Пентаозид олеаноловой кислоты и способ его получения из семян плюща обыкновенного

ПЕНТАОЗИД ОЛЕАНОЛОВОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ ИЗ СЕМЯН ПЛЮЩА ОБЫКНОВЕННОГОIV. Гликозидный состав плодов растения,интродуцированного в Крым. Химия природных соединений, 2005,4, 388-389 Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к тритерпеновому гликозиду пентаозиду 3-OL-арабинопиранозил-(12)-OD-галактопиранозил-(12)-O-[D-глюкопиранозил-(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозид олеаноловой кислоты формулы (1) Искендеров Гаибверди Башир оглы,Мусаева Саида Шамиль кызы (AZ) и к способу его получения. Данное химическое соединение, по всей вероятности, как и другие гликозиды олеаноловой кислоты, может быть использовано в качестве одного из основных действующих веществ таких лекарственных препаратов как "Проспан", "Гедерин" и т.д.,приготовленных из плюща обыкновенного (Hedera helix L.). Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к тритерпеновому гликозиду пентаозиду: 3-OL-арабинопиранозил-(12)-OD-галактопиранозил-(12)-O-[-D-глюкопиранозил(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозид олеаноловой кислоты формулы (1) и к способу его получения. Данное химическое соединение, по всей вероятности, как и другие гликозиды олеаноловой кислоты, может быть использовано в качестве одного из основных действующих веществ таких лекарственных препаратов, как "Проспан", "Гедерин" и т.д., приготовленных из плюща обыкновенного (Hedera helix L.). Известно близкое по структуре химическое соединение (2) 3-OD-глюкопиранозил-(12)-OLарабинопиранозил-28-OL-рамнопиранозил-(14)-OD-глюкопиранозил-(16)-OD-глюкопиранозиловый эфир олеаноловой кислоты [1].R2: -D-Glcp-(61)D-Glcp-(41)L-Rhap Известно близкое по структуре химическое соединение - ацетилированный гликозид (3) 3-ODглюкопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозил-28-О-(2-O-ацетилL-рамнопиранозил)-(14)-ODглюкопиранозил-(16)-OD-глюкопиранозид олеаноловой кислоты [2].R2: -D-Glcp-(61)-P-D-Glcp-(41)L-Rhap2OAc Наиболее близким по химическому строению заявляемому изобретению является 3-OLрамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозил-28-OL-рамнопиранозил-(14)-OD-глюкопиранозил-(16)-OD-глюкопиранозид олеаноловой кислоты (4) [3].R2: -D-Glcp-(61)D-Glcp-(41)L-Rhap Представленные в качестве аналогов и прототипа все вышеприведенные тритерпеновые гликозиды по химическому строению являются бисдесмозидами, тогда как заявляемое новое соединение - пентаозид олеаноловой кислоты, выделенный нами, представляет собой монодесмозид. Задачей изобретения является создание нового химического соединения из доступного сырья, а именно из семян плюща обыкновенного. Поставленная задача решается новым соединением, а именно 3-OL-арабинопиранозил-(12)-O-D-галактопиранозил-(12)-O-[-D-глюкопиранозил-(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OLарабинопиранозид олеаноловой кислоты формулы (1) и способом его получения. Известен способ получения тритерпеновых гликозидов из плюща обыкновенного, при котором экстракцию сапонинов из листьев плюща проводят в герметических условиях в водной среде или в среде водного раствора аммиака при температуре 110-200C [4]. Физико-химические свойства пентаозида олеаноловой кислоты Тритерпеновый гликозид, выделенный из семян плюща обыкновенного, представляет собой хроматографически однородный и чистый порошок белого цвета, хорошо растворимый в воде, в водноспиртовых растворах, н-бутаноле, насыщенном водой, не растворимый в различных органических растворителях. Имеет химический состав С 58 Н 94 О 25, молекулярную массу 1190, температуру плавления 188190C, удельное вращение +9 (с 0,1; 50% этанол). Для выяснения химической природы агликона и моносахаридных остатков, входящих в состав углеводной части молекулы гликозида, он подвергался кислотному гидролизу. Выделенный агликон после соответствующей очистки по температуре плавления, удельному вращению, хроматографическому поведению, отсутствию депрессии температуры плавления смешанной пробы с подлинным образцом и ИКспектру был идентифицирован как олеаноловая кислота. В гидролизате после нейтрализации методом тонкослойной хроматографии были обнаружены моносахариды: L-рамноза, L-арабиноза, D-галактоза, Dглюкоза. Установление числа углеводной цепи и места присоединения этой цепи к агликону проводили щелочным гидролизом и метилированием диазометаном с последующим гидролизом продукта. Присутствие в гидролизате исходного гликозида при щелочном гидролизе, а также образование метилового эфира олеаноловой кислоты при кислотном гидролизе метилированного диазометаном пентаозида показывает, что в молекуле этого гликозида отсутствует О-ацилгликозидная связь, т.е. он является монодесмозидом. Это подтверждается также ИК-спектром гликозида, так как имеется полоса поглощения при 1700 см-1 (-СООН группа). Следовательно, данный гликозид имеет одну углеводную цепь, обладающую О-гликозидной связью. Чтобы установить число моносахаридных остатков, входящих в состав углеводной цепи, провели гидролиз гликозида в аналитических условиях, определяя при этом количество выделенного агликона весовым и фотометрическим способами. По выходу агликона рассчитывали молекулярную массу гликозида и соответственно число моносахаридных остатков, входящих в состав углеводной цепи гликозида. Результаты этих исследований дают нам полное основание утверждать, что данный гликозид представляет собой пентаозид олеаноловой кислоты, в состав углеводной цепи молекулы которого входят по одной молекуле L-рамнозы, D-глюкозы, D-галактозы и две молекулы L-арабинозы. Для выяснения строения углеводной цепи, последовательности расположения отдельных моносахаридов в молекуле и моносахарида, непосредственно присоединенного к агликону, гликозид подвергался частичному гидролизу, контролируя ход процесса гидролиза через каждые 30 мин. Установили, что в течение первых 30 мин от молекулы пентаозида отщепляется 1 молекула L-арабинозы и образуется прогенин I С 53 Н 86 О 21, представляющий собой тетраозид. Это свидетельствует о том, что L-арабиноза является терминальным моносахаридом. В следующие 30 мин отщепляется 1 молекула D-галактозы и образуется прогенин II С 47 Н 76 О 16, т.е. триозид. Следовательно, D-галактоза занимает промежуточное положение между терминальной L-арабинозой и углеводной цепью. В последние 30 мин отщепляется 1 молекула Dглюкозы и образуется прогенин III C41H66O11, представляющий собой биозид, т.е. -гедерин, имеющий известное химическое строение: 3-OL-рамнопиранозил-(12)L-арабинопиранозид олеаноловой кислоты. Таким образом, пентаозид олеаноловой кислоты представляет собой -гедерин, включающий до-2 025213 полнительно углеводную цепь из D-глюкозы, D-галактозы и L-арабинозы. Для выяснения характера гликозидных связей между отдельными моносахаридами проводили полное метилирование пентаозида с последующим кислотным гидролизом. Результаты этих исследований показали, что данный гликозид имеет разветвленное строение, причем центром разветвления является Lрамноза, что подтверждает также периодатное окисление; одна ветвь включает только 1 моносахарид D-глюкозу (терминальная), а вторая ветвь состоит из дисахарида, включающего D-галактозу и Lарабинозу (терминальная). После выяснения последовательности расположения моносахаридов в углеводной цепи, характера гликозидных связей между отдельными моносахаридами было необходимо установить конфигурацию Огликозидной связи между моносахаридами, для чего сравнивали молекулярные вращения пентаозида,прогенинов I, II, III, а также метилированных производных соответствующих моносахаридов по правилу Клайна. На основе результатов экспериментов, а также их аналитических рассуждений установлено полное химическое строение этого гликозида и охарактеризовано как 3-OL-арабинопиранозил-(12)-ODгалактопиранозил-(12)-О-[-D-глюкопиранозил-(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозид олеаноловой кислоты. Сравнивая химические строения данного пентаозида и известных тритерпеновых гликозидов олеаноловой кислоты, приведенных в имеющихся монографиях по этим вопросам, в опубликованных работах исследователей различных стран, а также в интернете, авторы заявляемого изобретения пришли к выводу, что выделенный из семян плюща обыкновенного пентаозид олеаноловой кислоты является совершенно новым соединением из класса природных тритерпеновых гликозидов. Возможность осуществления заявляемого изобретения показана на следующем примере. Пример. 0,5 кг высушенных и измельченных семян плюща обыкновенного обезжиривают петролейным эфиром, для чего заливают эфиром до полного покрытия сырья, выдерживают в течение суток при комнатной температуре, а затем экстракт отделяют, экстракцию проводят трижды. Обезжиренные и высушенные семена заливают 50% этиловым спиртом до полного покрытия сырья и экстрагируют в течение 24 ч при комнатной температуре, спиртовое извлечение отделяют от сырья. Экстракцию остатка сырья повторяют еще 3 раза. Все водно-спиртовые экстракты объединяют и упаривают спирт до водного остатка,разбавляют равным объемом воды, раствор с осадком фильтруют через бумажный фильтр, водный фильтрат экстрагируют 0,5 объемом н-бутанола 4 раза в делительной воронке, все н-бутанольные вытяжки объединяют, помещают в делительную воронку и промывают 10% раствором аммиака 4 раза. Аммиачный слой отбрасывают, н-бутанольную вытяжку упаривают до полного удаления органического растворителя, густой остаток растворяют в 50 мл очищенной воды, к водному раствору добавляют 5-кратный объем ацетона, оставляют на 3 ч, раствор с осадком фильтруют через бумажный фильтр, осадок на фильтре высушивают в сушильном шкафу при 90C до постоянной массы. Выход - 15,2 г, что составляет 3,04%. Полученный продукт представляет собой белый аморфный хроматографически однородный порошок и является новым, индивидуальным гликозидом пентаозидом олеаноловой кислоты, ранее неизвестным. Чистоту целевого продукта и отсутствие посторонних примесей устанавливали методом хроматографии на тонких слоях сорбента. Литература 1. Соболев Е.А., Гришковец В.И., Качала В.В., Шашков А.С., Чирва В.Я. Тритерпеновые гликозидыFatsia Japonica. V. Установление строения гликозидов из цветочных бутонов фатсии японской // Химия природных соединений, 2001, 3, с.248-249. 2. Гришковец В.И., Довгий И.И., Качалов В.В., Шашков А.С. Тритерпеновые гликозиды CussoniaPaniculata. II. Ацетилированные гликозиды из листьев Cussonia Paniculata II, Химия природных соединений, 2005,4, с.351-356. 3. Панов Д.А., Гришковец В.И. Тритерпеновые гликозиды Kalopanax Sep-temlobum. IV. Гликозидный состав плодов растения, индуцированного в Крым // Химия природных соединений, 2005, 4, с. 388-389. 4. Борисенко С.Н., Тихомирова К.С., Борисенко Н.И., Ветрова Е.В. Способ получения сапонинов плюща. Патент Российской Федерации 2395516 от 27.07.2010. http://www.freepatent.ru/patents/2395516 Использованные материалы и устройства 1. Колба вместимостью 1 л: GG-17, 29/32; 2. Колба вместимостью 2 л: labware SH DINISOABoro 3.3, 29/32 pyrex; 3. Делительная воронка; 4. Фарфоровые чашки; 5. Стеклянный баллон вместимостью 3 л; 6. Стеклянная воронка; 7. Пульверизатор; 8. Фильтровальная бумага; 9. Пластинки "Silufol" (Чехия) для тонкослойной хроматографии; 10. Пластинки "Sorbfil" (Krasnodar 350072, Russia) для тонкослойной хроматографии; 11. Сушильный шкаф "GOLDTERM F-40"; 12. Водяная баня HH-S; 13. Установка для перегонки; 14. Петролейный эфир (t кип.=70-100C); 15. Семена плюща обыкновенного Hedera helix (0,5 кг). Схема получения пентаозида олеаноловой кислоты из семян плюща обыкновенного ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Пентаозид олеаноловой кислоты: 3-OL-арабинопиранозил-(12)-OD-галактопиранозил(12)-O-[-D-глюкопиранозил-(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозид олеаноловой кислоты формулы (1) 2. Способ получения тритерпенового гликозида пентаозида 3-OL-арабинопиранозил-(12)-O-D-галактопиранозил-(12)-O-[-D-глюкопиранозил-(14)]-OL-рамнопиранозил-(12)-OL-арабинопиранозид олеаноловой кислоты (1) из семян плюща обыкновенного, заключающийся в том, что высушенные и измельченные семена плюща обыкновенного обезжиривают петролейным эфиром, для чего заливают эфиром до полного покрытия сырья, выдерживают в течение суток при комнатной температуре, экстракт отделяют, экстракцию проводят трижды, затем обезжиренные и высушенные семена заливают 50% этиловым спиртом до полного покрытия сырья и экстрагируют в течение 24 ч при комнатной температуре, спиртовое извлечение отделяют от сырья, экстракцию остатка сырья повторяют еще 3 раза,далее все водноспиртовые экстракты объединяют и упаривают спирт до водного остатка, разбавляют равным объемом воды, раствор с осадком фильтруют через бумажный фильтр, водный фильтрат экстрагируют 0,5 объемом н-бутанола 4 раза в делительной воронке, все н-бутанольные вытяжки объединяют,помещают в делительную воронку и промывают 10% раствором аммиака 4 раза, после чего аммиачный слой отбрасывают, н-бутанольную вытяжку упаривают до полного удаления органического растворителя, густой остаток растворяют в 50 мл очищенной воды, к водному раствору добавляют 5-кратный объем ацетона, оставляют на 3 ч, раствор с осадком фильтруют через бумажный фильтр, осадок на фильтре высушивают в сушильном шкафу при 90C до постоянной массы и получают целевой продукт в виде белого аморфного порошка.