Многослойный продукт крови и способы его получения
Формула / Реферат
1. Многослойный продукт крови, пригодный для лечения ран, содержащий компоненты из цельной крови: фибрин, тромбоциты и лейкоциты, причем продукт крови содержит три слоя, где второй слой является смежным с первым слоем и третьим слоем, первый слой определяет первую внешнюю поверхность продукта крови, а третий слой определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови, при этом большая часть первого слоя представляет собой фибрин, большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты.
2. Продукт крови по п.1, где большая часть фибрина, содержащегося в продукте крови, содержится в первом слое.
3. Продукт крови по п.1 или 2, где большая часть тромбоцитов, содержащихся в продукте крови, содержится во втором слое.
4. Продукт крови по пп.1, 2 или 3, где большая часть лейкоцитов, содержащихся в продукте крови, содержится в третьем слое.
5. Продукт крови по любому из предыдущих пунктов, где продукт крови содержит только компоненты из цельной крови.
6. Продукт крови по пп.1-4, где продукт крови дополнительно содержит компонент, выбранный из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту.
7. Применение продукта крови по любому из пп.1-6 для изготовления лекарственного препарата для лечения ран.
8. Способ получения продукта крови по п.1 из цельной крови, включающий следующие этапы:
а) помещение цельной крови в контейнер, внутренняя поверхность которого выполнена из материала, не активирующего процесс коагуляции цельной крови,
b) обеспечение коагуляции цельной крови,
c) разделение коагулированной цельной крови на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы по меньшей мере в 1000 g, действующей на цельную кровь по меньшей мере 30 с, и
d) удаление продукта крови из контейнера.
9. Способ по п.8, в котором на этапе b) активируют коагуляцию, воздействуя на цельную кровь стеклянной гранулой.
10. Способ по п.8, где этап b) предшествует этапу а).
11. Способ по п.9, где этап b) осуществляют по меньшей мере за 1 мин до этапа а).
12. Способ получения продукта крови по п.1 из цельной крови, включающий следующие этапы:
a) помещение цельной крови в контейнер, внутренняя поверхность которого выполнена из материала, активирующего процесс коагуляции цельной крови,
b) разделение коагулированной цельной крови на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы по меньшей мере в 1000 g, действующей на цельную кровь по меньшей мере 30 с, и
c) удаление продукта крови из контейнера.
13. Способ по п.12, в котором материал внутренней поверхности контейнера выбран из группы, включающей полипропилен, полиэтилен, поликарбонат, полиамид, акрилонитрилбутадиенстирол, стирол, модифицированный стирол, полиуретан и другие полимерные материалы.
14. Способ по любому из пп.8-13, в котором материал внутренней поверхности контейнера снижает трение между продуктом крови и внутренней поверхностью контейнера.
15. Способ по любому из пп.8-14, где указанная центробежная сила больше, чем сила сцепления, действующая между внутренней поверхностью контейнера и продуктом крови.
16. Способ по любому из пп.8-15, в котором продукт крови, прилипающий к внутренней поверхности, отделяют от внутренней поверхности контейнера, по меньшей мере один раз во время этапа с).
17. Способ по любому из пп.8-15, в котором дополнительно уплотняют продукт крови фильтром, размещенным в контейнере.
18. Способ по любому из пп.8-16, в котором дополнительно удаляют эритроциты и/или сыворотку из продукта крови во время этапа с).
19. Способ по п.18, в котором продукт крови отмывают от эритроцитов и/или сыворотки.
20. Способ по любому из пп.8-19, в котором этап b) осуществляют одновременно с этапом с).
21. Способ по п.8, в котором в цельную кровь добавляют компонент, выбранный из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту.
22. Способ по п.17, в котором фильтр устанавливают в первое фиксированное положение в верхней части контейнера, содержащего эритроциты, и затем во второе положение в верхней части контейнера.
23. Способ по п.22, в котором фильтр фиксируют в первом положении в верхней части контейнера, содержащего эритроциты, за счет деформации стенки контейнера.
Текст
МНОГОСЛОЙНЫЙ ПРОДУКТ КРОВИ И СПОСОБЫ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Данное изобретение относится к многослойному продукту крови, а также способам получения данного продукта крови. Продукт крови содержит компоненты из цельной крови: фибрин,тромбоциты и лейкоциты. Продукт крови содержит три слоя, где второй слой является смежным с первым слоем и третьим слоем, первый слой определяет первую внешнюю поверхность продукта крови, а третий слой определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови. Большая часть первого слоя представляет собой фибрин, большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты. Данный продукт крови может быть получен способами с применением контейнера, внутренняя поверхность которого выполнена из материала, активирующего или не активирующего процесс коагуляции крови. Цельную кровь помещают в контейнер, обеспечивают ее коагуляцию, затем коагулированную цельную кровь разделяют на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы по меньшей мере в 1000 g, действующей на цельную кровь по меньшей мере 30 с, и полученный продукт крови удаляют из контейнера. Область техники Данное изобретение относится к многослойному продукту крови, способу получения продукта крови, продукту крови, получаемому способом, и контейнерному средству получения продукта крови. Предпосылки изобретения Система коагуляции человека способна остановить кровотечение и инициировать заживление. Функция системы хорошо известна и широко исследована. Однако важность продуктов коагуляции в инициации заживления признана только в последнее время. Продукты крови, такие как фибриновые уплотнители и концентраты тромбоцитов, производят выделением богатой тромбоцитами плазмы (PRP) из антикоагулированной цельной крови. Наличие тромбоцитов и плазмы частично имитирует естественную систему коагуляции человека при тромбиновой активации. Это дает содержащий тромбоциты аутологический концентрат факторов стимуляции роста в фибриновой матрице. Так композиция может быть использована для покрытия раневых поверхностей и заявлена для инициации заживления. В "Platelet-rich fibrin (PRF): A second-generation platelet concentrate. Part I: Technological concepts andevolution, Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006;101:E37-44" David M. Dohan et al описывают, как получить богатую тромбоцитом твердую фибриновую сетку из цельной крови без добавления каких-либо добавок или реагентов. Протокол PRF (богатый тромбоцитами фибрин): Образец крови берут без антикоагулянта в 10 мл стеклянные пробирки или покрытый стеклом пластик, которые немедленно центрифугируют при приблизительно 400 g в течение 10 мин. Отсутствие антикоагулянта подразумевает активацию в течение нескольких минут большинства тромбоцитов образца крови в контакте со стенками стеклянной пробирки и высвобождение каскадов коагуляции. Фибриноген сначала концентрирован в верхней части пробирки до того, как циркулирующий тромбин трансформирует его в фибрин. Затем в средней части пробирки получается фибриновый сгусток, вытягивая из верхней части эритроцитов на дне пробирки в неклеточную плазму сверху. Тромбоциты плотно улавливаются в фибриновые сети. Успех этой техники полностью зависит от скорости сбора крови и передачи в центрифугу. Конечно, без антикоагулянта образцы крови начинают коагулировать почти немедленно при контакте с пробирочным стеклом, и это занимает минимум несколько минут центрифугирования для концентрации фибриногена в средней части и верхней части пробирки. Быстрая обработка является единственным способом получения клинически применимого PRF сгустка. Если требуется продолжительный период для сбора крови и запуск центрифугирования излишне долгий, последует неудача: фибрин будет полимеризоваться диффузным путем в пробирке, и будет получен только небольшой кровяной сгусток без консистенции. В заключении, протокол PRF делает возможным собрать фибриновый сгусток, наполненный сывороткой и тромбоцитами. Путем удаления сгустка из пробирки, вручную разрезая части красных клеток и вручную выводя жидкости, захваченные в фибриновую матрицу (сыворотка), специалисты-практики получат аутологические фибриновые мембраны. Однако такая фибриновая сетка включает красный тромб, содержащий главную часть красных кровяных клеток, который должен быть вручную отрезан. Кроме того, компоненты полученной фибриновой сетки, такие как фибрин, лейкоциты и тромбоциты, произвольно распределены и запутаны в продукте. Выделение лейкоцитов не описано и не использовалось при низкой силе g, выделение лейкоцитов является низким, поскольку некоторые из них будут расположены в части с красными клетками. Сцепление клеток в фибрине ведет к отсутствию или низкому высвобождению этих клеток и, таким образом, ингибирует зависимый от контакта противомикробный потенциал включенных лейкоцитов. В "Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 2006; 101:E37-44 и 2006; 101 : E45-50" Dohan etal описывают сетку, которая не представляет тромбоцитный концентрат по конфигурации и структуре,который является непосредственно применимым для покрытия раневых поверхностей. Для получения конфигурации и формы/жесткости, применимых для покрытия раневых поверхностей, и предотвращения включения красных кровяных клеток известную богатую тромбоцитом твердую фибриновую сетку нужно будет реконфигурировать вручную и уплотнять. Кроме того, способ содержит несколько этапов и не может быть выполнен в одной закрытой системе и, следовательно, не подходит для клинического применения. В "Cell separation in the buffy coat. Biorheology. 1988; 25(4):663-73" Sutton et al описывают, как антикоагулированную цельную кровь разделить на несколько слоев при центрифугировании или пассивном осаждении: красные кровяные клетки, лейкоциты и тромбоциты (= светлый слой кровяного сгустка) и плазма. Далее, с использованием силы центрифугирования 10000 g в течение 10 мин и с использованием плавучей фракции плотностью 1,053 светлый слой кровяного сгустка может быть фиксирован глутаральдегидом и удален для исследования; однако, это нельзя использовать клинически из-за токсичности глутаральдегида. Существуют некоторые способы экстракции светлого слоя кровяного сгустка из антикоагулированной крови, включая применение веществ с определенной плотностью (то есть Lymphoprep). Кроме необходимости в антикоагулированной крови извлеченные клетки должны быть суспендированы- и смешаны (дезорганизованы) - в плазме, которая обязательно должна быть включена. Европейский патент ЕР 1637145 А описывает способ фильтрации клеток из суспензии (например,кровяные клетки, включая тромбоциты и лейкоциты) через листообразную пористую мембрану, остав-1 022026 ляющий клетки на мембране, как описано. Листовой пористый материал может быть приготовлен из фибрина. Однако получают неслоистую структуру, клетки захватываются в толще пористого материала,а применение аллогенного фибрина повышает риск передачи инфекции от других людей. Кроме того,способ включает несколько этапов и не может быть выполнен в одной закрытой системе и, следовательно, не подходит для клинического применения. Известные способы ограничены в их применении, особенно в клиническом применении. Добавление антикоагулянтов перед разделением клеток дает не полностью аутологические продукты, кроме того,высвобождение веществ, обеспечивающих заживление раны (например, факторы роста), требует смешивания с другими неаутологическими веществами (например, тромбин, Са 2 и т. д.), что ведет к гомогенным окончательным продуктам без желаемого распределения клеток. Известные способы, исключающие антикоагуляцию, приводят к спонтанному распределению клеток, клетки блокируются внутри продукта, практически ограничивая высвобождение и потенциал этих клеток. Кроме того, эти способы требуют ручной обработки вне закрытой системы для получения продукта, физически подходящего для клинического применения, неадекватно определенной обработки,которая ведет к переменному результату с выходом клеток, ниже оптимального. Кроме того, ручная обработка будет требовать рабочее время (затрат) и увеличение времени приготовления. Способы, описывающие хорошо определенную слоистую структуру, зависимые от антикоагуляции и добавления токсических компонентов, не подходят для клинического применения, для фиксации и самодостаточности полученной структуры. Раскрытие изобретения Целью данного изобретения является обеспечение нового и улучшенного продукта крови, который преодолевает или улучшает по меньшей мере один из недостатков известного уровня техники, или который предусматривает полезную альтернативу. Целью данного изобретения, кроме того, является обеспечение нового и улучшенного способа получения продукта крови, который преодолевает или улучшает по меньшей мере один из недостатков известного уровня техники или который представляет полезную альтернативу. Целью данного изобретения является полученный продукт крови, содержащий компоненты из цельной крови: фибрин, тромбоциты и лейкоциты, причем продукт крови содержит три слоя, где второй слой является смежным с первым слоем и третьим слоем, первый слой определяет первую внешнюю поверхность продукта крови, а третий слой определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови, при этом большая часть первого слоя представляет собой фибрин, большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты. Тем самым обеспечен продукт крови с многослойной структурой, каждый слой обеспечивает различную функциональность изза различной композиции каждого из слоев. Продукт крови является самоподдерживающимся, компактным и твердым, и продукт крови имеет такую структуру, что продукт крови непосредственно применяется для предназначенного применения. Под большей частью подразумевается, что компонент, такой как фибрин, тромбоциты или лейкоциты, составляет по меньшей мере 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98,99 или даже 100%, или любой интервал, который может быть определен из комбинаций этих упомянутых процентов, по объему и/или по массе соответствующего слоя и/или по объему и/или массе продукта крови. Каждый из первого, второго и третьего слоя является непрерывным и/или, по существу, параллельным один другому, например, формируя слоистый и/или многослойный продукт крови. Продукт крови предпочтительно включает три слоя, например первый слой, большая часть которого представляет собой фибрин, второй слой, большая часть которого представляет собой тромбоциты, и третий слой,большая часть которого представляет собой лейкоциты. Продукт крови имеет предпочтительно максимальное соотношение ширины к толщине 1, 2, 3, 4 или 5, однако соотношение может составлять до 10,15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или даже до 100, где ширина измеряется вдоль слоев продукта крови, а толщина измеряется перпендикулярно слоям продукта крови. В другом аспекте данного изобретения продукт крови содержит только компоненты из цельной крови. Тем самым представлен продукт крови, который содержит только компоненты из цельной крови,что означает отсутствие добавления каких-либо добавок в цельную кровь и/или продукт крови, и что продукт крови непосредственно получен из цельной крови, фракций цельной крови или комбинаций фракций цельной крови. В другом аспекте данного изобретения продукт крови является аутологическим. В другом аспекте данного изобретения продукт крови является гибким. Тем самым представлен продукт крови, который может выдерживать приложенную нагрузку во время нормального применения без разрыва. Благодаря эластичности продукта крови, продукт крови соответствует наиболее слитно контурам, на которые продукт крови наносится. В другом аспекте данного изобретения продукт крови дополнительно содержит первое вещество,выбранное из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту. Тем самым представлен продукт крови, который включает дополнительные клетки, которые, как известно,важны для регенерации кожи, и, таким образом, далее улучшает потенциальное заживление хронических ран, особенно ран на участках с соседней тканью, низкой жизнеспособности или нежизнеспособной. Ги-2 022026 алуроновая кислота, известный компонент кожи, обладает потенциалом к увеличению способности связывать воду продукта крови, а также к увеличению потенциала для включения/инфильтрации продукта крови на участках с потерей ткани. Данное изобретение также касается продукта крови для терапевтического применения и/или применения продукта крови согласно вышеупомянутому для терапевтического применения. Данное изобретение также касается применения продукта крови для изготовления лекарственного препарата для терапевтического применения. Данное изобретение также касается продукта крови для лечения раны и/или применения продукта крови согласно вышеупомянутому для лечения раны. Данное изобретение также касается применения продукта крови для изготовления лекарственного препарата для лечения раны. Тем самым представлен продукт крови, который является особенно подходящим для изготовления лекарственного препарата для лечения раны. Путем нанесения второй внешней поверхности, определенной третьим слоем, на рану, рану держат и/или поддерживают в основном стерильной, например без инфекции, поскольку большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты, которые представляют собой первые активные клетки и, таким образом, контролирует инфекцию и притягивает другие клетки, включая макрофаги, в то время как большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, которые содержат факторы стимуляции роста, стимулирующие фибробластные клетки, а большая часть первого слоя продукта крови представляет собой фибрин, и, таким образом, первая внешняя поверхность продукта крови обеспечивает эффективную защиту от загрязнения из окружающей среды; первый слой, кроме того, содержит факторы стимуляции роста, которые высвобождаются со временем. Путем нанесения второй внешней поверхности, определенной третьим слоем, на рану ее держат и/или поддерживают в основном без инфекции, поскольку большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты, которые легко высвобождаются из продукта. Лейкоциты являются клетками иммунной системы, защищающей организм от инфекции и чужеродных тел, таким образом они контролируют инфекцию и далее притягивают другие клетки, включая макрофаги. Большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, которые содержат факторы стимуляции роста, стимулирующие клетки. Поскольку лейкоциты будут быстро высвобождаться из продукта, второй слой окажется лицевой стороной к раневой поверхности для оптимальной доставки обеспечивающих рост веществ к ране. Большая часть первого слоя продукта крови представляет собой фибрин, и, таким образом, первая внешняя поверхность продукта крови обеспечивает эффективную защиту от загрязнения из окружающей среды; первый слой,кроме того, содержит обеспечивающие рост факторы, которые высвобождаются со временем. Данное изобретение также касается продукта крови для аутологического применения и/или применения продукта крови для аутологического применения. Данное изобретение также касается применения продукта крови для изготовления аутологического лекарственного препарата. Данное изобретение также касается продукта крови для хирургического применения, например, для закрытия зоны, для предотвращения постхирургического прилипания и/или применения в анастомозных процедурах и/или применения продукта крови согласно вышеупомянутому для хирургического применения. Данное изобретение также касается применения продукта крови для изготовления лекарственного препарата для хирургического применения. В другом аспекте данного изобретения продукт крови предназначен для анастомоза, применения продукта крови, получаемого способом согласно вышеупомянутому, для анастомоза. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используется для изготовления лекарственного препарата для анастомоза. Данное изобретение также касается способа получения продукта крови из объема цельной крови,включающего следующие этапы, на которых:a) помещают цельную кровь в контейнер, внутреннюю поверхность которого выполнена из материала, не активирующего процесс коагуляции цельной крови,b) обеспечивают коагуляцию цельной крови, с) разделяют коагулированную цельную кровь на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы, действующей на цельную кровь, помещенную в контейнер, тем самым цельная кровь разделяется на слои, содержащие эритроциты, продукт крови и сыворотку, из-за различий плотностей между эритроцитами, продуктом крови и сывороткой, причем продукт крови содержит фибрин, лейкоциты и тромбоциты, применяемая центробежная сила, по меньшей мере, в 1000 раз больше силы тяжести, например g, действующей на цельную кровь, центробежная сила изменяется в обратном порядке со временем центрифугирования и d) удаляют продукт крови из контейнера. Тем самым способ обеспечивает продукт крови, получаемый из цельной крови. Способ может быть выполнен в один цикл в закрытой системе, поскольку нет необходимости в выделении эритроцитов; однако, способ также может быть выполнен с использованием выделения эритроцитов. Выход способа экстракции фибрина из цельной крови составляет по меньшей мере выше 10, 20, 30,40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, 99 или даже 100%, тогда как выход способа экстракции лейкоцитов из цельной крови составляет по меньшей мере выше 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, 99 или даже 100%, и выход способа экстракции тромбоцитов из цельной крови составляет по меньшей мере выше 10,20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, 99 или даже 100%. Получаемый продукт крови имеет объем менее чем 30, 20, 15, 10% или даже менее чем 5% объема цельной крови. Тем самым способ обеспечивает продукт крови, получаемый, например, центрифугированием, дающим повышение центробежной силы. Применяемая центробежная сила по меньшей мере в 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000,10000, 11000, 12000, 13000, 14000, 15000, 16000, 17000, 18000, 19000 или даже 20000 раз больше, чем сила тяжести, например g, действующая на цельную кровь, или применяемая центробежная сила находится в любом интервале, который может быть определен из комбинаций упомянутых чисел. Центробежную силу применяют по меньшей мере 30, 40, 50, 60 с, 1-30 мин или применяемая центробежная сила находится в любом интервале, который может быть определен из комбинаций упомянутых чисел. В одном аспекте данного изобретения выход способа экстракции фибрина из цельной крови составляет по меньшей мере около 60%. В одном аспекте данного изобретения выход способа экстракции лейкоцитов из цельной крови составляет по меньшей мере около 50%. В одном аспекте данного изобретения выход способа экстракции тромбоцитов из цельной крови составляет по меньшей мере около 60%. В одном аспекте данного изобретения центробежная сила применяется в течение по меньшей мере 30 с. В одном аспекте данного изобретения продукт крови содержит только компоненты из цельной крови. Тем самым способ обеспечивает продукт крови, происходящий из цельной крови, таким образом,содержащий только компоненты из цельной крови. Таким образом, способ выполняют без добавления каких-либо добавок в цельную кровь и/или продукт крови. В другом аспекте данного изобретения коагуляция крови активируется материалом внутренней поверхности контейнера. Тем самым обеспечивается способ, в котором инициируется коагуляция, когда цельная кровь приводится в контакт с внутренней поверхностью, таким образом можно избежать добавления какого-либо объекта или подобного в цельную кровь для инициации коагуляции. В другом аспекте данного изобретения коагуляцию на этапе b) активируют, подвергая цельную кровь объекту, такому как стеклянная гранула. Тем самым обеспечивается способ, в котором инициируется коагуляция, когда цельная кровь приводится в контакт с объектом, добавленным в цельную кровь. Тем самым коагуляция может быть инициирована в выбранную точку времени, которая оптимальна для способа. В другом аспекте данного изобретения материал внутренней поверхности контейнера выбран из группы, включающей полипропилен, полиэтилен, поликарбонат, полиамид, акрилонитрилбутадиенстирол, стирол, модифицированный стирол, полиуретан и другие полимерные материалы. Полимеры в упомянутой группе, кроме того, могут быть наполнены стеклом. Тем самым обеспечен способ, где контейнер с внутренней поверхностью первого материала может быть типичными тестовыми пробирками или подобным, сделанными из всех видов полимеров, металла или стекла. Материал также может быть выбран так, чтобы свойство материала обеспечивало минимальную силу сцепления/трения между продуктом крови и внутренней поверхностью. Полиамид и полиуретан являются предпочтительными, поскольку эти материалы инициируют коагуляцию на предпочтительном уровне активации, который выше, чем уровень, полученный с использованием других полимеров. В другом аспекте данного изобретения внутренняя поверхность контейнера является обработанной поверхностью, например, покрытой для понижения трения между продуктом крови и внутренней поверхностью первого материала. Тем самым обеспечен способ, где контейнер с внутренней поверхностью первого материала может быть типичными тестовыми пробирками или подобным, сделанными из всех видов полимеров, металла или стекла. Внутренняя поверхность может быть обработанной и/или покрытой поверхностью для получения минимальной силы сцепления/трения между продуктом крови и внутренней поверхностью. В другом аспекте данного изобретения центробежная сила больше, чем сила сцепления, действующая между внутренней поверхностью и продуктом крови. Тем самым обеспечен способ, где центробежная сила является доминантной по сравнению с силой сцепления, которая защищает хорошо определенную слоистую структуру продукта крови. Центробежная сила может быть по меньшей мере в 10, 100,1000, 5000, 10000, 20000, 50000, 100000, 1000000 или даже 10000000 раз больше, чем сила сцепления,или центробежная сила находится в любом интервале, который может быть определен из комбинаций упомянутых чисел. В другом аспекте данного изобретения центробежная сила и время центрифугирования являются такими, что сила сцепления, действующая между внутренней поверхностью и фибрином,ослабевает/преодолевается и таким образом предоставляется возможность фибриновому слою уплотняться/сжиматься. Тем самым обеспечен способ, где центробежная сила является доминантной по сравнению с силой сцепления, которая защищает хорошо определенную слоистую структуру продукта крови. Центробежная сила, необходимая для преодоления прилипания к стенке, будет зависеть от плотности фибрина. Плотность фибрина будет зависеть от нескольких факторов, включающих активацию коагуля-4 022026 ции, концентрацию фибрина, время и т. д. Сила центрифугирования может составлять по меньшей мере 10, 100, 1000, 5000, 10000, 20000, 50000 или даже 100000 g, или центробежная сила находится в любом интервале, который может быть определен из комбинаций упомянутых чисел. В другом аспекте данного изобретения продукт крови, прилипающий к внутренней поверхности,отделяют от внутренней поверхности по меньшей мере один раз, во время этапа с). Тем самым обеспечен способ, где возможное прилипание продукта крови к внутренней поверхности может быть преодолено путем разделения продукта крови по меньшей мере один раз во время этапа с). Разделение может быть выполнено механическим методом, таким как срезание или подобное. Затем может быть выполнено уплотнение фибрина при более низкой силе g, поскольку сила g не нужна для высвобождения фибрина от стенки. В другом аспекте данного изобретения способ дополнительно включает этап уплотнения, где продукт крови уплотняют с помощью уплотняющего средства, такого как фильтр, помещенный в контейнер. Тем самым обеспечен способ, где продукт крови может быть уплотненным, например, фильтром. Фильтр может быть помещен фиксированно или подвижно в контейнере и фильтр может быть использован для выделения продукта крови. В другом аспекте данного изобретения способ дополнительно включает этап выделения, где эритроциты выделяются из продукта крови во время этапа с). Тем самым обеспечен способ, где эритроциты выделяются из сыворотки и продукта крови во время способа. В другом аспекте данного изобретения способ дополнительно включает этап промывания, где продукт крови промывают так, что в основном все эритроциты и/или сыворотка, присоединенные к продукту крови, отделяются. Тем самым обеспечен такой способ, что продукт крови в основном не содержит других компонентов, отличных от самого продукта крови. Сыворотка, образованная во время центрифугирования, может быть использована как жидкость для промывания. В другом аспекте данного изобретения контейнер представляет собой пробирку, имеющую открытый конец, закрывающийся съемной крышкой, и закрытый конец. Тем самым обеспечен способ, где стандартная тестовая пробирка или подобное может быть использовано для выполнения способа. В другом аспекте данного изобретения этап b) предшествует этапу а). Тем самым коагуляция может быть активирована до помещения цельной крови в контейнер, таким образом, контейнеру не нужно содержать какой-либо активатор коагуляции и/или цельной крови не нужно содержать активатор коагуляции, когда цельную кровь помещают в контейнер. Коагуляция в качестве примера может быть активирована во время извлечения крови путем помещения стеклянных гранул в пробирку с извлеченной кровью или выбора материала пробирки, который будет активировать кровь. Таким образом можно избежать добавления какого-либо объекта или подобного в цельную кровь для инициации коагуляции. В другом аспекте данного изобретения этап b) происходит по меньшей мере за 1 мин до этапа а). Тем самым обеспечен способ, где нет необходимости в очень быстрой обработке. Этап b) может происходить по меньшей мере за 30, 40, 50, 60 с, 1-20 мин до этапа а). Уровень активации коагуляции на этапеb) также может контролироваться способом. Это позволяет продлить время между этапами b) и а), поскольку разделение клеток на этапе с) должно происходить до того, как уровни фибрина станут достаточными для ингибирования разделения клеток. В другом аспекте данного изобретения этап b) происходит одновременно с этапом с). Тем самым коагуляция может быть активирована в оптимальную точку времени для способа во время этапа с). Коагуляция может быть активирована/инициирована активатором коагуляции, встроенным в контейнер,и/или с использованием материала внутренней поверхности контейнера, который будет активировать кровь. Коагуляторный материал может быть объектом, таким как стеклянные гранулы, добавленные в цельную кровь в контейнере. В другом аспекте данного изобретения первое вещество, выбранное из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту, добавляют в цельную кровь. Тем самым получают продукт крови, который включает дополнительные клетки, как известно, важные для регенерации кожи, и, таким образом, далее улучшает заживление хронических ран, особенно ран на участках с соседней тканью, низкой жизнеспособности или нежизнеспособной. Гиалуроновая кислота, известный компонент кожи, обладает потенциалом усиления способности продукта крови связывать воду, а также усиливает потенциал включения/инфильтрации продукта крови на участках потери ткани. В другом аспекте данного изобретения уплотняющее средство, такое как фильтр, имеет первое фиксированное положение и второе положение. Фильтр фиксируют в положении в части контейнера,содержащей эритроциты, во время первой части центрифугирования, где лейкоциты и тромбоциты разделены, в то время как фибрин в сыворотке не уплотнился. При условии, что плотность фильтра меньше,чем у сыворотки, высвобождение фильтра вызовет перенесение его в верхнюю часть пробирки и, таким образом, собирание лейкоцитного и тромбоцитного слоя и уплотнение фибринового слоя. В другом аспекте данного изобретения уплотняющее средство, такое как фильтр, фиксируют в первом фиксированном положении путем деформации в стенке контейнера. Фильтр фиксируют путем деформации стенки пробирки. Фильтр высвобождается путем удаления деформации стенки. В другом аспекте данного изобретения плазму, содержащую фибрин, и светлый слой кровяного сгустка, содержащий лейкоциты и тромбоциты, используют вместо цельной крови. Тем самым обеспечен способ, где может быть использована цельная кровь, не содержащая эритроциты, таким образом, продукт крови непосредственно происходит из цельной крови, фракций цельной крови или комбинаций фракций цельной крови. В другом аспекте данного изобретения способ выполняют за 15 мин. Способ выполняют по меньшей мере за 1-30 мин. Данное изобретение также касается продукта крови, получаемого вышеуказанным способом, содержащего компоненты из цельной крови, особенно фибрин, тромбоциты и лейкоциты, причем продукт крови содержит три слоя, где второй слой является смежным с первым слоем и третьим слоем, первый слой определяет первую внешнюю поверхность продукта крови, а третий слой определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови, при этом большая часть первого слоя представляет собой фибрин,большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты. Тем самым продукт крови получают с многослойной структурой; где каждый из слоев обеспечивает различную функциональность из-за различной композиции каждого слоя. Продукт крови является самоподдерживающимся, компактным и твердым, и продукт крови имеет такую структуру, что продукт крови непосредственно используют для назначенного применения. Под большей частью подразумевается, что компонент, такой как фибрин, тромбоциты или лейкоциты, составляет по меньшей мере 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98, 99 или даже 100%, или любой интервал, который может быть определен из комбинаций этих упомянутых процентов по объему и/или по массе соответствующего слоя или по объему и/или по массе продукта крови. Первый, второй и третий слои являются слитными и/или в основном параллельными друг другу, например, формирующими слоистый и/или многослойный продукт крови. Продукт крови предпочтительно содержит три слоя, например первый слой, большая часть которого представляет собой фибрин, второй слой, большая часть которого представляет собой тромбоциты,и третий слой, большая часть которого представляет собой лейкоциты. Продукт крови предпочтительно имеет соотношение максимальной ширины к толщине 1, 2, 3, 4 или 5, однако, соотношение может составлять до 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или даже до 100, где ширину измеряют вдоль слоев продукта крови, а толщину измеряют перпендикулярно слоям продукта крови. В другом аспекте данного изобретения фибрин, содержащийся в продукте крови, представляет собой большую часть первого слоя. Тем самым получают продукт крови, где фибрин, содержащийся во всем продукте крови, представляет собой большую часть первого слоя. В другом аспекте данного изобретения тромбоциты, содержащиеся в продукте крови, представляют собой большую часть второго слоя. Тем самым получают продукт крови, где тромбоциты, содержащиеся во всем продукте крови, представляют собой большую часть второго слоя. В другом аспекте данного изобретения лейкоциты, содержащиеся в продукте крови, представляют собой большую часть третьего слоя. Тем самым получают продукт крови, где лейкоциты, содержащиеся во всем продукте крови, представляют собой большую часть третьего слоя. В другом аспекте данного изобретения продукт крови содержит только компоненты из цельной крови. Тем самым получают продукт крови, который содержит только компоненты из цельной крови, что означает, что добавки не добавляют в цельную кровь и/или продукт крови и продукт крови непосредственно происходит из цельной крови, фракций цельной крови или комбинаций фракций цельной крови. В другом аспекте данного изобретения продукт крови является аутологическим. В другом аспекте данного изобретения продукт крови является гибким. Тем самым получают продукт крови, который может выдержать приложенную нагрузку во время нормального применения без разрыва. Из-за эластичности продукта крови продукт крови соответствует наиболее слитно контурам, на которые продукт крови наносят. В другом аспекте данного изобретения продукт крови дополнительно содержит первое вещество,выбранное из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту. Тем самым продукт крови включает дополнительные клетки, как известно, важные для регенерации кожи и,таким образом, далее улучшает заживление хронических ран, особенно ран на участках с соседней тканью, низкой жизнеспособности или нежизнеспособной. Гиалуроновая кислота, известный компонент кожи, обладает потенциалом повышения способности продукта крови связывать воду, а также увеличения потенциала для включения/инфильтрации продукта крови на участках потери ткани. В другом аспекте данного изобретения продукт крови предназначен для терапевтического применения, применения продукта крови, получаемого способом согласно вышеупомянутому, для терапевтического применения. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используют для изготовления лекарственного препарата для терапевтического применения. В другом аспекте данного изобретения продукт крови предназначен для лечения раны, применения продукта крови, получаемого способом согласно вышеупомянутому, для лечения раны. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используют для изготовления лекарственного препарата для лечения раны. Тем самым получают продукт крови, который особенно подходит для изготовления лекарственного препарата для лечения раны. Путем нанесения второй внешней поверхности,-6 022026 определенной третьим слоем, на рану, ее держат и/или поддерживают в основном стерильной, например,без инфекции, поскольку большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты, которые являются первыми активными клетками, и таким образом контролирует инфекцию и притягивает другие клетки,включая макрофаги, тогда как большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, которые содержат факторы стимуляции роста, стимулирующие заживление и/или грануляцию раны, а большая часть первого слоя продукта крови представляет собой фибрин, и, таким образом, первая внешняя поверхность продукта крови обеспечивает эффективную защиту от загрязнения из окружающей среды; первый слой, кроме того, содержит факторы стимуляции роста, которые высвобождаются со временем. Путем нанесения второй внешней поверхности, определенной третьим слоем, на рану ее держат и/или поддерживают в основном без инфекции, поскольку большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты, которые легко высвобождаются из продукта. Лейкоциты являются клетками иммунной системы, защищающей организм от инфекции и чужеродных тел, таким образом они контролируют инфекцию и далее притягивают другие клетки, включая макрофаги. Большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, которые содержат факторы стимуляции роста, стимулирующие клетки. Поскольку лейкоциты будут быстро высвобождаться из продукта, второй слой окажется лицом к раневой поверхности для оптимальной доставки обеспечивающих рост веществ к ране. Большая часть первого слоя продукта крови представляет собой фибрин, и, таким образом, первая внешняя поверхность продукта крови обеспечивает эффективную защиту от загрязнения из окружающей среды; первый слой, кроме того, содержит факторы стимуляции роста, которые высвобождаются со временем. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используют для аутологического применения, применения продукта крови, получаемого способом согласно вышеупомянутому, для аутологического применения. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используют для изготовления аутологического лекарственного препарата. Данное изобретение также касается продукта крови для хирургического применения, например для закрытия зоны, для предотвращения постхирургического прилипания и/или применения в анастомозных процедурах, и/или применения продукта крови согласно вышеупомянутому для хирургического применения. В другом аспекте данного изобретения продукт крови предназначен для анастомоза, применения продукта крови, получаемого способом согласно вышеупомянутому, для анастомоза. В другом аспекте данного изобретения продукт крови используют для изготовления лекарственного препарата для анастомоза. Данное изобретение также касается контейнера для получения указанного продукта крови, где контейнер для получения продукта крови содержит полиамид и/или полиуретан. Тем самым обеспечен контейнер для получения продукта крови, который активирует коагуляцию цельной крови или, конкретнее,обеспечивает комплементную активацию и в то же время содержит полимерный материал, который является предпочтительнее, чем стеклянные контейнеры, благодаря малой жесткости и/или стоимостей полимеров, и другие полимерные контейнеры из-за их коагуляционно неактивных свойств. Тот факт, что полиамид и/или полиуретан активирует коагуляцию цельной крови, является неожиданным и обеспечивает лучшую альтернативу типичному известному стеклянному контейнеру и коагуляционно неактивному полимерному контейнеру, поскольку контейнер для получения продукта крови объединяет преимущества известного стеклянного контейнера и полимерного контейнера. Данное изобретение также касается контейнера для получения продукта крови, где контейнер для получения продукта крови содержит полиамид и/или полиуретан. Тем самым обеспечен контейнер для получения продукта крови, котороый активирует коагуляцию цельной крови или, более конкретно, обеспечивает комплементную активацию, и в то же время содержит полимерный материал, который предпочтительнее, чем стеклянные контейнеры, благодаря малой жесткости и/или стоимости полимеров, и другие полимерные контейнеры из-за их коагуляционно неактивных свойств. Тот факт, что полиамид и/или полиуретан активирует коагуляцию цельной крови, является неожиданным и обеспечивает лучшую альтернативу типичному известному стеклянному контейнеру и коагуляционно неактивному полимерному контейнеру, поскольку контейнер для получения продукта крови объединяет преимущества известного стеклянного контейнера и полимерного контейнера. Краткое описание графических материалов Данное изобретение объясняется в деталях ниже со ссылкой на графические материалы, в которых фиг. 1 показывает поперечное сечение первого варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 2 показывает поперечное сечение второго варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 3 показывает поперечное сечение третьего варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 4 показывает поперечное сечение четвертого варианта осуществления контейнера по данному изобретению,-7 022026 фиг. 5 показывает поперечное сечение первого варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 6 показывает поперечное сечение второго варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 7 показывает поперечное сечение третьего варианта осуществления контейнерного средства по данному изобретению,фиг. 8 показывает поперечное сечение четвертого варианта осуществления контейнера по данному изобретению,фиг. 9 иллюстрирует поперечное сечение варианта осуществления продукта крови по данному изобретению и фиг. 10 показывает поперечное сечение варианта осуществления продукта крови по данному изобретению. Подробное описание Фиг. 1-4 иллюстрируют соответственно первый, второй, третий и четвертый варианты осуществления контейнера 1. Контейнер 1 в четырех вариантах осуществления содержит полость, имеющую внутреннюю поверхность 3. Полость определена стенкой 4, закрытым концом 12 и открытым концом, закрывающимся крышкой 2. Контейнер 1 означает объем цельной крови 5 и закрывается от окружающей среды с помощью крышки 2, укрепленной на открытом конце контейнера 1. Контейнер 1 может быть сделанно из любого материала, и материал может быть выбран так, чтобы материал контейнера 1 вследствие контакта с цельной кровью 5 через внутреннюю поверхность 3 активировал каскад коагуляции цельной крови 5, который является случаем для первого варианта осуществления на фиг. 1 и третьего варианта осуществления на фиг. 3. Альтернативно материал контейнера 1 может быть выбран таким, что материал является неактивным по отношению к каскаду коагуляции цельной крови 5, что является случаем для второго варианта осуществления на фиг. 2 и четвертого варианта осуществления на фиг. 3, где объект 7 сделан из материала, активирующего каскад коагуляции цельной крови 5, вместо добавления цельной крови 5, так, что объект 7 используется для активации каскада коагуляции цельной крови 5. Внутренняя поверхность 3 контейнера 1 в четырех вариантах осуществления может быть покрыта и/или поверхностно обработана для снижения трения между внутренней поверхностью 3 и какими-либо компонентами крови 5. Кроме того, материал контейнера 1 может быть выбран так, что получается низкое трение между внутренней поверхностью 3 и каким-либо компонентом крови 5, например, путем выбора материала с низкой способностью связывания белка. В третьем и четвертом вариантах осуществления, показанных на фиг. 3 и 4, средство уплотнения 8, такое как фильтр, помещено в контейнер 1, тем самым продукт крови 10 уплотняется против средства уплотнения. Уплотняющее средство 8 может быть заблокировано на закрытом конце 12 контейнера 1, где расположены эритроциты, в начале процесса. В более поздней точке времени уплотняющее средство 8 может быть высвобождено и обеспечено так, что плотность уплотняющего средства 8 ниже, чем у плазмы,уплотняющее средство будет вытолкнуто в верхнюю часть плазмы. Путем удаления крышки 2 продукт крови 10 может быть удален из контейнера 1. Средство уплотнения 8 или часть уплотняющего средства может быть использована для поддерживания продукта крови 10 во время переноса из контейнера 1. Цельная кровь 5 во всех четырех вариантах осуществления подвергается действию центробежной силы 6, действующей вниз, как показано, однако центробежная сила 6 не ограничена действием в показанном направлении. Центробежная сила 6 функционирует как средство разделения, поскольку компоненты цельной крови 5 имеют различные плотности и, таким образом, будут по-разному реагировать на центробежную силу 6. Фиг. 1-4 иллюстрируют четыре варианта осуществления контейнера 1 в точке времени, когда центробежная сила 6 только применена, следовательно, разделение цельной крови 5 не наблюдается, тогда как фиг. 5-8 соответственно показывают первый, второй, третий и четвертый варианты осуществления контейнера 1 в точке времени, когда центробежная сила 6 действовала достаточно долго и с достаточным значением, следовательно, цельная кровь 5 разделилась на сыворотку 9 с фибрином, равномерно распределенным в этой части сыворотки, тромбоцитный и лейкоцитный слой 10 и эритроциты 11. В более поздней точке времени уплотняющее средство 8 может быть высвобождено и обеспечено так, что плотность уплотняющего средства 8 ниже, чем у сыворотки, уплотняющее средство будет выталкиваться в верхнюю часть сыворотки и, таким образом, высвобождать фибрин от стенки и уплотнять фибрин. Путем удаления крышки 2 продукт крови 10 может быть удален из контейнера 1. Средство уплотнения 8 или часть уплотняющего средства может быть использована для поддерживания продукта крови 10 во время переноса из контейнера 1. Фиг. 9 иллюстрирует схематическое поперечное сечение продукта крови 10, содержащего первый слой 21, второй слой 22 и третий слой 23, где второй слой является соседним с первым слоем 21 и третьим слоем 23. Первый слой 21 определяет первую внешнюю поверхность 24 продукта крови 10, а третий слой 23 определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови 10. Большая часть первого слоя 21 представляет собой фибрин, тогда как большая часть второго слоя 22 представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя 23 представляет собой лейкоциты. Таким образом, продукт крови 10 имеет хорошо определенную многослойную структуру, причем каждый слой имеет различные композиции и,следовательно, имеет различные функциональности. Фиг. 10 показывает поперечное сечение продукта крови, полученного экспериментально с использованием тестовой пробирки, сделанной из полипропилена, в качестве контейнера. Данное изобретение описано со ссылкой на предпочтительный вариант осуществления. Однако объем данного изобретения не ограничен иллюстративным вариантом осуществления, и могут быть выполнены изменения, комбинации и модификации без отступления от объема данного изобретения. Примеры Пример 1. 1. Берут пластиковый контейнер (например, 2 мл микроцентрифужная пробирка) и добавляют триггер коагуляции, например 4 стеклянные гранулы (диаметр 2 мм). 2. Извлекают кровь в пластиковый контейнер. 3. Смешивают кровь и активатор коагуляции сверху вниз в течение 2 мин. 4. Вращают контейнер при 16200 g в течение 20 мин. 5. После этого продукт крови будет сформирован в слое между красными кровяными клетками и сывороткой. 6. Удаляют продукт крови с использованием пинцета. В этом способе необходимое время вращения и скорость вращения будут зависеть от мощности активации. Например, если активация коагуляции высокая, клетки должны быть разделены перед их захватыванием в фибриновую сетку, это потребует высокой скорости вращения. Благодаря высокой скорости вращения время вращения может быть небольшим. Пример 2. 1. Берут стандартный 50 мл центрифужный пробирочный контейнер и добавляют триггер коагуляции, например стеклянные гранулы. 2. Извлекают кровь в центрифужную пробирку. 3. Смешивают кровь в пробирке в течение 1 мин. 4. Вращают пробирку при 3000 g в течение 20 мин. 5. Открывают крышку и отделяют фибрин (сформированный в сыворотке в верхней части) от стенки (с использованием тонкого пластикового стека или иглы). 6. Вращают образец еще 5 мин при 3000 g. 7. После этого продукт крови будет сформирован в слое между красными кровяными клетками и сывороткой. 8. Удаляют продукт крови с использованием пинцета. Пример 3. 1. Берут 20 мл контейнер (внутренний диаметр 26 мм), полученный из полиамида или полиуретана. 2. Добавляют крышку и создают вакуум внутри контейнера. 3. Вставляют иглу пациенту. 4. Соединяют иглу с контейнером без потери вакуума. 5. Извлекают кровь в пластиковый контейнер с помощью вакуума. 6. Вращают пробирку при 15000 g в течение 12 мин. 7. После этого продукт крови будет сформирован в слое между красными клетками и сывороткой. 8. Удаляют продукт крови с использованием пинцета. Пример 4. 1. Берут 20 мл контейнер (внутренний диаметр 26 мм), полученный из полиамида или полиуретана. 2. Помещают диск на дно контейнера. Плотность диска должна быть менее чем 1, предпочтительно настолько ниже, насколько возможно. 3. Фиксируют диск на дне контейнера, например, сжимая стенку контейнера. 4. Добавляют крышку и создают вакуум внутри контейнера. 5. Вставляют иглу пациенту. 6. Соединяют иглу с контейнером без потери вакуума. 7. Извлекают кровь в пластиковый контейнер с помощью вакуума. 8. Вращают пробирку при 3000 g в течение 8 мин. На этой стадии лейкоциты окажутся сверху красных кровяных клеток, а фибрин будет полимеризован внутри верхнего слоя сыворотки, поскольку сила g низкая и не способна выдавить его в верхнюю часть тромбоцитов. 9. Высвобождают диск на дне. 10. Вращают пробирку при 3000 g в течение 2 мин. Это вызовет перемещение диска в верхнюю часть, и, таким образом, сбор лейкоцитов и тромбоцитов и сжатие фибринового слоя в один лист. 11. Удаляют крышку и удаляют продукт крови, который расположен в верхней части контейнера. Пример 5. 1. Берут 20 мл контейнер (внутренний диаметр 26 мм), полученный из полиамида или полиуретана. 2. Помещают диск на дно контейнера. Плотность диска должна быть менее чем 1, предпочтительно настолько ниже, насколько возможно. 3. Фиксируют диск на дне контейнера, например, сжимая стенку контейнера. 4. Создают вакуум внутри контейнера и добавляют крышку. 5. Вставляют иглу пациенту. 6. Соединяют иглу с контейнером без потери вакуума. 7. Извлекают кровь в пластиковый контейнер с помощью вакуума. 8. Вращают пробирку при 3000 g в течение 2 мин. На этой стадии лейкоциты окажутся сверху красных кровяных клеток, а фибрин будет полимеризован внутри верхнего слоя сыворотки, поскольку сила g низкая и не способна выдавить его в верхнюю часть тромбоцитов. 9. Ожидают 8 мин. 10. Высвобождают диск на дне. 11. Вращают пробирку при 3000 g в течение 2 мин. Это вызовет перемещение диска в верхнюю часть и, таким образом, сбор лейкоцитов и тромбоцитов и сжатие фибринового слоя в один лист. 12. Удаляют крышку и удаляют продукт крови, который расположен в верхней части контейнера. Как показано в примерах выше, комбинация активации коагуляции, скорости вращения (g), времени вращения, времени перерыва между вращениями может варьировать в некоторых пределах. Это показано в таблицах ниже. Пример 6. Оптимизация относительной силы центрифугирования и времени. 1. Цельную кровь извлекли в 6 мл EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) пробирки (Vacutainer, BD). 2. 20 мл контейнер (внутренний диаметр 26 мм), изготовленный из полиамида или полиуретана, наполнили на 18 мл и вращали при различных RCF в течение различного времени. 3. Образцы (300 мкл) брали шприцем со дна (приблизительно 5 мм выше дна) и верха (приблизительно 5 мм ниже поверхности) после вышеуказанного времени вращения, затем вращение продолжили для получения следующего образца. Образцы со дна разбавили 1:1 с D-PBS (фосфатно-солевой буферный раствор Дюльбекко). 4. Образцы анализировали автоматическим подсчетом клеток (ХЕ 2100, Sysmex Corporation) и рассчитали количества клеток в оригинальном образце. Результаты приведены в миллионах клеток на мл. Миллионы тромбоцитов на миллилитр в верхней (верх) и нижней (дно) части центрифугированной крови при данной относительной силе центрифугирования (g) как функции времени (мин): Миллионы лейкоцитов на миллилитр в верхней (верх) и нижней (дно) части центрифугированной крови при данной относительной силе центрифугирования (xg) как функции времени (минуты): Пример 7. Высвобождение фактора роста как ответ на жидкость хронической раны. 1. Продукт крови создали способом, приведенным в примере 1. 2. Продукты крови разрезали пополам и поместили в 100 мкл PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) 1% BSA (бычий сывороточный альбумин) или в 100 мкл жидкости хронической раны (собранной за 24 ч из венозной язвы ноги) и инкубировали при 37 С. 3. После данных точек времени (1, 2, 3, 5, 7, 14, 22 и 29 ч) образцы вращали при 16000 g в течение 10 мин и супернатант перенесли в новую пробирку, добавили 1/10 th (81 мкл образца + 9 мкл PI) ингибитора протеазы (Complete, Roche) и заморозили при -80 С. 4. Уровни происходящего от тромбоцита фактора роста - АВ определили с использованием набораRD), как описано изготовителем. Рассчитали PDGF-AB концентрации в оригинальных образцах. Высвобождение происходящего от тромбоцита фактора роста АВ (PDGF-AB) из продукта крови(нг/мл продукта крови) как функция времени (часы). Пример 8. 1. Продукт крови создали способом, приведенным в примере 1. 2. Два продукта крови инкубировали в 1 мл DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) (РАА, Германия) при 37 С и 5% СО 2 в течение 48 ч. 3. Параллельно 2 продукта крови инкубировали в 1 мл DMEM (РАА, Германия), включая липополисахарид (10 нг/мл) (LPS, происходящий от Escherichia coli; L2654; Sigma-Aldrich) при 37 С и 5% CO2 в течение 48 ч. 4. Через 48 ч среду перенесли в микроцентрифужные пробирки и вращали 20 мин при 16200 xg. Супернатант заморозили при -80 С до анализа. 5. Матрицы протеомных профилей ARY007 и ARY005 (обе системы RD) выполнили, как описано системами RD, за исключением того, что буфер 4 (ARY007) использовали в обоих наборах. 420 мкл супернатанта разбавили в 500 мкл буфера 4 и 580 мкл буфера 5, как описано системами RD. 6. Реактивность с матрицами определили с использованием хемилюминесцентного субстрата HRP(Immobilon Western, Millipore, США). 7. Излучение света зарегистрировали с использованием системы Fluorchem 3000 (Alpha Innotech,США). Среднюю пиксельную плотность извлекли программным обеспечением Flourchem (Alpha ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Многослойный продукт крови, пригодный для лечения ран, содержащий компоненты из цельной крови: фибрин, тромбоциты и лейкоциты, причем продукт крови содержит три слоя, где второй слой является смежным с первым слоем и третьим слоем, первый слой определяет первую внешнюю поверхность продукта крови, а третий слой определяет вторую внешнюю поверхность продукта крови, при этом большая часть первого слоя представляет собой фибрин, большая часть второго слоя представляет собой тромбоциты, а большая часть третьего слоя представляет собой лейкоциты. 2. Продукт крови по п.1, где большая часть фибрина, содержащегося в продукте крови, содержится в первом слое. 3. Продукт крови по п.1 или 2, где большая часть тромбоцитов, содержащихся в продукте крови,содержится во втором слое. 4. Продукт крови по пп.1, 2 или 3, где большая часть лейкоцитов, содержащихся в продукте крови,содержится в третьем слое. 5. Продукт крови по любому из предыдущих пунктов, где продукт крови содержит только компоненты из цельной крови. 6. Продукт крови по пп.1-4, где продукт крови дополнительно содержит компонент, выбранный из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту. 7. Применение продукта крови по любому из пп.1-6 для изготовления лекарственного препарата для лечения ран. 8. Способ получения продукта крови по п.1 из цельной крови, включающий следующие этапы: а) помещение цельной крови в контейнер, внутренняя поверхность которого выполнена из материала, не активирующего процесс коагуляции цельной крови,b) обеспечение коагуляции цельной крови,c) разделение коагулированной цельной крови на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы по меньшей мере в 1000 g, действующей на цельную кровь по меньшей мере 30 с, иd) удаление продукта крови из контейнера. 9. Способ по п.8, в котором на этапе b) активируют коагуляцию, воздействуя на цельную кровь стеклянной гранулой. 10. Способ по п.8, где этап b) предшествует этапу а). 11. Способ по п.9, где этап b) осуществляют по меньшей мере за 1 мин до этапа а). 12. Способ получения продукта крови по п.1 из цельной крови, включающий следующие этапы:a) помещение цельной крови в контейнер, внутренняя поверхность которого выполнена из материала, активирующего процесс коагуляции цельной крови,b) разделение коагулированной цельной крови на эритроциты, сыворотку и продукт крови с помощью центробежной силы по меньшей мере в 1000 g, действующей на цельную кровь по меньшей мере 30 с, иc) удаление продукта крови из контейнера. 13. Способ по п.12, в котором материал внутренней поверхности контейнера выбран из группы,включающей полипропилен, полиэтилен, поликарбонат, полиамид, акрилонитрилбутадиенстирол, стирол, модифицированный стирол, полиуретан и другие полимерные материалы. 14. Способ по любому из пп.8-13, в котором материал внутренней поверхности контейнера снижает трение между продуктом крови и внутренней поверхностью контейнера. 15. Способ по любому из пп.8-14, где указанная центробежная сила больше, чем сила сцепления,действующая между внутренней поверхностью контейнера и продуктом крови. 16. Способ по любому из пп.8-15, в котором продукт крови, прилипающий к внутренней поверхности, отделяют от внутренней поверхности контейнера по меньшей мере один раз во время этапа с). 17. Способ по любому из пп.8-15, в котором дополнительно уплотняют продукт крови фильтром,размещенным в контейнере. 18. Способ по любому из пп.8-16, в котором дополнительно удаляют эритроциты и/или сыворотку из продукта крови во время этапа с). 19. Способ по п.18, в котором продукт крови отмывают от эритроцитов и/или сыворотки. 20. Способ по любому из пп.8-19, в котором этап b) осуществляют одновременно с этапом с). 21. Способ по п.8, в котором в цельную кровь добавляют компонент, выбранный из группы, включающей фибробласты, кератиноцитные клетки и гиалуроновую кислоту. 22. Способ по п.17, в котором фильтр устанавливают в первое фиксированное положение в верхней части контейнера, содержащего эритроциты, и затем во второе положение в верхней части контейнера. 23. Способ по п.22, в котором фильтр фиксируют в первом положении в верхней части контейнера,содержащего эритроциты, за счет деформации стенки контейнера.
МПК / Метки
МПК: A61K 35/15, A61K 38/36, A61L 24/10
Метки: способы, продукт, получения, многослойный, крови
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/15-22026-mnogoslojjnyjj-produkt-krovi-i-sposoby-ego-polucheniya.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Многослойный продукт крови и способы его получения</a>
Предыдущий патент: Металлическое седло для отсечных клапанов
Следующий патент: Безопасный платеж и способ выставления счета с использованием номера мобильного телефона или абонентского лицевого счета
Случайный патент: Способы лечения злокачественных опухолей in vivo при помощи генотерапии с использованием генов, кодирующих &beta-интерферон