Сочетание реагентов и способ непосредственного измерения при комнатной температуре содержания холестерина липопротеинов низкой плотности с использованием индикаторной полоски

010414 Предпосылки создания изобретения Настоящее изобретение в целом относится к анализу in vitro пробы плазмы, сыворотки или цельной крови с использованием индикаторной полоски для анализа сухим путем, более точно, к анализу на холестерин липопротеинов низкой плотности, содержащихся в пробах. Признано, что уровень содержания холестерина в крови является существенным показателем риска развития ишемической болезни сердца. Холестерин содержат и переносят липопротеины крови. Под общим содержанием холестерина имеют в виду холестерин липопротеинов низкой плотности (LDL-C),холестерин липопротеинов средней плотности (IDL-C), холестерин хиломикронов, холестерин липопротеинов очень низкой плотности (VLDL-C) и холестерин липопротеинов высокой плотности (HDL-C). Из эпидемиологических и клинических исследований хорошо известно о существовании положительной корреляции между уровнями LDL-C и, в меньшей степени, Lp(a)-C и ишемической болезнью сердца.LDL-C традиционно считают "плохим" холестерином. С другой стороны, клинические исследования показывают, что между уровнями HDL-C ("хорошего" холестерина) и ишемической болезнью сердца существует отрицательная корреляция. Сам по себе общий уровень содержания холестерина в крови, который представляет собой общую сумму содержания HDL-C, LDL-C, IDL-C, VLDL-C и холестерина хиломикронов, в целом не считается адекватным показателем риска развития ишемической болезни сердца, поскольку суммарный уровень общего содержания холестерина не раскрывает относительные соотношения содержания холестерина в названных источниках. Чтобы лучше оценивать риск развития ишемической болезни сердца, желательно помимо общего содержания холестерина в пробе также определять содержание LDL-C. Наиболее распространенным способом определения содержания LDL-C в клинических условиях является метод Фридевальда, согласно которому содержание LDL-C оценивают исходя из результатов измерения общего содержания холестерина, HDL-C и триглицеридов. Несмотря на удобство метода Фридевальда, он имеет ряд хорошо известных недостатков. См. Nauck et al. "Methods for Measurement ofClin. Chem. 48.2 (2002). Например, поскольку метод Фридевальда предусматривает измерения не толькоLDL-C, ему присуща потенциальная кумулятивная неточность из-за вычисления в уравнении содержания других липидов. Кроме того, известно, что его применимость ограничена биологическими жидкостями,уровень содержания триглицеридов у которых составляет менее 400 мг/децилитр, а его точность снижается при уровне содержания триглицеридов свыше 200 мг/децилитров. Для выделения различных компонентов липопротеинов из проб сыворотки или крови и их количественного определения известно применение метода ультрацентрифугирования. Однако ультрацентрифугирование является трудоемким, длительным процессом, а высокоподвижные липопротеины могут претерпевать серьезные изменения под воздействием высоких концентраций соли, применяемой в процессе ультрацентрифугирования, а также центробежных сил. "Кроме того, в изобилии используется оборудование и трубки различных типов, что делает условия в одной лаборатории сложными для воспроизведения в другой и в значительно мере зависящими от умения и внимания лаборанта", там же, стр. 238. Другой методикой измерения содержания LDL-C является электрофорез. Она также имеет определенные недостатки. Анализ методом электрофореза в геле не предоставляет возможности автоматизации,а его точность и возможность повторения, по меньшей мере, частично зависят от методики, используемой лаборантом, который проводит анализ. В недавнее время стали доступны другие так называемые однородные способы, предусматривающие осаждение липопротеинов, не являющихся липопротеинами низкой плотности (не-LDL), нагревание и дополнительные стадии. Один из однородных способов раскрыт в патенте США US5888827 (Kayahara,Sugiuchi, et al.; уступлен компании Kyowa Medex Co., Япония). В патенте '827 описана двухстадийная реакция в жидкой фазе, которую осуществляют с целью количественного определения концентрацииLDL-C, содержащегося в пробе жидкости. На первой стадии пробу, содержащую LDL-C, помещают в первый реагент, включающий сахар в виде триметилбетациклодекстрина, солюбилизатор протеина в виде полиоксиэтиленмонолаурата, EMSE (N-этил-N-(3-метилфенил)-N'-сукцинилэтилендиамин) и трисбуфер. Затем реакционную смесь нагревают до 37 С и через 5 мин измеряют оптическую плотность. После этого добавляют второй реагент, включающий холестеролэстеразу, холестеролоксидазу, пероксидазу, 4-аминоантипирин и трис-буфер, и через 5 мин снова измеряют оптическую плотность на той же волне. Затем вычисляют содержание LDL-C, для чего стандартный раствор холестерина по отдельности подвергают одинаковой процедуре и сравнивают соответствующие значения оптической плотности. Во многих случаях условия, необходимые для практического осуществления данного способа, такие как нагревание, множество реагентов и многочисленные измерения считаются недостатком. С учетом сложности и трудоемкости осуществления данного способа даже в лабораторных условиях он неприменим в условиях лечебных учреждений. Другой способ двухстадийного однородного анализа раскрыт в патенте США US6194164 (Matsui etal.; уступлен компании Denke Seiken, Япония). На первой стадии удаляют содержащиеся в пробе для анализа HDL-C, VDL-C и холестерин хиломикронов, а на второй стадии определяют количество остающегося в пробе холестерина (т.е. LDL-C). На первой стадии воздействуют на пробу для анализа холесте-1 010414 ролэстеразой и холестеролоксидазой в присутствии поверхностно-активного вещества, которое воздействует на не-LDL. Каталаза разлагает образующуюся при этом перекись водорода на воду и кислород. В качестве альтернативы, для преобразования перекиси водорода в бесцветный порошок в реакцию с ней вводят донор водорода на основе фенола или анилина. Предпочтительные поверхностно-активные вещества, которые воздействуют на не-LDL, включают полиоксиэтиленовый эфир лаурилового спирта, полиоксиэтиленовый эфир цетилового спирта, полиоксиэтиленовый эфир олеилового спирта, полиоксиэтиленовый эфир высшего спирта и т.п. В процессе второй реакции, раскрытой в патенте '164, определяют количество холестерина, остающегося в пробе для анализа, которая теоретически должна содержать только LDL-C. На второй стадии добавляют поверхностно-активное вещество, которое воздействует, по меньшей мере, на липопротеины низкой плотности, и определяют количество перекиси водорода, образующейся под воздействием холестеролэстеразы и холестеролоксидазы, которые были добавлены на первой стадии. Как и у способа, раскрытого в патенте '827, недостатком способа, раскрытого в патенте '164, является необходимость нагревания реакционной смеси до температуры 37 С, а согласно экспериментальным данным при более низких температурах страдает точность анализа. Как и в патенте '827 способ по патенту '164 также требует добавления множества реагентов в различное время, что также делает его несовместимым с проведением анализа в условиях лечебных учреждений или применением в качестве отпускаемого без рецепта средства. Однородный анализ для измерения содержания LDL-C в сыворотке описан у Sugiuchi, et al, ClinicalChemistry 44:3 522-531 (1998). В данной работе показана корреляция между применением сочетания триблочного сополимера и сульфата альфациклодекстрина и избирательной ферментативной реакциейLDL-С, когда липопротеины низкой плотности и не-LDL взаимодействуют с таким сочетанием в жидкостной системе анализа. Раскрытый у Sugiuchi, et al. предпочтительный блок-сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена обладает ограниченной растворимостью в условиях реакции, протекающей в жидкой среде, что делает неосуществимым его применение в сочетании с индикаторной полоской для анализа сухим путем. В одновременно находящейся на рассмотрении и законно уступленной патентной заявке США 10/663555, поданной 16 сентября 2003 г., раскрыт одностадийный анализ цельной крови на LDL-C методом сухой химической обработки при комнатной температуре, в котором содержание LDL-C в цельной крови определяют по результатам непосредственных измерений общего содержания холестерина и холестерина не-LDL. Несмотря на то, что в описанном способе преодолено большинство недостатков известного из уровня техники многостадийного анализа на LDL-C методом жидкостной химической обработки,в нем по-прежнему отдается предпочтение методам непосредственного анализа. Таким образом, сохраняется потребность в удобном и легком для применения одностадийном способе непосредственного измерения LDL-C методом сухого анализа при комнатной температуре. Краткое изложение сущности изобретения В настоящем изобретение решены названные и другие задачи анализа на LDL-C, не решенные на предшествующем уровне техники. Согласно одной из особенностей настоящего изобретения предложен осуществляемый при комнатной температуре способ прямого обнаружения и измерения содержания холестерина липопротеинов низкой плотности в пробах плазмы, сыворотки или цельной крови. Способ заключается в том, что осуществляют обработку пробы, содержащей как липопротеины низкой плотности, так и не-LDL, чтобы способствовать ферментативному превращению LDL-C при одновременном замедлении или блокировании ферментативного оборота холестерина не-LDL. Для этого пробу обрабатывают путем взаимодействия с сочетанием реагентов, которые по-разному воздействуют на липопротеины низкой плотности и не-LDL в зависимости от изменения плотности их поверхностного заряда. Могут использоваться любые реагенты, которые сочетаются с различными содержащимися в пробе липопротеинами в зависимости от плотности поверхностного заряда, который несут липопротеины, чтобы избирательно способствовать ферментативному превращению холестерина, содержащегося в липопротеинах низкой плотности, при одновременном блокировании или замедлении такого превращения холестерина липопротеинов других типов. Настоящее изобретение частично основано на идее использования меняющейся плотности поверхностного заряда липопротеинов низкой плотности и не-LDL, которые содержатся в пробе. За счет характеристик своих поверхностей, которые имеют слабые отрицательные заряды на уровне или в районе уровня физиологического рН, хиломикрон, липопротеины очень низкой плотности и липопротеины средней плотности способны связываться с некоторыми анионными полимерами и, в частности, сульфатами. Несмотря на хорошие результаты, отмеченные в отношении некоторых сульфатов декстрана, полианиона с молекулярной массой от около 5000 до около 50000, наилучшие результаты на сегодняшний день были получены при использовании таких полианионов с сочетании с сульфатом альфациклодекстрина или другими производными циклодекстрина. Известно, что липопротеины высокой плотности обычно имеют сильные отрицательные заряды и не вырабатывают холестерин или временно защищены от действия вырабатывающих холестерин ферментов, если они связаны с определенными сочетаниями таких сульфатов и сополимерного поверхност-2 010414 но-активного вещества. Несмотря на то, что простые молекулы полипропиленгликоля или полиэтиленгликоля также способны подавлять ферментативное превращение HDL-C, предпочтительным сополимерным поверхностно-активным веществом является полиоксиэтилен-полиоксипропиленполиоксиэтиленовый гибрид с молекулярной массой от около 2100 до 6000 с преобладанием полиоксипропилена. Сополимерное поверхностно-активное вещество предпочтительно на 80-95% состоит из полиоксипропилена. Другая особенность изобретения частично основана на возможности использовать некоторые низкомолекулярные поверхностно-активные вещества для повышения растворимости высокомолекулярных блок-сополимерных поверхностно-активных веществ, что делает их применимыми при анализе с использованием индикаторных полосок для непосредственного измерения LDL-C. Проблема ограниченной растворимости данных предпочтительных соединений решена в настоящем изобретении за счет применения смеси поверхностно-активных веществ, которая частично действует на трех различных уровнях. На первом уровне поверхностно-активные вещества согласно настоящему изобретению способствуют повышению растворимости полиоксиэтилен-полиоксипропилен-полиоксиэтиленового гибрида без ущерба для избирательности ферментативного превращения LDL-C относительно образцов холестерина не-LDL в пробе. Поверхностно-активные вещества второго уровня частично вырабатывают смешанные мицеллы,которые при попадании на многослойную индикаторную полоску перемещают триблочный сополимер и высвобожденный LDL-C из слоя, содержащего реагент, в слой, в котором происходит реакция с холестерином. Поверхностно-активные вещества третьего уровня, которые на практике обычно непосредственно соседствуют со слоем индикаторной полоски, в котором происходит реакция с холестерином, или пропитывают его, частично способствуют повышению растворимости или превращению в эмульсию холестерина, высвобожденного из смешанных мицелл, содержащих триблочный сополимер и другие поверхностно-активные вещества, в результате чего холестерин способен вступать в реакцию с ферментной системой слоя, в котором происходит реакция с холестерином. Избирательную обработку содержащихся в пробе не-LDL такими реагентами обеспечивают за счет применения катионных частиц, которые избирательно соединяют их с не-LDL. Согласно одной из особенностей изобретения катионные частицы представляют собой двухвалентную металлическую мостиковую связь. Такой двухвалентной металлической мостиковой связью связаны реагенты с поверхностями не-LDL с достаточно плотным отрицательным поверхностным зарядом для того, чтобы липопротенины низкой плотности в той же пробе имели относительно слабый положительный поверхностный заряд. Несмотря на хорошие результаты, полученные при использовании магния, также применимы другие двухвалентные металлы, такие как кальций, марганец и другие. Кроме того, аналогичную избирательность в отношении ферментов демонстрируют любые материалы, способные образовывать электростатические связи с отрицательно заряженной поверхностью липопротеиновых структур и/или полианиона. Например, хорошие результаты получены при использовании в качестве катионных частиц, образующих мостиковую связь, гидрохлорида триэтаноламина. Сополимерное поверхностно-активное вещество и другие полимерные анионы, которые помогают блокировать выработку холестерина липопротеинами высокой плотности, тщательно выбирают таким образом, чтобы также инициировать выработку холестерина незаблокированными липопротеинами низкой плотности. Для измерения в пробе крови содержания холестерина, выработанного липопротеинами низкой плотности, применяют уже хорошо известные способы и материалы. Примером таких способов и материалов является применение реагентов Триндера в ферментативной реакции, приводящей к изменению цвета, что описано в упомянутой выше одновременно находящейся на рассмотрении и законно уступленной патентной заявке США 10/663555, которая основана на предварительной заявке 60/411209, поданной 16 сентября 2002 г. Согласно другой особенности настоящего изобретения предложена рассчитанная на вертикальный поток индикаторная полоска для непосредственного обнаружения холестерина, выработанного липопротеинами низкой плотности, содержащимися в пробе сыворотки, плазмы или цельной крови. Индикаторная полоска имеет механизм остановки или замедления вертикального потока красных кровяных клеток,содержащихся в пробе. Несмотря на применимость любого эффективного механизма наилучшие результаты на сегодняшний день достигнуты при использовании слоя материала, включающего нетканые стекловолокна. Содержащий стекловолокно слой может быть необязательно покрыт усиливающим растекание слоем, который способствует распределению крови вокруг точки внесения. Блокирование или, по меньшей мере, замедление потока красных кровяных клеток в направлении поверхности реактивного слоя осуществляют с целью не препятствовать обнаружению изменения цвета в конце анализа. Индикаторная полоска также имеет источник материалов, расположенный на пути вертикального потока пробы крови и состоящий из растворимых в пробе материалов, которые блокируют или замедляют выработку холестерина не-LDL, одновременно способствуя выработке холестерина липопротеинами низкой плотности. Поскольку источник таких материалов обычно помещен на одном или нескольких слоях на пути вертикального потока пробы крови, материалы переходят в растворенное состояние после выделения красных кровяных клеток из пробы. Вместе с тем, источник материалов также может поме-3 010414 щаться перед механизмом выделения красных кровяных клеток. Материалы выбирают таким образом, чтобы они сочетались с электрическими характеристиками компонентов не-LDL, выработку холестерина которыми необходимо заблокировать. Как правило, материалы представляют собой упомянутый выше источник ионов двухвалентного металла, способного образовать мостиковую связь между отрицательно заряженными компонентами и одновременно предотвращать формирование такой мостиковой связи между липопротеинами низкой плотности в пробе и защитными компонентами за счет ослабления анионных электрических характеристик поверхности, обычно характерных для липопротеинов низкой плотности. Индикаторная полоска также имеет расположенный на пути потока пробы крови и на максимальном удалении от точки применения источник материалов, выбранных таким образом, чтобы обеспечивать обнаруживаемое изменение цвета после ферментативного превращения выработанного холестерина. Общей задачей изобретения является создание способа сухой химической обработки индикаторной полоски для определения содержания анализируемых веществ в жидкости тела. Более конкретной задачей изобретения является создание индикаторной полоски для анализа сухим путем, способной непосредственно определять содержание LDL-C в цельной крови или плазме. Одно из существенных преимуществ настоящего изобретения заключается в возможности непосредственно определять содержание LDL-C путем одностадийного анализа. Еще одним преимуществом является осуществимость анализа при комнатной температуре. Другие преимущества и задачи изобретения раскрыты в следующем далее описании изобретения. Краткое описание чертежей На фиг. 1 показана индикаторная полоска согласно настоящему изобретению,на фиг. 2 - корреляция между содержанием LDL-C, определенным методом электрофореза в геле, и измеренным в % коэффициентом отражения, полученным при помощи индикаторных полосок для анализа сухим путем, изготовленных согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения, который описан в примере 1,на фиг. 3-9 - корреляция между содержанием LDL-C, определенным методом электрофореза в геле,и измеренным в % коэффициентом отражения, полученным при помощи индикаторных полосок для анализа сухим путем, изготовленных согласно другим вариантам осуществления настоящего изобретения,которые описаны в примерах 9-15. Описание предпочтительных вариантов осуществления С целью облегчить понимание принципов изобретения, далее приведены варианты его осуществления, проиллюстрированные на чертежах и раскрытые в следующем ниже описании. Подразумевается,что это не предполагает ограничения объема изобретения. Также подразумевается, что настоящее изобретение охватывает любые изменения и усовершенствования проиллюстрированных вариантов осуществления и дополнительные области применения принципов изобретения, которые мог бы предложить специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Один из полезных вариантов осуществления настоящего изобретения проиллюстрирован на фиг. 1. Между отверстием 1 для внесения пробы и отверстием 4 для снятия показаний зафиксированы элементы или слои M1 М 2, М 3 М 4 и М 5, которые образуют вертикальный канал, по которому перемещается проба,после внесения сыворотки, плазмы или цельной крови в отверстие 1 для внесения пробы. В данном варианте осуществления проба сначала проходит через оптический усиливающий растекание слой, не показанный на фиг. 1, но расположенный непосредственно над слоем М-1. Роль усиливающего растекание слоя, если он предусмотрен, состоит в обеспечении относительно равномерного распределения пробы по площади отверстия 1, которая превышает точку внесения. Кроме того, усиливающий растекание слой может быть пропитан списанными выше реагентами. Одна из задач пропитывания усиливающего растекание слоя, если он предусмотрен, состоит в обеспечении более длительного по времени взаимодействия между внесенной пробой и реагентами. Разделяющий кровь слой М-1 в данном варианте осуществления является по меньшей мере частью механизма блокирования или замедления потока красных кровяных клеток. В конкретном примере слой М-1 выполнен из нетканого стекловолокна, производимого компанией Ahlstrom Corporation под торговым наименованием TuffGlass 144. Слой М-1 может содержать сульфат декстрана, двухвалентный металл или его эквивалент, молекулы циклодекстрина, буферы, солюбилизаторы, такие как сорбит или сахароза и поверхностно-активные вещества, обладающие избирательностью в отношении LDL или неLDL. Как и слой М-1, слой М-2 также способен ограничивать или замедлять перемещение красных кровяных клеток через индикаторную полоску и соответствующие мембраны. Слой М-2 обычно представляет собой полисульфонную мембрану с высокой степенью асимметрии. В предпочтительном варианте осуществления мембрана выполнена из BTS SP-300, производимого компанией Pall Life Sciences. Данный слой может также содержать любой из компонентов, которые содержит слой М-1, с добавлением реагентов в концентрациях, заметно отличающихся от слоя М-1. Кроме того, он может содержать поверхностно-активные вещества, увеличивающие подвижность холестерина, высвобожденного из липопротеиновых структур. В частности, слой М-2 может полностью или частично содержать полианион,-4 010414 такой как сульфат декстрана, двухвалентный металл или другие катионные частицы, необходимые для соответствующего блокирования не-LDL, полностью или частично молекулы циклодекстрина, поверхностно-активные вещества и, в частности, полностью или частично блок-сополимер или триблочный полимер, который используют, чтобы блокировать HDL-C и/или сделать доступным LDL-C. Как и в случае слоя М-1, слой М-2 также может включать солюбилизаторы, такие как сорбит и сахарозу. Источник двухвалентного металла или других катионных частиц может находиться в слоях М-1, М 2 или в усиливающей растекание сетке, хотя предпочтительным местом его расположения является слой М-2 или дополнительно слой М-4. Двухвалентным металлом может являться, например, кальций, магний или марганец, Наиболее предпочтительным катионом является магний, что объясняется его низкой стоимостью, доступностью и удобством обращения. Катион также может представлять собой положительно заряженный амин, способный связывать липопротеины. Одним из предпочтительных аминов является третичный амин, такой как триэтаноламин. В варианте осуществления, показанном на фиг. 1, слой М-2 также является разделяющим кровь слоем. Он выполнен асимметричным и имеет поры размером 300 микрон на поверхности, через которую поступает проба, и размером около 3 микрон на индикаторной поверхности. Помимо того, что данный слой способствует блокированию или замедлению потока красных кровяных клеток, он также замедляет поток пробы крови в целом по вертикальному каналу, чтобы продлить время взаимодействия пробы с реагентами. Как и слой М-2, элемент, обозначенный на фиг. 1 как М-3, представляет собой слой, который снижает скорость потока внесенной пробы по вертикальному каналу, чтобы увеличить количество времени,в течение которого проба взаимодействует со слоями, содержащими реагенты, хотя данный слой редко обрабатывают реагентами, придающими избирательность к липопротеинам. Задачей слоя M3 является регулирование гидрофильности и размеров пор с целью ослабления потока вещества пробы через индикаторную полоску. Эффективными для этих целей является ряд различных материалов, хотя предпочтительным является слой из гидрофильного полиэфирсульфона, производимого компанией Pall Life Sciences под торговым наименованием Supor 1200. Особо эффективными для применения в качестве слоя М-3 также являются трековые мембраны из поликарбоната, такие как Poretics толщиной 0,4 микрона производства компании Osmonics Inc. В большинстве случаев такую мембрану обрабатывают только поверхностно-активными веществами или другими смачивающими веществами, которые могут способствовать распределению пробы по поверхности мембраны. Элемент, обозначенный на фиг. 1 как М-4, также является содержащим реагенты мембранным слоем, который необязательно может содержать те же реагенты, что и слой М-2, хотя и в других пропорциях. Как и слой М-2, данный слой предпочтительно выполнен асимметричным из полисульфона, такого как BTS SP 300 производства компании Pall Life Sciences. В некоторых примерах настоящего изобретения слой М-4 может являться необязательным в зависимости, по меньшей мере, частично от состава,реагентов и конструкции слоев М-1, М-2, М-3 и необязательной усиливающей растекание сетки, не показанной на фиг. 1. Проиллюстрированный на фиг. 1 слой М-5 является мембраной-индикатором холестерина, которая может представлять собой мембрану, описанную в одновременно находящейся на рассмотрении и законно уступленной патентной заявке США 10/663555, поданной 16 сентября 2003 г. Пример 1. Была сформирована индикаторная полоска для анализа сухим путем, состоящая из следующих слоев и имеющая конструкцию, проиллюстрированную на фиг. 1: слой М-1 из Tuff Glass, пропитанный раствором согласно разделу А,слой М-2 из BTS-SP300 пропитанный раствором согласно разделу Б,слой М-3 из Supor 1200, необработанный,слой М-4 из BTS-SP300, пропитанный раствором согласно разделу Б,слой М-5 из Biodyne А, описанный в одновременно находящейся на рассмотрении и законно уступленной патентной заявке США 10/663555, поданной 16 сентября. Слой М-1 из Tuff Glass окунули в раствор, полученный согласно разделу А, и высушили струей воздуха при температуре 38 С 2,5 С. Раздел А. К 300 мл деионизированной лабораторной воды добавили 3,50 г MES-буфера, 9,0 г сорбита, 9,0 г сахарозы, 7,0 г полиэтиленгликоля с молекулярной массой 200, 10,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 2,01 г NaCl. При помощи 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 5,90 +/- 0,1. Для достижения окончательного уровня рН 5,85 всего добавили 2,80 мл 5 N NaOH. Из данного исходного раствора удалили 169,89 граммов и поместили в 250-мл лабораторный химический стакан. В нем растворили 2,0 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000. При помощи 760 л 5 N NaOH довели рН до окончательного уровня 5,95. Окунули Tuff Glass в данный раствор и подвесили вертикально, чтобы из мембраны стек избыток раствора. Затем мембрану поместили в зажим и сушили в горизонтальном положении в сушильной камере при стандартном температурном режиме.-5 010414 Раздел Б. К 200,15 г деионизированной лабораторной воды последовательно добавили 2,0 мг MES-буфера,9,06 г сорбита, 7,04 г MgCl26H2O. Затем при помощи 1,025 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,03. Раствор охладили до температуры 5 С, после чего добавили 1,38 г сульфата -циклодекстрина, 0,73 г Silwet L-77, 1,66 г Pluronic L121, 0,45 г Pluronic L43. В процессе добавления всех ингредиентов раствор оставался охлажденным. Чашки из пирекса для окунания мембраны охладили в морозильной камере,после чего добавили смесь реагентов для пропитки. В охлажденный стеклянный сосуд добавили примерно 70 мл раствора, полученного согласно разделу Б. Мембраны окунали и подвешивали вертикально для просушивания. Избытку реагентов дали стечь из просушиваемой мембраны без нагревания или применения струи воздуха. На фиг. 2 проиллюстрированы результаты анализа двенадцати различных проб крови, полученные при помощи полоски согласно примеру 1, при этом результаты анализа каждой пробы являются усредненными результатами, полученными с использованием шести полосок. Контрольные аликвотные пробы подвергли анализу на LDL-C методом электрофореза в геле. Как показано на фиг. 2, корреляция между результатами анализа таких контрольных аликвотных проб и анализа способом согласно настоящему изобретению является правильной. Пример 2. Была сформирована индикаторная полоска для анализа сухим путем, состоящая из следующих слоев и имеющая конструкцию, проиллюстрированную на фиг. 1: слой М-1 из Tuff Glass, пропитанный раствором согласно разделу В,слой М-2 отсутствует,слой М-3 из Supor 1200, необработанный,слой М-4 из BTS-SP300, пропитанный раствором согласно разделу Г,слой М-5 из Biodyne A. Раздел В. Объемный фильтр, состоящий из аморфного волокна или композиции стекла, полимера или произвольной композитной матрицы, пропитали следующим раствором. С целью получения верхнего реактивного слоя индикаторной полоски пропитку осуществляли любыми известными способами, такими как окунание, распыление или лиофильная сушка. К 50 мл деионизированной лабораторной воды добавили 1,23 г MOPS-буфера, 1,5 г сульфата декстрана со средней молекулярной массой 10000, 0,5 г сульфата -циклодекстрина, 2,99 г сорбита, 3,0 г сахарозы и 0,6 г хлорида магния, при этом все ингредиенты содержались в 50 мл деионизированной воды. При помощи 1 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,17. Раздел Г. Мембрану пропитали следующим раствором, который может быть частично использован для выделения из пробы цельной крови красных кровяных клеток в качестве источника плазмы или сыворотки для индикаторного слоя М-5, а также для контроля воспроизведения реагентов в обрабатываемой в данный момент мембране или мембране, в дальнейшем обработанной реагентами, или другой подложке. К 300 мл деионизированной лабораторной воды добавили следующие реагенты: 6,01 г PluronicL121, 4,32 г хлорида магния, 3,0 г MOPS-буфера, 4,13 г сульфата -циклодекстрина, 0,63 г MOPSбуфера, 1,08 г сорбита, 1,11 г сахарозы, 0,47 г Silwet L-77. Уровень рН раствора, равный 6,95, не меняли. Температура помутнения раствора составляла 20 С. Слой обработали 60,09 г данного раствора. Пример 3. Была сформирована индикаторная полоска для анализа сухим путем, состоящая из следующих слоев и имеющая конструкцию, проиллюстрированную на фиг. 1: слой М-1 из Tuff Glass, пропитанный раствором согласно разделу Д,слой М-2 из BTS-SP300, пропитанный раствором согласно разделу Е,слой М-3 из Supor 1200, необработанный,слой М-4 отсутствует,слой М-5 из Biodyne A. Раздел Д. К 50 мл деионизированной воды добавили 1,2 г MOPS-буфера, 2,5 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,5 г сульфата -циклодекстрина, 2,01 г сорбита, 2,0 г сахарозы и 0,6 г хлорида магния. При помощи 1 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,16. Раздел Е. К 300 мл деионизированной воды добавили следующие реагенты: 6,19 г Pluronic L121, 3,22 г хлорида магния, 3,0 г MOPS-буфера, 4,0 г сульфата -циклодекстрина, 0,55 г MOPS-буфера, 1,1 г сорбита,1,12 г сахарозы, 1,88 г Silwet L-77, 1,05 г Pluronic L121. Уровень рН раствора, равный 7,0, не меняли. Температура помутнения раствора составляла 20 С. Слой обработали 60,09 г данного раствора. Пример 4. Индикаторную полоску согласно данному примеру сформировали из тех же мембран, что и в при-6 010414 мере 3, а именно Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300 (слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны, в которой происходит реакция с холестерином (слой М-5). Слой из Tuff Glass (М-1) обработали 4,32 г MOPS-буфера, 8,87 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,5 г сульфата -циклодекстрина, 9,9 г сорбита, 11,25 г сахарозы и 2,28 г хлорида магния, 7,4 г полиэтиленгликоля, растворенными в 168,33 г деионизированной воды. При помощи 0,4 мл 5 NNaOH уровень рН раствора довели до 7,11. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 30,02 г следующего раствора, содержавшего 5,42 г PluronicL121, 7,05 г хлорида магния, 2,0 г MOPS-буфера, 4,592 г сульфата -циклодекстрина, 9,01 г сорбита, 0,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 1,38 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 2,47 г Silwet L-77 в 100 мл деионизированной воды, в который добавили 0,33 г MOPS-буфера, 0,65 г сорбита, 0,67 г сахарозы, 29 мг Silwet L-77, 0,09 г Tetronic 1107. Окончательный уровень рН раствора довели до 7,27 при помощи 0,1 мл 5 N NaOH. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Пример 5. Индикаторную полоску согласно данному примеру сформировали из тех же мембран, что и в примере 3, а именно Tuff Glass (слой M-1), BTS-SP300 (слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны, в которой происходит реакция с холестерином (слой М-5). Слой из Tuff Glass (M-1) обработали 0,35 г Pluronic L121, 0,06 г Tetronic 304, 1,56 г MES-буфера,3,11 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,7687 г сульфата -циклодекстрина, 2,51 г сорбита, 1,17 г сахарозы и 1,1 г хлорида магния, 0,1 мл Silwet L-77, растворенными в 75,0 г деионизированной воды. При помощи 0,4 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,14. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 1,80 г Pluronic L121, 0,91 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,7477 г сульфата -циклодекстрина, 0,8 г MOPS-буфера, 2,0 г сорбита, 0,61 г сахарозы, 0,9 г хлорида магния, 0,29 г Tetronic 1107, при этом все ингредиенты содержались в 75 г деионизированной воды. Окончательный уровень рН раствора довели до 7,17 при помощи 0,15 мл 5 N NaOH. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Пример 6. Была сформирована индикаторная полоска для анализа сухим путем, состоящая из следующих слоев и имеющая конструкцию, проиллюстрированную на фиг. 1: слой М-1 из Tuff Glass, пропитанный раствором согласно разделу Ж, затем пропитанный раствором согласно разделу 3 и затем пропитанный раствором согласно разделу И,слой М-2 из BTS-SP300, пропитанный раствором согласно разделу К, затем пропитанный раствором согласно разделу Л и затем пропитанный раствором согласно разделу И,слой М-3 из Supor 1200, необработанный,слой М-4 отсутствует,слой М-5 из Biodyne A. Раздел Ж. К 1875,0 мл деионизированной воды добавили 8,95 г Pluronic L121, 17,85 г Tetronic 304, 39,1 г MESбуфера, 77,64 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 19,2 г сульфата -циклодекстрина,62,5 г сорбита, 29,11 сахарозы и 27,35 г хлорида магния, 2,5 г Silwet L-77. Уровень рН раствора довели до 6,14 при помощи 0,4 мл 5 N NaOH. Раздел 3. Для обработки мембраны, пропитанной раствором, полученным согласно разделу Ж, использовали следующий раствор. К 199,6 г деионизированной воды добавили 8,16 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 1,41 г сульфата -циклодекстрина, 1,85 г хлорида магния, 3,45 г MES-буфера, 3,14 г сорбита. Уровень рН раствора довели до 6,24 при помощи 1,4 мл 5 N NaOH. Раздел И. Был получен 2-процентный раствор поливинилового спирта, которым затем обработали слой М-1 и слой М-2. Раздел К. К 749,8 г деионизированной воды добавили 16,1 г Pluronic L121, 9,0 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 5,0 г сульфата -циклодекстрина, 7,9 г MOPS-буфера, 12,8 г сорбита, 4,7 г сахарозы, 7,0 г хлорида магния, 3,42 г Tetronic 1107, 2,2 г Silwet L-77. Окончательный уровень рН раствора довели до 7,22 при помощи 3,0 мл 5 N NaOH. Раздел Л. К 100 г деионизированной воды добавили следующие химикаты: 1,5 г Silwet L-77, 1,05 г PluronicL121. Пример 7. Индикаторную полоску сформировали из тех же мембран, что и в примере 3, а именно Tuff Glass(слой М-1), BTS-SP300 (слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны, в которой происходит реакция с холестерином (слой М-5). Слой из Tuff Glass (M-1) обработали 0,64 г Pluronic L121, 5,79 г Tetronic 304,12,58 г MES-буфера, 24,97 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 6,16 г сульфата -7 010414 циклодекстрина, 20,0 г сорбита, 9,3 г сахарозы и 8,77 г хлорида магния, 0,79 г Silwet L-77, растворенными в 599,63 г деионизированной воды. При помощи 5,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,21. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 3,6 г Pluronic L121, 2,02 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 1,53 г сульфата -циклодекстрина, 1,78 г MOPS-буфера, 1,21 г сорбита, 1,29 г сахарозы,1,81 г хлорида магния, 0,62 г Tetronic 1107, 1,03 г Emulgen 210P, 1,51 г гидроксипропил бетациклодекстрина, при этом все ингредиенты содержались в 201,5 г деионизированной воды. Обе мембраны (М-1 и М-2) поместили в сушильную камеру. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Пример 8. Индикаторную полоску сформировали из тех же мембран, что и в примере 3, а именно Tuff Glass(слой М-1), BTS-SP300 (слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны, в которой происходит реакция с холестерином (слой М-5). Слой из Tuff Glass (M-1) обработали 0,35 г Pluronic L121, 0,06 г Tetronic 304,1,56 г MES-буфера, 3,11 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,7687 г сульфата циклодекстрина, 2,51 г сорбита, 1,17 г сахарозы и 1,1 г хлорида магния, 0,1 мл Silwet L-77, растворенными в 75,0 г деионизированной воды. При помощи 0,4 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,14. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 1,80 г Pluronic L121, 0,91 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,7477 г сульфата -циклодекстрина, 0,8 г MOPS-буфера, 2,0 г сорбита, 0,61 г сахарозы, 0,9 г хлорида магния, 0,29 г Tetronic 1107, при этом все ингредиенты содержались в 75 г деионизированной воды. При помощи 0,15 мл 5 N NaOH окончательный уровень рН раствора довели до 7,17. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Пример 9. Индикаторные полоски согласно данному примеру сформировали из нестекловолокнистого верхнего слоя (М-1), а именно Accuwick Ultra, затем слоя BTS SP300 (М-2), слоя BTS SP300 (М-4) и мембраныиндикатора холестерина (М-5). Слой из Accuwick Ultra обработали раствором следующих химикатов в 375 г деионизированной воды: 7,80 г MES-буфера, 15,57 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10 000, 3,85 г сульфата -циклодекстрина, 12,5 г D-сорбита, 5,82 г сахарозы и 5,47 г хлорида магния, 1,79 гPluronic L121, 3,59 г Tetronic 304 и 0,5 г Silwet L-77. При помощи 2 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,16. Первый слой из BTS SP300 (М-2) пропитали окунанием в раствор, избыток которого удалили методом раскатывания, полученный в результате растворения в 187,5 г деионизированной воды следующих химикатов: 2,18 г ПВС с молекулярной массой 30-70 К, 1,75 г Tetronic 304, 4,02 г MES-буфера, 7,77 гDextralip 15, 1,96 г сульфата -циклодекстрина, 7,31 г D-сорбита, 1,40 г сахарозы, 3,52 г MgSO4, 2,5 г полиэтиленгликоля с молекулярной массой 6000, 57 мг Anifoam С. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,27. Второй слой из BTS SP300 (М-4) обработали раствором, состоявшим из следующих химикатов, растворенных в двух растворах. Первый раствор состоял из 20,35 г 4-процентного раствора ПВС с молекулярной массой 30000-70000 и 30,55 г раствора, содержавшего следующие химикаты, растворенные в 50,01 г деионизированной воды: 2,048 г ПВС с молекулярной массой 30000-70000, 2,31 г Pluronic L121,1,20 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 1,25 г сульфата магния, 1,31 г бис-трис-буфера,10,4 г сульфата -циклодекстрина, 3,75 г D-сорбита, 0,0256 г Silwet L-77 и 0,03 г Tetronic 304, 0,47 гCHAPS. При помощи 2,5 мл 3,25 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,48. Как показано на фиг. 3, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и шестнадцати анализов с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 9,является правильной. Пример 10. Индикаторные полоски согласно данному примеру состояли из Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300(слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны-индикатора холестерина (М-5). Слой из Tuff Glass (М-1) обработали раствором следующих химикатов в 300 г деионизированной воды: 6,27 г MES-буфера, 12,41 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10 000, 3,06 г сульфата -циклодекстрина, 10,01 г Dсорбита, 4,65 г сахарозы, 4,37 г сульфата магния, 1,43 г Pluronic L121, 2,90 г Tetronic 304 и 0,4 г Silwet L77. При помощи 1,8 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,15. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали раствором следующих химикатов в 296,5 г деионизированной воды: 7,20 г Pluronic L121, 3,6 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 3,58 г сульфата магния, 3,15 г MOPS-буфера, 3,20 г сульфата -циклодекстрина, 8,13 г D-сорбита, 2,38 г сахарозы и 1,2 г Tetronic 304. При помощи 1 мл 5 NNaOH уровень рН раствора довели до 7,12. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Как показано на фиг. 4, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и анализов с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 10, является правильной. Пример 11. Индикаторные полоски согласно данному примеру состояли из Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300-8 010414 обработали раствором следующих химикатов в 300 г деионизированной воды: 6,67 г MES-буфера, 12,57 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 3,07 г сульфата -циклодекстрина, 10,08 г Dсорбита, 5,33 г сахарозы, 4,41 г сульфата магния, 2,86 г Tetronic 304 и 0,0710 г азида натрия. При помощи 2,25 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,22. Чтобы нанести данный раствор на мембрану, ее окунули в раствор, после чего удалили избыток раствора путем прокатки между двумя роликами и подвергли мембрану естественной сушке на открытой волокнистой основе. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали раствором следующих химикатов в 500 г деионизированной воды: 12 г Pluronic L121, 5,99 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 5,99 г сульфата магния, 5,18 г MOPS-буфера, 5,19 г сульфата -циклодекстрина, 4,01 г D-сорбита, 4,01 г сахарозы и 1,9 гTetronic 304. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,19. Затем слой из BTSSP300 обработали путем распыления 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата -циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MES-буфера и 2,0 г D-сорбита, растворенных в 100,1 г деионизированной воды. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,31. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Как показано на фиг. 5, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и двадцати одного анализа с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 11,является правильной. Пример 12. Индикаторные полоски согласно данному примеру состояли из Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300(слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны-индикатора холестерина (М-5). Слой из Tuff Glass (М-1) обработали раствором следующих химикатов в 300 г деионизированной воды: 6,67 г MES-буфера, 12,57 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 3,07 г сульфата -циклодекстрина, 10,08 г сорбита,5,33 г сахарозы, 4,41 г сульфата магния, 2,86 г Tetronic 304 и 0,0710 г азида натрия. При помощи 2,25 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,22. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали раствором, полученным путем растворения следующих химикатов в 500 г деионизированной воды: 12 г Pluronic L121, 5,99 г сульфата магния, 5,18 г MOPS-буфера,5,19 г сульфата -циклодекстрина, 4,01 г сорбита, 4,01 г сахарозы, 5,99 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000 и 1,9 г Tetronic 304. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,19. Перед пропиткой к BTS-SP300 дополнительно добавили 0,50 г раствора, содержавшего 9,99 г Pluronic L123, 10,01 г Pluronic L101, 5,05 г Pluronic L103, 9,99 г Pluronic L61, 10,02 г Pluronic L64 и 2,75 гSilwet L-77. После сушки мембраны на нее распылили следующие химикаты, растворенные в 100 г деионизированной воды: 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MES-буфера и 2,0 г D-сорбита. При помощи 1,5 мл 5 NNaOH уровень рН раствора довели до 6,31. Затем слой из BTS-SP300 обработали путем распыления 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата -циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MES-буфера и 2,0 г сорбита. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,19. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Как показано на фиг. 6, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и двадцати одного анализа с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 12,является правильной. Пример 13. Индикаторные полоски согласно данному примеру состояли из Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300(слой М-2), Supor 1200 (слой М-3) и мембраны-индикатора холестерина (М-5). Слой из Tuff Glass (М-1) обработали раствором следующих химикатов в 300 г деионизированной воды: 6,67 г MES-буфера, 12,57 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 3,07 г сульфата -циклодекстрина, 10,08 г сорбита,5,33 г сахарозы, 4,41 г сульфата магния, 2,86 г Tetronic 304 и 0,0710 г азида натрия. При помощи 2,25 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,22. После сушки мембраны на Tuff Glass распылили 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата -циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MES-буфера и 2,0 г D-сорбита, растворенных в 100 г деионизированной воды. При помощи 1,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,31. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 18,8 г Pluronic L121, 2,90 г сульфата магния, 7,37 г MOPSбуфера, 8,96 г сульфата -циклодекстрина, 7,38 г сорбита, 6,00 г сахарозы, 10,11 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 7,12 г Tetronic 304, 2,90 г Silwet L-77 и 0,15 г азида натрия, растворенными в 749,5 г деионизированной воды. При помощи 2,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,15. Перед пропиткой к данному раствору дополнительно добавили 1,50 г раствора, содержавшего 9,99 г Pluronic L123, 10,01 г Pluronic L101, 5,05 г Pluronic L103, 9,99 г Pluronic L61, 10,02 г Pluronic L64 и 2,75 гSilwet L-77. После сушки мембраны на нее распылили следующие химикаты, растворенные в 100 г деионизированной воды: 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MES-буфера и 2,0 г сорбита. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Как показано на фиг. 7, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и-9 010414 анализа с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 13, является правильной. Пример 14. Индикаторные полоски согласно данному примеру состояли из Tuff Glass (слой М-1), BTS-SP300-циклодекстрина, 10,08 г сорбита, 5,33 г сахарозы, 4,41 г сульфата магния, 2,86 г Tetronic 304 и 0,0710 г азида натрия, растворенными в 300 г деионизированной воды. При помощи 2,25 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,22. После сушки мембраны на Tuff Glass распылили 4,03 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 0,6 г сульфата -циклодекстрина, 0,57 г сульфата магния, 1,75 г MESбуфера и 2,0 г сорбита, растворенные в 100 г деионизированной воды. При помощи 1,50 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,31. Затем на Tuff Glass распылили 2-процентный раствор ПВС. Слой из BTS-SP300 (М-2) обработали 18,8 г Pluronic L121, 2,90 г сульфата магния, 7,37 г MOPSбуфера, 8,96 г сульфата -циклодекстрина, 7,38 г сорбита, 6,00 г сахарозы, 10,11 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 2,90 г Silwet L-77, 7,12 г Tetronic 304 и 0,15 г азида натрия, растворенными в 749,5 г деионизированной воды. При помощи 2,5 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 7,15. Затем после сушки на BTS-SP300 распылили 24,00 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000,3,57 г сульфата -циклодекстрина, 3,58 г сульфата магния, 10,78 г MES-буфера и 11,82 г сорбита, растворенные в 600 г деионизированной воды. При помощи 2,0 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,20. Наконец, на BTS-SP300 (слой М-2) распылили состав, содержавший 0,15% Silwet L-77 и 1,0%Pluronic L121. Слой из Supor 12 00 не подвергали обработке. Как показано на фиг. 8, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и анализа с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 14, является правильной. Пример 15. Индикаторные полоски для анализа сухим путем согласно данному примеру сформировали из нестекловолокнистого слоя Accuwick Ultra (M-1), слоя BTS SP300 (М-2), слоя Supor 1200 (М-3) и мембраны-индикатора холестерина (М-5). Для обработки слоя из Accuwick Ultra в 300 г деионизированной воды растворили следующие химикаты: 6,30 г MES-буфера, 12,43 г сульфата декстрана с молекулярной массой 10000, 3,08 г сульфата -циклодекстрина, 10,04 г сорбита, 4,63 г сахарозы и 4,37 г сульфата магния,2,86 г Tetronic 304 и 0,4 г Silwet L-77, а также использовали 1,47 г раствора, содержавшего 1,03 г циклодекстринового полимера, 0,99 г статистически метилированного -циклодекстрина. Слой дополнительно обработали 2,98 г раствора, содержавшего 2,99 г Emulgen 210P, 9,00 г Pluronic L121, 1,98 г полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3500. При помощи 1,75 мл 5 N NaOH уровень рН раствора довели до 6,22. Слой из Supor 1200 не подвергали обработке. Слой из BTS-SP300 обработали раствором, полученным путем растворения следующих химикатов в 300 г деионизированной воды: 5,43 г Pluronic L121, 2,75 г сульфата магния, 2,39 г MOPS-буфера, 2,39 г сульфата -циклодекстрина, 1,80 г сорбита, 1,82 г сахарозы, 1,50 г Emulgen 210P, 0,45 г Tetronic 304, 0,47 г Tetronic 150R1, 0,46 г Tetronic 901, 2,33 г гидроксипропил бета-циклодекстрина. При помощи 0,9 мл 5N NaOH уровень рН раствора довели до 7,21. Как показано на фиг. 9, корреляция между результатами анализа контрольных аликвотных проб и четырнадцати анализов с использованием индикаторных полосок, изготовленных согласно примеру 15,является правильной. Несмотря на то, что изобретение проиллюстрировано и подробно раскрыто на чертежах и в вышеизложенном описании, его следует рассматривать в качестве иллюстрирующего, а не ограничивающего по своему характеру. Подразумевается, что рассмотрены лишь предпочтительные варианты осуществления и что охране подлежат все изменения, усовершенствования и дополнительные области применения,не выходящие за пределы сущности изобретения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Индикаторная полоска для непосредственного обнаружения холестерина, полученного из липопротеинов низкой плотности, содержащихся в пробе цельной крови, сыворотки или плазмы, включающая: а) мембрану для остановки или замедления прохождения красных кровяных клеток через индикаторную полоску,б) мембрану-индикатор холестерина для обеспечения изменения окраски в присутствии холестерина и в) запас сочетания реагентов в указанной индикаторной полоске между указанной мембраной для красных кровяных клеток и мембраной-индикатором холестерина, способных связываться с не-LDL липопротеинами (не являющимися липопротеинами низкой плотности) для блокировки измерения холестерина в указанных не-LDL липопротеинах в указанной мембране-индикаторе холестерина, избира- 10010414 тельно обеспечивая при этом прямое измерение холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C). 2. Индикаторная полоска по п.1, отличающаяся тем, что указанные реагенты выбраны из группы,содержащей катионы, полианионы, производные циклодекстрина, сополимерное поверхностно-активное вещество и поверхностно-активное вещество для сополимерного поверхностно-активного вещества. 3. Индикаторная полоска по п.2, отличающаяся тем, что катионы включают двухвалентный металл. 4. Индикаторная полоска по п.3, отличающаяся тем, что двухвалентным металлом является магний. 5. Индикаторная полоска по п.2, отличающаяся тем, что катионами является положительно заряженный амин, способный связывать липопротеины. 6. Индикаторная полоска по п.5, отличающаяся тем, что амином является гидрохлорид триэтаноламина. 7. Индикаторная полоска по п.2, отличающаяся тем, что полианионом является сульфат декстрана. 8. Индикаторная полоска по п.2, отличающаяся тем, что производным декстрина является сульфат-циклодекстрина. 9. Индикаторная полоска по п.2, отличающаяся тем, что сополимерным поверхностно-активным веществом является полиоксипропилен-полиоксиэтиленовый гибрид с молекулярной массой от около 2100 до 6000 с преобладанием полиоксипропилена. 10. Индикаторная полоска по п.1, отличающаяся тем, что в состав реагентов входит высокомолекулярное блок-сополимерное поверхностно-активное вещество, способное связывать не-LDL, и низковысокомолекулярное блок-сополимерное поверхностно-активное вещество, способное повышать растворимость блок-сополимерного поверхностно-активного вещества. 11. Индикаторная полоска по п.1, отличающаяся тем, что блокирующая мембрана для красных кровяных клеток пропитана, по меньшей мере, некоторым количеством запаса сочетания реагентов. 12. Индикаторная полоска по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно включает по меньшей мере одну промежуточную мембрану, пропитанную реагентами.