Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин

Данное изобретение относится к применению по меньшей мере одного гидрофобина или по меньшей мере одного производного гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора. 014384 Данное изобретение относится к промывочному буровому раствору, содержащему гидрофобии или его производное, а также к применению гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора. Промывочные буровые растворы в целом имеют задачей упрощать трудный процесс бурения при освоении новых месторождений, например, нефти или природного газа. При этом должно оказываться содействие как собственно процессу бурения, так и перемещению получающихся при этом кусочков горных пород. Буровое долото и буровые штанги нужно смазывать и охлаждать. Далее, гидростатическое давление месторождения нужно компенсировать, отчего зачастую используются промывочные буровые растворы с повышенным удельным весом. Также стенки буровой скважины должны закрепляться обсадными трубами. Важными свойствами используемых коммерческих промывочных буровых растворов являются также подходящие вязкость и реологические свойства, плотность, термостабильность, способность к эмульгированию и диспергированию, рН-контроль, а также не в последнюю очередь в высокой степени экологическая чистота. Так как поиски новых источников сырья продолжаются на земле в различных местах, причем часто нужно осуществлять глубокое бурение также и в недоступных местностях, например далеко от морского берега или посреди дремучего леса, существует потребность в новых вспомогательных средствах для бурения, в частности вспомогательных средствах для промывочного бурового раствора, которые отвечали бы высоким техническим требованиям, а также получение которых не требовало бы больших затрат и могло бы осуществляться на месте, Исходя из этого, промывочный буровой раствор должен также быть устойчивым при хранении и может использоваться спустя продолжительное время. Далее, особое значение имеет то, чтобы промывочный буровой раствор при попадании в окружающую среду не приводил к стойкому повреждению флоры и фауны. Гидрофобины представляют собой белки с небольшим молекулярным весом, состоящие из 100-150 аминокислот, которые могут быть получены из филаментозных грибов, например, из Schizophyllum commune. Они имеют, как правило, 8 цистеиновых звеньев в молекуле. Гидрофобины имеют заметно выраженное химическое сродство к поверхности раздела фаз и годятся поэтому для нанесения покрытий на поверхности, например, с целью изменения свойств граничных поверхностей за счет образования амфифатических мембран. Так, например, гидрофобинами можно покрывать полимер тефлон, получая при этом гидрофильную поверхность. Гидрофобины могут выделяться из природных источников. Далее, известны синтетические способы получения гидрофобинов и их производных. Например, в немецкой патентной заявке DE 102005007480.4 описан способ получения гидрофобинов и их производных. К настоящему времени уже предложено использование гидрофобинов для различных целей. Так в ЕР-А 05016962 описывается применение белков для улучшения разделения фаз в смесях масло/вода или топливо/вода. Специалисту известно, что некоторые амфифильные молекулы в зависимости от используемой концентрации и окружающей среды могут действовать на границу раздела фаз как стабилизирующим образом, так и дестабилизирующим образом. В WO 96/41882 сообщается о применении гидрофобинов в качестве эмульгаторов, загустителей,поверхностно-активных веществ, для гидрофилирования гидрофобных поверхностей, для улучшения водостойкости гидрофильных субстратов, для приготовления эмульсий масло-в-воде и вода-в-масле. Далее, предлагается использование в фармацевтике, например, для приготовления мазей или кремов, а также применение в косметических целях, например, для защиты кожи или для изготовления шампуней для волос или ополаскивателей для волос. Кроме того, в WO 96/41882 описаны композиции, например, для фармацевтического использования, содержащие гидрофобии. В ЕР-А 1252516 сообщается о нанесении покрытий на окна, контактные линзы, биосенсоры, медицинское оборудование, емкости для проведения экспериментов или емкости для хранения, корпуса судов, твердых частиц или рамы или кузова легковых автомобилей с помощью содержащего гидрофобии раствора при температуре 30-80 С,В WO 03/53383 описано применение гидрофобина для обработки кератиновых материалов в косметических целях. В WO 03/10331 сообщается, что гидрофобины обладают поверхностно-активными свойствами. Так сообщается о покрытом гидрофобином сенсоре, например, измерительном электроде, с которым связаны не ковалентно другие вещества, например, электроактивные вещества, антитела или энзимы. В WO 2004/000880 сообщается о покрытиях поверхностей гидрофобином или гидрофобиноподобными веществами. Далее сообщается о том, что эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле могут стабилизироваться добавлением гидрофобинов. Также в WO 01/74864, относящемся к гидрофобиноподобным белкам, сообщается, что эти белки могут использоваться для стабилизации дисперсий и эмульсий. Применение белков для разделения фаз в принципе известно. Так в GB 195876 описан способ для расслоения эмульсий вода-в-масле с применением коллоидов. В качестве коллоидов названы, например,-1 014384 белки, такие как желатин, казеин, альбумин, или полисахариды, такие как гуммиарабик или трагакантовая камедь. В JP-A 11-169177 сообщается о применении белков с липазной активностью для расслоения эмульсий. В WO 01/60916 сообщается о применении смесей, не содержащих поверхностно-активные вещества, состоящих по меньшей мере из одного растворимого в воде белка, по меньшей мере одного растворимого в воде полисахарида, а также по меньшей мере одного растворимого в воде полимера, такого как,например, полиэтиленоксид, для различных целей, среди которых было также деэмульгирование сырой нефти. Однако ни один из процитированных выше источников не упоминал о применении гидрофобинов в качестве вспомогательного средства для промывочных буровых растворов. Предметом данного изобретения является применение гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора, причем гидрофобии, в частности, используется в промывочной жидкости как эмульгатор. Используемый гидрофобии предпочтительно является при этом слитым гидрофобином, в частности слитым гидрофобином, выбранным из групп, о которых будет сказано ниже: yaad-Xa-dewA-his (SEQ IDNO: 20), yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO: 22) или yaad-Xa-basf1-his (SEQ ID NO: 24), причем в случае yaad речь может идти также об укороченном партнере слияния yaad' с 20-293 аминокислотами. Промывочные буровые растворы состоят, как правило, из одной или нескольких жидкостей, таких как, например, вода, сырая нефть и органические добавки или растворители, а также из суспендированных или растворенных твердых веществ. В зависимости от вида главных жидких компонентов различают водные промывочные буровые растворы, промывочные буровые растворы на масляной основе и синтетические промывочные буровые растворы. В случае промывочных буровых растворов согласно изобретению предпочтительно используется промывочный буровой раствор на масляной основе (например, дизельное топливо, минеральное масло). Также предпочтительно гидрофобии (могут одновременно использоваться также несколько гидрофобинов) используется в количестве от 0,1 до 10.000 част./млн, предпочтительно 1 - 1000 част./млн, наиболее предпочтительно 1-600 част./млн, соответственно, в расчете на всю композицию. Это является одним из преимуществ, что используемые количества гидрофобина заметно меньше, чем у обычных эмульгаторов,которые используются в количестве от 2 до 10 вес.%. Предпочтительно речь идет о промывочных буровых растворах на масляной основе, которые содержат 40-95, предпочтительно 70-95 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента, 2-80, предпочтительно 2-30 вес.% воды, а также при необходимости другие компоненты. В качестве других компонентов подходят, например, следующие вещества:a) соли (такие как, например, хлориды, бромиды, карбонаты щелочных и щелочно-земельных металлов; эти соли часто служат для рН-контроля),b) добавки для компенсации потерь жидкости (например, бентониты, крахмал, целлюлоза или ее производные),c) смачиватели (для того, чтобы вышеупомянутые добавки, например бентониты, смогли быть смоченными маслом),d) вещества, улучшающие текучесть (которые уменьшают сопротивление течению, например, акриловые смолы, полисилоксаны, полиуретаны),e) добавки для увеличения удельного веса промывочного бурового раствора (например, барит, гематит, магнетит, ильменит, сидерит, доломит, кальцит, поваренная соль),f) эмульгаторы (например, соли жирных кислот; полиамиды),g) прочие добавки, такие как, например, диспергаторы, понизители водоотдачи, полимеры или сополимеры, амины (например, полиакриламиды),h) повышающие вязкость добавки (например, бентонит, аттапульгит). В предпочтительном варианте осуществления изобретения наряду с гидрофобином используют по меньшей мере еще одно, другое соединение, которое улучшает образование эмульсии. Изобретение относится также к способу бурения скважин, в частности для освоения подземных месторождений, в особенности месторождений нефти и газа, при котором используется промывочный буровой раствор, который содержит по меньшей мере один гидрофобии или его производное. При этом предпочтительно используют названный выше слитый гидрофобин. При бурении используется преимущественно промывочный буровой раствор на масляной основе,который содержит 40-95 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента, такого как, например,биодизель, 2-60 вес.% воды (например, пресная или морская вода), а также при необходимости другие компоненты. Далее, сам промывочный буровой раствор, содержащий по меньшей мере один гидрофобии, представляет собой предмет данного изобретения. В специальном варианте осуществления изобретения промывочный буровой раствор содержит 7095 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента (например, биодизель), 2-30 вес.% воды, а так-2 014384 же при необходимости до 13 вес.% других компонентов (например, бентонита и/или хлорида кальция). Изобретение относится также к способу приготовления промывочного бурового раствора, при котором тщательно смешивают компонент гидрофобии и прочие компоненты промывочного бурового раствора. Это может происходить на промышленных производственных площадях, а также и на месте, например на буровой платформе. Применение белков, таких как гидрофобин: в качестве вспомогательного средства при бурении имеет преимуществом то, что речь идет о веществах природного происхождения или веществах, аналогичных натуральным, которые способны к биологическому расщеплению и тем самым не вызывают стойкую нагрузку на окружающую среду. При использовании в крупных масштабах, например, при бурении после нахождения нефти, большое значение придается как можно более продолжительной пригодности используемого вспомогательного средства. Задача изобретения заключалась в предоставлении улучшенного способа выполнения буровых работ с использованием специальных белков. Под понятием гидрофобии в рамках данного изобретения понимают также его производные или модифицированный гидрофобии. В случае модифицированного гидрофобина или производных гидрофобина речь идет, например, о слитых гидрофобин-белках или о белках, имеющих последовательность аминокислот, которая обладает по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, предпочтительно не менее чем 80%, особенно предпочтительно не менее чем 90%, наиболее предпочтительно не менее чем 95% последовательности, идентичной с последовательностью гидрофобина, и которая сохраняет до 50%, предпочтительно до 60%, особенно предпочтительно до 70%, наиболее предпочтительно до 80% биологических свойств гидрофобина, в частности того, что свойства поверхности за счет покрытия ее этим белком изменяются таким образом, что краевой угол капли воды до и после нанесения белкового покрытия на стеклянную поверхность возрастает не менее чем на 20, предпочтительно не менее чем на 25, наиболее предпочтительно не менее чем на 30. Был обнаружен поразительный факт, что гидрофобины или их производные улучшают производительность бурения при разведке и освоении месторождений. Это основывается на том, что не происходит быстрого разделения фаз в промывочном буровом растворе и транспортируемом материале. При этом чрезвычайно эффективными являются даже небольшие количества гидрофобина. Для определения гидрофобинов решающим является при этом структура, а не специфичность последовательности в гидрофобине. Последовательности аминокислот в природном гидрофобине очень различны, но они все же обладают очень характерным участком из 8 постоянно присутствующих цистеиновых остатков. Эти остатки образуют четыре внутримолекулярных дисульфидных мостика. N-конец и С-конец являются вариабельными в широком диапазоне. Здесь с помощью известных специалисту методов молекулярной биологии могут быть присоединены белки партнеров слияния с длиной от 10 до 500 аминокислот. Исходя из этого, под понятием гидрофобины и их производные следует понимать в смысле данного изобретения белки с аналогичной структурой и функциональной эквивалентностью. Под понятием гидрофобины в смысле данного изобретения следует понимать в дальнейшем полипептиды общей формулы (I) причем X может означать любую из 20 аминокислот природного происхождения (Phe, Leu, Ser, Tyr,Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly). При этом Х соответственно могут быть одинаковыми или различными. При этом стоящие у X индексы соответственно представляют собой число аминокислот, С означает цистеин, аланин, серин, глицин, метионин или треонин, причем по меньшей мере четыре из обозначенных С-остатков означают цистеин, а индексы n и m независимо друг от друга означают натуральные числа от 0 до 500, предпочтительно от 15 до 300. Далее полипептиды формулы (I) характеризуются следующим свойством: при комнатной температуре после их нанесения на стеклянную поверхность они вызывают увеличение краевого угла водяной капли не менее чем на 20, предпочтительно не менее чем на 25 и наиболее предпочтительно не менее чем на 30, соответственно по сравнению с краевым углом такой же по величине капли воды на стеклянной поверхности без покрытия. Аминокислоты, обозначенные как С 1 до С 8, предпочтительно являются цистеином; но они могут заменяться другими аминокислотами с аналогичным плотностью упаковки, предпочтительно аланином,серином, треонином, метионином или глицином. Правда, не менее четырех, предпочтительно не менее 5,особенно предпочтительно не менее 6 и наиболее предпочтительно не менее 7 позиций от С 1 до С 8 должны быть цистеинами. Цистеины в белках согласно изобретению могут быть либо редуцированными, либо могут образовывать друг с другом дисульфидные мостики. Наиболее предпочтительным является внутримолекулярное образование С-С-мостиков, в особенности по меньшей мере одного, предпочтительно двух, особенно предпочтительно 3 и наиболее предпочтительно 4 внутримолекулярных дисульфидных мостиков. При описанной выше замене цистеинов другими аминокислотами с аналогичным объемом попарно заменяются предпочтительно такие С-позиции, которые могут образовывать между собой внутримолекулярные дисульфидные мостики.-3 014384 В случае, если в обозначенных X позициях также используются цистеин, серии, аланин, глицин,метионин или треонин, может изменяться соответствующим образом нумерация отдельных С-позиций в общей формуле. Предпочтительно для осуществления данного изобретения используются гидрофобины общей формулы (II) причем X, С и индексы, стоящие при X и С, имеют указанные выше значения, индексы n и m означают числа от 0 до 300, и далее белки отличаются вышеупомянутым изменением краевого угла, далее,для по меньшей мере 6 обозначенных как С остатков речь идет о цистеине. Наиболее предпочтительно для всех остатков речь идет о цистеине. Наиболее предпочтительно используются гидрофобины общей формулы (III) причем X, С и индексы, стоящие при X, имеют указанные выше значения, индексы n и m означают числа от 0 до 200, и, далее, белки отличаются вышеупомянутым изменением краевого угла, далее, для по меньшей мере 6 обозначенных как С остатков речь идет о цистеине. Наиболее предпочтительно для всех остатков речь идет о цистеине. В случае остатков Xn и Xm речь может идти о последовательностях пептидов, которые также соединены естественно с гидрофобином. Однако в случае одного или обоих остатков может идти речь также о последовательностях пептидов, которые не соединены естественно с гидрофобином. Под такими остатками следует понимать остатки Xn и/или Xm, у которых встречающиеся в природе в гидрофобине последовательности пептидов удлиняются последовательностями пептидов, не встречающимися в гидрофобине в природе. В случае, если для Xn и/или Xm речь идет о не соединенных естественно в гидрофобине последовательностях пептидов, такого рода последовательности имеют, как правило, длину не менее 20, предпочтительно не менее 35, особенно предпочтительно не менее 50 и наиболее предпочтительно не менее 100 аминокислот. Такой остаток, не соединенный естественно с гидрофобином, в дальнейшем будет обозначаться также как партнер слияния. Этим будет выражаться то, что белки могут состоять по меньшей мере из гидрофобиновой части и части партнера слияния, которые в природе в таком виде вместе не существуют. Часть - партнер слияния может быть выбрана из множества белков. С гидрофобиновой частью могут также соединяться несколько партнеров слияния, например, у аминного конца (Xn) и у карбоксиконца (Xm) гидрофобиновой части. Однако с позициями (Xn или Xm) белка согласно данному изобретению могут соединяться также, например, два партнера слияния. Наиболее подходящими партнерами слияния являются белки, которые в природе встречаются в микроорганизмах, например в Е. Coli или Bacillus subtilis. Примерами таких партнеров слияния являются последовательности yaad (SEQ ID NO: 15 и 16), уаае (SEQ ID NO: 17 и 18) и тиоредоксин. Подходят также фрагменты или производные этих вышеназванных последовательностей, которые охватывают только часть, например 70-99%, предпочтительно 5-50% и наиболее предпочтительно 1040% названных последовательностей, или у которых отдельные аминокислоты или, точнее говоря, нуклеотиды изменены по сравнению с названной последовательностью, причем процентные данные соответственно относятся к числу аминокислот. В другом предпочтительном варианте осуществления фузионный гидрофобии имеет кроме партнера слияния в качестве группы Xn или Xm еще так называемые домены сродства (affinity tag/affinity tail). При этом речь идет в принципе об известных якорных группах, которые могут взаимодействовать с некоторыми комплементарными группами и предназначаться для облегчения обработки и очистки белков. Примерами таких доменов сродства служат (His)k-, (Arg)k-, (Asp)k-, (Phe)k- или (Cys)k-группы, причем к означает в общем случае натуральное число от 1 до 10. Предпочтительно может идти речь о (His)kгруппе, причем к означает 4-6. Согласно изобретению белки, используемые в качестве гидрофобинов или производных гидрофобинов, могут также быть модифицированными в их полипептидной последовательности, например, путем гликозирования, ацетилирования или также за счет химической сшивки, например, глутаровым альдегидом. Свойством используемых согласно изобретению гидрофобинов или их производных является изменение свойств поверхностей, если поверхности покрываются белками. Изменение поверхностных свойств можно определить экспериментально, например, измеряя краевой угол капли воды до нанесения покрытия и после нанесения покрытия с белками на поверхность и определяя разницу между этими двумя измерениями. Метод измерения краевых углов в принципе известен специалисту. Измерения проводятся при комнатной температуре на капле воды в 5 мкл прииспользовании в качестве субстрата стеклянных пластинок. Точные экспериментальные условия пригодного метода измерения краевого угла указаны в экспериментальной части. При названных там условиях используемые согласно данному изобретению слитые-4 014384 белки обладают свойством увеличивать краевой угол капли воды не менее чем на 20, предпочтительно не менее чем на 25, наиболее предпочтительно не менее чем на 30, соответственно, по сравнению с краевым углом равной по величине капли воды на стеклянной поверхности без покрытия. Наиболее предпочтительными гидрофобинами для осуществления данного изобретения являются гидрофобины типа dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2, которые структурно охарактеризованы в нижеследующем протоколе последовательностей. Однако речь может идти только о части или производном. Также несколько гидрофобиновых частей, предпочтительно 2 или 3, с одинаковой или различной структурой могут соединяться друг с другом и с соответствующей подходящей последовательностью полипептидов, которая не связана естественно с гидрофобином. Наиболее подходящими для данного изобретения являются слитые белки yaad-Xa-dewA-his (SEQID NO: 20), yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO: 22) или yaad-Xa-basf1-his (SEQ ID NO: 24) с указанными в скобках последовательностями полипептидов, а также кодирующими для них последовательностями нуклеиновых кислот, в особенности последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 19, 21, 23. Наиболее предпочтительные варианты осуществления представляют собой также белки, которые получаются,исходя из представленных в SEQ ID NO: 20, 22 или 24 последовательностей полипептидов, путем замещения, вставки или делеции по меньшей мере одной аминокислоты, до 10, предпочтительно 5, в особенности 5% всех аминокислот, и которые обладают биологическими свойствами исходного белка еще по меньшей мере на 50%. Под биологическими свойствами белков следует понимать уже описанное изменение краевого угла по меньшей мере на 20. Наиболее подходящими для осуществления изобретения производными являются yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO: 20), yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO: 22) или yaad-Xa-basf1-his (SEQ ID NO: 24) за счет сокращения остатка, имеющего происхождение от yaad-партнера слияния. Вместо полного yaad-партнера слияния (SEQ ID NO: 16) с 294 аминокислотами с успехом может использоваться укороченный yaadостаток. Но укороченный остаток должен включать по меньшей мере 20, предпочтительно не менее 35 аминокислот. Например, может использоваться укороченный остаток с 20-293, предпочтительно с 25- 50,особенно предпочтительно с 35-150 и наиболее предпочтительно с 35-100 аминокислотами. Место разрыва между гидрофобином и партнером слияния или слитыми партнерами может использоваться для того, чтобы высвободить чистый гидрофобии в неизмененном виде (например, путем BrCNрасщепления у метионина, расщепления фактором Ха, расщепления энтерокиназой, тромбинового расщепления, TEV-расщепления и т.п.). Далее, можно получать поочередно слитые белки из партнера слияния, например yaad или уаае, и нескольких гидрофобинов, также с различными последовательностями, например, DewA-RodA или Sc3DewA, Sc3-RodA). Также можно использовать гидрофобиновые фрагменты (например, укороченные с Nили С-концов) или мутеины, которые имеют до 70% гомологии. Выбор оптимальных конструктов происходит в расчете на соответствующее использование, т.е. применительно к разделяемым жидким фазам. Используемые согласно данному изобретению гидрофобины, иначе гидрофобины, содержащиеся в композициях согласно данному изобретению, можно получать химическим путем с помощью известных методов синтеза пептидов, например твердофазным синтезом по Меррифилду. Встречающиеся в природе гидрофобины можно выделить из природных источников с помощью подходящих методов. Сошлемся, например, на работу Wosten et. al., Eur. J Cell Bio. 63, 122-129 (1994) или WO 96/41882. Получение слитых белков предпочтительно может осуществляться методами генной инженерии,при которых последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие для партнера слияния и для гидрофобиновой части, в частности последовательности ДНК, комбинируются таким образом, что в организме хозяина путем экспрессии генов комбинированной последовательности нуклеиновых кислот получается желаемый белок. Такой метод получения описан, например, в DE 10 2005 007 480.4. Подходящими организмами-хозяевами для названного метода получения могут быть при этом прокариоты (включая Archaea) или эукариоты, особенно бактерии, включая галобактерии и метанококки,грибы, клетки насекомых, растений и млекопитающих, наиболее предпочтительны Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Aspergillus oryzea, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Pichia pastoris,Pseudomonas spec, Lactobacillen, Hansenula polymorpha, Trichoderma reesei, SF9 (или родственные клетки) и др. Кроме того, предметом изобретения является применение экспрессионных конструктов, содержащих кодирующую последовательность нуклеиновых кислот для используемого согласно изобретению полипептида, находящихся под генетическим контролем регуляторных последовательностей нуклеиновых кислот, а также векторы, включающие хотя бы один из таких экспрессионных конструктов. Использованные конструкты предпочтительно охватывают выше 5'-конца от соответствующей промоторной кодирующей последовательности и ниже 3'-конца терминаторной последовательности, а также при необходимости другие обычные регуляторные элементы, а именно соответственно оперативно соединенные с кодирующей последовательностью. Под понятием оперативное соединение в рамках данного изобретения понимают последовательное расположение промотора, кодирующей последовательности, терминатора и при необходимости других регуляторных элементов таким образом, что каждый из регулятор-5 014384 ных элементов может выполнять по назначению свои функции при экспрессии кодирующей последовательности. Примерами оперативно соединяемых последовательностей являются целевые последовательности,а также энханцеры, сигналы полиаденилирования и тому подобное. Другие регуляторные элементы включают способные к отбору маркеры, амплификационные сигналы, начала репликации и тому подобное. Подходящие регуляторные последовательности, например, описаны в книге Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, SanDiego, CA (1990). В дополнение к этим регуляторным последовательностям может еще иметь место естественная регуляция этих последовательностей от собственных структурных генов и при необходимости генетически она может быть изменена, так чтобы естественная регуляция исключалась и усиливалась экспрессия генов. Предпочитаемый конструкт из нуклеиновых кислот предпочтительно содержит также один или несколько так называемых энханцер-последовательностей, функционально соединенных с промотором,которые дают возможность усиленной экспрессии последовательности нуклеиновых кислот. Также у 3'конца последовательности ДНК могут помещаться дополнительные полезные последовательности, такие как другие регуляторные элементы и терминаторы. Нуклеиновые кислоты могут содержаться в конструкте в одной или нескольких копиях. В конструкте могут еще содержаться другие маркеры, такие как гены, комплементирующие устойчивость к антибиотикам или ауксотрофии, при необходимости для селекции на конструкте. Предпочитаемые регулирующие последовательности для получения содержатся, например, в промоторах, таких как cos-, tac-, trp-, tet-, trp-tet-, Ipp-, lac-, Ipp-lac-, laclq-T7-, T5-, T3-, gal-, trc-, ara-,rhaP(rhaPBAD) SP6-, лямбда-PR-или в лямбда-Р-промоторе, которые находят применение в грамотрицательных бактериях. Другие предпочтительные регулирующие последовательности содержатся,например, в грам-положительных промоторах amy и SP02, в дрожжевых или грибковых промоторахADC1, MF-альфа, АС, Р-60, CYC1, GAPDH, TEF, rp28, ADH. Для регуляции могут применяться также искусственные промоторы. Конструкт нуклеиновых кислот вставляется для экспрессии в организме хозяина предпочтительно в вектор, такой как, например, плазмида или фаг, который позволяет осуществлять оптимальную экспрессию генов в хозяине. Под векторами следует понимать кроме плазмид и фагов также все другие известные специалисту векторы, такие как, например, SV40, CMV, бакуловирус и аденовирус, транспозоны, ISэлементы, фазмиды, космиды, и линейные или кольцевые ДНК, а также системы агробактерий. Эти векторы могут быть реплицированы в организм хозяина автономно или хромосомно. Подходящими плазмидами являются, например, в Е. coli pLG338, pACYC184, pBR322, pUC18, pUC19, pKC30,pRep4, pHS1, pKK223-3, pDHE19.2, pHS2, pPLc236, pMBL24, pLG200, pUR290, pIN-III"3-B1, tgt11 илиpBdCI, в Streptomyces plJ101, pIJ364, plJ702 или plJ361, в Bacillus pUB110, pC194 или pBD214, в Corynebacterium pSA77 или pAJ667, в грибах pALS1, plL2 или pBB116, в дрожжах 2 альфа, pAG-1, YEp6, YEp13 или pEMBLYe23 или в растениях pLGV23, pGHlac+, pBIN19, pAK2004 или pDH51. Названные плазмиды представляют собой небольшую выборку из возможных плазмид. Другие плазмиды известны специалисту и могут быть взяты из книги Cloning Vectors (Eds. Pouwels P. H. et al. Elsevier, Amsterdam-New YorkOxford, 1985, ISBN 0 444 904018). Предпочтительно конструкт из нуклеиновых кислот для экспрессии других содержащихся генов содержит еще 3'- и/или 5'-терминальные регуляторные последовательности для усиления экспрессии,которые выбираются для оптимальной экспрессии в зависимости от выбранного организма-хозяина и гена или генов. Эти регуляторные последовательности должны давать возможность целенаправленной экспрессии генов и экспрессии белков. Это, например, в зависимости от организма-хозяина может означать то, что ген экспримируется или суперэкспримируется только после индукции, или что он экспримируется и/или суперэкспримируется немедленно. Регуляторные последовательности или факторы при этом могут преимущественно оказывать положительное влияние на экспрессию внедренного гена и тем самым усиливать е. Так, усиление регуляторных элементов может происходить благоприятным образом на транскрипционном участке, тем что применяются сильные транскрипционные сигналы, такие как промоторы и/или энханцеры. Наряду с этим возможно также усиление трансляции тем, что, например, улучшается стабильность мРНК. В другом варианте вектора содержащий конструкт из нуклеиновых кислот или нуклеиновые кислоты вектор также вводится в микроорганизмы предпочтительно в форме линейной ДНК и интегрируется в геном организма-хозяина через гетерологичную или гомологичную рекомбинацию. Эта линейная ДНК может состоять из линеаризованного вектора, такого как плазмида, или только из конструкта нуклеиновых кислот или из нуклеиновых кислот. Для оптимальной экспрессии чужеродных генов в организмы предпочтительно следует изменять последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с применяемым в организме специфическим-6 014384 синонимическим кодоном (codon usage). Синонимический кодон (Codon usage) можно легко определить, пользуясь компьютерной оценкой других, известных генов данного организма. Получение экспрессионной кассеты происходит путем соединения подходящего промотора с подходящей кодирующей последовательностью нуклеотидов, а также сигналом терминатора или сигналом полиаденилирования. Для этого применяют общеупотребительные приемы рекомбинации и клонирования, какие описаны, например, Т. Maniatis, E. F.Fritsch и J, Sambrook, Molecular Cloning: A LaboratoryInterscience (1987),Рекомбинантный конструкт нуклеиновых кислот или генный конструкт вводится для экспрессии в подходящий организм хозяина, предпочтительно в характерный для хозяина вектор, который дает возможность осуществления оптимальной экспрессии генов в хозяине. Векторы хорошо известны специалисту и могут быть взяты из "Cloning Vectors" (Pouwels P. H. et al., Hrsg, Elsevier, Amsterdam-New YorkOxford, 1985). С помощью векторов получаются рекомбинантные микроорганизмы, какие, например, трансформированы минимум одним вектором и могут использоваться для получения применяемого согласно изобретению гидрофобина или его производных. Вышеописанные рекомбинантные конструкты преимущественно вводятся с подходящую систему-хозяин и экспримируются. При этом используются преимущественно известные специалисту привычные методы клонирования и трансфекции, такие как соосаждение, слияние протопластов, электропорация, ретровиральная трансфекция и тому подобные, чтобы довести до экспрессии названные нуклеиновые кислоты в соответствующей экспрессионной системе. Подходящие системы описаны, например, в Current Protocols in Molecular Biology, F. Ausubel et al., Hrsg., WileySpring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Можно также получать гомологичные рекомбинированные микроорганизмы. Для этого получают вектор, который содержит по меньшей мере участок используемого гена или кодирующей последовательности, в котором при необходимости для изменения последовательности по меньшей мере осуществлено удаление, присоединение или замещение аминокислоты, например, функционального разрыва(нокаутирующий вектор). Введенная последовательность может, например, также быть гомологом из родственного микроорганизма или происходить из клеток млекопитающего, дрожжевых клеток или клеток насекомого. Вектору, применяемому для гомологичной рекомбинации, альтернативно может быть придан такой вид, чтобы эндогенный ген при гомологичной рекомбинации был мутирован или был изменен иным путем, но еще был способен кодировать функциональный белок (например, расположенная выше регуляторная область может изменяться таким образом, что вследствие этого изменяется экспрессия эндогенного белка). Измененный участок использованного согласно изобретению гена находится в гомологичном рекомбинантном векторе. Конструкция подходящих векторов для гомологичной рекомбинации описана, например, в работе Thomas, K. R. и Capecchi, M. R. (1987) Cell 51 : 503. В качестве рекомбинантных организмов-хозяев для такого рода нуклеиновых кислот или такого рода конструктов из нуклеиновых кислот подходят в принципе все организмы, как прокариоты так и эукариоты. Предпочтительно в качестве организмов-хозяев используются такие микроорганизмы, как бактерии, грибы или дрожжи. Преимущественно применяются грамположительные и грамотрицательные бактерии, предпочтительно бактерии семейств Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae, Rhizobiaceae, Streptomycetaceae или Nocardiaceae, наиболее предпочтительны бактерии родов Escherichia, Pseudomonas, Streptomyces, Nocardia, Burkholderia, Salmonella, Agrobacterium или Rhodococcus. Организмы, применяемые в описанных выше способах получения слитых белков, разводятся или выращиваются известными специалисту способами в зависимости от организма-хозяина. Микроорганизмы, как правило, выращиваются в жидкой среде, которая содержит источник углерода, чаще всего в форме сахаров, источник азота чаще всего в форме источника органического азота, такого как экстракт дрожжей или соли, такие как сульфат аммония, микроэлементы, такие как соли железа, марганца и магния, а также при необходимости витамины, при температуре от 0 до 100 С, предпочтительно от 10 до 60 С при насыщении кислородом. При этом величина рН в питательной жидкости может поддерживаться на постоянном значении, т.е. во время выращивания регулируется или не регулируется. Выращивание может происходить периодическим способом, полупериодическим способом или непрерывным способом. Питательные вещества могут загружаться полностью к началу ферментации или подаваться полупериодически или непрерывно. Энзимы могут выделяться из организмов в соответствии со способами,описанными в примерах, или могут применяться в реакции в виде неочищенного экстракта. Применяемые согласно изобретению гидрофобины или функциональные, биологически активные их фрагменты могут формироваться способом рекомбинантного получения, при этом культивируют микроорганизм, продуцирующий полипептиды, при необходимости индуцируют экспрессию белков и выделяют их из культуры. Белки таким способом могут производиться в промышленном масштабе, если-7 014384 это будет желательно. Рекомбинантные микроорганизмы могут культивироваться и ферментироваться по известным методикам. Бактерии могут размножаться, например, в ТВ- или LB-среде при температуре от 20 до 40 С и величине рН от 6 до 9. В подробностях подходящие условия культивирования описаны, например, в книге Т. Maniatis, E. F. Fritsch и J. Sambrook, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, ColdSpring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989). Затем клетки, если белки не выделяются в питательную среду, подвергаются лизированию и продукт получается из лизата известными способами выделения белков. По выбору клетки могут переводиться в удобное для переработки состояние высокочастотным ультразвуком, высоким давлением, таким как, например, во French-Druckzelle, осмолизом, воздействием детергентов, литических энзимов или органических растворителей, с помощью гомогенизаторов или комбинацией нескольких из перечисленных способов. Очистка белков может достигаться с помощью известных хроматографических методов, таких как хроматография на молекулярных ситах (гельфильтрация), хроматография на Q-сефарозе, ионообменная хроматография и гидрофобная хроматография, а также с использованием других обычных способов, таких как ультрафильтрация, кристаллизация, высаливание, диализ и естественный гель-электрофорез. Подходящие способы описаны, например, в книгах Cooper, F. G., Biochemische Arbeitsmethoden, VerlagWater de Gruyter, Berlin, New York или Scopes, R., Protein Purification, Springer Verlag, New York, Heidelberg, Berlin. Особенно выгодным может быть, если для облегчения выделения и очистки снабдить слитый гидрофобии специальными якорными группами, которые могут привязываться к соответствующим комплементарным группам твердых носителей, в частности подходящих полимеров. Такого рода твердые носители могут использоваться, например, в качестве наполнителей для хроматографических колонок, и таким способом можно, как правило, заметно повысить эффективность разделения. Такие способы разделения также известны как аффинная хроматография. Для встраивания якорных групп можно использовать при получении белков векторные системы или олигонуклеотиды, которые удлиняют кДНК на определенную последовательность нуклеотидов и тем самым кодируют измененные белки или слитые белки. Для более легкой очистки модифицированные белки включают действующие в качестве якоря так называемые таги ("Tags") (метки), например, известные модификации в виде гексагистидиновых якорей. Модифицированные гистидиновыми якорями слитые гидрофобины можно, например, очищать хроматографически при использовании никель-сефарозы в качестве заполнителя для колонки. После чего слитый гидрофобии с помощью подходящих средств для элюирования, таких как, например, раствор имидазола,снова вымывается с колонки. В упрощенном способе очистки можно отказаться от хроматографической очистки. Для этого клетки сначала с помощью подходящего метода выделяются из ферментативного бульона, например, путем микрофильтрации или центрифугированием. Затем клетки с помощью подходящих методов, например с использованием уже упомянутых выше методов, переводят в удобное для переработки состояние, и фрагменты разрушенных клеток отделяются от телец включений. Последнее удобно осуществлять путем центрифугирования. Наконец, тельца включений в принципе можно обычным путем переводить в удобное для переработки состояние, чтобы высвободить слитый гидрофобии. Это может, например, происходить с помощью кислот, оснований и/или детергентов. Тельца включений с использованным согласно изобретению слитым гидрофобином, как правило, могут полностью растворяться уже при использовании 0,1 М раствора NaOH в течение примерно 1 ч. Чистота полученного этим упрощенным способом слитого гидрофобина, как правило, составляет 60-80 вес.% по сравнению с количеством всех белков. Растворы,полученные описанным упрощенным способом очистки, могут использоваться без дальнейшей очистки для осуществления этого изобретения. Гидрофобины, полученные, как описано, могут применяться как непосредственно в качестве слитых белков, так и после отщепления и отделения партнера слияния как чистые гидрофобины. Если предусмотрено отделение партнера слияния, рекомендуется вводить потенциальное место расщепления в слитом белке (особенное место распознавания для протеаз) между гидрофобиновой частью и частью партнера слияния. В качестве мест расщепления пригодны в частности такие последовательности пептидов, которые не встречаются ни в гидрофобиновой части, ни в части партнера слияния,что легко можно определить с помощью биоинформационных технологий. Наиболее подходящими являются, например, BrCN-расщепление у метионина, или расщепление при посредничестве протеазы с фактором Ха-, расщепление энтерокиназой, тромбином, TEV-расщепление (протеаза Tobacca etch virus). Согласно изобретению гидрофобины или их производные могут использоваться в промывочных буровых растворах, содержащимися по меньшей мере в одной жидкой фазе. При этом речь может идти о любых составах, если они имеют по меньшей мере одну жидкую фазу, особенно фазу на основе масла. Композиция в рамках данного изобретения может содержать также и другие фазы. В случае масел в промывочных буровых растворах на основе масел предпочтительно речь идет согласно изобретению о биодизеле, инертном олефине, -олефине, сложных эфирах растительного происхождения, парафине или их смесях.-8 014384 Другими подходящими растворителями являются, например, органические растворители, такие как простые эфиры, ароматические соединения, такие как толуол, спирты, алканы, алкены, циклоалканы,циклоалкены, сложные эфиры, кетоны, нафтены или галогенированные углеводороды. Промывочный буровой раствор можно устанавливать по типу производимого бурения, а также при необходимости по веществам, имеющимся в грунте (руды, соли, полезные ископаемые), чтобы добиться оптимального эффекта. Бурение с использованием промывочных буровых растворов может дополнительно поддерживаться повышенными температурами, например, температурой от 0 до 400 С, предпочтительно от 30 до 200 С, наиболее предпочтительно от 40 до 150 С. Количество используемого гидрофобина или его производного может варьировать в широких пределах, причем это количество выгодно настраивать на состав сам по себе и при необходимости на другие компоненты, содержащиеся в композиции. Промывочный буровой раствор (в особенности его плотность) должен адаптироваться к соответствующим условиям, таким как, например, структура формации, которую подвергают бурению, глубина бурения, давление и температура. Был обнаружен поразительный факт, что уже небольшие количества гидрофобина или его производного приводят к улучшению стабильности промывочного бурового раствора и, вследствие этого,процесса бурения. По крайней мере один гидрофобин или его производное согласно изобретению может использоваться в любых подходящих количествах. Как правило, по меньшей мере один гидрофобин или его производное используется в количестве от 0,1 до 10.000 ppm, в расчете на всю композицию; предпочтительно в количестве от 1 до 1000 ppm, особенно предпочтительно 1-600 ppm и наиболее предпочтительно 4500 ppm. В рамках данного сообщения, данные в ppm означают мг на кг. Промывочные буровые растворы согласно данному изобретению могут комбинироваться с другими обычными компонентами и добавками. Здесь следовало бы назвать, например, масла-основы с выраженными свойствами детергентов или без них. Подходящими минеральными маслами-основами являются фракции, получающиеся при переработке нефти, такие как брайтсток или базовое масло с вязкостью, например, класса SN 500-2000; но также и ароматические углеводороды, парафиновые углеводороды и алкоксиалканолы. Согласно изобретению пригодны также фракция, известная как гидрокрекинговое масло (hydrocrack oil) и получающаяся при рафинировании минеральных масел (фракция вакуумной перегонки с температурой кипения примерно 360-500 С, получаемая из каталитически гидрированного при высоком давлении и изомеризованного, а также депарафинированного природного минерального масла). Также пригодны смеси из названных выше минеральных масел-основ. Примеры используемых согласно изобретению синтетических масел-основ выбраны среди следующих: полиолефины (полиальфаолефины или полиинтерналолефин), сложные (поли)эфиры, (поли)алкоксилаты, простые полиэфиры, алифатические полиэфирамины, простые полиэфиры, полученные из алкилфенолов, простые полиэфирамины, полученные из алкилфенолов, и сложные эфиры карбоновых кислот и длинноцепных насыщенных спиртов. Примерами подходящих полиолефинов являются олефиновые полимеры с Мп -400-1800, прежде всего на основе полибутена или полиизобутена (гидрированные или не гидрированные). Другие подходящие системы масел-основ описаны, например, в DE-A 3826608, DE-A 4142 241, DEA 4309074, ЕР-А 0452328 и ЕР-А 0548617, на что специально ссылались. Названные масла-основы используются при этом в количествах, пригодных с точки зрения специалиста для соответствующих целей. Другими обычными добавками являются ингибиторы коррозии, например, на основе способных к пленкообразованию аммонийных солей органических карбоновых кислот или гетероциклических ароматических соединений в случае защиты цветных металлов от коррозии; антиоксиданты или стабилизаторы, например, на основе аминов; другие обычные эмульгаторы; антистатики; металлоцены, такие как ферроцен; средства, улучшающие маслянистость (маслянистые добавки), такие как некоторые жирные кислоты, сложные эфиры алкенилянтарных кислот, алифатические бис(гидроксиалкил)амины, гидроксиацетамид или касторовое масло; красители (маркеры); понизители водоотдачи (например, полимеры),вещества для регулирования плотности, модификаторы реологических свойств, а также вещества, которые образуют фильтровальный осадок (такие как бентонит или глина), известь или другие эмульгаторы. При необходимости добавляются также амины для снижения величины рН. Изобретение подробнее разъясняется нижеследующими примерами. Примеры Пример 1. Подготовительные работы для клонирования yaad-His6/yaaE-His6 С помощью олигонуклеотидов Hal570 и Hal571 (Hal 572/ Hal 573) осуществляли цепную реакцию полимеразы. В качестве исходного образца ДНК использовали геномную ДНК бактерии Bacillus subtilis. Полученный фрагмент PCR содержал кодирующую последовательность гена yaaD/yaaE из Bacillus subtilis, и на концах по одной рестриционной нуклеазе Ncol и BglII. Фрагмент PCR очищали и разрезали с помощью рестрикционных эндонуклеаз Ncol и BglII. Этот фрагмент ДНК использовали как вставку, и-9 014384 клонировали в ранее линеаризированный с помощью рестрикционных эндонуклеаз Ncol и BglII векторpQE60 фирмы Qiagen. Созданные таким образом векторы pQE60YAAD2/pQE60YaaE5 могут применяться для экспрессии белков, состоящих из YAADHIS6 или YAAEHIS6. Пример 2. Клонирование vaad-гидрофобина DewA-His6 С помощью олигонуклеотидов KaM 416 и KaM 417 осуществляли цепную реакцию полимеразы. В качестве исходного образца ДНК использовали геномную ДНК плесневого грибка Aspergillus nidulans. Полученный фрагмент PCR содержал кодирующую последовательность гена гидрофобина dewA и Nконцевое место расщепления фактора Ха протеиназы. Фрагмент PCR очищали и разрезали с помощью рестрикционной эндонуклеазы BamHI. Этот фрагмент ДНК использовали как вставку и клонировали в ранее линеаризированный с помощью рестрикционной эндонуклеазы BglII вектор pQE60YAAD2 . Созданный таким образом вектор 508 может применяться для экспрессии слитого белка, состоящего из YAADXadewAHIS6. Пример 3. Клонирование yaad-гидрофобина RodA-His6 Клонирование плазмиды 513 происходило аналогично плазмиде 508 с использованием олигонуклеотидов KaM 434 и KaM 435. Пример 4. Клонирование vaad-гидрофобина BASF1-His6 Клонирование плазмиды 507 происходило аналогично плазмиде 508 с использованием олигонуклеотидов KaM 417 и KaM 418. В качестве исходной ДНК использовали искусственно синтезированную последовательность ДНК гидрофобин BASF1 (см. дополнение, SEQ ID NO. 11 и 12). Пример 5. Клонирование vaad-гидрофобина BASF2-His6 Клонирование плазмиды 506 происходило аналогично плазмиде 508 с использованием олигонуклеотидов KaM 417 и KaM 418. В качестве исходной ДНК использовали искусственно синтезированную последовательность ДНК гидрофобин BASF2 (см, дополнение, SEQ ID NO. 13 и 14). Пример 6. Клонирование yaad-гидрофобина SC3-His6 Клонирование плазмиды 526 происходило аналогично плазмиде 508 с использованием олигонуклеотидов KaM464 и KaM465. В качестве исходной ДНК использовали кДНК Schyzophyllum commune (см. дополнение, SEQ ID- 10014384 Пример 7. Ферментация рекомбинантного штамма E.coli yaad-гидрофобин DewA-His6 Инокуляция 3 мл жидкой LB-среды с экспримирующим штаммом E.coli yaad-гидрофобин DewAHis6 в сосуде Грайнера на 15 мл. Инкубация 8 ч при 37 С на мешалке с 200 об./мин. По две колбы Эрленмейера емкостью 1 л с дефлектором и 250 мл LB-среды (+ 100 мкг/мл ампициллина) засевали 1 мл соответствующей предварительной культуры и инкубировали 9 ч при 37 С на качалке с 200 об./мин. 13,5 л LB-среды (+ 100 мкг/мл ампициллина) засевали в 20 л ферментре 0,5 л предварительной культуры (OD600nm 1:10 измерено по сравнению с H2O). При OD60nm 3.5 добавление 140 мл 100 мМIPTG. Через 3 ч ферментр охлаждали до 10 С и ферментативный бульон центрифугировали. Клеточный осадок использовали для последующей очистки. Пример 8. Очистка рекомбинантного гидрофобин-слитого белка 100 г клеточного осадка (100-500 мг гидрофобина) вместе с 50 мМ натрийфосфатного буфера, рН 7,5 доводили до 200 мл и ресуспендировали. Суспензию обрабатывали с помощью Ultraturrax Тур Т 25(Janke und Kunkel; IKA-Labortechnik) в течение 10 мин и затем инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с 500 единицами бензоназы (Merck, Darmstadt; Best.-Nr. 1.01697.0001) для расщепления нуклеиновых кислот. Перед переведением клеток в удобное для переработки состояние фильтровали с помощью стеклянного фильтрующего элемента (Р 1). Для перевода клеток в удобное для переработки состояние и для разрезания остаточных геномных ДНК осуществляли две операции по гомогенизации при 1.500 бар (Microfluidizer M-110 ЕН; Microfluidics Corp.). Гомогенизат центрифугировали (Sorvall EG5B, GSA-Rotor, сосуд для центрифуги емкостью 250 мл, 60 мин, 4 С, 12.000 об./мин, 23.000 g), жидкость сверху поставили на лед, а осадок после центрифугирования ресуспендировали в 100 мл натрийфосфатного буфера, рН 7,5. Центрифугирование и ресуспендирование повторяли трижды, причем натрийфосфатный буфер при третьем повторе содержал 1% SDS (=додецилсульфат натрия). После ресуспендирования перемешивали 1 ч и осуществляли заключительное центрифугирование (Sorvall RC-5B, GSA-Rotor,сосуд для центрифуги емкостью 250 мл, 60 мин, 4 С, 12000 об./мин, 23000 g). В соответствии с SDSPAGE-анализом гидрофобин после заключительного центрифугирования содержится в жидкости (фигура). Опыты показали, что гидрофобин, по видимому, содержится в форме телец включений в соответствующих клетках E.coli. 50 мл жидкости, содержащей гидрофобии, наносили на колонку с 50 мл никельсефарозы высокого качества 17-5268-02 (Amershara), которая приведена к равновесию с помощью 50 мМ буфера Tris-Cl рН 8,0. Колонку промывали 50 мМ буфера Tris-Cl рН 8,0 и гидрофобин элюировали затем с помощью 50 мМ буфера Tris-Cl рН 8,0, содержащего 200 мМ имидазола. Для удаления имидазола раствор подвергали диализу против 50 мМ буфера Tris-Cl рН 8,0. Фигура показывает очистку полученного гидрофобина: След А: нанесенный слой никель-сефарозы с колонки (разбавление 1:10) След В: протекание = элюат стадии промывки Следы С-Е: OD 280 максимумы фракций элюирования (WP1, WP2, WP3) След F показывает нанесенные маркеры. Гидрофобии на фигуре имеет молекулярный вес около 53 кД. Более мелкие полосы представляют отчасти продукты разложения гидрофобина. Технологические испытания: Характеристика гидрофобина с помощью изменения краевого угла капли воды на стекле Субстрат: Стекло (оконное стекло, Sddeutsche Glas, Mannheim): Использовали очищенный в соответствии с примером 8 гидрофобин.- Концентрация гидрофобина в растворе: 100 мкг/мл, раствор содержит еще 50 мМ натрийацетатного буфера, а также 0,1% полиоксиэтилен(20)-сорбит-монолаурата (Tween 20), величина рН раствора: 4- Погружение стеклянной пластинки в этот раствор на ночь (температура 80 С)- После чего покрытая гидрофобином стеклянная пластинка извлекается из раствора и промывается дистиллированной водой,- После этого инкубация 10 мин/80 С/1% раствор SDS (=додецилсульфата натрия) в дистиллированной воде- Повторное промывание в дистиллированной воде Образцы сушили на воздухе и определяли краевой угол (в градусах) между каплей воды в 5 мкл и обработанной стеклянной поверхностью при комнатной температуре. Измерение краевого угла осуществляли на приборе Dataphysics Contact Angle System OCA 15+, Software SCA 20.2.0. (November 2002). Измерение происходило в соответствии с данными изготовителя. Необработанное стекло давало краевой угол 305; Стеклянная пластинка, покрытая гидрофобином в соответствии с примером 8 (yaad-dewA-his6), давала краевой угол 755.Увеличение краевого угла: 45- 11014384 Пример 10. Приготовление промывочного бурового раствора на масляной основе, содержащего концентрат гидрофобина (yaad-Xa-dewA-His6) Концентрат гидрофобина добавляется в количествеd) 10.000 ppm к композиции, содержащей 222 мл биодизеля и 61 мл раствора хлорида калия (25%-ного). С помощью прибора для эмульгирования (Ultra Turrax T50) готовили различные эмульсии с использованием следующей последовательности числа оборотов прибора: 2000, 6000 и 10000 об./мин и времени перемешивания 5 и 10 мин. С пробами промывочных буровых растворов проводили соответствующий эмульсионный тест (аналогично DIN 51415). При этом смешивали компоненты друг с другом, причем условия (время перемешивания и скорость перемешивания) названы выше. После чего наблюдали процесс деэмульгирования в зависимости от времени. Оценка происходила при помощи стандарта, причем 1 соответствует полному разделению эмульсии,2 соответствует частичному разделению при высвобождении воды,3 соответствует не зафиксированному разделению эмульсии. В табл. 1 сведены результаты опытов для указанных концентраций гидрофобина. Показаны соответствующие оценки разделения фаз через 1 мин, 24 и 48 ч (соответственно при комнатной температуре,т.е. 23 С). Далее, осуществляли также опыты при температуре, остающейся постоянной, 80 С. Таблица 1 Комментарии: Без добавления гидрофобина А наблюдается ускоренное расслоение буровой смеси. Оценка 1 для практики масляного бурения не приемлема. Гидрофобины даже в чрезвычайно малых количествах проявляют хороший эмульгирующий эффект. Уже концентрация гидрофобина 10 ppm (менее чем 1 мг) приводит к приемлемому результату. При использовании гидрофобина в более высокой дозировке получают гораздо лучший результат, особенно относительно термостабильности.- 12014384 Сопоставление названий последовательностей с последовательностями ДНК и последовательностями полипептидов в протоколе последовательностей