Способ деаэрации

009568 Изобретение относится к способу получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты(PUFA). Способ предусматривает деаэрацию водной среды, содержащей клетки, из которых получают масло или PUFA. После деаэрации клетки могут быть подвергнуты пастеризации. Далее, масло илиPUFA могут быть экстрагированы, очищены или выделены из клеток. Полиненасыщенные жирные кислоты, или PUFA, имеют природное происхождение, и разнообразные кислоты PUFA продуцируются различными одноклеточными микроорганизмами (водоросли, грибы и т.п.). Одной из особенно важных PUFA является арахидоновая кислота (ARA), являющаяся примером длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (кислоты LC-PUFA). В соответствии с химической номенклатурой арахидоновая кислота представляет собой цис-5,8,11,14 эйкозатетраеновую кислоту(20:4) и принадлежит к (n-6) семейству LC-PUFAs. Арахидоновая кислота является главным предшественником различных биологически активных соединений, известных как эйкозаноиды, включающих простагландины, тромбоксаны и лейкотриены. Кроме этого, предполагается, что арахидоновая кислота, как один из компонентов липидной фракции материнского молока, необходима для обеспечения оптимального неврологического развития детей. Арахидоновая кислота находит разнообразное и широкое применение, включающее использование в детском питании, пищевых продуктах и корме животных.WO-A-97/37032 относится к получению микробного PUFA-содержащего масла из пастеризованной биомассы. Однако в этом документе не содержится информации, касающейся деаэрации перед пастеризацией. В заявке WO-A-04/001021, опубликованной 31 декабря 2003 г., приводится более детальное описание условий пастеризации. Известны способы, предусматривающие нагревание биомассы или микробных клеток. В WO-A-97/37032 указывается, что микробные клетки могут быть подвергнуты пастеризации перед экстракцией из них PUFA в виде масла. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что использование процесса деаэрации может улучшить качество масла, экстрагируемого из клеток. В частности, полученное масло в меньшей степени подвержено окислению, может иметь более низкое пероксидное число (POV) и/или более низкое анизидиновое число (AnV). Раскрытие сущности изобретения Настоящее изобретение предусматривает усовершенствованный способ получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (PUFA). Такое усовершенствование заключается в проведении деаэрации, предпочтительно перед пастеризацией. В связи с этим первый аспект изобретения относится к способу получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (PUFA), включающему:b) получение из клеток масла или PUFA. Предпочтительная водная среда представляет собой бульон или культуральную среду, такую как ферментационный бульон или жидкая ферментационная среда. Такая среда может представлять собой жидкость, удаляемую в ходе ферментации, хотя предпочтительно она представляет собой бульон, образовавшийся в конце ферментации. Предпочтительные клетки представляют собой микробные клетки. Микробные клетки могут находиться в живом состоянии до, в ходе и/или после деаэрации. Предпочтительная деаэрация водной среды приводит к удалению воздуха, например увлеченного,захваченного, нерастворенного и/или растворенного воздуха. Поэтому такой процесс может представлять собой или включать эффективную дегазацию. С помощью такого процесса может удаляться газ (например, воздушные пузырьки). Предпочтительно, чтобы с помощью такого процесса удалялся кислород,например, растворенный кислород (в захваченной форме или в виде пузырьков). В этом контексте термин растворенный относится к такому газу, как воздух или кислород, присутствующему или растворенному в водной среде (а не к любому газу внутри клеток). Кроме этого, процесс деаэрации может обеспечивать удаление из жидкой среды других газов, например диоксида углерода. Поскольку в результате деаэрации удаляется по меньшей мере часть растворенного и/или некоторая часть нерастворенного кислорода, такой процесс может приводить к понижению степени окисления. Это означает, что может быть получено менее окисленная PUFA и/или масло, что повышает качество продукта. Из этого не следует, что удаление кислорода полезно, поскольку для жизнеобеспечения и роста микробных клеток требуется кислород. Во многих ферментационных процессах, включая предпочтительные способы согласно изобретению, воздух подается к микробным клеткам, например, доставляется в водную среду или культуральную жидкость (например, в результате барботажа). Процесс деления и роста клеток сопровождается биосинтезом одной или более PUFA. Идея о том, что в результате прекращения подачи кислорода или воздуха в ходе процесса ферментации произойдет деаэрация, возможно,предполагает полезную стратегию, поскольку такая операция может приводить к гибели клеток или потере способности продуцирования PUFAs и других ценных соединений.-1 009568 Деаэрация является известным процессом, который применяется для обработки пищевых продуктов, таких как молоко, апельсиновый сок, и в производстве бумаги. Однако следует отдавать отчет в том,что такие процессы отличаются от ферментации микробных организмов, в особенности в том, что касается продуцирования соединения, подлежащего экстракции, а также систем, в которых не используются живые клетки. В некоторых известных способах деаэрацию проводят для уменьшения бактериального роста, тогда как согласно изобретению рост и выживание микробных клеток (включая клетки бактерий) с целью продуцирования PUFA является важным элементом процесса ферментации, нуждающимся в кислороде. Существует ряд способов проведения деаэрации, включающих следующие методы, предусматривающие:b) механическую деаэрацию/дегазирование (перемешивание, вибрация, использование силы ускорения, например, при применении центрифуги или циклона);c) изменение вязкости (в результате разбавления водой или другими жидкостями либо изменения температуры);d) изменение условий ферментации, например уменьшение скорости подачи воздуха, скорости барботажа или введение кислорода или воздуха в ферментационную систему либо уменьшение скорости перемешивания;e) изменение pH, например уменьшение pH или подкисление (например, с использованием диоксида углерода, который при растворении в жидкости образует угольную кислоту);g) замену газовой фазы на такой инертный газ, как азот, или на такой благородный газ, как гелий;h) химическую деаэрацию, например, с использованием акцептора кислорода, такого как сульфит натрия или гидразин;i) регулирование длительности процесса, например обеспечение стационарного состояния жидкой фазы, или обеспечение диффузии такого газа, как кислород или воздух из жидкой фазы; и/илиj) комбинацию из одного или более указанных выше процессов. Далее каждый из указанных выше способов деаэрации обсуждается более подробно. 1. Использование вакуума (или пониженного давления). Поверхность водной среды может подвергаться воздействию вакуума. Однако действительный вакуум не всегда необходим, так как предпочтительный способ предусматривает понижение давления над поверхностью водной среды, например, находящейся в сосуде, например в ферментере. Предпочтительно, чтобы давление над поверхностью водной среды было меньше атмосферного или комнатного давления или, по меньшей мере, было ниже давления внутри ферментера (или давления в ходе ферментации). Таким образом, следует использовать пониженное давление в начале деаэрации, например, сразу после завершения ферментации. Вакуум или пониженное давление могут применяться в отдельном сосуде, отличном от того, в котором проводят ферментацию (например, ферментера). Жидкость может перемещаться в вакуумную станцию или отдельный контейнер, в котором создан вакуум. В этом контексте при обсуждении термина вакуум, как одного из методов деаэрации, следует иметь в виду, что такая операция предусматривает приложение вакуума к водной среде. В этом смысле совершенно не обязательно создавать полный вакуум. Предпочтительное давление (в ходе вакуумной деаэрации) не превышает 800, предпочтительно 600,оптимально 400 мбар (в расчете на давление в абсолютных миллибарах). В некоторых случаях при использовании надлежащего оборудования предпочтительное давление не превышает 200 или 100 мбар. Предпочтительное пониженное давление составляет 50-600 мбар, например 100-500 мбар, оптимально 200-450 мбар. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения водная среда, например, после ферментации перемещается в сосуд с пониженным давлением, другими словами, давлением ниже, чем в ферментере (или другом сосуде, из которого перемещается жидкая среда). Перемещение водной среды из двух указанных сосудов (например, из ферментера в сосуд с пониженным давлением) может обеспечиваться перепадом давления. Таким образом, давление, обеспечивающее перемещение, может представлять собой давление, которому подвергается жидкость в ходе перемещения из одного сосуда в другой. Такое давление не превышает 0,7, например 0,6, предпочтительно 0,5 бар. Давление, при котором происходит перемещение, может составлять 0,7-0,3 бар, например 0,6-0,4 бар. Сосуд, работающий при пониженном давлении, может быть обеспечен средствами повышения площади поверхности водной среды, способствующими деаэрации. В результате их применения водная среда может принимать форму пленки, например тонкой пленки. Форсированное превращение водной среды в пленку (например, тонкую пленку) может осуществляться с помощью механического устройства, например форсунки в виде зонтообразного сопла или парасольного деаэратора. В результате водная среда может принудительно подаваться на криволинейную поверхность в условиях пониженного давления. Увеличения площади поверхности водной среды, например, при образовании пленки или аэрозоля-2 009568 способствует деаэрации и может обеспечивать более эффективную дегазацию. Уровень водной среды внутри сосуда, работающего при пониженном давлении (снабженного форсункой или имеющего искривленную поверхность, на которую подается водная среда), может составлять 0,1-0,2 от полного заполнения. После этого деаэрированная водная среда может подаваться на стадию пастеризации или в нагревательный сосуд. 2. Механическая деаэрация. В ходе процесса ферментации в водную среду (культуральную или ферментационную среду) вводят кислород или (как правило) воздух. Эта операция способствует росту и делению микробных клеток и биосинтезу PUFA. В ходе ферментации водная среда может перемешиваться. В целях деаэрации степень перемешивания (или скорость перемешивания) может уменьшаться, замедляться или перемешивание может прекращаться. При перемешивании с низкой скоростью понижается вероятность кавитации вблизи или непосредственно на перемешивающей лопасти или движущихся поверхностях, а также вероятность образования воздушных пузырьков (в водной среде). Прекращение перемешивания или уменьшение скорости перемешивания может приводить к сливанию пузырьков и их поднятию на поверхность водной среды. В ходе пониженного перемешивания скорость перемешивания может уменьшаться не более чем на половину, треть или даже четверть от значения скорости в ходе ферментации. Так, например, если скорость перемешивания составляет 80 об/мин,то режим пониженного перемешивания, обеспечивающий деаэрацию, может предусматривать перемешивание со скоростью не более 40 об/мин. Механическая деаэрация может предусматривать уменьшение подачи воздуха или кислорода в водную среду (например, в ферментационный бульон с помощью аэрации). Введение воздуха или кислорода может замедляться или совсем прекращаться. В режиме деаэрации скорость подачи воздуха (или кислорода) может быть уменьшена не более чем на половину, треть или даже четверть (относительно скорости в режиме ферментации). Аэрация жидкости может быть остановлена или прекращена до завершения ферментации (например, за 5, 2 или 1 ч). В ходе ферментации в водную среду, находящуюся в ферментационном сосуде (или ферментере),часто подают воздух (или кислород). Газ барботируют через водную среду часто с помощью барботера. Режим деаэрации может предусматривать уменьшение скорости подачи воздуха или кислорода с помощью барботера. Кроме этого, деаэрация может достигаться в результате вибрации в том случае, когда водную среду пропускают через (статический) вибрационный сосуд, например через трубку. Водную среду можно деаэрировать с использованием вакуумного насоса. Водная среда может быть подвергнута действию силы ускорения, например, в циклоне. В этом случае жидкость подвергается действию центробежной силы, которая может способствовать деаэрации. В циклоне может осуществляться быстрое вращение водной среды и воздействие на нее центробежной силы, в результате чего газы, выходящие из жидкости, поднимаются вверх и отводятся сверху циклона, тогда как деаэрированная жидкость перемещается в противоположном направлении (например, вниз). Для деаэрации водной среды может использоваться механический вакуумный деаэратор. Он может представлять собой насос, работающий при вакууме (или пониженном давлении). Модифицированные(например, центробежные) насосы, способные создавать пониженное давление или вакуум, производятся промышленностью. Предпочтительный вакуумный насос имеет вращающуюся камеру, в которой пузырьки газа могут удаляться из водной среды, например, под воздействием центробежной силы. Альтернативные типы такого оборудования включают дегазационные насосы. С помощью подобных устройств может осуществляться дегазация жидкостей, в которых растворен газ. Такой насос может быть сблокирован с вакуумным насосом. Устройство способно производить дегазацию без каких-либо химических добавок. Такие системы могут осуществлять дегазацию до остаточного содержания газа порядка 0,5 м.д. С помощью устройств такого типа может обеспечиваться объемная скорость порядка 25 л/мин или менее. Походящие дегазационные насосы могут быть приобретены уYokota Manufacturing Company, Japan. 3. Регулирование вязкости. Уменьшение вязкости может быть достигнуто нагреванием водной среды. Такое нагревание также может приводить к деаэрации. Понижение вязкости способствует более эффективному движению газов к поверхности водной среды. Таким образом, уменьшение вязкости способствуют процессу деаэрации. Такая операция может проводиться добавлением другой жидкости (уже деаэрированной или имеющей более низкое содержание воздуха/кислорода, чем водная среда), например воды, и в результате подобный процесс предусматривает разбавление. Водная среда часто бывает достаточно вязкой из-за присутствия клеток и источников азота и/или углерода, ассимилируемых клетками. Другой способ понижения вязкости предусматривает нагревание водной среды. В результате повышения температуры понижается растворимость кислорода в жидкости.-3 009568 4. Регулирование pH. Водная среда может быть подкислена. В результате этого может быть уменьшена растворимость воздуха/кислорода в жидкости. На практике водная среда содержит живые клетки, которые синтезируют ценные соединения. Клетки дышат в том смысле, что они потребляют кислород и выделяют диоксид углерода. Углекислый газ может растворяться в водной среде, что приводит к образованию угольной кислоты. Понижение pH приводит к образованию подкисленной водной среды и уменьшению растворимости диоксида углерода (или кислорода). 5. Фильтрация. Водная жидкость может пропускаться через фильтр или мембрану, способные удалять мелкие пузырьки, например, воздуха. Этот процесс может осуществляться в относительно мелком масштабе. Предпочтительный фильтр или мембрана содержат инертный материал, такой как полимер. Такой полимерный материал может представлять собой галоидный алкилен, например PTFE. Водная жидкость может пропускаться через (мелкую или относительно тонкую) трубку или капилляр. Эти устройства могут содержать (например, на стенках) или быть покрыты таким полимером, какPTFE. Трубка может иметь отверстия или щели, через которые проходят растворенные газы или пузырьки. Водная среда может пропускаться через подобные трубки или капилляры под давлением. 6. Замена газа. Эта операция предусматривает вытеснение или замену кислорода или воздуха (как в растворенном,так и в ином состоянии), содержащегося в водной среде. Воздух или кислород могут быть заменены большим числом различных газов при условии, что растворенный кислород вытесняется из раствора и может покидать водную среду. Для этой цели предпочтительно использовать инертный газ, такой как азот, или благородный газ, например гелий. Газ может подаваться на поверхность водной среды (например, в свободное пространство ферментера). Так, например, газ может вводиться в свободное пространство над жидкостью, находящейся в таком сосуде, как ферментер. С другой стороны газ может вводиться в водную среду путем барботажа или с использованием разбрызгивателя. Предпочтительно использовать азот, хотя также может применяться газ, содержащий азот (но с уменьшенным содержанием кислорода,составляющим, например, менее 20, менее 10 или 15%, т.е. меньшим, чем в атмосферном воздухе). Предпочтительная технология заключается в уменьшении или прекращении подачи воздуха (или кислорода) в водную среду до завершения ферментации. Так, подача воздуха, например, через разбрызгиватель может быть прекращена по меньшей мере за 1 или 2 ч до завершения ферментации. Вместо воздуха может подаваться газ, отличный от воздуха или кислорода, например газ с пониженным содержанием кислорода, такой как азот. Таким образом, предпочтительно, чтобы за 1 или 2 ч до завершения ферментации в водную среду подавался азот. В результате такой операции над поверхностью водной среды создается инертная атмосфера или атмосфера с пониженным содержанием кислорода (например, обогащенная азотом), т.е. атмосфера с более высоким содержанием азота, чем в атмосферном воздухе. Парциальное давление азота над водной средой может составлять 0,4-0,8 бар, например 0,6 бар. 7. Химическая деаэрация. Цель может быть достигнута использованием вещества или химической добавки, способной эффективно реагировать с воздухом или, что более важно, с кислородом воздуха. Таким веществом может служить акцептор кислорода. Вещество такого типа может приводиться в контакт с водной средой. Химические агенты могут добавляться в водную среду, находящуюся в таком сосуде, как ферментер. Вещества, реагирующие с кислородом, включающие его акцепторы, хорошо известны в данной области и они включают сульфит щелочного металла (например, натрия) и соединения, содержащие гидразин. В том случае, когда PUFA или масло используются в пищевых продуктах, могут применяться другие (не химические) способы деаэрации. 8. Продолжительность. В стационарном состоянии водная среда медленно выделяет такие растворенные газы, как кислород и воздух. Растворенные газы могут диффундировать из водной среды. В результате газы постепенно выделяются из раствора. Измерение содержания воздуха/кислорода. Такая операция может осуществляться хорошо известными методами. Для этого может использоваться EGT (анализатор увлеченного газа). Количество воздуха в водной среде (особенно в микробной суспензии) может быть измерено неавтономными методами. Количество увлеченного газа (газовых пузырьков) может быть измерено сжатием образца в измерительной ячейке. Объемную долю увлеченного газа рассчитывают по закону Бойля (pv=const). Количество способного к выделению растворенного газа может быть измерено по увеличению объема образца. Этот процесс стимулирует резкое падение давления. В результате снижения давления в измерительной ячейке растворимость газов уменьшается, и они выделяются из среды. Это приводит к увеличению объема суспензии. Такая операция может быть полностью автоматизирована и/или может предусматривать использование on-line газового анализатора, расположенного в соответствующем месте,предпочтительно после блока деаэрации.-4 009568 В результате деаэрации содержание О 2 (в водной среде) составляет менее 20 или 15 м.д., например 2-5 или 15-20 м.д. Предпочтительная концентрация растворенного кислорода предпочтительно составляет менее 10, например менее 5, оптимально менее 2 м.д. Деаэрацию проводят таким образом, чтобы концентрация (растворенного) кислорода составляла менее 0,03 см 3/л (44 ч./млрд.), предпочтительно менее 0,005 см 3/л (7 ч./млрд.). Деаэрированная водная среда (полученная деаэрацией водной среды, содержащей клетки согласно изобретению) может подвергаться воздействию повышенного давления и/или повышенной температуры. Повышенное давление и/или повышенная температура могут использоваться при нагревании и/или пастеризации клеток. Согласно предпочтительному варианту осуществления, способ согласно изобретению предусматривает воздействие на деаэрированную водную среду давления по меньшей мере 1 бар, предпочтительно по меньшей мере 1,5 бар, более предпочтительно по меньшей мере 2 бар и наиболее предпочтительно по меньшей мере 5 бар. Давление не ограничивается конкретным значением. Так, например, деаэрированная жидкость может подвергаться воздействию давления менее 40 бар, например менее 20 бар. Предпочтительный способ осуществления изобретения включает воздействие на деаэрированную водную среду температуры по меньшей мере 60 С, предпочтительно по меньшей мере 80 С, более предпочтительно по меньшей мере 90 С, еще более предпочтительно по меньшей мере 100 С и наиболее предпочтительно по меньшей мере 110 С. Используемая температура не ограничивается конкретным значением. Так, например, деаэрированная водная среда может подвергаться воздействию температуры ниже 150 С. Предпочтительно, чтобы деаэрированная водная среда после воздействия повышенной температуры и/или повышенного давления имела предпочтительное содержание О 2 и/или содержала предпочтительное количество растворенного кислорода. Процесс пастеризации. Обычно пастеризацию проводят после деаэрации и/или после завершения ферментации. Согласно предпочтительному варианту осуществления, пастеризацию проводят после завершения ферментации,поскольку тепло, выделяющееся в ходе пастеризации, приводит к гибели клеток. Обычно осуществляют пастеризацию ферментационного бульона (или клеток в водной среде), хотя может проводиться пастеризация микробной биомассы, полученной в бульоне. В первом случае может проводиться пастеризация микробных клеток, все еще присутствующих в ферментере. Предпочтительно проводить пастеризацию до следующей обработки микробных клеток, например их грануляции (например, в результате экструзии), разрушения или перемешивания. Сразу после завершения ферментации ферментационный бульон может быть отфильтрован или обработан каким-либо иным способом с целью удаления воды или водной среды. После удаления воды может быть получены брикет из биомассы. Если пастеризация не проводилась, то обезвоженные клетки (или брикет из биомассы) могут быть подвергнуты пастеризации. Пастеризацию проводят непосредственным или косвенным нагреванием клеток. При непосредственном нагревании в ферментер может подаваться пар. Косвенный способ включает использование среды, пропускаемой через теплообменник или через стенку ферментера, или использование нагревательных змеевиков, а также внешних теплообменных средств, таких как пластинчатый теплообменник. Пастеризацию обычно проводят в ферментере, в котором проводилась ферментация. Однако в случае некоторых микроорганизмов (таких, как бактерии) часто предпочитают вначале удалять клетки из сосуда и затем проводить пастеризацию. Пастеризация может осуществляться перед другими методами обработки микроорганизмов, например, таких как сушка или грануляция. Обычно пастеризация приводит к гибели большинства, если не всех микроорганизмов. После пастеризации может быть уничтожено по меньшей мере 95, 96 или даже 98% микроорганизмов. Нагревание или пастеризация клеток может осуществляться при любой подходящей температуре,предпочтительно при температуре по меньшей мере 60 С, более предпочтительно по меньшей мере 80 С, предпочтительно по меньшей мере 90 С, предпочтительно по меньшей мере 100 С, предпочтительно по меньшей мере 110 С. Верхний температурный предел не имеет конкретных ограничений. Так,например, пастеризацию можно проводить при температуре ниже 150 С. Предпочтительные способы пастеризации описаны в WO 97/37032 и WO A-04/001021. Экстракция PUFA. Изобретение может предусматривать экстракцию и/или выделение PUFA из пастеризованных клеток. Эту операцию предпочтительно проводить после деаэрации и (возможно) после пастеризации. Экстракцию начинают с добавления галогенида щелочно-земельного металла, такого как хлористый кальций. После этого клетки могут быть подвергнуты фильтрации, промывке и/или сжатию с целью образования влажного брикета. Микробные клетки могут быть подвергнуты экструзии и в случае необходимости полученные в результате гранулы или экструдат подвергают сушке. Высушенные гранулы или высушенную биомассу можно использовать для экстракции одной из PUFA, предпочтительно масла, содержащего одну или более PUFA. Предпочтительные способы экстракции, предназначенные для получения PUFA-содержащей-5 009568 масла из микробных клеток, описаны в РСТ/ЕР 99/01446 (WO 97/36996), РСТ/ЕР 97/01448 (WO 97/37032) и РСТ/ЕР 01/08903 (WO 02/10423). Полиненасыщенные жирные кислоты (PUFAs) и микробиальные масла.PUFA может представлять собой отдельную PUFA либо две или более различных PUFA. Каждая изPUFA может относиться к n-3 или n-6 семейству. Предпочтительными веществами являются С 18, С 20 или С 22 PUFA. PUFA может содержать по меньшей мере 18 углеродных атомов и/или по меньшей мере 3 или 4 двойные связи. PUFA может находиться в виде свободной жирной кислоты, ее соли, эфира жирной кислоты (например, метилового или этилового эфира), фосфолипида и/или моно-, ди- или триглицерида. Подходящие (n-3 и n-6) PUFA включают в себя докозагексаеновую кислоту (DHA, 22:6 3), полученную из водорослей или грибов, таких как (динофлаггелят) Crypthecodinium или (гриб) Thraustochytrium;-линоленовую кислоту (ALA, 18:3 3); коньюгированную линолевую кислоту (октадекадиеновая кислота, CLA); дигомолиноленовую кислоту (DGLA, 20:3 6); арахидоновую кислоту (ARA, 20:4 6); эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА, 20:5 3). Предпочтительные PUFA включают арахидоновую (ARA), докозогексаеновую (DHA), эйкозапентаеновую (ЕРА) и -линоленовую (GLA) кислоты. Среди указанных кислот наиболее предпочтительной является ARA.PUFA могут быть получены в результате пастеризации клеток, таких как микробные клетки, с использованием способа согласно изобретению. Для этой цели могут использоваться бактерии, водоросли,грибы или дрожжевые клетки. Предпочтительные грибы относятся к отряду Mucorales, напримерinsidiosum. Водоросли могут относиться к динофлаггелятам и могут включать Porphyridium, Nitszchia,Crypthecodinium (Crypthecodinium cohnii). Дрожи включают микроорганизмы, относящиеся к виду Pichia или Saccharomyces, например Pichia ciferii. Бактерии могут относиться к роду Propionibacterium. Микробное масло может представлять собой жидкость (при комнатной температуре). Предпочтительно, чтобы большая часть PUFA находилась в виде триглицеридов. Предпочтительно,чтобы по меньшей мере 50%, например по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70% PUFA находились в виде триглицеридов. Однако содержание триглицеридов может быть более высоким и составлять по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, оптимально по меньшей мере 93% или 95% от количества масла. Предпочтительно, чтобы среди таких триглицеридов по меньшей мере 40%,например 50%, оптимально по меньшей мере 60% PUFA находились в -положении глицерина (входящего в состав триглицерида), также известного, как положение 1 или 3. Предпочтительно, чтобы по меньшей мере 20%, например по меньшей мере 30%, оптимально по меньшей мере 40% PUFA находилось в положении b (2). Микробное масло может содержать по меньшей мере 10, 35, 40 или 45% или более желаемой PUFA,такой как арахидоновая кислота. Содержание триглицеридов может составлять по меньшей мере 90%,например 92-94%. Типичное микробное масло содержит эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) в количестве менее 5%, предпочтительно менее 1% и более предпочтительно менее 0,5%. Рассматриваемое масло содержит С 20, С 20:3, С 22:0 и/или С 24:0 жирные кислоты в количестве менее 5%, менее 2% и менее 1% соответственно. Содержание свободных жирных кислот (FFA) составляет не более 1,0; 0,4; 0,2 или 0,1. Масло может не содержать или содержать незначительное количество GLA и/или DGLA. Микробное масло может представлять собой неочищенное масло. Оно может экстрагироваться из клеток с помощью органического растворителя, такого как гексан или изопропанол. Процесс экстракции PUFA.PUFA (или микробное масло, содержащее PUFA) может экстрагироваться из (пастеризованных) микробных клеток. Масло предпочтительно экстрагировать из (например, высушенных) гранул (например, экструдатов), содержащих клетки. Экстракцию можно проводить с использованием растворителя. Предпочтительно использовать неполярные растворители, такие как C1-8, предпочтительно С 2-6 алканы,например гексан. Предпочтительно, чтобы растворитель просачивался через высушенные гранулы. Подходящие для этой цели методы грануляции и экструзии микроорганизмов, а также последующей экстракции микробного PUFA-содержащего масла описаны в WO-A-97/37032. С помощью растворителя получают неочищенное PUFA-содержащее масло. Полученное масло может использоваться без дополнительной очистки или оно может быть подвергнуто одной или более очистке. Однако сырое масло обычно содержит растворитель, используемый для экстракции масла (например, гексан или спирт, такой как изопропиловый спирт), и оно представляет вещество, которое не было-6 009568 подвергнуто одной (предпочтительно всем) из следующих стадий очистки. Подходящие для этой цели методы очистки описаны в РСТ/ЕР 01/08902 (на содержание этого и всех других цитированных документов ссылаются в настоящем описании). Масло может быть подвергнуто одной или более операциям очистки, которые могут включать обработку кислотой или рафинирование, обработку щелочью или удаление свободных жирных кислот, отбеливание или удаление пигмента, фильтрацию, демаргаринизацию(или охлаждение с целью удаления насыщенных триглицеридов), дезодорацию (или удаление свободных жирных кислот) и/или доочистку (или удаление маслонерастворимых веществ). Все перечисленные стадии очистки подробно описаны в РСТ/ЕР 01/08902 и при внесении необходимых изменений могут применяться в настоящем изобретении. Полученное масло особенно подходит для пищевых применений и может добавляться в продукты питания (людей) и корм животных. Примерами таких пищевых продуктов могут служить молоко, детское питание, оздоровительные напитки, хлеб и животные корма. Клетки. Клетки могут представлять собой объекты, из которых могут быть получено масло или PUFA. Предпочтительными клетками являются микробные клетки. Микробные клетки (или микроорганизмы),используемые в изобретении, могут представлять собой любые объекты, описанные выше, в частности, в разделе, касающемся PUFA и микробных масел. Такие микроорганизмы могут включать либо продуцировать PUFA или микробное масло, причем PUFA может экстрагироваться или выделяться из клеток. Рассматриваемые клетки могут иметь нитеобразную форму, как в грибах или бактериях, или представлять собой отдельные клетки, как в дрожжах, водорослях и бактериях. Такие клетки могут представлять собой микроорганизмы, такие как дрожжи, грибы, бактерии или водоросли. Предпочтительные грибы относятся к отряду Mucorales, например к роду Mortierella, Phycomyces, Blakeslea или Aspergillus. Предпочтительные грибы относятся к виду Mortierella alpina, Blakeslea trispora, Aspergillus terreus. Предпочтительные дрожжи относятся к роду Pichia (например, Pichia cifferii) или Saccharomyces. Бактерии могут относиться к роду Propionibacterium. Предпочтительные клетки водорослей представляют собой динофлагеллят и/или принадлежат к роду Crypthecodinium или Daniella. Предпочтительные водоросли относятся к виду Crypthecodinium cohnii или Daniella salina. Пероксидное число (POV). Предпочтительное значение POV для (микробного) масла составляет 3-8 или 12. Однако способ изобретения позволяет использовать более низкие значения POV, и такие значения составляют 10,0 или менее 8,0. Значение POV может быть измерено с использованием известной методики, например, согласно AOCS Cd-8-53. Обычно POV имеет размерность мэкв./кг. Анизидоновое число (AnV). Это число отражает содержание альдегидов. Предпочтительное анизидиновое число микробного масла составляет 5, 6, 7 или 10-15, 20 или 25. Походящее значение AnV не превышает 20, например не превышает 15. В некоторых случаях оно не превышает 10 или даже 5 или 2. Предпочтительный интервал значений AnV составляет 5-15, оптимально 7-12. Более предпочтительное AnV имеет значение в интервале от 2 или 5 до 12 или 15. AnV может быть измерено с использованием известных методов, например,согласно AOCS Cd-8-53. Применение масел и PUFAs. Дополнительный аспект изобретения относится к композиции, содержащей масло и в некоторых случаях другие соединения. Рассматриваемая композиция может представлять собой корм и/или пищевую добавку для животных и людей. Масла могут приводиться в форму, подходящую для потребления человеком, обычно в результате рафинирования или очистки масла, полученного из микробов. Рассматриваемая композиция может представлять собой детское питание или пищевой продукт. Согласно изобретению состав такой формулы может регулироваться таким образом, чтобы обеспечивалось содержание липидов или PUFAs, соответствующее их содержанию в обычном материнском молоке. Такая операция предусматривает смешивание микробного масла согласно изобретению с другими маслами с получением композиции требуемого состава. Рассматриваемая композиция может представлять собой корм или пищевую добавку в корм животных или рыб. Полученный корм и пищевые добавки могут использоваться для кормления любых сельскохозяйственных животных, в частности овец, крупного рогатого скота и домашней птицы. Кроме этого, подобный корм или пищевые добавки могут применяться для кормления сельскохозяйственных водоплавающих животных, таких как рыбы и моллюски. Состав корма для таких животных может включать один или более пищевых веществ или ингредиентов. Согласно изобретению масло может представлять собой сырой или очищенный продукт. Рассматриваемый продукт может непосредственно поставляться на рынок непосредственно или в виде товаров в соответствующей упаковке, обычно в одноразовых алюминиевых бутылях, внутренняя поверхность которых покрыта эпоксифенольным лаком и заполнена азотом. Такое масло может содержать один или более антиоксидантов (например, токоферол, витамин Е, пальмитат), концентрация которых может составлять 50-800 м.д., например 100-700 м.д.-7 009568 Походящие составы могут представлять собой фармацевтические или ветеринарные композиции,предназначенные для перорального приема, или косметические композиции. Масло может потребляться как таковое или в капсулированной форме, например в виде капсул с оболочкой. Такие капсулы могут содержать желатин и/или глицерин. Композиция может содержать другие компоненты, например отдушки (со вкусом лимона или лайма), а также фармацевтически или ветеринарно применимые носители или наполнители. Пеногасители. В ходе деаэрации водной среды могут образовываться пузырьки газа. Такое явление может наблюдаться при дегазации, поскольку выходящие (в виде пузырьков) из раствора газы поднимаются к поверхности водной среды. В результате на поверхности водной среды может образовываться пена. Поскольку пенообразование нежелательно, для уменьшения или предотвращения такого процесса, в водную среду могут добавляться один или более пеногасителей. В способе изобретения могут использоваться такие известные пеногасители, как трибутилфосфат. Предпочтительный пеногаситель имеет гидрофобную природу и может не растворяться в воде. Рассматриваемое вещество может содержать неполярную углеводородную цепочку, например, модифицированную полярной группой. Предпочтительные пеногасители включают силиконовое масло, парафин, алкоксилат жирного спирта и/или полигликоль. Предпочтительные химические деаэраторы включают алифатические спирты, сложные эфиры жирных кислот, этоксилаты жирных кислот, полиэфиры жирных кислот и/или жирные спирты. Деаэрация может иметь другие преимущества, особенно в случае нагревания микробных клеток при их уничтожении или пастеризации. В ходе нагревания или пастеризации клетки или водная среда(или любая композиция, содержащая клетки) могут подвергаться воздействию высоких температур и/или высоких давлений. В результате происходит бурное выделение газов из водной среды, сопровождающееся кавитацией в насосах в ходе перемещения микробных клеток. Такое явление нежелательно, поскольку может приводить к повреждению клеточных стенок и разрушению клеток. Таким образом, предварительная деаэрация может уменьшать возможные проблемы, связанные с воздействием высоких температур и давлений в ходе нагревания или пастеризации. Оборудование (например, промышленная технологическая установка). Второй аспект изобретения относится к устройству для реализации первого аспекта изобретения. Второй аспект изобретения может предусматривать (a) средства для культивирования (или ферментации) микробных клеток (например, ферментер), возможно, соединенные со (b) средствами деаэрации водной среды, содержащей микробные клетки, и (c) необязательными средствами для получения масла из микробных клеток. В соответствии с одним из вариантов воплощения изобретения деаэрация по (b) может проводиться, когда клетки все еще присутствуют внутри ферментера. Согласно альтернативному решению деаэрационные средства могут быть отделены от средств деаэрации по (b) (хотя, возможно, они могут быть соединены с ними). Так, клетки и культурная среда (например, бульон) могут пропускаться или переноситься (например, непосредственно) через средства деаэрации по (b). Кроме этого, такие устройства также могут служить средствами пастеризации. После деаэрации по (b) деаэрированная жидкость может переноситься или пропускаться через устройства пастеризации либо подаваться в сосуд, в котором жидкость (и клетки) подвергают пастеризации. Каждое из указанных средств может размещаться в порядке,соответствующем порядку технологических стадий согласно первому аспекту. В предпочтительной системе водная среда может перемещаться от ферментера к нагревательной системе (предпочтительно трубчатого типа). Водную среду можно подвергать предварительному нагреванию, в ходе которого также может происходить деаэрация. Жидкость может нагреваться до 40-80 С,например до 50-70 С, например до 55-65 С. Таким образом, нагревание (или предварительное нагревание) может быть частью системы деаэрации. Деаэрация может дополнительно стимулироваться добавлением воды (способ разбавления) и/или пара (способ замены газа). Оба таких способа или любой из них могут осуществляться до (предварительного) нагрева. После предварительного нагрева водная среда может подвергаться дополнительной деаэрации, например, с использованием вакуума или пониженного давления. После этого может проводиться пастеризация жидкости. Предпочтительные отличия и характерные признаки одного аспекта изобретения с внесением необходимых изменений применимы в другом его аспекте. Далее изобретение описывается со ссылкой на следующие примеры, которые приведены в целях иллюстрации и не ограничивают область изобретения. Сравнительный пример 1 и примеры 2-4 (деаэрация внутри ферментера). При проведении некоторых экспериментов, включающих пастеризацию грибковой биомассы (Mortierella alpina), наблюдалось окисление. Предполагается, что наличие воздуха в ферментационном бульоне приводит к химическому окислению, особенно при высоких температурах. Хотя для жизнедеятельности микробных клеток и биосинтеза PUFA требуется воздух, было решено проводить деаэрацию ферментационного бульона внутри ферментера до пастеризации (метод теплового шока).-8 009568 Ферментацию грибковой биомассы, М. alpine, проводили известным способом. Использовали метод ферментации, аналогичный описанному в WO 97/36996 (см. примеры). Длительность ферментации составляла примерно 150-200 ч. Бульон из ферментера перемещали через небольшой сосуд (емкость 350 л) в оборудование для пастеризации. Испытанию подвергали ферментационные бульоны, полученные в серии ферментации длительностью 150-200 ч. В первой группе экспериментов испытания проводили непосредственно на бульоне, находящемся внутри ферментера, с использованием различных методов деаэрации, включающих прекращение барботажа воздуха в бульон через разбрызгиватель за 2 ч до завершения ферментации (пример 2) и использование азота для замены воздуха в свободном пространстве над ферментационным бульоном (примеры 3 и 4). В сравнительном примере 1 деаэрация не применялась. Сухую биомассу, полученную в испытаниях по методу теплового шока, анализировали с использованием ТРС (чашечный метод подсчета). Результаты ТРС незначительно отличаются от результатов измерений, полученных на бульоне, пастеризованном в стандартных условиях. Бульон после деаэрации и пастеризации использовали для выделения микробного/одноклеточного масла, содержащего арахидоновую кислоту (ARA). Сырое масло, содержащее арахидоновую кислоту, выделяли и анализировали. Процесс выделения после деаэрации и пастеризации бульона включал добавление хлористого кальция,фильтрацию/промывку и уплотнение с образованием влажного осадка. Далее, влажный осадок подвергали экструзии с получением экструдата, который сушили, и полученную высушенную биомассу подвергали экстракции. Было установлено, что 1 л бульона содержит 45-55 г сухой биомассы, содержащей 30-35% масла. Использовали следующий лабораторный процесс выделения. Хлористый кальций в виде хлопьев и воду добавляли в стеклянные лабораторные сосуды. 25% мас./мас. раствор хлористого кальция готовили с использованием CaCl22 Н 2 О. Полученный раствор в количестве 24 г добавляли в 1 л пастеризованного бульона и смесь тщательно перемешивали. Процесс фильтрации использовался для моделирования действия мембранного фильтровального пресса. Применяли 1-литровый фильтр "Seitz" с Sefar Fyltis AM 25116 тканью. 1 л бульона фильтровали под давлением азота 0,5-1,0 бар. Давление сбрасывали и добавляли свежую воду в количестве, составляющем 0,6 объема бульона, не повреждая при этом осадок на фильтре. После этого осадок промывали под давлением 0,5-1,0 бар и сушили продувкой в течение 1 мин. Вакуумную фильтрацию проводили с использованием Pannevis лабораторного ленточного фильтра,выполненного из марлевого материала Pannevis. Бульон в количестве 400-500 мл фильтровали под давлением 0,45 бар (вакуум - 0,55 бар). Добавляли свежую воду в количестве, составляющем 0,6 объема бульона, и осадок на фильтре промывали под давлением 0,45 бар. Полученный осадок на фильтре сушили с помощью водяного насоса досуха. После этого биомассу выжимали между пластинами до прекращения выделения воды. Операцию проводили с использованием марли. Экструзию проводили с использованием экструдера (Victoria) типа мясорубки. Полученные гранулы в течение 30 мин сушили в устройстве с псевдоожиженным слоем при температуре на входе 50 С и объемной скорости, установленной на значении "5". Содержание сухого вещества составило 91-96%. В ходе процесса экстракции 100 г сухой биомассы в течение 60 мин экстрагировали 500 мл гексана при комнатной температуре. Гексан декантировали и осадок на фильтре в течение 30 мин промывали 250 мл свежего гексана при комнатной температуре. Гексан сливали и добавляли в гексан с предыдущей стадии экстракции. Экстракт осветляли вакуумной фильтрацией с использованием стекловолокна. Процесс выпаривания включал быстрое испарение большей части гексана в роторном испарителе при температуре водяной бани 60-70 С и давлении 200 мбар в течение 5-20 мин. Оставшуюся часть гексана также выпаривали при указанной температуре в течение 10-20 мин при давлении ниже 100 мбар. Во избежание окисления сброс давления осуществляли с использованием азота. В полученном ARA-содержащем масле определяли POV и AnV, значения которых представлены в табл. 1. Бульон перемещали под давлением на входе в ферментер 1,8-2,0 бар. Как следует из табл. 1, уменьшение количества воздуха в бульоне улучшает значения POV и/илиAnV. Полученные результаты позволяют заключить, что деаэрация позволяет уменьшить степень окисления и улучшить значения POV и AnV. Дальнейшие испытания проводились в большем масштабе с использованием отдельного деаэратора. Примеры 5-14 (отдельный деаэратор). Устанавливали систему деаэрации непрерывного действия, снабженную зонтиковой насадкой,предназначенную для работы при давлении ниже 500 мбар. Ферментационную среду перемещали из ферментера в деаэратор с помощью насоса с низкой деформацией сдвига (monho насос). С целью имитации деаэратора типа парасоль, комплекс деаэрации, после ферментации, но до пастеризации устанавливали с использованием APV деаэрационной системы. Ферментер присоединяли к деаэратору и среду перемещали под давлением 0,5 бар. Деаэратор присоединяли к вакуумному насосу. После прохождения деаэратора биомассу направляли (через monho насос) в сборник и затем на стадии пастеризации, которую проводили с использованием оборудования для обработки методом теплового шока (также AVP). Объемная скорость подачи с помощью monho насоса составляла 10 м 3/ч при давлении внутри деаэратора 400 мбар. В табл. 2 представлены результаты испытания с использованием деаэрационной установки. Методика выделения микробного масла и его анализа приведены ранее. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения масла или полиненасыщенной жирной кислоты (PUFA), предусматривающий нагрев или пастеризацию водной среды, содержащей клетки, и экстракцию масла или PUFA, характеризующийся тем, что перед нагревом или пастеризацией водной среды осуществляют ее деаэрацию. 2. Способ по п.1, в котором указанные клетки являются микробными клетками. 3. Способ по любому предшествующему пункту, в котором водная среда представляет собой ферментационный бульон. 4. Способ по любому предшествующему пункту, который после экстракции дополнительно предусматривает очистку или выделение масла либо одной или более PUFA. 5. Способ по любому предшествующему пункту, в котором стадия деаэрации включает:b) механическую деаэрацию/дегазацию (перемешиванием, вибрацией, приложением силы ускорения или силы тяжести, например, с использованием центрифуги или циклона);c) изменение вязкости (в результате разбавления водой или другой жидкостью или в результате повышения температуры);d) изменение условий ферментации, например, уменьшением эрлифта, барботажем воздуха или подачей кислорода или воздуха в ходе ферментации либо уменьшение скорости перемешивания;f) фильтрацию, например, с использованием фильтра или мембраны, предпочтительно из (инертного) полимера, например, такого как PTFE;g) замену газа таким инертным газом, как азот, или таким благородным газом, как гелий, или паром;h) химическую деаэрацию, например, с использованием акцептора кислорода, например, такого как сульфит натрия или гидразин;i) период пребывания водной среды в условиях диффузии кислорода воздуха из жидкости; или комбинацию одного или более метода (a)-(i).- 13009568 6. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрацию проводят при замедленном перемешивании и/или замене газовой фазы. 7. Способ по п.6, в котором замену газа осуществляют с использованием газа, не содержащего кислород, или с концентрацией кислорода ниже его содержания в атмосферном воздухе. 8. Способ по п.6 или 7, в котором газ представляет собой или содержит азот. 9. Способ по п.6, в котором деаэрация предусматривает приложение вакуума или пониженного давления. 10. Способ по п.9, в котором пониженное давление составляет не более 800 мбар, предпочтительно не более 600 мбар. 11. Способ по п.9 или 10, в котором деаэрацию водной среды проводят с использованием вакуумного или дегазирующего насоса, деаэратора типа парасоль или зонтичного сопла. 12. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрация обеспечивает содержание О 2 в водной среде менее 20 м.д., предпочтительно менее 10 м.д. 13. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрация обеспечивает концентрацию растворенного кислорода менее 10 м.д., предпочтительно менее 5 м.д., более предпочтительно менее 2 м.д. 14. Способ по любому предшествующему пункту, в котором деаэрацию водной среды проводят при(i) давлении выше 1 бар, предпочтительно выше 1,5 бар, более предпочтительно выше 2 бар и/или (ii) температуре выше 60 С, предпочтительно выше 80 С, более предпочтительно выше 100 С. 15. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетки нагревают или пастеризуют при температуре выше 80 С, предпочтительно выше 90 С, более предпочтительно выше 100 С. 16. Способ по любому предшествующему пункту, в котором PUFA или масло, содержащее PUFA, в котором PUFA является С 18, С 20 или С 22 Q-3 или Q-6 PUFA (возможно, ARA, EPA, DHA и/или GLA). 17. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетки являются дрожжевыми, бактериальными, грибными или водорослевыми. 18. Способ по любому предшествующему пункту, в котором масло является микробным маслом или маслом одноклеточных микроорганизмов. 19. Способ по любому предшествующему пункту, в котором стадия экстракции включает получение из клеток масла, имеющего значение перекисного числа (POV) менее 12 и/или значение анизидинового числа (AnV) менее 20. 20. PUFA-содержащее масло или PUFA, полученные способом по любому предшествующему пункту. 21. Масло по п.20, которое представляет собой микробное масло или масло одноклеточных микроорганизмов. 22. Устройство для получения масла или PUFA из микробных клеток, включающее: а) средства культивирования или ферментации микробных клеток;b) средства деаэрации водной среды, содержащей микробные клетки; с) средства получения из микробных клеток масла или PUFA. 23. Устройство по п.22, которое включает (а) ферментер, (b) деаэратор, в котором может использоваться пониженное давление, и (с) гомогенизатор и/или центрифугу. 24. Устройство по п.22 или 23, в котором средства (b) включают вакуумный или дегазирующий насос, парасольный деаэратор или зонтичную форсунку. 25. Устройство по любому предшествующему пункту, в котором (b) включает деаэратор, способный прикладывать давление ниже 800 мбар, предпочтительно ниже 600 мбар.