Пептиды с пониженным уровнем образования димеров

ПЕПТИДЫ С ПОНИЖЕННЫМ УРОВНЕМ ОБРАЗОВАНИЯ ДИМЕРОВ Настоящее изобретение относится к пептидам, которые были сконструированы или получены в целях предупреждения образования димеров или снижения уровня их образования. Область техники, к которой относится изобретение Настоящее изобретение относится к пептидам, которые были сконструированы или получены в целях предупреждения образования димеров или снижения уровня их образования. Предшествующий уровень техники Для распознавания Т-клеточного антигена необходимо, чтобы антигенпрезентирующие клетки(АПК) имели на своей поверхности фрагменты антигена (пептиды), ассоциированные с молекулами главного комплекса гистосовместимости (МНС). Для распознавания фрагментов антигена, презентируемых АПК, Т-клетки используют свои антигенспецифические Т-клеточные рецепторы (TCR). Такое распознавание действует как стимулятор иммунной системы с продуцированием ряда ответов, направленных на уничтожение распознаваемого антигена. В большинстве случаев для специфического распознавания антигенных фрагментов Т-клетками достаточно присутствия в этих фрагментах подпоследовательности аминокислот меньшего размера. Такая подпоследовательность известна как Т-клеточный эпитоп. В случае внеклеточных аллергенов и аутоили аллоантигенов пептиды презентируются на молекулах МНС класса II, которые распознаются CD4-Тклетками. В соответствии с этим особый интерес с точки зрения лечения аллергических и ауто- или аллоиммунных расстройств представляют Т-клеточные эпитопы, связывающиеся с молекулами МНС класса II. Учитывая роль этих эпитопов в иммунной системе очевидно, что они представляют значительный интерес как терапевтические средства, модулирующие иммунную систему индивидуумов. Так, например, было продемонстрировано, что введение пептидных эпитопов индивидуумам приводит к индуцированию толерантности к антигенам, от которых происходит данный эпитоп. Терапевтические средства,полученные на основе такого действия, могут оказаться в высокой степени эффективными для предупреждения и лечения аллергии и ауто- или аллоиммунных заболеваний, где для такого предупреждения и лечения желательно ингибирование иммунного ответа. Замедление дальнейшего прогресса в этой области связано с рядом проблем. Во-первых, последовательности эпитопов, происходящие от аллергенов и ауто- или аллоантигенов, часто являются плохорастворимыми, что создает определенные трудности при получении этих последовательностей и их введении индивидуумам. Во-вторых, большинство эпитопов обычно плохо охарактеризованы. Большинство эпитопов, известных специалистам, идентифицированы лишь приблизительно по их коровой последовательности, присутствующей в какой-либо области более длинной последовательности, обычно состоящей приблизительно из двадцати аминокислот. Даже сама коровая последовательность часто оказывается не идентифицированной. Из-за отсутствия точных данных о коровой последовательности эпитопа осуществление модификации известных Т-клеточных эпитопов, проводимой для улучшения их растворимости, не представляется возможным, поскольку такая модификация может приводить к повышению риска элиминации коровых остатков, необходимых для распознавания Т-клетками. Описание сущности изобретения Пептиды, содержащие Т-клеточные эпитопы, могут иметь тенденцию к образованию димеров в растворе. Это может приводить к потере активных молекул, а в случае смесей различных пептидов - к образованию новых продуктов разложения или гетеродимеров, способных повышать уровень связыванияIgE или IgG на поверхности тучных клеток. Димеризация может также приводить к агрегации пептидов в виде нерастворимого осадка. Таким образом, пептиды, содержащие Т-клеточные эпитопы, часто являются неподходящими для сообщения толерантности индивидууму, поскольку они вызывают нежелательные иммунные ответы и/или не могут сохраняться в течение длительных периодов времени без образования агрегатов, и/или получение таких пептидов и их введение индивидуумам связано с определенными проблемами. Минимальная аминокислотная последовательность Т-клеточного эпитопа, необходимая для связывания с молекулой МНС класса II, может быть точно идентифицирована и обычно содержит приблизительно девять аминокислот. Авторами настоящего изобретения было установлено, что модификация специфических остатков в минимальной последовательности эпитопа может приводить, в частности, к образованию димера, либо модификация специфических остатков, фланкирующих минимальную последовательность, может приводить к снижению уровня образования димеров. Уровень образования димеров может быть также снижен путем добавления некоторых специфических агентов в композицию, содержащую немодифицированную последовательность такого пептида. Таким образом, композицией,содержащей пептид, модифицированный, как описано выше, или содержащей пептид и агент, который ингибирует образование димера, является композиция, в которой пептид присутствует преимущественно в мономерной форме, что приводит к улучшению растворимости и не оказывает какого-либо влияния на способность этого пептида стимулировать специфические Т-клетки, причем в этом случае данный пептид имеет достаточно малый размер, не позволяющий ему образовывать явную третичную структуру,которая должна сохранять конформацию эпитопа, перекрестно связывающего с IgG или IgE. Следовательно, последующие иммунные ответы, вызываемые таким перекрестным связыванием, продуцироваться не будут, а поэтому указанные композиции являются в высокой степени эффективными для сообщения индивидууму толерантности к белку, от которого происходит данный пептид. Кроме того, компози-1 018110 ции согласно изобретению с пониженным уровнем образования димеров имеют еще и то преимущество,что они сообщают индивидуумам толерантность к этим пептидам, поскольку пептидные димеры могут быть более иммуногенными, что, возможно, обусловлено их перекрестным связыванием с иммуноглобулинами. В соответствии с этим настоящее изобретение относится к композиции, содержащей:a) i) по меньшей мере один пептид длиной в 9-25 аминокислот, где указанный пептид содержит область, включающую по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, связывающийся с МНС класса II; иii) по меньшей мере один агент, ингибирующий образование димеров; илиb) i) по меньшей мере один пептид, определенный в пункте a)i), где аминокислотная последовательность данной области дополнительно модифицирована так, чтобы это способствовало снижению уровня образования димера; и, необязательно,ii) по меньшей мере один агент, ингибирующий образование димера,где минимальная часть пептида указанной композиции присутствует в растворе в виде димера. Обычно по меньшей мере один пептид по п. a)i) может быть использован в терапии, направленной на сообщение индивидууму толерантности к этому пептиду. Подробное описание изобретения Следует отметить, что инсерция, делеция или замена аминокислот в соответствии с настоящим изобретением не означают фактическую физическую инсерцию, делецию или замену аминокислот, т.е. вместо этого может быть синтезирован пептид, содержащий последовательность, в которой имеет место инсерция, делеция или замена (или которая является конечным результатом такой инсерции, делеции или замены). Аминокислоты. В представленной ниже таблице указаны свойства аминокислот. Молекулярные массы указаны ниже под трехбуквенным кодом каждой аминокислоты. Указанными молекулярными массами являются молекулярные массы нейтральных свободных аминокислот; причем массы остатков могут быть получены путем вычитания одного эквивалента воды (18 г/моль). Графический материал был получен от The бретению, обычно представляет собой минимальную аминокислотную последовательность, которая способна связываться с молекулами класса II и которая при ее презентации Т-клеткам вместе с молекулами класса II на клеточной поверхности способна стимулировать эти Т-клетки. Таким эпитопом обычно является эпитоп, который связывается с молекулой человеческого МНС класса II, такой как любая упомянутая в описании молекула. Молекула МНС класса II состоит из двух белков,и , каждый из которых кодируется различными генами. У человека имеются три кластера генов, кодирующих различные белкии . Такими кластерами являются кластеры антигенов лейкоцитов человека (HLA), DR, DQ и DP. Каждый кластер содержит множество различных генов А, кодирующих различные варианты белка , и множество различных генов В, кодирующих различные варианты белка . Поэтому полученные гетеродимеры МНС класса II имеют в высокой степени широкое разнообразие, а следовательно, существуют Т-клеточные эпитопы, с которыми они связываются. Сайт связывания молекул МНС класса II состоит из двух отдельных белков, которые образуют карман. Этот карман является незамкнутым, что, теоретически, обеспечивает связывание с пептидом любой длины. Однако в сам карман могут входить только 9 аминокислот. По наличию участка, имеющего до 9 аминокислот, присутствующих в данном кармане, можно определить, будет ли связываться данный пептид с молекулой МНС класса II, и может ли она презентироваться Т-клеткам. Поэтому указанный участок, имеющий до 9 аминокислот, представляет собой минимальную последовательность, которая необходима для связывания с МНС класса II. Вообще говоря, предполагается, что такая последовательность при ее презентации Т-клеткам в комбинации с МНС класса II на клеточной поверхности будет обладать способностью стимулировать Т-клетки. Однако это может быть подтверждено экспериментально стандартными методами, известными специалистам. Такие методы могут включать контактирование эпитопа с Т-клетками в образце, взятом у индивидуума, в условиях, стимулирующих взаимодействие эпитопа с Т-клетками, а затем определение наличия стимуляции этих Т-клеток. Стимуляция Т-клеток может быть определена любым подходящим методом,например путем детектирования продуцирования цитокинов Т-клетками, где продуцирование цитокинов указывает на стимуляцию Т-клеток. Подходящими цитокинами являются интерферон-, интерлейкин-4 и интерлейкин-13. Продуцирование цитокинов может быть детектировано любым подходящим методом,например с помощью анализа ELISA, ELISPOT или проточного цитометрического анализа. Т-клетки в образце, взятом у индивидуума, обычно присутствуют в популяции мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), выделенных из пробы крови или сыворотки, взятой у данного индивидуума. Т-клеточный эпитоп, согласно изобретению связывающийся с МНС класса II, обычно состоит из 8 или 9 аминокислот, но он может также состоять из 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 аминокислот. Аминокислотная последовательность эпитопа в широком смысле может быть также определена путем сравнения с последовательностью сайта связывания молекул МНС класса II. Такой сайт связывания имеет специфическисвязывающиеся карманы, которые соответствуют первому и второму заякоривающим положениям в последовательности связывающего пептидного эпитопа. Связывающие карманы определяют по положениям аминокислот в последовательности молекулы МНС класса II, и обычно они не являются абсолютно селективными для конкретной аминокислоты в данном эпитопе. Поэтому специфичность связывания пептидов с любой данной молекулой МНС является относительно широкой. Таким образом, пептиды, связывающиеся с МНС того же аллотипа, имеют некоторую степень сходства,но они необязательно должны быть идентичными. Для наиболее распространенных человеческих МНС класса II, HLA-DR, ключевыми заякоривающими положениями для связывания со связывающими карманами являются положения 1, 4, 6, 7 и 9 пептидного эпитопа (если считать от самого крайнего N-концевого остатка, присутствующего в кармане, до самого крайнего С-концевого положения). Поэтому различные аллели HLA-DR, которые имеют в своих связывающих карманах аналогичные аминокислоты, обычно связываются с аналогичными аминокислотами пептидов в положениях 1, 4, 6, 7 и 9. В соответствии с этим, область, содержащая Т-клеточный эпитоп, связывающийся с молекулой МНС класса II, предпочтительно имеет аминокислоты в положениях,соответствующих положениям 1, 4, 6, 7 и 9, которые позволяют связываться с аллелями HLA-DR очень широкого ряда. Примеры характерных связывающих свойств различных аллелей HLA-DR представлены ниже. В аллелях DR с глицином в положении 86 -цепи, в основном, преобладают гидрофобные остатки с крупными боковыми цепями (Trp, Tyr, Phe) в 1 положении пептида, тогда как в аллелях с валином в положении 86 размер кармана ограничен, и в этом положении преобладают гидрофобные остатки с небольшими боковыми цепями (Val и Ala). Гидрофобные аминокислоты среднего размера, Leu и Ile, часто встречаются во всех аллелях DR. Аллели DR с Gln в положении 70, с лизином в положении 71 и аргинином или Gln в положении 74-цепи имеют суммарный положительный заряд в кармане 4, что требует присутствия отрицательно заряженных аминокислот Asp и Glu в положении 4 связывающего пептида (как, например, в DRBl0301). Аллели DR с этим мотивом ассоциируются с развитием двух аутоиммунных заболеваний: системной красной волчанки и тиреоидита Хашимото. Аллели DR с Gln или Arg в положении 70, Arg или Lys в положении 71 и Glu или Ala в положении 74 -цепи связываются с пептидами, аналогичными пептидам, указанным непосредственно выше, поскольку значительное различие наблюдается только в положении 74. Однако если Ala присутствует в положении 74, то размер кармана 4 увеличивается, и этот карман может включать более крупные аминокислоты, такие как Phe, Trp и Ile (как, например, в DRBl0401, 04, 05). Предполагается, что аллели, несущие Glu в положении 74, допускают присутствие небольших полярных остатков, таких как Ser и Thr в положении 4 связывающего пептида. Аллели DR с этим мотивом ассоциируются с риском развития ревматоидного артрита. Аллели DR с Asp в положении 70, Glu или Arg в положении 71 и Leu или Ala в положении 74 цепи не содержат пептидов с отрицательно заряженными аминокислотами в положении 4 пептида (например, DRBl0402). Это обусловлено присутствием Asp в положении 70. Аллели DR с этим мотивом ассоциируются с развитием аутоиммунных заболеваний, таких как ювенильный ревматоидный артрит(ЮРА), вульгарная пузырчатка и аллергическое бронхопульмонарное заболевание/аллергический бронхопульмонарный синдром. Полиморфизм в положении 9 -цепи определяет размер связывающего кармана 9 во всех аллеляхDR. Аллели с Trp в этом положении допускают присутствие только небольших аминокислот в положении 9 связывающего пептида, например Ala, Val, Gly, Ser, Thr, Pro (как, например, в DRBl0101 и 1501).Glu в положении 9 в комбинации с Asp в положении 57 делает карман 9 отрицательно заряженным, что облегчает включение положительно заряженных аминокислот, таких как Lys (как, например, вDRBl0401 и 0404) и гистидин (как, например, в DRBl0402). В большинстве аллелей МНС класса IIAsp в положении 57 образует солевую мостиковую водородную связь с Arg в положении 76, в результате чего данный карман также может включать алифатические и полярные аминокислоты. В случае, когдаAsp в положении 57 заменен Ser (например, в DRBl0405) или Ala (DQ8), сеть водородных связей разрушается и Arg в положении 76 может сильно притягивать отрицательно заряженные аминокислоты,такие как Asp или Glu в положении 9 связывающего пептида (как, например, в DRBl0405). Поэтому репрезентативная предпочтительная последовательность для эпитопа имеет, например,Trp, Tyr, Phe, Val или Ala в положении 1; Asp, Glu, Ser или Thr в положении 4 и Ala, Val, Gly, Ser, Thr,Pro в положении 9. Другим примером предпочтительной последовательности для эпитопа является последовательность, которая имеет крупную ароматическую или гидрофобную аминокислоту в положении 1, например Tyr, Phe, Trp, Leu, Ile или Val, и небольшую незаряженную аминокислоту в положении 6,например Ser, Thr, Ala, Pro, Val, Ile или Met. Приблизительно 87,5% пептидов, связывающихся со всеми молекулами МНС класса II или их комбинациями, кодируемыми аллелями DRBl0101, 0401 и 0701,содержат этот мотив. Кроме того, поскольку Т-клеточные эпитопы, происходящие от аллергенов и аутоиммунных антигенов, обычно не содержат большого числа повторов данной аминокислоты или данных аминокислот, то предпочтительные эпитопы согласно изобретению обычно содержат по меньшей мере 5,6, 7 или 8 различных аминокислот. Точная аминокислотная последовательность эпитопа может быть предсказана с помощью компьютерных алгоритмов и подтверждена с помощью биохимического анализа in vitro. Подходящим коммерчески доступным алгоритмом является алгоритм EpiMatrix (EpiVax Inc.). Другие алгоритмы имеются,например, на сайтах http://www.imtech.res.in/raghava/propred/ и http://www.imtech.res.in/raghava/mhc2pred/. Анализ с использованием этих алгоритмов обычно включает "синтаксический" анализ путем разложения более крупной полипептидной последовательности на множество перекрывающихся небольших пептидов. Затем последовательности этих небольших пептидов анализируют с использованием указанного алгоритма для идентификации пептидов, которые, как предполагается, связываются с молекулами МНС класса II. Перекрывающиеся небольшие пептиды обычно являются 9-мерами. Затем пептиды-кандидаты, которые получили наиболее высокую оценку в данном анализе, анализируют на их способность связываться с панелью молекул МНС класса II, кодируемых различными аллелями класса II in vitro, с помощью стандартных анализов на связывание. Так, например, может быть проведен анализ на конкурентное связывание с МНС класса II, где каждый пептид анализируют на его способность вытеснять известный контрольный связывающий пептид из каждой молекулы исследуемого аллотипа человеческого МНС класса II. В этом анализе каждому пептиду присваивали величину IC50(концентрацию, при которой достигается 50%-ное ингибирование связывания контрольного пептида). Чем ниже IC50, тем выше аффинность связывания пептида с молекулой данного аллотипа МНС класса II. В качестве эпитопа или эпитопов в полипептиде принимают такие пептиды, которые обнаруживают наибольшую аффинность связывания с молекулами МНС класса II. Особенно предпочтительные эпитопы обнаруживают высокую аффинность связывания с различными молекулами класса II, кодируемыми более чем одним, предпочтительно двумя, а более предпочтительно тремя, четырьмя или пятью аллелями МНС класса II. Особенно предпочтительными эпитопами являются эпитопы, присутствующие в областях, которые имеют тенденцию к образованию димера, как определено ниже. Области, содержащие по меньшей мере один Т-клеточный эпитоп, связывающийся с МНС класса II. Биохимические анализы для идентификации Т-клеточного эпитопа обычно не позволяют определять положение минимальной последовательности эпитопа в более крупной последовательности с большей точностью, чем это может быть сделано приблизительно для 12 аминокислот, а обычно 15, 20 или более аминокислот. Это объясняется тем, что крупная последовательность должна быть физически фрагментирована на менее крупные перекрывающиеся пептиды, либо менее крупные перекрывающиеся пептиды должны быть получены de novo перед проведением in vitro анализа на способность этих пептидов связываться с молекулами МНС класса II. Для каждого специалиста в данной области очевидно, что чем меньше длина используемых фрагментов перекрывающегося пептида, тем более трудоемким является этот способ и тем больше времени требуется для его осуществления. Следовательно, в большинстве случаев эпитопы идентифицируют как эпитопы, содержащиеся в более крупной полипептидной области. Следует также отметить, что пептиды согласно изобретению могут содержать такую более крупную область. В соответствии с этим в пептидах согласно изобретению область, содержащая Т-клеточный эпитоп, связывающийся с МНС класса II, обычно имеет длину 8 или 9 аминокислот, однако она может иметь длину 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислот. Область согласно изобретению обычно имеет последовательность, которая способна образовывать димер. Следует отметить, что при этом может образовываться гомодимер (т.е. пептидные мономеры могут ассоциироваться с другими идентичными пептидными мономерами), и гетеродимер (т.е. пептидные мономеры могут ассоциироваться с другими пептидными мономерами). Следует также отметить, что термин "последовательности, которые имеют тенденцию к образованию димера", может означать последовательности, которые имеют тенденцию к образованию олигомеров высшего порядка, таких как тримеры, тетрамеры и тому подобные. Такая область согласно изобретению может содержать любую последовательность, имеющую тенденцию к образованию димера, или состоять из любой такой последовательности. Конкретная аминокислотная последовательность в данной области, которая стимулирует образование димера, может присутствовать в минимальной последовательности Т-клеточного эпитопа, связывающейся с МНС класса II, либо она может составлять остатки, которые фланкируют эту последовательность. Таким образом, последовательность, имеющая тенденцию к образованию димера, может целиком состоять из минимальной последовательности Т-клеточного эпитопа, связывающейся с МНС класса II. Особенно предпочтительные последовательности содержат по меньшей мере один цистеиновый остаток. Для каждого специалиста в данной области очевидно, что любой пептид, содержащий один цистеиновый остаток, может образовывать димеры либо с идентичным пептидом, либо с другими цистеинсодержащими пептидами, с которыми он может контактировать. Пептиды, содержащие два или более цистеинов, могут образовывать длинные цепи, которые затем могут образовывать агрегат. Такое образование димеров/агрегатов приводит к риску связывания с IgE или IgG и, тем самым, к риску продуцирования местного воспалительного ответа. В соответствии с этим такая область согласно изобретению обычно происходит от белка с большим количеством цистеиновых остатков. Так, например, область согласно изобретению может происходить от белка, имеющего более чем 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35% цистеиновых остатков от общего числа аминокислотных остатков в белке. Область согласно изобретению предпочтительно выбирают из последовательности, присутствующей в таком белке, который имеет меньшее число цистеиновых остатков. В соответствии с этим такая область может содержать максимум 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20% цистеиновых остатков от общего числа аминокислотных остатков в данной области. Цистеиновые остатки могут присутствовать в минимальной последовательности эпитопа, связывающейся с МНС класса II, либо они могут составлять остатки, фланкирующие эту последовательность. Другие последовательности, имеющие тенденцию к образованию димера, могут быть идентифицированы с помощью анализа in silico с применением подходящих компьютерных методов, либо с помощью анализа in vitro с применением подходящих лабораторных методов, которые позволяют количественно оценивать часть последовательности, присутствующей в мономерной или димерной форме, представленной ниже. Для последовательности, имеющей тенденцию к димеризации, часть последовательности, присутствующей в виде димера, может быть минимальной, т.е. она может составлять менее чем примерно 0,5 или 1% в твердом состоянии, но в материале, который хранился в растворе в течение определенного периода времени в соответствующих условиях, ее размер обычно возрастает со временем и составляет по меньшей мере примерно 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90%. Подходящими периодами времени и подходящими условиями являются периоды времени и условия, при которых специалист в данной области может с полным основанием предположить, что такая последовательность будет храниться в растворе до ее использования. Так, например, обычно, такой период времени составляет примерно 24 ч, примерно 48 ч или примерно 72 ч, хотя некоторые растворы могут храниться в течение более длительных периодов времени, например, по меньшей мере, в течение недели,месяца, 6 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет или более. Условиями хранения обычно являются условия хранения при комнатной температуре и при соответствующей относительной влажности или обычно при 25 С и относительной влажности 60%, однако специалистом могут быть выбраны любые стандартные условия хранения, например хранение приблизительно при 4, -20 или -80 С. Под восприимчивостью иммунной системы подразумевается такое состояние иммунной системы,при котором лишь небольшая часть димера может продуцировать нежелательный иммунный ответ. Оценка части последовательности, присутствующей в данной форме, может быть осуществлена подходящим методом, таким как, например, электрофорез в аналитическом геле, проводимый в неденатурирующих условиях. В таком методе раствор данной последовательности подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле вместе с набором стандартных маркеров молекулярной массы. Если последовательность образует димеры, то полоса белка будет наблюдаться в геле, соответствующем молекулам,молекулярная масса которых приблизительно в два раза превышает молекулярную массу, вычисленную для всех аминокислот последовательности в сумме (аналогичным образом, любые присутствующие тримеры или тетрамеры будут наблюдаться как полосы, соответствующие молекулам с молекулярной массой, которая приблизительно в три или четыре раза превышает молекулярную массу, вычисленную для суммы масс остатков аминокислот данной последовательности). Поскольку редко бывает, чтобы вся последовательность на 100% присутствовала в олигомерной форме, то может также наблюдаться вторая полоса, соответствующая молекулам, молекулярная масса которых приблизительно равна молекулярной массе, вычисленной для суммы масс аминокислот данной последовательности, т.е. это означает, что данная последовательность имеет мономерную форму. Относительная интенсивность полос может быть использована для количественной оценки части последовательности, которая присутствует в каждой форме. Аналогичным образом, молекулярная масса может быть оценена альтернативными методами, такими как, например, аналитическое центрифугирование, масс-спектрометрия или эксклюзионная хроматография. Альтернативно, олигомеры могут быть количественно оценены с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ), где димеры и олигомеры высшего порядка отделяют от мономеров, исходя из различий их гидрофобности. Идентификация молекул достигается с помощью масс-спектрометрического детектирования. Те же самые методы могут быть адаптированы для выявления тенденции данного пептида к гетеродимеризации с любым другим пептидом или с любой другой молекулой. Кроме того, область согласно изобретению может иметь растворимость менее чем 3,5 мг/мл в водном растворе при рН 2,0-12,0, или рН 2,0-11,0, рН 2,0-10,0, рН 2,0-9,0, рН 2,0-8,0, или рН 2,0-7,0; и/или содержать 1, 2, 3 или 4 цистеиновых остатков; и/или иметь изоэлектрическую точку ниже 4,5; и/или оценку GRAVY выше +0,25. Эти параметры могут быть оценены любым подходящим методом. Так, например, растворимость может быть оценена стандартными методами in vitro, а оценка GRAVY и значение изоэлектрической точки могут быть установлены in silico с применением подходящих компьютерных методов, таких как программа ProtParam (Gasteiger E. et al., pp. 571-607 The Proteomics ProtocolsHandbook, Humana Press (2005); John M. Walker (ed, которая имеется на сайтеhttp://www.expasy.ch/tools/protparam.html. Пептиды. Пептид согласно изобретению может содержать нативную последовательность области, определенной выше, или он может состоять из такой последовательности, либо он может содержать нативную последовательность области, сконструированную в целях снижения тенденции к образованию димера, или состоять из такой последовательности. Указанная область была сконструирована путем введения модификации в ее нативную последовательность. Особенно предпочтительными модификациями являются модификации, при которых по меньшей мере один цистеиновый остаток в нативной последовательности данной области заменен серином, 2-аминомасляной кислотой, аланином или глицином и/или по меньшей мере один цистеиновый остаток в нативной последовательности данной области был подвергнут реакции цистеинелирования с образованием цистинового остатка. Остаток или остатки, которые являются модифицированными, могут присутствовать в любой части последовательности данной области. В одном из вариантов изобретения остаток или остатки, которые являются модифицированными, не содержатся в минимальной последовательности области, связывающейся в МНС класса II. В предпочтительном варианте изобретения такая модификация не способствует образованию нового эпитопа или не оказывает негативного влияния на свойства области, относящиеся к связыванию с МНС класса II. Пептид согласно изобретению обычно содержит от 9 до 25 аминокислот, но может содержать 10,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 аминокислоты. Следует отметить, что пептид согласно изобретению может полностью состоять из области, определенной выше, либо он может содержать дополнительные аминокислоты, фланкирующие область длиной максимум 25 аминокислот, при условии, что такие дополнительные аминокислоты не будут способствовать образованию димера. Дополнительные аминокислоты, способствующие образованию димера, могут быть оценены методами,описанными в вышеприведенном разделе "Области". Пептиды длиной более чем 25 аминокислот могут иметь третичную структуру, достаточную для перекрестного связывания с IgG или IgE на клеточной поверхности, что может приводить к продуцированию нежелательных иммунных ответов, таких как активация В-клеток или дегрануляция тучных клеток. Синтез пептидов. Пептиды согласно изобретению теоретически могут быть получены из полипептидов, содержащих область, определенную выше. Это может быть достигнуто с использованием аминокислотной последовательности данной области и синтеза пептидов на основе такой последовательности. Пептиды могут быть синтезированы методами, хорошо известными специалистам. Предпочтительными методами являются методы твердофазного пептидного синтеза, а наиболее предпочтительным методом является автоматизированный или полуавтоматизированный метод синтеза пептидов. Обычно с применением таких методов аминокислоту, защищенную -N-карбамоилом, и аминокислоту, присоединенную к растущей пептидной цепи на смоле, подвергают реакции сочетания при комнатной температуре в инертном растворителе, таком как диметилформамид, N-метилпирролидинон или метиленхлорид, в присутствии агентов сочетания, таких как дициклогексилкарбодиимид и 1-гидроксибензотриазол, в присутствии основания,такого как диизопропилэтиламин. Затем -N-карбамоильную защитную группу удаляют из полученной пептидной смолы с использованием реагента, такого как трифторуксусная кислота или пиперидин, и реакцию сочетания повторяют со следующей нужной N-защищенной аминокислотой, присоединяемой к пептидной цепи. Подходящие N-защитные группы хорошо известны специалистам, и такими группами являются трет-бутоксикарбонил (tBoc) и флуоренилметоксикарбонил (Fmoc). Термин "пептид" включает не только молекулы, в которых аминокислотные остатки связаны пептидными связями (-CO-NH-), но также молекулы, в которых эта пептидная связь инвертирована. Такие пептидомиметики с ретро-инвертированными связями могут быть получены методами, известными специалистам, например, такими, как методы, описанные в публикации Meziere et al. (1997) J. Immunol. 159,3230-3237. Такой метод включает синтез псевдомиметиков, имеющих изменения в остове молекулы, но не в ориентации боковых цепей. В публикации Meziere et al. (1997) указывается, что такие псевдопептиды могут быть использованы, по меньшей мере, для вырабатывания ответов с образованием МНС классаII и Т-хелперных клеток. Пептиды с ретро-инвертированными связями, которые вместо пептидных связей СО-NH содержат связи NH-CO, являются гораздо более резистентными к протеолизу. Аналогичным образом, пептидная связь может вообще отсутствовать, но при условии, что в этом случае присутствует соответствующая линкерная группа, которая будет создавать пространство между атомами углерода аминокислотных остатков, при этом особенно предпочтительно, если линкерная группа будет иметь, в основном, такое же распределение зарядов и, по существу, такую же планарность, как и пептидная связь. Следует также отметить, что пептид может быть легко блокирован у его N- или С-конца для снижения чувствительности к экзопротеолитическому расщеплению. Так, например, N-концевая аминогруппа пептидов может быть защищена посредством реакции взаимодействия с карбоновой кислотой, а С-концевая карбоксильная группа пептида может быть защищена посредством реакции взаимодействия с амином. Другими примерами модификаций являются гликозилирование и фосфорилирование. Другой возможной модификацией является модификация, при которой атомы водорода на аминах боковой цепи R или K могут быть заменены метиленовыми группами (-NH2NH(Me) или -N(Ме)2). Аналогами пептидов согласно изобретению могут быть также пептидные варианты, которые способствуют увеличению или уменьшению времени полужизни пептидов in vivo. Примерами аналогов,способствующих увеличению времени полужизни пептидов, используемых в настоящем изобретении,являются пептоидные аналоги пептидов, D-аминокислотные производные пептидов и гибриды "пептидпептоид". В другом варианте изобретения полипептидные варианты, используемые в настоящем изобретении, содержат D-аминокислотные формы полипептида. Получение полипептидов с использованием Dаминокислот, а не L-аминокислот, позволяет значительно снижать какое-либо нежелательное действие такого агента при нормальных метаболических процессах, уменьшать количество вводимого агента, а значит, и частоту его введения. Композиции. Композиция согласно изобретению обычно содержит:a) i) по меньшей мере один пептид, где указанный пептид содержит нативную последовательность области, определенной выше; иii) по меньшей мере один агент, ингибирующий образование димера; илиb) i) по меньшей мере один пептид, где указанный пептид содержит определенную выше область,которая была сконструирована, как описано выше, в целях снижения тенденции к образованию димера; и, необязательно,ii) по меньшей мере один агент, ингибирующий образование димера; где минимальная часть пептида присутствует в растворе в виде димера. Агентами, подходящими для ингибирования образования димера, являются агенты, восстанавливающие дисульфидную связь, антиоксиданты или консерванты. Подходящими восстановителями являются любые триалкилфосфиновые соединения, включая трис(2-карбоксиэтил)фосфин (ТСЕР), 2 меркаптоэтанол и дитиотреитол (DTT). Другими подходящими агентами являются тиоглицерин, тиоанизол, глутатион и цистеин. Особенно предпочтительные композиции согласно изобретению содержат 0,5% тиоглицерин или 0,5% тиоанизол. Агентом, подходящим для ингибирования образования димера, может быть агент, стимулирующий цистеинелирование цистеиновых остатков, таких как цистеин, а в частности гидрохлорид цистеина. Агент, подходящий для ингибирования образования димера, может быть временно добавлен в композицию, а затем удален. В одном из таких вариантов изобретения указанным агентом является агент, который удаляет окислители из композиции или снижает их уровень, поскольку образование дисульфидной связи зависит от присутствия окислителей. Предпочтительными агентами такого типа являются азот,аргон или другие инертные газы, которые могут быть пропущены через композицию. Репрезентативная подходящая композиция согласно изобретению включает Вышеуказанные величины получены для обычной 400 г партии, включающей по меньшей мере один пептид. Минимальное количество пептида, присутствующего в растворе в виде димера, означает, что такое количество пептида, присутствующего в растворе в виде димера, составляет максимум 5, 4, 3, 2 или 1%. При этом следует отметить, что количество пептида, присутствующего в растворе в виде димера, представляет собой количество пептида, присутствующего в растворе в виде димера в течение определенного периода времени. Подходящими периодами времени являются периоды времени, по истечении которых специалист в данной области может с полным основанием предположить, что такая последовательность будет храниться в растворе до ее использования. Так, например, такой период времени составляет примерно 24 ч, примерно 48 ч или примерно 72 ч. Количество пептида, присутствующего в данной форме,может быть оценено любым подходящим методом, как описано выше в разделе "Области". Если эпитоп происходит от аллергена, то композиции согласно изобретению могут обладать способностью индуцировать ответ на поздней стадии у индивидуума, обладающего чувствительностью к аллергену. Термин "ответ на поздней стадии" включает определения, приведенные в публикации "Allergyand Allergic Diseases" (1997) А.В. Kay (Ed.), Blackwell Science, pp. 1113-1130. Ответ на поздней стадии может быть любым ответом на поздней стадии (LPR). Указанные композиции, предпочтительно содержащие эпитоп, происходящий от белкового аллергена, обладают способностью индуцировать астматический ответ на поздней стадии (LAR), ринальный ответ на поздней стадии, кожный ответ на поздней стадии или офтальмический ответ на поздней стадии. Способность конкретной композиции вызывать LPR может быть определена методами, хорошо известными специалистам, а особенно предпочтительный метод описан в публикации Cromwell О., Durham S.R., Shaw R.J., Mackay J.Kay А.В. Provocation tests andmeasurements of mediators from mast cells and basophils in asthma and allergic rhinitis. In: Handbook of Experimental Immunology (4) Chapter 127, Editor: Weir D.M., Blackwell Scientific Publications, 1986. Таким образом, отдельные композиции согласно изобретению предпочтительно обладают способностью индуцировать LPR у индивидуума, обладающего чувствительностью к белковым аллергенам, от которых происходит данный эпитоп. Наличие или отсутствие у индивидуума чувствительности к белку, от которого происходит данный эпитоп, может быть определено хорошо известными методами, такими как детектирование антител в крови или сыворотке индивидуума, которые являются специфичными к данному белку. Если эпитоп происходит от аллергена, то подходящими тестами на чувствительность к аллергену являются скарифицированная кожная проба, проводимая путем введения раствора экстрактов аллергена; индуцирование кожных LPR, ознакомление с историей болезни, провокация аллергеном и радиоаллергосорбентный тест(PACT) для оценки уровня белок-специфического IgE. Наличие или отсутствие у конкретного индивидуума благоприятного эффекта после лечения может быть определено врачом, например, путем проведения указанных тестов или оценок. Десенсибилизация или толеризация индивидуума к белку, от которого происходит эпитоп, означает ингибирование или ослабление аллергических тканевых реакций, индуцированных указанным белком у подверженных сенсибилизации индивидуумов. Было показано, что Т-клетки могут быть селективно активированы, а затем им может быть сообщена невосприимчивость к аллергену. Кроме того, анергия или элиминация этих Т-клеток приводит к нарушению восприимчивости пациента к конкретному белку. Сама десенсибилизация проявляется как снижение ответа на белок или происходящий от белка пептид или предпочтительно как элиминация такого ответа на второе и последующее введение белка или пептида,происходящего от этого белка. Второе введение может быть осуществлено через соответствующий период времени для поддержания десенсибилизации, при этом предпочтительным является любой период времени от одного дня до нескольких недель. Предпочтительным является интервал примерно в две недели. Хотя композиции согласно изобретению обладают способностью индуцировать LPR у индивидуума, восприимчивого к данному белку, однако следует отметить, что если данную композицию используют для лечения пациента, то предпочтительно, чтобы такая композиция имела достаточно низкую концентрацию, а именно такую концентрацию, которая не давала бы заметного ответа на поздней стадии(LPR), но давала бы ответ, который был бы достаточным для частичной десенсибилизации Т-клеток, так,чтобы можно было ввести следующую (предпочтительно более высокую) дозу и т.п. В этом методе дозу можно увеличивать до тех пор, пока она не будет давать полную десенсибилизацию и в большинстве случаев без какого-либо индуцирования LPR у пациента. При этом такая композиция или пептид могут давать такой же эффект при еще более высокой концентрации, чем концентрация, которая была введена. Композиция согласно изобретению обычно обладает пониженной способностью индуцировать у индивидуума ответ на ранней стадии. Термин "пониженная способность индуцировать ответ на ранней стадии" означает, что данная композиция согласно изобретению ослабляет тяжесть симптомов на ранней стадии (таких как дегрануляция базофилов или тучных клеток) в отличие от композиции, которая включает пептид с областью, аналогичной области, содержащейся в композиции согласно изобретению, и которая не была модифицирована в целях снижения уровня образования димера и не содержит агента,снижающего уровень образования димера. В соответствии с этим композиция согласно изобретению продуцирует более слабый ответ на ранней стадии, чем эквивалентный пептид, присутствующий преимущественно в димерной форме. Данный пептид является эквивалентным, поскольку он содержит такой же Т-клеточный эпитоп, связывающийся с МНС класса II. Альтернативно или дополнительно, композиция согласно изобретению обычно обладает повышенной способностью индуцировать толерантность у индивидуума. Термин "повышенная способность индуцировать толерантность" означает, что данная композиция согласно изобретению дает более высокий уровень десенсибилизации у индивидуума в отличие от композиции, которая включает пептид с областью, аналогичной области, содержащейся в композиции согласно изобретению, и которая не была модифицирована в целях снижения уровня образования димера и не содержит агента, снижающего уровень образования димера. В соответствии с этим композиция согласно изобретению дает более высокий уровень десенсибилизации, чем эквивалентный пептид, присутствующий преимущественно в димерной форме. Данный пептид является эквивалентным, поскольку он содержит такой же Т-клеточный эпитоп,связывающийся с МНС класса II. Десенсибилизация была определена выше, а ее уровень может быть охарактеризован любыми подходящими методами. Так, например, при аллергической астме более низкий LAR, продуцируемый в ответ на ингаляцию белка, от которого происходит эпитоп (или пептида, происходящего от этого белка),должен служить показателем более высокого уровня десенсибилизации после проведения лечения композицией согласно изобретению. Уровень LAR может быть оценен любым подходящим методом, известным специалистам, например путем детектирования снижения объема воздуха при форсированном выдохе в единицу времени (FEV) у индивидуума после введения белка. Чем больше снижение FEV, тем выше уровень LAR. Композиция согласно изобретению предпочтительно индуцирует LAR, который по меньшей мере на 10, 20, 30, 40 или 50% меньше, чем LAR, который индуцируется композицией, содержащей эквивалентный пептид, присутствующий преимущественно в димерной форме. Альтернативно, более высокий уровень десенсибилизации может определяться большим ослаблением белок-специфического продуцирования Т-клетками воспалительных цитокинов, таких как интерферон-, интерлейкин-4 и интерлейкин-13. Продуцирование цитокинов Т-клетками может быть детектировано любым подходящим методом,-9 018110 например с помощью анализа ELISA, ELISPOT или проточного цитометрического анализа. Особенно предпочтительными методами являются анализы с использованием массивов на мультиплексных сферах,описанные, например, в публикации Jager et al.; Clinical и Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, Vol. 10(1) p. 133-139. Термин "большее ослабление" предпочтительно означает, что лечение композицией согласно изобретению будет приводить к продуцированию воспалительных цитокинов, уровень которых по меньшей мере на 10, 20, 30, 40 или 50% ниже уровня, продуцируемого композицией, содержащей эквивалентный пептид, присутствующий преимущественно в димерной форме. Предпочтительные композиции согласно изобретению включают по меньшей мере один пептид,содержащий последовательность или состоящий из последовательности, соответствующей любой одной из SEQ ID NO: 1-71 и, необязательно, тиоглицерин. Особенно предпочтительные композиции включают,по меньшей мере, первый и второй пептиды, где указанные первый и второй пептиды содержат другую последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 37 (MLA01), SEQ ID NO: 38(MLA04), SEQ ID NO: 39 (MLA05), или SEQ ID NO: 40 (MLA12), или состоит из этой последовательности. Так, например, первый и второй пептиды могут содержать последовательности или состоять из последовательностей: a) SEQ ID NО: 37 (MLA01) и NO: 38 (MLA04); b) SEQ ID NO: 37 (MLA01) и NO: 39(MLA05); с) SEQ ID NO: 37 (MLA01) и NO: 40 (MLA12); d) SEQ ID NO: 38 (MLA04) и NO: 39 (MLA05); е) SEQ ID NO: 38 (MLA04) и NO: 40 (MLA12); или f) SEQ ID NO: 39 (MLA05) и NO: 40 (MLA12) соответственно. Полинуклеотиды, векторы и клетки. Используемые здесь термины "молекула нуклеиновой кислоты" и "полинуклеотид" являются синонимами и означают полимерную форму нуклеотидов любой длины, либо дезоксирибонуклеотидов, либо рибонуклеотидов или их аналогов. Не ограничивающими примерами полинуклеотидов являются ген,генный фрагмент, матричная РНК (мРНК), кДНК, рекомбинантные полинуклеотиды, плазмиды, векторы,выделенная ДНК любой последовательности, выделенная РНК любой последовательности, нуклеиновокислотные зонды и праймеры. Полинуклеотид согласно изобретению может быть получен в выделенной или очищенной форме. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая "кодирует" выбранный полипептид, представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая транскрибируется (в случае ДНК) и транслируется (в случае мРНК) в полипептид in vivo, если она находится под контролем соответствующих регуляторных последовательностей. Границы кодирующей последовательности определяются старт-кодоном у 5'-(амино)конца и кодоном терминации трансляции у 3'-(карбокси)конца. В соответствии с настоящим изобретением такими последовательностями нуклеиновой кислоты могут быть, но не ограничиваются ими, кДНК, происходящая от вирусной, прокариотической или эукариотической мРНК,геномные последовательности от вирусной или прокариотической ДНК или РНК или даже синтезированные последовательности ДНК. Последовательность терминации транскрипции может быть расположена со стороны 3'-конца по отношению к кодирующей последовательности. Полинуклеотиды согласно изобретению могут быть синтезированы методами, хорошо известными специалистам, например, как описано в руководстве Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning - a laboratorymanual; Cold Spring Harbor Press). Полинуклеотидные молекулы согласно изобретению могут быть получены в форме экспрессионного кластера, который включает регуляторные последовательности, функционально присоединенные к встроенной последовательности, что, тем самым, приводит к экспрессии пептида согласно изобретениюin vivo у индивидуума, подвергаемого лечению. В свою очередь, эти экспрессионные кластеры обычно вводят в векторы (например, плазмиды или рекомбинантные вирусные векторы), которые являются подходящими для их применения в качестве реагентов для иммунизации нуклеиновыми кислотами. Такой экспрессионный кластер может быть непосредственно введен индивидууму-хозяину. Альтернативно,вектор, содержащий полинуклеотид согласно изобретению, может быть введен индивидууму-хозяину. Полинуклеотид предпочтительно получают и/или вводят с использованием генетического вектора. Подходящим вектором может быть любой вектор, который обладает способностью переносить достаточное количество генетической информации и стимулирует экспрессию пептида согласно изобретению. Настоящее изобретение относится к экспрессионным векторам, которые содержат такие полинуклеотидные последовательности. Таким образом, настоящее изобретение относится к вектору, используемому для предупреждения или лечения аллергии путем сообщения толерантности, где указанный вектор содержит одну или более полинуклеотидных последовательностей, которые кодируют различные полипептиды согласно изобретению, и необязательно одну или несколько дополнительных полинуклеотидных последовательностей, которые кодируют различные полипептиды, определенные в настоящей заявке. Кроме того, следует отметить, что композиции и продукты согласно изобретению могут содержать смесь полипептидов и полинуклеотидов. В соответствии с этим настоящее изобретение относится к определенным в описании композиции или продукту, где вместо любого одного из указанных полипептидов присутствует полинуклеотид, способный экспрессировать указанный полипептид. Экспрессионные векторы конструируют способами, известными специалистам в области молекулярной биологии, и для этого могут быть, например, использованы плазмидная ДНК и соответствующие инициаторы, промоторы, энхансеры и другие элементы, такие как, например, сигналы полиаденилирова- 10018110 ния, которые могут оказаться необходимыми, и которые локализованы в правильной ориентации, обеспечивающей экспрессию пептида согласно изобретению. Могут быть использованы и другие подходящие векторы, известные специалистам в данной области. Другие примеры можно найти в руководствеSambrook et al. Таким образом, полипептид согласно изобретению может быть получен путем доставки такого вектора в клетку и его транскрипции из вектора. Предпочтительно полинуклеотид согласно изобретению или полинуклеотид, используемый в векторе, применяемом в настоящем изобретении, функционально присоединен к регуляторной последовательности, способной экспрессировать кодирующую последовательность клеткой-хозяином, т.е. указанным вектором является экспрессионный вектор. Термин "функционально присоединенный" относится к расположению элементов, при котором описанные компоненты имеют такую конфигурацию, которая позволяет осуществлять их обычную функцию. Таким образом, данная регуляторная последовательность, такая как промотор, функционально присоединенный к последовательности нуклеиновой кислоты, обладает способностью осуществлять экспрессию такой последовательности в присутствии соответствующих ферментов. Промотор необязательно должен быть смежным с данной последовательностью при условии, что он будет регулировать ее экспрессию. Так, например, интронные нетранслированные, но уже транскрибированные последовательности могут присутствовать между промоторной последовательностью и последовательностью нуклеиновой кислоты, а промоторная последовательность может еще рассматриваться как последовательность,"функционально присоединенная" к кодирующей последовательности. В литературе описан ряд экспрессионных систем, каждая из которых обычно состоит из вектора,содержащего представляющий интерес ген или представляющую интерес нуклеотидную последовательность, функционально присоединенную к последовательностям регуляции экспрессии. Такими регуляторными последовательностями являются транскрипционные промоторные последовательности и последовательности инициации и терминации транскрипции. Векторами согласно изобретению могут быть,например, плазмидные, вирусные или фаговые векторы с ориджином репликации, необязательно с промотором для экспрессии указанного полинуклеотида и, необязательно, с регулятором промотора. "Плазмидой" является вектор в форме внехромосомного генетического элемента. Векторы могут содержать один или несколько селективных маркерных генов, например ген резистентности к ампициллину в случае бактериальной плазмиды или ген резистентности в случае грибкового вектора. Векторы могут быть использованы in vitro, например, для продуцирования ДНК или РНК, либо они могут быть использованы для трансфекции или трансформации клеток-хозяев, например клеток-хозяев млекопитающих. Векторы могут быть также адаптированы для их использования in vivo, например для экспрессии полипептида in"Промотор" представляет собой нуклеотидную последовательность, которая инициирует и регулирует транскрипцию полипептид-кодирующего полинуклеотида. Промоторы могут включать индуцибельные промоторы (где экспрессия полинуклеотидной последовательности, функционально присоединенной к промотору, индуцируется аналитом, кофактором, регуляторным белком и т.п.), репрессируемые промоторы (где экспрессия полинуклеотидной последовательности, функционально присоединенной к промотору, ингибируется аналитом, кофактором, регуляторным белком и т.п.) и конститутивные промоторы. При этом предусматривается, что термин "промотор" или "регуляторный элемент" включает полноразмерные промоторные области и функциональные (например, регуляторы транскрипции или трансляции) сегменты этих областей. Полинуклеотид, экспрессионный кластер или вектор согласно изобретению может дополнительно содержать сигнальную пептидную последовательность. Сигнальную пептидную последовательность обычно функционально присоединяют к промотору так, чтобы сигнальный пептид экспрессировался и облегчал секрецию полипептида, кодируемого кодирующей последовательностью, которая также функционально присоединена к промотору. Обычно сигнальная пептидная последовательность кодирует пептид, состоящий из 10-30 аминокислот, например из 15-20 аминокислот. В большинстве случаев такие аминокислоты являются преимущественно гидрофобными. Обычно сигнальный пептид нацеливает растущую полипептидную цепь, несущую сигнальный пептид, в эндоплазматический ретикулум экспрессирующей клетки. Сигнальный пептид отщепляется в эндоплазматическом ретикулуме, что обеспечивает секрецию данного полипептида через аппарат Гольджи. Таким образом, пептид согласно изобретению может доставляться индивидууму посредством экспрессии из клеток, присутствующих у индивидуума, и секреции из этих клеток. Альтернативно, полинуклеотиды согласно изобретению могут быть экспрессированы соответствующим образом так, чтобы это обеспечивало опосредуемую молекулой МНС класса II презентацию пептида согласно изобретению на поверхности антигенпрезентирующей клетки. Так, например, полинуклеотид, экспрессионный кластер или вектор согласно изобретению может быть нацелен на антигенпрезентирующие клетки, либо в таких клетках может преимущественно стимулироваться или индуцироваться экспрессия кодируемого пептида. Представляющие интерес полинуклеотиды могут быть использованы in vitro, ex vivo или in vivo для продуцирования пептида согласно изобретению. Такие полинуклеотиды могут быть введены или исполь- 11018110 зованы для предупреждения или лечения аллергии на кошек путем сообщения толерантности к кошачьему аллергену. Методы доставки генов известны специалистам. См., например, патенты США 5399346, 5580859 и 5589466. Молекула нуклеиновой кислоты может быть введена непосредственно реципиенту, например,путем стандартной внутримышечной или внутрикожной инъекции; путем чрескожной доставки частиц; путем ингаляции; путем местного нанесения; либо путем перорального введения, интраназального введения или введения через слизистую. Альтернативно, такая молекула может быть введена ех vivo в клетки, взятые у пациента. Так, например, полинуклеотид, экспрессионный кластер или вектор согласно изобретению может быть введен в АПК индивидуума ex vivo. Затем клетки, содержащие представляющую интерес молекулу нуклеиновой кислоты, снова вводят индивидууму для вырабатывания у него иммунного ответа против пептида, кодируемого данной молекулой нуклеиновой кислоты. Молекулы нуклеиновой кислоты, используемые для такой иммунизации, обычно называются в описании "нуклеотидными вакцинами". Полипептиды, полинуклеотиды, векторы или клетки согласно изобретению могут быть представлены, по существу, в изолированной форме. Они могут быть смешаны с носителями или разбавителями, не препятствующими их применению в нужной форме, а поэтому они могут рассматриваться, по существу,как изолированные. Они могут быть также использованы, по существу, в очищенной форме, и в этом случае содержание указанных белков, полинуклеотидов, клеток или сухой массы будет составлять по меньшей мере 90%, например по меньшей мере 95, 98 или 99 мас.% всего препарата. Препараты. Пептиды, полинуклеотиды, векторы и клетки согласно изобретению могут быть введены индивидууму либо отдельно, либо в комбинации. Каждая молекула или клетка согласно изобретению может быть введена индивидууму в изолированной, по существу, изолированной, в очищенной или, по существу, очищенной форме. Так, например, пептид согласно изобретению может быть введен индивидууму, по существу, отдельно от других пептидов. Хотя указанные пептиды, полинуклеотиды или композиции согласно изобретению могут быть презентированы в неочищенной форме, однако предпочтительно, чтобы они были презентированы в виде фармацевтического препарата. Таким образом, в соответствии с другом своим аспектом, настоящее изобретение относится к фармацевтическому препарату, используемому для сообщения индивидууму толерантности к белку, от которого происходит пептид согласно изобретению, где указанный фармацевтический препарат включает композицию, вектор или продукт согласно изобретению в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями, и, необязательно,один или несколько других терапевтических ингредиентов. Указанный(е) носитель(и) должен быть(должны быть) "фармацевтически приемлемым(и)" в том смысле, что он(они) должен(должны) быть совместимым(и) с другими ингредиентами данного препарата (а в частности, указанный(е) носитель(и) не должен(не должны) стимулировать образование димера) и не должен(не должны) оказывать негативного воздействия на реципиента. Обычно носители, используемые для инъекций, и готовый препарат являются стерильными и апирогенными. Так, например, композиции, содержащие одну или несколько молекул или клеток согласно изобретению, могут быть объединены с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами или носителями. В эксципиенте или носителе могут присутствовать вспомогательные компоненты,такие как смачивающие или эмульгирующие вещества, рН-забуферивающие вещества, антиоксиданты,хелатообразующие агенты и т.п. Такие эксципиенты, носители и вспомогательные вещества обычно представляют собой фармацевтические средства, которые не индуцируют иммунный ответ у индивидуума при введении данному индивидууму указанной композиции и которые не оказывают чрезмерного токсического действия на индивидуума. Фармацевтически приемлемыми эксципиентами являются, но не ограничиваются ими, жидкости,такие как вода, физиологический раствор, полиэтиленгликоль, гиалуроновая кислота и этанол. Могут быть также включены фармацевтически приемлемые соли, например соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Подробное обсуждение фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей и вспомогательных веществ можно найти в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N.J. 1991). Указанные композиции могут быть получены, упакованы или представлены на продажу в форме,подходящей для введения в виде ударной дозы или для непрерывного введения. Композиции для инъекций могут быть изготовлены, упакованы или представлены на продажу в виде единичной дозированной формы, такой как ампулы или упаковки для многократного введения, содержащие консервант. Такими композициями являются, но не ограничиваются ими, суспензии, растворы, эмульсии в масляном или в водном носителе, пасты, имплантируемые препараты пролонгированного действия или биологически разлагаемые препараты. Такие композиции могут также содержать один или несколько дополнительных ингредиентов, включая, но не ограничиваясь ими, суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. В одном из вариантов композиции для парентерального введения активный ингредиент присутствует в сухой форме (например, в виде порошка или гранул), которая, перед ее парентеральным введением, может быть разведена соответствующим носителем (например, стерильной апирогенной водой). Фармацевтические композиции могут быть получены, упакованы или представлены на продажу в виде стерильной инъекции в виде водной или масляной суспензии, раствора или порошка. Такая суспензия или такой раствор могут быть приготовлены методами, известными специалистам, и могут содержать помимо активного ингредиента дополнительные ингредиенты, такие как описанные здесь диспергирующие вещества, смачивающие вещества или суспендирующие вещества. Указанные стерильные препараты для инъекций могут быть приготовлены с использованием нетоксичного парентерально приемлемого разбавителя или растворителя, такого как, например, водный раствор (включая воду), или 1,3 бутандиол. Другими фармацевтически приемлемыми разбавителями и растворителями являются, но не ограничиваются ими, раствор Рингера, изотонический раствор хлорида натрия и жирные масла, такие как синтетические моно- или диглицериды. Другими композициями для парентерального введения, которые могут быть использованы, являются композиции, содержащие активный ингредиент в микрокристаллической форме, в форме липосомного препарата или в виде компонента биологически разлагаемых полимерных систем. Композиции пролонгированного высвобождения или имплантируемые композиции могут содержать фармацевтически приемлемые полимерные или гидрофобные вещества, такие как эмульсия, ионообменная смола, слаборастворимый полимер или слаборастворимая соль. Альтернативно, пептиды или полинуклеотиды согласно изобретению могут быть инкапсулированы в носителях, абсорбированы на носителях или ассоциированы с носителями, состоящими из макрочастиц. Подходящими носителями, состоящими из макрочастиц, являются носители, полученные из полиметилметакрилатных полимеров, а также из микрочастиц PLG, состоящих из полилактидов и сополимера лактида и гликолидов. См., например, Jeffery et al. (1993) Pharm. Res. 10:362-368. Могут быть также использованы и другие системы и полимеры, состоящие из макрочастиц, например полимеры, такие как полилизин, полиаргинин, полиорнитин, спермин, спермидин, а также конъюгаты этих молекул и генетически сконструированные полимеры, такие как полимеры, подобные эластину шелка (GhandehariCappello (1998) Pharm. Res. 15: 813-815). Кроме того, пептиды могут быть получены в высоких концентрациях, составляющих 100 нмоль/мл, причем в имплантируемых устройствах для доставки лекарственного средства используются диметилсульфоксид, полиэтиленоксид, полиэтиленгликоль или другие подходящие наполнители. Получение любых упомянутых в документе пептидов, полинуклеотидов или клеток зависит от таких факторов, как природа данного вещества и способ его доставки. Любое из таких веществ может быть введено в виде различных лекарственных форм. Они могут быть введены перорально (например, в виде таблеток, пастилок, фармацевтических лепешек, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул), парентерально, подкожно, путем ингаляции, внутривенно, внутримышечно, интрастернально, чрескожно, интрадермально, подъязычно, интраназально, трансбуккально или путем вливания. Эти вещества могут быть также введены в форме суппозиториев. Подходящий способ введения для каждого конкретного индивидуума может быть определен самим лечащим врачом. Композиции, входящие в состав препаратов согласно изобретению, могут содержать подходящую эффективную концентрацию каждого из пептидов/полинуклеотидов/клеток, которая не вызывает побочной реакции. Обычно концентрация каждого пептида в данной композиции составляет в пределах от 0,03 до 200 нмоль/мл. Более предпочтительно такая концентрация составляет в пределах от 0,3 до 200 нмоль/мл, от 3 до 180 нмоль/мл, от 10 до 150 нмоль/мл или от 30 до 120 нмоль/мл. Такие композиции или препараты должны иметь чистоту более чем 95 или 98% или чистоту по меньшей мере 99%. Поэтому может быть приготовлена композиция, содержащая молекулу и/или клетки согласно изобретению, а также одну или несколько других терапевтических молекул. Альтернативно, композиция согласно изобретению может быть введена вместе с одним или несколькими другими терапевтическими композициями, а также последовательно или отдельно, как часть комбинированной терапии. Терапевтические способы и индивидуумы, подвергаемые лечению. Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим пептиды, которые обладают способностью десенсибилизировать организм человека или сообщать ему толерантность к белкам, от которых происходят пептиды согласно изобретению. Такими белками обычно являются аллергены или другие антигены, против которых вырабатывается нежелательный иммунный ответ. Примерами таких антигенов являются антигены, ассоциированные с аутоиммунными заболеваниями, антигены, ассоциированные с развитием реакций "трансплантат против хозяина" и отторжением трансплантата (называемые в описании "аллоиммунными состояниями"), и антигены, ассоциированные с вырабатыванием иммунных ответов у материнского плода, например с развитием гемолитической болезни новорожденных, ассоциированной с резус-фактором D. Поэтому композиции согласно изобретению могут быть использованы для предупреждения или лечения аллергического заболевания, аутоиммунного заболевания, аллоиммунного состояния или иммунного ответа у материнского плода. Настоящее изобретение относится к композициям, продуктам, векторам и препаратам, используемым для предупреждения или лечения вышеописанных состояний. Настоящее изобретение также относится к способу предупреждения у индивидуума вышеуказанных состояний или лечения индивидуума, страдающего такими состояниями, где указанный способ включает введение полипептидов/полинуклеотидов/клеток согласно изобретению, описанных выше, отдельно или в комбинации друг с другом. Индивидуумом, который подвергается лечению композицией или препаратами согласно изобретению или которому вводят композицию или препарат согласно изобретению, предпочтительно является человек. Следует отметить, что индивидуумом, подвергаемым лечению, может быть индивидуум с уже установленной чувствительностью к конкретному аллергену или антигену, либо индивидуум с риском развития у него чувствительности к такому аллергену или антигену, либо индивидуум с подозрением на такую чувствительность. Данный индивидуум можетбыть обследован на чувствительность к аллергенам или антигенам методами, хорошо известными специалистам и описанными в настоящей заявке. Альтернативно, данный индивидуум может иметь вышеописанные состояния в семейном анамнезе. При этом нет необходимости проводить тест на чувствительность к аллергенам, если у данного индивидуума появляются симптомы аллергии при его нахождении поблизости от соответствующего источника аллергенов. Термин "поблизости" означает присутствие на расстоянии 10 м или менее, 5 м или менее, 2 м или менее, 1 м или менее или 0 м от данного источника. Симптомами аллергии могут быть резь в глазах,обильные выделения из носа, затруднение дыхания, крапивница или кожная сыпь. Индивидуумом, подвергаемым лечению, может быть индивидуум любого возраста. Однако предпочтительно, если данный индивидуум входит в возрастную группу от 1 до 90 лет, от 5 до 60 лет, от 10 до 40 лет или более предпочтительно от 18 до 35 лет. Предпочтительно индивидуум, подвергаемый лечению, принадлежит к группе индивидуумов, у которых частота встречаемости аллелей МНС составляет в пределах величин,характерных для людей индоевропейской расы. Частота встречаемости аллелей у людей контрольной группы для 11 семейств общеизвестного аллеля DRB1 указана в табл. 1 (данные взяты из HLA Facts Частота аллелей для контрольной группы была определена с помощью анализа результатов множества исследований частоты встречаемости аллелей и указана как средняя величина. Поэтому предпочтительно, чтобы индивидуум, подвергаемый лечению, был выбран из группы, которая имеет частоту встречаемости аллелей МНС, эквивалентную частоте встречаемости контрольной группы для аллелей, указанной в табл. 1 (таких как, например, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или всех аллелей), например, в интервалах величин 1, 2, 3, 5, 10, 15 или 20%. Предпочтительным индивидуумом является индивидуум, принадлежащий к группе, у которой частота встречаемости нижеследующих аллелей DRBl составляет 4 - по меньшей мере 9%,7 - по меньшей мере 10%,11 - по меньшей мере 8%. Индивидуум, подвергаемый лечению от аллергического заболевания, может страдать аллергией в течение по меньшей мере 2 недель, 1 месяца, 6 месяцев, 1 года или 5 лет. Такой индивидуум может страдать кожной сыпью, заложенностью носа, выделениями из носа и/или кашлем, вызываемым аллергией. Данному индивидууму могут быть введены, а могут и не быть введены, другие композиции/соединения,которые могут быть использованы для лечения аллергии. Настоящее изобретение является особенно подходящим для применения в целях лечения индивидуумов, которым может оказаться необходимым многократное введение композиций согласно изобретению, описанных выше. Пептиды, которые имеют более высокую тенденцию к образованию димера, чем пептиды согласно изобретению, будут с большей вероятностью индуцировать нежелательный ответ у индивидуума, который подвергается лечению, путем многократного введения таких композиций. Поскольку мономерные пептиды являются менее иммуногенными, чем димерные пептиды, то композиция согласно изобретению также является особенно подходящей для введения индивидууму, страдающему указанным состоянием, или индивидууму с риском развития такого состояния, где указанное состояние характеризуется развитием нежелательной воспалительной реакции на введение лекарственного средства, содержащего пептид. Нежелательная воспалительная реакция на введение лекарственного средства,содержащего пептид, может быть диагностирована по проявлению любого из симптомов аллергии, описанных выше, после введения лекарственного средства, содержащего пептид. Индивидуум может рассматриваться как индивидуум с риском развития такой реакции по любому подходящему медицинскому показанию, например по проявлению аналогичных реакций в семейном анамнезе, по множеству аллергических реакций в персональной истории болезни или по интенсивным положительным ответам на общеизвестные аллергены, подтвержденным в результате взятия скарифицированной кожной пробы или анализа кожного лоскута. Аллергены и антигены. Подходящие аллергены, от которых может происходить область, содержащая Т-клеточный эпитоп,связывающийся с МНС класса II, могут быть получены и/или продуцированы известными методами. Классами подходящих аллергенов являются, но не ограничиваются ими, пыльца, перхоть животных(особенно кошачья перхоть), трава, плесень, пыль, антибиотики, яды жалящих насекомых и различные воздействия окружающей среды (включая действие химических веществ и металлов), лекарственные средства и пищевые аллергены. Общеизвестными аллергенами деревьев являются пыльца тополя трехгранного, тополя обыкновенного, ясеня, березы, клена, дуба, вяза, ореха гикори и пекана; общеизвестными растительными аллергенами являются аллергены полыни, амброзии, подорожника перистого, щавеля и щирицы; растительными аллергенами, вызывающими контактный дерматит, являются аллергены ядовитого дуба, ядовитого плюща и крапивы; аллергенами общеизвестных травянистых растений являются аллергены ржи, тимофеевки, дикого сорго, бермудской травы (свинороя), овсяницы и мятлика; при этом общеизвестные аллергены могут быть также получены из плесени или грибов, таких как Candida,Alternaria, Fusarium, Hormodendrum, Aspergillus, Micropolyspora, Mucor и термофильные актиномицеты; эпидермальные аллергены могут быть получены из домашней или органической пыли (обычно грибкового происхождения), от членистоногих, таких как домашние клещи (Dermatophagoides pteronyssinus),или из материалов животного происхождения, таких как кожа и собачья перхоть; общеизвестными пищевыми аллергенами являются аллергены молока и сыра (молочных продуктов), яиц, пшеницы, орехов(например, арахиса), морепродуктов (например, панцирных морских животных), гороха, бобов и клейковины; общеизвестными аллергенами окружающей среды являются аллергены группы металлов (никеля и золота), химических веществ (формальдегида, тринитрофенола и скипидара), латекса, каучука, волокна(хлопчатника или шерсти), мешковины, краски для волос, косметических средств, моющих средств и духов; общеизвестными лекарственными аллергенами являются аллергены местных анестетиков и салицилата; аллергенами-антибиотиками являются пенициллин, тетрациклин и сульфонамид, а общеизвестными аллергенами насекомых являются яд пчел, ос и муравьев, и аллергены яиц тараканов. Особенно хорошо охарактеризованными аллергенами являются, но не ограничиваются ими, основной аллерген,продуцируемый гликопротеином домашних кошек Felis catus (Felis domesticus) Feldl, основные и криптические эпитопы аллергена Der p I (Hoyne et al. (1994) Immunology 83:190-195), фосфолипаза пчелиного яда А 2 (PLA) (Akdis et al. (1996) J. Clin. Invest. 98:1676-1683), аллерген березовой пыльцы Bet v 1 (Baueret al. (1997) Clin. Exp. Immunol. 107:536-541), и мультиэпитопный рекомбинантный аллерген травыrKBG8.3 (Cao et al. (1997) Immunology 90:46-51). Эти и другие подходящие аллергены являются коммерчески доступными и/или могут быть легко получены в виде экстрактов известными методами. Подходящий аллерген предпочтительно выбирают из аллергенов, список последовательностей которых и их регистрационные номера в базе данных (регистрационные номера для доступа в NCBI) приводятся ниже. NCBI представляет собой Национальный центр биотехнологической информации и отделение Национального института здравоохранения США. Web-сайтом NCBI, с которого можно войти в базу данных, является www.ncbi.nlm.nih.gov/. Ниже представлены последовательности аллергенов и их регистрационные номера в базе данных (регистрационные номера для доступа в NCBI). Дополнительные последовательности клещевого аллергена (номера доступа в NCBI) Дополнительные последовательности гевеи (номера доступа в NCBI) Последовательности аллергенов деревьев (главным образом, березы) Дополнительные последовательности аллергенов деревьев (номера доступа в NCBI) Собаки. Последовательности аллергенов собак (Canis) Фрагмент сывороточного альбумина EAYKSEIAHRYNDLGEEHFRGLVL Фрагмент сывороточного альбумина Дополнительный аллергенный белок собак (номер доступа в NCBI) 1731859 Лошади. Последовательности аллергенов лошадей (Equus) Последовательности аллергенов злаков (травянистых растений) Аллерген пыльцы 1135 62 РОА Р 9