышечная или интраперитонеальная инъекция. Подобным образом, хотя и предполагается, что чем больше второе воздействие EPO, осуществляемое в сегменте дозирования, тем больше длительность повышения уровней EPO в крови и тем больше влияние на выживание и степень созревания неоцитов в эритроциты, насыщение дозой ожидается при воздействиях, которые обеспечивают более чем около 2400 МЕ/кг EPO. Таким образом, количества EPO,подходящие для применения в качестве второго воздействия сегмента дозирования, могут составлять от около 600 до около 2400 МЕ/кг EPO или предпочтительно от около 900 МЕ/кг до около 1500 МЕ/кг EPO. Как упоминалось выше, в настоящее время неожиданно обнаружено, что указанное второе воздействие EPO, введение которого рассчитано таким образом, чтобы оно совпадало с созреванием ретикулоцитов и/или неоцитов в эритроциты, может способствовать их созреванию. К тому же найдены подтверждения, что продолжительность воздействия на этой стадии может быть также или даже более важна,чем общая величина дозы самой по себе, воздействию которой подвергают ретикулоциты/неоциты. По существу, второе воздействие преимущественно и желательно может быть обеспечено как дробные воздействия низкого уровня, например менее, чем около 100 МЕ/кг/сутки, или менее, чем около 50 МЕ/кг/сутки, или даже менее, чем около 25 МЕ/кг/сутки, которое может быть обеспечено, например,подкожными инъекциями, чрескожным пластырем, имплантантом, применением EPO пролонгированного действия и тому подобное. Многие препараты EPO пролонгированного действия известны и коммерчески доступны, и любые из них могут быть использованы. Каждый сегмент дозирования, применяемый в соответствии с данной комбинированной схемой дозирования, может обеспечить зависимое от дозы увеличение концентрации ретикулоцитов посредством первого воздействия, как можно предположить на основании традиционного фармакологического понимания EPO. Каждый сегмент дозирования неожиданно может также способствовать поддержанию и созреванию существенной процентной доли ретикулоцитов и неоцитов в зрелые эритроциты, результат,который не является ни ожидаемым, ни предсказуемым на основе традиционного знания, ни наблюдаемым в действительности после традиционной дозы, например разовой подкожной дозы EPO. Хотя и полезная сама по себе, эта увеличенная скорость созревания неоцитов может быть дополнительно использована для извлечения других дополнительных преимуществ. Таким образом, поскольку ускоренное созревание неоцитов может продуцировать увеличение количества зрелых эритроцитов, существует большая гибкость в дозировании EPO для поддержания зрелых эритроцитов. В противоположность существующим схемам, данная схема сфокусирована на применении больших еженедельных дозEPO для непрерывной стимуляции ретикулоцитов. Кроме того, если увеличение или уменьшение суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина желательно или необходимо, применение сегмента или сегментов дозирования может изменяться соответственно. По существу, комбинированная схема дозирования по данному изобретению может быть приспособлена к конкретным потребностям или пожеланиям субъекта. Благоприятно то, что сегмент дозирования может быть повторен через интервал времени, подходящий для реализации желательного исхода, или после по меньшей мере около 2 недель, или даже около 4 недель, и фактически повторение сегмента дозирования после около 8 недель может быть достаточным в некоторых случаях для поддержания увеличения суммарного числа эритроцитов и/или гемоглобина,обеспеченного непосредственно предшествующим сегментом дозирования. Подобным образом, сегмент дозирования может быть повторен столько раз, сколько желательно, чтобы обеспечить комбинированную схему дозирования, способную сократить любой желательный период лечения, и число повторений не ограничивается никоим образом. Используемый здесь термин "эритропоэтин" или "EPO" будет включать такие полипептиды и белки, которые имеют биологическую активность рекомбинантного эритропоэтина человека (r-HuEPO), то есть, они связываются с рецептором EPO и, в конечном счете, стимулируют увеличение воспроизведения гемоглобина. Используемый здесь термин EPO относится также к аналогам эритропоэтина, изоформам эритропо-7 010889 этина, миметикам эритропоэтина, фрагментам эритропоэтина, гибридным белкам эритропоэтина, слитым белкам, его олигомерам и мультимерам, его гомологам, его вариантам структуры гликозилирования,включая ПЭГилированный EPO, его мутеины и дополнительно, вне зависимости от способа его синтеза или производства, включая без ограничения указанными, рекомбинантный (полученный или из КДНК,или из геномной ДНК), синтетический, трансгенный и полученный методом активированного гена, и дополнительно молекулы EPO, содержащие незначительные модификации, перечисленные выше. Способы конструирования и синтеза, например, пептидных миметиков хорошо известны специалистам в этой области и описаны, например, в патентах США 4833092, 4859765, 4853871 и 4863857. Особенно предпочтительными молекулами EPO являются молекулы, которые способны стимулировать эритропоэз у млекопитающего. Конкретные примеры эритропоэтина включают Epoetin alfa(EPREX, ERYPO, PROCRIT), а также белок, стимулирующий эритропоэз (NESP, ARANESP,дарбепоэтин альфа) и гипергликозилированный аналог рекомбинантного эритропоэтина человека (Эпоэтин), такие как описанные в Европейской патентной заявке ЕР 640619, а также CERA, аналоги эритропоэтина человека (такие как слитые белки сывороточного альбумина человека, описанные в международной патентной заявке WO 99/66054), мутанты эритропоэтина, описанные в международной патентной заявке WO 99/38890, эритропоэтин омега, который может быть получен из рестрикционного фрагмента Ара I гена эритропоэтина человека, описанный в патенте США 5688679, измененный гликозилированный эритропоэтин человека, описанный в международной патентной заявке WO 99/11781 и EP 1064951, и аналоги эритропоэтина, конъюгированные с ПЭГ, описанные в WO 98/05363, WO 01/76640 или в патенте США 5643575. Конкретные примеры клеточных линий, модифицированных для экспрессии эндогенного эритропоэтина человека, описаны в международных патентных заявках WO 99/05268 иWO 94/12650. Предпочтительной формой EPO является очищенный рекомбинантный EPO человека (rHuEPO), в настоящее время приготовляемый и распространяемый под товарными знаками EPREX,ERYPO, PROCRIT или ARANESP. Формы EPO пролонгированного действия также рассматриваются и, действительно, могут быть предпочтительными в некоторых вариантах воплощения данного изобретения для применения в качестве второго воздействия в сегменте дозирования. Используемый здесь термин "EPO пролонгированного действия" включает составы замедленного высвобождения и составы EPO с увеличенным полупериодом циркуляции, обычно достигаемым путем модификаций, которые уменьшают иммуногенность или изменяют скорость клиренса. Также включенным является EPO, инкапсулированный в полимерных микросферах. Примеры "EPO пролонгированного действия" включают, но без ограничения указанным, конъюгаты эритропоэтина с полиэтиленгликолем (ПЭГ), раскрытые в публикации PCT WO 2002049673 (Burg etal.), ПЭГ-модифицированный EPO, раскрытый в публикации PCT WO 02/32957 (Nakamura et al.), конъюгаты гликопротеинов, имеющие эритропоэтическую активность и имеющие по меньшей мере одну окисленную углеводную группу, ковалентно связанную с неантигенным полимером, описанные в публикации PCT WO94/28024 (Chyi et al.), и другие молекулы ПЭГ-ЕРО, полученные с использованием SCMПЭГ, SPA-ПЭГ и SBA-ПЭГ. Предпочтительными группами полиэтиленгликоля являются группы метоксиполиэтиленгликоля(МПЭГ). Группы предпочтительно присоединяют с помощью сложноэфирных сукцинимидилпроизводных типов метоксиполиэтиленгликоля. В одном примере предпочтительное сукцинимидилсложноэфирное производное типа метоксиполиэтиленгликоля включает: сложные сукцинимидил-эфиры карбоксиметилированного полиэтиленгликоля (SCM-ПЭГ) следующей формулы где R означает C1-8 алкил, n представляет целое число, сукцинимидил-производные поли(этиленгликоль)пропионовой кислоты (SPA-ПЭГ) следующей формулы, где R означает C1-8 алкил,n представляет целое число и сукцинимидил-производные поли(этиленгликоль)бутановой кислоты (SBA-ПЭГ) следующей формулы, где R означает C1-8 алкил, n представляет целое число Способы получения SCM-ПЭГ, SPA-ПЭГ и SBA-ПЭГ хорошо известны в технике. Например, в патенте США 5672662, Harris et al. описаны активные сложные эфиры ПЭГ кислот и родственные полимеры, которые имеют единственную группу пропионовой или бутановой кислоты и никаких других сложноэфирных связей. Получение SCM-ПЭГ описано, например, в Veronese et al. (1989), Journal of Controlled Release,-8 010889 110:145-54. Применение термина "SPA-ПЭГ" включает мПЭГ-SPA (метокси-ПЭГ-сукцинимидил-пропионат) и применение термина "SBA-ПЭГ" включает мПЭГ-SBA (метокси-ПЭГ-сукцинимидил-бутаноат). Активированные полимеры, такие как SBA-ПЭГ и SPA-ПЭГ, являются коммерчески доступными, и могут быть получены, например, от Nektar, Inc., Huntsville, Алабама, США. Применение термина "SCM-ПЭГ" (R-(OCH2CH2)n-O-CH2-CO-OSu), R означает C1-8 алкил, n представляет целое число, включает метокси-ПЭГ-сукцинимидил-эфир карбоксиметилированного ПЭГ(мПЭГ-SCM). Согласно Greenwald et al., SCM-ПЭГ "реакция с белком могла бы давать стабильный амид,но, как сообщалось (Nektar, Huntsville, Al., каталог за январь 1996, стр. 46), гидролиз t1/2 1 мин при рН 8, что сводит к минимуму ее полезность для модификации белка в водном растворе" (BioconjugateChem., 7(6), 638-641, 1996). В настоящее время SCM-ПЭГ может быть синтезирован на заказ, например, Delmar Chemicals, Inc.,Квебек, Канада.SCM-ПЭГ, SPA-ПЭГ и SBA-ПЭГ взаимодействуют, главным образом, с первичными аминогруппами лизина и N-концевой аминогруппой. Реакции с EPO показаны ниже для SCM-ПЭГ 5K, SPA-ПЭГ 5K иCH3O-(OCH2CH2)N-O-CH2CH2CH2-CO-NH-EPO Комбинированная схема дозирования по данному изобретению может быть назначена любому пациенту, кому может быть желательно начальное увеличение суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Субъекты могут также извлечь пользу из комбинированной схемы дозирования,если для них желательно или необходимо поддержание или регулирование суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. То есть, комбинированная схема дозирования может быть назначена профилактически, чтобы обеспечить увеличение, поддержание или иное регулирование суммарного числа эритроцитов и/или гемоглобина у субъекта перед событием, предвосхищающим сильное изменение суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Субъекты, которые могут извлечь пользу из схемы дозирования, конкретно не ограничены, к их числу могут быть отнесены и люди, и животные, и это могут быть предпочтительно млекопитающие. Как обсуждалось выше, комбинированная схема дозирования, описанная здесь, удивительно и неожиданно может не только стимулировать продукцию ретикулоцитов, но может также поддерживать значительную часть указанных ретикулоцитов, пока они созревают в неоциты и, в конечном счете, в зрелые эритроциты. Дополнительно этот эффект может быть поддержан циклическим осуществлением сегмента дозирования в больших временных приращениях, чем могло бы предложить традиционное дозирование EPO. Схему дозирования, поэтому соответственно назначают какому-либо субъекту при необходимости такого лечения или какому-либо субъекту, у которого ожидается снижение суммарного числа эритроцитов. Предложены также способы лечения субъекта, для которого является необходимым или желательным повышенное суммарное число эритроцитов и/или повышенная концентрация гемоглобина,а также предотвращения у субъекта возможности нежелательного снижения суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина. Существует множество ситуаций или случаев, которые могут приводить к снижению у субъекта суммарного числа эритроцитов и/или гемоглобина ниже оптимального уровня, и многие такие случаи могут быть соответствующе излечены или по существу предотвращены данным способом. Вообще говоря, любое состояние или случай, результатом которого может быть эпизодическая или хроническая тканевая гипоксия подходяще излечиваются данным способом, и примеры таких случаев включают физическое напряжение, путешествие на большую высоту над уровнем моря, потерю крови, неправильное питание, болезнь или применение некоторых других терапевтических агентов, таких как химиотерапевтические агенты и т.п. Так как способ по данному изобретению является таким эффективным при увеличении и поддержании суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина, предполагается,что он проявит себя наиболее полезным применительно к субъектам, страдающим от острой и/или хронической гипоксии, таким как субъекты, которые страдают от травматического повреждения с потерей больших количеств крови, пациенты, которые подвергаются химиотерапии и тому подобное. Хотя EPO и способы его дозирования коммерчески легко доступны, удобство применения данного сегмента дозирования или осуществления на практике данных способов может быть дополнительно усовершенствовано посредством предоставления компонентов, необходимых для этого, в форме набора, и такой набор также рассматривается как входящий в объем данного изобретения. Желательно, набор для применения сегмента дозирования или осуществления на практике данного способа должен включать по-9 010889 меньшей мере первый сегмент дозирования EPO, содержащий первую единицу дозирования EPO, способную обеспечивать воздействие EPO, эффективное для, по меньшей мере, пограничного увеличения продукции ретикулоцитов. Как упоминалось выше, первое воздействие может включать любую дозу в любом желательном формате дозирования, но может обеспечивать оптимальные результаты, если ее предоставляют в форме для введения в виде быстродействующего болюса, такой как, например, шприц,предназначенный для подкожного введения. Может быть также соответствующе предоставлена вторая единица дозирования EPO, содержащая другое количество дозировки и/или другую форму EPO, чем первая, и способная обеспечивать воздействие EPO, по меньшей мере, погранично эффективное для поддержания ретикулоцитов, пока они созревают в эритроциты. Подобно первому воздействию, второе воздействие может содержать любую дозу в любом желательном формате дозирования. Однако и как уже обсуждалось выше, оптимальные результаты могут быть обеспечены, если второе воздействие обеспечивает формат, который обеспечивает относительно продолжительное воздействие EPO, такой как многочисленные шприцы, предназначенные для ежедневных подкожных доз низкого уровня, многочисленные лекарственные формы для перорального введения для ежедневного применения, EPO пролонгированного действия в любом формате дозирования, пластырь для чрескожного введения и т.п. Инструкции могли бы быть включены в любой формат, которые желательно указывали бы, что результаты применения двух сегментов дозирования могут быть оптимизированы, если второе воздействие инициируют в течение около 3 дней, но не более, чем около 10 дней после первого воздействия. Любое число сегментов дозирования может быть предоставлено в связи с набором, причем каждый сегмент дозирования может содержать одинаковые или разные дозировки или форматы дозирования для каждого воздействия, так что индивидуальный набор может быть удобно заготовлен для ежедневного,еженедельного или ежемесячного лечения или профилактики, как желательно или необходимо. Однако чтобы полностью извлечь выгоду из гибкости, обеспечиваемой данной комбинированной схемой дозирования, при желании могут быть предоставлены наборы, содержащие компоненты, необходимые для осуществления одного сегмента дозирования, так что многочисленные наборы, содержащие любой сегмент дозирования, могут быть объединены, чтобы предоставить компоненты для осуществления любой желательной или необходимой комбинированной схемы дозирования, которая может быть установлена перед лечением с начальным сегментом дозирования или после применения и анализа ее последствий. Наборы могут быть еще дополнительно оптимизированы для субъектов, имеющих ряд различных этиологии. Например, набор может быть снабжен указанием, что он особенно полезен для лечения пациентов, принимающих химиотерапию, в этом случае инструкции могут указывать, что предоставленный в наборе сегмент дозирования желательно повторять, и повторение желательно инициировать перед каждым сеансом химиотерапии. Следующие примеры предоставлены для пояснения данного изобретения и не предназначены для его ограничения. Данное изобретение будет более понятным при обращении к схемам и примерам, которые приведены далее, но специалисты в этой области легко поймут, что они только иллюстрируют изобретение, которое описано более полно в прилагаемой формуле изобретения. Сравнительный пример 1. Разовую подкожную дозу 40000 ME EPO (EPREX, Optho Biotech, Торонто, Онтарио) вводили здоровым субъектам (n=8). Пробы сыворотки отбирали в течение 29 дней и проверяли на уровни содержания EPO, а также на концентрацию ретикулоцитов, гемоглобина и эритроцитов. Как показано на фиг. 2,уровни сывороточного EPO резко повышаются при дозировании и затем возвращаются к эндогенным уровням в течение около 10 дней. Дополнительно, как показано на фиг. 3, уровни ретикулоцитов резко повышались приблизительно 10 дней после введения и возвращались к базовой линии на 15 день. И, наконец, как показано на фигурах 4 и 5, соответственно, не было никакого продолжительного повышения суммарного числа эритроцитов и концентрации гемоглобина после разового подкожного введения обычной терапевтической дозы EPO. Пример 1. Три группы собак (n=3 в каждой группе) использовали для этого исследования. Одна группа получала традиционное дозирование EPO, т.е. разовую подкожную дозу 400 МЕ/кг в первый день дозирования, вторая группа получала ежедневно подкожные дозы EPO низкого уровня (25 МЕ/кг) в дни 4-16 испытания, и третья группа получала сегмент дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения данного изобретения, т.е. первое воздействие, включающее разовую подкожную дозу EPO 400 МЕ/кг в первый день дозирования с последующим вторым воздействием, включающим ежедневные подкожные дозы EPO 25 МЕ/кг в дни 4-16 испытания. Пробы сыворотки отбирали ежедневно и проверяли на уровниEPO, ретикулоцитов и гемоглобина, а также на суммарное число эритроцитов. Результаты этого примера показаны на фиг. 6-9, они ясно показывают, что сегмент дозирования в соответствии с указанным вариантом воплощения данного изобретения дает более значительное увеличение и суммарного числа эритроцитов, и концентрации гемоглобина, чем традиционное дозирование, а также ежедневное дозирование низкого уровня. Вероятно, если бы указанный сегмент дозирования осуществляли циклами по истечении по меньшей мере 14 дней или даже по истечении вплоть до по меньшей мере около 32 дней, увеличение, производимое применением первого сегмента дозирования, могло- 10010889 бы быть, по существу, поддерживаемым. Пример 2. Три группы собак (n=3 в каждой группе) использовали для этого исследования. Одна группа получала традиционное дозирование EPO, т.е. разовую подкожную дозу 400 МЕ/кг в первый день дозирования, вторая группа получала ежедневно подкожные дозы EPO низкого уровня (50 МЕ/кг) в дни 4-16 испытания, и третья группа получала сегмент дозирования в соответствии с одним вариантом осуществления данного изобретения, т.е. первое воздействие, включающее разовую подкожную дозу EPO 400 МЕ/кг в первый день дозирования с последующим вторым воздействием, включающим ежедневные подкожные дозы EPO 50 МЕ/кг в дни 4-16 испытания. Пробы сыворотки отбирали ежедневно и проверяли на уровниEPO, ретикулоцитов и гемоглобина, а также на суммарное число эритроцитов. Результаты этого примера показаны на фиг. 10-13, они ясно показывают, что сегмент дозирования в соответствии с указанным вариантом воплощения данного изобретения дает более значительное увеличение и суммарного числа эритроцитов, и концентрации гемоглобина, чем традиционное дозирование, а также ежедневное дозирование низкого уровня. Вероятно, что если бы указанный сегмент дозирования осуществляли циклически по истечении по меньшей мере 14 дней или даже по истечении вплоть до по меньшей мере около 32 дней, увеличение, производимое применением первого сегмента дозирования,могло бы быть, по существу, поддерживаемым. Пример 3. Три группы собак (n=3 в каждой группе) использовали для этого исследования. Одна группа получала традиционное дозирование EPO, т.е. разовую подкожную дозу 800 МЕ/кг в первый день дозирования, вторая группа получала ежедневно подкожные дозы EPO низкого уровня (25 МЕ/кг) в дни 4-16 испытания, и третья группа получала сегмент дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения данного изобретения, т.е. первое воздействие, включающее разовую подкожную дозу EPO 800 МЕ/кг в первый день дозирования с последующим вторым воздействием, включающим ежедневные подкожные дозы EPO 25 МЕ/кг в дни 4-16 испытания. Пробы сыворотки отбирали ежедневно и проверяли на уровниEPO, ретикулоцитов и гемоглобина, а также на суммарное число эритроцитов. Результаты этого примера показаны на фигурах 14-17, они ясно показывают, что сегмент дозирования в соответствии с указанным вариантом воплощения данного изобретения дает более значительное увеличение и суммарного числа эритроцитов, и концентрации гемоглобина, чем традиционное дозирование, а также ежедневное дозирование низкого уровня. Вероятно, если бы указанный сегмент дозирования осуществляли циклами по истечении по меньшей мере 14 дней или даже по истечении по меньшей мере около 32 дней, увеличение, производимое применением первого сегмента дозирования, могло бы быть,по существу, поддерживаемым. Пример 4. Три группы собак (n=3 в каждой группе) использовали для этого исследования. Одна группа получала традиционное дозирование EPO, т.е. разовую подкожную дозу 800 МЕ/кг в первый день дозирования, вторая группа получала ежедневно подкожные дозы EPO низкого уровня (50 МЕ/кг) в дни 4-16 испытания, и третья группа получала сегмент дозирования в соответствии с одним вариантом воплощения данного изобретения, т.е., первое воздействие, включающее разовую подкожную дозу EPO 800 МЕ/кг в первый день дозирования с последующим вторым воздействием, включающим ежедневные подкожные дозы EPO 50 МЕ/кг в дни 4-16 испытания. Пробы сыворотки отбирали ежедневно и проверяли на уровниEPO, ретикулоцитов и гемоглобина, а также на суммарное число эритроцитов. Результаты этого примера показаны на фиг. 18-21, они ясно показывают, что сегмент дозирования в соответствии с указанным вариантом осуществления данного изобретения обеспечивает более значительное увеличение и суммарного числа эритроцитов, и концентрации гемоглобина, чем традиционное дозирование, а также ежедневное дозирование низкого уровня. Вероятно, если бы указанный сегмент дозирования осуществляли циклами по истечении по меньшей мере 14 дней или даже по истечении по меньшей мере около 32 дней, увеличение, производимое применением первого сегмента дозирования,могло бы быть, по существу, поддерживаемым. Пример 5. Три группы собак (n=3 в каждой группе), все получали традиционные дозирования EPO (600 МЕ/кг/неделя) в течение 4 недель. Дозирование для группы А, как контрольной группы, было приостановлено, тогда как группа В получала 1800 МЕ/кг EPO на 5 неделе и снова на 8 неделе, и группа С получала комбинированную схему применения в соответствии с данным изобретением, содержащую применение первого сегмента дозирования из первого воздействия 600 МЕ/кг EPO на 5 неделе и второго воздействия 1200 МЕ/кг EPO на 6 неделе, с повторением сегмента дозирования в этой группе на неделях 8 и 9, т.е. первого воздействия 600 МЕ/кг EPO на 8 неделе и второго воздействия 1200 МЕ/кг EPO на 9 неделе. Гемоглобин у всех групп измеряли еженедельно. Результаты этого примера показаны на фиг. 22. Как можно видеть, уровни гемоглобина в группе А снижались естественно до эндогенных уровней даже после традиционного дозирования эквивалентных доз в течение 4 недель. Напротив, гемоглобин сохранялся на повышенном уровне для группы С, дозированной в соответствии с одним вариантом воплощения комбинированной схемы дозирования по изобре- 11010889 тению, не только между сегментами дозирования, но также по меньшей мере в течение 4 недель после осуществления второго воздействия последнего сегмента дозирования. Далее фиг. 22 показывает, что хотя группа В, которая получала такую же суммарную дозу, как группа С, сохраняла более высокий уровень гемоглобина, чем группа А, группа В не сохраняла столь высокое повышение гемоглобина как группа С, показывая, что комбинированная схема дозирования по данному изобретению обеспечивает более эффективную ответную реакцию гемоглобина, чем применение такой же суммарной дозы путем другой схемы дозирования. Хотя предшествующее описание описывает принципы данного изобретения с примерами, приводимыми с целью пояснения, должно быть понятно, что практическое применение изобретения охватывает все обычные изменения, приспособления и/или модификации, как входящие в сферу действия следующей формулы изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Комбинированная схема дозирования эритропоэтина, содержащая по меньшей мере первый сегмент дозирования, указанный первый сегмент дозирования включает первое воздействие EPO в дозе от около 150 до около 2400 МЕ/кг, эффективное для увеличения продукции ретикулоцитов, за которым следует второе воздействие EPO в дозе от около 600 до около 2400 МЕ/кг или от около 25 до около 100 МЕ/кг/сутки, эффективное для поддержания ретикулоцитов при их созревании в эритроциты, где применение второго воздействия начинают в течение около 3 дней, но не более чем около 10 дней после первого воздействия. 2. Комбинированная схема дозирования по п.1, где сегмент дозирования повторяют, чтобы обеспечить желательное суммарное число эритроцитов и/или желательную концентрацию гемоглобина в течение желательного периода времени. 3. Комбинированная схема дозирования по п.1, где первое воздействие включает подкожную, внутримышечную, внутривенную или интраперитонеальную инъекцию EPO. 4. Комбинированная схема дозирования по п.3, где второе воздействие включает одну или несколько ежедневных подкожных инъекций EPO в количестве менее чем около 100 МЕ/кг. 5. Комбинированная схема дозирования по п.3, где второе воздействие включает использование пластыря для чрескожного введения, содержащего EPO. 6. Комбинированная схема дозирования по п.3, где второе воздействие включает имплантацию имплантата, содержащего EPO. 7. Комбинированная схема дозирования по п.3, где второе воздействие включает введение EPO пролонгированного действия. 8. Комбинированная схема дозирования по п.1, где первое воздействие включает общее дозирование EPO, иное, чем второе воздействие. 9. Комбинированная схема дозирования по п.2, где суммарное число эритроцитов и/или концентрация гемоглобина поддерживаются по меньшей мере между двумя сегментами дозирования. 10. Комбинированная схема дозирования по п.9, где сегмент дозирования повторяют по истечении по меньшей мере около 8 недель после применения второго воздействия. 11. Комбинированная схема дозирования по п.10, где сегмент дозирования повторяют по истечении по меньшей мере около 4 недель после применения второго воздействия. 12. Комбинированная схема дозирования по п.11, где сегмент дозирования повторяют по истечении по меньшей мере около 2 недель после применения второго воздействия. 13. Комбинированная схема дозирования по п.1, где сегмент дозирования повторяют по меньшей мере около 6 раз. 14. Комбинированная схема дозирования по п.13, где сегмент дозирования повторяют по меньшей мере около 4 раз. 15. Комбинированная схема дозирования по п.14, где сегмент дозирования повторяют по меньшей мере около 2 раз. 16. Способ увеличения продукции и поддержания желательного числа зрелых эритроцитов и/или концентрации гемоглобина, предусматривающий стадию применения по меньшей мере первого сегмента дозирования, включающего первое воздействие EPO в дозе от около 150 до около 2400 МЕ/кг, эффективное для увеличения продукции ретикулоцитов, с последующим вторым воздействием EPO в дозе от около 600 до около 2400 МЕ/кг или от около 25 до около 100 ME/кг/сутки, эффективным для поддержания ретикулоцитов при их созревании в эритроциты, где применение второго воздействия начинают в течение около 3 дней, но не более чем около 10 дней после первого воздействия. 17. Способ по п.16, где сегмент дозирования может быть повторяющимся для обеспечения желательного суммарного числа эритроцитов и/или концентрации гемоглобина в течение желательного периода времени. 18. Способ по п.16, где способ используют для лечения субъекта, страдающего от анемии. 19. Способ по п.18, где анемия является хронической анемией.- 12010889 20. Способ по п.16, где способ используют для лечения субъекта, подвергающегося химиотерапии. 21. Способ по п.16, где способ используют для лечения субъекта, страдающего от травматического повреждения. 22. Способ по п.16, где первое воздействие содержит дозу EPO больше, чем доза EPO при втором воздействии. 23. Способ по п.16, где первое воздействие включает подкожную инъекцию EPO. 24. Способ по п.16, где второе воздействие включает по меньшей мере две ежедневные подкожные инъекции EPO менее чем около 100 МЕ/кг. 25. Способ по п.16, где второе воздействие включает использование трансдермального пластыря,содержащего EPO. 26. Способ по п.16, где второе воздействие включает имплантацию имплантата, содержащего EPO. 27. Способ по п.16, где второе воздействие включает введение EPO пролонгированного действия. 28. Способ по п.17, где применение последующих сегментов дозирования поддерживает суммарное число эритроцитов и/или концентрацию гемоглобина, полученную при использовании предыдущего сегмента дозирования. 29. Способ по п.28, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере приблизительно через 8 недель после второго воздействия. 30. Способ по п.29, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере приблизительно через 4 недели после второго воздействия. 31. Способ по п.30, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере приблизительно через 2 недели после второго воздействия. 32. Способ по п.16, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере около 6 раз. 33. Способ по п.32, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере около 4 раз. 34. Способ по п.33, где сегмент дозирования применяют по меньшей мере около 2 раз. 35. Набор, содержащий, по меньшей мере, первый сегмент дозирования EPO, указанный первый сегмент дозирования содержит первую единицу дозирования EPO, способную обеспечить первое воздействие EPO в дозе от около 150 до около 2400 МЕ/кг, эффективное для увеличения продукции ретикулоцитов, и вторую единицу дозирования EPO, способную обеспечивать воздействие EPO в дозе от около 600 до около 2400 МЕ/кг или от около 25 до около 100 МЕ/кг/сутки, эффективное для поддержания ретикулоцитов при их созревании в эритроциты, и дополнительно содержащий инструкции, указывающие,что применение второго воздействия должно быть начато в период в течение около 3 дней, но не более чем около 10 дней после первого воздействия. 36. Набор по п.35, где инструкции дополнительно указывают, что сегмент дозирования может быть повторен. 37. Набор по п.35, где инструкции дополнительно указывают, что для субъекта, подвергающегося химиотерапии, сегмент дозирования желательно может быть повторен в соответствии с химиотерапевтическим лечением. 38. Набор по п.35, где инструкции указывают, что сегмент дозирования должен быть повторен по истечении по меньшей мере около 8 недель после применения второго воздействия. 39. Набор по п.38, где инструкции указывают, что сегмент дозирования должен быть повторен по истечении по меньшей мере около 4 недель после применения второго воздействия. 40. Набор по п.39, где инструкции указывают, что сегмент дозирования должен быть повторен по истечении по меньшей мере около 2 недель после применения второго воздействия.