Бис-(2-галоидэтил)аминофенилзамещенные производные дистамицина и их применение в качестве противоопухолевого и противовирусного средства

Данное изобретение касается новых противоопухолевых и противовирусных средств (агентов), родственных известному антибиотику дистамицину А, мн Тихкоторый принадлежит к семейству пирроламидиновых антибиотиков, и сообщается, что он взаимодействует обратимо и избирательно с последовательностями ДНК-АТ, препятствуя как репликации, так и транскрипции [Машге 203, 1064 (1964); РЕВБ Ьепегз 7В ВЕ-А-1795539 описано получение производных дистамицина, в которых формильная группа дистамицина заменена водородом или кислотнь 1 м остатком органической С]-С 4 -алифатической кислоты или Циклопентилпропионовои кислоты.В ЕР-В-246868 описаны аналоги дистамицина А,в которых формильная группа дистамицина заменена ароматическими, ациклическими или гетероциклическими фрагментами, несущими алкилируюЩие группы.В настоящее время было найдено, что вь 1 браннь 1 й класс соединений, охватываемых общей химической формулой ЕР-В-246868, имеет более Ценные биологические свойства, чем родственные соединения предшествующего уровня техники.Соответственно, данное изобретение обеспечивает новые сайт-специфические азотсодержащие соединения, способ их получения, фармацевтические композиции, содержащие их, и их применение в терапии.Данное изобретение представляет новый класс соединений формулы (1)один из К и К] обозначает водород, С] -С 4-алкил,СРЗ и С 1-С 4 -алкокси, а другой независимо обозначает СРЗ, С] -С 4-алкил или С -С 4-алкокси; и Х обозначает галоген.Данное изобретение включает также фармацев тически приемлемые соли соединений формулы (1),так же, как и все возможные изомеры, охватываемые формулой (1), как отдельно, так и в смеси.Данное изобретение включает также в своем объеме как метаболиты, так и фармацевтически приемлемые биопредщественники (известные также как пролекарства) соединений формулы (1).Алкильные и алкокси-группы могут иметь разветвленные или прямые цепи. С] -С 4 -алкильной группой является предпочтительно метил или этил.С] -С 4-алкоксигруппой является предпочтительно метокси или этокси. В фенильном кольце карбамоильная и бис-галоидэтиламино группы находятся по отношению друг к другу предпочтительно в мета- или пара-положениях.К или К] могут быть у любого из свободных атомов углерода фенильного кольца, но, конечно, не у одного и того же атома углерода. Предпочтительно один из К и К обозначает водород или С -С 4-алкил, а другой обозначает С] -С 4 -алкил, СРЗ или С -С 4-алкокси; или К и К], являются одинаковыми и обозначают С -С 4 -алкокси.Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (1) являются солями с фармацевтически приемлемыми неорганическими или органическими кислотами.Примерами неорганических кислот являются хлористоводородная, бромистоводородная, серная и азотная кислоты; примерами органических кислот являются уксусная, пропионовая, янтарная, малоновая, лимонная, винная, метансульфоновая кислоты и п-толуолсульфокислота. Особенно предпочтительным значением п является 3. Х предпочтительно обозначает хлор или бром, в частности, хлор.Предпочтительным классом соединений, согласно данному изобретению, являются соединения формулы (1), в которой п обозначает 3; Х обозначает хлор; один из К и К обозначает водород или С -С 4-алкил, а другой обозначает С] -С 4 -алкил, СРЗ или С -С 4-алкокси; и их фармацевтически приемлемые соли. Примерами характерных соединений в рамках данного изобретения, особенно в форме солей, предпочтительно с хлористоводородной (соляной) кислотой, являются следующие соединения:Соединения данного изобретения и их соли могут быть получены по способу, предусматривающему реакцию соединения формулы (11)в которой п имеет указанные выше значения, с соединением формулы (111)в которой К, К и Х имеют указанные выше значения, а У обозначает гидрокси или отшепляемуюгруппу; и, при желании, образование соли соединения формулы (1) или получение свободного соединения из его соли, и/или, при желании, разделение смеси изомеров соединения формулы (1) на отдельные изомеры.Реакцию соединения формулы (11) с соединением формулы (111) можно проводить в соответствии сВ частности, У в качестве отЩепляемой группы может быть группой, выбранной из галогена, в частности хлора, 2,4,5-трихлорфенокси, 2,4-динитрофенокси, сукцинимидо-Ы-окси и имидазолильной группы.Реакцию между соединением формулы (11) и соединением формулы (111), в которой У обозначает-ОН, предпочтительно проводят при молекулярном соотношении от 1 :1 до 1 12 в органическом растворителе,таком как, например, Диметилсульфоксид, гексаметилфосфотриамид, диметилацетамид, диметилформамид,этиловый спирт, бензол или пиридин, в присутствии органического или неорганического основания, такого, как например, триэтиламин, диизопропилэтиламин,или карбоната или бикарбоната натрия, и конденсирующего агента, такого как, например, Ы -этил-Ы-(3 диметиламинопропил)карбодиимид или предпочтительно Ы,Ы-дициклогексилкарбодиимид. Температура реакции может варьироваться приблизительно от-10 С до 50 С, а время реакции приблизительно от 1 до 24 ч.Реакцию между соединением формулы (11) и соединением формулы (111), в которой У обозначает иную отЩепляемую группу, например, галоген, 2,4,5 трихлорфенокси или сукцинимидо-Ы-окси или имидазолил, можно проводить в аналогичных условиях,но без конденсирующего агента.Соединения формулы (11) являются известными соединениями или могут быть получены известными способами из известных соединений (см., например,Агсашопе ег. а 1., Оа 22 епа С 111 ш. 1 га 1. 97, 1097 (1967). Соединения формулы (Ш) являются также известными соединениями или могут быть получены из известных соединений посредством реакций, хорошо описанных в органической химии (см., например, .1.Ме 1. С 11 еш. 9, 882 (1966) и 25, 178 (1982).Образование соли соединения формулы (1), а также получение свободного соединения из соли можно проводить известными стандартными способами.Хорошо известные процедуры, такие, как фракционная кристаллизация или хроматография, могут затем выполняться для разделения смеси изомеров формулы (1) на отдельные изомеры.Новые соединения формулы (1), полученные в соответствии с вышеописанными способами, могут также очищаться обычными способами, такими как,например, колоночная хроматография на силикагелеили оксиде алюминия и/или перекристаллизация из органического растворителя, такого как, например,низший алифатический спирт, например, Метиловый,этиловый или изопропиловый спирт, или диметилформамид.Соединения данного изобретения могут быть полезны в качестве противоопухолевых и противовируснь 1 х средств. Они обнаруживают, в частности, цитостатические свойства в отношении опухолевых клеток, так что они могут быть полезными, например,для ингибирования роста различных опухолей, таких как, например карциномы, например рака молочной железы, рака легких, рака мочевого пузыря, рака толстой кишки, опухолей яичника и эндометрия млекопитающих, включая человека. Другие неоплазии, в случае которых могли бы найти применение соединения изобретения, представляют собой, например, саркомы, например саркомы мягких тканей и костные саркомы, и гематологические злокачественные состояния, такие как, например, лейкемия.Противоопухолевую активность оценивали 111 у 1 г 1 о при помощи исследований цитотоксичности,проводимых на клетках мышиной лейкемии Ь 1210. Клетки получали из опухолей 1 п у 1 уо и адаптировали в клеточной культуре. Клетки использовали до десятого пассажа. Цитотоксичность определяли подсчетом выживших клеток после 48 часов обработки.Процент роста клеток в обработанных культурах сравнивали с процентом роста клеток в контрольных. Величины 1 С 50, концентрации, ингибируюшей 50% клеточного роста по сравнению с контролями, рассчитывали на основании кривых зависимости ответа от дозы (кривых дозаответной реакции).Соединения данного изобретения испытывали также 111 у 1 уо на мышах, пораженных лейкемией 151210,и на мышиной ретикулосаркоме М 5076, где они обнаружили очень хорошую противоопухолевую активность, согласно следующей процедуре.Мышиная лейкемия 151210 поддерживалась 1 п у 1 уо при помоши внутривенной ( 1./.) серийной трансплантации. Для экспериментов 105 клеток иньецировали внутрибрюшинно (1.р.) самкам мышей СВ 2 Р 1, полученным от С 11 аг 1 е К 1 уе 11[а 1 у. В начале экспериментов животные имели возраст 8 - 10 недель. Соединения вводили внутривенно в день +1 после инъекций опухолевых клеток.Ретикулосаркому М 5076 поддерживали 1 п у 1 уо при помоши внутримышечной (1.ш.) серийной трансплантации. Для экспериментов 5 х 105 клеток иньецировали внутримышечно самкам мышей С 57 В 16, полученным от С 11 аг 1 е К 1 уег 1 га 1 у. В начале экспериментов животные имели возраст 8 -10 недель. Соединения вводили внутривенно на 3-й, 7-ой и 1 1-й дни после инъекций опухолевых клеток.Вычисляли время выживания мышей и рост опухолей, и активность выражали в Т/С% (обработанная/ контрольная группь 1)% и Т.1.% (ингибирование опухоли)%.среднее время выживания обработанной гругпты среднее время выживания необработанной группыТ.1. -% ингибирования опухолевого роста по отношению к контролю, Тох (Токс.) - число мышей, умерших от токсичности.Токсичность определяли, когда мыши умирали до того, как наблюдались значительные потери веса тела у контрольной группы и/или в опытном варианте и/или уменьшение размера селезенки и/или печени.Соединения изобретения обнаружили более вь 1 сокую противоопухолевую активность в этих моделяхНапример, соединения В-[1-метил-4-[1-метил-4[1-метил-4-[3-метил-4-11,11-бис(2-хлорэтил) аминобензол-1-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо] пиррол 2-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо]пропионамидин (внутренний код Р СЕ 29325) и В[-1-метил-4-[1 метил-4- [ 1 -метил-4-[3,5-диметил-4-11 ,11-бис (2-хлорэтил) аминобензол-1-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо]пропионамидин (внутренний код Р СЕ 29721) и соединение предшествующего уровня, согласно ЕРВ-0246868, [3[- 1 -метил-4-[ 1 -метил-4-[ 1 -метил-4- [4-11,11 бис (2-Хлорэтил) аминобензол-1-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо]пиррол-2-карбоксамидо] пиррол-2-карбоксамидо] пропионамидин (внутренний код Р СЕ 24517) испытывали против диссеминированной лейкемии мышей 151210 и получили следующие данные по активности.Представленные в таблице данные показывают,что соединения данного изобретения, несущие заявленные заместители на фенильном кольце бензоильного фрагмента, более активны, чем близкородственное незамещенное соединение предшествующего уровня Р СЕ 24517.Соединения этого изобретения обнаруживают также эффективность в противодействии репродуктивной активности патогенных вирусов и защищают клетки ткани от вирусных инфекций.Например, они обнаруживают активность против ДНК-вирусов, таких как, например, вирус герпеса, например вирусы простого герпеса и опоясь 1 ваюЩего герпеса, вирус коровьей оспы, РНК-вирусов, таких как, например риновирус и аденовирусь 1, и против ретровирусов, таких как, например, вирусы саркомы, например вирус саркомы мышей, и вирусов лейкемии, например вируса лейкемии Фриента. Так,например, вирусы герпеса, Коксаки и респираторносинцитиальные вирусы испытывали в жидкой среде следующим образом. Серийные двухкратные разбавления этих соединений в концентрации от 200 до 1,5 мкг/мл распределяли в количестве 0,1 мл на лунку в 96-луночных микротитрационных планшетах для культуры ткани. Сразу же добавляли клеточные суспензииПосле инкубирования в течение 3-5 дней при 37 С в 5% СО, клеточные культуры оценивали под микроскопом и определяли минимальную ингибируюЩую концентрацию (МИК), причем МИК является минимальной концентрацией, которая определяет уменьшение цитопатического действия по сравнению с инфицированными контролями.Соединения изобретения можно вводить млекопитающим, включая людей, обычными способами,например парентерально (например, внутривенной инъекцией или внутривенным вливанием), внутримь 1 шечно, подкожно, местным нанесением или перорально.Например, подходящая доза для введения взрослым людям для соединения Р СЕ 29325 может быть в пределах приблизительно от 0,1 до 150-200 мг на дозу 1Как уже говорилось, фармацевтические композиции, согласно изобретению, содержат соединение формулы (1) в качестве активного вещества в сочетании с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами (среда для лекарства).Фармацевтические композиции данного изобретения обычно готовят, следуя общепринятым способам, и вводят в фармацевтически подходящей форме.Например, растворы для внутривенной инъекции или внутривенного вливания могут содержать в качестве носителя, например, стерильную воду или,предпочтительно, они могут быть в форме стерильных изотонических солевых (физиологических) растворов.Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например пропиленгликоль, и, при желании, подходящее количество гидрохлорида лидокаина.В формах для местного применения, например кремах, лосьонах или пастах для использования в дерматологическом лечении, активный ингредиент может быть смешан с обычными маслянистыми или эмульгирующими средами.Твердые пероральные формы, например таблетки и капсулы, могут содержать вместе с активным соединением разбавители, например лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал и картофельный крахмал; смазывающие вещества, например диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоли; связующие агенты, например крахмалы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон; дезагрегирующие агенты, например крахмал, альгиновую кислоту, альгинать 1, натриевую соль гликолата крахмала; вспенивающие смеси; красители; подслащивающие агенты; смачивающие агенты, например, лецитин, полисорбать 1, лаурил-сульфаты; и обычные нетоксичные и фармакологически неактивные вещества, используемые в приготовлении фармацевтических готовых форм. Фармацевтический препарат может производиться известным образом, например, с помощью процессов смешивания, гранулирования, таблетирования, покрытия сахаром или покрытия пленкой.Кроме того, согласно данному изобретению,предоставляется способ лечения опухолей и вирусных инфекций нуждающихся в таком лечении пациентов, предусматривающий введение пациенту композиции изобретения.Дальнейшей целью данного изобретения является комбинированный способ лечения рака или улучшения состояний млекопитающих, в том числе людей,страдающих от рака, причем указанный способ предусматривает введение: соединения изобретения или его фармацевтически приемлемой соли, и дополнительного противоопухолевого агента, в количествах и по времени почти вместе друг с другом, достаточных для получения терапевтически полезного эффекта.Данное ИЗООРТСНИС предоставляет также ПрОДуКТЫ, содержащие СОЗДИНСНИС изобретения ИЛИ СГО фармацевтически приемлемую СОЛЬ И ДОПОЛНИТСЛЬ