Способ очистки водного экстракта растений
Формула / Реферат
1. Способ очистки водного экстракта растений, содержащего водорастворимый углевод, имеющий липидные группы, включающий приведение экстракта в контакт с липофильным компонентом, образующим комплекс с углеводом, удаление материала, имеющего размер, больший, чем у комплекса, путем микрофильтрации и далее удаление комплекса путем ультрафильтрации.
2. Способ по п.1, где растение представляет собой ромашку.
3. Способ по п.2, где экстракт представляет собой экстракт трубчатых цветков (flores tubiformis).
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где углевод содержит также белковые группы.
5. Способ по п.4, где углевод представляет собой эндотоксин.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где липофильным компонентом является масло.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где при микрофильтрации используют фильтр, имеющий размер пор по меньшей мере 0,1 мкм.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где при ультрафильтрации используют фильтр, имеющий размер пор в пределах от 0,001 до 0,01 мкм, например 0,1 мкм.
Текст
013618 Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к способу очистки и, в частности, к способу удаления эндотоксинов из растительных экстрактов. Предшествующий уровень техники Терапевтическое и другие применения растительных экстрактов известны в течение тысячелетий. Для выделения ценных веществ, особенно масел, из трав и других растений использовались все более изощренные технологии. Продукты в основном предназначены для приема через рот. Несомненно, удаление примесей из растительных экстрактов является желательным. В патентном документе US 6024998 описан способ удаления нежелательных липофильных примесей, находящихся в напитках и растительных препаратах. Такие примеси включают пестициды и другие токсичные вещества, которые обычно применяются во время выращивания растений и могут накапливаться в почве, а также сохраняться в частях растений. Способ, описанный в US 6024998, включает смешивание растительного препарата с липофильной фазой, в которой примеси растворяются и таким образом концентрируются, и последующее удаление этой липофильной фазы, например, фильтрацией. Таким способом весь растительный экстракт может быть сохранен, а чужеродные вещества удалены.WO 03/101479 описывает терапевтический продукт, который может содержать экстракт ромашки. Предполагается, что этот экстракт может иметь противовоспалительные свойства, полезные для ослабления воспаления, если продукт вводить предпочтительно путем инъекции. Эндотоксины того типа, который находится в клеточных стенках, являются пирогенами - нежелательными компонентами в составе композиции для инъекций. Типичный верхний регулятивный предел составляет 75 единиц эндотоксина на 1 мл (Ед/мл), причем желательно первоначально сосредоточиться на уровне 100 Ед/мл. Сущность изобретения В настоящее время понятно, что эндотоксины в основном являются водорастворимыми веществами, которые нельзя удалить избирательно, если вообще можно удалить, способом, описанным вUS 6024998. Однако принимается во внимание то, что у эндотоксинов есть липидные группы, которые образуют комплексы с липофильными веществами и могут быть удалены аналогичным способом. В соответствии с настоящим изобретением способ очистки водной композиции, содержащей водорастворимую примесь, имеющую липидные группы, включает приведение композиции в контакт с липофильным компонентом, который образует комплекс с примесью, за этим следует первый этап удаления материала, имеющего больший размер, чем комплекс, и второй этап удаления комплекса. В этом новом способе второй этап удаления - это, как правило, ультрафильтрация, и при этом удаляются эндотоксины, образовавшие комплекс с липофильным компонентом. Первая фильтрация или первый этап удаления иным способом необходимы для того, чтобы удалить более крупные компоненты,которые будут блокировать процесс ультрафильтрации. Краткое описание графических материалов Фиг. 1 и 2 являются блок-схемами, где представлены этапы осуществления изобретения. Описание предпочтительных вариантов осуществления Липофильный компонент, используемый в настоящем изобретении, может быть таким же, как описан в US 6024998. Поскольку такой компонент может образовывать относительно большие капли липофильной фазы, в которой растворены липофильные примеси, характерной особенностью настоящего изобретения является то, что такой материал может также образовывать комплексы с липидными группами в водорастворимой в целом молекуле, такой как эндотоксин; комплекс имеет такой размер, что он может быть удалн ультрафильтрацией, но не микрофильтрацией, что достаточно для удаления капель. Таким образом, хотя используемые в настоящем изобретении материалы могут быть такими же, как и материалы в предшествующем уровне техники, процедура неизбежно будет другой. Эндотоксины, а также антигены являются, главным образом, углеводами, имеющими боковые белковые и липидные группы; наличие липидных групп достаточно для образования комплекса с подходящим липофильным материалом, но оно не нарушает общую водорастворимую природу углеводной молекулы. Такие пирогенные молекулы могут при инъекции оказывать воспалительное действие и поэтому их следует удалять, насколько возможно, из подлежащего инъекции лекарственного средства. Настоящее изобретение, в частности, пригодно для удаления нежелательных компонентов из ромашки, чтобы приготовить лекарственное средство, как описано в WO 03/101479. Цветочная головка(capitulum) растения ромашки (Matricaria recutita) состоит из двух частей, т.е. из жлтых дисковых или трубчатых цветков или цветочков (flores tubiformis или tubiflorum) и расходящихся лучами белых цветков или цветочков (flores ligutatea). Особенный интерес представляют первые из них. С помощью настоящего изобретения пригодный к использованию продукт может быть получен путм отделения трубчатых цветков от остальных частей головки/растения ромашки, экстракции отделнной жлтой части водой и выделения экстракта/удаления эндотоксинов. Однако изобретение применимо к любому травянистому растению или иному растительному препарату; примеры таких растений представлены в патентном документе US 6024998, содержание которого включено в данное описание посредством ссылки.-1 013618 Липофильные компоненты, пригодные для использования в настоящем изобретении, также описаны в US 6024998. Этот компонент может быть животного, растительного, минерального или синтетического происхождения. Предпочтительно он не должен быть токсичным. Примеры подходящих материалов включают жиры, такие как масло какао или кокосовое масло; масла, такие как нейтральные масла,масло подсолнечника и фракционированное кокосовое; воски, такие как стеарины, масло жожобы, пчелиный воск, спермацет и воск карнаубы; парафины, в том числе вазелин, липиды и стерины. Все такие соединения, в чистом виде или в виде смесей, предпочтительно удовлетворяют требованиям Немецкого лекарственного справочника (Deutsches Arzneibuch), Британской фармакопеи (British Pharmacopeia), Европейской фармакопеи (European Pharmacopeia) или Кодекса пищевых и химических веществ США(US Food Chemical Codex). Особенно предпочтительными материалами являются миглиол, диглицериды,триглицериды и рициновое масло. Этот последний материал включает рицинолеиновую кислоту - пример длинноцепной жирной кислоты, содержащей полярную группу. Водный экстракт, который может быть подвергнут способу очистки согласно настоящему изобретению, обычно представляет собой многокомпонентную смесь водорастворимых компонентов. Он может быть получен добавлением воды к соответствующей части растения, чтобы получить суспензию, которую затем обычно нагревают до температуры ниже точки кипения воды, например до 90-94 С, а затем охлаждают до комнатной температуры. Затем водный экстракт подвергают двум этапам фильтрации. Исключительно в целях иллюстрации эти этапы будут описаны далее соответственно как микрофильтрация и ультрафильтрация. Могут быть пригодны также другие методы, такие как использование липофильного барьера. Каждый этап может быть при необходимости осуществлн в одну, две или более стадий. Как указано выше, микрофильтрацию применяют, чтобы удалить материал, который иначе будет снижать эффективность этапа ультрафильтрации. Конечно, микрофильтрация может удалять примеси,как описано в US 6024998. Она обычно включает использование фильтра с размером пор, равным по меньшей мере 0,1 мкм. В последующем этапе ультрафильтрации размер пор обычно составляет от 0,001 до 0,01 мкм, например вплоть до 0,1 мкм. Каждый этап фильтрации предпочтительно осуществляют с помощью мембранного разделения, используя синтетические мембраны или материалы, такие как стекло, металл, керамика или синтетические пластики. Пригодные для микрофильтрации материалы включают полипропилен и политетрафторэтилен. Пригодные для ультрафильтрации материалы включают полиэфирсульфоны и регенерированную целлюлозу. Разделение двух жидких фаз обычно осуществляют с помощью мембранной технологии. Для этой цели предпочтительны трубчатые мембраны или так называемые "мембраны поперечного потока"("cross-flow membranes"). Продукт может предназначаться для использования в терапии. В этом случае он должен быть стерильным, и желательно, чтобы соответствующие этапы его получения проводились в стерильных условиях. Такие этапы представлены позициями 19, 21, 23 и 26 на фиг. 2. Такая процедура проиллюстрирована в следующих далее примерах 1-5. Пример 6 также иллюстрирует изобретение с использованием изменнного протокола. Примеры 7-11 являются сравнительными. Описанная далее экспериментальная работа показывает, что комбинация фильтрационного каскада с добавлением растительного масла приводит к полному или почти полному удалению дебриса клеточных стенок бактерий, известных специалистам в данной области как бактериальные эндотоксины или пирогены. Эти липополисахариды или макромолекулы образованы остатком молекулы липида А, присоединенным к полисахаридной цепи, и являются основной составляющей клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Эти сложные макромолекулы водорастворимы, но неожиданно образуют высокомолекулярные комплексы с растительными маслами, что приводит к появлению суспензии, которую можно отделить с помощью техники разделения по принципу молекулярных сит, предпочтительно с использованием оборудования для ультрафильтрации. Микрофильтрация с фильтрационным разделением по молекулярной массе удобна, так как позволяет удалить значительную часть дебриса клеточных стенок, содержащих муцин фрагментов клеточных стенок из растительных материалов, которые иначе блокировали бы поры ультрафильтрационного оборудования. Анализ бактериальных эндотосинов в образцах, полученных в примерах, проводили стандартным методом анализа "Cambrex PyroGene assay" при разбавлении 1:10000. Примеры 1 и 2. 900 г воды (Aqua purificata - деминерализованная очищенная вода, квалификация по фармакопее Ph.Helv.) смешивали с 45 г жлтых трубчатых цветков ромашки (Chamomilla recutita). Эту смесь нагревали до температуры между 90 и 94 С в течение 20-30 мин. После этого смесь выдерживали при комнатной температуре (от 15 до 25 С) до тех пор, пока е температура не достигала значения между 30 и 35 С. Лекарственный остаток удаляли фильтрацией глубинного слоя. Полученный неочищенный фильтрат осветляли фильтрованием через мембрану с диаметром пор 0,22 мкм.-2 013618 К осветлнному фильтрату добавляли 0,3% (пример 1) или 0,1% (пример 2), относительно массы экстракта, рицинового масла (квалификация по фармакопее Ph. Eur.). Всю смесь гомогенизировали в течение 5 мин. Полученный экстракт фильтровали (в установке с тангенциальным потоком) через мембрану с диаметром пор 0,22 мкм с возвратом ретентата. Полученный фильтрат фильтровали (в установке с тангенциальным потоком) через мембрану с диаметром пор 0,1 мкм с возвратом ретентата. Наконец, полученный фильтрат фильтровали (в установке с тангенциальным потоком) через 1000 кДа мембрану с возвратом ретентата. В каждом окончательном фильтрате содержание бактериального эндотоксина было 100 Ед/мл. Примеры 3-5. Пример 1 повторяли с тем исключением, что вместо рицинового масла к осветлнному фильтрату добавляли, относительно массы экстракта, 0,3% (пример 3), 1,0% (пример 4) и 3,0% (пример 5) миглиола(квалификация по фармакопее Ph. Eur.). В каждом окончательном фильтрате содержание бактериального эндотоксина было 100 Ед/мл. Пример 6. В этом примере был использован изменнный протокол, в котором нагревание и охлаждение осуществляли не в автоклаве, а в двуслойном сосуде объмом 10 л при перемешивании (максимальная температура нагревателя составляла 140 С). Вместо рицинового масла добавляли миглиол. Это был миглиол для парентерального введения"Miglyol 812 for parenteral use" фирмы Hanseler. Смесь вместо гомогенизации перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Все этапы микрофильтрации в соответствии с предыдущим способом осуществляли с помощью систем Millipore Pellicon 2. Для большего практического удобства и сокращения времени на процедуры осветления микрофильтрации в этом примере проводили с использованием следующего оборудования. Кроме того, для стабилизации экстракта добавляли фенол. Количество добавленного фенола составляло 6,0-8,0 мг/мл. Его добавляли после этапа фильтрации 1000 кДа. После добавления суспензию перемешивали в течение приблизительно 10 мин, пока весь фенол не растворялся. В каждом случае содержание эндотоксина было низким. Пример 7 (сравнительный пример). Повторяли пример 1, но исключали два последних этапа фильтрации. В конечном фильтрате остаток бактериальных эндотоксинов составлял 1917 Ед/мл. Пример 8 (сравнительный пример). Повторяли пример 1, но исключали последний этап фильтрации. В конечном фильтрате остаток бактериальных эндотоксинов составлял 1556 Ед/мл. Пример 9 (сравнительный пример). Повторяли пример 1, но не добавляли рициновое масло и исключали два последних этапа фильтрации. В конечном фильтрате остаток бактериальных эндотоксинов составлял 3095 Ед/мл. Пример 10 (сравнительный пример). Повторяли пример 1, но не добавляли рициновое масло и исключали последний этап фильтрации. В конечном фильтрате остаток бактериальных эндотоксинов составлял 4839 Ед/мл. Пример 11 (сравнительный пример). Повторяли пример 1, но не добавляли рициновое масло. В конечном фильтрате остаток бактериальных эндотоксинов составлял 2068 Ед/мл. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ очистки водного экстракта растений, содержащего водорастворимый углевод, имеющий липидные группы, включающий приведение экстракта в контакт с липофильным компонентом, образующим комплекс с углеводом, удаление материала, имеющего размер, больший, чем у комплекса, путем микрофильтрации и далее удаление комплекса путем ультрафильтрации. 2. Способ по п.1, где растение представляет собой ромашку. 3. Способ по п.2, где экстракт представляет собой экстракт трубчатых цветков (flores tubiformis). 4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где углевод содержит также белковые группы. 5. Способ по п.4, где углевод представляет собой эндотоксин. 6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где липофильным компонентом является масло. 7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где при микрофильтрации используют фильтр,-3 013618 имеющий размер пор по меньшей мере 0,1 мкм. 8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где при ультрафильтрации используют фильтр,имеющий размер пор в пределах от 0,001 до 0,01 мкм, например 0,1 мкм. Экстракция
МПК / Метки
МПК: B01D 61/14, A61K 36/28, B01D 11/04
Метки: растений, очистки, способ, экстракта, водного
Код ссылки
<a href="https://eas.patents.su/5-13618-sposob-ochistki-vodnogo-ekstrakta-rastenijj.html" rel="bookmark" title="База патентов Евразийского Союза">Способ очистки водного экстракта растений</a>
Предыдущий патент: Мутации рецептора эпидермального фактора роста
Следующий патент: Замедленно набухающие в воде материалы и способы их использования
Случайный патент: Трубопровод для транспортировки криогенной текучей среды